MEDICINA TRANSFUSIONAL EM CES E GATOS: COLHEITA, PROCESSAMENTO E ARMAZENAMENTO DE SANGUE TOTAL E HEMOCOMPONENTES
Sarah Barboza Martins Orientador: Juan Carlos Duque Moreno
Goinia 2011 II
SARAH BARBOZA MARTINS
MEDICINA TRANSFUSIONAL EM CES E GATOS: COLHEITA, PROCESSAMENTO E ARMAZENAMENTO DE SANGUE TOTAL E HEMOCOMPONENTES
Seminrio apresentado junto Disciplina Seminrios Aplicados do Programa de Ps- Graduao em Cincia Animal da Escola de Veterinria e Zootecnia da Universidade Federal de Gois.
Nvel: Mestrado
rea de Concentrao: Patologia,Clinica e Cirurgia
Linha de Pesquisa: Tcnicas cirrgicas e anestsicas, patologia clnica cirrgica e cirurgia experimental
Orientador: Prof. Dr. Juan Carlos Duque Moreno UFG Comit de Orientao: Prof Dr Denise Tabacchi Fantoni USP Prof. Dr. Adilson Donizeti Damasceno UFG
Goinia 2011 III
SUMRIO
LISTA DE FIGURAS ......................................................................................... IV LISTA DE TABELAS .......................................................................................... V LISTA DE ANEXOS .......................................................................................... VI LISTA DE ABREVIATURAS ............................................................................. VII 1. Introduo ...................................................................................................... 1 2. Reviso de Literatura ..................................................................................... 3 2.1 Triagem de doadores ................................................................................... 3 2.1.1 Ces .......................................................................................................... 4 2.1.2 Gatos ......................................................................................................... 6 2.2 Coleta de sangue ......................................................................................... 8 2.2.1 Sala de colheita ......................................................................................... 9 2.2.2 Equipamentos e Materiais para colheita.................................................. 10 2.2.3 Procedimentos de colheita ...................................................................... 12 2.2.3.1 Ces ..................................................................................................... 13 2.2.3.2 Gatos .................................................................................................... 14 2.3 Fracionamento do sangue total .................................................................. 16 2.3.1 Sangue total (ST) .................................................................................... 17 2.3.2 Concentrado de Hemcias ...................................................................... 20 2.3.3 Derivados do Plasma .............................................................................. 25 2.3.3.1 Plasma Fresco Congelado (PFC) ......................................................... 25 2.3.3.2 Plasma Congelado (PC) ....................................................................... 27 2.3.3.3 Crioprecipitado e Criosobrenadante ..................................................... 27 2.3.3.4 Concentrado de plaquetas ................................................................... 28 3. Consideraes finais .................................................................................... 31 REFERNCIAS ................................................................................................ 32 ANEXOS .......................................................................................................... 40 IV
LISTA DE FIGURAS
Figura 1 - Diferentes tipos de sistema aberto para colheita de sangue total de gatos ( a BARFIELD & ADAMANTOS, 2010; b LUCAS et al., 2004). ...... 9 Figura 2 Alicate de ordenha utilizado para homogeneizao de sangue total. .......................................................................................................... 12 Figura 3 - Esquema dos produtos originados do sangue classificados em hemocomponentes e hemoderivados (BRASIL, 2008). ..................... 17 Figura 4- Clculo utilizado para estabelecer o volume total de sangue total a ser transfundido em ces ou gatos, de acordo com o hematcrito (HT) desejado para o receptor (Adaptado de HALDANE et al., 2004). ...... 18 Figura 5 - Clculo utilizado para estabelecer o volume total de ST a ser transfundido em gatos, de acordo com o hematcrito desejado para o receptor (Adaptado de CASTELLANOS et al., 2004). ....................... 18 Figura 6 - Unidade de sangue colhida de co em um extrator de plasma, com a respectiva bolsa satlite em uma balana para receber a poro de plasma. .............................................................................................. 20 Figura 7 - Clculo utilizado para estabelecer o volume total de CH a ser transfundido em gatos, de acordo com o hematcrito desejado para o receptor (Adaptado de CASTELLANOS et al., 2004). ....................... 21 Figura 8 Alteraes morfolgicas dos eritrcitos de concentrado de hemcias aps armazenados em bolsa CPD/SAG-M durante 40 (A) e 60 (B) dias, e em bolsa CPD/SAG-M acrescida de fosfato dissdico aps 40 (C) e 60 (D) dias, com predomnio de esferoequincitos em B e D (COSTA JNIOR, 2010).................................................................... 23
V
LISTA DE TABELAS
Tabela 1 - Exames de triagem recomendados para seleo de ces doadores de sangue (IF Imunofluorescncia, PCR Reao em cadeia da polimerase, ELISA Enzyme linked immunoabsorbent assay, SAT Soroaglutinao rpida em lmina, TAT Soroaglutinao em tubo). 5 Tabela 2 - Exames de triagem recomendados para seleo de gatos doadores de sangue (IF Imunofluorescncia, PCR Reao em cadeia da polimerase, ELISA Enzyme linked immunoabsorbent assay). ....... 7 Tabela 3 - Materiais necessrios para coleta de unidade de sangue total de ces ou gatos, e a respectiva descrio de cada item. ..................... 11
VI
LISTA DE ANEXOS
Anexo A - Formulrio de avaliao de doador de sangue canino. ................... 40
VII
LISTA DE ABREVIATURAS
2,3-DPG cido 2,3 Difosfoglicerator ACD cido citrato dextrose ATP Adenosina trifosfato CH Concentrado de hemcias CO 2 Dixido de carbono CP Concentrado de plaquetas CP 2 D Citrato fosfato-2 dextrose CPD Citrato fosfato dextrose CPDA-1 citrato-fosfato-dextrose-adeninda-1 DEA Dog erythrocyte antigen (Antgeno Eritrocitrio Canino) DMSO Dimetilsulfxido ELISA Enzyme linked immunoabsorbent assay FeLV Vrus da leucemia felina FIV Vrus da imunodeficincia felina Ht Hematcrito IF Imunofluorescncia LA Leses de Armazenamento PC Plasma congelado PCR Reao em cadeia da polimerase PFC Plasma fresco congelado PIF Peritonite infecciosa felina PRP Plasma rico em plaquetas Rpm Rotaes por minuto SAG-M Soluo aditiva de soro fisiolgico, adenina, glicose e manitol SAT Soroaglutinao rpida em lmina ST Sangue total TAT Soroaglutinao em tubo VPM Volume plaquetrio mdio vWF Fator de Von Willebrand
1. INTRODUO
O sangue vem sendo relacionado vida h sculos, porm seu uso teraputico foi muito recriminado no incio da histria em citaes bblicas. Seguindo a evoluo da medicina, sua utilizao se tornou uma prtica amplamente difundida (GREENWALT, 1997). A terapia transfusional uma prtica utilizada em medicina veterinria e que est em expanso com a implantao de programas de doao de sangue e implementao de bancos de sangue veterinrios (LUCAS et al., 2004). A terapia transfusional a base do tratamento de suporte de ces e gatos com anemia, sendo muitas vezes o nico tratamento. Em gatos as transfuses ainda no so comumente utilizadas, pois raramente o sangue total ou seus derivados esto disponveis (BARFIELD & ADAMANTOS, 2011) Nos ltimos anos o entendimento sobre a medicina transfusional tem-se aprimorado significativamente, bem como o uso de produtos sanguneos na prtica veterinria diria. Porm, ainda so frequentes as falhas na prtica da hemoterapia, em boa parte, devido disponibilidade restrita de hemocomponentes apropriados (LUCAS et al., 2004). Estudos acerca da segurana transfusional em pequenos animais tm mostrado bons resultados, mesmo em animais recebendo mltiplas transfuses sanguneas (ROUX et al., 2008). As transfuses so normalmente realizadas em animais apresentando anemia grave, devido perda de sangue com risco vida, hemlise ou insuficincia de medula ssea. Por isso, a hemoterapia tornou-se um componente importante do cuidado mdico, cirrgico e na terapia intensiva (WEINGART et al, 2004). importante ressaltar que, no homem, em casos de anemia moderada o uso de transfuses perioperatrias ainda controverso, devendo-se considerar o risco inerente terapia transfusional (CARSON et al., 1998). A qualidade do produto sanguneo disponvel para transfuso depende tanto da seleo adequada do doador quando da qualidade da colheita, processamento e armazenamento do sangue e seus componentes. Da vem a importncia de difundir o conhecimento sobre as etapas de processamento e sobre a correta utilizao dos componentes sanguneos, a 2
fim de que mais programas de doao de sangue e bancos de sangue veterinrios sejam disponibilizados. Os protocolos para seleo de doadores, para obteno de sangue e seus componentes e para seu armazenamento so ainda negligenciados na rotina veterinria, o que compromete a qualidade do produto sanguneo utilizado e aumenta os riscos para o receptor e as chances de insucesso no tratamento. O presente documento teve por objetivo fazer uma breve reviso de literatura a fim expor os cuidados que devem ser tomados em cada etapa da obteno e processamento do sangue total e seus derivados, em ces e gatos.
