UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA

CURSO: BIOQUMICA
GRUPO - SUBGRUPO: B2 MESA: N5
FECHA DE EJECUCION DE LA PRCTICA: 21 de Marzo del 2014
FECHA DE ENTREGA DE INFORME DE PRCTICAS: 24 de Marzo del 2014

INFORME DE PRCTICA:
PRCTICA N: 1
TTULO DE LA PRCTICA: Fotocolorimetra

Integrantes:
Rivera Medina, Luis Miguel.
Rocha Gomez, Joselyn Sandy.
Rodriguez, Ravez
Toralva, Anthony





CICLO 2014 I


Introduccin

El estudio de las molculas a un nivel bioqumico requiere de ciertas tcnicas
analticas que permitan determinarlas cuantitativa y cualitativamente y as poder
caracterizarlas fsico, qumico y biolgicamente.
La fotocolorimetra se fundamenta en la medicin de la intensidad de la luz transmitida
a travs de una solucin coloreada. Esto se debe a la capacidad de las molculas para
absorber radiaciones, entre ellas las radiaciones del espectro UV.
La eficiencia con la que se pueden absorber depende de las condiciones del medio,
como la temperatura y el pH, y de la estructura atmica y molecular.
La longitud de onda en que las molculas de una sustancia absorben con mayor
intensidad la luz, se denomina lambda mximo o longitud de mxima absorcin,
concepto que se utiliza en el primer experimento.
La ley de LAMBERT y BEER rige los principios de los principios de la colorimetra y
tiene como factores la concentracin del soluto y al espesor del recipiente.
En los siguientes experimentos se hace uso del mtodo de la curva de calibracin y el
mtodo del factor de calibracin y se podr observar las variaciones que existen entre
ambos mtodos gracias a diferentes factores.











Experimento 1
Identificacin de la longitud de onda de la mxima absorcin

Procedimiento y resultados
A partir del reactivo solucin patrn de cromato de potasio 0,1g/dL medir 3mL a un
tubo de ensayo y agregue 2mL de agua destilada, mezclar bien y leer en el
espectrofmetro a 500, 480, 460 y 440 mn.

Las lecturas del espectrofmetro fueron las siguientes:

Absorbancia
500 -0.039
480 0.003
460 0.162
440 0.616

Discusin
La absorbancia es un concepto que nos indica la cantidad de luz absorbida por una
sustancia, la lectura en el espectrofotmetro se da a partir de una solucin diluida de
un compuesto, cuya absorbancia mxima debe estar dentro del rango de medida del
espectrofotmetro, se ver as la absorbancia a diferentes longitudes de onda frente a
un blanco que contenga el disolvente de la solucin de la muestra a caracterizar.
Dicho valor de absorbancia mxima se utilizara para hacer determinaciones
cualitativas y cuantitativas del compuesto, este espectro de absorcin depende,
principalmente, de la estructura qumica de la molcula, pero existen una gran
cantidad de factores que originan la variaciones en los valores, como el pH, la
polaridad del solvente o molculas vecinas.

Conclusiones
Ya que la lectura fue mayor en la ltima lectura la longitud de onda de mayor
absorbancia es la de 440nm, es decir su
optimo
= 440nm.
Probablemente todos los valores de absorbancia mxima variaron por la posibilidad de
haber causado cambios en el medio al manipular la solucin.





Experimento 2 - 3
Preparacin de la curva de calibracin - Anlisis de resultados.

