Modulo Bioquimica 1 2013 PDF

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA UNAD
ESCUELA DE CIENCIAS BASICAS TECNOLOGA E INGENIERIA

CONTENIDO DIDCTICO DEL CURSO: 201103 BIOQUIMICA.

1

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A
DISTANCIA

ESCUELA DE CIENCIAS BASICAS TECNOLOGA E
INGENIERIA

201103 BIOQUIMICA

GOLDA MEYER TORRES VARGAS
(Director Nacional)

ALBERTO GARCIA JEREZ
Acreditador

DUITAMA

ENERO DE 2013


2

ASPECTOS DE PROPIEDAD INTELECTUAL Y VERSIONAMIENTO

El presente mdulo fue diseado en el ao 1992 por los docentes Gerardo Prez
y Yolanda Navarro para la Universidad Nacional Abierta y a Distancia publicado
por la Divisin de Produccin de materiales de la UNISUR.

El presente mdulo ha tenido una actualizacin, desarrollada por el Ingeniero
Rubn Daro Munera en el 2007 quien ha sido tutor de la UNAD en el CEAD
PALMIRA, y que se desempeaba hasta el primer periodo de 2009 como el
director nacional del curso.

Para el segundo periodo de 2009, el modulo tiene su segunda actualizacin por
Golda Meyer Torres Vargas, quien se ha desempeado como tutora de la ECBTI
del Cead de Duitama desde el 2006 y actualmente es la directora nacional del
curos en mencin.

Para el 2010, nuevamente se actualiza el mdulo pero permanecen intactos
algunos temas de la unidad 1,2 y3 cuyos autores son docentes Gerardo Prez y
Yolanda Navarro y sobre estos temas los estudiantes pueden encontrar la
complementacin y actualizacin a cargo de Golda Meyer Torres Varga.

En este mismo periodo, el Bilogo Alberto Garca Jerez, tutor del Cead de
Bucaramanga, apoy el proceso de revisin de estilo del mdulo y dio aportes
disciplinares, didcticos y pedaggicos en el proceso de acreditacin de material
didctico desarrollado en el mes de enero 2010 y se mantiene la vigencia para el
primer periodo de 2011.

En el segundo perodo del 2011, se presenta actualizaciones correspondientes a
las actividades evaluativas y formativas que deben ir al final del captulo
ejercicios, lecturas complementarias por programas y al final de la unidad
autoevaluaciones. Estas actualizaciones mantienen vigencia para los periodos
acadmicos del 2012 y 2013-1.


3

TABLA DE CONTENIDO
Pg.
Introduccin 9

Unidad 1: Biomolculas 11
introduccin 11
Justificacin 12
Objetivos 13
Contenido de la unidad 14
Captulo 1. Aminocidos 15
Leccin 1: Estructura general y clasificacin 15
Leccin 2: Aminocidos no polares o Hidrofbicos y aminocidos polares no cargados 17
Leccin 3: Aminocidos cidos y bsicos 20
Leccin 4: Propiedades acido bsicas 22
Leccin 5: Pruebas cualitativas y cuantitativas para determinar aminocidos y protenas en
laboratorio.
29
Ejercicios del captulo 31
Captulo 2: pptidos y protenas 32
Leccin 6: Pptidos 32
Leccin 7: Generalidades del enlace peptdico y niveles de estructuracin 38
Leccin 8: Estructura primaria y Secundaria 40
Leccin 9: Estructura terciaria y cuaternaria 48
Leccin 10: Clasificacin y Propiedades Fisicoqumicas 52
Captulo 3: Enzimas 57
Leccin 11: Caractersticas de la accin enzimtica 57
Leccin 12: Cintica enzimtica 61
Leccin 13: Factores que influencian la actividad enzimtica 67
Leccin 14: Inhibicin Enzimtica 69
Leccin 15: Sitios activos de algunas enzimas 75
Lecturas complementarias 80
Autoevaluacin unidad 1 83
Lecturas recomendadas 86
Bibliografa usada en la actualizacin de la unidad 1 86

Unidad didctica 2: cidos nucleicos y bioenergtica 87
Introduccin 87
Justificacin 88
Objetivos 89
Captulo 4: estructura de bases, nuclesidos y nucletidos 91
Leccin 16: Componentes de los cidos nucleicos 91

4

Leccin 17: Estructura de bases 92
Leccin 18: Nucletidos 94
Leccin 19: Nucletidos 96
Leccin 20: Otros nucletidos de inters bioqumico 99
Ejercicios del captulo
Captulo 5: cidos nucleicos 102
Leccin 21: Generalidades 102
Leccin 22: Estructura del ADN 103
Leccin 23: Complejidad y estructura supramacromolecular del DNA en el genoma 108
Leccin 24: RNA 110
Leccin 25: Estructura del RNA 110
Captulo 6: introduccin al metabolismo y bioenergtica 115
Leccin 26: Aspectos generales del metabolismo 115
Leccin 27: Bioenergtica 117
Leccin 28: Energa libre de hidrlisis 122
Leccin 29: Potencial de transferencia de grupos fosfato 122
Leccin 30: Importancia del ATP 124
Unidad didctica 3: metabolismo: catabolismo y biosntesis de Biomolculas 133
Introduccin 133
Justificacin 134
Objetivos 135
Captulo 7: metabolismo de glcidos 138
Leccin 31: Catabolismo de carbohidratos 138
Leccin 32: Fosforilacin oxidativa y la va del glicerol fosfato 152
Leccin 33: Balance global de la oxidacin de glucosa y va de las pentosas fosfato 162
Leccin 34: Generalidades de la biosntesis de carbohidratos 167
Leccin 35: Gluconeognesis 169
Leccin 36: Fotosntesis y biosntesis de polisacridos 174
Captulo 8: metabolismo de lpidos 184
Leccin 37: Catabolismo de lpidos 184
Leccin 38: Balance de la degradacin de cidos grasos 195
Leccin 39: Catabolismo de fosfolpidos 197
Leccin 40: Catabolismo de colesterol 199
Leccin 41: Biosntesis de lpidos 201
Captulo 9: metabolismo de aminocidos 213

5

Leccin 42: Catabolismo 213
Leccin 43: Catabolismo de los grupos -NH
2
y -COO
-
214
Leccin 44: Catabolismo del esqueleto carbonado 217
Leccin 45: Eliminacin del NH
4
218
Leccin 46: Biosntesis 223
Informacin de retorno ejercicios por captulos 236
Bibliografa usada en la elaboracin del modulo edicin 1 238

LISTA DE TABLAS

Tabla 1: aminocidos esenciales y no esenciales 16
Tabla 2: Aminocidos hidrofobicos 17
Tabla 3: Aminocidos polares no cargados 19
Tabla 4: Aminocidos cidos 20
Tabla 5: Aminocidos bsicos 21
Tabla 6: Estructuras de la Ala en funcin del pH 25
Tabla 7: Relacin entre el pH y la estructura del Glu 27
Tabla 8 :Propiedades fsicas de los aminocidos 29
Tabla 9: Accin de algunas enzimas sobre la amilopectina. 59
Tabla 10: Clases principales de enzimas. 60
Tabla 11 : Subclases de hidrolasas 61
Tabla 12: Sub-subclases de las proteasas 61
Tabla 13: ribonuclesidos y desoxirribonulceosidos presentes en los cidos nucleicos 96
Tabla 14: nucletidos que se encuentran en los cidos nucleicos 98
Tabla 15: Diferencias entre DNA y RNA 103
Tabla 16: Valores de G0 de hidrlisis y de Potencial de Transferencia de Grupos PTG para
algunos metabolitos fosforados
129
Tabla 17: Potenciales de reduccin estndar de algunos metabolitos y transportadores de la
cadena de electrones
153
Tabla 18: Algunas propiedades fisicoqumicas de los citocromos de la fosforilacin oxidativa 154
Tabla 19: Organismos fotosintticos 174
Tabla 20 : Precursores usados en la biosntesis de polisacridos 182
Tabla 21: Clasificacin de los AA esenciales o no, en humanos 224


6

LISTA DE FIGURAS

Figura 1: aminocido en forma de in Zwitterion 16
Figura 2: estructuras segn el pH de los aminocidos 23
Figura 3: Curva de titulacin de un aminocido con grupo R no cargado 24
Figura 4: Curva de titulacin del Glu 26
Figura 5: Representacin coplanar del enlace peptdico 33
Figura 6: Formacin del enlace peptdico. 38
Figura 7. ngulos de torsin del enlace peptdico 39
Figura 8: Secuencia de AA de la insulina bovina 41
Figura 9: Esquema simplificado de la insulina 42
Figura 10 : Puentes de hidrgeno en un polipptido con estructura extendida 43
Figura11: Estructura en hoja plegada 44
Figura 12: Empaquetamiento de grupos R en la fibroina 45
Figura 13: Estructura de -hlice 46
Figura 14: Tipos de enlaces que mantienen la estructura terciaria de las protenas 48
Figura 15: Estructura del grupo hemo 50
Figura16: Estructura cuaternaria de la hemoglobina 51
Figura 17 : Solubilidad de las protenas en funcin de la fuerza inica 54
Figura 18: Velocidad de transformacin del sustrato en funcin de S 62
Figura 19: Efecto de la concentracin de sustrato sobre la velocidad de una reaccin
Enzimtica.
64
Figura 20: Representacin grfica segn Lineweaver-Burk de v vs [S] 65
Figura 21: Ejemplos de actividad de algunas enzimas en funcin del pH 68
Figura 22: Catlisis enzimtica inhibida competitivamente 70
Figura 23: Cintica de una enzima inhibida no competitivamente 72
Figura 24: Representacin segn Lineweaver-Burk de la inhibicin no competitiva 73
Figura 25: Representacin de la inhibicin Incompetitiva 74
Figura 26: Sistema relay Ser, His, Asp en quimotripsina 76
Figura 27: Sitio activo de la carboxipeptidasa A 77
Figura 28: Sitio activo de la lisozima 78
Figura 29: Formacin de monmeros de los cidos nucleicos 92
Figura 30: Pentosas presentes en los cidos nucleicos 94
Figura 31: Enlace N-glicosdico de los nuclesidos 95
Figura 32: estructura del AMP 96
Figura 33: estructuras de difosfatos de nuclesidos 99
Figura 34: Estructura fundamental de un segmento de una cadena de DNA 105
Figura 35: Asociacin de las bases complementarias en el DNA 107
Figura 36: Estructura en doble hlice del DNA 108
Figura 37: Estructura fundamental de un segmento de RNA 111
Figura 38: Estructura general en hoja de trbol de t-RNA 112
Figura 39: Estructura terciaria del t-RNA para Phe 113
Figura 40 : Ciclo global del C y O en la biosfera 117
Figura 41 : Ciclo global del N en la bisfera 118

7

Figura 42: Flujo de grupos y situacin intermedia del ATP

125
Figura 42: Carbohidratos proveedores de las hexosas que nutren la gliclisis 141
Figura 43: Esquema de la va glicoltica 142
Figura 44: Papel del NAD en las reacciones de xido-reduccin 144
Figura 45: Oxidacin del piruvato en acetato por accin del complejo de la piruvato
deshidrogenada
147
Figura 46: Esquema del ciclo de Krebs 149
Figura 47: Estructura y modo de accin de la Flavinadenin dinucletido (FAD) 150
Figura 48: Fosforilacin oxidativa en Mitocondrias 158
Figura 49: Fosforilacin oxidativa en procariotes 159
Figura 50: Esquema de la va del glicerol-fosfato 162
Figura 51: Va de las pentosas fosfato 165
Figura 52: Secuencias de las reacciones de la gluconeognesis 170
Figura 53: Esquema del ciclo del glioxilato 173
Figura 54: Esquema de un cloroplasto 175
Figura 55: Estructura de clorofilas y carotenos 176
Figura 56: Etapa luminosa de la fotosntesis 178
Figura 57: Esquema de la etapa oscura de la fotosntesis 180
Figura 58: Esquema de la -oxidacin de cidos grasos saturados 190
Figura 59: Esquema de -oxidacin de cidos grasos ramificados 194
Figura 60: Productos resultantes de la degradacin de la Lecitina por fosfolipasas 198
Figura 61 : Estructura del colesterol 199
Figura 62 : Principales productos del catabolismo del colesterol 200
Figura 63: Transporte de Acetil-CoA mitocondrial al citoplasma 202
Figura 64: Esquema de las reacciones de biosntesis de cidos grasos 201
Figura 65: Esquema de la biosntesis de triglicridos y fosfoglicridos 209
Figura 66: Principales intermediarios en la biosntesis del colesterol 211
Figura 67: Convergencia de los esqueletos carbonados de los AA al ciclo de Krebs. 217
Figura 68 Ciclo de la Urea 222
Figura 69: Biosntesis de Thr y Met 225

P

8

ABREVIATURAS

Glc Glucosa
Frc Fructosa
Gal Galactosa
(Glc)
n
Glucgeno con n unidades de glucosa
Glc-1-P Glucosa1-1fosfato
Glc-6-P Glucosa 6-fosfato
Frc-6-P Furctosa-6-fosfato
Frc-1,6-P Fructosa 1,6-Fosfato
Frc-1,6-DIP Fructosa 1,6-difosfato
3-PDHA 3-fosfohidroxiacetona ( dihidroxiacetona-3-fosfato).
3-P-Gal 3-fosfo-gliceraldehido ( gliceraldehido-3-fosfato)
1,3-di-P-Gato 1,3-difosfoglicerato (glicerato-1,3-difosfato).
3-P-Gato 3-fosfoglicerato ( glicerato-3-3fosfato).
2-P-Gato 2-fosfoglicerato ( glicerato- 2-3fosfato).
PEP Fosfoenolpiruvato
PTT Pirofosfato de tiamina
NAD Nicotinamida-adenin-dinucletido
FAD Flavin adenin- dinucletido
FMN Flavinmononucletido
NADP Fosfato de nicotinamida adenin dinucletido
6-P-gluconato 6-fosfogluconato (o glucnico-6-fosfato).
Ribulosa-5-P Ribulosa-5-fosfato
Xil-5-P Cilulosa-5-fosfato
Rib-5-P Ribosa-5-fosfato


9

INTRODUCCIN

La bioqumica es una ciencia que comenz a emerger desde comienzos del siglo
pasado. Es frecuentemente descrita como el estudio de la qumica de la vida e
incluye el estudio de todas las formas de vida y utiliza los conceptos bsicos
derivados de la biologa, qumica, fsica y matemticas.

Con este mdulo se pretende que el estudiante se prepare en los conocimientos
bsicos acerca de las Biomolculas y su metabolismo a travs de la comprensin
de las interacciones entre ellas, reconozca los aminocidos como unidades
estructurales de las protenas, identifique las bases conceptuales bsicas a travs
del estudio sistemtico de nociones, conceptos y problemticas que configuran el
campo general de la bioqumica y que fortalezca los conocimientos adquiridos a
travs de las diferentes prcticas de laboratorio que se van a realizar.

Se espera que despus de estudiar este mdulo el estudiante analice
adecuadamente las vas metablicas ms importantes con referencia a su
importancia relativa en el conjunto del metabolismo y las correlaciona con otras
vas; distingue las transformaciones sufridas por los nutrientes como resultado de
la accin de agentes fsicos, qumicos o biolgicos.

En vista de la importancia de este curso acadmico y teniendo en cuenta que
algunos estudiantes que ingresan a la Universidad Nacional Abierta y a Distancia,
UNAD, son personas que generalmente han dejado pasar un tiempo despus que
terminaron sus estudios secundarios para luego ingresar a la universidad, se ha
diseado un texto con la didctica necesaria para que sus contenidos sean
aprendidos teniendo en cuenta los fundamentos bsicos del aprendizaje
autnomo.

Las unidades didcticas que conforman el curso son: 1) Biomolculas, 2) cidos
nucleicos y bioenergtica y 3) metabolismo: catabolismo y biosntesis de
Biomolculas. Al finalizar cada captulo el estudiante encuentra ejercicios de
aplicacin y al final de la unidad lecturas complementarias y la correspondiente
autoevaluacin.

El trabajo acadmico consta de dos componentes a saber: el estudio
Independiente, el cual puede ser realizado en trabajos a nivel personal y el trabajo
en pequeos grupos colaborativos que son los espacios donde se inicia el
verdadero autoaprendizaje; el segundo componente es el acompaamiento
tutorial, donde se desarrollan tutoras a nivel individual, en pequeos grupos
colaborativos o a nivel de grupo de curso.

La Bioqumica es, comparativamente con otras reas del conocimiento, una
disciplina cientfica joven, que integra mltiples conceptos de la Fsica, la Qumica

10

y la Biologa en un cuerpo coherente de generalizaciones que permiten
comprender cmo operan los organismos vivientes. Sus puntos de contacto con
otras reas son mltiples y no siempre es fcil establecer las fronteras respectivas.

La comprensin de las propiedades estructurales y funcionales de las principales
molculas que intervienen como constituyentes de los alimentos y del papel que
ellas juegan en el metabolismo, nos proporciona criterios para juzgar el valor
nutritivo de un alimento de uso comn o de una fuente nutricional potencialmente
utilizable.

Desde el punto de vista tecnolgico, los conceptos bioqumicos son claves para
una correcta interpretacin y una prediccin acertada de las trasformaciones
sufridas por los nutrientes como resultado de agentes fsicos, qumicos y
biolgicos. Estos puntos justifican de por s la necesidad de disponer de un bagaje
bioqumico mnimo.

Para facilitar la comprensin e ir profundizando gradualmente, se ha adoptado la
estrategia de discutir en los captulos iniciales las caractersticas estructurales y el
comportamiento de las macromolculas biolgicas.

Para finalizar esta introduccin quisiera dirigir un comentario a los estudiantes que
usarn este mdulo. La complejidad aparente de la Bioqumica se reduce
considerablemente cuando en su estudio se comparan sistemticamente las vas
biosintticas con las degradativas, se aplican los principios generales del
metabolismo y se tienen en mente los puntos ya mencionados en el enfoque
global. Es mejor hacer nfasis en las transformaciones generales y no en la
secuencia detallada de reacciones; poco a poco sta se ir incorporando a sus
conocimientos. Buen trabajo y mucho nimo!


11

UNIDAD 1: BIOMOLCULAS

INTRODUCCION

En esta unidad, se encuentran los conceptos bsicos que un estudiante de
Bioqumica debe manejar, como son las generalidades, clasificacin y estructura
de aminocidos, protenas y enzimas.

En esta unidad no se consideran las Biomolculas carbohidratos y lpidos, ya que
el espacio para estos conceptos es la unidad 3.

Es de vital importancia para los estudiantes de la formacin profesional y tcnica
de los programas de ingeniera de alimentos, tecnologa de alimentos , qumica y
regentes de farmacia, el manejo y comprensin de los temas que en esta unidad
se presentan; los nexos de la bioqumica con estos campos disciplinares se
derivan en que la bioqumica como parte de las ciencias biolgicas maneja los
conceptos tericos derivados de investigaciones en donde se explican el
funcionamiento y mecanismos qumicos a nivel celular para el mantenimiento de
los procesos vitales de organismo de origen vegetal y animal. Conocer las
generalidades, clasificacin y estructura de aminocidos, protenas y enzimas,
conlleva a los estudiantes de los programas mencionados, a comprender el cmo
los organismos utilizan estas Biomolculas para sus procesos de desarrollo,
nutricin y reproduccin, para ello debe conocer que las protenas estn
constituidas por aminocidos y que las protenas intervienen en un nmero
importante de las reacciones a nivel celular y que este tipo de mecanismo qumico
se realizan a grandes velocidades gracias a los catalizadores que se encuentran
en los sistemas biolgicos como son las enzimas.

Los estudiantes deben relacionar los conceptos tericos con la aplicacin en
contexto real de sus profesiones. Para el rea de alimentos, ests Biomolculas
marcan la pauta en trminos de alimentos funcionales con calidad protena y
calidad tcnica. Para los regentes de farmacia el saber sobre Biomolculas les
puede facilitar el manejo de medicamento y el mecanismo de accin de los
principios activos que contiene. Para los Qumicos, les resulta indispensable
manejar la bioqumica de la vida para disear tcnicas de anlisis y aprta al
estudio de las mismas.

El estudio detallado de la unidad puede conducir a los estudiantes a plantear
procesos y proyectos que conduzcan a fomentar la cultura investigativa.


12

JUSTIFICACION

El desarrollo de esta unidad se hace necesario en el curso de bioqumica porque
contiene las temticas bsicas para los estudiantes que toman cursos de las
ciencias bsicas referentes a la compresin de contextos de las ciencias
biolgicas.

Es preciso el diseo de esta unidad porque se presentan los conceptos sobre
aminocidos, protenas y enzimas; temticas que sern de gran importancia en el
perfil profesional de los programas de ingeniera de alimentos, tecnologa de
alimentos, qumica y regentes de farmacia.

Su estructuracin permite al estudiante comprender los conceptos sobre las
generalidades, clasificacin y estructura de aminocidos, protenas y enzimas;
temas que en primera instancia no son fciles de asimilar y se necesitan de la
activacin metacgnitiva de presaberes de cursos como qumica general, qumica
orgnica. Biologa y microbiologa.


13

OBEJTIVOS

CAPITULO 1: AMINOCIDOS

Diferenciar los tipos de aminocidos existentes, tomando como base la
naturaleza de sus cadenas laterales.
Establecer las relaciones existentes entre las curvas de titulacin de los
aminocidos y sus valores de pKa y pl.

CAPITULO 2: PPTIDOS Y PROTEINAS

Describir las caractersticas del enlace peptdico.
Reconocer los tipos de rupturas que pueden sufrir los pptidos.
Analizar el comportamiento anftero de los pptidos en trminos de su
composicin en aminocidos.
Identificar las principales actividades biolgicas de los pptidos.
Reconocer la correlacin entre la estructura y la funcin de los pptidos.
Explicar los diferentes niveles de organizacin estructural de las protenas.
Comparar las caractersticas de cada uno de los tipos de estructura
secundaria.
Identificar las interacciones que mantienen la estructura terciaria de una
protena.
Explicar las relaciones existentes entre la estructura y la funcin de las
protenas usadas como modelo.

CAPITULO 3: ENZIMAS

Identificar las caractersticas de la accin enzimtica.
Ilustrar la clasificacin de las enzimas basada en las clases de reacciones
catalizadas.
Analizar el comportamiento cintico de las enzimas.
Interpretar los cambios de actividad enzimtica debidas a la influencia del pH,
temperatura, efectores.
Establecer las diferencias entre los distintos tipos de inhibicin.
Identificar los sitios activos de algunas de las principales enzimas.

14

CONTENIDO DE LA UNIDAD

CAPITULO 1: AMINOCIDOS
CAPITULO 2: PPTIDOS Y PROTEINAS
CAPITULO 3: ENZIMAS


15

CAPITULO 1: Aminocidos

En este captulo el estudiante puede encontrar en forma clara y concreta la
estructura general de las unidades formadoras de las protenas, la clasificacin de
acuerdo a las caractersticas de su cadena lateral en relacin a su polaridad, las
pruebas que pueden aplicarse a nivel de laboratorio para su identificacin.

Los conceptos generales se refuerzan con la autoevaluacin, ejercicios de prctica
e informacin de inters que estn en recuadros donde se invita al estudiante a
generar conocimiento y consultar enlaces virtuales.

Leccin 1: Estructura general y clasificacin

1.1 estructura General

De acuerdo a Ramrez, Ruth (2009), los aminocidos son las unidades
estructurales bsicas de las protenas. Un aminocido consta de un grupo amino,
un grupo carboxlico, un tomo de hidrogeno y un grupo distinto R, enlazado al
tomo de carbono que se llama el carbono (alfa), el grupo R se refiere a la
cadena lateral que sern la identificacin del aminocido en la cadena proteica.
Veinte tipos de cadenas laterales de aminocidos que varan en tamao, forma,
carga, capacidad de enlace de hidrogeno y reactividad qumica, se encuentran
comnmente en las protenas
1
.

Los aminocidos se encuentran unidos en la molcula de la protena por enlaces
peptdicos (- CO-NH-) que se forman por condensacin de - COOH de un
aminocido con el -NH
2
de otro. Cuando varios aminocidos se unen para dar
un polmetro de bajo peso molecular ste se conoce como polipptido, mientras
que el trmino protena se usan generalmente para polmeros de peso molecular
grande.

Las propiedades de las protenas estn en funcin de su composicin y
conformacin de los aminocidos que las componen de ah que se deba tener
especial atencin en las propiedades qumicas y fsicas de tales compuestos. Se
debe recordar que los aminocidos en disolucin (propiedades cido-bsicas), a
pH neutro, son predominante iones dipolares (zwitteriones). En la forma dipolar
de un aminocido el grupo amino esta protonado y el grupo carboxilo esta
disociado:

1
Ramrez, R.- segunda edicin (2009). Qumica de alimentos. Bogot: Universidad Nacional Abierta y a
Distancia.


16

Figura 1: aminocido en forma de in Zwitterion.
Fuente: http://es.wikipedia.org/wiki/aminocido

1.2: Clasificacin

Desde el punto de vista fisiolgico- alimentario, es importante saber si
determinados aminocidos son esenciales o no para el hombre y los animales.

Dentro del grupo de aminocidos comnmente encontrados en los alimentos son
clasificados en dos grupos:

TABLA 1: aminocidos esenciales y no esenciales
Esenciales No esenciales
Treonina Serina
Metionina Alanina
Leucina Glicina
Valina cido glutmico
Lisina cido asprtico
Arginina Prolina
Fenilalanina Cistena
Histidina Tirosina
Isoleucina
Triptfano
Fuente: Plumer,D (1981). Bioqumica prctica. Londres: McGraw Hill.

Gerardo Prez, Navarro Yolanda presenta la clasificacin de los aminocidos de acuerdo
a la relacin de grupos COO-/NH3+, o considerando criterios que tienen que ver con su
polaridad, presencia o no de cargas positivas y negativas; todo a lo cual este
comportamiento depende de la naturaleza de la cadena lateral o grupo (R)
2

2
Prez, Gerardo. Navarro, Yolanda. (2005). Bioqumica. Bogot: Universidad Nacional Abierta y a Distancia.

CONSULTA EL SIGUIENTE ENLACE VIRTUAL PARA PROFUNDIZAR EN EL TEMA CONSULTA EL SIGUIENTE ENLACE VIRTUAL PARA PROFUNDIZAR EN EL TEMA CONSULTA EL SIGUIENTE ENLACE VIRTUAL PARA PROFUNDIZAR EN EL TEMA CONSULTA EL SIGUIENTE ENLACE VIRTUAL PARA PROFUNDIZAR EN EL TEMA: : : :
http://biomodel.uah.es/model1j/prot/inicio.htm http://biomodel.uah.es/model1j/prot/inicio.htm http://biomodel.uah.es/model1j/prot/inicio.htm http://biomodel.uah.es/model1j/prot/inicio.htm


17

La clasificacin de los aminocidos protenicos se puede hacer teniendo en cuenta
la relacin de grupos COO
-
/NH
3
+
, o considerando criterios que tienen que ver con
su polaridad, presencia o no de cargas positivas o negativas; todo lo cual, en
ltimo trmino, depende de la naturaleza de su cadena lateral (o grupo R). Estos
criterios sern continuamente utilizados en las siguientes unidades y por ello es
importante identificar los diferentes aminocidos de acuerdo con la siguiente
clasificacin (ver lecciones 2 y 3):

Leccin 2: Aminocidos no polares o hidrofobicos y aminocidos polares
no cargados

2.1 Aminocidos no polares o hidrofobicos

En estos aminocidos la cadena lateral, aliftica o aromtica, no tiene grupos que
interacten fcilmente con solventes acuosos y de ah el nombre de hidrofobicos.

A este grupo pertenecen los siguientes aminocidos:

Tabla 2: Aminocidos hidrofobicos
Aminocido Abreviatura Aminocido Abreviatura
Alanina
Valina
Leucina
Isoleucina
Ala
Val
Leu
Ile
Prolina
Fenilanina
Triptfano
Metionina
Pro
Phe
Trp
Met
Fuente: Prez, G. Navarro Y. (1992). Bioqumica. Santa f de Bogot.: Unisur.

Nombre Estructura

Alanina

Valina


18

Leucina

Isoleucina

Cisteina

Prolina
Fenilalanina

Triptfano


19

Metionina

Fuente: Ramrez, R.- segunda edicin (2009). Qumica de alimentos. Bogot: Universidad Nacional Abierta y a
Distancia.

2.2 Aminocidos polares no cargados

A diferencia de los anteriores, estos AA se solubilizan con mayor facilidad en
solventes acuosos y su grupo R no posee cargas positivas o negativas a pH
fisiolgico, es decir, pH cercanos a 6,5 y 7,0. Aqu incluimos los siguientes AA:

Tabla 3: Aminocidos polares no cargados

Aminocido Abreviatura Aminocido Abreviatura
Glicina
Serina
Treonina
Cisteina
Cistina
Gly
Ser
Thr
CySH
CySSCy
Tirosina
Asparagina
Glutamina
Hidroxi prolina
Tyr
Asn
Gln
OH - Pro

Nombre Estructura
Glicina

Serina


20

Distancia.

Leccin 3: Aminocidos cidos y bsicos

3.1 Aminocidos cidos

Se caracterizan porque su grupo R -(COOH) est cargado negativamente a pH
fisiolgico. Los aminocidos con sus respectivos pK
a
son:

Tabla 4: Aminocidos cidos
Aminocido Abreviatura pK
a

Asprtico
Glutmico
Asp
Glu
3,9
4,2
Fuente: Prez, G. Navarro Y. (1992). Bioqumica. Santa fe de Bogot.: Unisur.

Treonina

Tirosina

Asparagina

Glutamina


21

Distancia.

En consecuencia, estos aminocidos pierden su carga nicamente a pH bastante
cido y en su forma libre o como constituyentes de las protenas estn cargados
negativamente.

3.2 Aminocidos bsicos

En ellos, el grupo R (generalmente NH) est cargado positivamente a pH
fisiolgico. A este grupo pertenece:

Tabla 5: Aminocidos bsicos

Aminocido Abreviatura pK
a

Histidina
Lisina
Arginina
His
Lys
Arg
6,0
10,5
12,5

22

Distancia.

Leccin 4: Propiedades acido bsicas

Biolgicamente la actitud de los aminocidos a la ionizacin es muy importante y
facilita el anlisis cuantitativo. Algunas de las propiedades de los aminocidos
(punto de fusin, solubilidad en agua, momentos dipolares) se debe a la
distribucin dispar de sus cargas elctricas en solucin acuosa. As todos los
aminocidos en solucin acuosa a un pH prximo a la neutralidad estn bajo la
forma de iones Zwitteriones.

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23

Fuente: http://es.wikipedia.org/wiki/aminocido

Cuando un aminocido esta disuelto en agua, se puede comportar segn el pH en
como cido o como base:

Los aminocidos a pH bajo (cido) se encuentran mayoritariamente en su forma
catinica (con carga positiva), y a pH alto (bsico) se encuentran en su forma
anicnica (con carga negativa). Sin embargo, existe un pH especfico para cada
aminocido, donde la carga positiva y la carga negativa son de la misma magnitud
y el conjunto de la molcula es elctricamente neutro. En este estado se dice que
el aminocido se encuentra en su forma de ion dipolar o zwitterin.

En otros trminos, estas molculas son anfteras, Cuando el aminocido esta en
forma de Zwiteriones (el grupo carboxilo ionizado y el grupo amino protonado), la
carga elctrica global es igual a cero, se dice entonces que al pH donde esta
carga sea igual cero se designa como el punto isoelctrico (pI).

Figura 2: estructuras segn el pH de los aminocidos. Tomado de:
http://es.wikipedia.org/wiki/Amino%C3%A1cido

Para Gerardo Prez y Navarro Yolanda, el comportamiento anftero de cada uno
de los aminocidos y sus valores de punto isoelctrico (pl) son una consecuencia
de su estructura particular. Vamos a complementar estos conceptos con el anlisis
de las curvas de titulacin tpicas que se obtienen al considerar la disociacin
sucesiva de los grupos.


24

Las curvas de titulacin para aminocidos no polares o polares no cargados, se
pueden ver en la figura 3.

Figura 3: Curva de titulacin de un aminocido con grupo R no cargado
Prez, G. Navarro Y. (1992). Bioqumica. Santa fe de Bogot.: Unisur.

El AA usado como ejemplo es la Ala, donde los nicos grupos que en un momento
dado pueden tener carga, dependiendo del pH de la solucin, son el -COOH y el
-NH2. La siguiente tabla ilustra la situacin que se presenta en cada punto
identificado:

Punto Estructura Corresponde a
1

2

pH << pK
1

Pk
1
, (-COOH)


25

3

4

5

pl

pK
2
, (-NH2)

pH >> pK
2

Tabla 6: Estructuras de la Ala en funcin del pH

Podemos observar que al pH que corresponde al pl, la carga neta del 100% de
molculas es cero (mxima concentracin del Zwitterion); a pH inferiores al pl, un
cierto porcentaje de molculas tiene carga neta positiva, siendo mayor a medida
que el pH es ms cido y a pH superiores al pl, ms y ms molculas estn
cargadas negativamente mientras ms bsico es el pH. Notamos adems que las
zonas en que estos AA tienen capacidad buffer, se sitan en las cercanas de pK
1

y pK
2
.

Para un aminocido cido (Glu en este caso), podemos representar la curva de
titulacin as:

26

Figura 4: Curva de titulacin del Glu

La tabla 7 muestra lo que ocurre en cada uno de los puntos indicados en la figura
4.

Al calcular el pl vemos que es igual a 3.2 (que corresponde al pH del punto 3 en la
grfica), valor que indica que el Glu es un aminocido cido pues el pl est muy
alejado del rango 6.0 a 7.0; su carga neta a pH superiores a su pl ser negativa y
a pH inferiores, ser positiva. Al comparar su curva de disociacin con la de la Ala,
vemos que en la regin cida las inflexiones son menos fuertes.

Las curvas de titulacin obtenidas para los AA bsicos muestran tambin
inflexiones ms marcadas, pero estn desplazadas hacia pH ms altos y su
anlisis es similar.

Si se conocen los valores de pK de cada grupo y el pl (que se pueden determinar
experimentalmente) podemos proceder en forma inversa y representar las curvas
de disociacin.


27

Tabla 7: Relacin entre el pH y la estructura del Glu
Punto Estructura Corresponde a
1

2

3

4

5

6

pH << pK
1

Pk
1
, (-COOH)

pl

pK
2
= 4.2 (grupo R)

pK
3
= 9,7 (-NH
2
)

pH >> pK
3


28

Las consideraciones anteriores adems de que permiten comprender mejor el
comportamiento cido-base de los aminocidos en solucin, estos sern muy
tiles para entender las propiedades de polmeros integrados por aminocidos
(pptidos y protenas).

Los aminocidos no presentan absorcin en la zona del espectro visible por no
poseer cromforos y los nicos que absorben en el ultravioleta son el Trp y la Tyr
a 280 nm y la Phe, en menor grado, a 260 nm debido a que sus grupos R son
aromticos. Esta propiedad se aprovecha para detectar aminocidos, pptidos y
protenas en soluciones en que no haya otras molculas que absorben a estas
longitudes de onda.

En sntesis: El estado de ionizacin de un aminocido vara con el pH y en
relacin su Pka. (Tabla 8). En disolucin cida por ejemplo a un pH 1.0 el grupo
carboxlico no est disociado pero el grupo amino si esta protonado (- NH
3
+
). En
disolucin alcalina por ejemplo a pH 11.0 el grupo carboxilo esta ionizado (-
COO
-
) y el grupo amino esta desprotonado. En una forma ms clara mencionemos
el caso de la glicina donde posee un pKa de 2.3 para el grupo carboxlico y un
pka 9.6 para el grupo amino, esto quiere decir que el punto medio de la primera
ionizacin ocurre a pH = 2.3 y el de la segunda esta a pH = 9.6.

Calculo del punto isoelctrico de una aminocido: Es el pH que este en medio de
los valores de pKa de ambos lados de la especie isoinica, se suman y se dividen
por dos:

Ejemplo, ver tabla 7: pI para el cido glutmico: a pH 2.0 presenta un pK1= 2.0 y a
pH 4.2 presenta un pK2= 4.2

pI = 2.0 + 4.2/ 2 = 3.1

Cheftel, Jean presenta las siguientes propiedades de los aminocidos
3
:

3
Cheftel, Jean (1998). Protenas alimentaras. Espaa: Acribia.

29

Tabla 8: Propiedades fsicas de los aminocidos

AMINOCIDO

ABREVIATURA

LETRA

Pka1
(- COOH)

Pka2
-NH2

Pka R
R= cadena
lateral

pI
Alanina Ala A 2.35 9.69 6.02
Arginina Arg R 2.17 9.04 12.48 10.76
Asparagina Asg N 2.02 8.80 5.41
cido Asprtico Asp D 2.09 9.82 3.86 2.97
Cisteina Cys C 1.96 10.28 8.18 5.07
Fenilalanina Phe F 1.83 9.24 5.53
Glutamina Gln Q 2.17 9.13 5.65
cido glutmico Glu E 2.19 9.67 4.25 3.22
Glicina Gly G 2.34 9.78 6.06
Histidina His H 1.82 9.17 6.00 7.58
Isoleucina Ile I 2.36 9.68 6.02
Leucina Leu L 2.36 9.64 6.00
Lisina Lys K 2.18 8.95 10.53 9.74
Metionina Met M 2.28 9.21 5.75
Prolina Pro P 1.99 10.6 6.30
Serina Ser S 2.21 9.15 5.68
Tirosina Tyr Y 2.20 9.11 10.07 5.65
Treonina Tre T 2.71 9.62 6.16
Triptfano Trp W 2.38 9.39 5.89
Valina Val V 2.32 9.62 5.97
Fuente: Cheftel Jean- Claude. Protenas alimentaras: bioqumica, Propiedades funcionales, valor nutritivo, modificaciones
qumicas. Valores de pka y pI de loa aminocidos a 25 C.

Leccin 5: Pruebas cualitativas y cuantitativas para determinar
aminocidos y protenas en laboratorio.

5.1 Aminocidos.

Las pruebas cualitativas para la determinacin de las propiedades generales de los
aminocidos se relacionan a continuacin de acuerdo a Plummer, David (2000)
4
:

Reaccin de la Ninhidrina

La ninhidrina (hidrato de triceohidrindeno), un agente oxidante poderoso, reacciona con
todos los aminocidos a un pH entre 4- 8 para dar un compuesto de color prpura. Esta
reaccin se efecta con aminas primarias y amoniaco pero sin desprendimiento de CO2.
La reaccin es muy sensible y es ideal para la deteccin de aminocidos en
cromatografas y su determinacin cuantitativa en fracciones de columnas.

Reaccin Xantoproteica

Los aminocidos que contienen un ncleo aromtico (triptfano y Fenilalanina), forman
nitroderivados de color amarillo cuando se calientan con cido ntrico concentrado. Las

4
Plummer, David (2000). Bioqumica Prctica. Londres: mcGraw- Hill Latinoammericana S.A.

Consulta Consulta Consulta Consulta la presentacin virtual en la pgina principal del la presentacin virtual en la pgina principal del la presentacin virtual en la pgina principal del la presentacin virtual en la pgina principal del curso sobre: caracterizacin de protenas, curso sobre: caracterizacin de protenas, curso sobre: caracterizacin de protenas, curso sobre: caracterizacin de protenas,
parte 1 y 2. parte 1 y 2. parte 1 y 2. parte 1 y 2.


30

sales de estos derivados son de color naranja.

Reaccin de Milln

Los compuestos que contienen el radical hidroxibenceno (la tirosina) reaccionan con el
reactivo de milln formado compuestos rojos. Los nicos aminocidos fenlicos son la
tirosina y sus derivados y solamente ellos dan una reaccin positiva.

Reaccin de cido
glioxlico para triptfano

El grupo indlico del triptfano reacciona con el cido glioxlico en presencia del cido
sulfrico concentrado dando un color prpura. El cido actico glacial que ha sido
expuesto a la luz contiene cido glioxlico.

Prueba de Pauly

El cido sulfanilico diazotizado se une con las aminas de la arginina y la lisina, fenoles
como el de la tirosina e imidazoles como la Histidina para dar compuestos azo
fuertemente coloreados.

Reaccin de Ehrlich

Este reactivo reacciona con un buen nmero de compuestos orgnicos tales como ndoles,
aminas aromticas y compuestos ureicos para dar compuestos coloreados.
Prueba de nitroprusiato Los grupos tioles reaccionan con nitroprusiato de sodio ( Na2Fe(CN)5NO) en presencia de
un exceso de amoniaco para dar un color rojo.

Reaccin de Sakaguchi

El nico aminocido que contiene grupos guanidinios es la arginina; esta reacciona con
alfa-naftol y un agente oxidante tal como el agua de bromo dando un color rojo.

5.2 Mtodos cualitativos para la determinacin de las protenas.

prueba de Biuret para enlaces peptdicos

El sulfato alcalino de cobre reacciona con compuestos que contienen dos o mas enlaces
peptdicos dando un complejo de coloracin violeta. La intensidad del color obtenido es
una medida del nmero de enlaces peptdicos presentes en la protenas.

5.3 Mtodos Cuantitativos de aminocidos y protenas

Determinacin cuantitativa de los aminocidos usando la reaccin de la
ninhidrina

El desarrollo del color no es el mismo en todos los aminocidos. Los aminocidos como
la prolina e hidroxiprolina dan un color amarillo, as que ellos se leen a 440 nm.