3
2. REVISO DE LITERATURA
A estocagem de sangue uma rea emergente na medicina veterinria e o desenvolvimento de clnicas de emergncia e da terapia intensiva aumentou a demanda por concentrado de hemcias e por produtos derivados do plasma (IAZBIK et al., 2007), isso porque o principal objetivo da ressucitao em pacientes crticos a otimizao da perfuso e da oxigenao tecidual (PRITTIE, 2010). Apesar do sangue ser usado terapeuticamente h mais de 100 anos, a maior parte do desenvolvimento clinicamente relevante foi feita nas duas ltimas dcadas (CASTELLANOS et al., 2004).
2.1 Triagem de doadores
Um programa de doadores de sangue comea com a seleo dos ces e gatos que se encaixem num perfil j estabelecido (LUCAS, et al., 2004). O histrico completo do doador deve ser obtido antes de cada doao, como viagens a reas endmicas para vetores de doenas transmissveis, ou se os animais foram expostos a fatores de risco que possam requerer exames adicionais. Exame fsico completo e detalhado, incluindo temperatura retal e presena de ectoparasitas, deve preceder cada doao, mesmo que os animais faam parte de um programa de doao de sangue. Formulrios padronizados (Anexo 1) devem estar disponveis para os proprietrios dos doadores, a fim de esclarecer se os animais apresentaram qualquer tipo de doena ou viagem dentro das 48h antes da doao. Exames laboratoriais previamente doao, incluindo hemograma completo, bioqumicas plasmticas de funo renal e heptica, urinlise e exame de fezes so indicados para triagem. A determinao do hematcrito indispensvel para garantir produtos sanguneos com adequada concentrao de hemcias para transfuso e para prevenir a ocorrncia de anemia secundria doao nos ces e gatos doadores (WARDROP et al., 2005). A transfuso sangunea, apesar de muitas vezes ser o nico tratamento de algumas doenas, no pode ser considerada totalmente segura. A fim de minimizar o risco de transmisso de doenas via transfuso 4
sangunea, os doadores devem ser testados para determinadas doenas, variando segundo a espcie, localizao geogrfica dos animais e predisposio racial (REINE, 2004; WARDROP et al., 2005). Outro fator importante a ser considerado, principalmente em gatos, a determinao do tipo sanguneo do doador (TOCCI & EWING, 2009).
2.1.1 Ces
recomendado que os ces tenham pelo menos 25kg, idade entre um e sete anos, sejam dceis, permitindo conteno, e no tenham histrico de sopro cardaco ou convulses. No devem estar recebendo medicao e devem estar sob controle constante de ectoparasitas (LUCAS et al., 2004). Os exames para doenas infecciosas recomendados para ces doadores so Babesiose, Leishmaniose, Ehrliquiose, Brucelose, Anaplasmose, Ricketsiose, Tripanossomase e Bartonelose (Tabela 1). A frequncia com que os exames devem ser feitos depende de se os doadores esto em reas endmicas ou se foram expostos a fatores de risco. Deve-se lembrar que mais importante do que os testes aos quais os doadores so submetidos, a preveno de doenas e manejo adequado das unidades para evitar a contaminao aps a colheita (WARDROP et al., 2005). Poucos estudos tm sido feitos sobre os efeitos da doao de sangue em ces e a segurana do procedimento. O volume total de sangue dos ces em mdia de 90 mL/Kg (KUNUGIYAMA et al., 1989) e relatado que eles podem doar at 20% do seu volume de sangue total sem que ocorra anemia clinicamente significativa, embora a retirada desse volume possa induzir hipovolemia leve e transitria (HELM & KNOTTENBELT, 2010). Um estudo feito em ces da raa Greyhound (COUTO & IAZBIK, 2005) mostrou que a presso arterial sistlica diminui significativamente aps a doao de uma unidade de sangue total, o que significa uma perda de 17 a 22% do total de sangue dos animais. A presso arterial sistlica levou em mdia 90 minutos para que o valor voltasse ao basal. Nesse mesmo estudo, na correlao da diminuio da presso arterial aps doao de sangue com o peso dos doadores, os ces com menos de 33kg foram mais propensos a 5
desenvolver hipotenso, apesar de no apresentarem sinais clnicos de hipovolemia. importante ressaltar que ces da raa Greyhound tm presso arterial e ndice cardaco significativamente maiores do que ces mestios (COX et al., 1976). Sendo assim, os ces mestios podem ser mais sensveis doao de sangue, principalmente quando no apresentarem o peso mnimo aceitvel de 25 kg. Os ces podem levar at um ms para recuperar a contagem normal de hemcias, contudo recomendado que a frequncia de doao no ultrapasse quatro ou cinco vezes ao ano (HELM & KNOTTENBELT, 2010).
TABELA 1 Exames de triagem recomendados para seleo de ces doadores de sangue (IF Imunofluorescncia, PCR Reao em cadeia da polimerase, ELISA Enzyme linked immunoabsorbent assay, SAT Soroaglutinao rpida em lmina, TAT Soroaglutinao em tubo). Doena Agentes Triagem Teste Babesiose Babesia canis, B. gibsoni Recomendada IF, PCR Leishmaniose Leishmania donovani Recomendada IF, PCR Erliquiose Ehrlichia canis, E. ewingii, E. chaffeensis Recomendada
IF, ELISA, PCR Brucelose Brucella canis Condicional* PCR Anaplasmose Anaplasma phagocytophilum, A. platys Recomendada SAT, TAT Ricketsiose Neorickettsia risticii, N. helmintheca Condicional* IF, PCR Tripanossomase Trypanossoma cruzi Condicional* IF Bartonelose Bartonella vinsonii Condicional* IF Fonte: Adptado de WARDROP et al., 2005 * Dependendo da incidncia geogrfica
6
Atualmente, existem cinco grupos sanguneos de ces reconhecidos internacionalmente como tendo significncia clnica e classificados como dog erythrocyte antigen DEA (Antgeno Eritrocitrio Canino). So eles DEA 1 (com trs subgrupos DEA 1.1, 1.2 e 1.3), 3, 4, 5 e 7, sendo o DEA 1.1 e o 1.2 os mais importantes na medicina transfusional. O DEA 1.1 o mais antignico e apresenta alta prevalncia entre os ces. Interaes entre sangue positivo para DEA 1.1 ou 1.2 em ces receptores negativos para esses antgenos podem gerar reaes hemolticas agudas graves nos animais. O DEA 4 considerado o doador universal por ser o antgeno de maior prevalncia nos ces e a interao antgeno-anticorpo no produzir efeito na sobrevida das hemcias in vivo (HALE, 1995; NOVAIS et al., 2004). Um novo aloanticorpo contra um novo antgeno eritrocitrio, diferente dos previamente descritos, foi detectado em Dlmatas. Este antgeno, denominado Dal, parece estar presente na maioria dos ces dessa raa e pode causar reaes hemolticas tardias. Contudo, sua importncia clnica ainda no foi bem esclarecida (BLAIS et al., 2007). Outros grupos, como DEA 6 e 8 foram identificados, porm por no haver anticorpos monoclonais para sua deteco, no so estudados e so considerados de baixa importncia clnica (NOVAIS et al., 2004).
2.1.2 Gatos
Os doadores felinos devem pesar no mnimo 5 Kg (IAZBIK et al., 2007), ter entre um e sete anos de idade, serem dceis e no apresentarem histrico de sopro cardaco ou convulses. Devido preocupao com doenas infecciosas os doadores devem viver preferencialmente sem acesso rua. preconizado que os animais tenham temperamento dcil, mas independentemente do temperamento, a maioria dos gatos ir exigir algum tipo de sedao ou conteno qumica para a colheita do sangue (LUCAS et al., 2004). Os exames de triagem para doenas infecciosas em gatos incluem Leucemia Felina, Imunodeficincia Felina, Hemoplasmose, Bartonelose, Cytauxzoonose, Ehrliquiose, Anaplasmose e Ricketsiose (Tabela 2). A Peritonite Infecciosa Felina (PIF) uma sndrome clnica ocasionada por um coronavrus que, apesar de haver a chance de estar presente no sangue de 7
gatos, sua deteco no significa que o animal ir desenvolver a doena clnica. Alm disso, e at o momento ainda no foi relata a transmisso do coronavrus via transfuso sangunea. Por isso no est inclusa nos exames de triagem recomendados (REINE, 2004)
TABELA 2 - Exames de triagem recomendados para seleo de gatos doadores de sangue (IF Imunifluorescncia, PCR Reao em cadeia da polimerase, ELISA Enzyme linked immunoabsorbent assay). Doena Agentes Triagem Testes Leucemia Felina FeLV Recomendada ELISA Imunodeficincia Felina FIV Recomendada ELISA Hemoplasmose Mycoplasma haemofeliz, M. hemominutum Recomendada Microscopia, PCR Bartonelose Bartonella henselae, B. clarridgear, B. kholerae Recomendada/ Condicional* IF, PCR, Cultura Cytauxzoonose Cytauxzoon felis Condicional* Microscopia Erliquiose E. canis Condicional* PCR Anaplasmose A. Phagocytophilum Condicional* IF, PCR Ricketsiose N. risticii Fonte: Adptado de WARDROP et al., 2005 * Dependendo da incidncia geogrfica
Apesar de toda a triagem feita antes da doao de sangue, a colheita no isenta de riscos potencialmente graves para o felino doador, como j mostrado por WEINGART et al. (2004), que relataram a morte, provavelmente relacionada a uma cardiomiopatia oculta, verificada necropsia, de um gato doador dois dias aps a colheita do sangue. MOTT (1968) mostrou em seu estudo que gatos adultos tm em mdia volume total de sangue de 60mL/kg. J no estudo de IAZBIK et al. (2007) observou-se que gatos que doaram entre 16 e 20% do seu volume de sangue total no apresentaram hipotenso ou complicaes relevantes durante 8
a doao de sangue, por isso o peso mnimo dos doadores deve ser aproximadamente 5kg, que significa que poderiam doar at 60mL. De forma semelhante aos grupos sanguneos humanos, os grupos sanguneos dos gatos so denominados A, B e AB, contudo sem fator Rh. A prevalncia dos grupos sanguneos apresenta grande variao segundo a localizao geogrfica e a raa, sendo por isso a tipagem de grande importncia clnica na preveno da isoeritrlise neonatal e das reaes hemolticas agudas ps-transfusionais (GIGER & BCHELER, 1991; KNOTTENBELT et al., 1999; ARIKAN et al., 2003). A alta incidncia de reaes hemolticas graves na primeira transfuso ocorre pois os gatos, diferentemente dos ces, apresentam aloanticorpos naturais a antgenos eritrocitrios (KNOTTENBELT et al., 1999).
