E v a l u a t i o n o f F a c t o r s A f f e c t i n g S u r v i v a l o f

E s c h e r i c h i a c o l i i n S e a W a t e r
V . S t u d i e s w i t h H e a t - a n d F i l t e r - s t e r i l i z e d S e a W a t e r i
A . F . C A R L U C C I , 2 P . V . S C A R P I N O , A N D DA V I D P R A ME R
De p a r t m e n t o f A g r i c u l t u r a l Mi c r o b i o l o g y , R u t g e r s , T h e S t a t e U n i v e r s i t y , N e w B r u n s w i c k , N e w J e r s e y
R e c e i v e d f o r p u b l i c a t i o n De c e m b e r 9 , 1 9 6 0
A B S T R A C T
C A R L U C C I , A . F . ( R u t g e r s , t h e S t a t e U n i v e r s i t y ,
N e w B r u n s w i c k , N . J . ) , P . V . S C A R P I N O , A N D DA V I D
P R A ME R . E v a l u a t i o n o f f a c t o r s a f f e c t i n g s u r v i v a l o f
E s c h e r i c h i a c o l i i n s e a w a t e r . V . S t u d i e s w i t h h e a t -
a n d f i l t e r - s t e r i l i z e d s e a w a t e r . A p p l . Mi c r o b i o l . 9 : 4 0 0 -
4 0 4 . 1 9 6 1 . - T h e b a c t e r i c i d a l a c t i o n o f s e a w a t e r w a s
m e a s u r e d a s t h e d i f f e r e n c e i n s u r v i v a l o f c e l l s o f E s c h e r -
i c h i a c o l i i n u n t r e a t e d a n d a u t o c l a v e d p o r t i o n s o f w a t e r
s a m p l e s . T h e b e n e f i c i a l e f f e c t o f s t e r i l i z a t i o n b y h e a t
o n t h e s u r v i v a l o f E . c o l i i n s e a w a t e r v a r i e d w i t h
s e a s o n a n d w a s m o s t m a r k e d d u r i n g s u m m e r m o n t h s ,
h o w e v e r , t h e m a g n i t u d e o f t h e e f f e c t d i f f e r e d g r e a t l y
f r o m s a m p l e t o s a m p l e . T h e m o r e o b v i o u s a n d c o m -
m o n l y s u g g e s t e d e x p l a n a t i o n s f o r t h e b a c t e r i c i d a l
a c t i o n o f s e a w a t e r w e r e t e s t e d e x p e r i m e n t a l l y . T h e
p H a n d s a l i n i t y o f s e a w a t e r w e r e c h a n g e d b y a u t o -
c l a v i n g , b u t t h e d i r e c t i o n o f t h e f o r m e r w a s d e t r i -
m e n t a l r a t h e r t h a n b e n e f i c i a l a n d t h e s i g n i f i c a n c e o f
t h e l a t t e r w a s n o t c l a r i f i e d . T h e s u r v i v a l o f c e l l s o f E .
c o l i i n f i l t e r e d p o r t i o n s o f s o m e w a t e r s a m p l e s w a s
g r e a t e r t h a n t h a t i n u n t r e a t e d p o r t i o n s a n d e q u a l t o
t h a t i n a u t o c l a v e d p o r t i o n s , i n d i c a t i n g t h a t p r e d a t o r s
a n d c o m p e t i t o r s r e m o v e d b y f i l t r a t i o n h a d c o n t r i b u t e d
s i g n i f i c a n t l y t o t h e r a p i d d e a t h o f t h e b a c t e r i u m i n t h e
u n t r e a t e d w a t e r . H o w e v e r , i n t h e m a j o r i t y o f s a m p l e s
t e s t e d , s u r v i v a l o f E . c o l i i n a u t o c l a v e d w a t e r w a s c o n -
s i d e r a b l y g r e a t e r t h a n s u r v i v a l i n f i l t e r e d w a t e r .
T h e p o s s i b i l i t y t h a t t h e b e n e f i c i a l e f f e c t o f a u t o -
c l a v i n g o v e r a n d a b o v e t h a t o f f i l t r a t i o n r e s u l t e d f r o m
i n a c t i v a t i o n o r d e s t r u c t i o n b y h e a t o f b a c t e r i o p h a g e s
a n d t h e r m o l a b i l e t o x i c s u b s t a n c e s s u c h a s a n t i b i o t i c s
w a s c o n s i d e r e d . Mo r e o v e r , t h e s u g g e s t i o n w a s t e s t e d
t h a t t h e i n c r e a s e d s u r v i v a l o f E . c o l i i n a u t o c l a v e d s e a
w a t e r w a s d u e t o t h e a b i l i t y o f h e a t t o d i s r u p t a n d
d e g r a d e m i c r o b i a l c e l l s a n d t h e r m o l a b i l e c o m p o u n d s
I
P a p e r o f t h e J o u r n a l S e r i e s , N e w J e r s e y A g r i c u l t u r a l
E x p e r i m e n t S t a t i o n , R u t g e r s , t h e S t a t e U n i v e r s i t y , De p a r t -
m e n t o f A g r i c u l t u r a l Mi c r o b i o l o g y , N e w B r u n s w i c k , N . J .
T h i s i n v e s t i g a t i o n w a s s u p p o r t e d i n p a r t b y r e s e a r c h g r a n t
E 1 4 3 7 f r o m t h e N a t i o n a l I n s t i t u t e o f A l l e r g y a n d I n f e c t i o u s
Di s e a s e s , N a t i o n a l I n s t i t u t e s o f H e a l t h , U . S . P u b l i c H e a l t h
S e r v i c e .
2 P r e s e n t a d d r e s s : R e s e a r c h De p a r t m e n t , U n i t e d F r u i t
C o m p a n y , L a L i m a , H o n d u r a s , C . A .
4 0 0
a n d , t h e r e b y , t o c a u s e a n i n c r e a s e i n c o n c e n t r a t i o n o f
a v a i l a b l e n u t r i e n t s i n s e a w a t e r . I t w a s c o n c l u d e d
t h a t t h e b a c t e r i c i d a l a c t i o n o f s e a w a t e r i s n o t e x p l i c -
a b l e i n t e r m s o f t h e d e s t r u c t i o n o r i n a c t i v a t i o n b y h e a t
o f b a c t e r i o p h a g e s o r a n t i b i o t i c s . A l t h o u g h a d d e d
o r g a n i c m a t t e r i n f l u e n c e d t h e s u r v i v a l o f E . c o l i , t h e
t e s t o r g a n i s m w a s n o t a n e f f e c t i v e c o m p e t i t o r i n s e a
w a t e r a n d t h e n u t r i e n t l e v e l s r e q u i r e d t o o f f s e t t h e
b a c t e r i c i d a l a c t i o n w e r e e x c e s s i v e .
A r t i f i c i a l s e a w a t e r w a s d e m o n s t r a t e d t o e x e r t a
b a c t e r i c i d a l a c t i o n c o m p a r a b l e t o t h a t o f n a t u r a l s e a
w a t e r . L o w l e v e l s o f c y s t e i n e w h i c h f a v o r s u r v i v a l o f
E . c o l i i n n a t u r a l s e a w a t e r h a d a s i m i l a r e f f e c t i n
a r t i f i c i a l s e a w a t e r . N e v e r t h e l e s s , i t i s n o t a t t h i s t i m e
p o s s i b l e t o c o n c l u d e t h a t t h e f a c t o r s r e s p o n s i b l e f o r
t h e b a c t e r i c i d a l a c t i o n o f a r t i f i c i a l s e a w a t e r a r e i d e n -
t i c a l w i t h t h o s e r e s p o n s i b l e i n n a t u r a l s e a w a t e r .