Procedimiento y resultados

Disponer de una batera de tubos y proceder a preparar los estndares segn el
esquema.
TUBO 1 2 3 4 5 6
Solucin patrn
(mL)

Agua destilada
(mL)
0.3

5.7
0.6

5.4
0.9

5.1
1.5

4.5
2.4

3.6
3.0

3.0

Mezclar y llevar a leer los tubos en la longitud de onda de mayor absorbancia obtenido
en el paso 1.
TUBO 1 2 3 4 5 6
Solucin patrn
(mL)

Agua destilada
(mL)
0.3

5.7
0.6

5.4
0.9

5.1
1.5

4.5
2.4

3.6
3.0

3.0
Absorbancia 0.058 0.118 0.221 0.373 0.506

Encuentre la concentracin de cada uno de los tubos estndares en g/dL y en mol/L.
a) Concentracin del cromato de potasio: 0.1 g/dl
b) Formula a emplear: C
1
x V
1
= C
2
x V
2

TUBO1: 0.1 x 0.3 = C
1
x 6 C
1
= 0.005
TUBO2: 0.1 x 0.6 = C
2
x 6 C
2
= 0.01
TUBO3: 0.1 x 0.9 = C
3
x 6 C
3
= 0.015
TUBO4: 0.1 x 1.5 = C
4
x 6 C
4
= 0.025
TUBO5: 0.1 x 2.4 = C
5
x 6 C
5
= 0.04
TUBO6: 0.1 x 3.0 = C
6
x 6 C
6
= 0.05

En g/dl

CONCENTRACIN ABSORBANCIA
TUBO 2 0.01 0.58
TUBO 3 0.015 0.118
TUBO 4 0.025 0.221
TUBO 5 0.04 0.373
TUBO 6 0.05 0.506



En mol/l

CONCENTRACION
mol/l
ABSORBANCIA
TUBO 2 0.0004 0.58
TUBO 3 0.0006 0.118
TUBO 4 0.001 0.221
TUBO 5 0.0016 0.373
TUBO 6 0.002 0.506



Obtenga el factor de calibracin de cada tubo y el factor de calibracin promedio en
cada sistema de unidades de concentracin
a) El factor de calibracin es un trmino que relaciona la concentracin de una
sustancia con su absorbancia.
b) La frmula a emplear es la siguiente: [ St ] / DO
St
; donde [St] es la
concentracin del estndar y DO
St
la absorbancia del mismo
TUBO1: C
1
= 0.005 factor de calibracin: ----------
TUBO2: C
2
= 0.01 0.01/0.058 = 0.172 (eliminado por alejarse demasiado del
resto de valores)
TUBO3: C
3
= 0.015 0.015/0.118 = 0.127
TUBO4: C
4
= 0.025 0.025/0.221 = 0.113
TUBO5: C
5
= 0.04 0.04/0.373 = 0.107
TUBO6: C
6
= 0.05 0.05/0.506 = 0.09881
FACTOR DE CALIBRACION PROMEDIO:
0.127 + 0.113 + 0.107 + 0.099 = 0.0446 0.0446/4 = 0.1115
Discusin de resultados
Si bien es cierto, tericamente en los resultados de la lectura de la batera de tubos
ninguna de ellas tendra que haber salido negativa, pero obtuvimos un valor negativo
que tuvimos que eliminar junto con el valor de lectura que se alejaba demasiado de los
otras lecturas. Esto pudo haber sido por alguna falla al momento de pipetear la
solucin patrn o el volumen de agua

Conclusiones
Se demuestra la ley de Beer: existe una proporcionalidad entre la absorbancia de una
solucin coloreada y la concentracin de sta en un haz de luz monocromtica.
Se corrobora la ley de Lambert: existe una proporcionalidad entre el valor de las
absorbancias de las soluciones coloreadas y la distancia que recorre el haz de luz
monocromtica en ella.
Se puede determinar la concentracin de una solucin coloreada por 2 maneras:
mtodo de la curva de calibracin (mtodo grfico) y el mtodo del factor de
calibracin (mtodo analtico).

Experimento 4
Clculo de la concentracin de una muestra problema

Procedimiento y resultados
En la mesa de trabajo encontrar dos muestras de concentracin desconocida A y
B, una se puede leer directamente, pero la otra debe ser previamente diluida. Realice
la dilucin que estime conveniente (anote los volmenes), lleve a leer al
espectrofotmetro y encuentra la concentracin por el mtodo grfico y usando el
factor de calibracin y el factor de dilucin.
Coloque los resultados en la pizarra, compare y comente respecto a los resultados de
otras mesas.