Mtodo de folin lowry para determinacin de protenas

Las protenas reaccionan con el reactivo de Folin para dar un complejo colorado. El color
que se forma es debido a la reaccin del cobre alcalino con la protena, tal como sucede
en el ensayo de biuret y la reduccin de fosfomolibdato por la tirosina y el triptfano
presentes en la protena. La intensidad del color depende del nmero de aminocidos
aromticos presentes y cambiaran segn la clase de protena.


31

Ejercicios del captulo:

1. El punto isoelctrico de los siguientes pptidos es:

a. Gly-Ala-Asp-Pro-Lys-Met-Cys-Phe-Lys-Arg-Asp-Ser.

b. Cys-Tyr-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu

2. Desde el punto de vista qumico, los aminocidos se pueden clasificar en
cidos, bsicos, polares y no polares, esto, de acuerdo a la naturaleza de un
grupo de tomos que se conoce como cadena lateral R. Las siguientes
estructuras corresponden a dos aminocidos:

Del anlisis de las grficas se deduce:
3. Utilizando los valores de la tabla 8, determine las estructuras al cambio de pH
de la lisina: ubique las zonas de capacidad buffer y Demuestre como se calcula
el pI.

Los cambios de pH son: < 2.0, 2.16, 5.0, 9,2, 10.0, 10.8

4. El glutatin es un sustancia constituido por tres aminocidos: glicina, cistena y
cido glutmico y tiene funcin antioxidante celular. El cido glutmico y la cistena
se clasifican como:

32

CAPITULO 2: PEPTIDOS Y PROTEINAS

En este captulo el estudiante puede encontrar en forma clara y concreta la
definicin y formacin del enlace peptdico, concepto fundamental para la
interpretacin de los niveles de estructura de protenas, ya que el entendimiento
de estos temas conducen al estudiante a entender el comportamiento y funcin
biolgica de las protenas.

En este captulo, tambin se analizan las propiedades fisicoqumica que
condicionan junto con los niveles de estructuracin la funcin de la protenas en
los tejidos animal y vegetal.


Leccin 6: Pptidos
5

6.1 Aspectos estructurales

La unin de dos o ms AA entre s a travs de enlaces amida da origen a un
importante grupo de Biomolculas llamadas pptidos.

El enlace resultante recibe el nombre de enlace peptdico, y debido a la
distribucin electrnica posee un carcter parcial de doble enlace (alrededor de un
40%); por ello, aunque se represente convencionalmente como un enlace sencillo,
goza de dos caractersticas muy importantes que siempre deben tenerse en
cuenta:

Todos los tomos que intervienen en el enlace son coplanares, es decir, estn
situados en el mismo plano. Esta situacin la podemos ilustrar en la figura 5.

5


33

Figura 5: Representacin coplanar del enlace peptdico

Observamos que los cuatro tomos (C, O, N, H) que participan en el enlace
estn localizados en el plano indicado, en cuyos bordes se encuentran los
carbonos portadores de las cadenas laterales R
1
y R
2
. Como veremos ms
adelante, esta coplanaridad tiene consecuencias en la determinacin de una
estructura fundamental de las protenas.

Debido al carcter parcial de doble enlace, se establece una isomera
geomtrica del tipo trans, donde el O y el H (del enlace) estn en lados
opuestos.
Adicionalmente y como consecuencia de la configuracin L de los
aminocidos, los grupos R
1
y R
2
se alternan por encima y por debajo del plano.

Los pptidos se representan convencionalmente en forma simplificada como una
estructura lineal, que cumple las caractersticas anotadas, as:

El extremo de la izquierda corresponde al llamado extremo N-terminal donde est
el nico aminocido que en el pptido tiene libre su grupo -NH
2
; el extremo de la
derecha es el extremo C-terminal en el cual el aminocido tiene libre su grupo -
COOH. Para representarla estructura de un pptido en muchos casos es suficiente
indicar los aminocidos constitutivos en su forma abreviada.

Por ejemplo, una de las encefalinas (pptidos que tienen accin analgsica) se
puede indicar como el pentapptido:

Tyr-Gly-Gly-Phe-Met


34

Lo cual significa que la Tirosina es el AA N-terminal, la Metionina es el AA-C
terminal y que la Fenilalanina (p.e) ocupa la cuarta posicin.

Este tipo de representacin, aunque conveniente en muchos casos, no dice por s
mismo mucho sobre las propiedades cidas o bsicas del pptido; para ello es
importante recordar con exactitud a qu grupo pertenece cada uno de los
aminocidos presentes. Tampoco se puede formar con ella una idea de la
estructura tridimensional (conformacin), que en pptidos de cierto tamao puede
ser una caracterstica importante.

Dado el altsimo nmero de posibles combinaciones en que pueden participar los
20 AA para formar pptidos, hay una enorme variabilidad estructural. La
determinacin de la estructura de los pptidos puede hacerse combinando los
resultados obtenidos por hidrlisis total, hidrlisis parcial y/o identificacin de
aminocidos con reactivos especficos.

Las hidrlisis totales emplean cidos concentrados (HCI, H
2
SO
4
) que rompen
inespecficamente los enlaces peptdicos en condiciones drsticas de temperatura;
la mezcla de AA resultantes se separa por mtodos cromatogrticos. Esto nos
permite determinar cules AA hacen parte del pptido pero no el orden
(secuencia) en que estn colocados.

La secuencia se determina combinando rupturas selectivas de los enlaces
peptdicos, logrados en condiciones suaves, por medio de agentes especficos que
generalmente son enzimas con el establecimiento de los AA-N terminales, C-
terminales e intermedios, de los fragmentos resultantes ms pequeos.

Para identificar estos AA se puede usar el reactivo de Sanger o reactivos que
actan en forma similar como el reactivo de Edman o el Dansilo.

El conocimiento de la estructura de los pptidos permite, adems de su
caracterizacin, establecer cules AA son determinantes para la funcin biolgica
del pptido y, como veremos ms adelante, postular una estrecha correlacin
entre la estructura y la actividad biolgica.

6.2 Propiedades cido-base

El comportamiento cido-base de cada pptido est determinado por los grupos -
NH2 y -COOH (N- y C- terminales respectivamente) y por los grupos R de los AA
presentes.

Por ejemplo, en pptidos del grupo de las bradikininas, que poseen una fuerte
actividad depresora de la tensin arterial, es frecuente la presencia de
aminocidos bsicos lo cual le confiere pH fisiolgicos, cargas positivas y un pl

35

relativamente alto. El pptido Lys-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Leu-Pro-Phe-Arg tendr en
estas condiciones cuatro cargas positivas (una por el grupo -NH
3
+
y tres por los
grupos R de Lys y Arg) y una carga negativa (a causa del -COO- terminal); su pl
ser cercano al pK
a
de la Arg y por consiguiente es un pptido muy bsico.

En el caso de los pptidos donde predominan Glu y Asp tendremos la situacin
inversa (pptidos cidos, bajo pl).

En general los pptidos poseen simultneamente AA cidos y bsicos y su
comportamiento anftero depende de las proporciones relativas de estos
aminocidos; las curvas de titulacin presentan mltiples puntos de inflexin (a
diferencia de lo observado con los AA libres) y no es posible calcular el valor de pl
considerando los pK
a
de los AA y su disociacin sucesiva, pues frecuentemente
podemos tener a un pH dado ms de un grupo R que se est disociando. La
determinacin del pl podemos, en estos casos, realizarla por electroforesis.

6.3 Actividad biolgica de algunos pptidos

Los pptidos que existen libres en una clula desempean en muchos casos una
funcin biolgica bien precisa. A continuacin examinaremos algunos ejemplos:
6. 3.1 Actividad hormonal

En el lbulo posterior de la hipfisis se produce un cierto nmero de pptidos con
funcin hormonal. Se destacan: la oxitocina nonapptido cclico que estimula la
contraccin del msculo liso del tero durante el parto y la glndula mamaria en la
lactancia; y la vasopresina, otro nonapptido cclico que estimula la reabsorcin
renal del agua y aumenta la presin arterial (accin hipertensora). Estos pptidos
tienen las siguientes estructuras:

Oxitocina

Vasopresina

36

Aqu tenemos un buen ejemplo de la estrecha correlacin existente entre
estructura y accin biolgica ya que las dos hormonas difieren solamente en las
posiciones indicadas y a pesar de ello sus funciones biolgicas son
completamente diferentes.

Cuando en cualquiera de ellas se rompe el enlace -S-S- (disulfuro) entre las dos
Cisteinas por una reduccin suave, que no altera ningn otro enlace ni AA, se
pierde completamente la actividad hormonal. Esto se debe a que por la ruptura
ocurren cambios en la conformacin de estos pptidos; esto refuerza la decisiva
importancia que tiene la estructura sobre la accin biolgica.

La hipfisis produce en su lbulo anterior la hormona adrenocorticotropa (ACTH),
pptido constituido por 25 a 34 AA (dependiendo de la especie), que acta sobre
la corteza de las glndulas suprarrenales, quienes participan en la regulacin del
metabolismo de carbohidratos.

6.3.2 Actividad como antibiticos

Los pptidos que presentan esta actividad poseen generalmente AA con
configuracin D o enlaces poco comunes. Entre ellos tenemos:


37

6.3.3 Actividad hiper o hipotensora

Estos pptidos resultan de la accin de enzimas sobre protenas del plasma
sanguneo Las angiotensinas, derivadas del angiotensingeno, son un grupo de
agentes hipertensores estructuralmente relacionados con 8 a 10 AA:

Angiotensina I:
Asp-Arg-Val-Tyr-Val-His-Pro-Phe-His-Leu
Angiotensina II:
Asp-Arg-Val-Tyr-Val-His-Pro-Phe

Las bradikininas (ya mencionadas) son pptidos con 9 a 12 AA de fuerte actividad
hipotensora y pl elevados.

6.3.4 Actividad oxido reductora

El ms abundante es el Glutatin, presente en muchos tejidos, que presenta un
enlace no peptdico entre Glu y CySH como lo muestra la estructura:

(-Glu-Cys-Gly) = (GSH)

38

El grupo SH (tiol) de la Cistena puede oxidarse y dar lugar al glutatin oxidado
(GSSG):

Esta oxidacin est acompaada de la reduccin de un aceptor (metabolito) que
pasa de su forma oxidada a la reducida.

Leccin 7: Generalidades del enlace Peptidico y niveles de estructuracin

Se mencion en la leccin 1, algunos aspectos fundamentales de la formacin de
ste enlace. En este apartado se profundiza an ms la formacin y
caractersticas de este enlace.

El enlace peptdico se forma por la condensacin del -COOH de un aminocido
con el -NH2 de otro aminocido:

Figura 6: Formacin del enlace peptdico.
Fuente: Ramrez, R.- segunda edicin (2009). Qumica de alimentos. Bogot: Universidad Nacional
Abierta y a Distancia.

El enlace peptdico posee especiales caractersticas: Es polar, plano y est
estabilizado por resonancia. Es un hbrido de resonancia; el enlace C-N del
enlace peptdico tiene un carcter parcial de doble enlace, por esta razn no hay
libertad de movimiento. El doble enlace entre el carbono y el oxgeno del grupo
carbonilo, busca la estabilidad electrnica de la molcula.


39

Fuente: Ramrez, R.- segunda edicin (2009). Qumica de alimentos. Bogot: Universidad Nacional
Abierta y a Distancia.

Se ha mencionado que el carcter parcial de doble enlace no hay libertad de
movimiento, Pero de quin? La presencia de un doble enlace parcial ocasiona la
presencia de ismeros geomtricos de la forma trans en el oxgeno del grupo
carbonilo y el hidrogeno del grupo amino participantes en el enlace peptdico. La
presencia del doble enlace parcial del enlace peptdico ocasiona que no haya
libertad de movimiento entre el enlace C N, sino que el movimiento se d a
nivel de N- C con un ngulo de torsin (phi) y entre C-C con un ngulo de
torsin (psi). En la grfica siguiente se evidencia lo expuesto.

Figura 7. ngulos de torsin del enlace
peptdico
Fuente: Ramrez, R.- segunda edicin (2009).
Qumica de alimentos. Bogot: Universidad
Nacional Abierta y a Distancia.

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40

7. 1 Niveles estructurales
6

Se considera que cuando un pptido sobrepasa los 40-50 aminocidos tenemos
una cadena polipeptdica que llamamos protena. Estos polmeros poseen un
considerable grado de complejidad que se expresa en todas las protenas en por
lo menos tres niveles de estructura y en algunas hasta cuatro.

Estructura primaria. Est definida por la composicin en AA y su secuencia en la
protena.

Estructura secundarla. Es el ordenamiento espacial de las cadenas
polipeptdicas resultante de interacciones por puentes de hidrgeno formados
nicamente entre los tomos que intervienen en el enlace peptdico.

Estructura terciaria. Consiste en la distribucin espacial de todos los grupos de la
protena, es decir, su conformacin tridimensional.

Estructura cuaternaria. Est dada por la asociacin reversible de varias cadenas
polipeptdicas (monmeros) iguales o diferentes. Este tipo de estructura solo la
poseen algunas protenas.

Debido a la importancia que revisten estos niveles de organizacin para la
comprensin del funcionamiento y propiedades de las protenas, las discutiremos
con algn detalle a continuacin.

Leccin 8: Estructura primaria y Secundaria
7

8.1 Estructura primaria

El alto nmero de AA que integran una protena nos da, en forma similar a lo
anotado en los pptidos, una enorme variabilidad estructural y para caracterizar
una protena debemos por tanto conocer su composicin en AA y el orden en que
se encuentran.

La determinacin de la composicin se logra sometiendo la protena a una
hidrlisis drstica con cidos o bases (generalmente HCI 6N y Ba(OH)
2
4N) y
analizando cuantitativamente la mezcla de AA libres que resulta. Actualmente esto
se logra por medio de un analizador automtico de AA que se basa en la
separacin de los AA por cromatografa de intercambio inico, hacindole

6
Prez, G. Navarro Y. (1992). Bioqumica. Santa fe de Bogot: Unisur.
7
Prez, G. Navarro Y. (1992). Bioqumica. Santa fe de Bogot: Unisur.


41

reaccionar luego con Ninhidrina y determinando por colorimetra a 570 nm su
concentracin.

Establecer la secuencia es ms complejo; la estrategia que se utiliza consiste en
romper la protena por medios qumicos o enzimticos, en un nmero no muy
grande de pptidos, separar por diversos mtodos (cromatografa, intercambio
inico, solubilidad, etc). Los pptidos resultantes a cada uno determinarles su
secuencia en la forma ya discutida. Utilizando las combinaciones apropiadas de
agentes de clivaje, se pueden ensamblar como en un rompecabezas los pptidos,
y obtener la secuencia de la protena.

La primera protena a la que se le determin su estructura primaria fue la insulina,
hormona originada en el pncreas como proinsulina, que tiene por funcin
disminuir el nivel de glucosa en la sangre y cuya carencia tiene mltiples
complicaciones incluyendo la diabetes. Esta protena tiene dos cadenas
polipeptdicas (A y B) unidas por dos puentes de hidrgeno disulfuro
intermoleculares formados por la oxidacin de cuatro cisteinas.

En la figura 8 representamos esquemticamente la insulina bovina, sin que lo
indicado en los puentes disulfuro intermoleculares e intramoleculares, corresponda
a las longitudes relativas y ngulos de unin de los enlaces.

Figura 8: Secuencia de AA de la
insulina bovina
Prez, G. Navarro Y. (1992).
Bioqumica. Santa fe de
Bogot.: Unisur.

A pesar de ser una de las protenas ms pequeas es evidente lo incmodo que
resulta su representacin. Por esta razn se adoptan esquemas simplificados
como ste:

42

Figura 9: Esquema simplificado de la insulina

En la estructura primaria en detalle observamos que la hormona tiene todos los AA
con excepcin de Trp, Met, lo cual no es de extraar pues en total no hay sino 51
AA y las Met y Trp cuando estn presentes, slo se encuentran unos pocos
residuos (2 a 3 por cadena de 200 a 300AA).

Una vez que el grupo de Sanger en Inglaterra estableci la metodologa para
determinar la estructura primaria de protenas, lo cual le vali el premio Nbel en
1951, sta se ha aplicado no solo a insulina de distintos animales sino a un
nmero creciente de protenas, incluyendo la hemoglobina, citocromo c,
ribonucleasa y muchas enzimas.

Los estudios comparativos de secuencia realizados con estas protenas han
permitido:
Localizar los segmentos donde reside la actividad biolgica.
Realizar estudios sobre la evolucin de las protenas.
Utilizar en algunos casos protenas no humanas como sustitutos en el
tratamiento de ciertas enfermedades.
Predecir parcialmente la estructura terciaria de la protena.
Disear protenas sintticas con actividad biolgica.

Vemos por consiguiente las insospechadas consecuencias que ha tenido el
estudio, aparentemente poco complicado de la estructura primaria de las
protenas.

8 .2 Estructura secundaria

En una o varias cadenas polipeptdicas se presentan uniones por puentes de
hidrgeno en las que solo intervienen los grupos C=O y N-H que forman el enlace
peptdico. Todas las configuraciones existentes o propuestas deben satisfacer las
caractersticas estructurales que ya discutimos para este tipo de enlaces; la
configuracin ms sencilla es la de cadena extendida, figura 10.


43

Figura 10: Puentes de hidrgeno en un polipptido con estructura extendida

En esta configuracin la disposicin espacial de los grupos se repite cada 7.2 , lo
que constituye su distancia en la unidad de repeticin e incluye un puente de
hidrgeno por cada par de cadenas.

Si se observa con detenimiento la estructura vemos que en una cadena dada los
grupos laterales R
1
y R
3
estn localizados del mismo lado (hacia atrs, en este
ejemplo) y puesto que con excepcin de Ala y Gly, estos grupos son voluminosos,
por lo que existe impedimento estrico y por ello la estructura extendida es poco
estable.

En las protenas fibrosas que tienen un papel estructural, este problema se
resuelve mediante la adopcin de uno de los siguientes tipos de estructura:
Grupo l: Estructura en hoja plegada.
Grupo II: Estructura en -hlice.
Grupo III: Estructura en triple hlice.

El grupo l se caracteriza por tener una unidad de repeticin de 6.5 a 7.0 , con
formacin de puentes de hidrgeno intermoleculares entre al menos dos cadenas
o segmentos de cadena que pueden ser, paralelas (van en el mismo sentido):


44

+
COO N H
3

+
COO N H
3

o antiparalelas (van en sentido opuesto):
+
COO N H
3

3
NH OOC
+

Dado que cada enlace peptdico define un plano en el que tambin se
localizan los puentes de hidrgeno, se obtiene una estructura similar a la de
una hoja plegada, figura 11.

Figura 11: Estructura en hoja plegada


45

Esquemticamente se puede representar esta estructura de la siguiente manera,
donde cada lnea representa un plano, los grupos R impares y
los grupos R pares:

La protena ms importante de este grupo es la fibroina de la seda, constituida
bsicamente por Gly (45%), Ala (26%) y Ser (12%) con una secuencia repetitiva:

Gly-Ala-Gly-Ser-Gly-Ala

Debido a esta estructura primaria, no hay impedimento estrico apreciable y es
posible lograr un empaquetamiento compacto entre distintas capas originndose
as la fibra con sus propiedades de flexibilidad y poca extensibilidad.
Esquemticamente, figura 12, tendramos:

Figura 12: Empaquetamiento de grupos R en la fibroina

El grupo II posee una unidad de repeticin de 5.1 a 5.4 , y los puentes de
hidrgeno son exclusivamente intramoleculares, el ordenamiento espacial de las

46

cadenas polipeptdicas resultante de las interacciones por puentes de hidrgeno
formados nicamente entre los tomos de hidrgeno del nitrgeno y el oxgeno
del carbono carbonlico que conforman el enlace peptdico. Esto genera una
estructura helicoidal del tipo representado en la figura 13.

Podemos observar que los grupos R estn dirigidos hacia el exterior de la hlice,
lo cual implica que grupos R voluminosos tengan una misma carga, si estn
situados muy cerca desestabilizan la estructura; por otra parte la Prolina rompe la
hlice por no poder formar los puentes de hidrgeno necesarios.

A este grupo pertenece la -queratina que es el constituyente ms importante de
fibras como cabello y lana y de tejidos de proteccin como piel, plumas, cuernos,
uas, etc. Esta protena que posee muy poco Trp, His y Met, tiene una alta
proporcin de CySH que forma puentes disulfuro entre las distintas cadenas
helicoidales y mantiene as la estabilidad de la fibra:

Figura 13: Estructura de -hlice


47

Las fibras que tienen esta estructura son extensibles reversiblemente, luego de un
tratamiento por calor hmedo debido a que el agua provoca la ruptura de los
puentes de hidrgeno intramoleculares y la cadena puede adquirir una
configuracin extendida.

El grupo III posee una unidad de repeticin de 2.8 , y los puentes de hidrgeno
se forman entre tres cadenas polipeptdicas que se enrollan entre s, de manera
helicoidal. El mejor ejemplo de este tipo de estructura es el colgeno, protena que
constituye un 30% de las protenas del cuerpo humano y est presente en tejido
conjuntivo, piel, huesos, tendones. El colgeno tiene un 33% de Gly, 25% de Pro o
OH-Pro y 11% Ala, sin que haya Trp, CySH, CySSCy y con menos del 2% de Phe,
Tyr.

Cada cadena peptdica tiene aproximadamente 1000 AA y la unin de las tres
constituye el tropocolgeno que es la fibra bsica con 14 de dimetro y 2800
de larga. Estas fibras se unen a otras a travs de enlaces covalentes y generan el
colgeno De manera simplificada podemos representar el tropocolgeno as:



48

Leccin 9: Estructura terciaria y cuaternaria

9.1 Estructura terciaria

En estas protenas y como consecuencia de sus estructuras primaria y secundaria,
se presentan simultneamente varias clases de interacciones que determinan su
conformacin. Estas interacciones (representadas en la figura 14) son:

Figura 14: Tipos de enlaces que mantienen la estructura terciaria de las protenas

Puentes de hidrgeno intramoleculares o intermoleculares, cuando la
protena tiene ms de una cadena polipeptdica, que se forman entre
cadenas laterales, o entre cadenas laterales y tomos del enlace peptdico,
(a. en la figura 14).
Enlaces salinos o inicos que resultan de la atraccin electrosttica entre
grupos R con cargas opuestas, (b. en la figura 14).

49

Uniones hidrofbicas provenientes de las interacciones entre cadenas
laterales de AA no polares, que tienden a asociarse entre s excluyendo el
agua, (c. en la figura 14).
Enlaces covalentes entre grupos R de CySH (enlaces disulfuro), Lys y Glu o
Asp (enlaces amida), (d. en la figura 14).

Estos enlaces en conjunto mantienen la estructura terciaria que fundamentalmente
est determinada por su composicin y secuencia de aminocidos.

La conformacin de las protenas globulares es considerablemente ms compleja
que la de las protenas fibrosas y es caracterstica para cada una. Los estudios
realizados sobre diversas protenas (insulina, mioglobina, citocromo c,
hemoglobina, etc) usando difraccin de rayos X han permitido deducir algunas
caractersticas estructurales comunes:

La protena es una molcula compacta cuya forma se asemeja en muchos
casos a una esfera con cavidades y protuberancias. La cadena
polipeptdica sigue un trazo irregular con segmentos en hoja plegada, en -
hlice o desordenados.
Los aminocidos polares y los cargados estn generalmente situados en el
exterior, en ntimo contacto con el medio acuoso circundante.
Los aminocidos hidrofbicos se ubican preferencialmente en regiones
internas donde se encuentran pocas molculas de agua o iones.
Los segmentos de -hlice que se presentan estn interrumpidos por Pro o
por HO-Pro.
En una protena dada proveniente de diferentes especies, la conformacin
es similar.

Dada la enorme complejidad de la estructura terciaria es posible solo despus de
establecer la estructura primaria y a su vez es un requisito para tratar de explicar
la accin biolgica de una protena dada. Es importante resaltar la estrecha
dependencia que existe entre la conservacin de la estructura terciaria natural u
original (conformacin nativa) y la actividad de la protena.

9.2 Estructura cuaternaria
8

Algunas protenas y con mucha frecuencia aquellas con peso molecular (PM)
superiores a 100000 estn formadas por la asociacin reversible de dos o ms
cadenas polipeptdicas que no estn unidas entre s por enlaces covalentes y
pueden ser separadas y estudiadas individualmente.

8


50

Un buen ejemplo de este tipo de protenas es la hemoglobina (Hb) que se
encuentra presente en los glbulos rojos y tiene como funcin el transporte de
oxgeno a los tejidos. Esta protena est formada por dos cadenas polipeptdicas
y de dos cadenas que nos dan el tetrmetro
2
2
con un PM de 65000. Cada una
de ellas posee adems de la parte protenica (globina), un grupo heme en el cual
el Fe
+2
est unido a cinco tomos de Nitrgeno en la forma indicada en la figura
15.

Sobre este Fe
+2
se fija una molcula de oxgeno (OxiHb), o de H
2
O (HCO
3
-
) (de-
oxiHb) o de CO (carboxiHb) en casos de intoxicacin por este gas; en conjunto
tenemos:

4 2 2
) O ( Hb O 4 Hb +

Un esquema de la estructura cuaternaria de la hemoglobina se representa en la
figura 16.

Figura 15: Estructura del grupo hemo


51

Figura16: Estructura cuaternaria de la hemoglobina

Podemos representar el transporte de oxgeno como una serie de interacciones
cooperativas donde la entrada de un oxgeno se facilita si hay otro fijado:

En los pulmones la Hb se satura con O
2
y est oxigenada a casi un 100%; al llegar
a los tejidos la Hb suelta parte del O
2
y queda saturada a un 65% y en esta forma
regresa a los pulmones. Para realizar este transporte se requiere la forma
tetramtrica (
2
2
) ya que los monmeros (, ), dmeros (
2
,
2
, ) o trmeros (
2
,

52

,
2
) no transportan el oxgeno y tampoco existen como tales en los eritrocitos; el
tomo de hierro de cada heme debe estar en forma ferrosa (Fe
+2
), si se oxida a la
forma frrica (Fe
+3
) tampoco hay transporte.

Estudios similares con enzimas que poseen estructura cuaternaria han mostrado
que la actividad biolgica se presenta con la forma asociada y no con la forma
disociada (monmeros).

Leccin 10: Clasificacin y Propiedades Fisicoqumicas

10.1 Clasificacin

Adems de la clasificacin en fibrosas y globulares o en simples y conjugadas.
Las protenas globulares se pueden subdividir, segn Osborn, de acuerdo con su
solubilidad en:

Albminas: Son protenas solubles en agua y en soluciones salinas; precipitan
a altas concentraciones de sales, 80%S (porcentaje de solubilidad). Ejemplo:
(NH
4
)
2
.SO
4
, Na
2
SO
4
y estn ampliamente distribuidos en tejidos animales y
vegetales (albmina de huevo, albmina srica).

Globulinas: Son insolubles en agua y solubles en soluciones salinas diluidas
(NaCI 1%); precipitan a concentraciones medianas de sales (40 a 50%) y se
encuentran prcticamente en todos los tipos de clulas y tejidos.
Prolaminas: Insolubles en agua y soluciones salinas; son solubles en etanol
50-90% y se encuentran slo en vegetales (ej: zena de maz, hordeina de la
cebada, gliadina del trigo). Son ricas en Glu y en Pro (10%).

Glutelinas: Solo se solubilizan en cidos o bases diluidos; estn presentes
solo en tejidos vegetales (gluten del trigo) y tienen buenos contenidos de CySH
o CySSCy.


53

10.2 Propiedades fisicoqumicas
10.2.1 Propiedades cido-base

Debido a la presencia simultnea de AA cidos y bsicos, las protenas se
comportan como polielectrolitos e interactan ampliamente con solventes acuosos;
una excepcin la constituyen aquellas protenas que por tener una elevada
proporcin de aminocidos hidrofbicos, son poco polares y por ello poco solubles
en soluciones salinas.

En forma similar a lo que ocurre con los pptidos, las protenas presentan curvas
de titulacin complejas a partir de las cuales no es posible obtener informacin
sobre el pl o sobre los pK
a
de los grupos cargados. Los valores de pK
a
se pueden
determinar por mtodos fsicos o qumicos ms sofisticados y se ha encontrado
que en algunos casos el pK de un grupo R difiere del establecido para ese grupo
en un aminocido libre; probablemente esto se debe a interacciones (inicas,
puentes de hidrgeno) con grupos vecinos y a la cercana a residuos hidrofobicos
que modifican la constante dielctrica del medio.

El pl de las protenas se determina por electroforesis y en la mayora se encuentra
entre 4.5 y 5.5; en consecuencia su capacidad tampn es muy pequea a pH
fisiolgicos y slo las protenas con buen contenido de His, como la hemoglobina,
son capaces de actuar como buffers a estos pH.

El conocimiento del pI nos permite predecir la carga neta de una protena en un
pH dado y su comportamiento en un campo elctrico; si el pH es mayor que el pl,
la protena estar cargada negativamente y en un campo elctrico migrar hacia el
nodo. A pH menores que el pl tendr carga positiva y migrar al ctodo.

10.2.2 Solubilidad

Para Para Para Para reflexionar: reflexionar: reflexionar: reflexionar: Porque se Porque se Porque se Porque se dice: dice: dice: dice: de la composicin y conformacin de una protena depender su funcin de la composicin y conformacin de una protena depender su funcin de la composicin y conformacin de una protena depender su funcin de la composicin y conformacin de una protena depender su funcin
biolgica? biolgica? biolgica? biolgica?

Cmo Cmo Cmo Cmo se puede llegar a perder la actividad biolgica de una protena? se puede llegar a perder la actividad biolgica de una protena? se puede llegar a perder la actividad biolgica de una protena? se puede llegar a perder la actividad biolgica de una protena?

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54

La solubilidad de las protenas depende de varios factores:

pH: A mayor interaccin con el solvente mayor ser la solubilidad, por esto
en el pl (donde la carga neta es cero) la solubilidad es mnima.
Fuerza Inica () de la solucin: La mayora de las protenas presenta un
comportamiento como el ilustrado en la figura 17, donde se grafica el
logaritmo de la solubilidad en funcin de la fuerza inica:

Figura 17: Solubilidad de las protenas en funcin de la fuerza inica

Podemos aprovechar esta curva para deducir la ecuacin que rige la
solubilidad:

log S = - K
s

donde (interseccin por extrapolacin al eje y) representa la solubilidad
(terica para protenas diferentes a las albminas) en agua pura y K
s

(pendiente de la recta) es un parmetro cuyo valor es caracterstico para
cada protena. Se observa que la solubilidad aumenta rpidamente al
incrementar la fuerza inica (salting out). Esto explica por qu las albminas
y las globulinas precipitan con (NH
4
)
2
.SO
4
al 80% y al 50% de saturacin
respectivamente.

Temperatura: En el intervalo 0-60C la solubilidad aumenta al aumentar la
temperatura pero a valores superiores las protenas precipitan debido a que
la energa trmica es suficiente para destruir los enlaces no covalentes que
estabilizan la estructura terciaria, exponiendo al solvente los grupos R
hidrofbicos del interior y puesto que estos no interactan apreciablemente
con el agua, precipitndose.


55

Solventes orgnicos miscibles con el agua: Estos solventes (etanol,
acetona, metanol) disminuyen la constante dielctrica del solvente acuoso y
por tanto causan la precipitacin. Para que la protena permanezca en
solucin se requiere, como en el caso de las Prolaminas, que tenga una
composicin en aminocidos muy particular.

En los procesos industriales y de laboratorio tendientes a obtener protenas, se
aprovechan los anteriores factores, combinndolos de tal manera que las
diferencias en solubilidad sean mximas y se puedan eliminar componentes
indeseables.

10.2.3 Interacciones con iones

Una consecuencia de la presencia de grupos R cidos y bsicos es la capacidad
que tienen las protenas para fijar, por interacciones electrostticas, cationes y
aniones. Esta interaccin es muy importante pues en algunos casos la actividad
biolgica de la protena depende de ella (ej. metaloenzimas) y en otros es el
mecanismo usado para transportar o almacenar un determinado in (ej.:
ceruloplasmina, ferritina).

El tipo de in fijado y su cantidad depende de:

La naturaleza de la protena: Esto se manifiesta en la clase de grupos R
presentes, sus cargas y el pl de la protena.
pH de la solucin: Este factor determina la carga neta, y el nmero de
grupos R cargados positiva o negativamente en un momento dado.
Carga y tamao del In: Los iones divalentes se fijan ms fuertemente que
los monovalentes y a igualdad de carga los de mayor radio de hidratacin
ms dbilmente que los que poseen radios menores.
Concentracin del In: A mayor concentracin del in mayor cantidad se
fija sobre la protena pudindose alcanzar valores para la albmina srica
de hasta 20 moles CI
-
/10
5
g protena.

10.2.4 Desnaturalizacin:

Como discutimos anteriormente, la actividad biolgica de las protenas depende
de la conservacin de su estructura en los diferentes niveles (primaria, secundaria,
terciaria y aun cuaternaria en las protenas que la poseen). Es lgico pensar que
condiciones ambientales (hidrlisis, oxidacin, reduccin) que provoquen la
destruccin de enlaces covalentes causarn una prdida de la actividad; sin
embargo esta prdida se puede presentar tambin sin necesidad de romper
enlaces covalentes y en estos casos es imputable a modificaciones profundas de
su estructura terciaria y/o cuaternaria.


56

Estos cambios se conocen como desnaturalizacin (o prdida de su estructura
nativa) que en algunos casos puede ser reversible al eliminar el agente causal.
Cambios extremados en los factores que afectan la solubilidad, presencia de
metales pesados (Hg
+2
, Ag
+1
, Pb
+2
, etc.) o de detergentes, son algunas de las
causas que pueden desnaturalizar una protena u ocasionar su precipitacin, es
prcticamente imposible recuperar posteriormente la conformacin nativa y por
ende la actividad biolgica.


1. En la siguiente grfica se deduce un tipo de estructuracin de
protenas, cul es?, mencione la forma como van los puentes de
hidrgeno.

2. En una prctica de laboratorio sobre precipitacin de protenas,
se tiene los siguientes resultados:

Es de esperar que el tipo de protenas X1 de acuerdo a la clasificacin por la solubilidad
sean del tipo:

3. Dentro de la bioqumica de protenas, frecuentemente se usa el trmino prion para
designar algunas variantes patognicas de ciertas protenas naturales que son
producidas por las clulas nerviosas y algn otro tipo de clula. S en el organismo animal
o humano por varias razones se han producidos priones, ocasiona que stos obligan a
cambiar de forma a las protenas normales del cuerpo, especficamente ocasionan un
cambio en su estructura secundaria, este cambio conformacional se centra en cambiar
estructuras que estn en alfa-hlice por beta-lmina, este cambio se considera como la
infeccin por priones.

De acuerdo a su capacidad analtica, se espera que este cambio conformacional afecte:

1. La composicin qumica de aminocidos de la protena normal

57

2. El funcionamiento de la protena normal
3. El sitio activo de la protena normal
4. Las propiedades qumicas y fsicas de la protena normal.

4. Asocie la protena especificada en la lista con el tipo de estructura que le es
caracterstica y su funcin:
a. queratina d. Hemoglobina
b. Colgeno e. Queratina
c. Fibroina d. insulina
CAPITULO 3: ENZIMAS
9

En este captulo el estudiante puede encontrar en forma clara y concreta los
mecanismos mediante los cuales las enzimas ejercen su actividad cataltica, para
ello se analiza la especificacin de accin y de sustrato. Se presenta la
clasificacin enzimtica.

Las enzimas son sustancias importantes y mediadoras de las reacciones que
suceden en la celular, por ellas las reacciones tienen mayores velocidades en
corto tiempo, por lo que es importante estudiar los factores que condicionan su
actividad al igual que su inhibicin.

generar conocimiento y consultar enlaces virtuales

Leccin 11: Caractersticas de la accin enzimtica

En este captulo vamos a considerar un grupo de protenas que cumplen con la
funcin esencial de catalizar las reacciones qumicas que en su conjunto
constituyen el metabolismo. Estas protenas, que antiguamente se denominaron
fermentos, reciben el nombre de enzimas y frecuentemente son del tipo de las
albminas o de las globulinas pudiendo segn el caso ser protenas simples o
conjugadas. Su distribucin es muy amplia ya que todos los seres vivos las
poseen y podemos asignarles el papel de catalizadores biolgicos.

Adems de tener las propiedades generales de los catalizadores orgnicos o
inorgnicos, las enzimas ejercen su accin presentando las siguientes
caractersticas:

11.1 Especificidad de accin

9
Figura 8: Prez, G. Navarro Y. (1992). Bioqumica. Santa fe de Bogot.: Unisur.


58

Esto significa que una enzima en particular cataliza con un sustrato dado, un solo
tipo de reaccin qumica y ningn otro. Un buen ejemplo lo constituyen las
enzimas que intervienen en el metabolismo de los aminocidos, compuestos que
segn el tipo de enzima involucrada dar origen a diferentes productos; de manera
general podemos ilustrar este ejemplo as:

Tendremos entonces que la reaccin (1) ser catalizada solo por oxidasas y no
por decarboxilasas o transaminasas y as sucesivamente.

11.2 Especificidad por el sustrato

Cada enzima reconoce de una manera muy selectiva su sustrato basndose en la
estructura tridimensional que ste posee. La estreo especificidad es la que
determina que una oxidasa dada modifique por ejemplo la L-Phe sin que la D-
Phe sea alterada. Otro ejemplo son las proteasas que reconocen a nivel del
enlace peptdico cules son los AA adyacentes del lado amino o carboxilo; esto se
observa al comparar los enlaces hidrolizados en el siguiente pptido:

1. Tripsina rompe del lado COO- de Lys y Arg.
2. Quimotripsina rompe del lado del C00- de aminocidos aromticos (p.e. Trp).
3. Aminopeptidasa rompe en extremo N-Terminal
4. Caboxipeptidasa rompe en extremo C-Terminal


59

Debido a su especificidad estas enzimas producen a partir de un pptido o
protena dada, un mismo conjunto de fragmentos y son por tanto muy utilizadas en
los estudios de secuencia.

Un ejemplo de estas dos caractersticas de la reaccin enzimtica, est constituido
por las glicosidasas (hidrolasas que atacan los enlaces - y - glicosdicos de los
carbohidratos) que degradan el almidn y la celulosa. (para tener claras las
diferencias estructurales es conveniente revisar el Mdulo de Qumica Orgnica
1
).
La amilosa, polisacrido lineal con enlaces -1 ,4 entre las unidades de glucosa,
es hidrolizada por:
- amilasa presente en la saliva y el jugo pancretico, que es una glicosidasa que
acta al interior de la molcula produciendo una mezcla de maltosa y de glucosa.

- amilasa, muy abundante en semillas en germinacin, que ataca desde el
extremo reductor de la cadena liberando unidades de maltosa.

Estas dos glicosidasas son entonces un buen ejemplo de la especificidad de
accin ya que el mismo sutrato (amilosa) es degradado de diferente manera.

La amilopectina, segundo constituyente del almidn, adems de ser hidrolizado
por - y - amilasa lo es por la amilo -1, 6 glicosidasa y la accin conjunta de las
tres enzimas resulta en la degradacin completa de este polisacrido.

En el caso de la celulosa, que es un constituyente importante de las paredes
celulares vegetales, estas glicosidasas no pueden actuar y se requiere la
presencia de la celulasa para romper los enlaces -1,4 de este polmero y producir
glucosa y oligosacridos.

Podemos resumir la accin de estas enzimas sobre la amilopectina, de la
siguiente manera:

Enzima Ataque Productos
-amilasa

-amilasa

Amilo -1,6 glicosidasas
Interno, enlaces -1,4; su accin
se detiene en las cercanas de
enlace -1,6.
Extremo no reductor, enlaces -
1,4; su accin se detiene en las
cercanas de enlace -1,6.
Interno, enlaces -1,6.
Maltosa, glucosa y
oligosacridos ramificados.

Maltosa y dextrina lmite
(polisacrido).

Polisacridos (y oligosacridos)
con enlaces -1,6.
Tabla 9: Accin de algunas enzimas sobre la amilopectina.


60

Aqu tenemos ilustrada la especificidad sobre el sustrato pues para hidrolizar
enlaces glicosdicos -1,4 se requieren enzimas diferentes a las necesarias para
degradar enlaces -1,4 y viceversa.

Estas caractersticas de las enzimas implican que exista un nmero muy elevado
de ellas pues cada sustrato ser modificado por su enzima especfica.

11.3 Condiciones ptimas de actividad

Cada enzima presenta su mxima actividad en ciertas condiciones experimentales
que generalmente tienen que ver con pH, temperatura y la presencia o ausencia
de activadores o inhibidores respectivamente.

Ms adelante examinaremos en detalle como se afecta la actividad enzimtica con
cada uno de estos factores.

11.4 Clasificacin y nomenclatura

Debido al nmero creciente de enzimas que da a da se purifican y caracterizan,
es imperativo emplear un sistema de clasificacin lgico. El sistema adoptado
internacionalmente asigna la terminacin asa al nombre de la enzima y slo por
razones de uso se han conservado nombres triviales como tripsina, quimotripsina,
pepsina, papana y algunos otros.