I t h a s b e e n o b s e r v e d r e p e a t e d l y t h a t b a c t e r i a s u r -
v i v e t o a g r e a t e r e x t e n t i n h e a t - s t e r i l i z e d s e a w a t e r
t h a n i n u n t r e a t e d s e a w a t e r ( N i c a t i a n d R i e t s c h , 1 8 8 5 ;
De G i a x a , 1 8 8 9 ; K i r i b a y a s h i a n d A i d a , 1 9 3 4 ; Z o B e l l ,
1 9 3 6 ; K r a s s i l n i k o v , 1 9 3 8 ; K e t c h u m , C a r e y , a n d B r i g g s ,
1 9 4 9 ; V a c c a r o e t a l . , 1 9 5 0 ; N u s b a u m a n d G a r v e r ,
1 9 5 5 ; R i c h o u , N e a n t , a n d R i c h o u , 1 9 5 5 ) . T h i s t h e r -
m o l a b i l e b a c t e r i c i d a l a c t i o n o f s e a w a t e r v a r i e d w i t h
s e a s o n o f t h e y e a r a n d w a s g r e a t e s t d u r i n g s u m m e r
m o n t h s ( V a c c a r o e t a l . , 1 9 5 0 ) . F u r t h e r m o r e , t h e
s u r v i v a l t i m e o f b a c t e r i a i n s e a w a t e r h a s b e e n e x -
t e n d e d b y f i l t r a t i o n , c h l o r i n a t i o n , a n d t r e a t m e n t w i t h
o r g a n i c m a t t e r a s w e l l a s b y h e a t i n g ( B e a r d a n d
Me a d o w c r o f t , 1 9 3 5 ; K r a s s i l n i k o v , 1 9 3 8 ; V a c c a r o e t
a l . , 1 9 5 0 ; W i l l i a m s , 1 9 5 0 ; Z o B e l l , 1 9 3 6 ) . H o w e v e r , o u r
p r e s e n t k n o w l e d g e p r o v i d e s l i t t l e i n s i g h t i n t o t h e
n a t u r e o f t h e f a c t o r s r e s p o n s i b l e f o r t h e p h e n o m e n o n
o b s e r v e d . A l t h o u g h n u m e r o u s e x p l a n a t i o n s f o r t h e
b e n e f i c i a l e f f e c t o f c o m p l e t e o r p a r t i a l s t e r i l i z a t i o n o n
t h e s u r v i v a l o f b a c t e r i a i n s e a w a t e r h a v e b e e n s u g -
g e s t e d ( C a r l u c c i a n d P r a m e r , 1 9 5 9 ) , t h e y h a v e n o t
b e e n t e s t e d e x p e r i m e n t a l l y a n d t h e i d e n t i t y o f t h e
f a c t o r s r e s p o n s i b l e f o r t h e m o r e r a p i d d e a t h o f b a c t e r i a
i n n a t u r a l t h a n i n s t e r i l i z e d s e a w a t e r r e m a i n s t o b e
e s t a b l i s h e d .
S U R V I V A L O F E . C O L I I N S E A W A T E R
T h e p r e s e n t r e p o r t d e s c r i b e s t h e i n f l u e n c e o f s e a s o n ,
p H , s a l i n i t y , f i l t r a t i o n , a n d o r g a n i c m a t t e r o n t h e
b a c t e r i c i d a l a c t i o n o f s e a w a t e r . Mo r e o v e r , a r t i f i c i a l
s e a w a t e r w a s o b s e r v e d t o e x e r t a b a c t e r i c i d a l a c t i o n
c o m p a r a b l e t o t h a t o f n a t u r a l s e a w a t e r .
MA T E R I A L S A N D ME T H O DS
T h e b a c t e r i c i d a l a c t i o n o f s e a w a t e r w a s m e a s u r e d
a s t h e d i f f e r e n c e i n s u r v i v a l o f c e l l s o f E s c h e r i c h i a c o l i
i n u n t r e a t e d a n d a u t o c l a v e d p o r t i o n s o f t h e s a m e w a t e r
s a m p l e . De t a i l e d d e s c r i p t i o n s o f t h e m e t h o d s e m p l o y e d
f o r p r e p a r a t i o n a n d u s e o f i n o c u l a , t r e a t m e n t a n d
s t o r a g e o f w a t e r s a m p l e s , a n d o f t h e e n u m e r a t i o n a n d
c a l c u l a t i o n o f s u r v i v a l o f c e l l s o f E . c o l i i n s e a w a t e r
w e r e p r e s e n t e d p r e v i o u s l y ( C a r l u c c i a n d P r a m e r ,
1 9 6 0 a ) .
S e a w a t e r s a m p l e s w e r e h e a t s t e r i l i z e d b y a u t o -
c l a v i n g a t 1 2 1 C f o r 1 5 m i n . S t e r i l i z a t i o n b y f i l t r a t i o n
w a s p e r f o r m e d u s i n g g l a s s f i l t e r h o l d e r s a n d t y p e H A
Mi l l i p o r e m e m b r a n e s 3 h a v i n g a p o r e s i z e o f 0 . 4 5 , u .
R E S U L T S A N D DI S C U S S I O N
S e a s o n a l v a r i a t i o n . T h e b a c t e r i c i d a l a c t i o n o f s e a
w a t e r w a s d e t e r m i n e d a t i r r e g u l a r i n t e r v a l s f o r 2 y e a r s
b y m e a s u r i n g t h e s u r v i v a l o f c e l l s o f E . c o l i i n u n t r e a t e d
a n d a u t o c l a v e d p o r t i o n s o f e a c h w a t e r s a m p l e . I t w a s
f i r s t d e m o n s t r a b l e i n A p r i l , i n c r e a s e d i n m a g n i t u d e t o
a m a x i m u m i n J u l y , t h e n d e c r e a s e d , a n d w a s a b s e n t
f r o m w a t e r c o l l e c t e d i n N o v e m b e r . T h e g r e a t e s t
b a c t e r i c i d a l a c t i o n w a s e x e r t e d b y w a t e r s a m p l e d
d u r i n g J u l y 1 9 5 7 w h e n t h e r a t i o o f p e r c e n t s u r v i v a l
a f t e r 4 8 h r i n a u t o c l a v e d t o t h a t i n u n t r e a t e d w a t e r
e x c e e d e d 2 4 . T h e s e r e s u l t s w e r e c o n s i s t e n t w i t h t h o s e
o f V a c c a r o e t a l . ( 1 9 5 0 ) w h o r e p o r t e d t h a t t h e b a c t e r i -
c i d a l a c t i o n o f s e a w a t e r w a s m o s t p r o n o u n c e d d u r i n g
t h e s u m m e r m o n t h s a n d a b s e n t i n t h e w i n t e r . W a t e r
c o l l e c t e d d u r i n g t h e w i n t e r m o n t h s e x e r t e d n o b a c -
t e r i c i d a l a c t i o n a n d i t w a s n o t u n u s u a l f o r c e l l s o f E .
c o l i t o d i e m o r e r a p i d l y i n a u t o c l a v e d t h a n i n u n t r e a t e d
p o r t i o n s o f t h e s e s a m p l e s . T h i s h a s b e e n o b s e r v e d
( W i l l i a m s , 1 9 5 0 ) b u t n o t c o m m e n t e d o n b y p r e v i o u s
i n v e s t i g a t o r s .