Muestra A: 0.200 (obtenido directamente de la lectura al espectrofotmetro).

Muestra B: Se efectu una dilucin de 1/20 de la siguiente manera:

- 0.5mL de muestra B
- Agua c.s.p. 10mL
Se procedi a la lectura al espectrofotmetro obtenindose una absorbancia de 0.243.
Se presentan nuevamente los datos para hallar la concentracin segn el mtodo
grfico y segn el factor de calibracin.
TUBO 1 2 3 4 5 6
Concentracin(mg/dL) 0.005 0.010 0.015 0.025 0.040 0.050
absorbancia 0.000 0.058 0.118 0.221 0.373 0.506
Fc 0 0.172 0.127 0.113 0.107 0.099

Se hall el factor de calibracin promedio, considerando los valores resaltados:
Fc = 0.111 g/dL
Se hall la concentracin por el mtodo de factor de calibracin y factor de dilucin:
Abs x Fc x Fd = Concentracin MP
0.243 x 0.111 x 20 = 0.53946 g/dL = 539.46mg/dL
En la tabla se resaltan los valores tomados en cuenta para la realizacin de los
clculos. Se presentan los grficos (considerando todos los datos y el segundo,
considerando desde el tubo n3).



Se
procedi
a calcular la concentracin segn mtodo grafico intersectando el valor obtenido de
absorbancia en el grfico corregido.



La concentracin hallada se
multiplica por el factor de
dilucin.
0.024 x 20 = 0.480g/dL =
480mg/dL




Se presenta una tabla de resumen de los valores obtenidos por todas las mesas del
grupo de prctica:
g/dL Absorbancia mg/dL
MESA Fc Ampa Ampb db Mpa Mpb
1 0.110 0.191 0.287 1/11 21.00 347.20
2 0.115 0.202 0.345 1/14 23.20 555.00
3 0.107 0.190 0.133 1/20 20.33 284.60
4 0.113 0.200 0.431 1/14 22.60 681.80
5 0.111 0.200 0.243 1/20 22.20 539.40
6 0.090 0.200 0.389 1/14 18.00 490.00
7 0.128 0.195 0.278 1/18 24.00 640.00


Discusin
Los resultados obtenidos por el mtodo grfico y del factor de calibracin no fueron
los mismos, como se esperan de ser tericamente, pero si fueron similares. Los
valores fueron de 480mg/dL Y 539.4mg/dL respectivamente.
La seleccin de los valores a usar para el calcula de las dos modalidades se evalu
segn la diferencia en el valor del Fc, que indica la pendiente. De no ser por el
requisito de que la lnea de regresin inicie en el origen de coordenadas en lnea recta
solo podramos haber eliminado el valor del tubo n 6, asumiendo que el grfico en
valores bajos no es una recta.
Los valores de absorbancia para la muestra A fueron uniformes entre todas las
mesas dado que su proceso era mnimo. Las variaciones podran ser atribuidas a que
la cubeta de lectura no se enjuago o limpi externamente de modo adecuado entre
lecturas. Las concentraciones de esta muestra dependieron de los factores de
calibracin que mostraron ligeras variaciones.
Las diluciones usadas variaron un poco pero la mayora uso un factor entre 10 y 20.
Las absorbancia y concentraciones variaron considerablemente y no se encontr un
valor representativo entre las 7 mesas del grupo de prctica. La causa ms probable
sera la falta de experiencia de los usuarios en el trabajo homogneo de las
mediciones.

Conclusiones
Esta primera experiencia evidencia las limitaciones de trabajar con el mtodo grfico,
que brinda tan solo una aproximacin y del trabajo con material de laboratorio por
usuarios con escaso entrenamiento.
Al tratarse de la primera vez que el grupo trabaja con este tipo de material para hacer
mediciones precisas de volmenes es comprensible la falta de coherencia. Conforme
avancen las prcticas, las experiencias previas ayudaran al establecimiento de un
modo de trabajo ms ordenado y sistemtico, que minimice los errores y nos lleve a un
resultado ms preciso.








