Laboratorio actividad Enzimtica-Biologa 10 de abril de 2014

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ACTIVIDAD ENZIMTICA
Anyeline Assia M, Javier Dejongh G.
Universidad del Magdalena
Facultad de Ingeniera



RESUMEN
Las estructuras que forman el cuerpo de los seres vivos se construyen mediante reacciones
qumicas. Son tambin reacciones qumicas las que fabrican las molculas que forman esas
estructuras. Y reacciones qumicas son las que, en el ltimo trmino, dan lugar a las
funciones que todo ser vivo realiza. Las enzimas son las encargadas de dirigir toda esa
variedad de reacciones: hacen que ocurra la reaccin necesaria, en el lugar adecuado y en el
momento preciso.
ABSTRACT
the structures that form the body of living things are made by chemical reactions. Chemical
reactions are also those producing the molecules that form such structures. And chemical
reactions are those which, in the end, give rise to all living functions performed. Enzymes
are responsible for directing all that variety of reactions: make the necessary reaction in the
right place at the right time occurs
PALABRAS CLAVE
PH, clula aminocido, enzimas, perxido, reaccin, catalizador, piruvato, lugolPh, amino
acid cell, enzymes, peroxide, reaction catalyst, pyruvate, lugol.
KEY WORDS
Ph, amino acid cell, enzymes, peroxide, reaction catalyst, pyruvate, lugol



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INTRODUCCIN
Las clulas vivas obtienen la energa y los
componentes necesarios para su
supervivencia mediante reacciones
qumicas que transcurren constante y
ordenamente. Estas reacciones deben
producirse en condiciones relativamente
constante de pH prxima a la neutralidad
y temperatura cercana a 37 C. En estas
condiciones suaves, muchas de ellas, no
transcurriran a velocidad apreciable. Para
acelerar estos procesos metablicos, las
clulas poseen catalizadores especficos
denominados enzimas, que hacen
compatibles sus necesidades metablicas
con las condiciones de temperatura, pH y
presin del medio celular. [1]
Las enzimas son protenas especializadas
en la catlisis de reacciones biolgicas. Se
encuentran entre las ms notables de las
biomolculas conocidas, debido a su
extraordinaria especificidad y a su poder
cataltico, que es mucho mayor que la de
los catalizadores hechos por el hombre.
La mayora de las enzimas est
constituida por ms de 100 aminocidos,
los cuales confieren a la molcula una
masa mayor de 10 KDa y un dimetro de
25 A. [2]
La actividad de muchas enzimas puede
regularse para adecuarse a las necesidades
metablicas. Los principales mecanismos
de regulacin son los efectores positivos
o negativos, y la modificacin covalente,
reversible o irreversible. [3]
Cuatro son los factores principales que
parecen contribuir al gran incremento de
velocidad producido por las enzimas:
1. El enzima puede fijar la molcula
de sustrato de tal modo que el
enlace susceptible se halle a) Muy
prximo al grupo cataltico sobre
el centro activo y b) Orientado de
tal modo en relacin con el centro
cataltico que el estado de
transicin se forme con facilidad.
2. Algunas enzimas se pueden
combinar con el sustrato para
formar un intermediario covalente
inestable que reacciona con ms
facilidad para formar los
productos.
3. Al proporcionar grupos
funcionales capaces de actuar
como dadores o aceptores de
protones, el enzima puede efectuar
una catlisis general acida o
bsica.
4. El enzima puede inducir una
tensin o una distorsin en el
enlace susceptible de la molcula
del sustrato determinando que la
ruptura del enlace sea ms fcil.
[4]
Las enzimas tienen varias caractersticas
importantes. Poseen una elevada eficacia
cataltica, pues pueden aumentar
millones de veces la velocidad de las
reacciones en las que participan. Adems,
como cualquier catalizador, las enzimas
recuperan su estado inicial tras cada ciclo

