NTE INEN 0548 (1981) (Spanish): Alimentos

para animales. Determinacin de vitamina A

NTE INEN 548 1980-12



Norma Tcnica
Ecuatoriana

ALIMENTOS PARA ANIMALES
DETERMINACIN DE VITAMINA A



INEN 548
1980-12


1. OBJETO

1.1 Esta norma establece el mtodo para determinar el contenido de vitamina A en alimentos para animales.

2. RESUMEN

2.1 El contenido de vitamina A se basa en la medida de coloracin azul que se obtiene con tricloruro de
antimonio en solucin clorofrmica a 620 nm. La absorbancia se mide mediante el uso de un colormetro.

3. INSTRUMENTAL

3.1 Colormetro foto elctrico, de lectura directa, para mediciones de transmisin y absorbancias de luz, en
una longitud de onda de 620 nm.

3.2 Aparato de digestin, con condensador o refrigerante de reflujo adaptable a la boca de un matraz Erlen-
meyer de 500 cm
3
.

3.3 Embudo de separacin, de 500 cm
3
.

3.4 Matraz volumtrico, de 50 cm
3
.

3.5 Pipetas.

3. 6 Bao de agua, con regulador de temperatura, ajustado a 40 1C.

3.7 Balanza analtica, sensible al 0,1 mg.

4. REACTIVOS

4.1 Alcohol etlico absoluto o isopropanol, reactivo para anlisis. De tal pureza que, cuando se mida en una
cl ul a de cuarzo 1 cm
3
de agua destilada, deber tener una absorbancia no mayor de 0,01 en 320-
350 nm y no mayor de 0,05 a 300 nm.

4.2 Solucin e/ 50% de hidrxido de potasio. Disolver 50 g de hidrxido de potasio en 100 cm
3
de agua.

4.3 Eter etlico, libre de perxidos, con punto de ebullicin alrededor de 40C.

4.4 Sulfato de sodio anhidro, granular, reactivo para anlisis (no debe absorber vitamina A).

4.5 Cloroformo, redestilado (conteniendo al rededor de 1 % de etanol).



(Contina)


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4.6 Solucin de tricloruro de antimonio. Disolver 113,4 g de tricloruro de antimonio en 300 cm
3
de cloroformo (ver
4.5). Aadir 5 g de cloruro de calcio y filtrar en caliente. Diluir el filtrado a 500 cm
3
con cloroformo.

4.7 Solucin patrn de vitamina A. Es una solucin de acetato de vitamina A cristalina en aceite de semilla de
algodn, encerrada en una cpsula de gelatina, conteniendo 3,44 mg de trans acetato de vitamina A por
gramo de solucin. Un gramo de esta solucin tiene asignado 10 000 USP, unidades. La unidad USP est
definida como la actividad de 0,344 m de acetato de vitamina A, lo cual es equivalente a 0,3 m de vitamina
A alcohol.

4.8 Solucin Indicadora de fenolftalena. Disolver 0,5 g de fenolftalena en 100 cm
3
de alcohol etlico de 95-
96% (V/V).

4.9 Curva de calibracin. Cortar la punta de la cpsula que contiene la solucin estndar (ver 4.7) y colocar
su contenido sobre un vidrio de reloj, previamente limpio y pesado.

4.9.1 Pesar con toda precisin su contenido, transferir a un matraz volumtrico de 50 cm
3
, disolver y llevar a
volumen con cloroformo (ver 4.5). Esta solucin debe ser usada tan pronto como sea preparada, pero nunca
despus de ocho horas.

4.9.2 Hacer una serie de diluciones con la solucin 4.9.1, tomando volmenes de modo que la alcuota tratada
con cloroformo y cloruro estannoso d una transmisin entre 20-85 %, en el colormetro a 620 nm (ver
6.10 y 6.12). (Las lecturas deben realizarse en un tiempo mximo de 15 segundos, despus de la adicin de la
solucin del cloruro estannoso). El 100% de transmisin debe ser ajustado a paralelo con agua.

4.9.3 Con los datos obtenidos construir un grfico; valores de extincin medidos frente a la cantidad de acetato
de vitamina A expresados en m o en unidades internacionales (ver nota 1).


