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METABOLISMO MICROBIANO

CARACTERSTICAS GENERALES DE LOS GRUPOS MICROBIANOS


Las bacterias se encuentran en casi todos los ambientes e intervienen en varios procesos
biolgicos. El crecimiento microbiano requiere la formacin de estructuras complejas como
protenas, cidos nucleicos, polisacridos y lpidos a partir de elementos preformados en el
medio de crecimiento o ser sintetizados por la propia clula, a su vez, este crecimiento
necesita de una fuente de energa para ser llevado a efecto, todo este proceso se designa con
el nombre de metabolismo, que se define como todas las transformaciones qumicas que
ocurren en una clula.
Todos los seres vivos llevan a cabo el procesamiento de los nutrientes que los mantienen vivos.
A este conjunto de procesos, se le conoce como metabolismo y consiste de un gran nmero
de reacciones qumicas destinadas a transformar las molculas nutritivas en elementos que
posteriormente sern utilizados para la sntesis de los componentes estructurales; como
pueden ser las protenas. Otra parte importante del metabolismo es la de transformar y
conservar la energa que est contenida en una reaccin qumica en algn proceso que
requiera de energa como puede ser el trabajo o el movimiento.
Es evidente que los nutrientes son transformados cuando entran en un organismo, ya que en
ningn caso el alimento contiene todas las molculas que una clula requiere. Esto se vio con
claridad al observar el crecimiento normal de levaduras en un medio de cultivo que slo
contena glucosa como nica fuente de energa. As pues, se pens que la sntesis de todos los
componentes celulares se llevaba acabo en el interior de las levaduras.
Hoy se conoce que las transformaciones que sufre la glucosa no ocurren en un solo paso, sino
que, por el contrario, se forman varios productos intermedios que en muchas ocasiones no
tienen una funcin especfica a no ser la de formar parte delo que se conoce como va
metablica. La transformacin de los nutrientes en compuestos tiles para la subsistencia de
un organismo se lleva a cabo por medio de las reacciones qumicas que realizan unas protenas
conocidas como enzimas.
El trmino metabolismo se refiere al conjunto de reacciones qumicas que tiene lugar en la
clula, y tiene tres funciones especficas a saber:
- Obtener energa qumica del entorno, almacenarla, para utilizar luego en diferentes
funciones celulares,
- Convertir los nutrientes exgenos en unidades precursoras de los componentes
macromoleculares de la clula bacteriana,
- Formar y degradar molculas necesarias para funciones celulares especficas, como por
ejemplo, movilidad y captacin de nutrientes.

La energa liberada en las reacciones catablicas se usa para fosforilar ADP,generando ATP. La
energa almacenada en el ATP se utiliza en la mayora de los trabajos celulares. Por lo tanto, el
ATP acopla los procesos productores de energa de la clula a los consumidores de energa.
Figura N 1.2.
Todos los procesos que ocurren en la clula o bacteria requieren de energa.
Esta energa est almacenada como molculas de ATP, que se forma a partir de ADP y fosfato
inorgnico.




El metabolismo tiene lugar a travs de secuencias de reacciones catalizadas enzimticamente,
y se divide en anabolismo y catabolismo. El proceso por el cual la clula bacteriana sintetiza
sus propios componentes se conoce como anabolismo, y como resulta en la produccin de
nuevo material celular, tambin se denomina biosntesis.
La biosntesis es un proceso que requiere energa, por lo tanto las bacterias deben ser capaces
de obtenerla de su entorno para crecer y, eventualmente, multiplicarse.
El conjunto de reacciones de gradativas de los nutrientes para obtener energa o para
convertirlos en unidades. Figura N 1.3.








