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BIREME/OPAS/OMS - Biblioteca Virtual em Sade
Base de dados : LILACS Pesquisa : 222063 [Identificador nico] Total de
referncias : 1
1/1
Id: 222063 Autor: Veras, Maria do Socorro; Coelho, Sandra Barboza Vieira;
Sousa, Joseneide de; Cardoso, Lucianne; Santos, Jeova Francisco dos.
Ttulo: Prevalncia do trao falciforme em doadores de sangue do Distrito
Federal / Prevalence of the falciform trace in blood donors from Distrito
Federal Fonte: Rev. sade Dist. Fed;9(1):9-12, jan.-mar. 1998. tab. Idioma:
pt. Resumo: Foram estudados 55.450 amostras de doadores de sangue da
rede pblica do DF, no perodo de junho/95 a dezembro/96, para detectar
a prevalncia da hemoglobina S, atravs do Teste da Mancha e
confirmaao com o teste de Eletroforese, com o objetivo de selecionar
hemcias com melhor qualidade, evitando transfusoes que possam gerar
efeitos indesejveis e ineficcia teraputica nos receptores de sangue,
assim como dar orientaao gentica aos portadores assintomticos de
hemoglobina S. Nas amostras analisadas foram encontrados 1140
resultados positivos para o trao falciforme, o que representa 2,06 por
cento da totalidade. Esse resultado corrobora com outras pesquisas
publicadas e demonstra a necessidade da obrigatoriedade da realizaao
prvia s transfusoes do teste de triagem para hemoglobina S (Au)
Descritores: Doena da Hemoglobina SC/sangue Doena da Hemoglobina
SC/preveno & controle Doena da Hemoglobina SC/diagnstico
Doadores de Sangue Limites: Humanos Masculino Feminino Responsvel:
BR599.1 - Coordenao de Biblioteca
[Retorna]
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BIREME/OPAS/OMS - Centro Latino-Americano e do Caribe de Informao
em Cincias da Sade.
Palavra chave Eletroforese sangue
Artigo: eletroforese em diagnostico de doenas de sangue
de doadores.





TECNICA DE ELETROFORESE
A eletroforese uma
tcnica analtica utilizada na anlise de
macromolculas como protenas e cidos
nuclicos. Essa tcnica foi descoberta
e empregada pela primeira vez em 1937 por
Arne Tislius um bioqumico sueco. O efeito
eletrofortico tem como base a teoria de
Debye-Hckel-Onsager, onde esta teoria
de dissociao eletroltica aceita o fato de
as partculas carregadas moverem-se sob a
influncia de foras eletrostticas para um
eletrodo de carga oposta quando aplicada
uma diferena de potencial em uma soluo
contendo eletrlitos.


= v/E = Z/f
Onde:
A mobilidade eletrofortica () a razo entre
a velocidade(v) da macromolcula e
o potencial eltrico(E) que move a
macromolcula ou a razo entre a carga
lquida(Z) e o coeficiente de atrito(f).




Suportes para eletroforese funcionarem como
uma peneira molecular, ou seja, separar as
espcies em funo de sua massa e tamanho
molecular, respectivamente, inibe a
propagao do calor em virtude
do atritocausado pela migrao e pela
aplicao do calor.
Os suportes para eletroforese comumente
empregados so os gis de poliacrilamida para
protenas e agarose para os cidos nuclicos,
em virtude de estes polmeros campo eltrico.






Os gis de agarose so utilizados para
macromolculas visto que os cidos nuclicos
apresentam massas moleculares
extremamente grande.



Estrutura Quimica da agarose













Eletroforese de macromolculas em Gel de
SDS
Resumidamente o procedimento para
eletroforese de macromolculas o
seguinte:
1. As macromolculas so colocadas
em uma soluo chamada tampo de
amostra contendo SDS, Azul de
Bromo-fenol e DTT;
2. A soluo tampo de amostra
contendo as protenas aquecida a
90C de 5 a 10 minutos;
3. Aps o aquecimento das protenas
so desnaturadas, suas ligaes
dissulfeto so quebradas, e o SDS
agrega-se ao redor das protenas
proporcionando uma carga lquida
negativa.