p H a n d s a l i n i t y . T h e i n f l u e n c e o f a u t o c l a v i n g o n p H
a n d s a l i n i t y a n d t h e p o s s i b l e c o n t r i b u t i o n o f t h e s e
f a c t o r s t o t h e b a c t e r i c i d a l a c t i o n o f s e a w a t e r w e r e
c o n s i d e r e d e x p e r i m e n t a l l y . E l e c t r o m e t r i c d e t e r m i n a -
t i o n s d e m o n s t r a t e d t h a t t h e r e a c t i o n o f s e a w a t e r
i n c r e a s e d f r o m 0 . 5 t o 1 . 0 p H u n i t d u r i n g h e a t s t e r i l i z a -
t i o n a n d t h a t e q u i l i b r i u m w a s n o t r e - e s t a b l i s h e d f o r 2 4
t o 4 8 h r . I t h a s b e e n n o t e d p r e v i o u s l y t h a t t h e s u r v i v a l
o f E . c o l i i n s e a w a t e r v a r i e d i n v e r s e l y w i t h h y d r o g e n -
i o n c o n c e n t r a t i o n ( C a r l u c c i a n d P r a m e r , 1 9 6 0 b ) a n d
o n t h e b a s i s o f p H a l o n e s t e r i l i z a t i o n b y h e a t w o u l d b e
e x p e c t e d t o h a v e a n a d v e r s e r a t h e r t h a n b e n e f i c i a l
e f f e c t . S i n c e t h e s u r v i v a l o f E . c o l i i n h e a t - s t e r i l i z e d
w a t e r i s i n c r e a s e d r a t h e r t h a n d e c r e a s e d t h e b a c t e r i c i d a l
3
Mi l l i p o r e F i l t e r C o r p o r a t i o n , B e d f o r d , Ma s s .
a c t i o n c a n n o t b e a t t r i b u t e d t o t h e i n f l u e n c e o f a u t o -
c l a v i n g o n p H a l o n e .
T h e e f f e c t s o f s t e r i l i z a t i o n b y f i l t r a t i o n a n d a u t o -
c l a v i n g o n t h e s a l i n i t y o f s e a w a t e r w e r e e x a m i n e d
a n d a l t h o u g h t h e r e w a s t e n d e n c y f o r f i l t r a t i o n t o c a u s e
a d e c r e a s e a n d a u t o c l a v i n g t o c a u s e a n i n c r e a s e i n
s a l i n i t y , t h e m a g n i t u d e o f t h e c h a n g e s n e v e r e x c e e d e d
1 . 0 % . T h e n a t u r e o f t h e c h a n g e s w a s n o t d e t e r m i n e d
a n d t h e r e f o r e t h e i r s i g n i f i c a n c e i s n o t k n o w n .
F i l t r a t i o n . W a t e r s a m p l e s c o l l e c t e d d u r i n g J u l y a n d
A u g u s t o f 1 9 5 7 w e r e d i v i d e d i n t o t h r e e p o r t i o n s . O n e
w a s s t e r i l i z e d b y f i l t r a t i o n , t h e s e c o n d w a s s t e r i l i z e d
b y a u t o c l a v i n g , a n d t h e t h i r d s e r v e d a s a n u n t r e a t e d
c o n t r o l . T h e s u r v i v a l o f c e l l s o f E . c o l i i n t h e s e w a t e r s
w a s d e t e r m i n e d f o r e a c h o f s i x d i f f e r e n t c o l l e c t i o n s .
T h e r e s u l t s l i s t e d i n T a b l e 1 s h o w t h a t i n e a c h o f t h e
s i x s a m p l e s t e s t e d E . c o l i d i e d m o r e r a p i d l y i n u n t r e a t e d
t h a n i n a u t o c l a v e d w a t e r b u t t h e m a g n i t u d e o f t h e
e f f e c t v a r i e d g r e a t l y . L i k e w i s e , t h e i n f l u e n c e o f f i l t r a t i o n
w a s n o t c o n s t a n t . I n f o u r o f t h e s i x e x p e r i m e n t s s u r v i v a l
o f t h e t e s t o r g a n i s m w a s s i g n i f i c a n t l y g r e a t e r i n f i l t e r e d
t h a n i n u n t r e a t e d s e a w a t e r . I f i t i s a s s u m e d t h a t t h e
f a v o r a b l e e f f e c t o f f i l t r a t i o n r e s u l t e d f r o m r e m o v a l o f
p r e d a t o r y a n d c o m p e t i t i v e o r g a n i s m s , t h e n t h e n u m b e r s
a n d a c t i v i t i e s o f t h e s e o r g a n i s m s v a r i e d f r o m s a m p l e
t o s a m p l e . W a k s m a n a n d C a r e y ( 1 9 3 5 ) c o n s i d e r e d
p r e d a t i o n a s a f a c t o r c o n t r i b u t i n g s i g n i f i c a n t l y t o t h e
d e a t h o f b a c t e r i a i n s e a w a t e r . T h e d e c r e a s e d s u r v i v a l
o f E . c o l i i n t h e f i l t e r e d p o r t i o n o f w a t e r s a m p l e n o . 5
c a n b e e x p l a i n e d b y t h e p o s s i b l e b u t i m p r o b a b l e a s -
s u m p t i o n t h a t a b e n e f i c i a l s u b s t a n c e o r o r g a n i s m w a s
r e m o v e d d u r i n g f i l t r a t i o n .
I n t w o o f t h e s a m p l e s t e s t e d ( n o . 1 a n d 6 ) t h e b a c t e r i -
c i d a l a c t i o n o f t h e w a t e r c o u l d h a v e b e e n f u l l y a c -
c o u n t e d f o r b y p r e d a t o r y a n d c o m p e t i t i v e o r g a n i s m s
t h a t w e r e e l i m i n a t e d b y f i l t r a t i o n ; s u r v i v a l o f E . c o l i
w a s t h e s a m e i n f i l t e r e d a n d a u t o c l a v e d w a t e r . I n t w o
o t h e r s a m p l e s ( n o . 3 a n d 5 ) f i l t r a t i o n h a d n o i n f l u e n c e
o n s u r v i v a l o f t h e t e s t o r g a n i s m a n d i t a p p e a r e d u n -
l i k e l y t h a t p r e d a t i o n a n d c o m p e t i t i o n c o n t r i b u t e d
s i g n i f i c a n t l y t o t h e r a p i d d e a t h o f E . c o l i i n t h e u n -
t r e a t e d w a t e r . I n f o u r o f t h e s i x s a m p l e s t e s t e d ( n o . 2 ,
3 , 4 , a n d 5 ) , p r e d a t i o n a n d c o m p e t i t i o n w e r e n o t a n
a d e q u a t e e x p l a n a t i o n f o r t h e r a p i d d e a t h o f E . c o l i i n
u n t r e a t e d w a t e r , s i n c e s u r v i v a l i n a u t o c l a v e d w a t e r w a s
c o n s i d e r a b l y g r e a t e r t h a n s u r v i v a l i n f i l t e r e d w a t e r .
T A B L E 1 . S u r v i v a l o f E s c h e r i c h i a c o l i i n u n t r e a t e d , f i l t e r e d , a n d
a u t o c l a v e d p o r t i o n s o f s i x s e a w a t e r s a m p l e s c o l l e c t e d d u r i n g
J u l y a n d A u g u s t , 1 9 5 7
S u r v i v a l a f t e r 4 8 h r i n s e a w a t e r s a m p l e n o .