5. PREPARACION DE LA MUESTRA

5.1 Moler aproximadamente 5 g de muestra, en un micro molino que contenga un tamiz de abertura de 1
mm, segn Norma INEN 104, y que a travs de l pase aproximadamente un 95% del producto.

5.2 Transferir rpidamente la muestra homogenizada a un recipiente hermticamente cerrado, hasta el momento
del anlisis.


6. PROCEDIMIENTO

6.1 La determinacin debe realizarse por duplicado sobre la misma muestra preparada.

6.2 Pesar, con aproximacin al 0,1 mg, aproximadamente 5 g de muestra preparada y colocar en el matraz
Erlenmeyer de 500 cm
3
.

______________
NOTA 1. La curva de calibracin obtenida debe ser una lnea recta.




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6.3 Agregar 40 cm
3
de alcohol absoluto, 7 cm
3
de la solucin de hidrxido de potasio y conectar el matraz
Erlenmeyer al refrigerante. Mantener la ebullicin durante 30 min, agitando el matraz Erlenmeyer peridi-
camente para evitar que quede material adherido a las paredes.

6.4 Retirar el matraz Erlenmeyer del refrigerante y enfriar. Agregar 30 cm
3
de agua y transferir la solucin
al embudo de separacin.

6.5 Extraer la solucin por tres veces con 50 cm
3
de ter cada vez y transferir a otro embudo de separacin.
Reunir los extractos etreos y cautelosamente agregar 100 cm
3
de agua, imprimir suaves movimientos
giratorios, dejar decantar y cuando se observe formacin de dos capas visibles, que debe ser dentro de 2 min,
remover la parte acuosa.

6.6 Repetir el lavado por varias veces, usando cada vez 50 cm
3
de agua y sacudimientos vigorosos, hasta
que el ltimo lquido de lavado no d reaccin alcalina a la fenolftalena.

6.7 Evaporar el extracto etreo lavado sobre el bao de agua ajustado a 40 1C, hasta obtener aproxima-
damente 20 cm
3
, y luego agregar 3 a 6 g de sulfato de sodio anhidro, agitar y decantar.

6.8 Transferir el lquido claro decantado a un frasco volumtrico de 50 cm
3
. Lavar varias veces el sulfato
de sodio con ter y adicionar los lquidos de lavado al lquido claro y luego llevar a la marca con ter.

6.9 Comprobar si la vitamina A ha sido extrada completamente del sulfato de sodio, por adicin de unas
gotas de tricloruro de antimonio.

6.10 Evaporar a sequedad, cuidadosamente, en el bao de agua, una alcuota de la solucin contenida en el frasco
volumtrico (ver 6.8) y el residuo redisolverlo en una cantidad suficiente de cloroformo, de manera que se
obtenga una solucin entre 7 a 15 unidades internacionales de vitamina A por cm
3
.

6.11 Transferir a la cubeta del colormetro el residuo redisuelto, aadir 3 cm
3
de la solucin de
tricloruro de antimonio y leer inmediatamente la absorbancia en 620 nm (la lectura debe realizarse en un
tiempo mximo de 15 segundos).

6.12 Al mismo tiempo que se realiza el trabajo indicado en 6.11 y con otra cubeta que contenga 2 cm
3
de
cl oroformo, 3 cm
3
de la solucin de tricloruro de antimonio, ajustar el colormetro a 100% de
transmisin, usando la longitud de onda a 620 nm y leyendo inmediatamente, como se anota en 6.11.


7. CALCULOS

7.1 El contenido de vitamina A en la muestra se determina de acuerdo con la curva estndar correspondiente y el
resultado se expresa en unidades internacionales de vitamina A por kilogramo de muestra.
8. ERRORES DE METODO

8.1 La diferencia entre los resultados de una determinacin efectuada por duplicado no debe exceder de
2 UI/cm
3
;

en caso contrario, debe repetirse la determinacin.




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9. INFORME DE RESULTADOS
9.1 Como resultado final, debe reportarse la media aritmtica de los dos resultados de la determinacin.

9.2 En el informe de resultados, deben indicarse el mtodo usado y el resultado obtenido. Debe mencionarse,
adems, cualquier condicin no especificada en esta norma o considerada como opcional, as como
cualquier circunstancia que pueda haber influido sobre el resultado.