2.2 Colheita do sangue
O sangue total colhido em sistemas preferencialmente fechados, estreis, que permitem sua separao, por centrifugao, em componentes sanguneos sem que haja contato com o ar ambiente. O sangue total colhido em sistema aberto (Figura 1) no pode ser utilizado para processamento e armazenamento, devendo ser utilizado em at 24 hotas aps a colheita (ABRAMS OGG & SCHNEIDER, 2010).
9
FIGURA 1 - Diferentes tipos de sistema para colheita de sangue total de gatos ( a BARFIELD & ADAMANTOS, 2010; b LUCAS et al., 2004).
2.2.1 Sala de colheita
A escolha do local onde ser feita a colheita fundamental, visto que a qualidade do produto final depende, entre outros fatores, da qualidade da tcnica empregada (AUTHEMENT et al.,1986; HGMAN et al., 2002). A sala de colheita deve ser um lugar exclusivo para esse fim, que seja calmo, silencioso e livre da passagem de outras pessoas. O piso no deve ser liso, principalmente no caso de colheita de sangue de ces. A mesa deve ser firme, sem desnveis e de tamanho adequado tanto para posicionar os animais em decbito lateral quanto em decbito esternal. importante tambm que seja controlado o acesso de pessoas sala a fim de se evitar interrupes durante o procedimento (LUCAS et al., 2004).
a b 10
2.2.2 Equipamentos e materiais para colheita
Todos os materiais necessrios para colheita (Tabela 3) devem ser separados previamente para facilitar o processo e evitar interrupes. Os materiais necessrios variam de acordo com o produto a ser processado e com a espcie do doador (LUCAS et al., 2004). O sangue colhido em bolsas de sangue convencionais contendo solues anticoagulantes e preservativas, acopladas a uma agulha para puno. As bolsas de colheita convencionais esto disponveis em diversos tamanhos, com capacidade total de 150 a 500ml, sendo a proporo sangue:soluo preservativa de 10:1 e 7:1, aproximadamente em ces e gatos, respectivamente (ABRAMS OGG & SCHNEIDER, 2010). Os principais anticoagulantes utilizados so cido citrato dextrose (ACD), citrato-fosfato-dextrose-adeninda-1 (CPDA-1), citrato fosfato dextrose (CPD) e citrato fosfato-2 dextrose (CP 2 D), podendo estes conter aditivos que prolongam a meia-vida das hemcias estocadas (ABRAMS OGG & SCHNEIDER, 2010). O sangue colhido em soluo CPDA-1 tem validade de 35 dias, j o colhido em soluo ACD, CPD e CP 2 D tm validade de 21 dias. Quando, aps a centrifugao e fracionamento, o concentrado de hemcias acrescido de soluo aditiva como SAG-M (CPD/SAG-M), composta por soro fisiolgico, adenina, glicose e manitol, a validade passa a 42 dias. Em todos os tipos de soluo, a temperatura de armazenamento deve ser 42C (BRASIL, 2008).
11
TABELA 3 Materiais necessrios para colheita de unidade de sangue total de ces ou gatos, e a respectiva descrio de cada item. Fonte: Adaptado de LUCAS et al., 2004. a Uso exclusivo para coleta de sangue total de ces ou b gatos.
As fraes do sangue so obtidas a partir da centrifugao do sangue total, que deve ser mantido sob temperatura controlada e constante, a fim de se preservar a qualidade e minimizar as Leses de Armazenamento (LA). Para isso, necessrio que as bolsas tenham ao menos uma bolsa satlite e que sejam centrifugadas em centrfuga refrigerada. Antes de proceder centrifugao, o sangue presente no oquipo deve ser homogeneizado com o auxilio de um alicate de ordenha prprio (Figura 2), de forma que o sangue total Item Descrio Bolsa CPDA-1 a
Sistema fechado de bolsa de colheita de sangue, com uma bolsa principal (500ml) e uma ou mais bolsas satlites Sistema de coleta de sangue de gatos b
Esto disponveis para compra sistemas abertos para coleta (FIGURA 1) Soluo para antissepsia Solues iodadas associadas a lcool 70% Clip de alumnio Anis de alumnio utilizados para selar assepticamente as bolsas de sangue Balana digital (1000g) Alimentada a bateria e utilizada para pesar a bolsa e estimar o momento em que est cheia Atadura Tipo Vetrap para prevenir formao de hematomas Pinas hemostticas plsticas Para fechar a bolsa antes e depois da colheita, evitando que entre ar no sistema. Em bolsas de sangue no devem ser utilizadas pinas hemostticas de metal Tesoura comum Para cortar as bandagens Lixo comum e hospitalar Conforme o padro de coleta de lixo de cada estabelecimento Aparelho de anestesia inalatria b
Isoflurano ou Sevoflurano, circuito sem reinalao de gases, para colheita de unidade de sangue total de gatos Dispositivo de conteno para gatos b
Recomenda-se o uso de bolsas de conteno para gatos Soluo anticoagulante b
Adicionada ao sistema de coleta de felinos, quando no possui, principalmente no caso de colheita de sangue total em sistema aberto 12
contido na bolsa e no equipo tenham a composio mais semelhante possvel, visto que as alquotas de sangue do equipo que sero utilizadas para os testes transfusionais e para controle de qualidade (LUCAS et al., 2004; ABRAMS OGG & SCHNEIDER, 2010).
FIGURA 2 Alicate de ordenha utilizado para homogeneizao de ST.
Para separar a papa de hemcias do plasma utilizado um extrator de plasma e pinas hemostticas plsticas so utilizadas para selar os equipos de transferncia, evitando o contato do sangue com o ar, at que as bolsas sejam seladas definitivamente. Esto disponveis no mercado seladoras de bancada e seladoras portteis especficas para banco de sangue. Antes do incio do fracionamento e aps cada fracionamento, as bolsas e as respectivas bolsas satlites devem ser pesadas para se estimar o volume final de cada componente fracionado. Para promover adequado armazenamento, h equipamentos especficos para cada componente, sendo o concentrado de hemcias armazenado sob refrigerao (4C), o plasma congelado (-18C) e o plasma rico em plaquetas e concentrado de mantidos em temperatura ambiente (202C) e constante agitamento em homogeneizadores de plaquetas (LUCAS et al., 2004; ABRAMS OGG & SCHNEIDER, 2010). 2.2.3 Procedimentos de colheita
13
Para que o procedimento de colheita ocorra de forma ideal so necessrias trs pessoas. A primeira para manter o doador em decbito lateral ou sentado, a segunda para promover a flebotomia e manter a agulha adequadamente posicionada e uma terceira para homogeneizar, constante e delicadamente, a bolsa de sangue para que todo o sangue colhido entre em contato o mais breve possvel com o anticoagulante e minimize o risco de formao de microtrombos. A bolsa deve ser pesada continuamente at que atinja 405-480g (LUCAS et al., 2004; HELM & KNOTTENBELT, 2010). Esto disponveis no mercado homogeneizadores digitais, com pesagem e homogeneizao automticas, que controlam o fluxo sanguneo de doao e tambm avisam por sinal sonoro quando o volume, ou peso, desejado atingido. provvel que a utilizao dessa tecnologia possa substituir a terceira pessoa necessria para o procedimento de colheita. A tricotomia e a antissepsia do local de puno so essenciais para minimizar o risco de contaminao das unidades de sangue total. Estudos feitos com sangue humano tm mostrado que bactrias gram-positivas, provenientes da microflora da pele, so as mais encontradas em unidades contaminadas, e que a combinao antissptica que diminuiu a colonizao bacteriana na pele dos doadores de sangue de forma mais eficaz foi a associao de um agente iodado ao lcool etlico 70% (FONSECA et al., 2009).