T r e a t m e n t
1 S o t 2 3 4 5 6
N o n e 2 . 2 0 . 7 4 . 6 2 2 . 8 4 . 4 2 . 7
F i l t e r e d 8 . 3 3 . 8 4 . 8 3 0 . 1 0 . 6 3 9 . 6
A u t o c l a v e d 8 . 4 3 0 . 9 6 4 . 6 5 3 . 6 6 9 . 6 3 8 . 5
1 9 6 1 ] 4 0 1
A . F . C A R L U C C I , P . V . S C A R P I N O , A N D D. P R A ME R
T h e b e n e f i c i a l e f f e c t s o f a u t o c l a v i n g o v e r a n d a b o v e
t h o s e r e s u l t i n g f r o m f i l t r a t i o n m a y h a v e b e e n d u e t o
a n y o n e o r a c o m b i n a t i o n o f p o s s i b i l i t i e s t h a t i n c l u d e :
( i ) d e s t r u c t i o n o f b a c t e r i o p h a g e s ; ( i i ) i n a c t i v a t i o n o f
t h e r m o l a b i l e t o x i c s u b s t a n c e s s u c h a s a n t i b i o t i c s ; ( i i i )
i n c r e a s e i n a v a i l a b l e n u t r i e n t s .
T h e i n f l u e n c e s o f b a c t e r i o p h a g e s a n d a n t i b i o t i c s
o n t h e s u r v i v a l o f E . c o l i i n s e a w a t e r w e r e t e s t e d a n d
d i s c u s s e d p r e v i o u s l y ( C a r l u c c i a n d P r a m e r , 1 9 6 0 c , d ) .
T h e e f f e c t i v e n e s s o f b a c t e r i o p h a g e s d e p e n d s o n g r o w t h
a n d m u l t i p l i c a t i o n o f h o s t c e l l s . S i n c e s e a w a t e r d o e s
n o t s u p p o r t d e v e l o p m e n t o f c e l l s o f E . c o l i , c o l i p h a g e s
h a v e n o s i g n i f i c a n t i n f l u e n c e o n s u r v i v a l o f t h e t e s t
b a c t e r i u m a n d i t i s d o u b t f u l t h a t t h e y c o n t r i b u t e t o
t h e b a c t e r i c i d a l a c t i o n o f s e a w a t e r . T h e b i o l o g i c a l
e f f e c t s o f a n t i b i o t i c s i n s e a w a t e r v a r y w i t h t h e n a t u r e
a n d c o n c e n t r a t i o n o f t h e a n t i b i o t i c . I t w a s o b s e r v e d
t h a t , a l t h o u g h s o m e a n t i b i o t i c s a d v e r s e l y i n f l u e n c e d
t h e s u r v i v a l o f c e l l s o f E . c o l i i n s e a w a t e r , t h e r e s u l t
w a s o f a c a d e m i c i n t e r e s t o n l y s i n c e r e l a t i v e l y h i g h
c o n c e n t r a t i o n s w e r e r e q u i r e d a n d t h e r e i s n o e v i d e n c e
t h a t a n t i b i o t i c s a r e p r o d u c e d u n d e r n a t u r a l c o n d i -
t i o n s b y m a r i n e m i c r o o r g a n i s m s .
N u t r i e n t s . S i n c e h e a t k i l l s a n d d i s r u p t s m i c r o b i a l
c e l l s a n d d e g r a d e s t h e r m o l a b i l e c o m p o u n d s t h e t h i r d
p o s s i b i l i t y l i s t e d a b o v e a p p e a r e d r e a s o n a b l e , n a m e l y ,
t h a t t h e c o n c e n t r a t i o n o f a v a i l a b l e n u t r i e n t s i n s e a
w a t e r w a s i n c r e a s e d b y a u t o c l a v i n g . P r e v i o u s s t u d i e s
( V a c c a r o e t a l . , 1 9 5 0 ; O r l o b , 1 9 5 6 ; C a r l u c c i a n d
P r a m e r , 1 9 6 0 b ) h a v e s h o w n t h a t t h e a d d i t i o n o f o r g a n i c
m a t t e r t o s e a w a t e r w h i c h w a s o t h e r w i s e u n t r e a t e d
i n c r e a s e d t h e s u r v i v a l o f E . c o l i . T h e e f f e c t v a r i e d w i t h
t h e c o m p o s i t i o n a n d c o n c e n t r a t i o n o f t h e s u b s t a n c e
t e s t e d . R e l a t i v e l y h i g h l e v e l s w e r e r e q u i r e d a n d i t w a s
d e m o n s t r a t e d t h a t t h e a b i l i t y o f E . c o l i t o u t i l i z e
o r g a n i c m a t t e r a d d e d t o s e a w a t e r w a s l i m i t e d b y p H
a n d s a l i n i t y , a s w e l l a s b y c o m p e t i t i o n f r o m t h e i n -
d i g e n o u s m i c r o p o p u l a t i o n ( C a r l u c c i a n d P r a m e r ,
1 9 6 0 b ) . S i n c e s t e r i l i z a t i o n b y h e a t w o u l d s i m u l t a n e -
o u s l y e l i m i n a t e c o m p e t i t o r s a n d i n c r e a s e t h e a m o u n t o f
a v a i l a b l e o r g a n i c m a t t e r i n s e a w a t e r , l o w e r n u t r i e n t
l e v e l s m a y b e r e q u i r e d f o r a b e n e f i c i a l e f f e c t i n a u t o -
c l a v e d t h a n i n u n t r e a t e d s e a w a t e r . T h e r e f o r e , t h e
i n f l u e n c e o f c o n c e n t r a t i o n o f p e p t o n e o n t h e s u r v i v a l
o f c e l l s o f E . c o l i i n u n t r e a t e d a n d a u t o c l a v e d p o r t i o n s
o f t h e s a m e w a t e r s a m p l e w a s d e t e r m i n e d a t d a i l y
i n t e r v a l s f o r 4 d a y s . T h e r e s u l t s a r e i l l u s t r a t e d i n F i g . 1 .
T h e b a c t e r i c i d a l a c t i o n o f t h e w a t e r w a s a p p a r e n t
f r o m t h e m o r e r a p i d d e a t h o f c e l l s o f E . c o l i i n t h e u n -
t r e a t e d t h a n i n t h e a u t o c l a v e d u n s u p p l e m e n t e d p o r t i o n
o f t h e w a t e r s a m p l e . P e p t o n e a t l e v e l s o f 1 a n d 1 0 p p m
f a v o r e d s u r v i v a l o f t h e t e s t o r g a n i s m i n b o t h u n t r e a t e d
a n d a u t o c l a v e d s e a w a t e r b u t t h e e f f e c t w a s g r e a t e r
i n t h e a u t o c l a v e d p o r t i o n s . A p e p t o n e c o n c e n t r a t i o n
o f 1 0 0 p p m s u p p o r t e d g r o w t h o f E . c o l i i n b o t h u n -
t r e a t e d a n d a u t o c l a v e d w a t e r a n d t h e i n e r e a s e i n c e l l
n u m b e r s w a s g r e a t e r i n t h e s t e r i l i z e d w a t e r . T h e r e -
d u c e d b e n e f i t d e r i v e d b y c e l l s o f E . c o l i f r o m p e p t o n e
a d d e d t o w a t e r w h i c h w a s o t h e r w i s e u n t r e a t e d w a s d u e
i n p a r t t o c o m p e t i t i o n , s i n c e t u r b i d i t y m e a s u r e m e n t s
a n d p l a t e c o u n t s s h o w e d t h a t t h e i n d i g e n o u s m i c r o b i a l
p o p u l a t i o n o f t h e s e a w a t e r i n c r e a s e d w i t h a n i n c r e a s e
i n t h e a m o u n t o f p e p t o n e a d d e d .