La clasificacin se establece segn el tipo de reaccin qumica catalizada y la
divisin en grupos segn el tipo de reaccin junto con el nombre del sustrato,
proporciona la base para el nombre individual de cada enzima.

En consecuencia resultan seis clases principales de enzimas:

Tabla 10 : Clases principales de enzimas.

Clase Nombre Accin Cataltica
1.
2.
3.

4.

5.
6.

xido reductasa
Transferasas
Hidrolasas

Liasas

Isomerasas
Ligasas
Catalizan reacciones de xido-reduccin.
Catalizan reacciones de transferencia de grupos.
Catalizan reacciones de hidrlisis de enlaces covalentes C-
O, C-N, C-C, etc.
Catalizan reacciones que implican formacin de un doble
enlace debido a la remocin de un grupo o desaparicin de
un doble enlace por adicin de un grupo.
Reacciones de isomeracin.
Reacciones en las que se forma un enlace entre dos
tomos, acompaada de un consumo de energa.


61

Cada una de estas clases se subdivide en varias subclases de acuerdo con el tipo
de enlace; por ejemplo la clase de las hidrolasas se divide en:

Tabla 11: Subclases de hidrolasas

Subclase Hidrolasa Ejemplo del sustrato Nombre general
3.1
3.2
3.3
3.4
3.5
3.6
3.6
3.8
3.9
3.10
3.11
Esterasas
Glicosidasas
Hidrolasas de teres
Peptidasas
Otros grupos CN
Anhdridos de cido
Enlaces C-C
Enlaces C-haluro, P-haluro
Enlaces P-N
Enlaces S-N
Enlaces C-P
Lpidos
Carbohidratos

Pptidos, protenas.
Amidas
Lipasas
Amilasas Celulasas
Tripsina

Estas subclases a su vez se dividen en varias sub-subclases dependiendo de
sustrato en particular que se considere; en ltimo trmino cada enzima se
identifica con cuatro nmeros que le son propios. La siguiente tabla nos muestra
varios ejemplos:

Tabla 12: Sub-subclases de las proteasas
3.4.21
3.4.21.1
3.4.21.2
3.4.21.4
3.4.21.5
Sub-subclase: serin proteinasas
Quimotripsina
Quimotripsina C.
Tripsina
Trombina


Leccin 12: Cintica enzimtica

Las reacciones qumicas que se presentan en los organismos vivos ocurren por
una parte gracias a la capacidad de las enzimas de disminuir la energa de
activacin que acta como una barrera y por otra parte por la especificidad con
que se realiza esta catlisis.

Los estudios pioneros de Henry y Brown realizados con enzimas de la levadura
mostraron que la cintica enzimtica presenta el comportamiento ilustrado en la
figura 18 donde [S] es la concentracin de sustrato y dS/dt equivale a la velocidad
de transformacin del sustrato (v).

62

Figura 18: Velocidad de transformacin del sustrato en funcin de S

Podemos observar que la curva se divide en 3 zonas. En la zona I, la velocidad (v)
aumenta linealmente con la concentracin de sustrato [S]. Esta regin
corresponde a una cintica de primer orden en la cual a una concentracin dada
de enzima (que permanece constante) podemos obtener un rpido incremento de
v con cambios pequeos en [S].

En la zona II la velocidad permanece constante para un intervalo de [S] y se
considera que la enzima est saturada.

A concentraciones altas de S, se llega a la zona III donde se observa una
disminucin de la velocidad a medida que aumentamos ms y ms S.

Este comportamiento se interpreta como una inhibicin de la enzima por exceso
de sustrato.

El anlisis del comportamiento de la enzima en las zonas I y II condujo a Michaelis
y Menten a plantear que la enzima (E) se une reversiblemente con el sustrato (S)
formando un complejo inestable (ES) que da lugar, irreversiblemente, al producto
(P) y a la enzima libre (E), la formacin del complejo ocurre por
complementariedad estrica entre el sustrato y una regin de la enzima,
denominada el sitio activo, donde se realiza la catlisis. El Sitio activo es entonces
un grupo de aminocidos de la protena que son los responsables de la actividad
cataltica y que, como consecuencia de la estructura terciaria, se disponen
espacialmente de tal manera que la conformacin del conjunto es complementaria
de la conformacin del sustrato.

El planteamiento de Michaelis y Menten se puede resumir en la expresin:

63

P E S E S E
2
1
1
k
k
k
+ +
Ecuacin 1

donde k
1
= rata de formacin de ES.
k
1
= rata de descomposicin reversible de ES.
k
2
= rata de descomposicin irreversible de ES.

La constante k
2
es considerablemente menor que k
1
o k
-1
y por tanto la velocidad
global del proceso estar dado por:

[ ] ES k v
2
= Ecuacin 2

En otras palabras el paso limitante, ser la descomposicin de ES en producto
ms enzima.

Teniendo en cuenta las consideraciones anteriores es posible deducir a partir de la
ecuacin (1) la ecuacin de Michaelis-Menten
1
que describe el comportamiento de
la enzima:

[ ]
[ ] S KM
S max V
v
+
= Ecuacin 3

Donde Vmax (velocidad mxima) y KM (constante de Michaelis) son dos
parmetros importantes de la enzima dado que en la zona I tenemos una cintica
de primer orden, podemos considerar que habr un momento en el cual la
velocidad es igual a la mitad de la velocidad mxima, es decir:

max V
2
1
v =

Reemplazando en la ecuacin 3:
[ ]
[ ] S KM
S max V
max V
2
1
v
+
= =

Dividiendo por Vmax y despejando, tendremos:

[ ] S KM = Ecuacin 4

Esta ecuacin nos proporciona el significado fsico de KM que ser entonces la
concentracin del sustrato (moles/litro) necesaria para alcanzar la velocidad
semimxima.


64

Por su parte Vmax es la velocidad obtenida cuando la enzima se encuentra
saturada con sustrato o sea la situacin que se presenta cuando los sitios activos
de todas las molculas de enzima se encuentran ocupados por sustrato.

En condiciones experimentales definidas (sustrato, pH, temperatura), la constante
de Michaelis (KM) tiene un valor propio para cada enzima y es uno de los
parmetros que la caracterizan, al igual que el PM, pl, composicin en
aminocidos, etc.

Los valores de KM y Vmax de una enzima se pueden determinar por mtodos
grficos realizando en el laboratorio la cintica con un sustrato dado en
condiciones experimentales bien definidas, de manera que al calcular las
velocidades (cantidad sustrato transformada/ mililitro/ minuto) alcanzadas con
diferentes concentraciones de S se obtiene la figura 19.

Figura 19: Efecto de la concentracin de sustrato sobre la velocidad de una reaccin enzimtica.

En esta grfica, el valor de Vmax se obtiene al extrapolar sobre el eje Y la
velocidad con la enzima saturada. Si tomamos 1/2 de Vmax e interpolamos en la
grfica, obtenemos KM.

Debido a que es posible cometer errores experimentales que no se detectan en la
grfica, esta determinacin de KM y Vmax no es muy apropiada y se prefiere
emplear mtodos como el de Lineweaver- Burk o el de Eadie-Hofstee
2
.

En el primero de ellos, se opta por transformar la ecuacin de Michaelis Menten
as:

[ ]
[ ] S KM
S max V
v
+
=

Tomando los inversos tenemos:


65

[ ]
[ ] S max V
S KM
v
1 +
=

[ ] max V
1
S
1
.
max V
KM
v
1
+ = Ecuacin 5

La ecuacin 5 corresponde a una lnea recta: Y = mX + b. En donde: Y = 1/v y X =
1/[S].

La pendiente m = KM/Vmax; y la intercepcin en el eje Y, b = 1/Vmax.

Graficando 1/v versus 1/ [S] tendremos (figura 20) que la interseccin en el eje X
corresponde a -1/KM y su valor absoluto expresa la afinidad de la enzima por su
sustrato. Dado que KM (si k
2
< k
-1
) corresponde a la disociacin de ES E+S.

Figura 20: Representacin grfica segn Lineweaver-Burk de v vs [S]

Esta representacin tiene la ventaja de poder detectar errores experimentales en
la determinacin de la cintica; cuando esto ocurre la dispersin de los datos no
permite trazar una recta por los puntos obtenidos.

El mtodo de Eadie- Hofstee transforma la ecuacin de Michaelis-Menten de la
siguiente manera:
[ ]
[ ] S KM
S max V
v
+
=

Tomamos los inversos y obtenemos la ecuacin 5:
[ ] max V
1
S
1
.
max V
KM
v
1
+ =

66

Multiplicando los dos miembros por (Vmax.v):

( ) ( )
[ ]
( )
max V
1
v . max V
S
1
.
max V
KM
v . max V
v
1
v . max V + =
[ ]
v
S
v
. KM max V + =
[ ] S
v
. KM max V v = Ecuacin 6

Graficando v versus v/[S] tendremos la figura 20:

Representacin grfica segn Eadie-Hofstee de v vs [S]

Si los datos obtenidos se ajustan a una recta, se descartan eventuales errores
experimentales y de la grfica se obtienen directamente los valores de KM y
Vmax.

Es conveniente resaltar que, sea cual fuere el mtodo que usemos para hallar KM
y Vmax, solo necesitamos determinar experimentalmente la velocidad de
transformacin del sustrato (a una [S] dada) la cual se hace generalmente por
colorimetra. Las referencias 4 y 5 son un buen ejemplo de cmo se determinan
cuidadosamente estos parmetros.

Aunque la ecuacin de Michaelis-Menten es muy til para describir el
comportamiento cintico de las enzimas, es conveniente que tengamos en cuenta
que en algunos casos se pueden presentar discrepancias debido a la formacin de
varios intermediarios inestables (ecuacin 7) o a la presencia de ms de un
sustrato susceptible de ser transformado (ecuacin 8) o la combinacin de las dos
situaciones.

67

P E EP EZ ES S E
4
3
3
2
2
1
1
k
k
k
K
k
k
k
+ +

Ecuacin 7

1
k
1
k
k
1
P E ES S E
2
1
1
+ +

2
k
2
k
k
2
P E ES S E
4
3
3
+ +
Ecuacin 8

Esto naturalmente complica considerablemente el anlisis cintico y las
ecuaciones son mucho ms complejas. Para fines prcticos la determinacin de
KM y Vmax, en condiciones de laboratorio bien definidas, se realiza como lo
hemos descrito.

12.1 Actividad enzimtica

La actividad de las enzimas se puede expresar como:

12.2 Actividad especfica

Se define como el nmero de unidades por mg de protena. Una unidad es la
cantidad de enzima que transforma 1 micromol (10
-6
moles) de sustrato por
minuto, a 25C.

Esta forma de expresar la actividad es la ms corriente y nos da una medida de la
pureza de la enzima ya que los valores aumentan a medida que se avanza en el
aislamiento de la enzima.

12.3 Nmero de transformacin

Se define como el nmero de molculas de sustrato transformadas por una
molcula de enzima en la unidad de tiempo. Para calcular el nmero de
transformacin se requiere conocer el PM de la enzima lo cual implica su
purificacin previa. Los nmeros de transformacin para la mayora de las
enzimas son del orden de 10
4
- 10
5
y en algunos casos ste puede llegar hasta
10
6
- 10
7
; esto nos da una idea del enorme poder cataltico de estas protenas.

Leccin 13: Factores que influencian la actividad enzimtica


68

Dado que el sitio activo es el responsable de la actividad cataltica de la enzima,
es esencial preservar su conformacin en la protena nativa. Aquellos factores que
modifican la conformacin de las protenas influirn por consiguiente en la
actividad enzimtica y nos referimos en particular al pH, la temperatura y los
efectores.

13.1 pH

La actividad enzimtica en funcin del pH puede cambiar en la forma indicada en
las siguientes grficas:

Figura 21: Ejemplos de actividad de algunas enzimas en funcin del pH

Observamos que cada enzima tiene un pH (o un rango de pH, para algunas) en el
que su actividad es mxima; este valor corresponde al pH ptimo el cual es una
consecuencia de la intervencin de:
Los pK
a
de los grupos laterales presentes en el sitio activo que efectan la
catlisis.
Los pK
a
de los grupos que en el sitio activo ayudan a fijar el sustrato
Los pK
a
de las cadenas laterales que contribuyen a estabilizar la conformacin
global de la enzima.
Los pK
a
de los grupos funcionales del sustrato, si ste tiene cargas

La mayora de las enzimas tienen pH ptimos cercanos a la neutralidad pero que
no necesariamente coinciden con el pH intracelular; esto sugiere que en
condiciones fisiolgicas algunas enzimas no actan al mximo de su capacidad.

El pH ptimo puede variar por la influencia de los siguientes factores:

Origen de la enzima; las enzimas que modifican el mismo sustrato pero que
por provenir de diferentes fuentes difieren en su pH ptimo, pl, KM, velocidad
de inactivacin trmica, etc., reciben el nombre de isoenzimas; en ellas las
variaciones en pH ptimo pueden ser hasta de 2,5 a 3 unidades de pH.

69

Origen del sustrato: en estos casos la variacin en pH generalmente es
menor de 0,5 unidades de pH.
Concentracin de sustrato: a bajas concentraciones de sustrato, KM vara
con el pH y el pH ptimo se desplaza hacia la zona donde KM aumenta al
aumentar el pH. Esta es la razn por la cual KM se determina a [S] elevadas
con el fin de evitar los cambios en funcin de pH.
Presencia de sustancias asociadas: Generalmente las impurezas modifican
el pH ptimo por razones que no son claras.

Las variaciones de actividad con cambios de pH indican la necesidad de usar
tampones cuando se est trabajando con enzimas, lo cual nos permite eliminar
estas variaciones.

13.2 Temperatura

Las enzimas presentan un comportamiento dual respecto a la temperatura. En el
rango 5C - 50C la actividad aumenta, ya que la velocidad de reaccin se
incrementa. A temperaturas superiores (60C a 80C) la gran mayora de las
enzimas se inactivan debido a la desnaturalizacin que sufren. Una excepcin a
este comportamiento la constituyen las enzimas de las bacterias termfilas que se
encuentran en hbitats muy clidos, como son las fuentes termales.

Para cada enzima existe una temperatura ptima en la cual su actividad es
mxima.

13.4 Efectores

Con este nombre designamos iones o molculas pequeas que activan o inhiben
las reacciones enzimticas.

Los activadores ms corrientes son iones como Ca
+2
, Mg
+2
, Mn
+2
, Zn
+2
o grupos
reductores (por lo general -SH).

Los inhibidores son de una naturaleza ms variada y provocan segn el caso,
diferentes tipos de inactivacin.

Leccin 14: Inhibicin Enzimtica

La inhibicin especfica de la accin enzimtica puede ser de tipo reversible o de
tipo irreversible. El primer tipo incluye la inhibicin competitiva y la no competitiva y
el segundo se refiere a la inhibicin incompetitiva. A continuacin examinaremos
las caractersticas de cada una y cmo podemos identificarlas por su
representacin grfica segn Lineweaver-Burk.


70

14.1 Inhibicin competitiva

En este tipo de inactivacin, el inhibidor (I) posee una estructura qumica similar a
la del sustrato: esto le permite fijarse reversiblemente en el sitio activo de la
enzima excluyendo el sustrato que previamente se haya unido. La enzima no
modifica el inhibidor porque ste no posee enlaces susceptibles al ataque
cataltico, que si estn presentes en el sustrato. La situacin puede representarse
con las reacciones:
P E ES S E
2
1
1
k
k
k
+ +

EI I E
3
3
k
k
+

Ecuacin 9

De acuerdo con esto podemos deducir que la magnitud de la inhibicin depender
de la [I] y que un exceso de S elimina la inhibicin pues se usar toda la enzima
libre y el equilibrio se desplazar hacia la formacin de ES, y de all a la formacin
de P.

A partir de las ecuaciones planteadas se puede obtener
1
la ecuacin 10:

[ ]
[ ]
*
i
*
i
max V
1
S
1
K
I
1
max V
KM
v
1
+
+ = Ecuacin 10

Donde
v = velocidad de reaccin en presencia del inhibidor.
*
max V = velocidad mxima en presencia del inhibidor
K
constante de inhibicin,

[ ][ ]
EI
I E
K
i
=

La cintica con y sin inhibidor competitivo se presentara grficamente as:

71

Figura 22: Catlisis enzimtica inhibida competitivamente

Observamos que con un exceso de sustrato alcanzamos la misma Vmax que en
su ausencia. No sucede lo mismo para los valores de KM pues en presencia de
inhibidor (KM (2)) la constante es ms alta, o lo que es lo mismo, disminuye la
afinidad por el sustrato.

Usando la ecuacin 10 y segn el mtodo de Lineweaver-Burk, tendremos la
figura 21 donde se visualiza fcilmente el cambio en KM y la igualdad en el valor
de Vmax.

Esta inhibicin ha sido estudiada a nivel molecular con la lisozima, glicosidasa que
degrada la pared celular de las bacterias y un trisacrido sinttico o de manera
ms elemental con la deshidrogenasa succnica.

Figura 22: Representacin segn Lineweaver-Burk de la inhibicin competitiva

72

Esta enzima cataliza la oxidacin del succinato o fumarato segn la reaccin.

El malonato o el oxalacetato, cuyas estructuras son:

Malonato Oxalacetato

Actan como inhibidores competitivos pues al igual que el sustrato natural poseen
dos grupos COO
-
y un tamao adecuado para encajar en el sitio activo de la
enzima.

14.2 Inhibicin no competitiva

Se presenta por la unin reversible del inhibidor a un sitio de la enzima libre o con
sustrato, diferente del sitio activo. Esta unin provoca cambios en la conformacin
de la enzima alterando as el sitio activo e impidiendo por consiguiente la
transformacin del sustrato. Las reacciones que ocurren simultneamente son:
P E ES S E + +

EI I E +

Ecuacin 11

EIS I ES +

Ecuacin 12

En la reaccin 12, la enzima no es capaz de modificar S por las razones anotadas;
en consecuencia con un exceso de sustrato no podemos recuperar la totalidad de

73

las molculas de enzima y por tanto no alcanzaremos la misma Vmax obtenida en
ausencia de inhibidor. La figura 23 ilustra lo anterior.

Figura 23: Cintica de una enzima inhibida no competitivamente

El tratamiento matemtico de esta situacin
1
resulta en la ecuacin 13:

[ ]
[ ]
[ ]
+ +
+
i
*
i
*
i
K
I
1
max V
1
S
1
K
I
1
max V
KM
v
1
Ecuacin 13

La cual se representa en la figura 24 y comparada con la enzima en ausencia de
inhibidor muestra que decrece la Vmax pero que KM no cambia.

Este tipo de inhibicin se presenta con frecuencia con metabolitos intermedios que
se combinan con enzimas reguladoras disminuyendo la actividad de sus sitios
catalticos.

Figura 24: Representacin segn Lineweaver-Burk de la inhibicin no competitiva


74

14.3 Inhibicin Incompetitiva

La caracterstica ms importante de esta inhibicin es la unin irreversible (por
enlaces covalentes) del inhibidor con una de las cadenas laterales de los
aminocidos presentes en el sitio activo; en algunos casos la unin irreversible se
hace sobre el complejo ES. Esta inhibicin se presenta ms frecuentemente con
enzimas que tienen mecanismos complejos y la representacin grfica de la
ecuacin de Lineweaver-Burk es:

Figura 25: Representacin de la inhibicin Incompetitiva

Y su expresin matemtica es:
[ ]
[ ]
+ + =
i
* *
i
K
I
1
max V
1
S
1
.
max V
KM
v
1

De la figura 25 deducimos que en este tipo de inhibicin los valores de KM y Vmax
son menores que los obtenidos en ausencia de inhibidor.

El ejemplo clsico de inhibicin Incompetitiva es la reaccin de compuestos
organofosforados (clase a la cual pertenecen muchos insecticidas) con los grupos
OH de la serina presente en el sitio activo de muchas enzimas. El diisopropil
fluorofosfato.

(DPF) inactiva de esta forma a enzimas como la acetil colinesterasa (necesaria
para la transmisin de los impulsos nerviosos), la tripsina, quimotripsina, elastasa
(proteasa), etc.

75

Podemos representar de manera simplificada la accin del DPF as:

Si hacemos una revisin de lo tratado en esta seccin vemos que es posible por
comparacin de las grficas de Lineweaver- Burk, formarse una idea del tipo de
inhibicin y deducir con base en ello cules AA participan en el sitio activo o cul
es la estructura aproximada del sustrato natural o cules otros compuestos podra
actuar como inhibidores.

En la prxima seccin discutiremos algunos aspectos sobre la estructura de sitios
activos de enzimas, que en parte se han aclarado con el uso de inhibidores.

Leccin 15: Sitios activos de algunas enzimas

Debido a la gran variedad de enzimas existentes y por ende de sitios activos nos
limitaremos a considerar los sitios catalticos de algunas de las enzimas mejor
conocidas. Es conveniente recordar que para establecer la estructura de un sitio
activo es necesario conocer en detalle la estructura terciaria de la enzima y puede
ser de gran ayuda aclarar para un inhibidor dado, cul es el tipo de inhibicin que
se presenta. A su vez el conocimiento del Sitio activo, juntamente con los
parmetros que inciden en la actividad enzimtica, permite proponer el mecanismo
molecular por el cual se efecta la catlisis.

Un grupo de enzimas particularmente bien estudiado lo constituyen las proteasas
de la familia de la tripsina que adems de esta enzima incluye la quimotripsina,
elastasa, trombina y la proteasa B de Streptomices griseus (una bacteria). Usando
inhibidores incompetitivos (DPF y otros) se ha establecido que en estas protenas

76

el sitio activo est formado por Ser, His y Asp que segn Blow (lecturas
recomendadas 3 y 4) dan lugar a un sistema relay de transferencia de protones
que le confiere al oxgeno del grupo OH de la serina, un carcter nucleoflico que
facilita el ataque del enlace peptdico y su posterior hidrlisis.

La figura 26 muestra cmo opera este sistema relay en la quimotripsna con su
Ser 195, His 57 y Asp 102.

Esta clase de sitio activo lo tienen tambin las proteasas de la familia de la
subtilisina, enzima producida por la bacteria Bacillus subtilis. En todas ellas hay
una interesante similitud de secuencias en la regin donde se localiza la serina del
sitio activo; esto ha dado lugar a la idea de una convergencia evolutiva en estas
enzimas.

Figura 26: Sistema relay Ser, His, Asp en quimotripsina

Un segundo tipo de sitio activo podemos ilustrarlo con la Caboxipeptidasa A. Esta
exopeptidasa requiere para ser activa, de la presencia de un tomo de Zn
+2
que se
ubica en una depresin en la cual est el sitio activo que se extiende como un
bolsillo al interior de la protena. Los aminocidos del sitio activo son Tyr 248, Glu
270 y Arg 145; el Zn
+2
forma enlaces coordinados con el N(His 69), (Glu 72) y N
(His 196); el cuarto ligando es el O del C = O del enlace peptdico que se va a
hidrolizar. El Zn
+2
sirve entonces para orientar el sustrato y polarizar el C=0. La
figura 26 esquematiza la situacin (lectura recomendada No. 4)


77

Figura 27: Sitio activo de la carboxipeptidasa A

El mecanismo de accin del Zn en la Caboxipeptidasa ha servido como modelo
para otras metaloenzimas que necesitan de Zn, Cu, Fe, Mo, Ni u otro metal para
realizar la catlisis; la complejacin del metal con EDTA suprime la actividad y
esto es un primer indicio de que se trata de una metaloenzimas.

El estudio del sitio activo de la lisozima es uno de los ejemplos clsicos que
integran los datos estructurales y cinticos obtenidos con esta enzima. La lisozima
es muy abundante en la clara de huevo y secreciones mucosas y su papel fue
descubierto por Fleming quien encontr que esta protena ataca las paredes
celulares bacteriales donde estn presentes como unidades alternas la N-acetil
glucosamina (NAG) y el cido N-acetilmurmico (NAM) formando la mureina1.

El mecanismo de accin de la enzima ha sido establecido por el grupo de Phillips
(lectura recomendada No.2) gracias al uso de un anlogo del sustrato natural (que
es muy difcil de obtener en forma purificada), constituido por el trisacrido NAG-
NAG-NAG.

Este compuesto acta como un inhibidor competitivo que, segn los estudios por
difraccin de rayos X del complejo lisozima-trisacrido, ocupa la mitad del sitio
activo unindose a la enzima a travs de puentes de hidrgeno e interacciones no
polares; la fijacin del trisacrido provoca un cambio conformacional en la
vecindad del sitio activo.

78

Tomando como base, adems de lo anterior, la informacin disponible sobre la
estructura primaria y terciaria, el grupo de Phillips construy un modelo con el
hexasacrido natural:

-1,4 -1,4 -1,4 -1,4 -1,4

NAG NAM NAG NAM NAG NAM que ocupa todo el sitio activo y
teniendo en cuenta la conformacin del sustrato y del sitio activo propuso el
mecanismo representado en forma simple en la figura 28.

La catlisis cido-base se realiza con la intervencin de los grupos carboxilo del
Asp 52, que por estar situado en una regin polar de la protena, se encuentra
como -C00- aun en condiciones cidas, y del Glu 35 que est en forma no
disociada debido al ambiente hidrofbico que lo rodea. Observando la figura 27, la
cesin del H
+
del Glu 35 sobre el O del enlace glicosidico (a), la estabilizacin del
in carbonio (C
+
) por el Asp 52 (b) y la intervencin de un 0H
-
(que se fija sobre el
C
+
) y de un H
+
(que se fija sobre el carboxilo del Glu 35) (c), son los pasos por los
cuales se realiza la catlisis.

Actualmente se conocen los mecanismos catalticos de algunas enzimas ms
incluyendo las proteasas de tipo tiol como la papana, que poseen una CySH en
su sitio activo.

Los ejemplos anteriores adems de describir en detalle los mecanismos
moleculares por los cuales se realiza la catlisis enzimtica, nos sirven para
ilustrar la estrecha correlacin existente entre la estructura y la funcin de las
enzimas.

Es evidente que an pequeos cambios conformacionales, que resultan en
variaciones de las distancias y posiciones espaciales de los grupos activos de la
enzima con respecto al sustrato, pueden modificar apreciablemente la funcin
cataltica (o reguladora) de la enzima.

Figura 28: Sitio activo de la
lisozima
Fuente: Prez, G. Navarro Y.
(1992). Bioqumica. Santa fe de
Bogot.: Unisur.


79

Ejercicios del Capitulo
1. Al frente de cada una de las siguientes enzimas coloque la clase y subclase a la
que pertenecen.

Enzima Clase Subclase
Tripsina
Quimotripsina
-amilasa
Lisozima
Carboxipeptidasa
Lipasas
Celulasa

2. Muestre cules de los siguientes sustratos son atacados por las enzimas
indicadas:
Sustrato Enzima
a. Hb
b. Amilosa
c. Triglicrido
d. Lisozima
e. Celulosa
f. Insulina
1. Fosfatasa
2. Oxidorreductasa
3. Quimotripsina
4. Lipasa
5. 1,4-glicosidasa
6. Carboxipeptidasa

Cules son los productos resultantes en cada caso?
Cules seran las posibles aplicaciones de estas enzimas en: alimentos, ciencias
agrarias, medicina y ciencias pecuarias?

3. siguiendo lo expuesto en cintica enzimtica (mdulo 2011, leccin 12),
especficamente donde se trata del clculo experimental de Km y Vmx por el
mtodo de Linewearver-Burk, desarrollar el siguiente ejercicio.

En la siguiente tabla se presenta los valores
de concentracin de sustrato (S) en mM y la
Vo (Vmax) mM/seg, de una reaccin en
ausencia (A) y en presencia (B) de un
inhibidor:
Utilizando el mtodo descrito por Lineweaver Burk, se debe calcular los valores de
Km y V
o
(Vmax) respectivamente para A y B.


80

LECTURAS COMPLEMENTARIAS LECTURAS COMPLEMENTARIAS LECTURAS COMPLEMENTARIAS LECTURAS COMPLEMENTARIAS
Las actividades que aqu se presentan, son a nivel formativo y no cuantitativo (es decir, no Las actividades que aqu se presentan, son a nivel formativo y no cuantitativo (es decir, no Las actividades que aqu se presentan, son a nivel formativo y no cuantitativo (es decir, no Las actividades que aqu se presentan, son a nivel formativo y no cuantitativo (es decir, no
generan calificacin). generan calificacin). generan calificacin). generan calificacin).

Seor estudiante de regencia de farmacia: analice las siguie Seor estudiante de regencia de farmacia: analice las siguie Seor estudiante de regencia de farmacia: analice las siguie Seor estudiante de regencia de farmacia: analice las siguientes situaciones: ntes situaciones: ntes situaciones: ntes situaciones:

1. Durante su vida profesional, encontrar formulaciones con medicamentos para tratar la
deficiencia de protenas; dichas deficiencias estn relacionadas con las siguientes causas:

Consumo de protenas de baja calidad
Elevada excrecin de protenas en la orina, en casos de lesiones renales o
hemorragias.
Problemas nutricionales como Marasmo y Kwashiorkor.
La deficiencia tambin puede ser consecuencia de uan menor Resistencia a la
infeccin dado que se requiere una adecuada ingesta de protenas para la formacin de
fagocitos, leucocitos y anticuerpos.
El estrs, debido, por ejemplo, a traumatismos accidental o quirrgico, embarazo y
lactancia tambin puede causar deficiencia de aminocidos.
Es importante, recomendar, siempre que sea posible, el consumo de alimentos naturales
de alto contenido proteico. Cuando el mdico as lo indique, recomendar concentrados
proteicos como por ejemplo leche descremada en polvo adicionada casena y lacto
albmina.

Cuando no se puede suministrar grandes cantidades de alimentos con elevado contenido
proteico o cuando el paciente es incapaz de digerir protenas enteras se puede indicar
hidrolizados o mezclas de aminocidos cristalizados.

2. En espacios laborales como farmacias de servicios de hospitalizacin, sala de partos y
obstetricia, frecuentemente se reciben formulas con medicamentos como oxitocina (
pitocin), y sus antagonistas ( atosiban: cido, 1-(3-mercaptopropanoico)-2-(o-etil-D-tirosine)-
4-L-treonina-8-L-oxitocina). Como profesional en el rea de los medicamentos, debe Usted
saber que la oxitocina es un nanopptido usado para inducir y favorecer el parto en caso
de partos detenidos. La oxitocina es una hormona de naturaleza proteica, por lo tanto, su
composicin qumica es a base de aminocidos. El antagonista atosiban, es un
medicamento inhibidor de la hormona oxitocina y vasopresina y se usa para detener la
progresin de un parto prematuro.

Actividades formativas:
Del anlisis de cada caso, subraye las palabras que se relacionan con las temticas del
captulo 1 y 2 y redacte con sus propias palabras la definicin de cada una de ellas.


81

Dibuje la estructura de la hormona oxitocina y mencione los 9 aminocidos que la
componen. Tome cada uno de ellos, y menciones si son bsicos, polares, no polares o
cidos.

Dibuje la estructura de la hormona vasopresina y mencione los 9 aminocidos que la
componen. Tome cada uno de ellos, y menciones si son bsicos, polares, no polares o
cidos. Que similitudes y diferencias puede tener con la oxitocina desde el punto de vista de
la composicin de aminocidos.

De acuerdo al tema de inhibicin enzimtica y a los conceptos adquiridos, relacione el tipo
de inhibicin que puede presentar el medicamento atosiban para actuar como antagonista
de la oxitocina. Para ello debe investigar algo ms sobre este medicamento.
Actividad formativa: realice una pequea investigacin sobre: Dentro de los estantes de
medicamentos, figuran complementos alimenticios que tiene dentro de sus componentes
activos aminocidos como la glicina o glicocola; Qu sabe Usted de este aminocido, que
tipo de aminocido es?, Por qu se recomienda en el tratamiento de la diabetes?.

Seor estudiante de Ingenieria de alimentos y Tec Seor estudiante de Ingenieria de alimentos y Tec Seor estudiante de Ingenieria de alimentos y Tec Seor estudiante de Ingenieria de alimentos y Tecnologa de alimentos: nologa de alimentos: nologa de alimentos: nologa de alimentos:
analice las siguientes situaciones: analice las siguientes situaciones: analice las siguientes situaciones: analice las siguientes situaciones:

El valor nutricional de las protenas de la dieta incluye el reconocimiento de la calidad y cantidad de
las protenas. Los seres humanos carecen de la capacidad para sintetizar todos los aminocidos
requeridos para uan buena salud normal. Por lo general, se recomienda que un adulto ingiera 1,5 g
de protenas/Kg por da, esta cantidad relaciona uan cantidad adecuada de aminocidos esenciales
y no esenciales. Las protenas del huevo, carne y la leche se consideran de mayor valor nutricional.

1. En operaciones sencillas, como tratamientos trmicos de la leche, si las variables de tiempo y
temperatura se exceden, se tiene un producto en donde muy posiblemente, se evidencien
reacciones de pardeamiento y el producto adquirir un color mbar y un sabor a cocido. Este tipo
de reacciones se producen por la asociacin qumica de los azcares de la leche ( lactosa) y el
aminocido lisina ( exactamente por el amino en la posicin psilon en la cadena lateral) , lo que en
este estado, este aminocido, no estar disponible para el organismo y el producto tendr un bajo
contenido proteico, haciendo de ste indigerible, ya que las protenas de la leche cuando la lisina se
encuentra enlazada a los azcares de la leche, es resistente a las proteasas digestivas.

Actividad formativa:
Del anlisis del caso, subraye las palabras que se relacionan con las temticas del captulo 1, 2 y 3
redacte con sus propias palabras la definicin de cada una de ellas.

Qu tipo de aminocido es la lisina?. Que estructura tiene y cul es su grupo (psilon).
Qu importancia tiene la cadena lateral de la lisina en las reacciones de pardeamiento de la leche?
Por qu en este estado disminuye el aporte nutricional de la lisina?
A que hace referencia el trmino proteasa.

2. En la elaboracin de quesos, la simple prctica de adicionar cuajo ( renina) a la leche causa la
precipitacin de las caseinas, es especfica para cortar enlaces por el extremo carboxilo entre la

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fenilalanina y metionina a pH 6.0-5.0 y a una T 37-43C. Una vez que la caseina se ha hidrolizado, el
pH del medio baja hasta 4.6, donde las caseinas experimenta la mnima solubilidad y precipitan en
forma de cogulo de caseina o cuajada. La renina consta de una sola cadena polipeptdica, con
grupos sulfihidrilos internos.

Actividad formativa: Del anlisis del caso , subraye las palabras que se relacionan con las temticas
del captulo 1, 2 y 3 redacte con sus propias palabras la definicin de cada una de ellas.
Por qu la renina debe actuar a un pH y una T adecuada. Que implica para la produccin de
quesos alterar estas condiciones?
Los trminos precipitar y desnaturalizar protenas son iguales? Argumente su respuesta.
Qu tipo de aminocidos es la fenilalanina y la metionina.
Cul es el sustrato de la renina.
Se puede decir que a pH 4.6, las caseinas precipitan porque las interacciones caseina agua se
pierden debido a que a este pH las cargas elctricas de las caseinas son iguales a cero, est en forma
de in Zwitterion. Esto implica que las caseinas llegan a un pH conocido como?, argumente su
respuesta.
Si la renina tiene una sola cadena polipeptdica, con grupos sulfihidrilos internos; que nivel de
estructuracin puede adoptar y que aminocidos estn implicados en la formacin de puentes
disulfuro.

Seor estudiante del Programa Profesional de Qumica: Seor estudiante del Programa Profesional de Qumica: Seor estudiante del Programa Profesional de Qumica: Seor estudiante del Programa Profesional de Qumica: analice las siguientes
situaciones:

Las estructuras de las diferentes Biomolculas se han podido elucidar gracias a las tcnicas de
qumicas, es ah en donde se resalta la relacin entre la qumica y la bioqumica; desde el nivel
molecular al atmico, por ejemplo: La estructura por difraccin de rayos X de la lisozima, fue
determinada por David Philips en 1965, fue la segunda estructura determinada de una protena y
la primera de uan enzima con alta definicin. Mediante esta tcnica, se determin, que la lisozima
forma una hoja beta antiparalela, de tres cadenas.

Actividad for Actividad for Actividad for Actividad formativa: mativa: mativa: mativa: Del ejemplo, subraye las palabras que se relacionan con las temticas del
captulo 1, 2 y 3 redacte con sus propias palabras la definicin de cada una de ellas.
Que conceptos deba manejar el Qumico y fsico David Philips para llegar a elucidar la estructura
de la lisozima?
Cul es el sustrato de la lisozima?

Las protenas de acuerdo a su composicin y conformacin en aminocidos adoptan estructuras, se
conocen: la estructura primaria, secundaria y terciaria. Estos plegamientos o estructuras se relacionan
con temas de fisicoqumica en trminos de plegamiento de protenas y relacionan a la segunda ley de
la termodinmica (Entropa) y las interacciones que exista entre puentes de hidrgeno, interacciones
hidrofbicas y fuerzas de van der Waals.
Actividad formativa: Actividad formativa: Actividad formativa: Actividad formativa: Del enunciado, subraye las palabras que se relacionan con las temticas del
captulo 1, 2 y 3 redacte con sus propias palabras la definicin de cada una de ellas.
Qu caractersticas tiene una estructura primaria, secundaria y terciaria .
Que tipos de interacciones se presentan en una estructura primaria, secundaria y terciaria
Cmo explica la aplicacin de la segunda ley de la termodinmica y la conformacin estructural de
las protenas.

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AUTOEVALUACION DE LA UNIDAD 1

1. Ilustre la estructura general de los aminocidos que constituyen las protenas e identifique sus
caractersticas generales.

2. Establezca la correspondencia entre los trminos de la columna de la izquierda y los de la
derecha, que pueden ser vlidos para un aminocido. Cada trmino puede ser usado una vez,
varias veces o ninguna vez.

a. Glutmico ( ) 1. Aminocido bsico
b. Valina ( ) 2. Aminocido aromtico
c. Lisina ( ) 3. Aminocido azufrado
d. Asprtico ( ) 4. Aminocido con grupo fenlicos
e. Triptfano ( ) 5. Aminocido cido
f. Metionina ( ) 6. Aminocido neutro
g. Arginina ( ) 7. Aminocido con grupo imidazol.

3. Explique en qu consiste el carcter anftero de los aminocidos.

4. Explique cmo se forma un enlace peptdico.

5. Relacione los trminos correspondientes:
a. Ala - Gly - Val - Asp ( ) 1. Dipptido
b. Trp - Lys ( ) 2. Tetrapptido
c. His - Met - Leu - Gly - Glu ( ) 3. Tripptido
d. Arg - Arg - Ser ( ) 4. Pentapptido

6. Construya una tabla con los cuatro tipos de aminocidos de la siguiente manera:

Nombre Abreviatura Estructura pK
a
del grupo R Tipo

7. A partir de los valores dados en la tabla 1 represente las curvas de titulacin para cada uno de
los siguientes aminocidos. Ubique las zonas con capacidad buffer y calcule el pl para cada uno:

Aminocido -COOH -NH
2
R
His
Arg
Lys
Asp
Ser
Gly
1,8
2,2
2,2
2,1
2,2
1,9
9,2
9,0
8,9
9,8
9,1
9,2
6,0
12,5
10,5
3,9

Valores de pK
a
de los grupos de algunos aminocidos


84

8. Usando los valores de PKa de la tabla 1, calcule los pl de los siguientes pptidos:

a) Arg-Gly-Asp-Ser
b) Ser-Lys-His

9. Teniendo como criterio la naturaleza qumica de sus cadenas laterales, cmo puede clasificar
los aminocidos? Cite dos ejemplos en cada caso, indicando en los casos pertinentes, los valores
de pK de los grupos R.

10. Explique a partir de la curva de disociacin que puede dibujar a partir de los siguientes datos,
porqu la His es el nico AA con capacidad tampn a pH fisiolgico.

Grupo pK
a

-COOH
-NH
2

R-(imidazol)
1.8
9.2
6.0
pK del grupo de la His

11. Describa las caractersticas del enlace peptdico.

12. Enuncie los tipos de degradacin a que puede ser sometido un pptido, identificando los
agentes que los provocan y los mtodos de anlisis usados en cada caso.

13. Cite los diferentes factores que influyen en la solubilidad de las protenas. Recuerde cules son
los factores que afectan la interaccin de las protenas con un solvente dado.

14. Explique cmo estn definidos los niveles de organizacin estructural de las protenas.

15. Compare las caractersticas de cada una de las clases de estructura secundaria que puede
adoptar una protena. D un ejemplo en cada caso.