a) Procedimento de colheita em ces
preconizado que ces doadores de sangue no sejam sedados, mas havendo a necessidade pode ser utilizado tartarato de butorfanol (0,1- 0,3mg/kg) associado ou no a acepromazina (0,01-0,03mg/kg). Quando esta associao for utilizada, devido ao efeito hipotensor da acepromazina, a fluidoterapia deve ser instituda para minimizar os riscos ao doador (HELM & KNOTTENBELT, 2010). O local de puno deve ser tricotomizado e procedida antissepsia trs vezes. O local de preferncia de colheita a veia jugular, na qual o fluxo de sangue maior e h menor risco de formao de cogulos durante o procedimento, todavia em ces de maior porte a colheita pode ser feita por 14
puno da veia ceflica (HELM & KNOTTENBELT, 2010). A bolsa de colheita deve ser posicionada na balana digital e realizada a tara. Antes da abertura da linha de colheita, o equipo deve ser fechado, de sete a dez centmetros aps a agulha, com pina hemosttica plstica de forma que o sistema no abra e a parte interna do circuito no entre em contato com o ar ambiente (LUCAS et al., 2004). A flebotomia deve ser feita com o bisel voltado para cima, e s ento a pina hemosttica pode ser removida do circuito. A colheita deve continuar at que a bolsa atinja entre 405 e 480g de peso, sendo que a homogeneizao do sangue deve ser feita a cada 50 a 75 mL colhidos. Aps o trmino da colheita o equipo deve ser novamente fechado antes que a agulha seja retirada da veia jugular. Deve-se ento comprimir o local de puno e imediatamente envolver o pescoo do animal com atadura de compresso leve, do tipo Vetrap
, por 30 minutos, a fim de minimizar o risco de formao de hematoma
no local de puno (LUCAS et al., 2004; HELM & KNOTTENBELT, 2010). O tempo ideal de colheita entre trs e dez minutos. (HELM & KNOTTENBELT, 2010). O circuito de colheita deve ser ento fechado definitivamente com seladora prpria para banco de sangue. O equipo de colheita possui um nmero de identificao, que tambm est presente na bolsa, e importante que ao menos um nmero seja mantido no equipo para manter a correlao com a bolsa. A identificao da bolsa deve conter os dados do doador, data e hora da colheita e a quantidade de sangue total colhido (peso em gramas) (LUCAS et al., 2004). Aps o trmino da colheita todos os dados da colheita devem ser devidamente registrados, incluindo os dados do exame fsico antes da colheita, valores de hematcrito e protenas totais, bem como quaisquer problemas ocorridos durante o procedimento (LUCAS et al., 2004).
b) Procedimento de colheita em gatos
Diferentemente dos ces, os gatos devem ser sedados para doar sangue, visto que qualquer movimento durante a colheita pode inutilizar o produto final (LUCAS et al., 2004), assim sedao com associao de cetamina 15
e midazolam, ou outro protocolo que no cause hipotenso, pode ser utilizado para conteno (HELM & KNOTTENBELT, 2010). A dose necessria de sedativos, bem como a escolha do protocolo varia entre os estudos, com relatos sobre a colheita com a associao de cetamina, na dose 5-6mg/Kg, associada ao midazolam, na dose 0,1mg/Kg (WEIGART et al., 2004) ou anestesia geral com induo e manuteno anestsica com sevofluorano (TROYER et al., 2005). Em gatos o local de puno para colheita de sangue deve ser a veia jugular porque nas veias perifricas o fluxo sanguneo muito baixo. Assim como nos ces, a regio de flebotomia deve ser tricotomizada e feita antissepsia. A colocao de acolchoamento sob o pescoo dos gatos pode melhorar a exposio e visualizao da veia jugular (HELM & KNOTTENBELT, 2010). O sangue total de gatos no pode ser colhido em bolsas de coleta de sangue convencionais, pois o volume de sangue colhido menor, bem como o fluxo de sangue durante a colheita (HELM & KNOTTENBELT, 2010). O Penn Animal Blood Bank, banco de sangue da Universidade da Pensilvnia, desenvolveu um sistema fechado de coleta de sangue para gatos, que permite o fracionamento do sangue em papa de hemcias e plasma fresco congelado, bem como seu armazenamento (GIGER, 2009). Sistemas fechados de colheita de sangue para felinos no esto comercialmente disponveis no Brasil, sendo assim a colheita feita em um sistema aberto, e por isso o armazenamento no deve ultrapassar 24h devido ao risco de contaminao bacteriana (LUCAS et al., 2004; GIGER, 2009; HELM & KNOTTENBELT, 2010). O mtodo convencional de colheita de sangue de gatos constitudo por um escalpe 19G conectado a uma seringa de 60mL e a uma bolsa de sangue peditrica atravs de uma torneira de trs vias. A seringa deve conter sete mililitros de anticoagulante, preferencialmente CPDA-1, para manter a proporo anticoagulante:sangue entre 1:7 e 1:9. Durante a colheita a seringa deve ser homogeneizada constantemente evitando assim a formao de microtrombos. Ao trmino da colheita a torneira de trs vias deve ser fechada para o escalpe antes de retir-lo do local de puno e, aps homogeneizao, a torneira de trs vias aberta para a bolsa e o sangue transferido (HELM & 16
KNOTTENBELT, 2010). Aps a retirada do escalpe do local de puno, deve ser feita compresso no local, seguida por bandagem com atadura do tipo Vetrap (LUCAS et al., 2004). Diferentemente dos ces, os gatos so mais sensveis doao de sangue. Aps a doao preconizada a reposio volmica, contudo h variao quanto a soluo, a dose e a via de administrao utilizada. HELM & KNOTTENBELT (2010) recomendam a administrao de 90mL de soluo fisiolgica pela via subcutnea imediatamente antes do incio da doao de sangue, e mais 60-90mL durante 15 a 20 minutos pela via intravenosa, comeando quando aproximadamente metade do volume total de sangue j foi doado. WEINGART et al., (2004) utilizaram Ringer Lactato para reposio volmica na dose de 20mL/Kg, aproximadamente, pela via subcutnea ou intravenosa quando os animais apresentavam sinais clnicos de hipovolemia. Aps o trmino da colheita, a identificao tanto da bolsa de sangue colhida quanto do doador deve ser feita da mesma forma que nos ces, alem disso quaisquer problemas durante a colheita devem ser registrados tambm (LUCAS et al., 2004).
2.3 Fracionamento do sangue total
A terapia transfusional vem se aprimorando nas ltimas dcadas, e com isso o uso de produtos sanguneos, na rotina clnica da medicina veterinria. Em ces j se trata de uma terapia amplamente utilizada, e em gatos est se aprimorando na medida que estudos sobre o fracionamento do sangue total vo sendo feitos. A vantagem da utilizao dos produtos do fracionamento sanguneo principalmente a utilizao mais eficaz de cada unidade de sangue colhida, visto que nem sempre os animais precisam de reposio de todos os componentes sanguneos (CASTELLANOS et al., 2004; CHIARAMONTE, 2004). Hemocomponentes e hemoderivados (Figura 3) so produtos sanguneos diferentes, sendo distinguidos conforme o tipo de processamento que sofrem. Hemocomponentes so aqueles obtidos a partir de processos 17
fsicos, como centrifugao e congelamento. J os hemoderivados so aqueles obtidos a partir de processos fsico-qumicos (BRASIL, 2008). Face a importncia do fracionamento, deve-se ressaltar que a viabilidade do sangue estocado est diretamente relacionada tcnica da colheita utilizada, ao anticoagulante disponvel, temperatura de conservao, aos parmetros bioqumicos e frequncia de homogeneizao durante o armazenamento, este ltimo no caso de conservao de plaquetas (AUTHEMENT et al.,1986; HGMAN et al., 2002).
FIGURA 3 - Esquema dos produtos originados do sangue classificados em hemocomponentes e hemoderivados (BRASIL, 2008).
2.3.1 Sangue total (ST)
18
O sangue total pode ser utilizado fresco, em quatro a seis horas aps a colheita, ou armazenado em at 35 ou 42 dias, dependendo da adio ou no de solues preservativas. O sangue total fresco composto por eritrcitos, leuccitos, plaquetas, fatores de coagulao e protenas plasmticas, como albumina e antitrombina III, sendo assim suas principais indicaes so hemorragia aguda ou quando diversos componentes sanguneos so necessrios. O volume total a ser utilizado pode ser calculado de duas formas, 20mL/Kg o que ir aumentar o hematcrito do receptor em aproximadamente 10%, ou por clculos (Figura 4) estimando o volume segundo o hematcrito desejado para o receptor (CHIARAMONTE, 2004; HALDANE et al., 2004).
Volume total = Kg X 90 (ces) X HT desejado HT do receptor ou ________________________ 70 (gatos) HT do doador FIGURA 4- Clculo utilizado para estabelecer o volume total de sangue total a ser transfundido em ces ou gatos, de acordo com o hematcrito (HT) desejado para o receptor (Adaptado de HALDANE et al., 2004).
CASTELLANOS et al. (2004) afirmaram em seu estudo que a administrao de aproximadamente 10mL de sangue total aumenta o hematcrito em 1,1% em gatos e, por isso, sugerem que o volume total de ST a ser administrado em gatos seja estimado segundo o aumento desejado do hematcrito (Figura 5).
Volume de ST = Kg X Aumento desejado do hematcrito X 1,7 FIGURA 5 - Clculo utilizado para estabelecer o volume total de ST a ser transfundido em gatos, de acordo com o hematcrito desejado para o receptor (Adaptado de CASTELLANOS et al., 2004).