T h e s u r v i v a l o f c e l l s o f E . c o l i i n s e a w a t e r t h a t w a s
n o t s t e r i l i z e d b u t c o n t a i n e d 1 0 p p m o f p e p t o n e d i d n o t
d i f f e r s i g n i f i c a n t l y f r o m t h a t i n u n s u p p l e m e n t e d a u t o -
c l a v e d s e a w a t e r ; t h e a d d i t i o n o f 1 0 p p m o f p e p t o n e t o
s e a w a t e r t h a t w a s o t h e r w i s e u n t r e a t e d e l i m i n a t e d t h e
b a c t e r i c i d a l a c t i o n o f t h e w a t e r . H o w e v e r , t h e e f f e c t
l a s t e d o n l y 4 8 h r , a f t e r w h i c h c e l l s o f E . c o l i w e r e o b -
s e r v e d t o d i e o f f m o r e r a p i d l y i n t h e p e p t o n e s u p p l e -
m e n t e d u n s t e r i l i z e d w a t e r t h a n i n t h e u n s u p p l e m e n t e d
a u t o c l a v e d w a t e r . I t a p p e a r e d t h a t s u r v i v a l o f t h e
t e s t o r g a n i s m i n n a t u r a l w a t e r w o u l d h a v e b e e n c o m -
p a r a b l e t o t h a t i n a u t o c l a v e d w a t e r f o r t h e d u r a t i o n o f
t h e e x p e r i m e n t i f t h e f o r m e r h a d b e e n s u p p l e m e n t e d
w i t h m o r e t h a n 1 0 p p m b u t l e s s t h a n 1 0 0 p p m o f p e p -
t o n e . A l t h o u g h a v a i l a b l e o r g a n i c m a t t e r i n t h e f o r m o f
p e p t o n e f a v o r e d s u r v i v a l o f E . c o l i i n s e a w a t e r t h e
m a g n i t u d e o f t h e e f f e c t w a s n o t g r e a t . T h e n u m b e r o f
c e l l s t h a t p e r s i s t e d i n s t e r i l i z e d s e a w a t e r s u p p l e m e n t e d
w i t h 1 0 p p m o f p e p t o n e w a s a p p r o x i m a t e l y 1 0 t i m e s
t h a t i n s t e r i l i z e d b u t u n s u p p l e m e n t e d w a t e r 4 d a y s
a f t e r t r e a t m e n t , w h e r e a s t h e l a t t e r w a s m o r e t h a n
1 , 0 0 0 t i m e s t h e n u m b e r o f c e l l s t h a t s u r v i v e d i n w a t e r
w h i c h w a s n o t s t e r i l i z e d o r s u p p l e m e n t e d . I f t h e
f a v o r a b l e e f f e c t o f a u t o c l a v i n g o n t h e s u r v i v a l o f c e l l s
o f E . c o l i i n s e a w a t e r i s t o b e e x p l a i n e d o n t h e b a s i s o f
a n i n c r e a s e i n c o n c e n t r a t i o n o f a v a i l a b l e n u t r i e n t s ,
i t i s n e c e s s a r y t h a t t h e h e a t t r e a t m e n t r e l e a s e m o r e
t h a n 1 0 b u t l e s s t h a n 1 0 0 p p m o f o r g a n i c m a t t e r , a n d
t h i s i s u n l i k e l y , s i n c e t h e r e q u i r e d r a n g e e x c e e d s t h e
o r g a n i c m a t t e r c o n t e n t o f s e a w a t e r ( Z o B e l l , 1 9 4 6 ) .
T o b e t t e r e v a l u a t e t h e i m p o r t a n c e o f c o m p e t i t i o n
a n d p r e d a t i o n , t h e s u r v i v a l o f E . c o l i w a s m e a s u r e d i n
DA YS
F I G . 1 . I n f l u e n c e o f c o n c e n t r a t i o n o f p e p t o n e o n t h e s u r v i v a l
o f E s c h e r i c h i a c o l i i n u n t r e a t e d a n d a u t o c l a v e d s e a w a t e r .
4 0 2
[ V O L . 9
S U R V I V A L O F E . C O L I I N S E A W A T E R
u n t r e a t e d , f i l t e r - s t e r i l i z e d , a n d a u t o c l a v e d p o r t i o n s
o f s e a w a t e r s a m p l e s w i t h a n d w i t h o u t a d d i t i o n o f 2 0 0
p p m o f g l u c o s e , p e p t o n e , a n d s e w a g e v o l a t i l e s o l i d s .
T h e r e s u l t s s u m m a r i z e d i n T a b l e 2 s h o w t h a t s u i r v i v a l
o f t h e t e s t b a c t e r i u m v a r i e d w i t h t h e c o m p o s i t i o n o f
t h e o r g a n i c m a t e r i a l t e s t e d a n d t h e t r e a t m e n t t o w h i c h
t h e w a t e r s a m p l e w a s s u b j e c t e d . I n a l l b u t o n e c a s e ,
s u r v i v a l o f E . c o l i w a s g r e a t e r i n s u p p l e m e n t e d t h a n i n
u n s u p p l e m e n t e d w a t e r . T h e e x c e p t i o n w a s a u t o c l a v e d
w a t e r t h a t r e c e i v e d s e w a g e . E . c o l i m u l t i p l i e d i n s e a
w a t e r s u p p l e m e n t e d w i t h 2 0 0 p p m p e p t o n e . T h e a d d i -
t i o n o f g l u c o s e a n d s e w a g e t o s e a w a t e r t h a t w a s o t h e r -
w i s e u n t r e a t e d i n c r e a s e d s u r v i v a l b u t d i d n o t r e s u l t i n
m u l t i p l i c a t i o n o f t h e t e s t o r g a n i s m . R e m o v a l b y f i l t r a -
t i o n o f p r e d a t o r s a n d c o m p e t i t o r s c a u s e d a n i n c r e a s e
i n g r o w t h o f t h e t e s t o r g a n i s m i n w a t e r t r e a t e d w i t h
p e p t o n e a n d p e r m i t t e d m u l t i p l i c a t i o n i n w a t e r t h a t
r e c e i v e d g l u c o s e . T h e s u r v i v a l o f E . c o l i i n w a t e r s u p -
p l e m e n t e d w i t h s e w a g e w a s i n c r e a s e d b y f i l t r a t i o n .