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cataltico. Por otra parte, son
catalizadores especficos, tanto para el
tipo de reaccin, como para los
componentes sobre los que actan. Por
ltimo, su actividad cataltica puede ser
regulada por mecanismos celulares que
varan en funcin de las necesidades
metablicas de cada momento. Por tanto,
las enzimas son componentes esenciales
para la clula: Permiten que tengan lugar
las reacciones necesarias para su
desarrollo, de forma ordenada, regulada y
adaptada a las circunstancias del
organismo. [5]
OBJETIVOS
Identificar en una reaccin las
enzimas y sus respectivos
sustratos.
Observar la actividad de algunas
enzimas en tejidos animales y
vegetales.
Demostrar el efecto de la
temperatura, el pH y la
concentracin sobre la actividad
de una enzima.
Demostrar la forma en que una
enzima es especfica para ciertos
sustratos.

RESULTADOS

OBSERVACIN DE LA INVERSA

PROCEDIMIENTO 1
Se rotul y se prepar cuatro tubos de
ensayos de la siguiente forma:

Nmero del tubo
Ml de extracto de
hgado
1 0
2 1
3 2
4 4

Una vez realizado el procedimiento, se
agit bien los tubos, luego se agreg al
mismo tiempo, 2 ml de perxido de
hidrogeno en cada uno de los tubos.
Se pudo observar lo siguiente:
Tubo 1: No pas nada.
Tubo 2: La reaccin se puso caliente y
espumosa.
Tubo 3: Se observ un residuo y lo dems
se evaporo.
Tubo 4: Se observ que la reaccin se
calent y boto espuma.

La cantidad de enzima afecta la actividad
enzimtica positivamente ya que al haber
mayor concentracin de enzimas mayor
ser la velocidad de la reaccin.


PROCEDIMIENTO 2
Se rotul y se prepar cinco tubos de
ensayos de la siguiente forma:

Nmero del tubo
ml de extracto de
hgado
1 1
2 1
3 1
4 1
5 1


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Posteriormente se agit cada uno de los
tubos, y se agreg al mismo tiempo las
siguientes cantidades de perxido de
hidrogeno.

Al agregar perxido de hidrogeno en los
tubos de ensayo con mililitros de hgado
se pudo observar las siguientes
reacciones:
Tubo 1: No hubo reaccin.
Tubo 2: La reaccin se volvi espumosa y
qued un residuo. Tambin aumento la
temperatura.
Tubo 3: La reaccin se puso espesa,
qued un residuo, la espuma se puso
caliente y de color blanca.
Tubo 4: La reaccin se puso espumosa y
tomo color blanco. Aumento la
temperatura de la espuma en la parte
superior y abajo se puso fra.
Tubo 5: La reaccin se volvi espumosa,
aumento el volumen de las burbujas y
qued un residuo. Tambin aumento de
temperatura.
Al aumentar la concentracin de sustrato
la enzima se saturara por lo que, en un
grfico donde en las abscisas, pones la
concentracin y la velocidad obtendrs
una hiprbola que en un momento ser
una lnea horizontal y paralela a la
abscisa. Esto es porque la velocidad se
vuelve constante ya que aunque
agreguemos sustrato las enzimas tienen
todos sus centros activos ocupados. Sin
embargo, en esta parte del experimento el
sustrato siempre fue el mismo, es decir, 1
mililitro de extracto de hgado.


Nmero del tubo
ml de Perxido de
hidrogeno
1 0
2 1
3 2
4 4
5 6


(Figura nm. 1)

PROCEDIMIENTO 3
Se rotul y se prepar tres tubos de
ensayos de la siguiente forma:



Nmero
del tubo
ml de
extracto
de hgado
Temperatura
C
1 2
Bao con
hielo
2 2
Temperatura
ambiente
3 2
Agua
hirviendo

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Se Esper a que el material que se
encontraba dentro de los tubos tuviera la
misma temperatura que la de los
respectivos baos; luego se agit y se
procedi a agregar al mismo tiempo 2 ml
de perxido de hidrogeno a cada uno de
los tubos.