TIPOS DE METABOLISMO MICROBIANO
Los distintos tipos de metabolismo microbiano se pueden clasificar segn tres criterios
distintos:
1. La forma la que el organismo obtiene el carbono para la construccin de la masa
celular:
Auttrofo. El carbono se obtiene del dixido de carbono (CO
2
).
Hetertrofo. El carbono se obtiene de compuestos orgnicos (glucosa, por
ejemplo).
Mixtrofo. El carbono se obtiene tanto de compuestos orgnicos como fijando
el dixido de carbono.
2. La forma en la que el organismo obtiene los equivalentes reductores para la
conservacin de la energa o en las reacciones biosintticas:
Litotrofo. Los equivalentes reductores se obtienen de compuestos inorgnicos.
Organotrofo. Los equivalentes reductores se obtienen de compuestos
orgnicos.
3. La forma en la que el organismo obtiene la energa para vivir y crecer:
Quimiotrofo. La energa se obtiene de compuestos qumicos externos.
Fototrofo. La energa se obtiene de la luz.

En la prctica, estos trminos se combinan casi libremente. Los ejemplos tpicos
son como sigue:
Los quimiolitoauttrofos obtienen energa de la oxidacin de compuestos
inorgnicos y el carbono de la fijacin del dixido de carbono. Ejemplos:
bacterias nitrificantes, bacterias oxidantes del azufre, bacterias oxidantes del
hierro, bacterias oxidantes del hidrgeno.
Los fotolitoauttrofos obtienen energa de la luz y el carbono de la fijacin del
dixido de carbono, usando compuestos inorgnicos como equivalentes
reductores. Ejemplos: Cyanobacteria (agua como equivalente
reductor), Chlorobiaceae,Chromaticaceae (sulfuro de
hidrgeno), Chloroflexus (hidrgeno).
Los quimiolitohetertrofos obtienen energa de la oxidacin de compuestos
inorgnicos, pero no pueden fijar el dixido de carbono. Ejemplos:
algunos Nitrobacter spp., Wolinella (con hidrgeno como equivalente
reductor), algunas bacterias oxidantes del hidrgeno.
Los quimioorganohetertrofos obtienen energa, carbono y equivalentes
reductores para las reacciones biosintticas de compuestos orgnicos.
Ejemplos:
La mayora de las bacterias, como Escherichiacoli, Bacillus spp., Actinobacteria.
Los fotoorganotrofos obtienen energa de la luz y el carbono y los equivalentes
reductores para las reacciones biosintticas de compuestos orgnicos.








COMPETENCIAS
Manipula e identifica los microorganismos en funcin a su comportamiento
bioqumico.

MATERIALES Y EQUIPOS

Placas con agar nutritivo con 1% de almidn
Tubos con: gelatina, caldo peptonado, caldo MR VP (Rojo de Metilo
VogesProskauer), caldo lactosado con indicador de Andrade.
Tubos con medio de: Citrato de Simmons en plano inclinado, Urea, TSI en plano
inclinado y con TSA.
Cultivos de: E. coli,B. subtilis,Ps. aeruginosa,
Enterobacter,Proteusvulgaris,Staphylococcus. aureus,Streptococcusviridans.
Lugol.
Reactivos de: kovacs, rojo de metilo, Voges Praoskauer: alfa-naftol al 5%, en
alcohol amlico, KOH creatina al 40%
Tiras de papel de filtro impregnadas con solucin saturada de acetato de plomo.
Perxido de hidrgeno al 3%.
Campanas de Durham y pipetas Pasteur.





PROCEDIMIENTO
1. UTILIZACION DE CARBOHIDRATOS
A.) CALDO LACTOSADO

Inocule en el tubo de caldo lactosado con Shigella.
Incubar a 37 C por 24 horas.

B.) TSA CON ALMIDON 5%



Siembre en la placa petri que contiene
TSA con almidn al 5 % el m.o Shigella,
incube a 37 C por 24 horas.





C.) TSI: TRIPLE SUGAR IRON

Con el asa de siembra, inocule una porcin pequea de
la colonia en el centro del tubo y estre la superficie
del pico de flauta. Rotular e incubar a 37C por 24
horas.