De v e l o p m e n t o f t h e t e s t o r g a n i s m w a s s i m i l a r i n p e p -
t o n e - s u p p l e m e n t e d , a u t o c l a v e d , a n d f i l t e r - s t e r i l i z e d
w a t e r , w h i c h m i g h t s u g g e s t t h a t c o m p e t i t o r s a n d p r e d -
a t o r s w e r e o f p r i m a r y i m p o r t a n c e i n l i m i t i n g u t i l i z a -
t i o n o f p e p t o n e b y E . c o l i . T h e s a m e e x p l a n a t i o n m a y
T A B L E 2 . I n f l u e n c e o f o r g a n i c m a t t e r o n t h e s u r v i v a l o f E s c h e r i c h i a
c o l i i n u n t r e a t e d , f i l t e r e d , a n d a u t o c l a v e d s e a w a t e r
S u r v i v a l a f t e r 4 8 h r a f t e r
w a t e r t r e a t m e n t :
S u p p l e m e n t
N o n e F i l t e r e d A u t o c l a v e d
N o n e 4 . 6 4 . 8 6 4 . 6
P e p t o n e , 2 0 0 p p m 2 7 2 . 7 * 2 , 8 7 3 . 6 * 2 , 6 3 1 . 2 *
N o n e 2 . 2 8 . 3 8 . 4
G l u c o s e , 2 0 0 p p m + 1 7 . 6 7 1 2 . 1 * 3 , 3 0 5 . 9 *
( N H 4 ) 2 H P O 4 - N , 4 p p m
N o n e 0 . 7 3 . 8 3 0 . 9
S e w a g e ( v o l a t i l e s o l i d s ) , 2 0 0 5 . 0 1 8 . 6 2 0 . 2
p p m
*
E . c o l i m u l t i p l i e d .
T A B L E 3 . C o s n p o s i t i o n o f f o u r a r t i f i c i a l s e a w a t e r s
Z o B e l l
T o m l i n s o n S v e r d r u p Ma c L e o d
C o n s t i t u e n t
( 1 9 4 6 )
a n d Ma c L e o d e t a l . a n d O n o f r e y
( 1 9 5 7 ) ( 1 9 4 2 ) ( 1 9 5 6 )
N a C l 2 . 4 2 . 4 2 . 7 2 . 4
Mg C l 2 - 6 H 2 0 1 . 1 1 . 1 0 . 5 1 . 1
N a 2 S O 4 0 . 4 0 . 4 0 . 4
C a C l 2 - 2 H 2 0 0 . 1 0 . 2 0 . 2
K C I 0 . 0 7 0 . 0 7 0 . 0 7 0 . 0 7
N a H C O 3 0 . 0 2 0 . 0 2 0 . 0 2 0 . 0 2
K B r 0 . 0 1 0 . 0 1 0 . 0 1
S r C l 2 * 6 H 2 0 0 . 0 0 4 0 . 0 0 4 0 . 0 0 4
H 3 B O 3 0 . 0 0 3 0 . 0 0 3 0 . 0 0 3
N a 2 S i O 3 , 9 H 2 0 0 . 0 0 0 5
N a F 0 . 0 0 0 3
N H 4 N O 3 0 . 0 0 0 2
F e P O 4 - 4 H 2 0 0 . 0 0 0 1
Mg S O 4 - 7 H 2 0 0 . 7
N a B r 0 . 0 0 8
b e o f f e r e d f o r t h e c o m p a r a b l e s u r v i v a l o f E . c o l i i n
s e w a g e - s u p p l e m e n t e d , a u t o c l a v e d , a n d f i l t e r - s t e r i l i z e d
w a t e r . O n t h e o t h e r h a n d , g r o w t h o f E . c o l i i n a u t o -
c l a v e d s e a w a t e r s u p p l e m e n t e d w i t h g l u c o s e w a s m u c h
g r e a t e r t h a n t h a t i n f i l t e r e d w a t e r t h a t r e c e i v e d t h e
s a m e s u p p l e m e n t , s u g g e s t i n g t h a t d e v e l o p m e n t o f t h e
t e s t o r g a n i s m i n s e a w a t e r c o n t a i n i n g g l u c o s e w a s
l i m i t e d n o t o n l y b y p r e d a t o r s a n d c o m p e t i t o r s , b u t a l s o
b y o t h e r f a c t o r s n o t r e m o v e d b y f i l t r a t i o n b u t d e s t r o y e d
b y t h e a u t o c l a v i n g p r o c e s s .
F r o m t h e s e a n d o t h e r s t u d i e s i t i s a p p a r e n t t h a t
o r g a n i c m a t t e r c a n i n f l u e n c e t h e s u r v i v a l o f E . c o l i i n
s e a w a t e r . H o w e v e r , t h e c o n c e n t r a t i o n r e q u i r e d t o
o b t a i n a n e f f e c t o f s u f f i c i e n t m a g n i t u d e t o o v e r c o m e
t h e b a c t e r i c i d a l a c t i o n i s i n t h e r a n g e o f 1 0 t o 1 0 0 p p m
a n d e x c e e d s t h e t o t a l o r g a n i c m a t t e r c o n t e n t o f p e l a g i c
w a t e r t h a t i s f r e e o f p o l l u t i o n . T h e r e p o r t o f J o h a n -
n e s s o n ( 1 9 5 7 ) i s u n i q u e i n t h a t t h e a m i n o a c i d c y s t e i n e
w a s d e m o n s t r a t e d t o b e p a r t i c u l a r l y e f f e c t i v e , a n d t o
f a v o r s u r v i v a l o f E . c o l i i n s e a w a t e r a t o r g a n i c m a t t e r
l e v e l s t h a t a r e c o n c e i v a b l e u n d e r n a t u r a l c o n d i t i o n s .
T h e b e n e f i c i a l e f f e c t o f c y s t e i n e o n s u r v i v a l o f c e l l s o f
E . c o l i i n s e a w a t e r w a s c o n f i r m e d ( C a r l u c c i a n d P r a m e r ,
1 9 6 0 b ) a n d s t u d i e s o f t h e m o d e o f a c t i o n o f c y s t e i n e
a r e i n p r o g r e s s .
O n t h e b a s i s o f t h e p r e s e n t i n v e s t i g a t i o n s i t i s c o n -
c l u d e d t h a t t h e b a c t e r i c i d a l a c t i o n o f s e a w a t e r a s
m e a s u r e d b y t h e d i f f e r e n c e i n s u r v i v a l o f c e l l s o f E .
c o l i i n u n t r e a t e d a n d a u t o c l a v e d p o r t i o n s o f w a t e r i s
n o t e x p l i c a b l e i n t e r m s o f t h e d e s t r u c t i o n o r i n a c t i v a -
t i o n b y h e a t o f b a c t e r i o p h a g e s o r a n t i b i o t i c s . A l t h o u g h
a u t o c l a v i n g k i l l s a n d d i s r u p t s m i c r o b i a l c e l l s a n d d e -
g r a d e s t h e r m o l a b i l e c o m p o u n d s , t h e r e s u l t i n g i n c r e a s e
i n n u t r i e n t l e v e l i s n o t a d e q u a t e t o e x p l a i n t h e f a v o r a b l e
e f f e c t o f h e a t s t e r i l i z a t i o n . F u r t h e r e v i d e n c e i n s u p p o r t
o f t h i s c o n c l u s i o n w a s o b t a i n e d f r o m s t u d i e s w i t h
a r t i f i c i a l s e a w a t e r .