16. Explique la correlacin existente entre la estructura y la funcin de:
a. Hemoglobina
b. Fibroina

17. Explique las relaciones existentes entre la composicin en AA, el pl de la protena y el pH de la
solucin con:

c. La solubilidad de la protena
d. Las propiedades anfteras
e. Las interacciones con iones

18. Cite las diferentes formas como se puede desnaturalizar una protena.

19. Analice las consecuencias de la desnaturalizacin sobre la actividad biolgica de las protenas.

20. Explique el significado del trmino grupo prosttico.

21. Establezca la diferencia entre estado en equilibrio y estado estacionario.


85

22. Si se tiene el pptido indicado. Cules sern los fragmentos resultantes del ataque con:

a. Quimotripsina
b. Carboxipeptidasa A (2 ataques sucesivos)
c. Tripsina
d. Aminopeptidasa (3 ataques sucesivos)
e. - amilo-1, 6-glicosidasa

GIu-Leu-Ala-Phe-Arg-Met-Val-Lys-His-Trp-Gly-Ala

23. En la hidrlisis de - Glicerotosfato con fosfatasa intestinal (pH 9,2 a 37C), se determin el
efecto de la concentracin de sustrato sobre la actividad enzimtica. La determinacin del fsforo
resultante a los 20 minutos de hidrlisis se realiz colorimtricamente obtenindose los siguientes
datos:
(-glicerofosfato)
moles/ml
(Fosfato)
nano moles/ml
(10
-9
moles/ml)
2
3
8
12
16
20
40
186.7
311.2
470.1
646.6
706.5
742.9
1189.7

Calcule la velocidad para cada concentracin de sustrato, y con el mtodo de Lineweaver-Burk
determine los valores de KM y Vmax.

24. Teniendo en cuenta las caractersticas de los diferentes tipos de inhibicin, deduzca de cada
una de las siguientes grficas:

a. Tipo de inhibicin
b. Cmo cambian los valores de KM y Vmax respecto a los obtenidos sin inhibidor. De qu
otra manera podra representar grficamente estas inhibiciones?

25. Escriba las caractersticas que sirven para identificar la accin de las enzimas. D ejemplos
en cada caso?

26. Teniendo en cuenta el tipo de reaccin que catalizan, cmo se pueden clasificar las enzimas?

27. Analice las diferentes zonas que se pueden presentar en la catlisis enzimtica.


86

28. Cmo se pueden caracterizar cinticamente las reacciones enzimticas? Explique el
significado fsico de los parmetros involucrados en este anlisis.

29. Explique cmo influyen el pH, la temperatura y los efectores en la actividad de las enzimas.

30. Compare entre s los distintos tipos de inhibicin enzimtica

LECTURAS RECOMENDADAS

Usted puede profundizar algunos de los temas estudiados del captulo 1y 2
consultando las siguientes referencias:

1. Protenas/P. Doty: En: La base molecular de la vida /Julio R Villanueva:
Lecturas del Scientific American.- - Madrid: Blume, 1971.- - p31.
2. La molcula de la insulina / E.O.P. Thompson. - - En: Ibid., p.24
3. La molcula de hemoglobina / M. F. Perutz. - - En: Ibid, p39.

Usted puede profundizar algunos de los temas estudiados del captulo 3
consultando las siguientes referencias:

1. Enzyme Kinetics /R.A. Alberty. - - Advances in Enzymology. - - Vol 17, 1956.- -
p1
2. La estructura tridimensional de una enzima / D.C. Phillips.- -En: Las bases
moleculares de la vida/ R.H. Haynes; P:L. Hanawalt.- - San Francisco:
Freeman Co, 1968.
3. Serine proteases. Structure an mechanism of catalysis /J.Kraut.- - Annual
Review Biochemistry. - - Vol 46, 1977.- - p331
4. Biochemistry / D. E. Metzler. - - New York: Academic press, 1977.- - p 374-379.

BIBLIOGRAFIA USADA EN LA ACTUALIZACION DE LA UNIDAD

Cheftel (1999). Protenas alimentaras: bioqumica, Propiedades funcionales, valor
nutritivo, modificaciones qumicas. Barcelona. Acribia.
Litwack, G. (1967). Bioqumica experimental. Barcelona: Omega.
Rogelio Hernndez M (1979). Bioqumica experimental. Mxico: Limusa.
Plumer,D (1981). Bioqumica prctica. Londres: McGraw Hill.
Ramrez, R.- segunda edicin (2009). Qumica de alimentos. Bogot: Universidad
Nacional Abierta y a Distancia.

87

UNIDAD DIDACTICA 2: CIDOS NUCLICOS Y BIOENERGTICA

INTRODUCCION

Bioqumica debe manejar, como son las generalidades, clasificacin y estructura
de los cidos nucleicos.

de los programas de ingeniera de alimentos, tecnologa de alimentos, qumica y
regentes de farmacia, el manejo y comprensin de los temas que en esta unidad
se presentan; los nexos de la bioqumica con estos campos disciplinares se
derivan en que la bioqumica como parte de las ciencias biolgicas maneja los
conceptos tericos derivados de investigaciones en donde se explican el
funcionamiento y mecanismos qumicos a nivel celular para el mantenimiento de
los procesos vitales de organismo de origen vegetal y animal. Conocer las
generalidades, clasificacin y estructura de los cidos nucleicos, conlleva a los
estudiantes de los programas mencionados, a comprender el papel fundamental
de la transmisin de los caracteres genticos para la conservacin, modificacin y
creacin de nuevas caractersticas genticas.

Esta unidad es la base para que los estudiantes en formacin profesional
relacione las tcnicas del ADN recombinante, la cual es muy aplicada en todos los
perfiles a quien va dirigido este curso.

contexto real de sus profesiones. Para el rea de alimentos, la relacin con los
cidos nucleicos est en la produccin de nuevas protenas y enzimas utilizando la
biotecnologa alimentaria. Para los regentes, comprender la obtencin de
medicamentos a partir de la manipulacin contenida en el ADN y frmacos a
base de nucletidos. Los profesionales en Qumica, les resulta importante
comprender esta unidad para aportar a nuevas tcnicas analticas para el estudio
de esta molculas y sus posibles aplicaciones en otras reas.



88

JUSTIFICACION

biolgicas.

cidos nucleicos; temticas que le pueden ser tiles en el perfil profesional de los
programas de ingeniera de alimentos, tecnologa de alimentos, qumica y
regentes de farmacia.

generalidades, clasificacin y estructura de nuclesidos, nucletidos, ADN y ARN;
temas de fcil comprensin pero que requieren de la activacin metacgnitiva de
presaberes de cursos como Biologa y microbiologa.


89

OBJETIVOS

CAPTULO 4: ESTRUCTURA DE BASES, NUCLESIDOS Y NUCLETIDOS

Diferencia los tipos de bases nitrogenadas que conforman los cidos
nucleicos
Analizar la formacin de nuclesidos y nucletidos.
Analizar la estructura qumica de nuclesidos y nucletidos.

CAPTULO 5: CIDOS NUCLEICOS

Diferenciar las clases de cidos nucleicos existentes con base en sus
propiedades estructurales y funcionales.
Identificar los nucletidos constitutivos de los cidos nucleicos.
Explicar las caractersticas de los diferentes niveles estructurales del DNA.
Reconocer las diferencias ms notorias en lo referente a la complejidad y
organizacin supramacromolecular del DNA en virus, procariotas y eucariotes.
Describir las caractersticas ms notables de la estructura primaria, secundaria
y terciana del t-RNA.

CAPITULO 6: INTRODUCCION AL METABOLISMO Y BIOENERGETICA

Explicar las principales actividades que se desarrollan en el metabolismo.

Ilustrar los principios de compartamentalizacin y universalidad de las vas
metablicas.

Reconocer las diferencias existentes en la utilizacin de la energa y los
elementos en la bisfera.

Identificar los factores que controlan el metabolismo en una clula.

Utilizar conceptos termodinmicos para predecir la direccin de las reacciones
metablicas.

Analizar el papel del ATP en las reacciones de fosforilacin.


90


CAPITULO 4: ESTRUCTURA DE BASES, NUCLESIDOS Y NUCLETIDOS
CAPITULO 5: ACIDOS NUCLEICOS
CAPITULO 6: INTRODUCCION AL METABOLISMO


91

CAPITULO 4: ESTRUCTURA DE BASES, NUCLESIDOS Y NUCLETIDOS

En este captulo el estudiante puede encontrar en forma breve y clara los
conceptos de las estructuras bsicas que componen los cidos nucleicos; es as
que el estudiante comienza el estudio de este captulo con la estructura de bases
nitrogenadas para llegar a comprender la formacin de los nuclesidos y
nucletidos siendo estos ltimos las unidades monomricas de los cidos ADN y
ARN.

Tambin el estudiante analiza que aparte de los nucletidos que se pueden
encontrar en los cidos nucleicos hay otros de inters en los diferentes campos
de la medicina, medio ambiente, etc.


Leccin 16: Componentes de los cidos nucleicos
10

Para Garrido, Armando. Teijon, Jos Mara (2008), la informacin gentica es
almacenada y transmitida por los cidos nucleicos ADN y ARN, que son
macromolculas resultantes de la polimerizacin de un nmero elevado de
nucletidos.

Los cidos nucleicos estn formados por tres unidades fundamentales: una base
nitrogenada, un azcar y una molcula de cido fosfrico.

La unin del azcar (ribosa o 2-desoxirribosa) y una base nitrogenada (purina o
pirimidina) por un enlace N-glucosdico se denomina nuclesido. El compuesto
formado por la esterificacin de un nuclesido por cido fosfrico es un nucletido.

10
Garrido, Armando. Teijon, Jos Mara (2008). Fundamentos de Bioqumica estructural. Madrid, Espaa:
Editorial Tebar.

92

Figura 29: Formacin de monmeros de los cidos nucleicos
Fuente: Garrido, Armando. Teijon, Jos Mara (2008). Fundamentos de Bioqumica estructural. Madrid,
Espaa: Editorial Tebar.

Los nucletidos que constituyen los cidos son desoxirribonucletidos, estos
contiene D-2-desoxirribosa para el caso del ADN, con D-ribosa, en el caso de
ARN.

Leccin 17: Estructura de bases
11

17.1 Bases

En lo referente las bases nitrogenadas tenemos dos estructuras fundamentales de
donde se derivan todas las bases constituyentes:

Bases purnicas, llamadas as por ser la purina la base original, que da
lugar a la Adenina (abreviada A) y Guanina (G) como bases comunes (o
muy frecuentes).

Purina

11

93

Adenina (A) Guanina (G)

Estas bases se encuentran tanto en DNA como en RNA.

Bases pirimidnicas, originadas en la pirimidina que genera como bases
comunes la Citosina (C); Uracilo (U) que es caracterstico del RNA y Timina
(T) que se encuentra en el DNA.

Pirimidina

Citosina (C) Uracilo (U) Timina (T)

Adems de las bases anteriores, se encuentran con alguna frecuencia,
especialmente en algunas clases de RNA, las llamadas raras (o poco
frecuentes). Generalmente estas bases son derivadas metil, hidroximetil o
productos de oxidacin o reduccin de las bases comunes. Como ejemplos
podemos citar:

Inosina (l) 1-Metil-I (Me-I) 5-metil-C (5-Me-C)


94

5 -Hidroximetil-G (5-OHMe-G) Dihidrouridina (DHU)

Seudo uridina () 2 Metil-Guanina (2Me-G o G
*
)

Ms adelante veremos cul es la importancia de estas bases raras. Es
conveniente sealar que todas las molculas anteriores tienen carcter bsico y
corresponden al tipo de aminas aromticas.

Leccin 18: Nuclesidos

18.1 el azcar

El azcar que participa en la formacin de los nuclesidos es una aldosa de cinco
carbonos llamada ribosa.

Como ya se ha mencionado, en el ADN, esta ribosa ha perdido un oxgeno del
grupo hidroxilo en la posicin 2, por ello toma el nombre de desoxi:

Figura 30: Pentosas presentes en los cidos nucleicos

95

En general:

En el ADN: D-2- desoxirribosa
En el ARN: D-ribosa

18.2 Formacin de nuclesido

Se forman por la unin de una pentosa (ribosa o deoxirribosa) a una base
purnicas o pirimidnicas a travs de un enlace N-glicosdico en las posiciones 9 y
3 respectivamente. Por ejemplo con Adenina y Citosina tendramos:

Adenosina 2 -Deoadenosina Citidina Deoxicitidina

Figura 31: Enlace N-glicosdico de los nuclesidos
A continuacin se presentan los ribonuclesidos y desoxirribonulceosidos
presentes en los cidos nucleicos:


96

Tabla 13: ribonuclesidos y desoxirribonulceosidos presentes en los cidos nucleicos

Los nuclesidos con U, T y G son respectivamente: Uridina (o deoxi-Uridna),
Tmidina (o deox-Timidina) y Guanosina (o deoxi- Guanosina).

Cuando el azcar es ribosa, el nuclesido se denomina ribonuclesido, y estn
presentes en el ARN. Cuando se trata de una D-2-desoxirribosa, el nuclesido se
denomina Desoxirribonucleico, y estn presentes en el ADN.

Leccin 19: Nucletidos

Para Garrido, Armando. Teijon, Jos Mara (2008), la formacin de nucletido se
produce mediante un enlace fosfodiester en el que participan un grupo OH del
cido fosfrico y el H del OH del carbono 5 del azcar con prdida de una
molcula de agua, en la siguiente figura, se indica la formacin del AMP:

Figura 32: Formacin del AMP


97

En sntesis:
Resultan de la esterificacin de un nuclesido por uno o varios grupos fosfato .
Los nucletidos biolgicamente ms importantes portan el fosfato en el OH-5 de
la ribosa o desoxirribosa y por convencin cuando no se especifica la posicin del
fosfato, se sobreentiende que est en 5. Dependiendo del nmero de grupos que
intervengan, se pueden obtener los nucletidos AMP, ADP y ATP, a partir de la
adenosina. En el caso del trifosfonucleotido la posicin relativa de los grupos
se indica con , y ; los deoxirribonucleotidos (formados con deoxirribosa) sern
entonces d-AMP, d-ADP y d-ATP.

Adenosin monofosfato AMP

Adenosin difostato ADP

Adenosin trifosfato ATP
P
P

98

De una manera anloga tendremos GMP, CMP, UMP, GDP, CDP, etc.

Los monofosfonucleotidos (AMP, GMP, CMP, UMP, TMI) son los bloques
constituyentes de los diferentes tipos de cidos nucleicos en forma similar a como
los AA son los bloques constituyentes de los pptidos y protenas; los otros
nucletidos (di, tri y an tetra) intervienen, como lo veremos en captulos
posteriores, activamente en innumerables reacciones del metabolismo y como
precursores en la sntesis de los cidos nucleicos.

Los nucletidos que se encuentran en los cidos nucleicos son:

Tabla 14: nucletidos que se encuentran en los cidos nucleicos

C CC Consulta los sigu onsulta los sigu onsulta los sigu onsulta los siguiente enlaces virtuales para profundizar en el tema: iente enlaces virtuales para profundizar en el tema: iente enlaces virtuales para profundizar en el tema: iente enlaces virtuales para profundizar en el tema:
http://biomodel.uah.es/model1j/prot/inicio.htm
http://www.youtube.com/watch?v=Gn8NaEEEykk


99

Leccin 20: Otros nucletidos de inters bioqumico
12

Segn Garrido, Armando. Teijon, Jos Mara (2008), Existen, nucletidos de gran
importancia biolgica que no forman parte de los cidos nucleicos. Tales es el
caso del adenosin 3-5-fosfato cclico (APMc):

Estructura del AMPc

Este nucletido acta como mensajero en la regulacin hormonal del
metabolismo.

Tambin existen difosfatos de nuclesidos que merecen un entrs especial, por
ejemplo el citidin-5-difosfato (CDP), que transporta molculas de colina para la
sntesis de lpidos; o l uridin-5-difosfato (UDP), que participa en la sntesis del
glucgeno.

Fuente: figura 33: estructuras de difosfatos de nuclesidos

12
Garrido, Armando. Teijon, Jos Mara (2008). Fundamentos de Bioqumica estructural. Madrid, Espaa:
Editorial Tebar.


100

Entre los trifosfatos de nucletidos se destaca por sus funciones el adenosin-5-
trifosfato (ATP). Este compuesto es la reserva energtica de los procesos
endergnicos del metabolismo tales como la contraccin muscular, sntesis de un
gran nmero de compuestos o transporte activo a travs de ls membranas
celulares.


1. Los componentes de los cidos nucleicos son los nucletidos; estos contienen
bases nitrogenadas, cido fosfrico y un azcar del tipo pentosa. En la siguiente
grfica se presenta la estructura de la Inosina, de acuerdo a su estructura, de que
base se deriva y a qu tipo de base pertenece?

En el tratamiento de enfermedades existen En el tratamiento de enfermedades existen En el tratamiento de enfermedades existen En el tratamiento de enfermedades existen nuclesidos nuclesidos nuclesidos nuclesidos naturales y sintticos que hacen parte de los principios naturales y sintticos que hacen parte de los principios naturales y sintticos que hacen parte de los principios naturales y sintticos que hacen parte de los principios
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urato sdico. La hiperuricemia puede causar inflamacin aguda (clsicamente en el dedo gordo del urato sdico. La hiperuricemia puede causar inflamacin aguda (clsicamente en el dedo gordo del urato sdico. La hiperuricemia puede causar inflamacin aguda (clsicamente en el dedo gordo del urato sdico. La hiperuricemia puede causar inflamacin aguda (clsicamente en el dedo gordo del
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biosntesis biosntesis biosntesis biosntesis de purinas . la Secundaria, produce una menos excrecin de urato. de purinas . la Secundaria, produce una menos excrecin de urato. de purinas . la Secundaria, produce una menos excrecin de urato. de purinas . la Secundaria, produce una menos excrecin de urato.

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101

2. Complete la informacin de la siguiente tabla:
N
o
m
b
r
e

Nuclesido purnica Nuclesido pirimidinas

E
s
t
r
u
c
t
u
r
a

D
i
f
e
r
e
n
c
i
a

n
o
m
b
r
e

E
s
t
r
u
c
t
u
r
a

D
i
f
e
r
e
n
c
i
a

3. Asocie cada una de las siguientes molculas con el (los) tipo(s) de estructura(s)
correspondiente(s). Puede usarlo una vez, varias veces o ninguna vez.
Molcula Tipo de estructura
a. CDP 1) Nuclesido
b. CMP 2) Base purnica
c. Timidina 3) Bloque constituyente de DNA
d. UMP 4) Deoxirribonucletido
e. d-CMP 5) Bloque constituyente de RNA
f. Guanina 6) Difosfonucletido
g. d-TMP 7) Base pirimidnica

4. Establezca la correspondencia entre las molculas y la(s) estructura(s) en que
se encuentran presentes:
Molcula Estructura
1. Ribosa a) Trifosforribonucletido
2. AMP b) RNA
3. d-GTP c) Trifosfodeoxirribonucletido
4. ATP d) Nucletido
5. Grupo fosfato e) DNA

102

CAPITULO 5: ACIDOS NUCLEICOS
13

En este captulo el estudiante puede encontrar en forma breve y clara la estructura
general de los cidos nucleicos, sustancias importantes para la conservacin de
las especies. El estudiante analiza que el ADN es una macromolcula que gracias
a las investigaciones durante el siglo XXI, en el cual se descubri que esta
molcula tiene estructura primaria y secundaria y que es la encargada de
conservar la informacin gentica de generacin en generacin y para su
expresin, la clula recure a la sntesis de un segundo cido nucleico como es el
ARN y de acuerdo a su ubicacin celular, estos pueden ser ARNm, ARNt y ARNr.

El captulo presenta figuras de las estructuras para mejor compresin de las
temticas.


Leccin 21: Generalidades

Los cidos nucleicos tienen, en trminos generales, la funcin de conservar y
transmitir el mensaje gentico que caracteriza cada organismo vivo. La expresin
tangible de ese mensaje se realiza a travs de la sntesis de protenas que actan
como catalizadores, componentes estructurales, funcionales o reguladores en el
organismo.

Los conceptos anteriores son una sntesis que involucra mltiples procesos de
gran complejidad que iremos discutiendo a lo largo de varios captulos. Por lo
tanto, trataremos de exponer en sta las caractersticas y las propiedades
estructurales ms sobresalientes de los cidos nucleicos.

Estos biopolmeros se caracterizan por poseer (con excepcin de una clase de
RNA) pesos moleculares muy elevados que se sitan entre 10
6
y 10
9
daltons. Esto
ya los diferencia de las protenas (cuyos pesos moleculares rara vez superan los 5
x 10
5
daltons) y de los polisacridos (con PM menores o iguales a 10
6
daltons).

Debido a la presencia de un altsimo nmero de grupos fosfato, los cidos
nucleicos tienen una gran densidad de carga negativa y en consecuencia se
comportan como polianiones, esta carga se neutraliza, segn sea el tipo de cido
nucleico, con poliaminas, histonas o Mg
+2
.

13
Prez, G. Navarro Y. (1992). Bioqumica. Santa fe de Bogot.: Unisur

103

La hidrlisis completa de los cidos nucleicos produce caractersticamente:
Bases purnicas y pirimidnicas.
Pentosas correspondientes a la ribosa o desoxirribosa.
Grupos fosfato.

Tomando como criterios su composicin qumica y funcin, adems de otras
propiedades, los cidos nucleicos se pueden diferenciar en dos grandes tipos:
El cido desoxirribonucleico o DNA (o ADN).
El cido ribonucleico o RNA (o ARN).

La tabla 13 nos muestra las diferencias existentes en trminos de los parmetros
indicados. Las diferencias sealadas son aplicables a las molculas de DNA y
RNA aisladas de la clula por los procesos convencionales ya que existen
excepciones como son los precursores de RNA cuyo tamao y localizacin
original, difieren de los RNA clsicos que discutiremos ms adelante.

21.1 Estructura de bases, nuclesidos y nucletidos

Para comprender mejor la estructura y las propiedades de los cidos nucleicos es
conveniente discutir previamente las estructuras de sus constituyentes.

Tabla 15: Diferencias entre DNA y RNA
Parmetro DNA RNA
Composicin
- Pentosa
- Bases

PM (daltons)

Funcin

Localizacin

Deoxirribosa
Timina

10
6
-10
9

Conservacin del
mensaje gentico.

98% en zona nuclear,
2% extracromosomal

Ribosa
Uracilo

10
8

Expresin del mensaje
gentico

Variada segn la clase de
RNA

Leccin 22: Estructura del ADN

En el DNA podemos identificar tres niveles de organizacin estructural definidos
en forma similar a la utilizada con las protenas. Dado que el DNA proveniente de
virus y bacterias es menos complejo que el DNA de clulas eucariticas y se
puede obtener ms fcilmente y en mayor cantidad, se ha avanzado mucho ms
en los estudios estructurales del DNA de procariotes.

22.1 Estructura Primaria


104

Tal como lo mencionamos antes, la hidrlisis total del DNA produce grupos
fosfato, bases purnicas (A, G) y pirimidnicas (C, T) y deoxirribosa; la hidrlisis
qumica proporciona poca informacin pues el DNA es resistente a los lcalis y el
tratamiento con cidos causa frecuentemente una depurinacin o sea la prdida
de las bases purnicas. Ver Figura 34: Estructura fundamental de un segmento de
una cadena de DNA

Por ello los datos disponibles sobre la composicin en bases han sido obtenidos
empleando diversas enzimas con diferente especificidad; se usan endonucleasas
(atacan al interior de la molcula) del tipo de las fosfodiesterasas o de las
deoxirnbonucleasas (DNAsa) 1 y II y exonucleasas (atacan en las extremidades 3
y 5 de la molcula respectivamente) de tipo a o b. El anlisis de los productos de
hidrlisis resultantes en cada caso (oligonucletidos, deoxirribonucletidos con
en 3, deoxirribonucletidos con en 5, etc) ha permitido deducir que la
estructura bsica de una cadena (o banda) de DNA consiste en la sucesin de
mononucletidos unidos entre s por enlaces fosfodiester. La figura 28 ilustra esta
situacin para un fragmento muy pequeo de una cadena de DNA, con una
secuencia hipottica.

Al observar esta figura notamos varias cosas:
Cada deoxirribosa, con excepcin de las terminales, est formando enlaces
ster con a travs de sus hidroxilos 3 y 5. Si imaginamos la accin de una
enzima capaz de romper en la posicin 3 indicada por las flechas tendramos
al final una mezcla de nucletidos 5 y un nuclesido.

Uno de los extremos corresponde a la deoxirribosa con su OH- 5 no
esterificado (extremo 5) y el otro a la pentosa con su OH
-
3 libre (extremo 3).
Por convencin se considera que la cadena comienza en su extremo 5 libre y
termina en su extremo 3libre.

Por cada nucletido presente hay un grupo fosfato con una carga negativa, lo
que significa que en un DNA con 1.000 nucletidos (que sera un DNA muy
pequeo) tendremos una altsima densidad de cargas negativas.

P
P
P P

105

Figura34: Estructura fundamental de un segmento de una cadena de DNA
Fuente: Prez, G. Navarro Y. (1992). Bioqumica. Santa fe de Bogot.: Unisur

La estructura de la figura 34 podemos representarla de varias maneras todas
simplificadas:

a. b.

En (a) la deoxirribosa se indica por la lnea vertical con las posiciones 5 y 3 y las
bases unidas al azcar se indican con sus abreviaturas correspondientes. En (b)

106

slo se muestra el orden de las bases indicando con d que se trata de una cadena
formada con deoxirribosa y se sobreentiende que las bases no se unen
directamente sino que el esqueleto de la cadena es la sucesin...deoxirribosa-
fosfato-deoxirribosa-fosfato.

Los estudios comparativos realizados por el grupo de Chargaff con DNA de
diferentes especies permitieron establecer dos hechos muy interesantes que se
conocen como las reglas de Chargaff. El primero consiste en que la cantidad de
Adenina es igual a la de Timina y la de Guanina igual a la de Citosina; esto se
pudo explicar posteriormente cuando se determin la estructura secundaria y
terciaria del DNA. La segunda regla de Chargaff consiste en que la relacin (A+T) /
(G+C) posee un valor constante para cada especie y se usa como un criterio para
la determinacin de especies (bacteriales, animales o vegetales).

El establecimiento de la secuencia de nucletidos del DNA ha sido muy difcil
debido al gran tamao de la molcula (PM >10
6
), a la complejidad de los
hidrolizados y a la ausencia de segmentos distintivos por no haber sino cuatro
bases diferentes. La estrategia es similar a la empleada con las protenas
empleando marcacin con radioistopos, rupturas qumicas y enzimticas
especficas y separacin y caracterizacin de los fragmentos.

Recientemente y gracias a nuevas tcnicas ha sido posible determinar la
secuencia compleja de un virus y la de varios genes de procariotes. En el caso de
los eucariotes la mayor complejidad del genoma ha dificultado considerablemente
La determinacin de secuencias del DNA.

22.2 Estructura secundaria y terciaria

La elucidacin de la estructura espacial del DNA fue posible gracias a la
informacin qumica disponible (1
a
y 2
a
reglas de Chargaff) y a la suministrada por
el anlisis por rayos X de las preparaciones para-cristalinas de DNA. Se demostr
la existencia de estructuras ordenadas con una unidad de repeticin muy estable
de 3,4 y otra ms dbil de 34 ; la cual se pareca a algunas -queratina.

Integrando la informacin disponible y con la ayuda de modelos moleculares,
Watson y Crick en 1953, propusieron un modelo tridimensional que luego fue
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107

comprobado experimentalmente. El modelo postula que el DNA est formado por
dos cadenas enrolladas helicoidalmente entre s, mantenidas y estabilizadas por la
formacin de puentes de H
2
entre pares de bases llamadas complementarias,
situadas cada una en una banda.

Considerando el tamao de las bases, el dimetro de la fibra de DNA (20 ) y la
estructura de las bases, se propuso que los pares de bases son A: T (unidos por
dos puentes de H
2
) y G: C (unidos por tres puentes de H
2
); la figura 35 nos
muestra cmo se establecen los puentes de H
2
entre las bases complementarias.

Los pares de bases se disponen perpendicularmente al eje de la molcula en
nmero de 10 por cada vuelta de la hlice, que corresponde a la distancia de la
unidad de repeticin ms dbil, encontrndose superpuestas con una separacin
entre cada par del orden de 3,4 .

Figura 35: Asociacin de las bases complementarias en el DNA

En la molcula las estructuras polares (deoxirribosa y grupos fosfato) se sitan al
exterior de la hlice estando en contacto con el solvente y otras molculas y las
bases que son poco polares (por ser de naturaleza aromtica) se localizan al
interior. Una representacin simplificada de esta doble hlice se indica en la figura
36.

Observamos en la figura 36 que las dos bandas son antiparalelas, es decir corren
en direcciones opuestas ya que los extremos 5 no se encuentran del mismo lado.

108

Esta estructura en doble hlice explica por qu en el DNA tenemos cantidades
iguales de T y A o de C y G (la regla de Chargaff), la estabilidad (proporcionada
por el alto nmero de puentes de H
2
que se forman), muchas de las propiedades
del DNA en solucin (alta viscosidad, fragilidad al pasarlo por capilares) y permite
proponer como se efecta su copia en dos molculas intactas, lo cual ocurre
durante su biosntesis como veremos posteriormente.

Figura 36: Estructura en doble hlice del DNA

Leccin 23: Complejidad y estructura supramacromolecular del DNA en el
genoma

La complejidad y localizacin del DNA vara segn sea la entidad funcional (virus,
procariotes o eucariotes) que consideremos.

En los virus cuyo material gentico es DNA (generalmente virus animales o
bacteriales y algunos vegetales) tenemos una forma circular donde se han unido
los extremos 3 y 5 y en la mayora estn presentes las dos bandas de DNA; en
unos pocos por ejemplo: virus x 174 slo hay una banda y por ello son una
excepcin a la primera regla de Chargaff pues no existe el apareamiento A : T y G
: C. La circunferencia de estos DNA virales (determinada por microscopia
electrnica) es mayor que la partcula viral completa; esto implica que el DNA en el
virus est empacado en forma muy compacta y recubierta por las proteinas virales
de envoltura. El peso molecular de los DNA oscila entre 3 y 120 X 10
6
lo que
facilita el estudio de su secuencia.

109

En las clulas procanticas el DNA es circular, de doble banda y se encuentra
anclado en un punto a la membrana celular estando en contacto con el material
citoplasmtico; asociados a este nico cromosoma se hallan enzimas, poliamidas
o Mg
+2
y el DNA existe en una forma superenrollada muy compacta. Los pesos
moleculares son considerables, ej. 2.600 x 10
6
para el DNA de E. coIi, teniendo la
molcula varios millones de bases apareados.

Adems de este DNA cromosomial puede haber DNA adicional, ms pequeo y
tambin circular, que son los llamados plsmidos; ellos son portadores de unos
pocos genes que confieren a la bacteria ciertas caractersticas como la resistencia
a los antibiticos.

En los eucariotes la gran mayora del DNA (aproximadamente 98%) forma parte
de la cromatina en el ncleo y el resto est en partculas como las mitocondrias o
cloroplastos; ste DNA extranuclear es diferente del nuclear respecto a su
composicin, propiedades fsicas como densidad, viscosidad, etc y asociacin con
protenas. En la cromatina el DNA lineal (35%) se asocia con histonas (60% en
total) y protenas cidas y RNA (5%) dando lugar a una estructura muy compacta
con una organizacin espacial no muy bien conocida.

Una ilustracin del grado de compactacin se deduce del hecho de que el DNA de
una clula eucariote con un dimetro de 10-20 m, si estuviera extendido tendra
una longitud de 2 metros. Cada cromosoma tiene un DNA 4 a 100 veces mayor
que el DNA de E.coIl, lo que hace que las clulas humanas tengan 600 veces ms
DNA que la E.coIi.

Los datos anteriores nos muestran la enorme complejidad organizacional que
tiene el DNA eucaritico y por ello su estudio es uno de los grandes temas de la
biologa molecular actual.

Consulta los siguiente enlaces virtuales para profundizar en el tema:

http://recursos.cnice.mec.es/biosfera/alumno/2bachillerato/biomol/actividades/videoadn/adn.htm

http://www.johnkyrk.com/DNAanatomy.esp.html

http://recursos.cnice.mec.es/biosfera/alumno/2bachillerato/biomol/actividades/videoadn


110

Leccin 24: RNA

24.1 Clasificacin

Tradicionalmente el RNA se ha clasificado tomando como criterio las especies
moleculares ms o menos estables, aisladas de la clula por procedimientos de
laboratorio bien establecidos.

Estos RNA se dividen en tres clases:
t-RNA o RNA de transferencia. Se encuentra en el citoplasma celular en
forma libre o asociado a un AA dado; en consecuencia existen unas 20
especies moleculares distintas; es el ms pequeo de los cidos nuclicos ya
que su peso molecular est en el rango 7.000 a 8.000 y se puede aislar con
cierta facilidad por ser estable.

m-RNA o RNA mensajero. Se encuentra tanto en el ncleo como en el
citoplasma como una mezcla muy compleja de molculas cuyos PM oscilan
entre 5 x 10
5
y 1 x 10
6
; esta clase de RNA es bastante lbil y por tanto muy
dficil de aislar.

r-RNA o RNA ribosomal. Se localiza en los ribosomas de procariotes y de
eucariotes donde representa aproximadamente un 50% deI total de estas
partculas subcelulares. Hay tres tipos de r-RNA diferentes cuya complejidad
(en razn de su mayor tamao) es mayor en los eucariotes que en los
procariotes; algunos r-RNA pueden tener PM entre 5 x 10
5
y 2 x 10
6
.

Adems de estos tres tipos de RNA que podramos considerar como los RNA
clsicos, se han identificado recientemente otros RNA presentes en el ncleo cuyo
perodo de vida es muy corto y que parece actan como precursores de los RNA
clsicos o durante la sntesis de DNA (Hn-RNA, c-RNA.

Por otra parte, hay una gran cantidad de virus cuyo material gentico es RNA,
tales como los bacterifagos F2, MS2, Rl7 y Q cuyo estudio ha permitido
entender mejor cmo actan estos virus y cules enzimas estn involucradas en
su biosntesis y regulacin.

Leccin 25: Estructura del RNA

De manera anloga a lo discutido con el DNA, el RNA posee estructura primaria,
secundaria y terciaria cuyas caractersticas son intensamente estudiadas en la
actualidad. Los trabajos iniciales se adelantaron indistintamente con las tres clases
de RNA y posteriormente para estudiar en detalle la organizacin estructural se
seleccion el t-RNA puesto que su menor tamao, estabilidad y relativa facilidad

111

de purificacin constituan ventajas apreciables en comparacin con las otras
clases de RNA.

Estructura primaria
Aun cuando el RNA es susceptible a la hidrlisis bsica, debido a la ribosa
presente, el ataque por enzimas como la ribonucleasa (RNAsa), fosfodiesterasas y
exonucleasas proporcionan la informacin que nos permite representar la
estructura fundamental del RNA, figura 37.

Como caractersticas sobresalientes de la estructura primaria del RNA podramos
citar las siguientes:
La formacin de enlaces fosfodiester se hace a travs de los hidroxilos 3 y 5
de la ribosa, quedando siempre libre el hidrxilo 2; lo cual implica una
estructura lineal sin que haya ramificaciones.
El sentido de la cadena se define igual a lo ya explicado con el DNA (direccin
5 3).
La molcula es un polianin con muchas cargas negativas.
La composicin en bases no sigue las reglas de Chargaff y las bases raras son
especialmente abundantes en el t-RNA (aproximadamente un 20%).
La secuencia de nucletidos ha sido establecida en el RNA del virus R17 y en
numerosos t-RNA. En otros RNA se conocen fragmentos de su secuencia pero su
gran tamao y las dificultades encontradas en su purificacin no han permitido
avanzar en estos aspectos.

Figura 37: Estructura fundamental de un segmento de RNA

112

25.1 Estructura secundaria y terciaria

La comparacin de secuencias de muchos t-RNA ha sido posible gracias a los
trabajos de Holley y ha permitido establecer una estructura general llamada hoja
de trbol que se ilustra en la figura 38.

Esta representacin estructural es puramente bidimensional y no corresponde,
como veremos ms adelante, a la conformacin de la molcula. Sin embargo su
utilidad reside en que permite precisar las siguientes caractersticas que son
comunes a todos los t-RNA:

Aunque no hay sino una sla banda con 75-80 nucletidos (a diferencia del
DNA) hay tres segmentos o brazos en que las bases complementarias A : U y
G : C forman puentes de H
2
, contribuyendo as a estabilizar la estructura.

Las regiones donde se encuentran las bases raras (G* , DHU) no muestran
apareamiento de bases, debido a los sustituyentes de las bases raras, y
reciben el nombre de bucles. En uno de los tres bucles existentes se encuentra
el triplete de bases que constituye el anticodn que determina cul AA se une
al t-RNA.

El extremo 3 siempre tiene la secuencia A-C-C y all se fija el AA que es
transportado especficamente por un t-RNA dado.

Figura 38: Estructura general en hoja de trbol de t-RNA

113


Los estudios de difraccin de rayos X realizados por el grupo de Rich sobre t-RNA
para Phe han mostrado que la molcula tiene una estructura terciaria ms
parecida a una L invertida y retorcida, que a una hoja de trbol. La figura 39 es
una representacin simplificada de la estructura terciaria del t-RNA.

En esta representacin los brazos, con sus bases complementarias; se indican por
las zonas sombreadas y los bucles, por las zonas claras.

La comprensin del funcionamiento de estos t-RNA en la biosntesis de protenas,
que discutiremos posteriormente, ha sido considerablemente facilitada por estos
estudios estructurales. Sin embargo hoy en da se sabe muy poco sobre la
organizacin estructural de m-RNA y r-RNA, debido probablemente a la carencia
de tcnicas adecuadas para estudiarlas.

Figura 39: Estructura terciaria del t-RNA para Phe
Fuente: Prez, G. Navarro Y. (1992). Bioqumica. Santa fe de Bogot: Unisur.

observa en la pgina principal del curso la presentacin en flash sobre sntesis de protena observa en la pgina principal del curso la presentacin en flash sobre sntesis de protena observa en la pgina principal del curso la presentacin en flash sobre sntesis de protena observa en la pgina principal del curso la presentacin en flash sobre sntesis de protena


114


1. La estructura de doble hlice del ADN
explica por qu hay cantidades iguales
de purinas y pirimidinas para cumplir con
la regla de Chargaff. Considerando el
tamao y la estructura de las bases, se
propuso que los pares de bases estn
unidos por puentes de Hidrgeno. La
figura indica, cmo se establecen los
puentes de Hidrgeno entre las bases
complementarias: dos pares de bases
estn unidas por 2 puentes de hidrgeno
y las otras dos estn unidas por 3 puentes de hidrgeno.

Las bases que deben estar en los signos de interrogacin (?) para forma 3
puentes hidrgeno son:

2. Se tiene la siguiente secuencia de DNA

T-T-A-G-C-A-C-G-T-G-C-T-A-A-G
Analizar y completar:

Secuencia complementaria
con el m-RNA.
Secuencia complementaria
con el t-RNA.
Aminocidos
que codifica
cada triplete de
bases.
Tipo de aminocidos (ver
Captulo 1 Unidad 1).

3. Por qu la estructura en doble hlice del DNA permite explicarla primera regla
de Chargaff y los valores obtenidos para las unidades de repeticin? Esquematice
esta estructura indicando los apareamientos que se presentan.

4. Mediante un grfico esquematice la participacin del ADN y ARN en la sntesis
de protenas.


115

CAPITULO 6: INTRODUCCION AL METABOLISMO Y BIOENERGETICA
14

En este captulo el estudiante encuentra la relacin que existe entre la
termodinmica y el gasto energtico en los sistemas biolgicos, para ello, se
presentan conceptos bsicos sobre cmo la clula trabaja con el mnimo gasto
energtico, para mayor entendimiento, estudiante debe activar conocimientos de
cursos anteriores como qumica general, termodinmica, fsica general, en
relacin a la primera y segunda ley de la termodinmica.

Explica en forma breve el clculo de la energa libre en sistemas biolgicos los
cuales operan bajo condiciones biolgicas estandarizadas y que a partir de datos
de experimentos invitro se calcula el consumo o la liberacin de energa en
procesos endergnicos y exergnicos.

El captulo finaliza con la importancia del adenosn trifosfato (ATP), el cual se
conoce como la moneda energtica de la clula.


Leccin 26: Aspectos generales del metabolismo

El metabolismo es un conjunto altamente integrado de sistemas multienzimticos
que en su forma ms sencilla se localizan en la clula y realizan un intercambio
permanente de energa y materia con el medio ambiente. Para la discusin
posterior vamos a considerar a la clula como el modelo de un organismo viviente
y, a menos que se especifique lo contrario, los emplearemos como trminos
equivalentes.

Podemos considerar que el metabolismo desarrolla cuatro actividades
fundamentales:

Obtiene energa bien a partir de la luz solar, a travs de procesos
fotosintticos, o bien a partir de compuestos qumicos gracias a reacciones de
xido-reduccin.

Transforma los nutrientes exgenos en substancias precursoras de las
biomolculas y/o de las macromolculas. Las diferencias en cuanto a la fuente

14


116

de donde toman estos nutrientes es lo que nos permite dividir los organismos
vivos en autotrficos y heterotrficos.

Sintetiza (reacciones anablicas) o degrada (reacciones catablicas) las
biomolculas por ejemplo: aminocidos, monosacridos, lpidos, etc., que
necesita para realizar las funciones especficas del organismo.

Degrada o sintetiza las macromolculas (protenas, polisacridos, cidos
nucleicos etc.) que le permiten construir, hacer funcionar o regular el
organismo ya sea unicelular o multicelular.

Un aspecto muy importante del metabolismo es lo que se conoce como la
universalidad de las vas del metabolismo. Esto significa que las vas metablicas
fundamentales comunes son muy similares en los diferentes organismos vivos ya
sean procariticos o eucariticos, unicelulares o multicelulares, animales o
vegetales. Es previsible que existan pequeas diferencias entre unas y otras en
cuanto a algunas reacciones en particular pero esto no afecta de modo notable ni
la transformacin global del metabolismo en cuestin, ni la produccin o consumo
(segn el tipo de va involucrada) de energa.