Se pudo observar lo siguiente:
Tubo 1: La reaccin de las enzimas al
contacto con el perxido de hidrogeno fue
lenta a una temperatura menor de 0C.
Tubo 2: La reaccin se calent a una
temperatura superior a los 40C, al aadir
el perxido de hidrogeno se observ una
mayor velocidad de la reaccin en
comparacin de la primera.
Tubo 3: Al reaccionar se observ una
mezcla heterognea, el hgado en la parta
inferior del tubo, con una contextura ms
densa que los dos casos anteriores. Al
agregar el perxido de hidrogeno se pudo
observar que la mezcla se solidifico.
La temperatura influye en la actividad
enzimtica. El punto ptimo representa el
mximo de actividad. A temperaturas
bajas, las enzimas se hallan "muy rgidas"
y cuando se supera un valor considerable
(mayor de 50C) la actividad cae
bruscamente porque, como protena, la
enzima se desnaturaliza.



PROCEDIMIENTO 4
Se rotul y se prepar tres tubos de
ensayos de la siguiente forma:



Nmero
del tubo
ml de
extracto
de hgado
pH
1 2
cido
actico 5
gotas
2 2
Solucin
salina
3 2
Hidrxido
de Sodio

Luego se agit cada uno de los tubos y se
le agreg al mismo instante 2 ml de
perxido de hidrogeno en cada uno de
ellos.

Se pudo observar lo siguiente:

Tubo 1: Al agregar 5 gotas de cido
actico a los 2 ml de extracto de hgado y
posteriormente aadirle 2 ml de perxido
de hidrogeno, la mezcla cambio de color,
tornndose a un tono ms claro. Se
observ un aumento en la temperatura y
se puso espumosa.
Tubo 2: Al agregar 5 ml de solucin
salina a los 2 ml de extracto de hgado y
posteriormente aadirle 2 ml de perxido
de hidrogeno, se pudo observar que la
reaccin fue inmediata, volvindose
espumosa y de color amarillo,
aumentando su temperatura y dejando un
residuo.

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Tubo 3: Al agregar 5 gotas de hidrxido
de sodio a los 2 ml de extracto de hgado
y posteriormente 2 ml de perxido de
hidrogeno, se pudo observar que la
mezcla reacciono de forma lenta,
calentndose y generando ms burbujas
que los dos tubos anteriores.
El pH es un factor que ejerce una gran
influencia sobre la cintica de las
reacciones catalizadas por enzimas. Dado
que los sitios activos de las enzimas estn
frecuentemente compuestos de grupos
ionizables que deben estar en la forma
inica apropiada para mantener la
conformacin del sitio activo, acoplar los
sustratos o catalizar la reaccin, las
propiedades inicas del medio ejercen
una influencia directa sobre la cantidad de
enzima que tiene los grupos ionizados de
la manera correcta para llevar a cabo la
catlisis.

(Fig. Nm. 3)

PROCEDIMIENTO 5
Se rotul y se prepar cuatro tubos de
ensayos de la siguiente forma:
Nmero del tubo Material
1 1 ml de extracto de
hgado
2 1 ml de saliva
3
1 ml de extracto de
hgado
4 1 ml de saliva

Posteriormente se procedi a Agitar cada
uno de los tubos; a los dos primeros se
agreg 2 ml de perxido de hidrogeno.
Luego de observar lo sucedido se le
agrego 2ml de solucin de almidn a los
tubos 3 y 4, se agitaron durante 3 minutos
y luego se agreg 3 gotas de lugol.