T A B L E 4 . S u r v i v a l o f E s c h e r i c h i a c o l i i n u n t r e a t e d a n d a u t o c l a v e d
p o r t i o n s o f f o u r a r t i f i c i a l s e a w a t e r s
S u r v i v a l a f t e r 2 4 h r
A r t i f i c i a l s e a w a t e r
U n t r e a t e d A u t o c l a v e d
Z o B e l l ( 1 9 4 6 ) . . . . . . . . . . . . . . . . . < . . . . . . . . 0 . 0 1 2 . 3
T o m l i n s o n a n d Ma c L e o d ( 1 9 5 7 ) . . . . . . . < 0 . 0 1 0 . 7
Ma c L e o d a n d O n o f r e y ( 1 9 5 6 ) . . . . . . . . . < 0 . 0 1 5 . 1
S v e r d r u p e t a l . ( 1 9 4 2 ) . . . . . . . . . . . . . . . . < 0 . 0 1 0 . 1
T A B L E 5 . I n f l u e n c e o f c y s t e i n e o n t h e s u r v i v a l o f E s c h e r i c h i a c o l i
i n a r t i f i c i a l s e a w a t e r
T r e a t m e n t S u r v i v a l a f t e r 2 4 h r
A u t o c l a v e d . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 3 . 6
U n t r e a t e d . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . < . . . . . . 0 . 0 1
U n t r e a t e d + c y s t e i n e , 0 . 0 3 5 p p m . . < 0 . 0 1
U n t r e a t e d + c y s t e i n e , 0 . 3 5 p p m . . . . . . . . . . 0 . 3
U n t r e a t e d + c y s t e i n e , 3 . 5 p p m . . . . . . . . . . . 2 0 . 3
1 9 6 1 ]
4 0 3
A . F . C A R L U C C I , P . V . S C A R P I N O , A N D D. P R A ME R
A r t i f i c i a l s e a w a t e r . S e v e r a l f o r m u l a t i o n s o f a r t i f i c i a l
s e a w a t e r h a v e b e e n u s e d f o r v a r i o u s p u r p o s e s b y
n u m e r o u s i n v e s t i g a t o r s ( Z o B e l l , 1 9 4 6 ) . T o d e t e r m i n e
i f a r t i f i c i a l s e a w a t e r e x e r t e d b a c t e r i c i d a l a c t i o n , t h e
s u r v i v a l o f E . c o l i i n a u t o c l a v e d a n d u n t r e a t e d p o r -
t i o n s o f f o u r d i f f e r e n t f o r m u l a t i o n s w a s d e t e r m i n e d .
T h e c o m p o s i t i o n o f t h e w a t e r s e m p l o y e d i s p r e s e n t e d
i n T a b l e 3 . T h e s i m p l e s t f o r m u l a t i o n c o n t a i n e d 7 s a l t s ,
w h e r e a s t h e m o s t c o m p l e x c o n t a i n e d 1 3 . T h e y d i f f e r e d
p r i m a r i l y i n t h e c o m p o s i t i o n a n d c o n c e n t r a t i o n o f
t r a c e c o n s t i t u e n t s .
T h e r e s u l t s l i s t e d i n T a b l e 4 s h o w t h a t s u r v i v a l o f
t h e t e s t o r g a n i s m w a s c o n s i s t e n t l y g r e a t e r i n a u t o -
c l a v e d t h a n i n u n t r e a t e d w a t e r b u t t h e m a g n i t u d e o f
t h e e f f e c t v a r i e d . A r t i f i c i a l s e a w a t e r p r e p a r e d a c c o r d -
i n g t o Ma c L e o d a n d O n o f r e y ( 1 9 5 6 ) h a d t h e g r e a t e s t
b a c t e r i c i d a l a c t i o n a n d t h e f o r m u l a t i o n o f S v e r d r u p ,
J o h n s o n , a n d F l e m i n g ( 1 9 4 2 ) h a d t h e l e a s t e f f e c t . T h e
w a t e r c h o s e n f o r f u r t h e r u s e w a s t h a t o f Ma c L e o d
a n d O n o f r e y ( 1 9 5 6 ) . I t w a s m o r e c o n v e n i e n t t o p r e p a r e
t h a n t h a t o f Z o B e l l ( 1 9 4 6 ) , m o r e c o m p l e t e i n m a j o r
e l e m e n t s t h a n t h a t o f T o m l i n s o n a n d Ma c L e o d ( 1 9 5 7 ) ,
a n d d e m o n s t r a t e d a m a r k e d a n d c o n s i s t e n t b a c t e r i c i d a l
a c t i o n . A r t i f i c i a l s e a w a t e r i s a m o r e s i m p l e s y s t e m f o r
s t u d y t h a n n a t u r a l s e a w a t e r . I t i s o f k n o w n c o m -
p o s i t i o n , a n d l a c k s b a c t e r i o p h a g e s , p r e d a t o r s , c o m -
p e t i t o r s , a n t i b i o t i c s , a n d o r g a n i c n u t r i e n t s t h a t a r e o r
m a y b e p r e s e n t i n n a t u r a l s e a w a t e r . H o w e v e r , t h e
b a c t e r i c i d a l a c t i o n o f a r t i f i c i a l s e a w a t e r m a y b e c a u s e d
b y f a c t o r s w h i c h d i f f e r f r o m t h o s e r e s p o n s i b l e f o r t h e
e f f e c t i n n a t u r a l s e a w a t e r a n d , i n s u c h a c a s e , i d e n t i -
f i c a t i o n o f t h e f o r m e r w i l l n o t c l a r i f y t h e l a t t e r .
E v i d e n c e t h a t t h e b a c t e r i c i d a l a c t i o n o f a r t i f i c i a l
a n d n a t u r a l s e a w a t e r h a v e a c o m m o n b a s i s w a s o b -
t a i n e d f r o m s t u d i e s w i t h c y s t e i n e . S i n c e t h i s c o m -
p o u n d i s k n o w n t o o f f s e t t h e b a c t e r i c i d a l a c t i o n o f
n a t u r a l s e a w a t e r ( J o h a n n e s s o n , 1 9 5 7 ; C a r l u c c i a n d
P r a m e r , 1 9 6 0 b ) , i t s e f f e c t o n t h e s u r v i v a l o f E . c o l i i n
a r t i f i c i a l s e a w a t e r w a s d e t e r m i n e d . T h e r e s u l t s l i s t e d
i n T a b l e 5 s h o w t h a t s u r v i v a l o f t h e t e s t o r g a n i s m w a s
g r e a t e r i n a u t o c l a v e d t h a n i n t h e u n t r e a t e d a r t i f i c i a l
s e a w a t e r . C y s t e i n e a t a c o n c e n t r a t i o n o f 0 . 0 3 5 p p m
w a s w i t h o u t e f f e c t , b u t s u r v i v a l w a s i n c r e a s e d b y 0 . 3 5
p p m a n d i n w a t e r t h a t r e c e i v e d 3 . 5 p p m o f c y s t e i n e
b u t w a s o t h e r w i s e u n t r e a t e d , s u r v i v a l o f t h e t e s t
o r g a n i s m e x c e e d e d t h a t i n a u t o c l a v e d w a t e r . F u r t h e r
s t u d y i s r e q u i r e d t o i d e n t i f y t h e f a c t o r s r e s p o n s i b l e
f o r t h e b a c t e r i c i d a l a c t i o n o f a r t i f i c i a l s e a w a t e r a n d
t o e s t a b l i s h t h a t t h e s a m e o r d i f f e r e n t f a c t o r s a r e
r e s p o n s i b l e f o r t h e m o r e r a p i d d e a t h o f E . c o l i i n u n -
t r e a t e d t h a n i n a u t o c l a v e d n a t u r a l s e a w a t e r .
L I T E R A T U R E C I T E D
B E A R D, P . J . , A N D N . F . ME A DO W C R O F T , 1 9 3 5 . S u r v i v a l a n d
r a t e o f d e a t h o f i n t e s t i n a l b a c t e r i a i n s e a w a t e r . A m . J .
P u b l i c H e a l t h 2 5 : 1 0 2 3 - 1 0 2 6 .
C A R L U C C I , A . F . , A N D D. P R A ME R . 1 9 5 9 . F a c t o r s a f f e c t i n g t h e
s u r v i v a l o f b a c t e r i a i n s e a w a t e r . A p p l . Mi c r o b i o l . 7 : 3 8 8 -
3 9 2 .