Esta caracterstica de universalidad de las vas facilita muchsimo el estudio de un
organismo vivo en particular y permite localizar rpidamente aquellas reacciones
(o vas) que le son propias.

Otra caracterstica del metabolismo reside en el hecho de que la mayora de los
sistemas enzimticos estn localizados en una partcula subcelular dada (u
organelo), lo cual facilita la coordinacin espacial y temporal de las diferentes vas.

Esta compartamentalizacin permite la ocurrencia simultnea de vas opuestas
(ejemplo: sntesis y degradacin de lpidos) dentro de la misma clula y el control
de las actividades intracelulares.

Existen varios factores que regulan el metabolismo de una clula:
Necesidades energticas. La clula parece operar bajo el principio de la
mxima economa y es as como no produce o consume sino el mnimo de
energa requerida; es decir desperdicia la menor cantidad posible de energa.

Condiciones que regulan la actividad enzimtica, tales como pH, temperatura y
efectores.

Existencia de enzimas reguladoras. El papel de estas protenas es el de
controlar a travs de un mecanismo de retroinhibicin, o sea de inhibicin por
retroalimentacin, la actividad de otras enzimas o la ocurrencia de una
reaccin en particular.

117

Control a nivel de los genes, de la velocidad de sntesis de una (o varias)
enzima (s) que intervengan en una va. Este mecanismo regulador se conoce
bastante bien en clulas procariticas y fue descubierto hace relativamente
poco tiempo por Jacob y Monod.

Actividad de hormonas. Es tal vez el mecanismo ms complejo y sofisticado,
siendo especialmente importante en organismos multicelulares.

Leccin 27: Bioenergtica

27.1 Flujos de materia y energa

El estudio del metabolismo debe incluir no slo el anlisis de cmo se utilizan los
nutrientes, sino tambin una evaluacin de los costos o rendimientos en energa
que acompaan esta utilizacin.

Hay una diferencia fundamental entre la utilizacin de los diferentes elementos
que componen las molculas precursoras, Biomolculas y polmeros y el
aprovechamiento de las diversas formas de energa. Los elementos qumicos
(exceptuando tal vez el P) circulan en la bisfera de manera cclica y los
organismos vivos son un eslabn de una cadena circular; esta situacin podemos
ilustrarla con las figuras 40 y 41 para el C, O y N que son algunos de los
elementos ms abundantes en un organismo.

Figura 40: Ciclo global del C y O en la biosfera


118

Figura 41: Ciclo global del N en la bisfera

En estas figuras observamos que una cantidad finita de estos elementos sera
suficiente para mantener el ciclo en operacin. Podemos imaginar entonces que
en un sistema muy reducido (ideal) la misma molcula de carbono, oxgeno o
nitrgeno es utilizada repetidas veces a lo largo de muchos ciclos.

En el caso de la energa la situacin es completamente diferente como podemos
ver en la figura 41:

Figura 41 : Flujo de la energa en el mundo biolgico


119

La energa generada en el sol proviene de la fusin termonuclear 4H
+
He + 2e
-

que all ocurre y una pequesima parte de esta energa llega a la superficie de la
tierra en diferentes formas como calor, magnetismo y energa lumnica; esta ltima
se transforma parcialmente en energa qumica (polisacridos, ATP) por medio de
la fotosntesis.

La energa almacenada en los enlaces qumicos de los productos de la
fotosntesis es utilizada por los diferentes organismos (incluidas las plantas) para
realizar distintas clases de trabajo (mecnico: contraccin muscular; osmtico:
transporte activo en membranas; biosntesis: formacin de nuevos enlaces; etc) y
finaliza tarde o temprano como calor o sea como energa no aprovechable.

El flujo de la energa es, pues, unidireccional y en cada etapa donde se pasa de
una forma a otra, la cantidad de energa utilizable es solo una fraccin del total.

Este hecho nos sirve para entender por qu es tan importante para un organismo
transformar y utilizar la energa de la manera ms eficiente posible; aqu opera el
principio de la mxima economa que ya mencionamos.

En general podemos decir que los organismos autotrficos derivan su energa de
la fotosntesis o de procesos de reduccin mientras que los heterotrficos la
obtienen a travs de la oxidacin de los compuestos sintetizados por los
autotrficos.

27.2 Consideraciones termodinmicas

Podemos considerar que en el metabolismo hay tres tipos de reacciones a las que
podemos asociar cambios en la energa libre del sistema. Estos tipos son:

Transferencia de H
+
: reacciones cido-base.
Transferencia de e
-
: reacciones de xido -reduccin.
Transferencia de grupos fosfato: Reacciones de fosforilacin.

En estas reacciones el cambio de energa libre (G) nos sirve por una parte para
calcular las constantes de equilibrio que nos describen el estado de equilibrio y por
otra parte como medida de la fuerza impulsora de la reaccin; el sentido en que se
realice la reaccin depende tanto de la magnitud del G como de su signo (como
ya se vio en el mdulo de Termodinmica).

En los sistemas biolgicos es ms importante la prediccin del sentido de la
reaccin ya que las condiciones propias de estos sistemas no permiten alcanzar el
equilibrio.

En las reacciones cido-base que podemos representar por:

120

+
+ H A AH

La constante de disociacin (K
a
) se relaciona con el cambio en energa libre por
medio de la ecuacin:
) K ln( . RT H G
a
0
+ = Ecuacin 14

En el equilibrio G = 0; entonces:

) K ln( . RT G
a
0
= Ecuacin 15

Lo que es lo mismo:

) K log( . RT 303 . 2 G
a
0
= Ecuacin 16

Puesto que pK
a
se define como -log (K
a
).

a
0
pK . RT 303 . 2 G = Ecuacin 17

Despejando:
RT 303 . 2
G
pK
0
a

= Ecuacin 18

Esta ecuacin es vlida para sistemas en que las concentraciones molares son 1,
es decir [H
+
] = 1 M lo que equivale a pH = 0. Es claro que este pH no se da en
sistemas biolgicos y si el pH tomara el valor de 7.0, entonces [H
+
] = 10
-7
M.

Por ello se prefiere usar el trmino G que representa el cambio en energa libre
del sistema a pH 7,0. Entonces la ecuacin 14 quedara:
) K ln( . RT G ' G
a
' 0
+ = Ecuacin 19

La ecuacin 16 sera:
) K log( . RT 303 . 2 G
a
' 0
+ = Ecuacin 20

En las reacciones de xido-reduccin usamos la ecuacin de Nernst:
K ln
nF
RT
E E
0
+ = Ecuacin 21

En el equilibrio E = 0; entonces:
K ln
nF
RT
E
0
= Ecuacin 22

Que a pH 7,0 sera:

121

K ln
nF
RT
303 . 2 E
0
= Ecuacin 23

Despejando log K de las ecuaciones 20 y 23, igualando y despejando G
tendramos:
' 0
E nF G = Ecuacin 24

Ecuacin que nos muestra cmo es posible convertir una diferencia de potenciales
de reduccin (por convencin) en un cambio de energa libre y predecir el curso de
la reaccin.

El tercer tipo de reacciones lo examinaremos en detalle a continuacin.

Leccin 28: Energa libre de hidrlisis
15

En la discusin que sigue es fundamental tener en claro cundo las reacciones se
realizan en tubo de ensayo (In vitro) y cundo suceden en la clula (In vivo).

Los trifosfonucletidos como el ATP pueden sufrir in vitro una hidrlisis que
representamos por:
+
+ + + H HPO ADP O H ATP

2
4
3
2
4

Es decir la prdida del grupo fosfato en posicin , producindose ADP y
fsforo inorgnico (Pi). En condiciones estndar a pH 7,0 el clculo de G arroja
un valor de -7.300 caloras/mol o sea que es una reaccin muy exergnica
desplazada hacia la derecha; esta energa se conoce como energa libre de
hidrlisis. Si se calcula el G in vitro empleando las concentraciones
intracelulares de ATP, ADP y Pi y se tiene en cuenta la formacin de complejos
con el Mg
+2
(que es lo que ocurre dentro de la clula) el G de hidrlisis (
' 0
hidr
G )
del ATP puede subir hasta unas -12000 caloras/mol.

Otros compuestos con grupos fosfato estn tambin presentes en la clula y con
ellos se puede calcular in vitro su
' 0
hidr
G . Los valores que se obtienen se muestran
en la tabla 16.

Observamos que hay un amplio rango de valores de G, siendo el PEP y el 1,3-
DP glicerato los que liberan la mayor cantidad de enega cuando se hidroliza in
vitro el enlace del grupo . Por convencin, y para distinguirlo de los enlaces
con mayor estabilidad, se representa por ~ el enlace que al hidrolizarse libera la
energa; este enlace se ha llamado inapropiadamente enlace rico en energa y

15
P
P

122

cuando se usa este trmino (en lenguaje bioqumico) significa un enlace muy lbil
que libera buena cantidad de energa al romperse.

Leccin 29: Potencial de transferencia de grupos fosfato
16

Compuesto Abreviatura Estructura
' 0
hidr
G , caloras/mol
PTG
Fosfoenol Piruvato

3-Fosfogliceroil-fosfato

Fosfocreatina

Acetil fosfato

PEP

1, 3 DP Glicerado

p-Creatina

-14800

-11800

-10300

-10100

14.6

11.8

10.3

10.1

16

Seor es Seor es Seor es Seor estudiante: tudiante: tudiante: tudiante:

Para mayor entendimiento del tema, le sugiero revisar los apuntes de fsica, qumica genera, fisicoqumica Para mayor entendimiento del tema, le sugiero revisar los apuntes de fsica, qumica genera, fisicoqumica Para mayor entendimiento del tema, le sugiero revisar los apuntes de fsica, qumica genera, fisicoqumica Para mayor entendimiento del tema, le sugiero revisar los apuntes de fsica, qumica genera, fisicoqumica
en su lugar termodinmica en relacin a las Primera ley , segunda ley de la termodinmica. en su lugar termodinmica en relacin a las Primera ley , segunda ley de la termodinmica. en su lugar termodinmica en relacin a las Primera ley , segunda ley de la termodinmica. en su lugar termodinmica en relacin a las Primera ley , segunda ley de la termodinmica.

En el siguiente enlace hay una revisin En el siguiente enlace hay una revisin En el siguiente enlace hay una revisin En el siguiente enlace hay una revisin bibliogrfica al respecto: bibliogrfica al respecto: bibliogrfica al respecto: bibliogrfica al respecto:
http://books.google.com.co/books?id=HRr4MNH2YssC&pg=PA11&dq=leyes+de+la+termodinamica&ei=83
lYSt70LY-UzASB0KQL&client=firefox-a
http://books.google.com.co/books?id=43qKhqwAoLgC&pg=PA755&dq=energia+libre+de+gibs&ei=rnpYSv
mpJoiGygT8m4mnBw&client=firefox-a


123

Adenosin trifosfato

Glucosa-1-fosfato

Glucosa-6-fosfato
ATP

G-1-P

G-6-P

-7300

-5000

-3300

7.3

5.0

3.3

Tabla 16: Valores de G0 de hidrlisis y de Potencial de Transferencia de Grupos PTG para algunos
metabolitos fosforados

Si expresamos en kcal.mol
-1
el valor absoluto del
' 0
hidr
G obtenemos el valor
correspondiente al potencial de transferencia de grupos (PTG), que nos indica la
tendencia que tiene un compuesto fosforilado, a transferir su grupo fosfato lbil.
Entre mayor sea el PTG ms fcilmente se transferir el .

En la clula (o sea in vivo) NO ocurre la hidrlisis directamente sino que se realiza
una transferencia de entre dos compuestos, que en forma general podemos
representar por:
A~P + B
B~P + A

La direccin en que se desplace el equilibrio depender de los valores de PTG de
A~P y B~P; debemos notar adems que se requiere que el aceptor de est en
forma no-fosforilada. Estas reacciones son catalizadas por una subclase de
transferasas denominadas kinasas. Consideremos como ejemplo la formacin de
ATP en la clula a partir de ADP; aunque en teora cualquiera de los primeros
cuatro compuestos de la tabla 14 podra emplearse, utilicemos el PEP. La
reaccin sera:

PEP Piruvato
P
P
P

124

Puesto que el PTG para PEP piruvato es de 14.8 y el PTG de ATP ADP es
de 7.3, la transferencia del se hace del PEP al ADP para formar ATP y piruvato; la
Fosforilacin no se hace en sentido inverso porque se transferir el de un
compuesto con PTG menor a un compuesto con PTG mayor. Note que in vivo
realmente no hay hidrlisis del PEP sino transferencia del .

Las determinaciones del G in vitro nos sirven entonces para conocer el PTG de
un compuesto y predecir la direccin en que la kinasas cataliza la Fosforilacin.

Leccin 30: Importancia del ATP

El sistema ATP-ADP es el ms empleado por la clula para estas reacciones de
Fosforilacin por varias razones:

El ATP est situado en una posicin intermedia y sirve entonces como puente
o Intermediario comn para la transferencia de de compuestos ricos en
energa (con G muy bajos) a compuestos pobres en energa (con G
bajos). Esto tiene la ventaja que se conserva mejor la energa pues los G de
cada reaccin son menores, ver figura 42.

En todas las reacciones de Fosforilacin intervienen kinasas que tienen sitios
activos que unen el ATP o el ADP segn sea el caso.

El ADP sirve como aceptor de provenientes de compuestos con alto PTG.
P
P
P
P

125

Figura 42: Flujo de grupos y situacin lntermedia del ATP

Lo anterior ha conducido a algunos bioqumicos a considerar el ATP como la
moneda usada por la clula para transportar la energa. En las unidades
siguientes veremos muchos ejemplos de estas fosforilaciones y de aplicaciones
del formulismo termodinmico discutido ms arriba. La aplicacin de estos
conceptos a sistemas biolgicos est sujeta a varias limitaciones dado que:
Los valores de G y E estn influenciados por cambios en pH, temperatura
fisiolgica y concentraciones celulares de Mg
+2
.

La clula es un sistema abierto, que intercambia materia y energa con su
medio ambiente y estos conceptos de termodinmica se definen a partir de un
sistema cerrado.

Las reacciones in vivo estn en un estado estacionario y no en equilibrio; por
tanto las concentraciones son siempre algo menores que en el equilibrio.

Lo anterior ha conducido al desarrollo de una termodinmica especial o de
procesos irreversibles bastante ms compleja que la termodinmica clsica. Sin
embargo para los fines prcticos de prediccin del sentido de la reaccin y de la
comprensin de por qu ocurren las transferencias de grupos , lo visto en este
captulo es aplicable y utilizable.

P
P

126


1. Para el desarrollo de este ejercicio, debe Usted analizar la forma de calcular la Keq y
la G de la siguiente reaccin:

6-Glucosa-P 1-Glucosa-Fosfato

La variacin de la energa libre (G), para esta reaccin, a 25C en Kcal/ mol es:

2. Se tiene la siguiente ecuacin:

Acetato + CoenzimaA AcetilCoA

Calcular el valor de G de la reaccin acoplada y las reacciones acopladas.

3. Se tiene la siguiente ecuacin:

Acetato + CoenzimaA AcetilCoA

El valor de G cuando la los productos y reaccionantes llegan al equilibrio a 25C y
hay una concentracin de:

Acetato de 7.1 mM
CoenzimaA 28 mM
AcetilCoa de 7.0 Mm

4. De las tres reacciones siguientes, cul tiene lugar realmente?

a. PEP + Glc-6-P Piruvato + Glucosa
b. PEP + Glucosa Piruvato + Glc -6 -P
c. Piruvato + Glc-6-P PEP+ Glucosa

Recuerde como se usa el concepto del potencial de transferencia de grupos.


127

Seor estudiante de regencia de farmacia: Lea la siguiente lectura y analice: Seor estudiante de regencia de farmacia: Lea la siguiente lectura y analice: Seor estudiante de regencia de farmacia: Lea la siguiente lectura y analice: Seor estudiante de regencia de farmacia: Lea la siguiente lectura y analice:

Anlogos de nuclesidos

Hace ms de cincuenta aos, el descubrimiento de la estructura del ADN revoluciono
campos como la gentica o la biologa molecular aportando una mejor compresin de los
procesos bioqumicos por los que los cidos nucleicos controlan la viabilidad celular in
vivo, lo que condujo al diseo y desarrollo de frmacos que pudieran interferir con uno o
ms de los procesos controlados por dichas macromolculas.

Los cidos nucleicos ( ADN y ARN), molculas de las que depende el almacenamiento de
la informacin gentica, su transmisin y la transcripcin a sntesis proteica de todos los
seres vivos, son polmeros formados por una o dos cadenas de monmeros llamados
nucletidos y estos y a la vez estn formados nuclesidos y molculas de cido fosfrico.
En el campo de la medicina, especficamente en el tema relacionado con las terapias
antitumorales y vricas, uno de los temas de investigacin lo constituye la introduccin de
nuclesidos al diseo de frmacos. Se toma la estructura general de un nuclesido y sus
modificaciones pueden ser en la parte del azcar que forman parte del nuclesido o en la
base nitrogenada ( purina o pirimidina) o bien en ambas partes , dando lugar a un gran
nmero de compuestos denominados anlogos de nuclesidos.

Fuente: Prez, I. (n.d). Nuevos Carbanuclesidos condensados a heterociclos con bases no naturales : exploracin de
rutas sintticas y evaluacin biolgica. Galicia, Espaa: Universidad Santiago de Compostela.

Las modificaciones en la parte de la base nitrogenada, determinan la eficiencia de la
interaccin

Entre bases, mientras que las modificaciones en el azcar determinan la capacidad de
propagacin de la cadena de cido nucleico mediante la formacin de enlaces fosfodiester.
LECTURAS COMPLEMENTARIAS
Las actividades que aqu se presentan, son a nivel formativo y no cuantitativo (es decir, no generan calificacin).


128

Los anlogos de nuclesidos, de estructura similar a los de los nuclesidos naturales, se
incorporan a las cadenas de ADN o de ARN en formacin y segn su actividad se pueden
dividir en dos categoras: 1. S el anlogo presenta una modificacin en la parte del azcar,
como la falta del grupo 2-hidroxilo, 3-hidroxilo o ambos, se impide la formacin del enlace
fosfodiester en la cadena y por lo tanto se produce la terminacin de la misma. 2. Si la
estructura del anlogo permite completar la biosntesis del cido nucleico, ste dar lugar a
la formacin de protenas defectuosas o enzimas no funcionales con la consecuente
inhibicin de la replicacin viral.

Ejemplo: El aciclovir es un frmaco antiviral que se usa en el tratamiento de las infecciones
producidas por el virus herpes humano (VHH), entre las que se incluyen el herpes genital, el
herpes bucal, el herpes zster, la varicela y la mononucleosis infecciosa.
Este frmaco impide la replicacin viral disminuyendo la extensin y duracin de la
enfermedad.

Actividades formativas: Relacione los conceptos que Usted considera que debe saber para
entender el tema de nuclesidos anlogos y redacte con sus propias palabras la definicin
de cada una de ellas.

Defina el trmino nuclesido y nucletido, dibuje sus estructuras e identifique diferencias.
Dibuje la estructura de las bases nitrogenadas y establezca diferencias.

Defina las siglas ADN y ARN, dibuje sus estructuras e identifique diferencias.
Que otros frmacos actan o pueden actuar como nuclesidos anlogos?

Seor estudiante de In Seor estudiante de In Seor estudiante de In Seor estudiante de Ingenieria de alimentos y Tecnologa de alimentos: genieria de alimentos y Tecnologa de alimentos: genieria de alimentos y Tecnologa de alimentos: genieria de alimentos y Tecnologa de alimentos: Lea
la siguiente lectura y analice:

Durante muchos aos se ha considera que los nucletidos de la dieta no son nutrientes
indispensables, ya que los tejidos son capaces de sintetizarlos a partir de aminocidos y de otros
compuestos imples. Aunque la deficiencia en nucletidos en la dieta, no se ha relacionado con
ninguna enfermedad, se tiene evidencia de que estos compuestos son benficos para el ser
humano, especialmente durante la infancia. Sin embargo, en determinadas circunstancias, y para
algunos tejidos, el dficit de nucletidos dietticos puede afectar a funciones muy importantes. Se
puede decir que los nucletidos son nutrientes semiindispensables o condicionalmente
indispensables en algunas situaciones clnicas y de crecimiento. La ingesta de cidos nucleicos
depende del origen de la dieta y de los efectos del procesamiento de los alimentos. La ingesta
diettica vara mucho entre individuos, pero est en el rango de 0.1 1 g/persona/da. Algunos
estudios sugieren que el lmite mximo de seguridad de ingesta de cidos nucleicos sea de 2
mg/da, ya que en esta situacin se produce un incremento en el cido rico srico de 1,1-1,8 mg/dl.
Es un cido que se produce de manera natural en el organismo como resultado del metabolismo de
las purinas.

Actividad formativa Actividad formativa Actividad formativa Actividad formativa: Relacione los conceptos que Usted considera que debe saber para entender el
tema de la lectura y redacte con sus propias palabras la definicin de cada una de ellas.
De nuclesido y nucletido, dibuje sus estructuras e identifique diferencias.

129

De las bases nitrogenadas establezca diferencias.
Como profesional en el rea de los alimentos, que alimentos son ricos en purinas?.
Que nuevas lneas de produccin pueden surgir para la reduccin de alimentos ricos en purinas y
aportar a la reduccin de enfermedades como la gota?

En el proceso postmortem del pescado, se evidencian procesos de autolisis de nucletidos. El
reblandecimiento (relajacin) del tejido muscular tras el rigor se cree esta relacionado con la actividad
de una o ms enzimas musculares presentes en el pescado, las cuales digieren ciertos componentes
que intervienen en el proceso de rigor mortis.
De la hipoxantina
El ATP se degrada a ADP a AMP y a IMP, Inosina e hipoxantina . La determinacin de Inosina o
hipoxantina se ha utilizado como criterio para determinar el grado de frescura en pescados. Para
establecer de manera ms satisfactoria, el grado de frescura, , se ha considerado el valor K, el cual
expresa la relacin (%), entre la hipoxantina e Inosina frente al total de los compuestos relacionados
con el ATP. El pescado muy fresco, tiene valores bajos de K. El sabor amargo percibido en los
pescados se atribuye a la formacin de la hipoxantina, mientras que el IMP es responsable del sabor
deseable en pescados frescos.
Actividad formativa: Actividad formativa: Actividad formativa: Actividad formativa: Relacione los conceptos que Usted considera que debe saber para entender el
tema del prrafo anterior y redacte con sus propias palabras la definicin de cada una de ellas.
Qu relacin tiene los conceptos encontrados y las temticas de la Unidad 2?.

Seor estudiante del Programa Profesional de Qumica: Seor estudiante del Programa Profesional de Qumica: Seor estudiante del Programa Profesional de Qumica: Seor estudiante del Programa Profesional de Qumica:

La cristalografa de rayos X, es una tcnica fsica empleada en qumica para elucidar estructuras de
Biomolculas. La estructura secundaria del ADN, fue elucidad por Rosalind Elsie Franklin, la cual
sirvi como fundamento para la hiptesis de la estructura doble helicoidal del ADN en la
publicacin del artculo de James Watson y Francis Crick de 1953. Del anlisis de las imgenes
obtenidas, Rosalind, realiz las siguientes consideraciones: la estructura del ADN tiene dos
cadenas", tiene sus grupos fosfato hacia afuera y que existe en dos formas:

Fuente: http://www.galileog.com/ciencia/biologia/adn/franklin.html

Actividad formativa:
Relacione los conceptos que Usted considera que debe saber para entender el tema del prrafo
anterior y redacte con sus propias palabras la definicin de cada una de ellas.
Que relacin tiene los conceptos encontrados y las temticas de la Unidad 2?.
Defina las siglas ADN y ARN, dibuje sus estructuras e identifique diferencias.
Que relacin tiene el prrafo anterior y su ejercicio profesional?.


130

AUTOEVALUACION UNIDAD 2

1. Cul es el significado de los trminos:

a. Bases purnicas
b. Desoxirribosa
c. DNA
d. Bases pirimidnicas
e. Nucletido
f. RNA

2. Cul es la importancia del DNA?

3. Explique cul es la relacin existente entre genes, DNA y herencia.

4. En cules partculas subcelulares se localizan el DNA y el RNA en:
a. Bacterias
b. Hongos
c. Clulas animales y vegetales (clulas eucariticas)

5. Elabore una lista de los productos resultantes de la hidrlisis completa del DNA
y del RNA.

6. Compare las estructuras de los siguientes compuestos en el orden indicado:

Adenina Adenosina AMP
Uracilo Uridina UDP
Limina Timidita TDP
Guanina Guanosina 3 GMP

a. Base vs nuclesido vs nucletido
b. Nucletidos entre s

Recuerde como se originan los nuclesidos y como se forman los monofosfo y
ditosfonucletidos.

7. Elabore una lista de los nucletidos que se encuentran en el DNA y en el RNA.
Explique las diferencias existentes entre unos y otros. Tenga en cuenta que hay
nucletidos comunes y nucletidos que son propios de cada clase de cido
nucleico.


131

8. Cmo se localizan en la clula los diferentes tipos de RNA? Seale las
diferencias existentes entre ellos en relacin con su tamao, estabilidad y
heterogeneidad.

9. Compare el DNA y el RNA respecto a su composicin global, tamao, funcin
general y distribucin subcelular.

10. Compare la estructura primaria fundamental del DNA con la del RNA.

11. Explique cmo se organiza el DNA en virus, procariotes y eucariotes.

12. Ilustre las caractersticas ms sobresalientes de las estructuras secundaria y
terciaria del t-RNA.


132


Para ampliar sus conocimientos en algunos de los aspectos especficos tratados
en este captulo, consulte las siguientes referencias:

1. La estructura del material hereditario /F.H.C., Crick.- - En: Las bases
moleculares de la vida: Lecturas del Scientific American / Julio R Villanueva.- -
Madrid: Blume, 1971.- - p.86.
2. La estructura de los virus / R. W. Horne. - - En: las bases moleculares de la
vida.- - Ibid., p155.
3. The genetic activity of mitochondria and chloroplasts / U. W. Goodenough, R.P.
Levine.- - Scientific American.- - Vol.223, 1970.- - p22.

1. The oxygen cycle/Preston Claud, Aharon Gibor. - - Scientlfic American.- - Vol.
223, 1970.- -p.110.
2. The carbon cycle / Brt Bolin.- - Scientlflc American.- - Vol 223, 1970.- - p124.
3. The nitrogencycle/C.C. Delwiche.- - Scienflilc American.- - vo1223, 1970.- -
p.136.
4. The energy cycle of the biosphere / George M WoodwelL- - Scientlflc American.
Vol 223, 1970.- - p64.

BIBLIOGRAFIA USADA EN LA ACTUALIZACION DE LA UNIDAD 2

Garrido, Armando. Teijon, Jos Mara (2008). Fundamentos de Bioqumica
estructural. Madrid, Espaa: Editorial Tebar.


Plumer, D (1981). Bioqumica prctica. Londres: McGraw Hill.


133

UNIDAD DIDACTICA 3: METABOLISMO: CATABOLISMO Y
BIOSINTESIS DE BIOMOLECULAS

INTRODUCCION

Bioqumica debe manejar, como son las generalidades y mecanismos bioqumicos
de las rutas catablicas y biosintticas de las Biomolculas que se consumen en
la dieta.

de los programas de ingeniera de alimentos, qumica y regentes de farmacia, el
manejo y comprensin de los temas que en esta unidad se presentan; los nexos
de la bioqumica con estos campos disciplinares se derivan en que la bioqumica
como parte de las ciencias biolgicas maneja los conceptos tericos derivados de
investigaciones en donde se explican el funcionamiento y mecanismos qumicos a
nivel celular para el mantenimiento de los procesos vitales de organismo de origen
vegetal y animal. Conocer el funcionamiento de las vas catablicas y
biosintticas conlleva a los estudiantes de los programas mencionados, a
comprender la importancia en la produccin de ATP para el diseo de balances
energticos, procesos tecnolgicos y el surgimiento de nuevas tecnologas como
el diseo de frmacos.
Esta unidad es la base para que los estudiantes en formacin profesional
relacionen el destino de los nutrientes suministrados en la dieta animal y vegetal
en la formacin de nuevos bloques de protenas, carbohidratos y lpidos, as como
tambin las alteraciones que sufren conllevando a la alteracin del metabolismo y
enfermedad del organismo.

contexto real de sus profesiones. Para el rea de alimentos, la relacin con las
rutas catablicas est en la produccin de nuevas lneas e innovacin de
productos fermentados. Los regentes de farmacia podrn comprender el
mecanismo y espectro de accin de los medicamentos y como pueden stos
aliviar el malestar activando o inhibiendo la ruta involucrada. Los profesionales en
qumica, la bioqumica del metabolismo evidencia los mecanismo qumicos
como la oxido-reduccin, transferencia de electrones, diferencias de potenciales y
gradientes qumicos, mecanismos involucrados en cada ruta catablica y
anablica.


134

JUSTIFICACION

biolgicas.

metabolismo; temticos de mucho inters e importancia en el perfil del profesional
de los programas de ingeniera de alimentos, qumica y regentes de farmacia.

reacciones qumicas catablicas y el aporte energtico provenientes de la
oxidacin de la Biomolculas, la biosntesis y el consumo de energa, temas de
alta complejidad que requieren de dedicacin, empeo y estudio por parte del
estudiante.


135

OBJETIVOS

CAPITULO 7: METABOLISMO DE GLUCIDOS

- Describir la secuencia de transformaciones que sufren los carbohidratos en
cada una de las vas degradativas, identificando las clases de enzimas que
intervienen.
- Ilustrar en las diferentes vas los principios generales que las rigen.
- Identificar en cada va su localizacin celular, los metabolitos iniciales y
finales, los compuestos intermediarios ms importantes, el tipo de
transformacin sucedida y las enzimas que participan.
- Establecer para cada va los balances de sustrato carbonado, coenzimas y
energa en forma de ATP.
- Explicar las diferentes vas por las cuales se realiza la biosntesis de
carbohidratos.
- Ilustrar los principios organizativos de la biosntesis.
- Identificar en cada va su localizacin celular, metabolitos iniciales y finales,
metabolitos intermedios ms importantes y las coenzimas que participan.
- Realizar para cada va los balances de compuestos carbonados, coenzimas
y energa (como ATP).
- Aplicar los conceptos de bioenergtica para explicar la ocurrencia o no de
algunas reacciones metablicas.
- Establecer las analogas y diferencias entre las vas degradativas y
biosinteticas de monosacridos.
CAPITULO 8: METABOLISMO DE LIPIDOS

- Ilustrar cmo se realiza la degradacin de los triglicridos, fosfoglicridos y
esteroides.
- Explicar las vas biosintticas generales de las diferentes clases de lpidos.
- Identificar en cada una de las vas metablicas su localizacin celular,
metabolitos iniciales, metabolitos intermedios comunes a otras vas,
metabolitos finales y las coenzimas que intervienen.
- Establecer los balances de compuestos carbonados, coenzimas y ATP,
cuando sea el caso, producidos en el catabolismo y anabolismo de los
diferentes tipos de lpidos estudiados.
- Comparar la biosntesis con la degradacin de los cidos grasos.


136

CAPITULO 9: METABOLISMO DE AMINOACIDOS

- Analizar las principales vas generales del catabolismo de los esqueletos
carbonados, grupos -NH2 y -COOH de los aminocidos.
- Describir las diferentes formas como se elimina el NH4, enfatizando el
mecanismo empleado por los vertebrados terrestres.
- Ilustrar las diferencias de capacidad biosintticas de aminocidos que
presentan los diversos organismos.
- Ilustrar cmo se realiza la biosntesis de algunos aminocidos.
- Demostrar la forma como opera en la biosntesis de aminocidos el
mecanismo de control de retroinhibicin.


137


CAPITULO 7: METABOLISMO DE GLUCIDOS


138

CAPITULO 7: METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS
17

Para el inicio del estudio del catabolismo de carbohidratos, el estudiante debe
activar sus conocimientos metacognitivos previos de sus cursos anteriores como
la qumica general y la qumica orgnica en cuanto a los conceptos generales de
los carbohidratos (estructura, propiedades qumica y clasificacin) ya que estos
conceptos como tales no hacen parte del curso de bioqumica. Para ayudar al
estudiante en esta parte, el curso cuenta con una herramienta virtual donde se
ilustra los conceptos previos, titulado Generalidades de carbohidratos

El captulo comienza con la el estudio de una de las rutas catablicas ms
importantes en la degradacin de los azcares que se consumen en la dieta, la
gluclisis o gliclisis. El estudiante encuentra las reacciones y la ubicacin celular
de esta ruta y el destino de sus metabolitos finales segn el organismo (aerobio y
anaerobio). Si el organismo es aerobio, el captulo analiza la siguiente ruta
catablica para continuar con esa degradacin, se habla de la ruta que ocurre en
organismo eucariotes aerobios, especficamente en las mitocondrias, llamada ciclo
de krebs o ciclo de los cidos tricarboxlicos. Este ciclo es de vital importancia para
comprender y calcular la produccin de ATP y mantener el equilibrio del
metabolismo basal.

Tanto la glicolisis como el ciclo de krebs se caracterizan por ayudar a la
produccin del ATP y para ello, el estudiante entra a comprender que de acuerdo
a la reaccin, coenzimas y enzimas de los mecanismo qumicos de estas rutas, la
clula puede formar ATP a partir de dos mecanismos: a travs de sustratos,
empleando kinasas especficas y a travs de una cadena transportadora de
electrones ubicada en la parte externa, media e interna de la mitocondria; siendo
este ltimo mecanismo el mayor generador de ATP, este proceso se conoce
como fosforilizacin oxidativa (FO), el cual utiliza coenzimas especificas como
NAD, FAD y Coenzima.

17

Estimado Estudiante: antes de com Estimado Estudiante: antes de com Estimado Estudiante: antes de com Estimado Estudiante: antes de comenzar con el tema. Se recomienda que repase los conceptos generales de enzar con el tema. Se recomienda que repase los conceptos generales de enzar con el tema. Se recomienda que repase los conceptos generales de enzar con el tema. Se recomienda que repase los conceptos generales de
carbohidratos visto en sus cursos de: qumica general y qumica orgnica. carbohidratos visto en sus cursos de: qumica general y qumica orgnica. carbohidratos visto en sus cursos de: qumica general y qumica orgnica. carbohidratos visto en sus cursos de: qumica general y qumica orgnica.
Para ello consulta el material virtual que est en la pgina principal del curso Generalidades sobre Para ello consulta el material virtual que est en la pgina principal del curso Generalidades sobre Para ello consulta el material virtual que est en la pgina principal del curso Generalidades sobre Para ello consulta el material virtual que est en la pgina principal del curso Generalidades sobre
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http://biomodel.uah.es/model3j/redir.htm?monosac.htm http://biomodel.uah.es/model3j/redir.htm?monosac.htm http://biomodel.uah.es/model3j/redir.htm?monosac.htm http://biomodel.uah.es/model3j/redir.htm?monosac.htm

139

En este captulo tambin se analiza las reacciones de biosntesis de
carbohidratos, su ubicacin celular e importancia en la construccin de tejidos y
rganos y la reacciones de Fotosntesis para organismos vegetales.


Leccin 31: Catabolismo de carbohidratos

31.1 Gluclisis

Este tema se iniciar con la llamada va glicoltlca porque a ms de ser la primera
va degradativa por la que pasan los carbohidratos es una de las ms adecuadas
para ser usada como un ejemplo de va metablica ya que se conocen con
bastante detalle las diversas reacciones que en ella ocurren, as como las enzimas
que la catalizan, las transformaciones de energa involucradas y, por si fuera poco,
es una de las vas metablicas que ms aplicaciones industriales tiene. De hecho
las investigaciones pioneras sobre la gliclisis realizadas por Pasteur, Tauber y
otros, se hicieron por su inters en comprender como se realizaba la fermentacin
alcohlica.
La gliclisis se realiza en el citoplasma celular y las enzimas que intervienen se
pueden aislar con relativa facilidad por no estar asociadas a ninguna partcula
subcelular; esto ha facilitado muchsimo el anlisis individual de las diferentes
reacciones como veremos ms adelante. En esta va se realiza una oxidacin
anaerobia de carbohidratos (almidn, glicgeno, glucosa, fructosa, etc.)
apareciendo como productos finales alguno de los siguientes compuestos:

cido lctico: tejidos animales (msculo especialmente).
Etanol y CO
2
: levaduras.
Etanol o cido pirvico: plantas y animales dependiendo de las condiciones.

El confinamiento de esta va en el citoplasma es posible porque todos los
metabolitos intermedios son del tipo ester-fosfato, lo cual impide su paso a travs
de la membrana celular y por tanto no pueden difundirse al exterior de la clula.
En la gliclisis, como veremos luego, se ilustra muy bien un principio general del
metabolismo que consiste en que las oxidaciones (aerobias o anaerobias) estn
acopladas a la formacin de ATP; esto sucede porque generalmente el compuesto
oxidado que se forma tiene un grupo fosfato con un potencial de transferencia
de grupo elevado y cede este sobre el ADP para dar lugar al ATP.
P
P

140

La gliclisis es una de las vas ms universales que existen pues tiene lugar en
organismos aerobios, anaerobios y facultativos; de hecho, por razones que sern
claras ms adelante, es la va que permite a los organismos anaerobios obtener la
energa que requieren para sus procesos metablicos. En los otros tipos de
organismos es la primera etapa obligada de una secuencia de vas para la
degradacin de los carbohidratos y de all su importancia.

Los carbohidratos que alimentan la va pueden ser:

Polisacridos como el almidn, que por accin de las - y - amilasas produce
maltosa o glucosa, o el glicgeno que en el msculo es degradado por accin
de la fostorilasa a (que es una glicosiltransferasa) a Glc-1-P.
Disacridos que frecuentemente son:
- Sacarosa, que por una hidrolasa (invertasa) produce GIc y Frc.
- Maltosa, que con la maltasa se hidroliza a Glc.
- Lactosa, que por la lactasa (una hidrolasa) produce Gal y Glc.
Hexosas que generalmente son Glc, Gal, Frc.

La figura 42 ilustra las reacciones que desembocan en la produccin de los
monosacridos.

La va glicoltica se esquematiza en la figura 43 donde se indican las clases de
enzimas que catalizan cada reaccin usando la nomenclatura ms general; es
conveniente tener presente que cada enzima es caracterstica de una reaccin
dada y as, por ejemplo, la isomerasa de la reaccin 3 es diferente de la isomerasa
de la reaccin 4 y de la isomerasa de la reaccin 6 y as sucesivamente. Hemos
adoptado este enfoque general para evitar el uso de los nombres de cada enzima
que consideramos innecesario para los propsitos de este curso.

Analizaremos en primer lugar las transformaciones qumicas que sufren los
monosacridos que nutren la va, haciendo nfasis en los metabolitos intermedios
que sirven como puntos de conexin con otras vas. Luego analizaremos la va
desde el punto de vista energtico y por ltimo resaltaremos la importancia que
tiene en diversos organismos.


141

Figura 42: Carbohidratos proveedores de las hexosas que nutren la gliclisis

Vemos en la figura 43 que la Gal, GIc y Frc (ver la lista de abreviaturas) sufren
cada una Fosforilacin por distintas kinasas (reacciones 2, 5 y 7) que resultan en
los respectivos derivados esterfosfato; la Gal-1-P es transformada a Glc-1- P (que
a su vez puede provenir de la degradacin del glicgeno por fosforilasa a) y por
reacciones de isomeracin (4 y 6) estos monosacridos convergen a Frc -6- P.

Esta molcula sufre una segunda Fosforilacin (reaccin 8) para dar el diester-
fosfato Frc-1, 6-DiP; de todas las reacciones de la va, sta es la que se realiza
ms lentamente y por ello es el paso limitante en la gliclisis, es decir de la
velocidad con que se suceda, depende la velocidad global de la va.

La prxima reaccin (9) es muy interesante pues a partir de una molcula de
hexosa se obtienen dos triosas que adems de ser fcilmente interconvertibles
(10) sirven como puntos de enlace de la gliclisis con otras vas.

Dependiendo de las necesidades metablicas de la clula la 3-P-DHA puede ser
usada para la sntesis de lpidos o puede ser isomerizada (10) a 3-P-Gal si la
clula requiere la produccin de energa, en este caso prosigue la gliclisis con 2
molculas de 3-P-Gal y tendremos que hasta aqu se han producido 2 triosas a
partir de una hexosa.

142

Figura 43: Esquema de la va glicoltica


143

La reaccin de ruptura podemos tambin representarla as:

En la siguiente reaccin (11) se tiene que, paralelamente con la oxidacin del
aldehdo al cido, se produce un compuesto con alto PTG ilustrando as uno de
los principios generales a que ya nos referimos; la oxidacin se cataliza por una
deshidrogenasa que emplea como coenzima la nicotinamidaadenindinucletldo
(NAD).

Esta molcula incluye en su estructura la nicotinamida que es una vitamina del
grupo B cuya deficiencia tiene mltiples efectos incluyendo la pelagra; el NAD es
una de las coenzimas de las deshidrogenasas y participa reversiblemente en
muchas reacciones de xido-reduccin de acuerdo con lo indicado en la figura 44.