D.) PRODUCCION DE ACIDOS Y ACETIL-METIL-CARBINOL
(ACEOTINA)

1. PRUEBA DE VOGES PROSKAUER
Por la tcnica de inoculacin sembrar el m.o Shigella,
incubar a 37C por 24 horas.





2. PRUEBA DE ROJO DE METILO
Por la tcnica de inoculacin sembrar el m.o
Shigella, incubar a 37C por 48-72horas.





2. PROTEINAS
A.) HIDRLISIS DE LA GELATINA
Inocule el m.o Shigella en el tubo que contiene gelatina
haciendo uso de un asa en punto introduciendo de manera
vertical hasta el fondo del tubo.



B.) PRODUCCION DEL INDOL


Inocule el m.o Shigella en el tubo que contiene
caldo peptonado haciendo uso de un asa en punto
por el mtodo de inoculacin. Inocule a 37 C por
24 horas. Al segundo dia agregue 4 gotas del
reactivo de Kovac dejando resbalar por la pared
interna que presenta el desarrollo bacteriano,
luego agite suavemente.


C.) PRODUCCION DE SULFURO DE HIDROGENO
Por una tcnica de puntura y estria, sembrar el m.o en el medio de TSA. Luego
coloque una tira de papel de filtro impregnada con acetao de plomo, finalmente incube
a 37C por 24 horas.













E.) SIM

Sembrar el m.o Shigella en el medio de cultivo SIM,
incubar a 37C por 48-72horas




3. PRUEBAS BIOQUIMICAS DIFERENCIALES
A.) UTILIZACION DEL CITRATO


Sembrar por la tcnica de estria con la sepa de
Shigella.
Incubar a 37C por 24 horas.





B.) HIDRLISIS DE LA UREA
Por la tcnica de estra sembrar en el medio de urea el m.o Shigella
Incubar a 37C por 24 horas.


C.) PRUEBA DE LA CATALASA
Con el asa de siembra en punta, picar el crecimiento de uno de los tubo con el cultivo de
Shigella y transferir el inoculo a un portaobjeto limpio.
Aadir 2 gotas de H
2
O
2
3%
Observar si se forman burbujas o no inmediatamente despus que se aade el reactivo.










RESULTADOS:
A) CARBOHIDRATOS
1.- CALDO LACTOSADO











La prueba resulto
positiva porque se
observo el
desprendimiento
de gases, es decir
burbujas (CO2) en
el tubo de
Dunhan.

2.- TSI















4.- PRODUCCION DE ACIDOS Y ACETIL METIL CARBINOL
ROJO DE METILO













VOGES PROSKAWER
El tubo de ensayo que
contena TSI cambio de
coloracin (rojo-amarillo),
siendo esto un resultado
positivo y significando que la
bacteria Shigella ferment 3
azucares (glucosa, lactosa y
sacarosa).No hubo produccin
de gas.
El rojo de metilo es un indicador de pH,
que se utiliza para visualizar la
produccin de cidos por la va de
fermentacin cido mixta.
La prueba es positiva si se desarrolla de
un color rojo estable, esto indica que la
produccin de cido es suficiente para
producir el viraje del indicador y el
microorganismo ferment la glucosa por
la va de cido mixta, pero en este caso
con la bacteria Shigella nos dio
NEGATIVO.















PROTEINAS
1.- CALDO PEPTONADO

















Se realizo para determinar la presencia
de INDOL que es uno de los productos
de degradacin metablica del
triptfano, y da positivo para las
bacterias que poseen triptofanasa porque
estas son capaces de hidrolizar y
desaminar el triptfano con produccin
de indol, acido piruvico y amoniaco.
Esta prueba est basada en la formacin
de un complejo rojo cuando el indol
reacciona con el grupo aldehdo del p-
dimetilaminobenzaldehido, en este caso
para Shigella nos dio un resultado
NEGATIVO porque no existe la
formacin del anillo rojo.
El acetil-metil-carbinol (o acetona)
es un producto intermediario en la
produccin de butanodiol. En
medio alcalino y en presencia de
oxgeno la acetona es oxidada a
diacetilo. El desarrollo de un color
rojo-fucsia luego de 15 minutos
indica la presencia de diacetilo,
producto de oxidacin de la
acetona y por lo tanto una prueba
VP positiva, pero en este caso con
Shigella nos dio un resultado
NEGATIVO.