19
Quando o sangue total estocado refrigerado os fatores lbeis de coagulao V e VIII so perdidos em 24 horas e as plaquetas em duas a quatro horas (HALDANE et al., 2004). Outra importante alterao durante o armazenamento do sangue total a diminuio da concentrao de cido 2,3- difosfoglicerato (2,3-DPG), que ocorre de forma progressiva. O 2,3-DPG uma molcula eritrocitria que se liga hemoglobina e regula a afinidade da hemoglobina ao oxignio, sendo assim quanto menor a concentrao de 2,3- DPG maior a afinidade da hemoglobina pelo oxignio, o que diminui a distribuio de oxignio para os tecidos (COSTA JNIOR et al., 2008). Quando o sangue total no armazenado adequadamente e mantido em temperatura superior a 25C, em poucas horas a concentrao de 2,3-DPG diminui em at 50%, todavia se armazenado entre quatro e dez graus Celsius, a concentrao se mantm inalterada por pelo menos 24 horas (HGMAN et a., 1999). As alteraes ocorridas no sangue total armazenado por um perodo superior a 24 horas dependem do tipo de soluo de conservao utilizada, sendo que quando solues preservativas como CPD/SAG-M so utilizadas o 2,3-DPG continua a ser produzido por at sete dias de armazenamento, e ento ocorre uma diminuio progressiva (COSTA JNIOR et al., 2008). Em um estudo feito em humanos, foi demonstrado que 50% da concentrao de 2,3-DPG restabelecida aps sete horas de transfuso, e que a concentrao normalizada em at 72 horas (HEATON et al., 1989), contudo ainda controverso quanto ao uso de sangue total ou concentrado de hemcias estocados em pacientes crticos (TINMOUTH et al., 2006). Como efeito adverso transfuso de sangue total, deve ser citada a sobrecarga de volume, visto que muitas vezes os animais apresentam anemia normovolmica (HALDANE et al., 2004). Importante ressaltar que diferentemente dos ces, os gatos possuem aloanticorpos naturais para os antgenos eritrocitrios diferentes do prprio tipo sanguneo e, por isso, a transfuso de sangue total ou de qualquer produto sanguneo deve ser precedida de teste de tipagem sangunea e compatibilidade (KNOTTENBELT et al, 1999). Em Medicina, o fracionamento do sangue total em hemocomponentes e hemoderivados obrigatrio (BRASIL, 2008). 20
2.3.2 Concentrado de Hemcias (CH)
O CH de ces obtido a partir da centrifugao de uma unidade de ST a aproximadamente 4.000 rpm (rotaes por minuto) em centrfuga refrigerada a 10C, e o CH de gatos obtido pela centrifugao do ST a 3.800 rpm sob a mesma temperatura, por 12 a 15 minutos. A unidade ento posicionada em um extrator de plasma (Figura 6) e, aps rompimento do lacre da sada para a bolsa satlite, o plasma separado de forma que aproximadamente dois centmetros de plasma permaneam no CH (LUCAS et al., 2004).
Figura 6 - Unidade de sangue colhida de co em um extrator de plasma, com a respectiva bolsa satlite em uma balana para receber a poro de plasma.
A vantagem da utilizao do CH que ele possui a mesma quantidade de hemcias, sendo assim a mesma capacidade de carreamento 21
de oxignio de uma unidade de sangue total, mas em volume significativamente menor. Cada unidade de CH de co e gato possui hematcrito entre 55 e 80% respectivamente, variando de acordo com o hematcrito do doador, com a diluio da soluo de preservao e com a quantidade de plasma residual necessrio para preservao adequada das hemcias (HALDANE, et al., 2004). A principal indicao para a utilizao de CH, portanto, no tratamento de anemias normovolmicas geralmente causadas por diminuio da eritropoiese, hemlise ou perda sangunea crnica, sendo ainda um benefcio o baixo volume quando pacientes cardiopatas ou nefropatas necessitam de transfuso sangunea (HALDANE et al., 2004). CASTELLANOS et al. (2004) mostraram um aumento de 2,1% no hematcrito de gatos para cada 10mL de concentrado de hemcias transfundidos, sugerindo assim uma frmula para clculo do volume total, em mililitros, de CH a ser administrado nos gatos (Figura 7).
Volume de CH = Kg X Aumento desejado do hematcrito (%) FIGURA 7 - Clculo utilizado para estabelecer o volume total de CH a ser transfundido em gatos, de acordo com o hematcrito desejado para o receptor (Adaptado de CASTELLANOS et al., 2004).
Durante o armazenamento as hemcias perdem potssio, cido 2,3- difosfoglicerato (2-3-DPG), diminuem as reservas de ATP, bem como de lipdeos e parte da membrana celular, tornando-se mais rgidas e, por isso, apresentam menor capacidade de fornecimento de oxignio para os tecidos (HESS, 2006). A frao de hemcias estocadas que circula aps ser reinfundida diminui conforme aumenta o tempo de estocagem, independentemente do sistema de colheita. Essas alteraes que ocorrem durante o armazenamento so coletivamente conhecidas como Leses de Armazenamento de eritrcitos. Algumas, como a perda de potssio, so alteraes secundrias aos efeitos metablicos do resfriamento. Outras, como a perda de 2,3-DPG e 22
diminuio da atividade glicoltica, esto relacionadas diminuio do pH (HESS, 2006). A alterao da concentrao de 2,3-DPG est diretamente relacionada ao pH. Valores de pH maiores do que sete so tidos como propcios para a regenerao do 2,3-DPG, enquanto que valores inferiores a sete, favorecem sua degradao, contribuindo de forma significativa na deteriorao da capacidade do eritrcito em carrear O 2 (KURUP et al., 2003). A reduo do pH ocorre devido a produo de lactato e CO 2 , metablitos cidos provenientes do metabolismo anaerbico dos eritrcitos durante o armazenamento (COSTA JNIOR, 2010). O balano entre o pH e a taxa metablica dos eritrcitos crtico para a preservao da qualidade do CH. O metabolismo glicoltico dos eritrcitos consome ATP, gerando cido lctico, o que diminui o pH devido fraca capacidade de tamponamento do citrato-fosfato-dextrose (CPD), substncia usada como anticoagulante do sangue total. A sntese de ATP inibida em pH cido, ento a concentrao de ATP diminui durante o armazenamento, sendo que o consumo de ATP continua para manter as funes e a sobrevivncia das hemcias (VEALE et al., 2011). Os eritrcitos tm um programa intrnseco de morte celular regulado pela concentrao de ATP. O ATP necessrio para manter o transporte ativo do clcio (Ca ++ ) para fora da clula e assim prevenir alteraes da morfologia da membrana dos eritrcitos, induzida pelo acmulo deste on. O aumento de Ca ++ nos eritrcitos promove redistribuio dos fosfolipdios de membrana alterando sua forma bicncava, formando os equincitos, o que aumenta o clearance de eritrcitos da circulao pelos macrfagos (KAMP et al., 2001). O armazenamento inicialmente faz com que os eritrcitos passem da forma bicncava para esferide, e dessa forma sua integridade e flexibilidade ficam menos prejudicadas. Dependendo da soluo de preservao utilizada h maior incidncia da forma esferoequinoctica (Figura 8), a qual mais rapidamente fagocitada e eliminada da circulao. Estudos vm mostrando que a adio de solues tamponantes, como o fosfato dissdico, ao concentrado de hemcias diminuem as alteraes morfolgicas sofridas pelos eritrcitos durante o armazenamento (COSTA JNIOR, 2010). 23
A ocorrncia de hemlise durante o armazenamento est relacionada ao rompimento das espculas dos equincitos, ou esferoequincitos, promovendo assim a liberao da hemoglobina. Assim, sugerido que o percentual de hemlise no esteja diretamente relacionado lise celular, visto que no h um declnio do hematcrito na mesma proporo da ocorrncia de hemlise (COSTA JNIOR, 2010). O potssio (K + ), on intracelular, um importante marcador da integridade da membrana plasmtica. Suas concentraes intracelulares so mantidas pela bomba de sdio e potssio. Entretanto, os baixos valores de pH influenciam diretamente nesse equilbrio, promovendo migrao do potssio para o meio extracelular (DIBARTOLA & MORAIS, 2006).
FIGURA 8 Alteraes morfolgicas dos eritrcitos de concentrado de hemcias aps armazenados em bolsa CPD/SAG-M durante 40 (A) e 60 (B) dias, e em bolsa CPD/SAG-M acrescida de fosfato dissdico aps 40 (C) e 60 (D) dias, com predomnio de esferoequincitos em B e D (COSTA JNIOR, 2010).