C A R L U C C I , A . F . , A N D D. P R A ME R . 1 9 6 0 a . A n e v a l u a t i o n o f
f a c t o r s a f f e c t i n g t h e s u r v i v a l o f E s c h e r i c h i a c o l i i n s e a
w a t e r . I . E x p e r i m e n t a l p r o c e d u r e s . A p p l . Mi c r o b i o l . 8 : 2 4 3 -
2 4 7 .
C A R L U C C I , A . F . , A N D D. P R A ME R . 1 9 6 0 b . A n e v a l u a t i o n o f
f a c t o r s a f f e c t i n g t h e s u r v i v a l o f E s c h e r i c h i a c o l i i n s e a
w a t e r . I I . S a l i n i t y , p H , a n d n u t r i e n t s . A p p l . Mi c r o b i o l .
8 : 2 4 7 - 2 5 0 .
C A R L U C C I , A . F . , A N D D. P R A ME R . 1 9 6 0 c . A n e v a l u a t i o n o f
f a c t o r s a f f e c t i n g t h e s u r v i v a l o f E s c h e r i c h i a c o l i i n s e a
w a t e r . I I I . A n t i b i o t i c s . A p p l . Mi c r o b i o l . 8 : 2 5 1 - 2 5 4 .
C A R L U C C I , A . F . , A N D D. P R A ME R . 1 9 6 0 d . A n e v a u l a t i o n o f f a c -
t o r s a f f e c t i n g t h e s u r v i v a l o f E s c h e r i c h i a c o l i i n s e a w a t e r .
I V . B a c t e r i o p h a g e s . A p p l . Mi c r o b i o l . 8 : 2 5 4 - 2 5 6 .
DE G I A X A , V . 1 8 8 9 . U e b e r d a s V e r h a l t e n e i n i g e r p a t h o g e n e r
Mi k r o o r g a n i s m e n i m Me e r w a s s e r . Z . H y g . I n f e k t i o n s -
k r a n k h . 6 : 1 6 2 - 2 2 4 .
J O H A N N E S S O N , J . K . 1 9 5 7 . N a t u r e o f t h e b a c t e r i c i d a l a g e n t i n
s e a w a t e r . N a t u r e 1 8 0 : 2 8 5 - 2 8 6 .
K E T C H U M, B . H . , C . L . C A R E Y, A N D M. B R I G G S 1 9 4 9 . P r e l i m i -
n a r y s t u d i e s o n t h e v i a b i l i t y a n d d i s p e r s a l o f c o l i f o r m
b a c t e r i a i n t h e s e a . I n L i m n o l o g i c a l a s p e c t s o f w a t e r s u p p l y
a n d w a s t e d i s p o s a l , p . 6 4 - 7 3 , A A A S , W a s h i n g t o n , D. C .
K I R I B A YA S H I , S . , A N D T . A I DA . 1 9 3 4 . A s t u d y o f t h e f a t e o f
c h o l e r a v i b r i o i n t h e s e a w a t e r o f K e e l u n g P o r t , F o r m o s a .
U . S . P u b l i c H e a l t h E n g . A b s t r . 1 4 : 6 1 .
K R A S S I L N I K O V , N . A . 1 9 3 8 . T h e b a c t e r i c i d a l a c t i o n o f s e a w a t e r .
Mi k r o b i o l o g i y a , 7 : 3 2 9 - 3 3 4 ( E n g l i s h s u m m a r y ) .
MA C L E O D, R . A . , A N D E . O N O F R E Y, 1 9 5 6 . N u t r i t i o n a n d m e t a b o -
l i s m o f m a r i n e b a c t e r i a . I I . O b s e r v a t i o n s o n t h e r e l a t i o n
o f s e a w a t e r t o t h e g r o w t h o f m a r i n e b a c t e r i a . J . B a c t e r i o l .
7 1 : 6 6 1 - 6 6 7 .
N I C A T I , W . , A N D W . R I E T S C H . 1 8 8 5 . E x p e r i e n c e s s u r l a v i t a l i t 6
d u b a c i l l e v i r g u l e c h o l e r i g e n e . R e v . h y g . e t p o l i c e s a n i t .
7 : 3 5 3 - 3 7 8 .
N U S B A U M, I . , A N D R . M. G A R V E R , 1 9 5 5 . S u r v i v a l o f c o l i f o r m
o r g a n i s m s i n P a c i f i c C o a s t a l w a t e r s . S e w a g e a n d I n d .
W a s t e s 2 7 : 1 3 8 3 - 1 3 9 0 .
O R L O B , G . T . 1 9 5 6 . V i a b i l i t y o f s e w a g e b a c t e r i a i n s e a w a t e r .
S e w a g e a n d I n d . W a s t e s 2 8 : 1 1 4 7 - 1 1 6 7 .
R I C H O U , R . , M. N E A N T , A N D H . R I C H O U . 1 9 5 5 . S u r l e p o u v o i r
b a c t e r i c i d e d e l ' e a u d e m e r a l ' 6 g a r d d i i s t a p h y l o c o q u e .
R e v . i m m u n o l . 1 9 : 6 4 - 6 8 .
S V E R DR U P , H . V . , M. W . J O H N S O N , A N D R . H . F L E MI N G . 1 9 4 2 .
T h e o c e a n s . P r e n t i c e - H a l l , I n c . , N e w Yo r k . p . 1 0 8 7 .
T O ML I N S O N , N . , A N D R . A . MA C L E O D. 1 9 5 7 . N u t r i t i o n a n d
m e t a b o l i s m o f m a r i n e b a c t e r i a . I V . T h e p a r t i c i p a t i o n o f
N a +, K +, a n d Mg + s a l t s i n t h e o x i d a t i o n o f e x o g e n o u s
s u b s t r a t e s b y a m a r i n e b a c t e r i u m . C a n . J . Mi c r o b i o l .
3 : 6 2 7 - 6 3 8 .
V A C C A R O , R . F . , M. P . B R I G G S , C . L . C A R E Y, A N D B . H .
K E T C H U M. 1 9 5 0 . V i a b i l i t y o f E s c h e r i c h i a c o l i i n s e a w a t e r .
A m . J . P u b l i c H e a l t h 4 0 : 1 2 5 7 - 1 2 6 6 .
W A K S MA N , S . A . , A N D C . C A R E Y. 1 9 3 5 . De c o m p o s i t i o n o f o r -
g a n i c m a t t e r i n s e a w a t e r b y b a c t e r i a . I I . I n f l u e n c e o f
a d d i t i o n o f o r g a n i c s u b s t a n c e s u p o n b a c t e r i a l a c t i v i t i e s .
J . B a c t e r i o l . 2 9 : 5 4 5 - 5 6 1 .
W I L L I A MS , F . W . 1 9 5 0 . S u r v i v a l o f E s c h e r i c h i a c o l i i n s e a w a t e r .
MS c . T h e s i s , U n i v . o f W a s h i n g t o n , P u l l m a n .
Z o B E L L , C . E . 1 9 3 6 . B a c t e r i c i d a l a c t i o n o f s e a w a t e r . P r o c . S o c .
E x p . B i o l . Me d . 3 4 : 1 1 3 - 1 1 6 .
Z o B E L L , C . E . 1 9 4 6 . Ma r i n e m i c r o b i o l o g y . C h r o n i c a B o t a n i c a
C o . , W a l t h a m , Ma s s . p . 2 4 0 .
4 0 4
[ V O L . 9