En la reaccin (11) Ared corresponde a 3-P-Gal y Aox a 1,3 -DiP-Gato. En la
figura 44 se aprecia que en su forma oxidada el NAD tiene una carga positiva y
cuando se reduce acepta slo un hidrgeno, liberndose al medio el otro
hidrgeno como H
+
; la parte de la molcula que acepta el H
+
es la nicotinamida y
el resto queda inalterado.

El compuesto rico en energa (1,3-DiP-Gato) cede, gracias a una kinasa, un grupo
fosfato (el ms lbil) sobre el ADP formando ATP y 3-P-Gato (reaccin 12), ste
se isomeriza a 2-P-Gato (13) quien por accin de la enolasa sufre una xido
reduccin interna al perder H
2
0 y dar PEP; nuevamente ac se puede demostrar
cmo una oxidacin se acompaa de la produccin de un metabolito con PTG

144

elevado. El PEP cede su al ADP por accin de una kinasa y se transforma en
enolpiruvato (15) que se isomeriza (16) a piruvato.

Figura 44: Papel del NAD en las reacciones de xido-reduccin

Hasta aqu la va glicoltica sucede en igual forma para todos los organismos y
dependiendo de si tenemos condiciones anaerobias o aerobias el piruvato se
transforma de diferente manera. Por ejemplo, si la gliclisis se est realizando en
el msculo, donde predominan condiciones de O
2
bajas el piruvato se reduce (por
una deshidrogenasa) a lactato (17) o si se est realizando en levaduras, hay una
decarboxilacin (19) y posterior reduccin a Etanol (20); tenemos entonces una
fermentacin alcohlica. En los microorganismos anaerobios el piruvato es
transformado en diversos productos de fermentacin que terminan en metano y
otros gases.

En organismos aerobios el piruvato se usa como producto inicial en otra va
degradativa que se conoce como el ciclo de Krebs o de los cidos tricarboxlicos,
que estudiaremos posteriormente.

Si hacemos un balance de compuestos carbonados tenemos entonces que a partir
de una hexosa (Glc, Gal, Frc) se producen dos molculas de piruvato, habiendo
ocurrido una oxidacin (sin intervencin del O
2
, o sea anaerobia).
Desde el punto de vista de un balance de coenzimas se han producido 2 NADH +
2H
+
por dos piruvato (o sea por hexosa) que luego son consumidas en la
transformacin del piruvato a lactato o a etanol.

El balance energtico de la gliclisis nos muestra que si una hexosa es la materia
prima se consumen 2 ATP (reacciones 2 y 8 reacciones 5 y 8 reacciones 7 y 8)
P

145

y se producen 4 ATP (12 y 15) por 2 piruvatos producidos; la ganancia neta es de
2 ATP por hexosa oxidada.

Si consideramos la reaccin: Glucosa 2 lactatos

Lo que no permite un balance cero de NAD
+
y no altera el balance neto de ATP,
tenemos que su G = -47 Kcal/mol.

La reaccin en la clula sera (para condiciones estndar):

Glucosa + 2 ADP + 2 Pi 2 lactatos + 2 ATP + 2H
2
O,

Con un G = -32,4 kcal /mol

La diferencia de G es entonces de -14,6 kcal/mol que corresponde a la energa
acumulada en los 2ATP (7,3 kcal/mol x 2) y en consecuencia la eficiencia
energtica de la gliclisis es de un 31% (14,6 x 100/47); vale la pena anotar cmo
esta eficiencia es muy superior a la del rendimiento energtico de cualquier motor
mecnico.

En algunas clulas, como el eritrocito, debido a las concentraciones intracelulares
de los diversos metabolitos de la gliclisis la eficiencia puede subir hasta un 53% y
por eso estas clulas pueden derivar nicamente de la gliclisis toda la energa
que requieren para su metabolismo.
Si la materia prima es el glicgeno (caso del msculo y del hgado) un examen de
la figura 39 nos muestra que el balance neto es de +3ATP lo que significa una
eficiencia superior al 31%.

De lo anterior podemos deducir la enorme importancia que reviste la gliclisis
como proceso que permite obtener energa en forma anaerobia para todos
aquellos microorganismos anaerobios y como proceso inicial de oxidacin en los
organismos aerobios; una discusin detallada del papel de la gliclisis en la
contraccin muscular la encuentra en la lectura recomendada No. 1.

Las reacciones de la gliclisis adems de estar en la base de procesos
industriales como las fermentaciones alcohlica, lctica, actica, de produccin de
glicerol, etc., proveen tambin la explicacin de algunos mtodos usados para el
control de la proliferacin de microorganismos como son la clorinacin del H
2
O (ya
que el Cl
2
inhibe las enzimas que catalizan los pasos iniciales de la gliclisis), la
adicin de ion F
-
(que inhibe la enolasa, reaccin 14) o la adicin de agentes
acomplejantes de metales (ya que las enzimas que catalizan las reacciones 14,15,
9 requieren metales para ser activas).


146

31.2 Ciclo de Krebs

Esta va tambin recibe el nombre ciclo de los cidos tricarboxlicos porque en ella
aparecen algunos cidos de este tipo; la secuencia de reacciones que la integran
fue propuesta por el bioqumico austriaco Hans Krebs quien recibi el premio
Nobel en 1953. Su propuesta original coincide bsicamente con el ciclo tal como lo
conocemos hoy y estaba fundamentada en una gran cantidad de evidencia
experimental.

La va se realiza en la cara interna de las membranas mitocondriales de los
eucariotes y en la membrana celular de los procariotes donde se encuentran las
enzimas y coenzimas participantes; esto tiene varias consecuencias importantes
derivadas de la permeabilidad selectiva que poseen las membranas.

El ciclo de Krebs tiene como funcin primordial oxidar completamente hasta CO
2
y
H
2
O, el acetato (que se encuentra bajo una forma activada) que proviene directa o
indirectamente del catabolismo de carbohidratos, lpidos o protenas; esto, aunado
al hecho que muchos de los metabolitos intermedios del ciclo se usan como
precursores en varias rutas biosintticas, pone de relieve la gran importancia del
ciclo de Krebs y su posicin central en el metabolismo celular. Este punto se ir
haciendo evidente a medida que estudiemos las vas metablicas.

En todos los organismos aerobios se ha demostrado la existencia de este ciclo lo
cual demuestra su universalidad y la importancia de conservar esta va a lo largo
de la evolucin. Comnmente se inicia la discusin del ciclo de Krebs a partir del
metabolito que conecta esta va con la gliclisis.

Veamos entonces que sucede con el piruvato obtenido como producto final de la
gliclisis en las clulas aerobias. Este piruvato, que se encuentra en el citoplasma,
es oxidado hasta una forma especial del acetato llamado acetil-coenzlma A o
acetilCoA por medio de un sistema multienzimtico conocido como el complejo de
la piruvato deshidrogenasa. Esta reaccin de oxidacin es un requisito para la
entrada del esqueleto carbonado de los carbohidratos (a travs del piruvato) en el
ciclo de Krebs. El complejo de la piruvato deshidrogenasa est constituido por
varias deshidrogenasas y transferasas acompaadas de sus respectivas
coenzimas; nosotros nos limitaremos a mencionar la secuencia en que actan

Seor estudiante Seor estudiante Seor estudiante Seor estudiante: acabamos : acabamos : acabamos : acabamos de analizar una de las rutas ms importantes par de analizar una de las rutas ms importantes par de analizar una de las rutas ms importantes par de analizar una de las rutas ms importantes para a a a los organismos aerobios los organismos aerobios los organismos aerobios los organismos aerobios y y y y
anaerobios. anaerobios. anaerobios. anaerobios.
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147

estas coenzimas, lo cual se muestra en la figura 45 donde se indican solo las
partes funcionales de las enzimas. Tenemos entonces:

Pirofosfato de tiamina (PTT) que corresponde a la vitamina B que asociada a
una deshidrogenasa provoca la decarboxilacin del piruvato en
(radical acetilo) que se une temporalmente al PTT.

Figura 45: Oxidacin del piruvato en acetato por accin del complejo de la piruvato deshidrogenada

148

El cido lipoico, vitamina del complejo B asociada a una transferasa que recibe
el del PTT, regenerado este ltimo.

La coenzima A, unida a una transferasa; la parte funcional de esta coenzima es
un grupo tiol (-SH) capaz de entrar a formar un enlace tioester (rico en energa)
con el acetilo ligado al lipoico dando lugar al acetil-CoA y liberando el cido
lipoico en su forma reducida. De aqu en adelante las siguientes reacciones
tienen por objeto reoxidar las coenzimas reducidas.

La flavinadenin-di nucletido (FAD) de cuya estructura hace parte la riboflavina
(vitamina B2). Esta es una coenzima de deshidrogenasas y recibe los dos
hidrgenos del lipoico regenerando la forma oxidada de ste y quedando como
FADH
2
.

El NAD
+
que por intermedio de una deshidrogenasa reoxida al FADH
2
,
quedando como aceptor final de los electrones en forma de NADH + H
+

La accin de este sistema multienzimtico la podemos resumir en la reaccin 1 de
la figura 46. De esta manera se oxida el piruvato y el acetil-CoA queda situado en
la membrana interna mitocondrial donde est disponible para entrar en el ciclo de
Krebs.

La va del ciclo de Krebs se inicia (figura 46) con la condensacin de una molcula
de oxalacetato y una molcula de acetil-CoA (reaccin 2) catalizada por una
sintetasa formndose el citrato; este cido se isomeriza (3 y 4) hasta Isocitrato y
luego se oxida con una NAD
+
deshidrogenasa (5) hasta oxalsuccinato siendo esta
reaccin el paso limitante. Si observamos la estructura del oxalsuccinato
apreciamos que es una -ceto cido con un carboxilo vecinal y por eso sufre
fcilmente una decarboxilacin (6); la -ceto glutarato resultante es decarboxilado
a su vez por un complejo multienzimtico muy similar al que actu en la reaccin 1
y se produce la succinil-CoA (7).

Este compuesto tiene un enlace rico en energa (enlace tioester) y aqu
nuevamente podemos demostrar el principio de que una oxidacin est acoplada
a la formacin de un compuesto con alto PTG. Esta energa se aprovecha para
fosforilar el ADP a travs del par GDP-GTP (reaccin 8); esta produccin de ATP
es lo que se conoce como fosforilacin a nivel de sustrato y en la gliclisis se
presenta tambin cuando se pasa del 1,3-DiP-Gato a 3-P- Gato (reaccin 12,
figura 43) o del PEP a piruvato (reaccin 15, figura 43).

149

El succinato producido se oxida a fumarato (9) por medio de una deshidrogenasa
que tiene como coenzima FAD; la estructura y la reaccin de xido-reduccin en
que participa se muestra en la figura 47.

Note que el FAD puede aceptar dos hidrgenos y no se liberan H
+
al medio, a
diferencia de lo que ocurre con el NAD
+
.

El fumarato se hidrata para formar malato (reaccin 10) que se oxida a oxalacetato
con una NAD-deshidrogenasa. De esta manera se cierra el ciclo regenerndose el
oxalacetato consumido en la condensacin con el Acetil-CoA (reaccin 2)

Figura 46: Esquema del ciclo de Krebs. Fuente: Prez, G. Navarro Y. (1992). Bioqumica. Santa fe de
Bogot.: Unisur.

150

En esta va encontramos un gran nmero de metabolitos que sirven como sitios de
enlace con otras vas y es ms breve enumerar aquellos que no cumplen tan
frecuentemente esta funcin; estos metabolitos son fundamentalmente los cidos
tricarboxlicos citrato y cis-aconitato cuyas conexiones directas con otras rutas
metablicas son escasas.

Tiene especial importancia el acetil-CoA pues all convergen productos del
catabolismo de carbohidratos (como hemos visto), de lpidos (en lo que respecta al
metabolismo, los cidos grasos) y de algunos aminocidos; el -cetoglutarato,
fumarato, malato y oxalacetato son tambin compuestos que conectan con vas
degradativas o biosintticas de aminocidos y carbohidratos.

Figura 47: Estructura y modo de accin de la Flavinadenin dinucletido (FAD)

Al intentar hacer un balance de los compuestos que intervienen en esta va,
observamos que por su naturaleza cclica slo se requiere un aporte extremo de

151

acetil-CoA, de coenzimas de deshidrogenasas y de ADP, puesto que los
intermediarios del ciclo se regeneran continuamente.

En lo referente al carbono un examen de la figura 46 muestra que por cada acetil-
CoA que entra se producen 2CO
2
o sea que podemos considerar que el acetilo se
ha oxidado hasta CO
2
y H
2
O; esta oxidacin lleva aparejada la produccin de 3
NADH + 3H
+
y de 2 FADH
2
que por existir en pequeas cantidades al interior de la
mitocondria y no poder difundir a travs de la membrana (por la permeabilidad
selectiva de sta), deben ser reoxidadas para que el ciclo siga operando. Esta
reoxidacin se efecta por medio de la fosforilacin oxidativa que es una va
ntimamente asociada, tanto temporal como espacialmente, al ciclo de Krebs.

Con excepcin del NADH + H
+
las coenzimas que participan en los sistemas
multienzimticos de las reacciones (1) y (7) se regeneran por las reacciones
indicadas en la figura 45.

Desde el punto de vista energtico, el ciclo de Krebs no es un gran productor
directo de ATP pues por acetato oxidado solo se obtiene un ATP (reaccin 8); es
en la Fosforilacin oxidativa donde la reoxidacin del NADH + H
+
y FADH
2

producir buenas cantidades de ATP tal como veremos ms adelante.

Al igual que en la gliclisis es posible estudiar in vitro las diversas reacciones y
calcular sus G empleando las concentraciones determinadas in vitro; se
encuentra as que varias reacciones del ciclo (1,2,7,11) tienen G del orden de -8
kcal/mol, es decir son muy exergnicas y su equilibrio est fuertemente
desplazado en la direccin que en la figura 46 corresponde al sentido del giro de
las manecillas del reloj; estos valores explican por qu las reacciones que en
principio son fcilmente reversibles (3, 4, 5), en la clula no ocurren en direccin
opuesta.

Es importante recordar que el ciclo de Krebs no es nicamente una va
degradativa sino que a partir de algunos de sus metabolitos, se pueden sintetizar
otras Biomolculas. Si por alguna razn alguno de sus metabolitos intermedios es
consumido, es posible restaurar su concentracin inicial por medio de las llamadas
reacciones anaplerticas. Por ejemplo, si hay deficiencia en oxalacetato la
reaccin:

152

Permite su sntesis a expensas del consumo de ATP y CO
2
utilizando el piruvato
que es un metabolito fcilmente disponible. Puesto que el oxalacetato se usa
cclicamente se puede renovar con esta reaccin cualquiera de los intermediarios
que participan en el ciclo. El bloqueo de estas reacciones anaplerticas puede
conducir a la paralizacin del ciclo y por ende del metabolismo.

La actividad del ciclo se puede controlar a travs de varios factores:

Niveles enzimticos. Las enzimas estn presentes en proporciones
constantes y muy seguramente hay un mecanismo de control gentico que
regula su biosntesis.
Niveles de substrato. Las concentraciones de los substratos son del orden de
10
-4
M en hgado o en rin y de 10
-5
M en clulas procariticas (ej. E. coli).
Niveles de coenzimas. Generalmente son cercanos a 10
-4
M -10
-5
M y su
disponibilidad es crtica para el funcionamiento de la va.
Accesibilidad o permeabilidad de la membrana. Es un resultado de las
propiedades de la membrana y tiene como efecto el que el NADH, FADH
2

citoplasmticos no puedan penetrar a la mitocondria para ser reoxidadas. A su
vez el acetil - CoA intramitocondrial no difunde al exterior (o sea al citoplasma).
Control respiratorio. Este factor resulta del acoplamiento respiracin
fosforilacin. El control se origina en el valor de la relacin ADP/ATP. Si el ADP
>> ATP, aumenta la respiracin (o sea el catabolismo de acetl-CoA y la
fosforilacin); si hay exceso de ATP se tiene el efecto inverso debido a la
inhibicin de la deshidrogenasa que acta en el paso limitante del ciclo, es
decir la oxidacin de isocitrato o oxalsuccinato (reaccin (5) en la figura 46).
Este mecanismo de control es una demostracin ms del principio de mxima
economa que se discuti previamente.

Leccin 32: Fosforilacin oxidativa y la va del glicerol fosfato

32.1 Fosforilacin oxidativa


153

Dada la asociacin entre esta va y el ciclo de Krebs, su localizacin es a nivel de
las crestas mitocondriales de los eucariotes y de las membranas celulares de los
procariotes; es obvio que tiene lugar slo en organismos aerobios obligados o
facultativos.

La funcin de la fosforilacin oxidativa es doble: por una parte reoxida las
coenzimas reducidas (NADH + H
+
, FADH
2
) producidas en el ciclo de Krebs,
transfiriendo los electrones por una serie de transportadores hasta que finalmente
son aceptados por el O
2
; por otra parte, sintetiza ATP aprovechando las
diferencias en potenciales de reduccin (E) que existen entre los
transportadores y la convertibilidad de estas diferencias de potencial en energa.

Para facilitar la discusin consideremos primero el transporte de electrones y
luego la formacin del ATP que le est asociada, sin que por ello se quiera
significar que son procesos independientes o consecutivos.

32.1.1 Transporte de electrones

Las reacciones que tienen lugar en este transporte, son de xido-reduccin y en
consecuencia se puede determinar sus potenciales de reduccin estndar y
aplicarles la ley de Nernst. En la tabla 17 se muestran los principales compuestos
que intervienen en el transporte con sus valores de E.

Tabla 17: Potenciales de reduccin estndar de algunos metabolitos y transportadores de la cadena de
electrones

Forma Reducida Forma Oxidada E (Volts)
Piruvato + HSCoA
H
2

Isocitrato
NADH + H
+

Malato
FADH
2

Succinato
Citocromo b (Fe
+2
)
Citrocromo c1 (Fe
+2
)
Citocromo c (Fe
+2
)
Citocromo a (Fe
+2
)
Citocromo a3 (Fe
+2
)
H
2
O
Acetl-CoA
2H
+

-cetoglutarato
NAD
+

Oxalacetato
FAD
Fumarato
Citrocromo b (Fe
+3
)
Citocromo c1 (Fe
+3
)
Citocromo c (Fe
+3
)
Citocromo a (Fe
+3
)
Citocromo a3 (Fe
+3
)
O
2

-0,48
-0,41
-0,38
-0,32
-0,18
-0,05
+0.03
+0,07
+0,23
+0,25
+0,29
+0,55
+0,82

Los transportadores de e
-
ms estudiados son de tres tipos:

NAD
+
- Deshidrogenasas y NADP
+
- Deshidrogenasas
Flavin -deshidrogenasas
Citocromos

154

Las deshidrogenasas del primer tipo poseen NAD
+
(cuya estructura y modo de
accin ya fue discutido) o NADP
+
como coenzimas. Esta ltima es muy similar
estructural y funcionalmente al NAD
+
ya que solo difiere en que posee un grupo
fosfato adicional que esterifica el OH -2 en la ribosa de la adenosina. La diferencia
ms importante reside en que las NAD
+
- deshidrogenasas actan
preferencialmente en reacciones degradativas y las NADP
+
- deshidrogenasas
catalizan reacciones redox biosintticas.

Las deshidrogenasas del segundo tipo emplean FAD y FMN (flavinmono-
nucletido) como enzimas. El FMN es un nucletido en que interviene la flavina
como base nitrogenada, con el mismo mecanismo aceptor de H
+
que el FAD. Si
est interesado en la estructura del FMN consulte alguna de las referencias
generales.

El tercer tipo de transportadores est constituido por la familia de los citocromos.
Estas protenas globulares adems de su cadena polipeptdica poseen un grupo
heme cuya estructura es muy similar al heme de la hemoglobina ya que solo
cambian algunos de los sustituyentes sobre el ncleo porfirnico; la diferencia
fundamental estriba en la funcin de este grupo en los citocromos ya que en ellos
el tomo de hierro interviene en el transporte de electrones (e
-
) pasando de Fe
+3

(forma oxidada) a Fe
+2
(-forma reducida) y viceversa. En los citocromos los sitios
de coordinacin 5 y 6 del Fe estn ocupados por residuos de AA y por tanto no
estn disponibles para unirse con O
2
, CN
-
o CO. La tabla 18 muestra las
principales caractersticas de los citocromos que participan en el transporte de
electrones en la fosforilacin oxidativa.

Tabla 18: Algunas propiedades fisicoqumicas de los citocromos de la fosforilacin oxidativa
Protena Peso Molecular
(Daltons)
E (Volts) Bandas de Absorcin (nm)
*

Citocromo b
Citocromo c
Citocromo c
Citocromo a
Citocromo a
3

30.000
370.000
12.500
240.000**
+ 0,07
+0,23
+0,25
+0,29
+0,55
563
554
550
600
603
532
524
521
-
-
429
418
415
439 (Cu presente)
443 (Cu presente)
* Bandas de absorcin de la forma reducida
** Complejo a +a3

Estas protenas, con excepcin del citocromo c, estn fuertemente asociadas a la
membrana mitocondrial lo cual ha dificultado su purificacin y caracterizacin
detallada. Sin embargo se conoce su composicin en AA y los estudios
comparativos de secuencia hechos con el citocromo c han permitido establecer
cmo ha evolucionado esta protena en los diversos organismos aerobios.

155

La estrategia seguida para establecer los componentes y su orden, en la cadena
de transporte de electrones es un buen ejemplo de cmo la evidencia
experimental de diferente naturaleza puede integrarse para construir un modelo de
una va metablica. En el caso presente se tuvieron en cuenta los siguientes
hechos:

Es factible aislar de las mitocondrias complejos de algunos de los
transportadores ej: NAD - deshidrogenasa asociada con citocromo b, coenzima
Q y protenas Fe-S o citocromo c asociado a citocromo c
1
. Esto significa que
hay una organizacin de estos componentes en la membrana.
El orden en que se coloquen los transportadores debe considerar los valores
de E y se ir del ms negativo hasta el ms positivo o sea hasta el O
2
como
aceptor final de los e
-
.
El transporte de e
-
puede ser bloqueado selectivamente en varios puntos
gracias a la existencia de inhibidores de este transporte; los ms estudiados
son la rotenona, el amital, la antimicina A y el in CN
-
. Estos inhibidores
provocan la acumulacin de las formas reducidas de los transportadores que
estn localizados antes del sitio de accin del inhibidor; los transportadores
posteriores estn en su forma oxidada y estas dos formas se pueden distinguir
espectroscpicamente. Los estudios con inhibidores del transporte de e- han
sido particularmente tiles para establecer el orden de aquellos
transportadores para los cuales no se conoce su valor de E.

Adems de los transportadores ya discutidos, se han aislado:
Coenzima Q (o ubiquinona). Es una benzoquinona con 8-10 radicales isopreno
(n = 8, n = 10) que acta en reacciones redox de la siguiente forma:



156

Protenas Fe-S. Estas protenas se caracterizan por poseer tomos de Fe unidos a
S lbil, que no corresponde al S del Meto o CySH. Intervienen en reacciones redox
a travs del Fe que pasa de Fe
+2
a Fe
+3
o viceversa.

Considerando el conjunto de la evidencia experimental se ha propuesto que la
cadena de transporte de electrones se realiza segn el esquema de la figura 44.
En este esquema observamos que el donador inicial de 2e
-
y 2H
+
, es un sustrato
(metabolito) que al oxidarse cede sus e
-
sobre el NAD
+
(caso del piruvato
Acetil-CoA + CO
2
, del isocitrato oxalsuccinato, del -cetoglutarato succinil-
CoA + CO
2
o del malato oxalacetato; reacciones del ciclo de Krebs, ver figura
46, que pasa a NADH + H
+
que al cederlos 2e
-
y 2H
+
sobre el FMN se reoxida,
formndose FMNH
2
. Esta coenzima cede los 2e
-
sobre las protenas Fe-S que se
reducen y los 2H
+
salen de la mitocondria; esta reaccin redox permite regenerar
el FMN (o FAD segn el caso) y constituye un segundo sitio de entrada de e- a la
cadena en el caso en que el metabolito al oxidarse produzca FADH
2
(o FMNH
2
)
como sucede en el paso de succinato a fumarato en el ciclo de Krebs. Vemos que
as son reoxidados el NADH + H
+
y el FADH
2
producidos en Krebs; las reacciones
siguientes en la cadena de transporte de electrones tienen como objeto canalizar
los electrones a travs de una serie de transportadores (coenzima Q, citocromo b,
citocromo c
1
, etc) hasta llevarlas finalmente sobre el O
2
y producir H
2
O.

En la figura 48 se indican tambin los sitios donde actan los inhibidores del
transporte de electrones; por ejemplo el CN
-
impide la transferencia de e
-
del
complejo citocromo a + a
3
al oxgeno molecular, provocando un bloqueo de la
cadena respiratoria y en consecuencia impidiendo la reoxidacin del NADH + H
+
y
FADH
2
con lo cual se paralizan las vas metablicas (comenzando por el ciclo de
Krebs).

En los procariotes (donde no existen las mitocondrias) el transporte de electrones
se realiza en la membrana celular por un mecanismo similar y algo ms sencillo
como se indica en la figura 49. Aqu la coenzima Q pasa directamente de la forma
Q a QH
2
y la salida de los H
+
es hacia el medio circundante de la clula.

Una discusin detallada de los esquemas de transporte de electrones se
encuentra en la lectura recomendada No.3.

32.1.2 Fosforilacin - Sntesis de ATP

Como ya dijimos la fosforilacin del ADP est ntimamente asociada al transporte
de electrones. Empleando la ecuacin: G = - nFE

Donde n = 2 electrones, F (expresado en faradays) cuyo equivalente energtico es
igual a 23062 caloras podemos calcular la energa tericamente disponible que
tenemos en la cadena cuyos E van de -0.32 a +0.82 volts.

157

Entonces: G = -2 x 23062 x (0.82 - (-0.32)) = -52.7 Kcal, lo que significa que se
tiene, en principio, energa suficiente para sintetizar varios ATP ya que la
formacin de un ATP cuesta 7300 cal /mol.

Usando la misma frmula podemos calcular cual sera la E mnima para
sintetizar un ATP:

-7300 = -2 x 23062 E

E = 0.22 volts

O sea que en aquellos sitios donde la diferencia en los potenciales de reduccin
estndar de dos transportadores sea igual o mayor que este valor podemos tener
energa suficiente para formar un ATP.


158

Figura 48: Fosforilacin oxidativa en mitocondrias

159

Figura 49: Fosforilacin oxidativa en procariotes


160

El estudio experimental de la fosforilacin oxidativa in vivo ha permitido establecer
como puntos fundamentales:

La relacin P: O (incorporacin de Pi como fsforo orgnico, o sea ATP/mol O
2

consumido) es de 3 si se parte de la oxidacin piruvato Acetil-CoA + CO
2
o
de Isocitrato -ceto glutarato + CO
2
; cuando se oxida succinato fumarato,
P : O = 2.

Existen sustancias como el 2,4-dinitrofenol o la valinomicina que permiten el
transporte de electrones hasta el oxgeno pero sin que se forme ATP, es decir
desacoplan la oxidacin de la fosforilacin. Estas sustancias no tienen ningn
efecto sobre las fosforilaciones a nivel de sustrato que ocurren por ejemplo en
la gliclisis o en el ciclo de Krebs, porque all la produccin de ATP no est
ligada al transporte de electrones en una cadena.

Hay una salida de H
+
(6H
+
en mitocondrias y 4H
+
en clulas procariticos)
como consecuencia del transporte de e
-
(ver figuras 48 y 49). Esto genera un
gradiente de potencial a travs de la membrana, que es impermeable a la
difusin simple de H
+
. La entrada de estos H
+
est asociada a la formacin de
ATP.

En la membrana existe una ATP asa (o sistema F
1
- F
0
) que dadas las
condiciones apropiadas, es capaz de sintetizar ATP a partir de ADP y Pi.

Reuniendo toda la evidencia experimental disponible y con las consideraciones
termodinmicas iniciales, Mitchell ha propuesto la llamada teora quimio-osmtica
para explicar la sntesis del ATP en la fosforilacin oxidativa y tambin en la
fotosntesis
1
. (Una discusin detallada la encuentra en la lectura recomendada No.
3) En las figuras 48 y 49 se indican los sitios de la cadena que cumplen las
condiciones para la sntesis del ATP.
Si hacemos un balance global de materiales de la fosforilacin oxidativa vemos
que:

Se reoxidan las coenzimas NADH + H
+
y FADH
2
producidas en el ciclo de
Krebs.

Se consume media molcula de 0
2
por par de electrones transportados.

Por cada par de electrones transportados desde el NADH + H
+
, se producen 3
ATP.

Por cada par de electrones transferido a partir de FADH
2
se sintetizan 2 ATP.


161

El rendimiento energtico de la va es de un 40% calculado as:

- Componente exergnico dado por la reaccin:

NADH + H
+
+ O
2
NAD
+
+ H
2
O, G = -52.7 Kcal/mol

- Componente endergnico dado por la reaccin:

3ADP + 3Pi 3ATP +3H
2
O, G = +21.9 Kcal/mol

Rendimiento % 40
52.7
100 x 21.9
= =
Este rendimiento es mayor que los obtenidos en las vas ya discutidas.

32.2 Va del glicerol fosfato

La segregacin existente entre el NAD
+
/ NADH + H
+
citoplasmticos y
mitocondriales, debida a la impermeabilidad de la membrana mitocondrial para la
entrada de estas coenzimas, plantea la pregunta de cmo se efecta la
reoxidacin de las coenzimas presentes en el citoplasma.

La respuesta la constituye la va del glicerol-fosfato que mostramos en la figura 50
y que adems es una excelente ilustracin de la permeabilidad selectiva de la
membrana mitocondrial.

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162

Figura 50: Esquema de la va del glicerol-fosfato

En la figura observamos que el NADH + H
+
producido citoplasmticamente (por
ejemplo en la gliclisis) es reoxidado (por una deshidrogenasa, reaccin 1) al
reducir la 3-P-DHA (que es un metabolito fcilmente disponible en el citoplasma)
para dar glicerol 3- ; este compuesto s puede atravesar la membrana
mitocondrial y al interior sufre una reoxidacin por accin de una deshidrogenasa
que emplea el FAD como coenzima (reaccin 2).

El resultado es la produccin de FADH
2
que es reoxidado en la fosforilacin
oxidativa y de 3-P-DHA que difunde al exterior de la mitocondria donde es
reutilizado en la reoxidacin de una nueva molcula de NADH + H
+
. Vemos
entonces que la triosa es utilizada cclicamente y que la produccin de un NADH +
H
+
citoplasmtico resulta en la aparicin de un FADH
2
mitocondrial que al ser
reoxidado produce 2 ATP/mol FADH
2
.

Leccin 33: Balance global de la oxidacin de glucosa y va de las pentosas
fosfato

33.1 Balance global de la oxidacin de glucosa

Comparemos ahora los balances de sustrato carbonado y de ATP cuando la
glucosa es oxidada anaerbicamente o aerbicamente.

P

163

En la oxidacin anaerobia (gliclisis) la reaccin global ser:

Glucosa + 2NAD
+
+ 2ADP + 2Pi 2 piruvatos + 2ATP + 2NADH + 2H
+

(citoplasmticos) (1)

Por tanto se producen 2 moles de piruvato y 2 ATP/mol glucosa oxidada.
En la oxidacin aerobia (gliclisis + ciclo de Krebs + fosforilacin oxidativa)
tendremos:

Citoplasma
(Gliclisis)
Glucosa + 2NAD
+
+ 2ADP + 2Pi 2 Piruvatos + 2ATP + 2NADH + 2H
+
(1)
M
I
T
O
C
O
N
D
R
I
A
2 Piruvatos + 2NAD + 2HSCoA 2Acetil-CoA+2C02+ 2NADH +2H
(2)

2 Acetil-CoA + 2ADP + 2Pi + 6NAD + 2FAD 4CO
2
+ 2ATP + 6NADH + 6H
+
+ 2FADH2
(3)

8NADH + 8H + 4FADH
2
+ 6O
2
+ 32ADP + 32Pi 8NAD + 4FAD + 6H
2
O + 32ATP
(4)

En la oxidacin aerobia los 2 piruvatos son oxidados por el complejo
multienzimtico de la piruvato decarboxilasa (reaccin (2) y por su parte los 2
Acetil-CoA son completamente oxidados en Krebs (reaccin 3) hasta 4CO
2
y que
con los 2CO
2
de (2) nos dan los 6 carbonos de la glucosa.

Las coenzimas: 8NADH + 8H
+
= 2 (de la reaccin 2) + 6 (de la reaccin 3); y
4FADH
2
= 2 (de la reaccin 3) + 2 (que se producen por la va del glicerol 3- a
partir de los 2NADH + 2H
+
citoplasmticos) producen en la fosforilacin oxidativa
(F.O) (reaccin 4) 32 ATP porque:

En la fosforilacin oxidativa 1NAD + H
+
3 ATP
8 x 3 24 ATP
1FADH
2
2ATP
4 x 2 8 ATP

La cantidad total de ATP producido en esta oxidacin aerobia de la glucosa ser:

2ATP (reaccin 1) + 2ATP (reaccin 3) + 32ATP (reaccin 4) = 36 ATP

P

164

Es decir la energa recuperada ser: 36 x 7300/686.000 = 40%

El calor de combustin de la glucosa es 686.000 cal/mol y corresponde al 100%
de la energa acumulada en un mol de glucosa; se observa que por mol de
glucosa la oxidacin aerobia produce 18 veces ms energa que la anaerobia
(36ATP vs 2ATP) lo que significa que, para obtener una cantidad dada de energa,
una clula facultativa consume 18 veces ms glucosa en condiciones anaerobias
que en condiciones aerobias y adems acumula lactato en condiciones
anaerobias.

Si se pasa a condiciones aerobias (es decir admite O
2
) baja el consumo de
glucosa y desaparece el lactato; esto es lo que se conoce como el efecto Pasteur.

33.2 Va de las pentosas fosfatos

Esta va degradativa que ocurre en el citoplasma de todos los organismos,
constituye una alternativa muy interesante en el catabolismo de los carbohidratos.
Gracias a esta va la clula puede:
Producir NADPH + H
+
en el citoplasma, lo cual es especialmente importante en
aquellos tejidos que realizan biosntesis que requieren esta coenzima por
ejemplo el hgado, tejido adiposo o corteza de glndulas suprarrenales donde
se sintetizan cidos grasos y esteroides. En este aspecto es la nica va por la
cual muchas clulas (excluyendo aquellas que realizan fotosntesis) obtienen
su NADPH + H
+
.
Obtener pentosas, en especial D-ribosa, que se requiere para biosintetizar los
nucletidos.
En la etapa oscura de la fotosntesis, generar metabolitos que sirven como
precursores de la glucosa.
Obtener una serie de monosacridos C
4
, C
5
y C
7
que emplea como
intermediarios para otras vas.

En forma global podemos considerar tres etapas en la va de las pentosas fosfato:

Oxidacin de la glucosa -6-P (hexosa) hasta ribulosa -5- P (pentosa).
Interconversin reversible de las pentosas fosfato.
Transformacin de las pentosas fosfato en hexosas fosfato.

Las reacciones que suceden en esta va se muestran en la figura 51 donde para
una mejor comprensin del balance de C y de cmo ocurren las reacciones,
consideramos inicialmente 6 molculas de glucosa-6-P (Glc-6-P).
En esta figura empleamos la representacin grfica de los monosacridos donde
slo se indica la posicin de los grupos OH, sin tener en cuenta los tomos de H
unidos al carbono tetravalente. Esta hexosa proviene de una fosforilacin de la

165

glucosa o de la fosforilacin e isomerizacin de otras hexosas como fructosa o
galactosa (reacciones 2-7 de la figura 43).

Figura 51: Va de las pentosas fosfato


166

En la primera etapa de la va la Glc-6-P es oxidada en dos pasos por
deshidrogenasas que utilizan el NADP
+
como coenzima (reacciones 1, 2, 3)
produciendo NADPH + H
+
y 3-ceto-6-fosfogluconato que por ser un -ceto cido
se decarboxila por medio de una decarboxilasa, reaccin 4, produciendo 6
molculas de CO
2
y 6 de una pentosa fosfato que corresponde a la ribulosa -5-P
(una cetosa).

En esta primera etapa tiene lugar entonces la degradacin de las hexosas y las
reacciones de las etapas siguientes, adems de producir los monosacridos
intermediarios que alimentarn otras vas, servirn para regenerar parte de las 6
molculas de hexosa degradadas.

En la segunda etapa (reacciones 5 y 6) se interconvierten reversiblemente las
pentosas fosfato entre s; esta interconversin se realiza gracias a isomerasas que
permiten la fcil conversin de unas pentosas en otras.

Dependiendo de las necesidades globales de la clula se puede entonces
canalizar la produccin hacia una pentosa determinada; si por ejemplo la clula va
a iniciar una mitosis, se requerir una buena cantidad de nucletidos disponibles
para la sntesis de cidos nucleicos; a su vez ello implica que la ribosa (o
deoxirribosa), segn el caso, est disponible para la formacin de los precursores
(ATP, GTP, CTP, etc.). En nuestro diagrama, para facilitar el balance de C,
consideramos que las seis molculas de ribulosa-5-P generan dos de ribosa-5-P
(reaccin 6) y cuatro de xilulosa-5-P. De estas 4 xilulosa-5-P, dos molculas se
combinarn con dos de ribosa-5-P (reaccin 7) y dejamos en reserva las otras dos
molculas de xilulosa-5-P.

La ltima etapa, que se inicia con la reaccin 7, posibilita la obtencin de una serie
de monosacridos (tetrosas y heptosas) que no hemos encontrado hasta ahora ni
como intermediarios ni como productos de las vas ya estudiadas.

Adems las reacciones que ocurren en esta etapa son las reacciones que en
sentido contrario constituyen parte de la etapa oscura de la fotosntesis; por ello su
conocimiento y comprensin en este momento nos facilitar el estudio de las
reacciones de la fotosntesis.

Esta etapa comienza con la transferencia de un fragmento de la xil -5-P (indicado
en el recuadro) sobre el carbono 1 de la Rib-5-P; esta reaccin est catalizada por
una transferasa (transcetolasa) que tiene como coenzima el pirofosfato de tiamina
(PTT) y es reversible; el paso del fragmento (2) sobre la pentosa (C
5
) nos genera
la seudoheptulosa (C
7
) y el fragmento residual (C
3
= C
5
- C
2
) corresponde al 3-P-
Gliceraldehdo (3-P-Gal).


167

En la prxima reaccin (8) tiene lugar una segunda transferencia que ahora es un
fragmento C
3
(mostrado en el recuadro y se refiere a que el residuo tiene tres
carbonos unidos entre s) de la seudoheptulosa, sobre el C
1
(carbono nmero uno
de la molcula) del 3-P-Gal; la transferasa que interviene aqu (trans aldolasa) es
diferente de la anterior.

Como resultado nos aparece una hexosa (C
6
= C
3
+ C
3
) que corresponde a Frc-6-
P y una tetrosa (C
4
= C
7
- C
3
) que es la Eritrosa-4-P; ya que consideramos
anteriormente que esta etapa se inici con dos molculas de xil-5-P y 2 de Rib-5-
P, tendremos hasta aqu, 2 molculas de Frc-6-P y 2 molculas de Eritrosa-4-P.

Las dos Eritrosa-4-P se combinan ahora con las dos molculas de xil-5-P que
tenamos en reserva, gracias a una transcetolasa (similar a la de la reaccin 7) y el
fragmento C
2
de la Xil-5-P (en el recuadro) va sobre el C
1
de la tetrosa formando
una hexosa (C
6
= C
2
+ C
4
); el resto es la triosa 3-P-Gal.

Como balance del sustrato carbonado en esta va tenemos entonces que a partir
de 6 hexosas se produjeron 6CO
2
(reaccin 4) y se formaron 2 mol de 3-P-Gal y 4
de Frc-6-P (reaccin 8 y 9). Dado que a partir de 2 molculas de 3-P- Gal se
puede formar una molcula de Frc-6-P (reaccin inversa a la reaccin 9 b de
gliclisis), tendremos 5 molculas de Frc-6-P que se pueden isomerizar a 5
molculas de Glc-6-P. En resumen, usando 6 mol de hexosa obtenemos por
oxidacin 6CO
2
y recuperamos 5 mol de hexosa.

En lo referente al balance de coenzimas vemos que por 6 Glc-6-P que entran en la
va, se obtienen 12NADPH + 12H
+
(reaccin 1 + 3) que podrn usarse en
biosntesis que impliquen reducciones y as regenerar el NADP
+
. En esta va no
hay produccin o consumo de ATP y por tanto no es un sistema por el cual la
clula puede obtener energa al degradar los monosacridos; su importancia como
ya vimos es otra.

No sobra anotar que en la clula tanto esta va como la gliclisis ocurren
simultneamente y la magnitud relativa de una de ellas respecto a la otra,
depende de las necesidades metablicas en un momento dado.

Leccin 34: Generalidades de la biosntesis de carbohidratos

En esta leccin se estudiar las dos vas biosintticas ms importantes de
carbohidratos que son la gluconeognesls (o biosntesis de glucosa) y la
fotosntesis.