24
Outro efeito importante do armazenamento o acmulo de amnia. A amnia produzida a partir do catabolismo de protenas, aminas, aminocidos, cidos nuclicos e outros componentes nitrogenados, no caso a partir do catabolismo nos eritrcitos. Por difuso, a amnia sai dos eritrcitos para o plasma ou sobrenadante, onde mensurada. Contudo, a importncia clinica do acmulo de amnia em CH ainda no est bem estabelecida, visto que ces anmicos no apresentaram nveis alterados de amnia srica aps a transfuso de CH com elevada concentrao de amnia. Em pacientes com insuficincia heptica ainda no foram feitos estudos clnicos, por isso a utilizao de CH armazenados nesses animais deve ser feita com cautela (WADDELL et al., 2001). A anlise dos gases sanguneos tambm pode ser usada para atestar a qualidade do sangue estocado. O aumento da presso pacial de dixido de carbono (P CO2 ) em CH provavelmente expe o 2,3-DPG a uma maior taxa de degradao, pois o CO 2 compete com o 2,3-DPG pelo mesmo stio de ligao na hemoglobina. Quando no est ligado hemoglobina o 2,3- DPG se torna mais susceptvel degradao metablica (HGMAN et al., 2002). COSTA JNIOR et al. (2008) relataram aumento da P O2 , que pode estar associado permeabilidade do plstico da bolsa ao oxignio, contudo HGMAN et al. (2002) afirmaram que o plstico permevel apenas ao CO 2 . Apesar da indicao do tratamento de anemias com CH, importante ressaltar que as LA ocorridas nos eritrcitos podem resultar em ocluso microvascular e possvel falncia de rgos. Alm disso, as alteraes de formato e funo dos eritrcitos e o desvio da curva de saturao da hemoglobina, ocasionado pela diminuio do 2,3-DPG, reduzem a disponibilidade de oxignio para os tecidos (COLLINS, 2011). No h duvidas de que a transfuso de CH tem importncia no manejo do paciente crtico apresentando hipxia relacionada a anemia, contudo deve-se considerar que a anemia uma condio tolerada em muitos pacientes crticos, e que a transfuso sangunea associada a piores resultados em alguns casos, principalmente devido as LA sofridas pelas hemcias (PRITTIE, 2010). O nvel crtico mnimo de hemoglobina para indicao de transfuso sangunea no est bem estabelecido, e por isso indicado que variveis 25
relacionadas oxigenao tecidual, como a concentrao de lactato e a saturao do sangue venoso misto, sejam tambm consideradas antes da deciso de promover ou no a transfuso do concentrado de hemcias (PRITTIE, 2010).
2.3.3 Derivados do Plasma
a) Plasma Fresco Congelado (PFC)
O PFC obtido aps a centrifugao e separao do sangue total e congelado em at seis horas, o que previne a degradao dos fatores de coagulao. Pode ser mantido congelado por at um ano entre -18C e -4C, porm j havendo degradao dos fatores de coagulao em dois ou trs meses aps a colheita (HELM & KNOTTENBELT, 2010). Em at um ano de armazenamento, o PFC contm fator de Von Willebrand (vWF) e os fatores II, VII, VIII, IX e X de coagulao. Aps um ano de armazenamento, reclassificado como Plasma Congelado podendo continuar congelado por mais quatro anos (CHIARAMONTE, 2004). As indicaes do uso PFC incluem deficincia congnita ou adquirida de fatores de coagulao, principalmente deficincia do vWF em ces, tratamento de coagulopatias (como falncia heptica, intoxicao por warfarnicos e coagulao intravascular disseminada), para aumentar os nveis de enzimas protetoras, como 1-antitripsina e 2-macroglobulinas, alm de aumentar a presso coloidosmtica intravascular (CHIARAMONTE, 2004; HALDANE et al., 2004). SNOW et al., (2010) demonstraram em um estudo retrospectivo que os objetivos quanto ao uso de plasma fresco congelado mudaram, sendo que na dcada de 90 a principal utilizao era para correo de hipoalbuminemia, e a partir de 2006 o principal foco passou a ser a correo de coagulopatias. Todavia, a terapia com plasma fresco congelado no mostrou eficcia significativa nem melhorou o suporte onctico dos pacientes, sendo necessrios ainda mais estudos para melhor comprovao. 26
Por outro lado, KOHN et al. (2003) mostraram bons resultados no tratamento de gatos apresentando hemorragia, por provvel intoxicao por rodenticidas anticoagulantes, com a associao de plasma fresco congelado e vitamina K. Atualmente, a utilizao de PFC para reposio de albumina no mais indicada na medicina, principalmente porque outras fontes de suplementao esto comercialmente disponveis (colides sintticos e albumina srica humana). A dose recomendada de PFC para reposio de albumina, 45mL/Kg, muito superior necessria para reposio dos fatores de coagulao, 10-20mL/Kg, e aumenta em apenas 1g/dL a concentrao de albumina srica (CHIARAMONTE, 2004). O PFC deve ser manuseado cuidadosamente, visto que a bolsa de armazenamento plstica e, quando submetida a baixas temperaturas, quebra facilmente. O PFC pode ser descongelado em temperatura ambiente ou em banho-maria a 37C sem que haja diferena na deteriorao dos fatores I, VIII de coagulao ou no vWF, tampouco no tempo de ativao da tromboplastina ativada, no tempo de protrombina e na concentrao de fibrinognio (WARDROP & BROOKS, 2001; YAXLEY et al., 2010). Aps descongelado, o PFC deve ser mantido refrigerado entre um e seis graus Clsius, e se no transfundido em 24 horas, pode ser congelado novamente, porm reclassificado como plasma congelado, ou mantido sob refrigerao por at cinco dias, isso porque estudos mostraram que h diminuio da atividade dos fatores V e VIII de coagulao. YAXLEY et al. (2010) mostraram em seu estudo que o PFC descongelado e refrigerado (1- 6C) por at uma hora e novamente congelado mostrou boa manuteno da atividade do fator VIII de coagulao. Esses autores sugerem por isso que, apesar de apresentarem o mesmo valor in vitro aps o aquecimento, ainda so necessrios estudos clnicos. Diferentemente dos ces, importante ressaltar que os gatos s podem receber transfuso de plasma de tipo sanguneo compatvel porque os gatos possuem anticorpos naturais a outros tipos sanguneos, mesmo sem nunca terem recebido transfuses prvias (BARFIELD & ADAMANTOS, 2011).
27
b) Plasma Congelado (PC)
considerado PC, ou plasma de 24 horas, aquele congelado entre seis e 24 horas da colheita do sangue total ou o PFC estocado h mais de um ano. A principal diferena que o PC perde a ao dos fatores V, VIII e vWF da coagulao e as protenas plasmticas, porm ainda contm os fatores dependentes da vitamina K, os fatores II, VII, IX e X da coagulao. A indicao de uso do PC a deficincia dos fatores no-lbeis da coagulao, como na intoxicao por rodenticidas (CHIARAMONTE, 2004; BRASIL, 2008; HELM & KNOTTENBELT, 2010).
c) Crioprecipitado e Criosobrenadante
O crioprecipitado composto por aproximadamente 20% de fibrinognio, 50% de fator VII da coagulao e 30% de fatores VIII, XIII e vWF. obtido a partir da centrifugao do plasma em temperatura controlada. A unidade de PFC deve ser aquecida a 4C e ento centrifugada, formando um precipitado branco. Assim como o PFC, idealmente estocado entre -18C e - 20C por at um ano (CHIARAMONTE, 2004; HELM & KNOTTENBELT, 2010). A dose recomendada 12-20mL/Kg a cada dez ou 12 horas, at que a hemorragia seja controlada. As principais indicaes so deficincia de vWF, hemofilia A e hipofibrinogenemia (CHIARAMONTE, 2004). A poro lquida da centrifugao chamada criosobrenadante, ou crioprecipitado pobre. fonte de fatores de coagulao, exceto os do crioprecipitado, e de protenas plasmticas, sendo a forma de armazenamento a mesma do crioprecipitado. indicado no tratamento de deficincias de fatores de coagulao, com exceo de hemofilia A e deficincia do vWF (HELM & KNOTTENBELT, 2010).