Se pudo observar lo siguiente:
Tubo 1: Al agregar 2 ml de perxido de
hidrogeno a un ml de extracto de hgado,
se observa una reaccin inmediatamente
espumosa y amarilla. Al mismo tiempo
aumenta la temperatura.
Tubo 2: Al agregar 2 ml de perxido de
hidrogeno a un mililitro de saliva no se
observa ningn cambio.
Tubo 3: Al agregar 2 ml de almidn y 3
gotas de lugol a 1 ml de extracto de
hgado. Luego se agito durante tres
minutos, la mezcla se volvi espumosa
con el almidn y al agregar el lugol se
observ que se puso ms denso.
Tubo 4: Al agregar 2 ml de solucin de
almidn y 3 gotas de lugol a 1 ml de
saliva, se observ que cambia de color a
amarillo pollito y claro. No aumento la
temperatura.

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(Figura nm. 2)

DISCUSIN
Las Funciones de las enzimas, se
entrelazan y se pliegan una o ms cadenas
polipeptdicas, que aportan un pequeo
grupo de aminocidos para formar el sitio
activo, o lugar donde se adhiere el
sustrato, y donde se realiza la reaccin.
Una enzima y un sustrato no llegan a
adherirse si sus formas no encajan con
exactitud. Este hecho asegura que la
enzima no participa en reacciones
equivocadas. Dentro de los Factores que
incluyen las reacciones enzimticas
tenemos: Cambios en el pH, Cambios en
la temperatura, Presencia de cofactores,
Las concentraciones del sustrato y de los
productos finales, Activacin, Costes,
Disponibilidad.
PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS
1. Para los procedimientos realizados
identifique la enzima y los respectivos
sustratos.
Ptialina o amilasa: Trabajan en la saliva
transformando el almidn en azcar
Invertasa: Intervienen en las reaccin
entre la glucosa y es especfica y solo
cataliza esta reaccin
Aparte de cambiar sus propiedades
pticas, tambin cambian las propiedades
qumicas de las soluciones que son
tratadas mediante invertasa. En la caso de
la sacarosa, el tipo de enlace que subsiste
entre sus molculas enlazadas de fructosa
y sacarosa (que es a para la glucosa y b
para la fructosa) impide que dicha
molcula contenga terminales reductores
(aldehdos o cetnicos). Al hidrolizarse,
estas molculas quedan libres
recuperando as su poder reductor.
Fisiolgicamente, cuando el ser humano
consume azcar comn o sacarosa, la
invertasa presente en la saliva y en tracto
digestivo, cataliza la reaccin de
rompimiento del enlace glucosdico
haciendo que el procesamiento y
asimilacin de esta por su organismo sea
bastante rpido.
Lactato deshidrogenasa: es una enzima
catalizadora. Corresponde a la categora
de las oxidorreductasas, dado que cataliza
una reaccin redox, en la que el piruvato
es reducido a lactato gracias a la
oxidacin de NADH a NAD+
2. Cmo explicara usted el burbujeo
que se produce al aplicar perxido de