Mecanismo da eletroforese
Abaixo descrito o mecanismo da eletroforese.
1 a amostra contendo as macromolculas
devidamente desnaturadas e reduzidas
distribuda ao nos poos ou cavidades do gel de
suporte;
2 - aps a distribuio o equipamento fechado e o
campo eltrico aplicado no gel, atravs de
um dispositivo diferencial de energia eltrica e as
macromolculas vo sendo distribudas pela
extenso do gel e so separadas em funo de sua
massa e tamanho molecular que so os principais
fatores que determinam a mobilidade eletrofortica
de acordo com o esquema:

Equipamento de eletroforese em gel. Quando
a diferena de potencial aplicada as
molculas migram do ctodo eletrodo
negativo em direo ao anodo eletrodo
positivo.

No topo do gel existe uma mistura de
macromolculas de variados tamanhos e
massas moleculares de modo que quando o
campo eltrico aplicado as molculas
menores migram primeiro, pela malha
formada pelo gel.






No final do processo quando todas as
macromolculas esto ditribuidas o gel
mergulhado em uma soluo corante.





Focalizao Isoeltrica de protenas em gel de
SDS

Uma tcnica muito poderosa para analise de
protenas que proporciona alta resoluo
chamada Focalizao Isoeltrica onde as
protenas so separadas, atravs de seu ponto
isoeltrico.
. A focalizao isoeltrica se processa da
seguinte maneira:

No primeiro gel os anflitos adicionados
so distribudos com a aplicao do campo
eltrico.
No segundo gel adicionada a soluo
de protenas.
No terceiro gel aplicado o campo
novamente e as protenas migram em
direo a seu ponto isoeltrico.
Eletroforese Bidimensional ou 2D
Essa tcnica oferece uma resoluo melhor,
ou seja, um grau maior de detalhes no
eletroforetograma final por que combina a
focalizao isoeltrica e a eletroforese em gel
SDS. De acordo com o esquema abaixo:



Eletroforese 2D corado com Nitrato de prata.

Na eletroforese bidimensional o gel da
focalizao isoeltrica colocado
horizontalmente sobre um gel de sds, o
campo eltrico aplicado e as
macromolculas proticas so separadas de
acrodo com o ponto isoeltrico e em funo de
sua massa molecular, fornecendo um
eletroforetograma que possibilita a
visualizao e identificao de vrias protenas
de uma s vez.





Anemia falciforme uma doena hereditria (passa dos
pais para os filhos) caracterizada pela alterao dos
glbulos vermelhos do sangue, tornando-os parecidos com
uma foice, da o nome falciforme. Essas clulas tm sua
membrana alterada e rompem-se mais facilmente,
causando anemia. A hemoglobina, que transporta o
oxignio e d a cor aos glbulos vermelhos, essencial
para a sade de todos os rgos do corpo. Essa condio
mais comum em indivduos da raa negra. No Brasil,
representam cerca de 8% dos negros, mas devido intensa
miscigenao historicamente ocorrida no pas, pode ser
observada tambm em pessoas de raa branca ou parda.
Diagnstico:
A deteco feita atravs do exame eletroforese de
hemoglobina. O teste do pezinho, realizado gratuitamente
antes do beb receber alta da maternidade, proporciona a
deteco precoce de hemoglobinopatias, como a anemia
falciforme.

Diagnstico laboratorial das doenas das clulas falciformes
aplicada em eletroforese.