CUESTIONARIO

1. Una sustancia absorbe 530nm el 30% de la luz incidente, cual es su
absorbancia.

Solucin:

Si absorbe el 30% Transmite el 70%
De la relacin entre absorbancia y transmitancia:



Despejamos:
Y adems



Empleando los datos:


5




2. Transforme las absorbancias de la prctica a porcentaje de transmitacia
y realice la grfica de la curva de calibracin

Solucin:
Abs tubo2 = 0.58
Abs tubo3 = 0.118
Abs tubo4 = 0.221
Abs tubo5 = 0.373
Abs tubo6 = 0.506

De la ecuacin:



%





Hallando la transmitancia para cada concentracin

26.3%







Graficando y tabulando los resultados:















3. Si una sustancia tiene una DO de 0.325 en una cubeta de 1 cm. Cul ser su
absorbancia cuando la cubeta sea de 0.4 cm. de paso de la luz?
Solucin:
Como la concentracin de la sustancia no vara emplearemos la ley de Lambert:
A
1
/ l
1
= A
2
/ l
2
, reemplazando tenemos
0.325 / 1 = A
2
/ 0.4 A
2
= 1.3

CONCENTRACION
[ ] g/dL
TRASMITANCIA
(%)
0.01
26.3%
0.015
76.2%
0.025
60.11%
0.04
42.36%
0.05
31.18%
4. Una sustancia tiene un coeficiente de extincin molar de 780 cm
-1
. mol
-1
. L,
Cul ser su concentracin sabiendo que una muestra de la misma sustancia
tuvo una DO de 0.720 en una cubeta de 2 cm. de paso de luz?
Solucin:
Como nos dan de dato el coeficiente de extincin molar y nos piden la concentracin,
entonces emplearemos laley de Lambert y Beer
DO = l. C. e
Reemplazando tenemos
0.720 = 2. C. 780 C = 0.0004615

5. Una muestra fue diluida colocando 0.5mL de ella en un tubo y se aadi 7.5mL
de agua destilada, la DO obtenida fue 0.572 y el estndar de 25mg/L tubo una DO
de 0.386, calcular la concentracin de la MP.
Solucin:
0.5ml muestra + 7.5mL agua destilada
Dilucin = 0.5mL/0.5mL +7.5m = 1/16
Fd = 16

Estandar: 25mg/L ; DO= 0.386
Fc = 25mg/L/0.386
Fc = 64.767mg/L
Concentracin MP = AbsMP x Fd x Fc
Concentracin MP = 0.572 x 16 x 64.767mg/L
Concentracin MP = 592,7mg/L

6. Una sustancia tiene 180mol/g, una solucin de dicha sustancia a concentracin
de 50ug/ml en una cubeta de 0.5cm tiene una transmitancia del 65%, calcular el
coeficiente de extincin molar de dicha sustancia.
Solucin:

MP = 180mol/g ; Concentracin MP = 50ug/ml
Longitud = 0.5cm ; %T = 65
Concentracin en moles = 50mg/L x 180mol/g = 9mol/L
A = l.c.e
2 log%T = l.c.e
2 log65 = 0.5cm x 9mol/L x e
e = 0.04156 L/mol.cm

7. A 3ml de una muestra de cromato de potasio, se le aande 5ml de agua;
de la mezcla se toman 0,5mL y se agrega agua hasta 3mL, se lee al
espectrofmetro y se obtiene una lectura de 0,285 DO, usando los
resultados de su prctica, calcula la concentracin por mtodo grfico y
por clculo.
Solucin:





8mL de mezcla 0.5mL de mezcla extrada 3mL de
mezcla

Mtodo por clculo:

[MP] = 0.285 x 0.115 x
[MP] = 0.524
Mtodo por grfico
3mL de
K
2
CrO
4

5mL de H
2
O
0.1875mL de
K
2
CrO
4

0.3125mL de
H
2
O
0.1875mL de
K
2
CrO
4

2.0125mL de
H
2
O


y = 9.599x
0.285 = 9.599 (x)
[MP] = X = 0.0297