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hidrogeno (H2O2) a una herida; Cul es
el propsito de este procedimiento?
La razn por la que las espumas se debe a
que la sangre y las clulas contienen una
enzima. Nada ms hacernos un corte,
estas enzimas salen junto con la sangre.
Cuando la enzima entra en contacto con
el perxido de hidrgeno, convierte el
perxido de hidrgeno (H 2 O 2) en agua
(H2O) y el gas oxgeno (O2). Esta
reaccin se debe a la catalasa, la cual
desdobla al perxido en agua y oxgeno,
esto es lo que burbujea. Aplicada en las
heridas evita infecciones y ayuda en la
cicatrizacin.
3. Realice una breve descripcin de la
forma en que se puede inhibir la
actividad de una Enzima.
La actividad enzimtica se puede inhibir,
es decir, reducir o eliminar la actividad
enzimtica o cataltica de enzimas
especficas. La inhibicin puede ser:
Irreversible - el inhibidor se une
covalentemente a la enzima, La enzima
queda inactiva permanentemente. Por
ejemplo, la aspirina o cido
acetilsaliclico (ASA) inhibe
irreversiblemente la accin de la sintetiza
de prostaglandina:
Algunas prostaglandinas producen dolor e
inflamacin. Al quedar bloqueada su
sntesis se reduce la inflamacin y se
alivia el dolor.
Reversible: el inhibidor puede disociarse
de la enzima porque no se une por enlaces
covalentes.
4. Est usted de acuerdo con la
interaccin enzima - sustrato es anloga
a lo de una Cerradura y su llave.
Explique su respuesta.
Si es anloga. El sustrato encaja
perfectamente en el centro activo gracias
a unas complementariedades moleculares
y electrostticas con la enzima de manera
tal que este no cambia su forma. (El
sustrato seria la llave y la enzima o centro
activo la cerradura en este smil).
5. Desde el punto de vista enzimtico
como una fiebre alta puede afectar su
actividad? Explique.
Puesto que la estructura proteica es la que
determina la actividad enzimtica,
cualquier causa que perturbe esta
estructura puede llevar a una prdida de
actividad. La temperatura ptima para la
mayora de las reacciones enzimticas
est, entre 30C y 40C, en que la
actividad es mxima. Al aumentar la
temperatura, la velocidad de reaccin
aumenta y, para casi todas las enzimas, un
incremento de 10C duplica e incluso
triplica la velocidad de reaccin. Ese
mismo aumento de temperatura acelera
tambin la inactivacin de la enzima por
desnaturalizacin trmica. Las enzimas
muestran, a menudo, una marcada
fragilidad trmica. Cuando se calientan a

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temperaturas superiores a los 50C la
mayora de las enzimas, pero no todas, se
desnaturan. Habitualmente la
desnaturalizacin a alta temperatura es
irreversible, debido a que se rompen las
fuerzas dbiles de enlace al aumentar la
vibracin trmica de los tomos
componentes, fenmeno que daa la
estructura tridimensional.
6. A qu se debe que una enzima actu
mejor a un determinado pH y sea inactiva
a otro? Explique.
La intensidad mxima de la actividad de
la enzima, ocurre en el pH ptimo, con
rpida disminucin de la actividad a cada
lado de este valor de pH. La actividad
ptima generalmente se observa entre los
valores de 5 y 9. Cuando la
concentracin de iones hidrogeno es muy
baja en comparacin con la concentracin
optima, la molcula los cede
desapareciendo cargas positivas o
apareciendo cargas negativas en su
superficie. Ante una concentracin
elevada de iones hidrogeno, algunos se
fijan a la molcula desapareciendo cargas
(-) o poniendo cargas (+) que no existan.
CONCLUSIN
Al terminar esta actividad experimental
que tiene como fin observar la actividad
de algunas enzimas en tejidos, se puede
concluir que las enzimas son un factor
importante en las reacciones qumicas que
se llevan a cabo en la clula. Por lo tanto,
las enzimas son catalizadores biolgicos
de naturaleza proteica, que presentan
especificidad de sustratos y de redaccin,
as como, una capacidad cataltica
elevada.
BIBLIOGRAFIA
[1] Dr. Joan Jos Hicks Gmez.
BIOQUIMICA. Segunda edicin. 2007.
McGraw-Hill Interamericana.
[2] J. A. Lozano Tercel. BIOQUIMICA Y
BIOLOGIA MOLECULAR PARA
CIENCIAS DE LA SALUD. 2005.
McGraw-Hill Interamericana de Espaa.
[3] Albert L. Lehniger. BIOQUIMICA:
Las bases moleculares de la estructura y
funcin celular. Segunda edicin. 1995.
Ediciones Omega, S.A. Barcelona.
[4] Christopher K. Mathews.
BIOQUIMICA. Segunda edicin. 1998.
McGraw-Hill Interamericana de Espaa
S.A.
[5] White Abraham. PRINCIPIOS DE
BIOQUIMICA. 1983. McGraw-Hill
Interamericana de Mxico, S.A. de C.V.






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