As tcnicas utilizadas para avaliar amostras de sangue
encaminhadas ao laboratrio com suspeitas de doena
falciforme incluem testes que podem ser subdivididos em
quatro grupos: a) confirmatrios da presena de Hb S
nos eritrcitos: teste de falcizao ou teste de
solubilidade; b) determinantes de gentipos (AS, SS, SC,
etc.): eletroforeses de hemoglobinas em meios alcalino e
cido, isoeletrofocalizao, dosagem de Hb Fetal, e
cromatografia lquida de alta presso (HPLC); c)
determinantes de hapltipos por meio de tcnicas de
biologia molecular; d) monitorao: hemograma,
contagem de reticulcitos, morfologia eritrocitria,
dosagens de: ferritina, bilirrubina, cido rico, fosfatase
alcalina, desidrogenase lctica (LDH) e metaemoglobina, e
pesquisas intracelulares de corpos de Heinz, Hb H e Hb
Fetal.
Cada grupo de testes tem sua importncia na informao
de dados para fundamentar com segurana o diagnstico
completo da doena falciforme. Entretanto, para
dimensionar sua importncia no conjunto de informaes,
comentaremos cada um dos testes apresentados.





Eletroforese alcalina de hemoglobina: a
eletroforese alcalina assim denominada devido ao
fato do tampo utilizado para esse fim ter pH
varivel entre 8 e 9.



Eletroforese alcalina de hemoglobinas em gel de
agarose. Diferenciao da mobilidade eletrofortica
dos gentipos SC, SF e AS. Os traos de Hb A nos
gentipos SC e SF se devem sangue transfundido
em ambos pacientes que cederam as amostras de
sangue para anlise.

Eletroforese cida de hemoglobina: essa
eletroforese sempre realizada em gel de agarose
tamponada em soluo de citrato ou fosfato com pH
varivel entre 5 e 6, por isso tambm conhecida
por agarose cida.




Eletroforese cida de hemoglobinas em gel de
agarose. (1) Hb ASF em sangue de recm-nascido;
(2) Hb AS; (3) Hb AA. Devido ao processo fsico-
qumico de eletroendosmose a Hb Fetal migra com
maior rapidez que a Hb A.

Isoeletrofocalizao: tambm conhecida por
eletroforese de focalizao isoeltrica. Nesse tipo de
eletroforese as protenas so fracionadas de acordo
com o seu pH ao longo de um gradiente de pH
varivel entre 5 e 14 que se forma durante a
composio do gel.


Eletroforese de focalizao isoeltrica
(isoeletrofocalizao) em gel de agarose.(1) "pool"
de hemoglobinas A, F, S e C. (2) Hb AD. Por meio
da isoeletrofocalizao possvel obter
fracionamentos de hemoglobinas com excelente
nitidez, alm de diferenciar as mobilidades das
hemoglobinas S e D..

A eletroforese de hemoglobina apresenta
concentraes de Hb S variveis entre 90 e 100%,
Hb Fetal: 2 a 10%, e Hb A
2
: 2 a 4%. A Hb A est
sempre ausente em pacientes com anemia
falciforme no transfundidos.



Eletroforese alcalina de hemoglobina em acetato de
celulose. (1) Hb AS; (2) HbAA; (3) Hb SS com 5% de
Hb Fetal. A seta indica frao de meta Hb S em
paciente com anemia falciforme associada
deficincia de G6PD.


Hb SS / Talassemia alfa (Hb SH) A talassemia
alfa uma alterao da sntese de globina alfa que
pode ter origem gentica ou adquirida.
Entre pessoas negras, a talassemia alfa resulta
geralmente da deleo de um ou dois genes alfa. A
prevalncia de talassemia alfa entre negros da
Amrica do Norte de 30%, enquanto no Brasil
varivel entre 20 e 25%. Assim, admite-se que a
interao entre a anemia falciforme e talassemia alfa
ocorra com alta frequncia..