En general todos los procesos biosintticas requieren del aporte de energa ya que
ella es necesaria para formar los enlaces qumicos del precursor o de la

168

biomolcula que se est formando; si adicionalmente el proceso incluye
reacciones de reduccin, la coenzima de la deshidrogenasa es casi siempre
NADPH + H
+
que proviene o de la va de pentosas fosfato o de la fotosntesis (en
el caso de las plantas).

34.1 Principios organizativos

Las vas biosintticas o anablicas transcurren en la clula gracias a varios
principios organizativos entre las cuales podramos enumerar:

La secuencia de reacciones que constituyen la va biosinttca de una
biomolcula generalmente difiere en varios pasos de la va usada para su
degradacin. A pesar de que muchas enzimas pueden actuar en la una o en la
otra, siempre intervienen algunas enzimas propias de la va anablica que no
aparecen en la contra parte degradativa. Esta diferencia preserva la integridad
del metabolismo global pues as ste no depende de las concentraciones
relativas de los metabolitos que podran, si las vas fueran completamente
reversibles, influir en el sentido de las mismas.

Las vas anablicas estn controladas por enzimas reguladoras diferentes de
aquellas que actan en la va catablica correspondiente. Se establece
entonces una regulacin dinmica que opera de manera recproca, es decir si
se estimula el proceso biosintticas de una biomolcula se inhibe su proceso
degradativa o a la inversa.
Adems las enzimas reguladoras de biosntesis generalmente actan en las
etapas iniciales de la va, de manera que se evitan reacciones innecesarias
que conduzcan a intermediarios no utilizables o no requeridos por la clula en
ese momento. Tenemos aqu una nueva aplicacin del principio de la mxima
economa celular.

Las reacciones biosintticas son consumidoras de energa y estn acopladas a
la degradacin del ATP. Esta degradacin tiene lugar de tal manera que el
G de hidrlisis es mayor que el G requerido para la biosntesis y por tanto
la reaccin es esencialmente irreversible. Generalmente el ATP se degrada a
AMP y compuesto este ltimo que se hidroliza, por accin de una
pirofosfatasa en 2 Pi.
Dicho de otra manera por cada nuevo enlace que se forma, se rompen 2
enlaces ricos en energa.

P P

169

Leccin 35: Gluconeognesis

Dada la importancia de la glucosa como sustancia que al ser oxidada produce
energa, la clula (o el organismo) tendr una enorme ventaja si puede sintetizarla
a partir de metabolitos que no sean carbohidratos. Esta va tiene lugar
parcialmente en el citoplasma y la mitocondria y en los animales es especialmente
importante en tejidos como el hgado y la corteza renal.
La figura 52 muestra las reacciones por las cuales sucede la gluconeognesis.
Observamos en ella que muchas reacciones ya las hemos encontrado en sentido
contrario en la gliclisis; especficamente nos referimos a las reacciones 5, 6, 7, 8,
9, 10, 12 y 14. (Ver figura 43).

La reaccin 5 se inicia con el PEP y la reaccin 11 y siguientes arranca con la Frc
-1,6-Di-P.
Veamos en primer trmino cmo es posible obtener PEP a partir de piruvato en
forma indirecta. La reaccin directa sera:

Tiene un G = +7,5 kcal por la cual es muy costosa energticamente y
termodinmicamente est prohibida; es por ello que en la gliclisis se realiza en
direccin contraria (reacciones 15 y 16. fig. 43).

La clula utiliza un rodeo para obtener este PEP. En la figura 52 vemos que el
piruvato (que proviene de distintas fuentes) entra a la mitocondria y all por accin
de una carboxilasa (reaccin 1) y ATP se genera oxalacetato. Este es un ejemplo
de una reaccin anaplertica estando regulada la enzima por acetil-CoA que
requiere para la reaccin. El paso posterior (2) permite obtener malato que puede
salir de la mitocondria y en el citoplasma es reoxidado a oxalacetato (3); ahora
acta una carboxikinasa que con GTP como donador de nos da PEP (reaccin
4).

P

170

Figura 52: Secuencias de las reacciones de la Gluconeognesis

171

Si consideramos los cambios en energa libre tendramos lo siguiente:

Paso No. Reaccin G kcal
1 Piruvato + CO2 + ATP
a carboxilas
Oxalacetato + ADP + Pi -0.5
2 Oxalacetato + NADH + H
+

nasa Deshidroge
Malato + NAD
+
-6.7
3 Malato + NAD
+

nasa Deshidroge
Oxalacetato + NADH + H
+
+6.7
4 Oxalacetato + GTP
Liasa
PEP + GDP + CO
2
+0.7

Globalmente tendremos un G = +0.2 kcal = (-0.5 6.7 + 6.7 + 0.7) lo que
significa que la reaccin global (sumando 1 a 4):

Piruvato + ATP + GTP PEP + ADP + GDP + Pi

Esta reaccin es termodinmicamente posible; hay que anotar que aqu tambin
se ilustra el principio del gasto de dos enlaces ricos en energa por la formacin de
uno.

Esta formacin de PEP a partir de piruvato es un ejemplo del primer principio
enunciado al comienzo del captulo.

Las reacciones 5 a 10 son inversas a las de la gliclisis y por ellas se llega hasta
Frc1,6-Di P.

El paso de Frc-1,6-DiP a Frc-6-P (reaccin 1) constituye la segunda diferencia con
la gliclisis; si la reaccin fuese inversa a la de gliclisis se tendra:
Frc-1,6-DiP + ADP Frc-6-P + ATP, con un G = +3,4 kcal lo que la hace
irrealizable.

En la glucognesis acta una fosfatasa que hidroliza la fructosa-difosfato
produciendo Frc- 6-P y libera fsforo inorgnico (Pi) con un G = 4,0 kcal.
La actividad de esta enzima reguladora est controlada por la relacin ATP/AMP
siendo el ATP un modulador positivo (estimula la actividad) y el AMP un
modulador negativo.

La tercera reaccin diferente a la que ocurre en la gliclisis es la defosforilacin de
Glc-6-P a Glc (reaccin 13); aqu tambin acta una fosfatasa que cataliza la
reaccin:

Glc-6-P + H2O GIc + Pi, que tiene un G = -3,3 kcal.


172

De esta manera se puede sintetizar GIc a partir de 2 piruvatos. La reaccin global
sera:

2 Piruvatos + 4ATP + 2GTP + 2NADH + 2H
+
+ 4H
2
O Glucosa + 4ADP + 2GDP + 6 Pi + 2NAD
+

Luego por cada molcula de Glc formada se gastan 6 enlaces ricos en energa;
este alto costo implica que la gluconeognesis es irreversible y por tanto la
biosntesis de glucosa (gluconeognesis) y la degradacin de glucosa (gliclisis)
ocurren paralelamente y en forma coordinada. Esta va es, tal como lo hemos
sealado, una de las mejores ilustraciones de los principios organizativos de la
biosntesis y con la glucosa obtenida se puede sintetizar glicgeno o almidn
(reacciones 14 y 15) en condiciones controladas por hormonas (insulina en el caso
del glicgeno).

La va est alimentada por:
Intermediarios del ciclo Krebs puesto que cualquiera de ellas puede dar lugar al
malato (ver figura 46) quien al salir de la mitocondria se oxida a oxalacetato
(reaccin 3) y genera PEP.

Productos del catabolismo de cidos grasos. Como veremos ms adelante, los
cidos grasos son oxidados hasta acetil-CoA y en las plantas ste es
transformado en PEP por medio del ciclo del glioxilato ilustrado en la figura 53.

Acabamos de analizar la ruta biosinttica de la gluconeognesis, en la cual se sintetiza glucosa y est es Acabamos de analizar la ruta biosinttica de la gluconeognesis, en la cual se sintetiza glucosa y est es Acabamos de analizar la ruta biosinttica de la gluconeognesis, en la cual se sintetiza glucosa y est es Acabamos de analizar la ruta biosinttica de la gluconeognesis, en la cual se sintetiza glucosa y est es
almacenada en forma almacenada en forma almacenada en forma almacenada en forma de glucgeno en el hgado en el msculo. de glucgeno en el hgado en el msculo. de glucgeno en el hgado en el msculo. de glucgeno en el hgado en el msculo.

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importancia del glucgeno debe ser analizado desde: importancia del glucgeno debe ser analizado desde: importancia del glucgeno debe ser analizado desde: importancia del glucgeno debe ser analizado desde:

- Importancia Biomdica del Glucgeno Importancia Biomdica del Glucgeno Importancia Biomdica del Glucgeno Importancia Biomdica del Glucgeno
- Efectos de los ayuno Efectos de los ayuno Efectos de los ayuno Efectos de los ayunos prolongados sobre la reserva del glucgeno s prolongados sobre la reserva del glucgeno s prolongados sobre la reserva del glucgeno s prolongados sobre la reserva del glucgeno
- Efectos del estrs y el ayuno prolongado sobre las reservas del glucgeno en animales de sacrificio Efectos del estrs y el ayuno prolongado sobre las reservas del glucgeno en animales de sacrificio Efectos del estrs y el ayuno prolongado sobre las reservas del glucgeno en animales de sacrificio Efectos del estrs y el ayuno prolongado sobre las reservas del glucgeno en animales de sacrificio
(produccin (produccin (produccin (produccin de carnes DFD (oscuras, duras y secas). de carnes DFD (oscuras, duras y secas). de carnes DFD (oscuras, duras y secas). de carnes DFD (oscuras, duras y secas).

173

Figura 53: Esquema del ciclo del glioxilato

Este ciclo que ocurre en los glioxisomas en las plantas se realiza por algunas
de las reacciones que ocurren en el ciclo de Krebs (1, 2, 3, 6, 7, 8 y 9) y
adicionalmente con la intervencin de una liasa (reaccin 4) y una sintetasa
(reaccin 5). Como resultado neto dos molculas de acetil-CoA sirven para
sintetizar una de succinato que por las reacciones 7, 8 y 9 (iguales a las del
ciclo de Krebs) forma oxalacetato que sirve como punto de partida para la
gluconeognesis (reaccin 10).

Esqueletos carbonados de aminocidos. Los aminocidos en su catabolismo
producen intermediarios del ciclo Krebs y pueden as servir para sintetizar
glucosa.

Gracias a esta diversidad de fuentes carbonadas que pueden proporcionar
precursores. la clula puede sintetizar glucosa fcilmente aunque a un alto
costo. Veremos ms adelante en este captulo como puede utilizarse esta
glucosa en la sntesis de diversos polisacridos.


174

Leccin 36: Fotosntesis y biosntesis de polisacridos

36.1 Fotosintsis

Esta va metablica posee una singular importancia no slo para aquellos
organismos que son capaces de llevarla a cabo sino tambin para la realizacin
de los ciclos del carbono y del oxgeno pues es el eslabn que permite en la
biosfera la conservacin de una atmsfera oxidante donde el 0
2
est en amplia
disponibilidad.

La fotosntesis ocurre en una amplia gama de organismos tanto procariotes como
eucariotes, tal como lo muestra la tabla 19. En ella indicamos adems la fuente de
electrones que usa cada organismo de estos para efectuar la reduccin del C0
2
y
sintetizar as la glucosa.
Esta tabla nos muestra que un buen nmero de procariotes realiza fotosntesis
usando como donadores de electrones compuestos diferentes al H
2
O, por tal
razn la fotosntesis en estos organismos no libera O
2
sino S, compuestos
orgnicos oxidados, etc.
Por esta razn la ecuacin general de la fotosntesis sera:

2H
2
D + CO
2

Luz
CH
2
O + H
2
O + 2D

Donde H
2
D es el donor de e
-
y D es su forma oxidada (O
2
, S, piruvato, acetona,
etc.); esta situacin implica adems que en las plantas el O
2
liberado proviene del
H
2
O y no del CO
2,
lo cual ha sido demostrado experimentalmente.
Tabla 19: Organismos fotosintticos

Organismo Genero Utilizacin
del O2
Fuente de electrones
P
R
O
C
A
R
I
O
T
E
Algas verde azules
Sulfobacterias verdes
Bacterias verdes
filamentosas
Sulfobacterias prpura
Bacterias prpura
Cianobacteriaceae
Chlorobiaceae
Chloroflexaceae
Chromatiaceae
Rhodospirillaceae
Aerobios
Anaerobios
estrictos
Aerobios
Anaerobios
estrictos
Aerobios
H2O
H2S, S2O3
2-
, H2, S

H2S, compuestos orgnicos
H2S, S2O3
2-
, H2, S

Compuestos orgnicos
(ej: isopropanol, lactato)
E
U
C
A
R
I
O
T
E
Plantas superiores
Algas verdes, pardas, rojas
Plankton
Flagelados
Diatomceas
Dinoflagelados
Aerobios
Aerobios
Aerobios
Aerobios
Aerobios
H2O
H2O
H2O
H2O
H2O

175

La fotosntesis se sucede en los cloroplastos, partculas subcelulares, ms
grandes que las mitocondrias (1 - 10 m) que poseen una compleja estructura con
varias clases de membranas. La membrana externa, muy frgil, rodea un sistema
de membranas internas y de vesculas (o sacos) llamada tilacoides o discos
tilacoides. Estos tilacoides se apilan unos sobre otros formando los grana y all se
encuentran los pigmentos fotosintticos. Los discos tilacoides estn conectadas
entre s por filamentos membranosos llamados lamelas y todo est suspendido en
un lquido denominado estroma (para una discusin ms detallada de la estructura
del cloroplasto consulte la lectura recomendada No. 1). La figura 54 muestra
esquemticamente la estructura de un cloroplasto.

Figura 54: Esquema de un cloroplasto

En los cloroplastos se encuentran todas las substancias necesarias para la
fotosntesis, que podemos clasificar en dos grupos:

Componentes fotorreactivos.
Componentes no fotorreactivos.

Los primeros son pigmentos que por su estructura qumica son capaces de
absorber parte de la energa luminosa y pasar a un estado excitado o sea a un
nivel superior de energa. Los ms abundantes son las clorofilas, los carotenoides
y las ficobilinas; estos ltimos estn presentes slo en las algas rojas y verde-
azules; los otros dos son de ocurrencia general. La estructura general de las
clorofilas y de los carotenos se muestra en la figura 55.


176

Figura 55: Estructura de clorofilas y carotenos

La mxima eficiencia conjunta en la absorcin de la energa luminosa se presenta
en las regiones 400 - 500 nm y 600 - 700 nm (o sea en el espectro visible)
observndose que los carotenos actan como receptores complementarios en la
regin del espectro no cubierta por las clorofilas. En los cloroplastos hay tambin
pequeas cantidades de pigmentos llamados fitocromos cuya absorcin es
mxima a 680 nm (P 680) o a 700 nm (P700). (Una discusin detallada del papel
de las clorofilas la encuentra en el artculo de Rabinowitch).

Dentro de los componentes fotorreactivos encontramos una gran variedad de
compuestos:

Lpidos: Glicolpidos y fosftidos.

177

Protenas: Citocromos (t, b
3
, b
6
); plastocianina (Cu
+2
), ferredoxinas,
flavoprotenas.
Enzimas.
Quinonas Benzoquinonas (plastoquinona) y Naftoquinonas.
Coenzimas NADP
+
, NAD
+
.

Los dos tipos de componentes poseen probablemente una organizacin espacial
en los grana de tal manera que hay una considerable complejidad estructural y
funcional que permite la ocurrencia de la fotosntesis que podemos considerar que
sucede en dos etapas: la etapa luminosa y la etapa oscura. Por razones de
conveniencia discutiremos cada una de ellas por separado, sin olvidar que estn
ntimamente relacionadas y son interdependientes.

6.1.1 Etapa Iuminosa

Esta etapa ha sido estudiada por mtodos espectroscpicos ya que ocurre muy
rpidamente (10
-15
a 10
-13
segundos); en ella se captura un cuanto de luz propia
por parle de los pigmentos fotorreactivos que pasan a un estado excitado; de esta
forma la energa luminosa se transforma en energa qumica. Al excitarse,
aumentan los potenciales de reduccin de las molculas y esto ocasiona una
transferencia de electrones por varios transportadores hasta que finalmente los
electrones son aceptados por el NADP
+
; asociadas a este transporte de electrones
ocurren varias fosforilaciones (fotofosforilacin) de manera anloga a lo que
sucede en la fosforilacin oxidativa.

En los organismos aerobios hay una fotlisis del H
2
O, liberndose O
2
y electrones
que son quienes van a ser transferidos por la cadena de transportadores.

En los anaerobios se oxida el donor de e
-
producindose frecuentemente S
(molecular) o H
2
.
Con base en la evidencia experimental disponible, esta etapa luminosa en los
aerobios se ha esquematizado como se indica en la figura 56.

Se considera que en los cloroplastos de estos organismos hay dos centros
fotorreactivos: fotosistemas l y II (FSI y FSII) constituidos por clorofila a, carotenos
y P700 y por clorofilas a y b, ficobilinas y P680 respectivamente. Tal como lo
indica la figura 56 en el FSII ocurre la fotlisis del H
2
O y al recibir el cuanto de luz
(hv ) su valor de E se hace ms negativo (estado Z) y los electrones provenientes
del H
2
O son transferidos por reacciones de xido-reduccin a travs de la
plastoquinona, cito-cromo b, citocromo f y plastocianina hasta el FSI en su estado
fundamental; al ceder los electrones el FS II retorna a su estado fundamental y
queda listo para una nueva excitacin.


178

Figura 56: Etapa luminosa de la fotosntesis

Si observamos con cuidado el esquema vemos que la transferencia de electrones
desde Z hasta el FSI se hace de un E ms negativo (0,0) a uno ms positivo
(+0,6); la diferencia de potencial resultante (aproximadamente 0,5 volts) se
aprovecha para sintetizar ATP por un mecanismo similar al ya discutido en la
fosforilacin oxidativa (para una discusin en detalle consulte la lectura
recomendada No.2) que requiere un mnimo de 0,22 volts para sintetizar un ATP.

El fotosistema I que ha recibido los electrones, captura la energa luminosa y pasa
a su estado excitado (P430) con un salto en su E; los electrones son
transportados ahora a travs de una ferredoxina y una reductasa para ser
finalmente aceptados por el NADP
+
que se reduce a NADPH + H
+
. La cesin de
los electrones hace que P430 retorne a su estado fundamental.

Como resultado global de esta etapa luminosa podemos decir que a partir del H
2
O
se produce O
2
y que por cada par de electrones transferidos se fosforila el ADP
(dos molculas posiblemente) hasta ATP y se reduce el NADP
+
hasta NADPH +
H
+
. La lectura recomendada No. 3 le dar un panorama de esta etapa luminosa.

Es interesante anotar cmo en esta etapa se pueden ilustrar varios de los
principios que rigen el metabolismo ya que la oxidacin de una sustancia (el H
2
O)
est aparejada con la produccin de ATP y la transferencia de electrones se hace

179

en el sentido creciente de los potenciales de reduccin (de ms negativo a ms
positivo) tal y como ocurre en la fosforilacin oxidativa.
Adems de proveer el ATP y el NADPH + H
+
necesarios para la siguiente etapa, la
etapa luminosa es una excelente ilustracin de un mecanismo biolgico que
permite transformar energa luminosa en energa qumica; es por ello y por las
potenciales aplicaciones que de aqu se puedan derivar, que ha sido objeto de
numerosos estudios que continan hoy en da.

36.1.2 Etapa oscura

La elucidacin de esta etapa fue posible, en buena parte gracias a los trabajos del
grupo de Calvin quien recibi por ello el Nbel en 1961. Usando
14
C y mtodos
cromatogrficos se estableci que la reduccin del CO
2
hasta glucosa ocurre en
un breve periodo (10
-4
- 1s) utilizando el ATP y el NADPH + H
+
generados en la
etapa luminosa. Una descripcin muy interesante de estos trabajos la encuentra
en la lectura recomendada No. 4. Dado que esta etapa de la fotosntesis es cclica,
se conoce tambin con el nombre de ciclo de Calvin. La figura 57 nos muestra las
reacciones que se suceden.

Para facilitar la comprensin de esta etapa y su balance de C, se considera la
intervencin de 6CO
2
que por accin de una carboxilasa (liasa), bastante
abundante en los cloroplastos, efecta la carboxilacin de la ribulosa-1,5-Di-P (una
pentosa) para dar 3-P-Glicerato (3-P-Gato) como producto final de esta reaccin
(1); es probable que la pentosa (C
5
) al recibir el CO
2
origine un C
6
que es inestable
y se rompe en 2 molculas (por pentosa + CO
2
) de 3-P-Glicerato. Ya que
consideramos 6CO
2
iniciales, se obtienen 12 de 3-P-Gato; este cido es reducido
(reaccin 2) por una deshidrogenasa que usa NADPH + H
+
como coenzimas hasta
12 molculas de 3-P-Gliceraldehdo; la reduccin requiere energa que en este
caso es provista por el ATP. De las doce molculas de 3-P-Gal dejemos seis en
reserva y consideremos las seis restantes.

Las prximas reacciones (3, 4, 5, 6 y 7) se encaminan a la sntesis de la glucosa y
son iguales a algunas de la que ocurren en la gluconeognesis (ver figura 52
reacciones 9, 10, 11, 12 y 13).

De las seis molculas de 3-P-Gal, tres son convertidas a 3-P-DHA y por
condensacin de estas triosas se producen tres molculas de Frc-1, 6-Di P
(reaccin 4) que por medio de una fosfatasa se transforman en tres de Frc-6-P
(reaccin 5); isomerizndose luego una de ellas hasta Glc-6-P (reaccin 6); esta
hexosa pierde su grupo fosfato por accin de una fosfatasa, convirtindose en
Glucosa (reaccin 7), que ahora sirve como punto de partida para la biosntesis de
varios polisacridos.


180

Las reacciones restantes tienen como objetivo final regenerar las seis molculas
de Ribulosa 1, 5-Di P gastadas en la reaccin 1 y para ello se utilizan las dos
molculas de Frc-6-P restante y las seis de 3-P-Gal dejadas en reserva; las
reacciones que ocurren en esta porcin del ciclo son inversas a las de la parte de
la va de las pentosas fosfato (figura 51 reacciones 5 a 9).

Las dos molculas de Frc-6-P se combinan con dos de 3-P-Gal (quedando cuatro
en reserva) para dar en la reaccin (9), dos molculas Xilulosa-5-P y dos de
Eritrosa-4-P (2C
6
+ 2C
3
2C
5
+ 2C
4
); las dos Xilulosas-5-P las dejamos en
reserva y las dos Eritrosa-4-P se unen con dos de PDHA (que son equivalentes a
dos de 3-P-Gal de las cuatro que haba en reserva) para dar en la reaccin (11),
dos molculas de Seudoheptulosa -1,7-DiP (2C
4
+ 2C
3
2C
7
). Estas reacciones
son catalizadas por distintas transferasas.

181

La heptosadifosfato pierde un grupo fosfato por medio de una fosfatasa (reaccin
12) y se obtienen dos molculas de Seudoheptulosa-7-P que se condensan con
las dos ltimas molculas de 3-P-Gal de la reserva para dar (reaccin 13), dos de
Ribulosa-5-P y 2 de Xilulosa-5-P (2C
7
+ 2C
3
4C
5
); estas ltimas, sumadas con
las dos de Xil-5-P que tenamos en reserva, se isomerizan (reaccin 15) a 4 de
Ribulosa-5-P y en consecuencia tendremos seis de Ribulosa-5-P. Esta pentosa
sufre una fosforilacin catalizada por una Kinasa (reaccin 16) y se producen seis
molculas de Ribulosa -1,5 -Di P.

De esta manera se regenera la pentosa gastada en la fijacin del CO
2
y se cierra
el ciclo. El funcionamiento del ciclo, o sea de la etapa oscura, slo requiere del
aporte externo de CO
2
, NADPH + H
+
y ATP y cantidades relativamente pequeas
de los intermediarios (triosas, tetrosas, pentosas, hexosas y heptosas) son
suficientes para mantenerlo en operacin, a condicin de que no se utilicen en
otras vas. Dado que el primer metabolito que aparece en la fijacin del CO
2
es un
compuesto con 3C, esta fotosntesis se conoce actualmente como de tipo C
3
.

Si realizamos un balance de esta etapa observamos que la reaccin neta,
descontando los intermediarios cclicos, ser:

6CO
2
+ 18 ATP + 12 NADPH + 12H
+
Glucosa + 18 ADP + 18 Pi + 12NADP
+

Es decir hay un apreciable consumo de ATP y de NADPH + H
+
para poder reducir
el CO
2
, estas molculas provienen de la etapa luminosa que las producen por la
fotlisis del H
2
O (con el transporte asociado de los electrones resultantes) y la
fotofosforlacin.

Aunque esta etapa parece muy complicada desde el punto de vista de las
reacciones que ocurren, su comprensin se facilita considerablemente si se
conocen bien las reacciones de la gluconeognesis y de las pentosas fosfato.
Recientemente se ha descubierto que existe un grupo de plantas gramneas como
maz, caa de azcar, sorgo etc., y otras en las cuales el primer producto de la
fijacin del CO
2
(reaccin 1) son cidos dicarboxlicos con 4 carbonos (malato,
oxalacetato); en ellas hay algunas reacciones cclicas previas a las del ciclo de
Calvin y el resultado neto es que el balance de la etapa oscura ser:

6CO
2
+ 30ATP + 12NADPH + 12H
+
Glucosa + 30ADP + 30Pi + 12NADP
+

En consecuencia este tipo de fotosntesis, llamado C
4
, consume ms energa pero
est compensado porque presenta menor fotorrespiracin y por tanto es ms
eficiente fotosintticamente. El artculo de Hatch
1
le dar detalles sobre este tipo
de fotosntesis


182

36.2 Biosntesis de polisacridos

El grupo de Leloir en Argentina ha establecido que los polisacridos animales y
vegetales se sintetizan empleando como precursores compuestos del tipo
monosacridos-nucletido que actan como donadores del monmero.
Dependiendo del polisacrido que se vaya a sintetizar se usan los compuestos
indicados en la tabla 20:

Tabla 20: Precursores usados en la biosntesis de polisacridos
Carbohidrato Nucletido - Azcar
Glicgeno
Almidn
Celulosa
UDP-glucosa
ADP-glucosa
ADP-glucosa, CDP-glucosa, GDP-glucosa

Estos precursores provienen de la Glucosa-6-P producida en la fotosntesis que es
transformada en UDP-Glc por la secuencia de reacciones:

Glucosa-6-
Isomerasa

Glucosa-1-
Glucosa-1- + UTP
a Transferas
UDP-Glucosa +
asa Pirofosfat
2Pi
En la sntesis del glicgeno (hgado, msculos), la UDP-glucosa es el donador de
Glc que es transferido sobre un extremo no reductor de una molcula de glicgeno
((Glc)
n
) y ste se alarga en una unidad de glucosa:

UDP-Glc + (Glc)
n

etasa int S
UDP + (Glc)
n+1

Esta reaccin forma los enlaces -1,4 del glicgeno pero la sintetasa del
glicgeno no puede formar los enlaces -1 ,6; para ello interviene una enzima
ramificante que cataliza la transferencia de un fragmento (6-7 glucosas) del
extremo no reductor, sobre el OH - 6 de una glucosa interna, creando as el
enlace -1 ,6.

Cuando se requiere un nucletido como ADP-glucosa la sntesis es anloga a la
de UDP-glucosa por la reaccin:

Glucosa-1- + ATP
a Transferas
UDP-Glucosa +
asa Pirofosfat
2Pi

La celulosa y el almidn se sintetizan de manera anloga haciendo uso de una
sintetasa o del conjunto sintetasa + enzima ramificante segn se trate de formar
amilosa o amilopectina en el caso del almidn.
P
P
P
P
P
P
P P

183


1. En un anlisis de las reacciones qumicas de la ruta catablica
de las glucolisis, desde el punto de vista del consumo y
generacin de energa, se evidencian dos etapas: en la primera,
consumo de molculas de ATP para activacin de molculas
fosforiladas (Glucosa + ATP Fruc 1,6- Di-P), en la
segunda, recuperacin y produccin de molculas de ATP (3-
PHA + 3- P-Gal Piruvato).

Sobre el esquema, se puede sealar las reacciones en donde
ocurren las reacciones de fosforilacin a nivel de sustrato y las
reacciones de oxidacin-reduccin (fosforilacin oxidativa (F:O)
para la produccin de ATP.

Cules son las reacciones correctas dnde se produce estas
reacciones?

2. Pregunta abierta: Una ingesta exagerada de harinas ayuda a
promover la biosntesis de cidos grasos, cmo explica la
anterior afirmacin.

3. Dentro de la glucolisis ocurre reacciones de ruptura de enlace carbono-carbono. la
reaccin que sufre este tipo de reaccin es?.

4. En las reacciones el ciclo de krebs: hay dos formas de produccin de ATP en este
ciclo a saber: a nivel de sustrato (Fosforilacin transferencia de grupos fosfatos) y a
nivel de la cadena transportadora de electrones (fosforilizacin oxidativa F: O). Cuantas
molculas de ATP se forman de la entrada de la oxidacin de 6 molculas de piruvato?

5. Cul es el total de ATP formado cuando se consume un gramo de glucosa?

6. Presente un cuadro comparativo en donde resalte las siguientes caractersticas entre
la glucolisis y la gluconeognesis:

a. similitudes entre las dos vas
b. diferencias entre las dos vas
c. ubicacin celular
d. metabolitos iniciales y finales de las dos vas


184

18

Para el inicio del estudio del catabolismo de lpidos, el estudiante debe activar sus
conocimientos metacognitivos previos de sus cursos anteriores como la qumica
general y la qumica orgnica en cuanto a los conceptos generales de los lpidos
(estructura, propiedades qumica y clasificacin) ya que estos conceptos como
tales no hacen parte del curso de bioqumica.

El captulo analiza el catabolismo de triglicridos, fosfolpidos y colesterol. Hay que
destacar la beta-oxidacin, ruta catablica de los triglicridos, ya que este grupo
de sustancias son las que constituyen en un 95% de las grasas consumidas en la
dieta del hombre y animales. La beta-oxidacin es una de las rutas ms complejas
de este captulo ya que se debe analizar detalladamente la clase de cido
proveniente del triglicridos que se estn oxidando. El captulo detalla la ubicacin
celular, las reacciones qumicas y el balance energtico para la produccin de
ATP.

En este captulo tambin se analiza las reacciones de biosntesis de lpidos, su
ubicacin celular e importancia en la construccin de tejidos y rganos.


Leccin 37: Catabolismo de lpidos

El estudio del metabolismo de los lpidos ha recibido mayor atencin en los
organismos animales y es por ello que la informacin disponible en este campo
para procariotes y para vegetales es considerablemente menor. En la clula en
general los triglicridos son considerados como material de reserva energtica
mientras que los fosfolpidos y los esfingolpidos son constituyentes importantes
de las membranas.

18

Seores estudiantes: antes de comenzar la leccin Seores estudiantes: antes de comenzar la leccin Seores estudiantes: antes de comenzar la leccin Seores estudiantes: antes de comenzar la leccin 37 37 37 37, los invito a que repasen los conceptos , los invito a que repasen los conceptos , los invito a que repasen los conceptos , los invito a que repasen los conceptos
relacionados con: relacionados con: relacionados con: relacionados con:
- -- - lpidos lpidos lpidos lpidos
- -- - clasificacin clasificacin clasificacin clasificacin
- -- - cidos grasos saturados cidos grasos saturados cidos grasos saturados cidos grasos saturados e insaturados e insaturados e insaturados e insaturados
- -- - formacin e hidrlisis de triglicridos formacin e hidrlisis de triglicridos formacin e hidrlisis de triglicridos formacin e hidrlisis de triglicridos
La revisin bibliogrfica de estas temticas le La revisin bibliogrfica de estas temticas le La revisin bibliogrfica de estas temticas le La revisin bibliogrfica de estas temticas le ayudar ayudar ayudar ayudar a comprender mejor la vida metablica que a comprender mejor la vida metablica que a comprender mejor la vida metablica que a comprender mejor la vida metablica que
estamos a punto de estudiar. estamos a punto de estudiar. estamos a punto de estudiar. estamos a punto de estudiar.

185

En los animales superiores los triglicridos son los componentes lipdicos ms
abundantes, alrededor de un 65% es tejido adiposo donde se realiza un activo
metabolismo tanto de tipo degradativo (gliclisis, ciclo de Krebs y fosforilacin
oxidativa), como de tipo biosinttico. En este tejido, se almacenan en forma de
triglicridos, los cidos grasos transportados en su forma libre por la albmina
srica (protena muy abundante en la sangre) o por los quilomicrones como
triglicridos.

Debido a su alto contenido en energa (del orden de 9 kcal /g), a la ausencia de
agua, al menor volumen ocupado y a su disponibilidad, los triglicridos son la
forma ms eficiente en que la clula acumula reservas de energa. En un
triglicrido, alrededor del 95% de la energa biolgicamente aprovechable,
proviene de las cadenas carbonadas del cido graso y slo un 5% corresponde al
glicerol.

En rganos tales como el corazn, hgado y en el msculo esqueltico, los
triglicridos proveen cerca de la mitad de las necesidades energticas. En ciertos
animales, particularmente aves migratorias y animales con periodos de
hibernacin, estos lpidos son la fuente casi nica de energa. Dependiendo del
tejido donde se encuentren los lpidos, su vida media es diferente. En el tejido
adiposo por ejemplo, su vida media es de 15-20 das, en el cerebro es de 10-15
das y en el hgado es de 1-2 das. Algunos lpidos como los fosfoglicridos
perduran en promedio desde 200 das (en el cerebro) hasta solo 1 o 2 das (en el
hgado).

En general los lpidos son hidrolizados biolgicamente gracias a una gran variedad
de lipasas que se encuentran en el intestino delgado, en la superficie de los
adipocitos y en los lisosomas. Para cada tipo de lpido (ver la clasificacin de los
lpidos en el mdulo de Qumica Orgnica1), tenemos un grupo de lipasas muy
especficas respecto al enlace que atacan. La carencia de alguna de estas
enzimas, (en ocasiones debido a defectos genticos), ocasiona enfermedades
mortales cuyas causas han sido bien establecidas especialmente en la
degradacin de los esfingolpidos.

37.1 Catabolismo de triglicridos

Por las razones expuestas anteriormente, se centrar este estudio en la
degradacin de los triglicridos. Se examinar su hidrlisis por las lipasas, la
entrada de los cidos grasos a la mitocondria y su oxidacin completa hasta CO
2

y H
2
O. As mismo, los rendimientos en ATP y las variantes existentes para los
cidos grasos insaturados servirn para comparar las rutas catablicas ms
importantes y generales.
Desde comienzos de siglo XX y gracias a los trabajos pioneros de Knoop, se ha
ido acumulando una enorme cantidad de evidencia qumica (lectura recomendada

186

#1), que aunada a los trabajos posteriores con los sistemas enzimticos, han
permitido disponer de una visin detallada del proceso, que se describe
enseguida.

37.1.1 Hidrlisis y entrada de cidos grasos a la mitocondria

Los triglicridos (grasas y aceites) ingeridos en la alimentacin, son hidrolizados
por las lipasas intestinales hasta glicerol y cidos grasos libres segn la siguiente
reaccin:

El glicerol es absorbido como tal y rpidamente sufre las siguientes
transformaciones:

La 3-fosfo dihidroxiacetona (3 P DHA) formada, entra a la va glicoltica y se oxida
finalmente hasta piruvato que luego pasa a Acetil -CoA.

Los cidos grasos por su parte, se unen a los cidos biliares y pueden ser
transportados como tales por la albmina srica, absorbidos, o nuevamente
esterificados para formar triacil glicridos en los quilomicrones. En este caso, al
llegar a la clula las lipasas los hidrolizan hasta cidos grasos y de esta forma
llegan al citoplasma.


187

Debido a que los cidos grasos no pueden atravesar la membrana mitocondrial,
sufren una activacin y transferencias sobre diversos compuestos, para finalizar
como complejos acil-carnitina.

Esta activacin se realiza por medio de una tiokinasa y ATP segn esta reaccin:

Esta transferasa est situada en la membrana externa de las mitocondrias y la
reaccin es fcilmente reversible pues su G = -0,2 kcal/mol y solo la accin de
la pirofosfatasa hace que el equilibrio se desplace hacia la activacin del cido
graso. El G global es = -7,1 kcal/mol.

Los aciladenilatos as formados son transferidos sobre HSCoA por medio de
transferasas que varan de acuerdo con la longitud de la cadena del cido graso
(grupo R, ver referencia especfica # 1).
Esta reaccin general es:

Estos acil-CoA tampoco pueden atravesar la membrana mitocondrial y para ello
deben ser transformados en un derivado acilcarnitina por medio de una
transferasa localizada en la membrana externa.

188

El proceso de entrada est regulado por la accin de esta transferasa.
Posiblemente la naturaleza anfiftica de la acilcamitina permite su paso a travs
de la membrana de la mitocondria y una vez en su interior, el cido graso forma
nuevamente acil -CoA por medio de otra transferasa situada en la membrana
interna.

Gracias a esta secuencia de reacciones, los diferentes cidos grasos llegan al
interior de la mitocondria donde sufrirn un proceso degradativo conocido como -
oxidacin.


189

37.1. 2 -oxidacin de cidos grasos pares y saturados.

La oxidacin de los cidos grasos se realiza en dos etapas.

En la primera, el carbono 3 (carbono beta) es oxidado y se eliminan 2 tomos de
carbono de la cadena hidrocarbonada del cido, formndose Acetil-CoA.
En la segunda etapa, el Acetil-CoA es oxidado hasta CO
2
y H
2
0 a travs del ciclo
de Krebs y la fosforilacin oxidativa.

Considere en primer trmino, cmo ocurre la -oxidacin de los cidos grasos
saturados y con un nmero par de tomos de carbono. Como ejemplo se
emplear el cido palmtico (C
16
) que al haber sido transportado al interior de la
mitocondria est en forma de palmitoil-CoA. La figura 58 esquematiza la primera
vuelta en la -oxidacin.

El acil-CoA (en este caso palmitoil-CoA), es oxidado en una primera reaccin por
una FAD-deshidrogenasa que remueve especficamente hidrgeno de los
carbonos 2 y 3 ( y ), dando lugar a un doble enlace trans ( 2,3). Dependiendo
de la longitud de la cadena, actan diferentes deshidrogenasas en forma
especfica. En la segunda reaccin, una hidratasa adiciona una molcula de H
2
0
sobre el doble enlace. Dado que este enlace es trans, se produce un -hidroxiacil-
CoA de configuracin L (note que el carbono 3 es asimtrico), lo cual es
fundamental para que contine el proceso. Si el doble enlace fuese de tipo cis, la
hidratacin producira un D--hidroxialcil-CoA.

190

Figura 58: Esquema de la -oxidacin de cidos grasos saturados

La deshidrogenasa que acta a continuacin (reaccin 3), es estreo especfica y
requiere que el -hidroxiacil-CoA tenga la configuracin L.


191

La accin de esta enzima, origina que el grupo OH se oxide hasta quedar un
grupo C=O, apareciendo un -cetoacil-CoA (-cetopalmitoil-C0A en este ejemplo)
y NADH + H
+
.

En la cuarta y ltima reaccin de esta primera etapa, acta una transferasa
(Tiolasa), la cual al introducir una nueva molcula de HSCoA libre sobre el
compuesto -cetoacil-CoA, ocasiona una ruptura del enlace entre los carbonos
y , producindose un acil-CoA con 2 tomos menos de carbono y otra molcula
de Acetil-CoA; este ltimo entra al ciclo de Krebs directamente (ya que se
encuentra al interior de la mitocondria) y se oxida completamente hasta 2 CO
2
y
H
2
O.

El nuevo acil-CoA tendr ahora 14 carbonos y entra en una segunda vuelta de -
oxidacin (lnea punteada) y luego de sufrir las 4 reacciones enzimticas, se
transforma en una nueva molcula de Acetil-CoA y un acil-CoA con 12 carbonos
(C
12
). Cada acil-CoA entra a una vuelta adicional de -oxidacin y despus de un
nmero de vueltas (n) que depende de la longitud inicial del cido graso se obtiene
luego de la reaccin 3 (repetida n veces) el compuesto aceto-acetil-CoA (C
4
), que
por la reaccin 4 se transforma en 2 molculas de Acetil-CoA, de la siguiente
manera:

En el caso del cido palmtico (C
16
) se requieren 7 vueltas para llegar a esta
situacin, dado que en general se requieren (n/z )-1 vueltas, si n es el nmero de
carbonos iniciales. La ecuacin global para la -oxidacin del cido palmtico ser:

+ +
+ + + + + + H 7 NADH 7 FADH 7 CoA - 8acetil O H 7 HSCoA 7 NAD 7 FAD 7 CoA - Palmitoil
2 2

Las 8 molculas de acetil-CoA son oxidadas totalmente hasta CO
2
y H
2
0
produciendo una cantidad considerable de ATP en la fosforilacin oxidativa
(considerar conjuntamente las figuras 46 y 48).

Por su parte, las coenzimas reducidas (FADH
2
y NADH+ H
+
) cuando son
reoxidadas en la fosforilacin oxidativa, generan tambin ATP. El balance de C y
energa se mostrar ms adelante.