28
d) Concentrado de plaquetas (CP)
Obtido a partir da centrifugao do sangue total em duas etapas, sendo a primeira uma centrifugao leve, na qual se obtm o plasma rico em plaquetas (PRP), seguido de centrifugao em alta rotao para obteno do concentrado de plaquetas (CP). Aps a centrifugao o CP deve ser mantido a 222C sob agitao constante e no deve ser resfriado ou aquecido, mesmo antes de ser transfundido (BRASIL, 2008). Uma vez que as plaquetas so componentes sanguneos instveis no plasma e que podem ser perdidas no sangue total em poucas horas, transfuses profilticas no so recomendadas em veterinria pois os produtos contendo plaquetas so de difcil armazenamento e porque aps transfundidas so rapidamente retiradas da circulao, especialmente quando o receptor apresenta quadro de destruio de plaquetas. A indicao de uso de PRP ou de CP nos casos em que trombocitopenia, baixa contagem de plaquetas, ou trombocitopatia, disfuno plaquetria qualitativa, esto predispondo hemorragia (HALDANE et al., 2004; GUERIN & BURTET, 2006). A resposta do paciente aps a transfuso de CP ou PRP depende da integridade da funo biolgica das plaquetas aps a colheita, o processamento e armazenamento, sendo que um bom indicador da integridade das plaquetas a deteco da ativao plaquetria, quando parte da funo biolgica est comprometida (LANDI & MARQUES JUNIOR, 2003). Um controle rgido de qualidade deve ser constantemente feito. Os CP tm que apresentar contagem mnima de plaquetas de 5,5x10 10 por bolsa, suspensas em 50 a 70 mL e plasma com o pH mantido entre 6,5 e 7,4, podendo ser armazenados por at cinco dias (GUERIN & BURTET, 2006). Estudos vm sendo feitos no intuito de prolongar o tempo de armazenamento de CP pela adio de dimetilsulfxido (DMSO) aos preparados. Os testes feitos in vitro demonstraram que houve um aumento da ativao e diminuio da quantidade e funo plaquetria comparando-se a contagem de CP provenientes de plasma fresco congelado e os congelados com soluo de DMSO (GUILLAUMIN et al., 2008; GUILLAUMIN et al., 2010). O risco de contaminao bacteriana de CP, com evoluo para sepse, hoje o maior perigo infeccioso associado a transfuses sanguneas 29
em medicina. Por menor que seja a contagem de bactrias no interior da bolsa aps a colheita, a temperatura de armazenamento predispe a proliferao bacteriana, sendo os microorganismos gram-positivos, principalmente Staphylococcus, responsveis pela maior parte da contaminao de CP. Esses microorganismos fazem parte da microbiota da pele, mostrando a necessidade de se executar a desinfeco efetiva do local de puno (MARTINI et al., 2010). A prevalncia de contaminao bacteriana em CP na medicina no bem descrita, com grande variao entre os centros de colheita de sangue, porm a eliminao completa da contaminao proveniente da pele difcil de ser alcanada, aumentando a importncia do reconhecimento precoce de sintomas clnicos associados a sepse transfusional, como a febre e vmito (MARTINI et al., 2010). Atualmente, a legislao exige que o controle de qualidade feito em CP avalie a concentrao plaquetria, o volume total da unidade de CP, o pH, a temperatura ambiente e a validade no quinto dia, quando deve ser descartado (BRASIL, 2002). No entanto, h ainda a recomendao da avaliao da presena de fragmentao plaquetria e da integridade funcional, que so anlises qualitativas funcionais dos CP. Assim como os CH, os CP tambm apresentam LA (GUERIN & BURTET, 2006). Normalmente, as plaquetas apresentam formato discide, e quando adicionadas ao anticoagulante EDTA sofrem tumefao, aumentando seu volume plaquetrio mdio (VPM). Quando sofrem alterao de morfologia, passando a forma de esfera, no ocorre tumefao com EDTA e por isso h grande variao do VPM. Da mesma forma, pode-se determinar a presena de agregados plaquetrios, pela diferena do nmero de plaquetas com tumefao, quando adicionadas de EDTA, com o nmero de plaquetas em amostra sem EDTA (GUERIN & BURTET, 2006). A principal causa da perda da forma discide a diminuio do pH que leva a degranulao e aumento da permeabilidade da membrana. A principal causas de diminuio do pH o aumento da atividade metablica plaquetria, seja pelo excesso de plaquetas na unidade de CP com consequente aumento do consumo de O 2 e produo de lactato e CO 2 , ou pela contaminao da unidade de CP por microorganismos. Cultura bacteriana de 30
unidades aleatrias tambm uma forma de controle de qualidade de unidades de CP (GUERIN & BURTET, 2006). A implantao de um sistema de Controle de Qualidade visa monitorar os processos por amostragem aleatria do produto final, comprovando a conformidade ou no s especificaes estabelecidas, garantindo que o produto final tenha qualidade e confiabilidade para promover a segurana transfusional (GUERIN & BURTET, 2006).
31
3. CONSIDERAES FINAIS
A medicina transfusional uma importante ferramenta no tratamento de diversas doenas de ces e gatos e, apesar de sua importncia, no isenta de riscos, sendo estes principalmente relacionados qualidade do produto sanguneo utilizado. Assegurar a qualidade do sangue total e seus componentes deve ser um objetivo de todos os veterinrios que se dispem a trabalhar com a coleta de sangue e com a implantao de bancos de sangue veterinrios, lembrando que os cuidados vo desde a seleo de doadores, com testes de triagem que assegurem o bom estado de sade, at a qualidade do armazenamento que cada componente sanguneo exige. O conhecimento dos principais problemas associados transfuso de componentes sanguneos, as Leses de Armazenamento, podem ser minimizadas, ou mesmo ter sua ocorrncia retardada, com o manejo adequado durante o armazenamento e com o estabelecimento de sistemas de controle de qualidade. Os estudos acerca das Leses de Armazenamento devem ser utilizados a fim de aproximar os dados obtidos em medicina prtica da medicina transfusional veterinria. Isso por que, atualmente, no est disponvel uma legislao com normatizaes tcnicas especficas para bancos de sangue veterinrios, sendo que as normas utilizadas so extrapoladas das normatizaes estipuladas pela Vigilncia Sanitria para a medicina.
32
REFERNCIAS
1. ABRAMS-OGG, A.C.G.; SCHNEIDER, A. Principles of canine and feline blood collection, processing and storage. In: WEISS, D.J.; WARDROP, K.J. Veterinary Hematology. 6ed. Iowa: Wiley-Blackwell, 2010. se 8, cap 94, p. 731-737.
2. ARIKAN, S.; DURU, S.Y.; GURKAN, M.; AGAOGLU, Z.T.; GIGER, U. Blood Type A and B Frequencies in Turkish Van and Angora Cats in Turkey. Journal of Veterinary Medicine Series A, Berlin, v.50, n.6, p.303-306, 2003.
3. AUTHEMENT JM, WOLFSHEIMER KJ, CATCHINGS S. Canine blood component therapy: product preparation, storage and administration. Journal of the American Medical Association, Chicago, v.23, p. 483-493, 1986.
4. BARFIELD, D.; ADAMANTOS, S. Feline blood transfusions A pinker shade of pale. Journal of Feline Medicine and Surgery, Londres, v.13, n.1, p.11-23, 2011.
5. BLAIS, M.C.; BERMAN, L.; OAKLEY, D.A.; GIGER, U. Canine Dal blood type: a red cell antigen lacking in some Dalmatians. Journal of Veterinary Internal Medicine, Lawrence, v.21, n.2, p.281-286, 2007.
6. BRASIL. Resoluo da Diretoria Colegiada (RDC) n 343, anexo 1, de 13 de dezembro de 2002. Dispe sobre o Regulamento Tcnico dos Servios de Hemoterapia. Dirio Oficial [da] Repblica Federativa do Brasil, Poder Executivo, Braslia, DF, 17 jan. 2003.
7. BRASIL. Ministrio da Sade. Secretaria de Ateno Sade. Departamento de Ateno Especializada. Coordenao da Poltica Nacional de Sangue e Hemoderivados. Guia para o uso de 33
Hemocomponentes: Srie A. Normas e Manuais Tcnicos. Braslia, 2008. 140p.
8. CARSON, J.L.; DUFF, A.; BERLIN, J.A.; LAWRENCE, V.A.; POSES, R.M.; HUBER, E.C.; OHARA, D.A.; NOVECK, H.; STROM, B.L. Perioperative blood transfusion and postoperative mortality. Journal of the American Medical Association, Chicago, v. 279, n. 3, p. 199-205, 1998.
9. CASTELLANOS, I.; COUTO, C.G.; GRAY, T.L. Clinical use of blood products in cats: a retrospective study (1997 2000). Journal of Veterinary Internal Medicine, Lawrence, v. 18, p. 529-532, 2004.
10. CHIARAMONTE, D. Blood-component therapy: Selection, administration and monitoring. Clinical Techniques in Small Animal Practice, Filadlfia, v. 19, n. 2, p. 63-67, 2004.
11. COLLINS, T.A. Packed red blood cell transfusions in critically ill patients. Critical Care Nurse, Aliso Viejo, v.31, n.1, p.25-34, 2011.
12. COSTA JNIOR, J.; VIANA, J.A.; RIBEIRO FILHO, J.D.; FAVARATO, E.S.; MATA, L.C.; NETO, N.A. Parmetros bioqumicos e hemogasomtricos do sangue total canino armazenado em bolsas plsticas contendo CPDA-1 e CPD/SAG-M. Cincia Rural, Santa Maria, v. 38, n. 2, p. 378-383, 2008.
13. COSTA JNIOR, J. Avaliaes bioqumicas, hemosasomtricas e morfolgicas do sangue canino conservado em bolsas CPD/SAG-M acrescidas de fosfato dissdico, 2010. 86f. Tese (Doutorado em Medicina Veterinria) Centro de Cincias Biolgicas e da Sade, Universidade Federal de Viosa, Viosa.
14. COUTO, C.G.; IAZBIK, M.C. Effects of blood donation on arterial blood pressure in retired racing greyhounds. Journal of Veterinary Internal Medicine, Lawrence, v.19, n.6, p.845-848, 2005. 34
15. COX, R.H.; PETERSON, L.H.; DETWEILER, D.K. Comparison of arterial hemodynamics in the mongrel dog and the racing greyhound. American Journal of Physiology, Baltimore, v.230, n.1, p.211-218, 1976.
16. DIBARTOLA, S.P.; MORAIS, H.A. Disorders of potassium: hypokalemia and hyperkalemia. In DIBARTOLA, S.P. Fluid, Electrolyte, and cid-Base Disorders in Small Animal Practice, 3 ed. St. Louis, Saunders Elsevier, 2006, p. 91-121.
17. FONSECA, L.G.; LANGHI JUNIOR, D.M.; CARVALHO, R.L.B.; MIMICA, L.M.J.; CHIATTONE, C.S. Avaliao da antissepsia cutnea por quatro mtodos em doadores de sangue. Revista Brasileira de Hematologia e Hemoterapia, Santos, v.31, n.1, p.5-8, 2009.
18. GIGER, U. Peculiarities about feline transfusion medicine. Proceeding of the International Veterinary Emergency and Critical Care Symposium, Chicago, p.103-106, 2009.
19. GIGER, U.; BCHELER, J. Transfusion of type-A and type-B blood to cats. Journal of the American Veterinary Medical Association, Schaumburg, v.198, n.3, p.411-418, 1991.