Eletroforese alcalina de hemoglobina em acetato de celulose. (1):
Hb SH obtida de paciente com anemia falciforme (transfundida, por
isso a presena de Hb A) associada a talassemia alfa (-
2
S
/ - -

2
S
), observe a presena de duas fraes de Hb H: uma formada
por tetrmeros de
A
e outra por tetrmeros de
S
; a concentrao
maior da Hb H por
4
A
em relao diminuta concentrao da Hb
H por
4
S
se deve ao fato deste tetrmero ser muito instvel. (2):
Hb AS. (3): Hb AA. Para visualizar a Hb H necessrio aplicar
hemolisado feito com saponina a 1%.

A Hb S/Talassemia Beta pode ser diferenciada
laboratorialmente por meio de eletroforeses alcalina e cida
em dois gentipos: SF e SFA. No gentipo SF h completa
ausncia da Hb A, com concentraes variveis de Hb A2
entre 2 e 6%


Eletroforese alcalina de hemoglobinas em gel de agarose.
(1) Hb AA padro normal; (2) Hb AF na talassemia beta
maior aps transfuso de concentrado de hemcias; (3) Hb
S/Tal.
0
ou Hb SF com excesso de metaemoglobina S e
globinas alfa livres atrs do local da aplicao; (4) Pai do
caso 3 talassemia beta menor com Hb A
2
e Hb Fetal
aumentadas; (5) Me do caso 3 com Hb AS.
Esse gentipo se deve total deficincia de sntese de
globina beta normal ou
A
, sendo por isso denominado por
talassemia
0
que associado a Hb S se torna Hb S /Tal.
0
.
Na talassemia
0
h elevada expresso do gene gama que
induz o aumento da sntese da Hb Fetal quando h
interao com a Hb S.
CONCLUSION

The use of electrophoresis in use in our laboratory has
been important to determine hemoglobinopathies and
thalassemias aid diagnosis for specific diseases , eg .
Multiple myeloma beyond application lipidogramas ,
molecular biology and enzymopathies .
More sensitive techniques such as isoelectric focusing
allow separation of fractions with excellent resolution.
An electrophoretic technique for use in scientific research
related to molecular weight fractionation of samples with
excellent resolution is performed in polyacrylamide gel.
Since the description of sickle cell anemia until the last
decade , many little could be done to improve the lives of
patients , these being destined to suffer various
complications and have a low life expectancy.
Recently, several advances have been made , both at the
level of cytogenetic diagnosis and treatment as well as its
complications . Moreover , recent research in search of
drugs able to reduce falcilizao of erythrocytes , such as
hydroxyurea and curative treatment as implant bone
marrow demonstrate that in the near future it will be
possible for patients with sickle cell disease have a normal
life .

TRADUO
CONCLUSO
A utilizao de eletroforese no uso da rotina
laboratorial tem sido importante para determinar
hemoglobinopatias e talassemias auxlio diagnstico
para doenas especficas, por ex.: mieloma mltiplo
alm de aplicao em lipidogramas, biologia
molecular e enzimopatias.
Tcnicas mais sensveis, como o caso da
focalizao isoeltrica permitem a separao de
fraes com excelente resoluo
Uma tcnica eletrofortica de uso em pesquisa
cientfica associada ao fracionamento por peso
molecular das amostras e com excelente resoluo
realizada em gel de poliacrilamida.Desde a
descrio da anemia falciforme at a ltima dcada,
muitos pouco podia se fazer para melhorar as
condies de vida dos pacientes, estando estes
destinados a sofrer diversas intercorrncias e a
apresentar uma baixa expectativa de
vida.Recentemente, vrios avanos tm sido feitos,
tanto ao nvel de citogentica e diagnstico como
tambm no tratamento de suas complicaes. Alm
disso, as recentes pesquisas em busca de drogas
capazes de reduzir a falcilizao das hemcias,
como a hidroxiuria e de tratamento curativos como
implante de medula ssea demonstram que num
futuro prximo ser possvel ao paciente com
anemia falciforme ter uma vida normal.