2.- SIM














3.- PRODUCCION DE SULFURO DE HIDROGENO TSA

















Nos dio un resultado
negativo, el cual indica que
Shigella no presenta
movilidad ya que solo
creci en el rea de la
puntura.
Los bacilos productores de este gas hacen que el medio tome un color
enengrecido cas siempre en la profundidad. Como producto final metablico se
obtiene sulfuro del hidrgeno (H
2
S). El hidrgeno producido durante la
fermentacin es realmente quin conduce la respiracin durante la reduccin del
sulfato. Eventualmente, los electrones pasan de la enzima hidrogenasa a la APS
reductasa, que junto con la sulfito reductasa termina la reduccin del sulfato a
sulfuro del hidrgeno, pero en este caso obtuvimos un resultado NEGATIVO.


4.- GELATINA












USO DEL CITRATO


















Se usa para valorar la licuefaccin o
licuacin de la gelatina por accin de las
gelatinasas bacterianas producidas por
algunas Enterobacterias. La reaccin
positiva hace que el medio permanezca
lquido despus de la incubacin an
despus de dejarse en refrigeracin
durante media hora. La reaccin
negativa permite nuevamente la
solidificacin.

Mide la capacidad de un organismo
para utilizar el citrao como nica
fuente de carbono, las bacterias al usar
citrato extraen nitrgeno de la sal de
amonio con produccin de amoniaco
(alcalinizacin del medio) que hace
que vire el indicador de verde a azul,
en este caso nos dio un resultado
POSITIVO porque la muestra final
viro a color azul.
REACCION DE CITOCROMO OXIDASA
















PRUEBA DE CATALASA
















Se trata de un enzima que oxida el citocromo C
de la cadena transportadora de e-. Este se detecta
utilizando el tetra para fenilendiamina: el
reactivo de oxidasa contiene este compuesto que
va a ser oxidado por la citocromo C oxidasa. En
estado reducido es incolora, pero cuando se
oxida vira a prpura, en este caso nos dio un
resultado NEGATIVO, lo cual indica que la
bacteria no presenta la citrocromo oxidasa.

Esta prueba detecta la presencia de
citocromooxidasas. La produccin inmediata
y abndante de burbujas indica la conversin
del H2O2 en agua y oxigeno gaseoso, pero en
este caso nos dio un resultado POSITIVO.
4.- HIDRLISIS DE LA UREA











CONCLUSIONES
Todos los organismos tienen una temperatura optima de crecimiento, crecimiento
pero algunos tienen la capacidad para resistir cambios moderados de temperatura.
Estos realizan pequeas alteraciones en su metabolismo para poder tolerar el cambio y
as poder sobrevivir. sobrevivir Ej. E. coli en la sntesis de cidos grasos saturados e
insaturados

BIBLIOGRAFIA
http://www.unac.edu.pe/documentos/organizacion/vri/cdcitra/Informes_Finales_Investigacio
n/Octubre_2011/IF_DECHECO%20EGUSQUIZA_FIPA/CAPITULO%20N%BA%201.pd
http://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/quimica/5_anio/biotecnologia/practicoIII.pdf
https://cv2.sim.ucm.es/moodle/file.php/21298/Practicas/PracMicro07-08.pdf
http://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/quimica/5_anio/biotecnologia/practicoIII.pdf
Fuentes de informacion
Madigan, M. T.; Martinko, J. M.; Parker, J.: Brook Biologa de los Microorganismos. 10 ed, Madrid
Prentice Hall Iberia., 1999.
Prescott L/ Harley J ,/ Klein D 576/P 85 2000 Madrid

Se utiliza para la valoracin de
la produccin de ureasa por
algunas enterobacterias. Este
medio contiene glucosa,
peptona, urea y rojo de fenol.
Las bacterias que producen
ureasa a partir de la urea dan
lugar al carbonato de amonio y
el indicador se vuelve rojo
prpura, en este caso se observo
una ligera formacin rojiza en la
base del tubo.