20. GREENWALT, T.J. A short history of transfusion medicine. Transfusion, Malden, v. 37, n.5, p. 550-563, 1997.
21. GUERIN, G.D.; BURTET, L.P. Avaliao de concentrados plaquetrios produzidos pelo servio de Hemoterapia do Hospital Santo ngelo: implantao de um sistema de controle de qualidade. Revista Brasileira de Anlises Clnicas, Rio de Janeiro, v.38, n.4, p.287-292, 2006.
22. GUILLAUMIN, J.; JANDREY, K.E.; NORRIS, J.W.; TABLIN, F. Assessment of a dimethyl sulfoxide-stabilized frozen canine platelet concentrate. 35
American Journal of Veterinary Research, Chicago, v.69, n.12, p.1580- 1586, 2008.
23. GUILLAUMIN, J.; JANDREY, K.E.; NORRIS, J.W.; TABLIN, F. Analysis of a commercial dimethyl-sulfoxide-stabilized frozen canine platelet concentrate by turbidimetric aggregometry. Journal of Veterinary Emergency and Critical Care, San Antonio, v.20, n.6, p.571-577, 2010.
25. HALE, A.S. Canine blood groups and their importance in veterinary transfusion medicine. Veterinary Clinics of North America Small Animal Practive, Filadlfia, v.25, n.6, p.1323-1332, 1995.
26. HEATON, A.; KEEGAN, T.; HOLME, S. In vivo regeneration of red cell 2, 3- diphosphoglycerate following transfusion of DPG-depleted AS-1, AS-3 and CPDA-1 red cells. British Journal of Haematology, Oxford, v.71, n.1, p.131-136, 1989.
27. HELM, J.; KNOTTENBELT, C. Blood transfusions in dogs and cats 1. Indications. In Practice, London, v. 32, p. 184-189, 2010.
28. HESS, J.R. An update on solutions for red cell storage. Vox Sanguinis, Basel, v. 91, p. 13-19, 2006.
29. HGMAN, C.F.; KNUTSON, F.; LF, H.; PAYRAT, J.M. Improved maintenance of 2,3-DPG and ATP in RBCs stored in a modified additive solution. Transfusion, Malden, v. 42, n. 7, p. 824-829, 2002.
30. HGMAN, C.F.; KNUTSON, F.; LF, H. Storage of whole blood before separation: the effect of temperature on red cell 2,3-DPG and the 36
accumulation of lactate. Transfusion, Malden, v. 39, n. 5, p. 492-497, 1999.
31. IAZBIK, M.C.; OCHOA, P.G.; WESTENDORF, N.; CHARSKE, J.; COUTO, C.G. Effects of blood collection for transfusion on arterial blood pressure, heart rate, and PCV in cats. Journal of Veterinary Internal Medicine, Lawrence, v.21, n.6, p. 1181-1184, 2007.
32. KAMP, D.; SIEBERG, T.; HAEST, W.M. Inhibition and stimulation of phospholipid scrambling activity. Consequences for lipid asymmetry, echinocytosis and microvesiculation of erythrocytes. Biochemistry, Easton, v. 40, n. 31, p. 9438-9446, 2001.
33. KNOTTENBELT, C.M.; ADDIE, D.D.; DAY, M.J.; MACKIN, A.J. Determination of the prevalence of feline blood types in the UK. Journal of Small Animal Practice, Oxford, v.40, n. 3, p. 115-118, 1999.
34. KOHN, B.; WEINGART, C.; GIGER, U. Haemorrhage in seven cats with suspected anticoagulant rodenticide intoxication. Journal of Feline Medicine and Surgery, Londres, v.5, n.5, p.295-304, 2003.
35. KUNUGIYAMA, I.; ITO, N.; FURUKAWA, Y. Determination of blood volume in dogs using an enriched stable isotope 50 Cr. The Japanese Journal of Veterinary Science, Toquio, v.51, n.5, p.855-860, 1989.
36. KURUP, P.A.; ARUN, P.; GAYATHRI, N.S.; DHANYA, C.R.; INDU, A.R. Modified formulation of CPDA for storage of whole, and of SAGM for storage of red blood cells, to maintain the concentration of 2,3- diphosphoglycerate. Vox Sanguinis, Basel, v.85, n.4, p.252-261, 2003.
37. LANDI, E.P.; MARQUES JUNIOR, J.F.C. Caracterizao da ativao plaquetria nos concentrados de plaquetas por citometria de fluxo. Revista Brasileira de Hematologia e Hemoterapia, Santos, v.25, n.1, p.39-46, 2003. 37
38. LUCAS, R.L.; LENTZ, K.D.; HALE, A.S. Collection and preparation of blood products. Clinical Techniques in Small Animal Practice, Filadlfia, v. 19, n. 2, p. 55-62, 2004.
39. MARTINI, R.; KEMPFER, C.B.; RODRIGUES, M.A.; KUHN, F.T.; RIGATTI, F.; RATZLAFF, V.; SEGALA, Z.; HRNER, R. Contaminao bacteriana em concentrados plaquetrios: identificao, perfil de sensibilidade aos antimicrobianos e sepse associada transfuso. Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical, Rio de Janeiro, v.43, n.6, p.682-685, 2010.
40. MOTT, J.C. The effect of haemorrhage on haemoglobin concentration, blood volume and arterial pressure in kittens and cats. The Journal of Physiology, Cambridge, v.194, n.3, p.659-667, 1968.
41. NOVAIS, A.A.; FAGLIARI, J.J.; SANTANA, A.E. Prevalncia dos antgenos eritrocitrios caninos (DEA dog erythrocyte antigen) em ces domsticos (Canis familiaris) criados no Brasil. Ars Veterinria, Jaboticabal, v.20, n.2, p.212-218, 2004.
42. PRITTIE, J.E. Controversies related to red blood cell transfusion in critically ill patients. Journal of Veterinary Emergency and Critical Care, San Antonio, v.20, n.2, p.167-176, 2010.
43. REINE, N.J. Infection and blood transfusion: A guide to donor screening. Clinical Techniques in Small Animal Practice, Filadelfia, v.19, n.2, p.68- 74, 2004.
44. ROUX, F.A.; DESCHAMPS, J.; BLAIS, M.; WELSH, D.M.; DELAFORCADE-BURESS, A.M.; ROZANSKI, E.A. Multiple red cell transfusions in 27 cats (2003-2006): indications, complications and outcomes. Journal of Feline Medicine and Surgery, Londres, v. 10, n. 3, p. 213-218, 2008. 38
45. SNOW, S.J.; JUTKOWITZ, L.A.; BROWN, A.J. Trends in plasma transfusion at a veterinary teaching hospital: 308 patients (1996-1998 and 2006-2008). Journal of Veterinary Emergency and Critical Care, San Antonio, v.20, n.4, p.441-445, 2010.
46. TINMOUTH, A.; FERGUSSON, D.; YEE, I.C.; HRBERT, P.C. Clinical consequences of red storage in the clitically ill. Transfusion, Malden, v.46, n.11, p.2014-2027, 2006.
47. TOCCI, L.J.; EWING, P.J. Increasing patient safety in veterinary transfusion medicine: an overview of pretransfusion testing. Journal of Veterinary Emergency and Critical Care, San Antonio, v.19, n.1, p.66-73, 2009.
48. TROYER, H.L.; FEEMAN, W.E.; GRAY, T.L.; COUTO, C.G. Comparing chemical restraint and anesthetic protocols used for blood donations in cats: One teaching hospital's experience. Veterinary Medicine, Kansas City, v.100, p.652-658, 2005.
49. VEALE, M.F.; HEALEY, G.; SPARROW, R.L. Effect of additive solutions on red blood cell (RBC) membrane properties of stored RBCs prepared from whole blood held for 24 hours at room temperature. Transfusion, Malden, v. 51, n. s1, p. 25S-33S, 2011.
50. WADDELL, L.S.; HOLT, D.E.; HUGHES, D.; GIGER, U. The effect of storage on ammonia concentration in canine packed red blood cells. Journal of Veterinary Emergency and Critical Care, San Antonio, v.11, n.1, p.23-26, 2001.
51. WARDROP, K.J.; REINE, N.; BIRKENHEUER, A.; HALE, A.; HOHENHAUS, A.; CRAWFORD, C.; LAPPIN, M. Canine and feline blood donor screening for infectious disease. Journal of Veterinary Internal Medicine, Lawrence, v.19, n.1, p. 135-142, 2005. 39
52. WARDROP, K.J.; BROOKS, M.B. Stability of hemostatic proteins in canine fresh frozen plasma units. Veterinary Clinical Pathology, Santa Brbara, v.30, n.2, p.91-95, 2001.
53. WEINGART, C.; GIGER, U.; KOHN, B. Whole blood transfusions in 91 cats: a clinical evaluation. Journal of Feline Medicine and Surgery, Londres, v.6, n.3, p. 139-148, 2004.
54. YAXLEY, P.E.; BEAL, M.W.; JUTKOWITZ, L.A.; HAUPTMAN, J.G.; BROOKS, M.B.; HALE, A.S.; PARR, A. Comparative stability of canine and feline hemostatic proteins in freeze-thaw-cycled fresh frozen plasma. Journal of Veterinary Emergency and Critical Care, San Antonio, v.20, n.5, p.472-478, 2010.
40
ANEXOS
Anexo A - Formulrio de avaliao de doador de sangue canino.