9.3 Deben incluirse todos los detalles necesarios para la completa identificacin de la muestra.






















































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APENDICE Z

Z.1 NORMAS A CONSULTAR

INEN 104 Tamices de ensayo. Tamaos nominales de las aberturas,


Z.2 BASES DE ESTUDIO

Mtodo AOAC de anlisis. AOAC 39. Vitamin A in mixed feeds. Association of Official Analytical Chemists.
Washington, 1970.

Mtodos de anlisis de vitaminas. The association vitamin chemists U.S.A. Mtodo colorimtrico, color
azul Carr-Price. Ed, pp 68, Editorial Academia Leon. Espaa, 1969.

Norma Hind IS: 2052. Indian Standard Specification for Compounded feeds for cattle. Determination of
vitamin A. (Carr-Price method). Indian Standard Institution. Nueva Delhi, 1968.

Rolf Strohecher - Heinz M. Henning. Anlisis de vitaminas: Valoracin de Vitamina A en alimentos y
piensos. 2the. Ed, pp, 64, Editorial Paz Montalvo. Madrid, 1967.

Association of vitamin chemists. Vitamin Assay. Colorimetric method (Carr - Price blue color). Ed, 1 pp
24, Editorial Interscience publishens, Inc. Nueva York, London, 1967.






























INFORMACIN COMPLEMENTARIA

Documento:
NTE INEN 548

TTULO: ALIMENTOS PARA ANIMALES. DETERMINACIN
DE LA VITAMINA A
Cdigo:
AL 06.01-332

ORIGINAL:
Fecha de iniciacin del estudio:

REVISIN:
Fecha de aprobacin anterior por Consejo Directivo
Oficializacin con el Carcter de
por Acuerdo No. de
publicado en el Registro Oficial No. de

Fecha de iniciacin del estudio:

Fechas de consulta pblica: de 1974-10-28 a 1974-12-13

Subcomit Tcnico: Al 06.01 ALIMENTOS PARA ANIMALES
Fecha de iniciacin: Fecha de aprobacin: 1975-12-08
Integrantes del Subcomit Tcnico:

NOMBRES:

Lic. Emilio Herrera
Ing. Alfonso Romero
Ing. Nelson Villacs
Dr. Jos Lucio
Dr. Jorge Anhalzer
Ing. Fausto Peafiel
Dra. Leonor Orozco
Dra. Mara Navas

INSTITUCIN REPRESENTADA:

Agrosol de Ecuador
Ecuadorian Feed
Ministerio de Agricultura
Ministerio de Agricultura
Alimentos Anhalzer
INEN
INEN
INEN








Otros trmites: !
4
Esta norma sin ningn cambio en su contenido fue DESREGULARIZADA, pasando de
OBLIGATORIA a VOLUNTARIA, segn Resolucin de Consejo Directivo de 1998-01-08 y oficializada
mediante Acuerdo Ministerial No. 235 de 1998-05-04 publicado en el Registro Oficial No. 321 del 1998-05-20
El Consejo Directivo del INEN aprob este proyecto de norma en sesin de !"#$%!&%&"

Oficializada como: '()*+,-'.*, Por Acuerdo Ministerial No. !!/ 123 !"#!%$&%$4
Registro Oficial No. 5#5 123 !"#!%$&%!"


















































Instituto Ecuatoriano de NormaIizacin, INEN Instituto Ecuatoriano de NormaIizacin, INEN Instituto Ecuatoriano de NormaIizacin, INEN Instituto Ecuatoriano de NormaIizacin, INEN - -- - Baquerizo Moreno E8 Baquerizo Moreno E8 Baquerizo Moreno E8 Baquerizo Moreno E8- -- -29 y Av. 6 de Diciembre 29 y Av. 6 de Diciembre 29 y Av. 6 de Diciembre 29 y Av. 6 de Diciembre
CasiIIa 17 CasiIIa 17 CasiIIa 17 CasiIIa 17- -- -01 01 01 01- -- -3999 3999 3999 3999 - -- - TeIfs: (593 2)2 501885 aI 2 501891 TeIfs: (593 2)2 501885 aI 2 501891 TeIfs: (593 2)2 501885 aI 2 501891 TeIfs: (593 2)2 501885 aI 2 501891 - -- - Fax: (593 2) 2 567815 Fax: (593 2) 2 567815 Fax: (593 2) 2 567815 Fax: (593 2) 2 567815
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