37.1. 3 -oxidacin de cidos grasos pares Insaturados

En la -oxidacin de los cidos grasos de este tipo intervienen algunas enzimas
adicionales que permiten resolver los problemas planteados por la pre-existencia

192

de los dobles enlaces que por razones de biosntesis son de tipo cis. Se
considerarn los dos casos a los cuales se puede reducir el problema.
En el primer caso, se toma por ejemplo el cido oleico (C
18
), en el cual existe un
doble enlace cis entre C9-C10 y luego de 3 vueltas de -oxidacin, con produccin
de 3 Acetil-CoA, 3 FADH
2
y 3 NADH + 3H
+
, se llega al acil-CoA siguiente:

Donde existe un 3, 4-cis-enoil-CoA que corresponde al 9, 1 0-cis original del
cido oleico.

Dado que ya existe la instauracin, no acta la FAD-deshidrogenasa (reaccin 1
figura 58) y no se produce FADH
2
, interviene una isomerasa que pasa el doble
enlace de 3,4 cis- a 2,3 trans- y la va contina sin ningn cambio adicional. La
diferencia en el balance global ser un FADH
2
menos que en la -oxidacin del
cido esterico (C
18
saturado).

En el segundo caso, estn los cidos grasos poliinsaturados. Se analizar lo que
sucede con el linoleico (9, 10, 12, 1 3-cis). Luego de 3 vueltas hay una situacin
anloga a la del oleico ya que el acil-CoA resultante sera:

Al iniciar la cuarta vuelta, acta una isomerasa que pasa el doble enlace de 3,4-
cis- a 2,3-trans- para luego realizar las reacciones posteriores de la vuelta sin
produccin de FADH
2
. Al terminar la quinta vuelta tenemos el siguiente acil-CoA:

193

En el cual existe un 2,3-cis- por lo cual no acta la FAD-deshidrogenasa y al ser
hidratado (reaccin 2 figura 58), produce el D--hidroxiacil-CoA; puesto que la
NAD-deshidrogenasa es absolutamente especfica para L- - hidroxiacil-CoA. Esta
enzima no actuara, paralizndose la -oxidacin.

El problema se resuelve con la intervencin de una enzima ismera (epimerasa)
que transforma el D-- hidroxiacil-CoA en L--hidroxiacil-CoA y la degradacin
contina.

Los cidos grasos poliinsaturados restantes (linolnico y araquidnico, entre otros)
son degradados de manera similar recurriendo a estas isomerasas.

37.1.4 -oxidacin de cidos grasos de cadena impar o ramificada

Los cidos grasos de cadena impar o ramificada son poco frecuentes en la
naturaleza y ms bien aparecen como productos de la degradacin de algunos
compuestos (ejemplo: Val, Ile). Estos cidos son degradados de la manera usual
hasta que se llega a la ramificacin o al radical propionil.
La secuencia de las reacciones que suceden de ah en adelante se muestra en la
figura 59.


194

Figura 59: Esquema de -oxidacin de cidos grasos ramificados

En primer lugar acta una transferasa (reaccin 1) que al incorporar HSCoA produce
propionil-CoA este compuesto sufre una carboxilacin (reaccin 2) que requiere ATP y
biotina (vitamina del grupo B) como coenzima; se produce inicialmente D-metilmalonil-
CoA que es isomerizado a L- metilmalonil-CoA que a su vez se isomeriza (reaccin 3) a
succinil-CoA que por ser uno de los intermediarios del ciclo de Krebs contina por esa va.
Se tiene aqu un nuevo ejemplo de una reaccin anaplertica y la posibilidad de degradar
cidos grasos poco comunes.

195

Leccin 38: Balance de la degradacin de cidos grasos
19

Con el objeto de ilustrar como se efectan los balances de carbono y energa al
considerar el catabolismo de los cidos grasos, se presentan 2 casos:
Catabolismo del cido esterico.
Catabolismo del cido linoleico.

En el primer caso tenemos un cido graso con 18 carbonos, saturado. En su
activacin se consume 1 ATP y su -oxidacin requiere 8 vueltas, es decir (18/2) -
1. Por tal motivo, se tomar como ecuacin global:

Estearil-CoA + 8FAD + 8NAD
+
+ 8HSCoA + 8 H
2
O 9 acetil-CoA + 8FADH
2
+ 8NaDH + 8H
+

Los 9 acetil-CoA al ser oxidados en Krebs producen:

9Acetil-CoA + 9ADP + 27NAD
+
+ 9FAD 18C0
2
+ 9ATP + 27NADH + 27H
+
+ 9 FADH
2

(ver figura 46)

La reoxidacin de las coenzimas reducidas en la fosforilacin oxidativa producen 3
ATP por cada NADH + H y 2 ATP por cada FADH
2
en consecuencia tendremos:

+
+ +
+ =
+
+
+
H 35 NADH 35
Krebs
H 27 NADH 27
oxidacin -
H 8 NADH 8

2
2 2
FADH 17
Krebs
FADH 9
oxidacin -
FADH 8
= +

35 x 3 = 105 ATP Reoxidacin NADH + H
+

17 x 2 = 34 ATP Reoxidacin FADH
2

9 ATP Krebs (fosforilacin a nivel sustrato)

Total ATP producidos: 148

Menos ATP gastados: 1

Produccin neta: 147 ATP

En resumen 1 mol de cido esterico (PM=284,5) al ser oxidado hasta CO
2
y H
2
O
nos produce 147 ATP o sea 1073100 cal (147X7300). Dado que el calor de

19
Munera, R. (2008). Bioqumica. Palmira: Universidad Nacional Abierta y a distancia.


196

combustin de 1 mol de esterico es de 2.698 kcal, la recuperacin de energa es
del 39,8%.
En el segundo caso, un cido graso de 18 carbonos con 3 insaturaciones, gasta
para su activacin 1 ATP y con las 8 vueltas necesarias su ecuacin global es:

Linolenil-CoA + 5FAD + 8NAD
+
+ 8HSCoA + 8 H
2
O 9 acetil-CoA + 5FADH
2
+ 8NaDH + 8H
+

En este caso, se producen 5 FADH
2
(comparados con los 8 FADH
2
producidos en
la -oxidacin del esterico) debido a las 3 insaturaciones preexistentes. Los
clculos son similares a los efectuados para el esterico y luego de la oxidacin
por el ciclo de Krebs se obtiene:

+
+ +
+ =
+
+
+
H 35 NADH 35
Krebs
H 27 NADH 27
oxidacin -
H 8 NADH 8

2
2 2
FADH 14
Krebs
FADH 9
oxidacin -
FADH 5
= +

35 x 3 = 105 ATP Reoxidacin NADH + H
+

14 x 2 = 28 ATP Reoxidacin FADH
2

9 ATP Krebs (fosforilacin a nivel sustrato)

Total ATP producidos: 142

Menos ATP gastados: 1

Produccin neta: 141 ATP

Comparando con el esterico, el catabolismo del linolnico, y en general de los
insaturados, tiene un rendimiento en ATP algo ms bajo. Si el calor de combustin
de 1 mol de linoleico fuese de 2.625 kcal, la energa recuperada sera:

265 100%
141 x 7.3 X

X = 39.2%

Entonces, la cantidad de energa (en trminos de ATP) obtenida por la oxidacin
de los cidos grasos es muy superior a la obtenida de los carbohidratos. Esta es la
razn por la cual el organismo acumula triglicridos como material de reserva
energtica.


197

La cantidad de ATP proveniente de la oxidacin completa de un triglicrido es
considerable obteniendo 3 molculas de cidos grasos adems del glicerol que a
travs de la gliclisis, ciclo de Krebs y fosforilacin oxidativa, tambin contribuyen
a la produccin de ATP.

Leccin 39: Catabolismo de fosfolpidos

Los fosfolpidos son constituyentes muy importantes de las membranas celulares
cuyas propiedades biolgicas dependen en buena medida de la presencia y
composicin de esta clase de lpidos. Algunos de ellos como la esfingomielina son
especialmente abundantes en el tejido nervioso y en el cerebro.

Cuando se considera la estructura global de los fosfoglicridos y de los
esfingolpidos, es evidente la enorme diversidad estructural que poseen estos
lpidos. Por ello se presentarn solamente los mecanismos ms generales para su
degradacin.

En el catabolismo de los fosfolpidos intervienen hidrolasas que pueden ser
fosfolipasas, fosfodiesterasas y fosfomonoesterasas; cada una con un alto grado
de especificidad. Por ejemplo, cuatro tipos de enzimas fosfolipasas presentes en
los tejidos, producen especficamente los compuestos sealados en la figura 60,
donde el sustrato es una lecitina.

De acuerdo al tema que acabas de ver, podramos afirmar que esta es la razn por la cual las grasa De acuerdo al tema que acabas de ver, podramos afirmar que esta es la razn por la cual las grasa De acuerdo al tema que acabas de ver, podramos afirmar que esta es la razn por la cual las grasa De acuerdo al tema que acabas de ver, podramos afirmar que esta es la razn por la cual las grasa
aportan ms caloras que los azcares. aportan ms caloras que los azcares. aportan ms caloras que los azcares. aportan ms caloras que los azcares.

Es interesante saber que Es interesante saber que Es interesante saber que Es interesante saber que las grasas saturadas como las de origen animal aportan ms caloras (mayor las grasas saturadas como las de origen animal aportan ms caloras (mayor las grasas saturadas como las de origen animal aportan ms caloras (mayor las grasas saturadas como las de origen animal aportan ms caloras (mayor
produccin de ATP) que los insaturados de origen vegetal. produccin de ATP) que los insaturados de origen vegetal. produccin de ATP) que los insaturados de origen vegetal. produccin de ATP) que los insaturados de origen vegetal.

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198

Figura 60: Productos resultantes de la degradacin de la Lecitina por fosfolipasas

Adicionalmente, una fosfodiesterasas puede liberar colina a partir de glicerolfosforil
colina (GPC) segn la reaccin:

A su vez, una fosfomonoesterasa hidroliza el glicerol-fosfato (GP) a fosfato
inorgnico (Pi) y glicerol que puede ser catabolizado por la va glicoltica:


199

Otros fosfolpidos como fosfatidiletanolamina, fosfatidilserina, entre otros, son
catabolizados de manera semejante y en conjunto los diferentes productos
participan en un ciclo metablico por medio del cual se efecta tambin la
biosntesis de estos compuestos.

Leccin 40: Catabolismo de colesterol

El colesterol presente en los organismos superiores (peces, aves, mamferos) es
excretado en forma de esteroles neutros (con 27 tomos de carbono, C
27
) o como
cidos biliares (C
24
).

La figura 61, muestra las caractersticas estructurales del colesterol.

Figura 61: Estructura del colesterol

Los esteroides neutros presentes en las heces son una mezcla bastante compleja
y en el hombre constituyen un 30 - 80% de los esteroides excretados. Se ha
calculado que alrededor de 500 - 700 mg/da de esteroides neutros son
excretados a travs de la bilis; clulas de la mucosa intestinal y secreciones
Seores estudiantes: Consulte el siguiente material, ser de gran ayuda: Seores estudiantes: Consulte el siguiente material, ser de gran ayuda: Seores estudiantes: Consulte el siguiente material, ser de gran ayuda: Seores estudiantes: Consulte el siguiente material, ser de gran ayuda:
http://www.youtube.com/watch?v=iK75Pm9pK0k http://www.youtube.com/watch?v=iK75Pm9pK0k http://www.youtube.com/watch?v=iK75Pm9pK0k http://www.youtube.com/watch?v=iK75Pm9pK0k
http://www.youtube.com/watch?v=WtoQn7Pa http://www.youtube.com/watch?v=WtoQn7Pa http://www.youtube.com/watch?v=WtoQn7Pa http://www.youtube.com/watch?v=WtoQn7Pa- -- -FI FI FI FI


200

intestinales; la cantidad vara con cada especie y con la dieta, siendo mayor para
dietas ricas en grasas insaturadas. El componente mayoritario de la mezcla es el
coprostanol (cuya estructura se muestra en la figura 58) acompaado de otros
esteroides saturados en las posiciones 5,6 y de esteroides de origen vegetal como
sitosterol y estigmaesterol.

Los cidos biliares ms abundantes son el cido clico, el deoxiclico y el
quenodeoxiclico cuya similitud estructural se aprecia en la figura 62.

Figura 62: Principales productos del catabolismo del colesterol

El catabolismo de los cidos biliares incluye como transformaciones ms
importantes, la saturacin del doble enlace presente en los carbonos 5,6 del
colesterol, la isomerizacin del hidroxilo 3 -a 3 - la hidroxilacin (oxidacin) de

201

los carbonos 7 y/o 12 y la degradacin de la cadena lateral hasta obtener un
carboxilo en el carbono 24.

Los cidos biliares se conjugan con glicina o taurina para formar las sales biliares,
las cuales juegan un papel muy importante en la digestin y absorcin de los
lpidos por sus propiedades emulsificantes. La formacin de estas sales est
influenciada por la dieta, por el estado de salud del individuo y por los niveles de
algunas hormonas.

En el tracto intestinal las sales de los cidos biliares se hidrolizan a su forma libre
y luego de sufrir oxidacin de los hidroxilos a grupos ceto, son reabsorbidas en la
parte inferior del leon y pasan al hgado donde luego de conjugarse con glicina o
taurina son reexcretados a la bilis y de all pueden pasar a las heces; este
procesamiento est controlado homeostticamente por la concentracin de cidos
biliares en la sangre que va al hgado por la vena porta.

Leccin 41: Biosntesis de lpidos

En los organismos vivos la capacidad de almacenamiento de polisacridos es
bastante limitada mientras que los lpidos y especialmente los triglicridos
representan una fraccin considerable del peso. Un adulto de 70 kg puede
almacenar hasta 12 kg de triglicridos, lo cual es suficiente para mantener su
energa basal durante 8 semanas.

Los procesos de biosntesis de lpidos son particularmente activos en el hgado y
en el tejido adiposo de los animales, mientras que en las plantas se localizan
principalmente en el fruto y semillas.

La mayora de la discusin subsiguiente estar dedicada a la biosntesis de
triglicridos, dada su importancia como material de reserva y luego se discutirn
los fosfoglicridos, por ser constituyentes de la membrana celular y los esteroides
por el papel hormonal que tienen algunos de ellos.

41.1 Biosntesis de triglicridos

41.5.1.2 Biosntesis de cidos grasos

Se estudiar en primer lugar como se sintetizan los cidos grasos. Los trabajos en
este campo han demostrado que el primer cido graso sintetizado es el palmtico
(C
16
) y que a partir de l se derivan por alargamiento y formacin de dobles
enlaces, si es el caso, los otros cidos grasos.


202

Las reacciones tienen lugar en el citoplasma a donde es transportado el grupo
acetilo presente en las mitocondrias como AcetilCoA; ste metabolito proviene del
catabolismo de carbohidratos, de cidos grasos o de algunos aminocidos y
cuando se encuentra en exceso (como resultado de este catabolismo) es
exportado al citoplasma empleando la secuencia de reacciones ilustrada en la
figura 63.

Figura 63: Transporte de Acetil-CoA mitocondrial al citoplasma


203

La reaccin (1) corresponde a la primera reaccin del ciclo de Krebs y el citrato es
llevado al citoplasma por medio de un sistema transportador presente en la
membrana mitocondrial. En el citoplasma es degradado por una liasa para dar
oxalacetato y acetil CoA (reaccin 2); la energa necesaria para formar el enlace
ster proviene del ATP que se degrada. El Acetil-CoA citoplasmtico va a la
biosntesis de cidos grasos y el oxalacetato a travs de la formacin de malato,
su entrada a la mitocondria y posterior reoxidacin (reacciones 3 y 4), regeneran el
oxalacetato gastado en la primera reaccin y el resultado neto es que el grupo
acetato inicialmente presente en la mitocondria est ahora en el citoplasma donde
sufre una carboxilacin por medio de una sintetasa que requiere biotina (vitamina
del grupo B) y ATP.

La reaccin es la siguiente:

Esta sintetasa es una enzima reguladora cuya actividad aumenta con citrato; por
consiguiente la velocidad global de la va depende de la velocidad con que se
efecte esta carboxilacin.

Una vez que se ha formado el malonil-CoA, interviene en los pasos restantes un
complejo de siete enzimas (en clulas animales), conocido como la sintetasa de
cidos grasos que se abreviar como E (de enzima) y que en forma esquemtica
se considera constituido por las enzimas asociadas que se indican en el siguiente
esquema:

204

El componente PTA (Protena Transportadora de Acilos) es una enzima pequea
(PM 9000) que tiene la 4-fosfopantetena como grupo prosttico; esta molcula
tiene en uno de sus extremos un grupo -SH que forma enlaces tio ster de manera
similar a como lo hace la HSCoA y sirve as como un transportador de grupos R-
(CO)
-
(acilo); la enzima est tambin presente en procariotes
20
donde el complejo
multienzimtico ha sido parcialmente estudiado.
La participacin de la sintetasa de cidos grasos en la biosntesis se lleva a cabo a
travs de una serie de pasos esquematizados en la figura 64.

La primera enzima que acta es la acetil transferasa que lleva el grupo CH
3
(CO)-
sobre una cisteina de la sintetasa de cidos grasos (E) (reaccin 1) y luego el
grupo malonil (
-
OOC CH
2
(CO) ) es colocado por la malonil transferasa
sobre el HS de la PTA (reaccin 2).

Como resultado, los 2 grupos acilo estn muy cerca en la sintetasa (E) y en el
siguiente paso (reaccin 3) son condensados recibiendo el C
+
el grupo acetil y
saliendo como CO
2
el COO
-
marcado con **. Este mecanismo se estableci
gracias al empleo de
14
C como marcador.

La protena PTA, es quien ahora tiene el grupo 3-ceto acil.

20
Lipid metabolism / W. J Lennarz, - Anual review in Biochemestry. Vol 39, 1970. p359.

205

Este es reducido por una enzima que usa NADPH+H
+
como coenzima (reaccin
4); este dinucletido proviene de la va de pentosas fosfato y esta reaccin
regenera la forma reducida necesaria para la operacin de la va (ver captulo 6,
Catabolismo de Carbohidratos de este mdulo). El D-3- hidroxiacil PTA producido
pierde una molcula de H
2
0 por medio de una deshidratasa formndose un doble
enlace 2,3-trans- (reaccin 5) que es reducido por otra NADP- deshidrogenasa
(reaccin 6).

El butiril SPTA unido a la sintetasa (E), es transferido enzimticamente sobre la
CySH (reaccin 7)

En esta primera vuelta de la biosntesis, la reaccin global sera:

Acetil-SCoA+Malonil SCoA+2 NADPH+2H
+
+HSPTA 2 NADP+Butiril- SPTA +2
HSCoA+CO
2


206

Figura 64: Esquema de las reacciones de biosntesis de cidos grasos

207

En la segunda vuelta, un nuevo malonil- CoA se transfiere al HS de la PTA
(reaccin 2) y luego se repiten las reacciones 3, 4, 5, 6 y 7 terminando el complejo
como:

En cada vuelta se aaden 2 carbones sobre el acilo ya formado, actuando el
malonil CoA como el donante de C.

El palmtico requiere 7 vueltas en total y la ecuacin global sera

7C0
2
+8AcetilCoA+14NADPH+14H+7ATP+7H
2
Palmtico (C
16
)+7CO
2
+14NADP
+
+7ADP+7 Pi

El proceso de alargamiento de los cidos grasos se efecta por medio de sistemas
enzimticos localizados en la mitocondria donde el Acetil-CoA es el donante del
par de carbonos recibidos por el acil-CoA; o tambin en el retculo
endoplasmtico, donde en forma muy activa se adiciona malonil-C0A sobre el
Para la biosntesis de los cidos grasos monoinsaturados, el palmtico y el
esterico sirven como precursores ya que por accin de una oxigenasa mixta
(emplea NADPH + H
+
y O
2
) se crea el doble enlace cis en la posicin 9,10.

Los cidos grasos poliinsaturados (linoleico, linolnico) no pueden ser sintetizados
por mamferos, quienes no disponen de las enzimas necesarias; por esta razn se
consideran como esenciales y deben ser ingeridos en la dieta.

Los procariotes y las plantas s pueden sintetizar los cidos grasos poliinsaturados
por medio de oxigenasas propias de cada tipo de organismo.

41.1.3 Biosntesis de triglicridos y fosfoglicridos

Estos tipos de compuestos comparten en su biosntesis, varios intermediarios y
algunas reacciones. Los intermediarios comunes son acil-CoA y glicerol-3-fosfato;
este ltimo puede provenir o de gliclisis (ver figura 43) o de la fosforilacin del
glicerol as:


208

Los acil-CoA se forman por la reaccin:

Un esquema general de la biosntesis de triglicridos y fosfoglicridos se ilustra en
la figura 65, donde los triglicridos y los fosfoglicridos se biosintetizan gracias a
una secuencia de reacciones que incluyen la formacin de un cido fosfatdico a
partir de 2 molculas de acil-CoA y glicerol-3- (10), una eliminacin del por
una hidrolasa (2) lo cual produce diacil-glicerol; hasta este punto la ruta
biosinttica es comn para los dos tipos de lpidos.

Si la clula necesita triglicridos, se lleva a cabo la reaccin (3); si se requieren los
fosfoglicridos el diacil-glicerol recibe un grupo fosfoetanolamina proveniente de
citidin-difosfatoetanolamina (CDPOCH
2
CH
2
NH
2
) por accin de una
transferasa (reaccin 4), apareciendo un primer tipo de fosfoglicrido.

Cuando se requiere sintetizar lecitinas, la fostatidiletanolamina sufre una
metilacin en la que un derivado de la metionina (S-adenosilmetionina) acta
como donante de los grupos CH
3
(reaccin 5).

Tambin, las lecitinas se pueden sintetizar por una va directa (reaccin 6) en la
que el diacil-glicerol recibe fosfocolina de un donante que es la CDP- colina.
Los otros fosfolpidos que estn en las membranas son sintetizadas en forma
similar empleando diacil glicerol y derivados del CDP
1
.

En los animales el catabolismo y anabolismo de los triglicridos ocurre
simultneamente y ellos se encuentran en un estado estacionario en cantidades
ms o menos constantes. Si los carbohidratos, protenas o grasas son ingeridos
en exceso respecto a los requerimientos energticos y biosintticos, las caloras
en exceso se almacenan como triglicridos. Su biosntesis est controlada por
hormonas como la insulina que la promueve, el glucagon y hormonas
adrenocorticales (cortisol) que la disminuyen.

P P

209

Figura 65: Esquema de la biosntesis de triglicridos y fosfoglicridos

41.1.4 Biosntesis de colesterol

Dada la importancia de este esteroide como precursor de otros esteroides
biolgicamente importantes como son los cidos biliares y las hormonas
esteroidales, su biosntesis ha sido objeto de un gran nmero de trabajos y su

210

esclarecimiento por Bloch
21
, Lynen y Conforth les vali el Nbel en 1961.
Empleando
14
C se ha establecido que la va biosinttica se inicia con la
condensacin de 3 molculas de acetil-CoA, producindose mevalonato que a su
vez es fosforilado y por prdida de CO
2
e H genera isopentenilpirofosfato que es
una forma activa de una unidad isopreno. Luego 6 unidades isopreno se
ensamblan para producir el escualeno que por ciclizacin produce el lanosterol,
que es un esteroide y a partir de l se obtiene el colesterol.

Las transformaciones anteriores son grupos de reacciones y la va en detalle es
una de las ms complejas que existen, por eso solo se indican los intermediarios
ya citados, en la figura 66.

21
The biological sntesis of colesterol K. Bloch.-Science.-Vol 150, 1965.-p.19

211

Figura 66: Principales intermediarios en la biosntesis del colesterol


212


1. En las reacciones de -oxidacin de cidos graso se realizan 4 etapas
equivalentes a un ciclo, en cada ciclo la cadena carbonada del cido grado va
perdiendo dos tomos de carbono en forma de AcetilCoA. Cuantas molculas de
ATP, se producen en la degradacin del cido laurico?

ATP, se producen en la degradacin del cido laurico provenientes de la
reoxidacin del NAD+ NADH+ + H
+
.

ATP, se producen en la degradacin del cido laurico provenientes de la
reoxidacin del FAD+ FADH
2
.

4. Calcule la produccin neta de ATP a partir de la degradacin del cido
araquidnico

5. En las reacciones biosintticas del cido caprilico, cuantas veces debe
repetirse la incorporacin de malonilCoA, para la elongacin de la cadena?.


213

22

El captulo analiza el catabolismo de los aminocidos consumidos en la dieta y los
sintetizados en el organismo. El estudiante puede comprender que para cada
aminocido hay una ruta diferente, pero que hay rutas en las cuales participan
ms de un aminocido.

Se analiza que la degradacin de los aminocidos en relacin a su estructura
general tiene cuatro mecanismos, los cuales sirven de base para la formacin
eliminacin de otros aminocidos.

El capitulo presenta la degradacin de los aminocidos y cuando estos son
integrantes o vas de alimentacin de otras rutas como el ciclo de Krebs.

La biosntesis de aminocidos son conceptos que tambin se consideran en este
captulo.


Leccin 42: Catabolismo

Los aminocidos realizan una serie de funciones muy vanadas en el organismo ya
que son usados como bloques constituyentes de protenas, como precursores de
coenzimas, hormonas, ncleos porfirnicos, neurotransmisores, antibiticos, etc.
En condiciones especiales, cuando hay carencia de reservas energticas, pueden
incluso ser utilizados como fuente de energa.

La rata de conversin metablica de los aminocidos es considerable y se calcula
que un hombre de 70 kg, metaboliza alrededor de 400 g, diarios de protenas, de
los cuales cerca de un 25% entran en degradaciones oxidativas que confluyen en
el ciclo de Krebs y en consecuencia, son catabolizados hasta CO
2
y NH
3
.

Los aminocidos pueden ser catabolizados en diferentes circunstancias
metablicas:
Durante el proceso de renovacin normal de los tejidos, las protenas son
degradadas hasta aminocidos y si estos no se utilizan para sintetizar otras
protenas, son degradados oxidativamente.

22


214

Si la dieta provee ms de los aminocidos necesarios para satisfacer los
requerimientos de la sntesis de protenas corporales, el exceso se cataboliza
pues el organismo no puede acumularlos.

En ciertas condiciones metablicas, en las cuales no se permite la utilizacin
adecuada de los carbohidratos (por ejemplo, diabetes mellitus) o en las cuales
no hay suficientes reservas de polisacridos (ayuno), las protenas son
utilizadas como fuentes de energa y los aminocidos son oxidados
degradativamente.

Generalmente, el catabolismo de los aminocidos est precedido por la hidrlisis
de las protenas que en forma exgena a los tejidos se realiza en el tracto
digestivo por la accin combinada de proteasas como la pepsina (jugo gstrico),
tripsina, quimotripsina, exopeptidasas (jugo pancretico y glndulas del intestino
delgado); los aminocidos libres resultantes son absorbidos en el intestino delgado
y transportados por la sangre hasta los diferentes tejidos.
La degradacin de las protenas al interior de la clula (protelisis endgena) no
se conoce en detalle pero muy seguramente involucra las variadas proteasas
presentes en los lisosomas.

En contraste con lo ya discutido para la degradacin de carbohidratos y lpidos, no
es posible incluir todos los aminocidos en esquemas generales de degradacin y
por el contrario existen cerca de 20 sistemas multienzimticos, uno para cada
aminocido, que entran en juego en el catabolismo de la cadena carbonada.

Leccin 43: Catabolismo de los grupos -NH
2
y -COO
-

Existen cuatro caminos por los cuales se modifican degradativamente los
aminocidos a nivel de los grupos -NH
2
o -COO
-
.

43.1 Decarboxilacin

Un cierto nmero de decarboxilasas (clase liasas), catabolizan la siguiente
reaccin:

Estas enzimas, que utilizan el fosfato de piridoxal como coenzima, producen a
partir de ciertos aminocidos aminas con una actividad biolgica muy fuerte

215

(histamina a partir de His, DOPA-amina a partir de dihidrofenilalanina) y cuya
existencia es muy breve en la clula ya que son destruidas por aminooxidasas.

43.2 Deaminacin no oxidativa

Algunas enzimas presentes en ciertos microorganismos y en vegetales superiores,
catalizan la reaccin:

La enzima de este tipo mejor conocida es la aspartasa (clase liasa) que transforma
el cido asprtico en fumarato.

43.3 Transaminacin

La reaccin general catalizada por las transaminasas (transferasas) tiene como
objeto remover el grupo -NH
2
de un aminocido dado y transferirlo finalmente
sobre un aceptor comn (el -cetoglutarato) y el producto posteriormente es
catabolizado. Podemos representar la reaccin as:

La mayora de las transaminasas son ms especficas para el -cetoglutarato que
para el aminocido donador del -NH
2
y la reaccin es fcilmente reversible pues

216

el G es cercano a cero. Con varios aminocidos la reaccin produce -
cetocidos que son metabolitos del ciclo de Krebs o fcilmente llegan a serlo, tal
como se observa en las siguientes transaminaciones:

Uno de los aspectos ms importantes de este tipo de reaccin es la canalizacin
de los grupos -NH
2
de todos los aminocidos hacia el -cetoglutarato que acta
como un transportador comn en la forma de Glu.

43.4 Deaminacin oxidativa

En este camino el grupo -NH
2
del Glu es liberado como NH
3
por la
deshidrogenasa glutmica (oxido-reductasa) segn la reaccin:

217

La enzima presente solo en la mitocondria usa el NAD como coenzima
produciendo NH
4
libre que es txico y por lo tanto debe ser eliminado (lo cual se
ver ms adelante), y regenerando el -cetoglutarato gastado en las reacciones
de transaminacin.
Esta reaccin junto con la transaminacin, ocupa un lugar clave en el catabolismo
de los aminocidos y la actividad de la enzima est modulada positivamente por
ADP e inhibida por GTP; en consecuencia, el funcionamiento del ciclo de Krebs
regula su actividad.

Leccin 44: Catabolismo del esqueleto carbonado

El esqueleto carbonado resultante de la prdida del -NH
2
o del -COO
-
, es
degradado en cada caso (o sea para cada aminocido) por un sistema enzimtico
diferente que al fin de cuentas produce uno o dos intermediarios del ciclo de
Krebs. La figura 67 ilustra en forma general los puntos de entrada y los
metabolitos finales producidos en el catabolismo de estos esqueletos carbonados:


218

Figura 67: Convergencia de los esqueletos carbonados de los AA al ciclo de Krebs.

En el caso de aminocidos con dos sitios de entrada (por ejemplo Phe, Tyr) ello se
debe a que durante el catabolismo se producen dos fragmentos que finalizan
como dos metabolitos diferentes del ciclo de Krebs.

Es interesante sealar como slo son cinco los metabolitos que finalmente
aparecen y son frecuentemente aquellos que en otros procesos catablicos sirven
como puntos de conexin con otras vas. Por otra parte esta convergencia
refuerza el papel central del ciclo de Krebs en el metabolismo general de la clula.

Tomando como criterio los sitios de entrada a Krebs, los aminocidos que
producen Acetoacetil-CoA se llaman cetognicos (por producir cuerpos cetnicos
en el hgado) y el resto (unos 15 aminocidos) son llamados glucognicos ya que
por degradarse a piruvato, -cetoglutarato, succinato u oxalacetato pueden dar
lugar a glucosa y a glicgeno por la va de la gluconeognesis.

Leccin 45: Eliminacin del NH
4

El NH
4
+
liberado en la deaminacin oxidativa de Glu debe ser eliminado pues su
toxicidad es muy elevada; ello parece deberse a que la pequea fraccin (1%)
existente como NH
3
penetra fcilmente a la clula y en la mitocondria desplaza
hacia la izquierda la reaccin catalizada por la hidrogenasa glutmica.


219

Cuando esto ocurre, se sintetiza Glu a expensas de -cetoglutarato y, por ser este
un intermediario del ciclo de Krebs, se disminuye la actividad de esta va y por
ende la oxidacin de la glucosa, que en el caso del cerebro, es prcticamente la
nica fuente de energa.

Para evitar estos problemas, el organismo posee mecanismos para transportar el
NH
4
en una forma no txica y luego deshacerse de l en la orina.
El transporte de NH
4
+
se efecta usando diferentes mecanismos segn sea el
tejido donde se produce la deaminacin oxidativa.

En muchos tejidos perifricos incluyendo el cerebro, el NH
4
+
producido se combina
con Glu para formar Gln que es transportada por la sangre hasta el hgado o los
riones; la reaccin es catalizada por la glutamin-sintetasa (clase ligasa) y
podemos representarla as:

En el tejido muscular, donde la actividad metablica es considerable, tienen lugar
dos reacciones consecutivas. En la primera, que ilustramos como:

220

Una NADP-deshidrogenasa reduce el NH
4
+
hasta el -NH
2
de Glu y en la segunda
reaccin se realiza una transaminacin usando como -cetocido el piruvato:

Es interesante anotar que en esta secuencia:

Se incorpora el NH
4
+
como el grupo -NH
2
de la Ala.

Se utiliza como aceptor de -NH
2
al Piruvato que es un metabolito abundante
en el msculo.

Se regenera el -cetoglutarato, lo cual es importante pues existe una cantidad
limitada del mismo.

La Ala as formada transporta al nitrgeno (proveniente del NH
4
+
) por el torrente
sanguneo hasta el hgado.


221

La excrecin del nitrgeno proveniente de los grupos -NH
2
de los aminocidos se
realiza de tres maneras diferentes, segn la especie animal de que se trate:

En el caso de los peces, la glutamina circulante en la sangre llega a las
branquias y all se efecta la reaccin:

El NH
4
se solubiliza rpidamente en el agua que llega a las branquias y as
es eliminado; los animales que usan este sistema de excrecin se llaman
amonotlicos (excretores de amonaco).
Las aves, los Insectos y los reptiles convierten el nitrgeno de los
aminocidos y de las bases purnicas en cido rico por un proceso
multienzimtico relativamente complejo. Por tal razn se conocen como
uricotlicos.
Los vertebrados terrestres, excretan el nitrgeno de los aminocidos
sintetizando urea en el hgado por un proceso descubierto por Krebs y
Henselit que recibe el nombre de Ciclo de la Urea. Las reacciones que se
suceden, se ilustran en la figura 68.

El glutmico y/o la glutamina que vienen por la sangre, liberan NH
4
(reacciones 1 y
2) al interior de la mitocondria heptica por medio de la glutaminasa o de la
deshidrogenasa; este NH
4
(que proviene, como ya vimos de los grupos -NH
2
de
los aminocidos) reacciona con ATP y HCO
3
gracias a una sintetasa (reaccin 3)
para formar un compuesto de alta energa que es el Carbamil-fosfato.

Este se une con la ornitina (aminocido no proteico) que proviene del citoplasma
(4) para formar citrulina, que es otro aminocido no proteico, el cual sale del
citoplasma. All la citrulina se combina con una molcula de asprtico, generado
por las reacciones de transaminaciones que se vieron antes, para formar

222

argininosuccinato, estando catalizada la reaccin por una sintetasa que emplea
ATP como coenzima (reaccin 5).

Figura 68 Ciclo de la Urea


223

Este compuesto se rompe (en el enlace marcado con la lnea punteada) por
accin de una liasa (6) y produce Fumarato que va al ciclo de Krebs y Arginina;
sta se degrada a su vez (7) produciendo urea y ornitina.

La ornitina regenerada penetra a la mitocondria y el ciclo est listo para
recomenzar; la urea es transportada por la sangre hasta el rin para ser
excretada en la orina.

En este ciclo se ve como hay una cooperacin de enzimas mitocondriales y cito
plasmticas para eliminar dos productos de desecho como son el NH
4
y el HCO
3
.
El costo energtico es alto pues el balance de ATP muestra que por molcula de
urea producida se consumen dos ATP en la reaccin 3 y que en la reaccin 5 se
produce una de AMP ms pirofosfato a partir de un ATP, lo cual significa que en
ltimo trmino el consumo total es de cuatro ATP por molcula de urea
sintetizada.

Se ha calculado que alrededor de un 15% de la energa obtenida por el
catabolismo del esqueleto carbonado de los aminocidos, se invierte en la
produccin de la urea como forma de excrecin del grupo -NH
2
.

Leccin 46: Biosntesis

De manera anloga a lo que ocurre en la degradacin de los aminocidos, su
biosntesis se lleva a cabo por medio de variadas rutas metablicas cada una de
las cuales es propia de un determinado aminocido; en algunos casos (lisina,
isoleucina) hay hasta unas dos o tres rutas diferentes para cada uno.
Los organismos vivientes difieren ampliamente respecto a su capacidad y respecto
a la fuente de nitrgeno que emplean.

El hombre posee los sistemas enzimticos que le permiten la biosntesis a partir
de NH
3
de slo diez aminocidos, que corresponden a los aminocidos no
esenciales, los aminocidos restantes (esenciales) deben ser ingeridos en la dieta;
los nitritos o nitratos no pueden ser utilizados como fuente de nitrgeno protenico.

Los rumiantes aunque no sintetizan por s mismos sino los aminocidos no
esenciales, pueden emplear el NO
2
-
o el NO
3
-
como fuente, gracias a la accin de
los microorganismos presentes en el rumen que reducen estos compuestos a NH
3
.

Las plantas superiores sintetizan todos los aminocidos y emplean NH
3
, NO
2
-
o
NO
3
-
como fuente de nitrgeno protenico; algunas de ellas (las leguminosas)
pueden inclusive fijar el nitrgeno atmosfrico a travs de un proceso simbitico
con bacterias del gnero Rhlzobium.


224

Los microorganismos por su parte difieren muchsimo en su capacidad biosinttica
de aminocidos y es as como la Escherlchia coli puede elaborar todos sus
aminocidos, mientras que ciertos Lactobacillus slo fabrican de cuatro a cinco
aminocidos.

La tabla 21 indica cuales aminocidos son esenciales o no para el hombre:

Tabla 21: Clasificacin de los AA esenciales o no, en humanos

Aminocidos No Esenciales Aminocidos Esenciales
Glutmico
Glutamina
Alanina
Asprtico
Asparagina
Prolina
Glicina
Serina
TiroSina*
Cisteina*
Leucina
Isoleucina
Lisina
Metionina
Fenilalanina
Treonina
Triptfano
Valina
Arginina
Histidina

*Requieren de Phe y Met respectivamente para su biosntesis, por lo cual se consideran como semiesenciales

Dada la particularidad de rutas existentes para la biosntesis de cada aminocido,
es muy difcil generalizar. En principio las rutas son ms sencillas para los
aminocidos no esenciales que para los esenciales; adems, la biosntesis de
estos ltimos est regulada casi siempre por mecanismos de retroinhibicin
bastante eficientes.

Para ilustrar lo anterior consideramos la sntesis de algunos aminocidos no
esenciales y la de dos esenciales.

El Glu, Asp y Ala se sintetizan a partir de los -cetocidos correspondientes, que
se encuentran en a clula como intermediarios del ciclo de Krebs por reacciones
de transaminacin o de aminacin inversas a las que ocurren en su catabolismo.

En el caso de la Ala, la reaccin es la siguiente:


225

Figura 69: Biosntesis de Thr y Met


226

El cido glutmico se sintetiza por una reaccin que transfiere el NH
4
sobre el -
cetoglutarato y es catalizada por una deshidrogenasa que emplea como coenzima
el NADPH.

La Asn y Gln se forman por accin de sintetasa que incorporan NH
4
+
a los
aminocidos respectivos (Asp, Glu) consumiendo energa; en el caso de Asn, la
reaccin es:

En contraste con las biosntesis anteriores, que slo involucran una a dos
reacciones, la formacin de Met o de Thr ocurre a travs de una va compleja
(figura 69) que ilustra muy bien algunas de las caractersticas de la biosntesis de
los aminocidos esenciales.

Se puede apreciar que en la biosntesis de Thr y Met se realiza a partir de Asp por
medio de varias reacciones comunes, lo cual no es frecuente en la biosntesis de
aminocidos, (1 a 3) que producen homoserina, punto en el cual cada va
transcurre por caminos diferentes.

La biosntesis de Thr es algo ms sencilla (reacciones 4 a 7) y el producto final
(Thr) acta como un inhibidor reversible de la primera reaccin de la va, cuando
se sintetiza ms Thr de la necesaria; este tipo de inhibicin se conoce como

227

retroinhibicin y es un excelente ejemplo que ilustra el principio metablico de una
mxima economa ya que al bloquearse la primera reaccin no se sintetizan
metabolitos intermediarios innecesarios.

La biosntesis de Metionina requiere la presencia de cisteina (reaccin 9) para
formar el cistation que se rompe (en los sitios indicados por las lneas curvas) por
accin de una liasa (10) y nos da homocistena, piruvato y NH
4
+
.
La homocistena sufre una metilacin, catalizada por una transferasa (11) que
emplea como coenzima el metiltetrahidrofolato, formndose la metionina; este
aminocido regula su propia biosntesis por un mecanismo de retroinhibicin que
bloquea la reaccin de la homoserina con Succinil-CoA (reaccin 8).

La biosntesis de aminocidos con anillos en su cadena lateral (His, Phe, Trp) es
an ms compleja y produce, en el caso del Trp, metabolitos que sirven como
intermediarios en la sntesis de productos secundarios (ligninas) en plantas.


1. Realice la reaccin qumica con el uso de las estructura qumicas, de
deaminacin oxidativa para producir fumarato a partir del cido asprtico.

2. Realice la reaccin qumica con el uso de las estructura qumicas,
Transaminacin partiendo de la serina para producir el alfa-cetocido
correspondiente y cido glutmico.

3. Ilustre sobre el ciclo de krebs cules son los puntos de entrada del
catabolismo de los esquelos carbonados de loa aminocidos.

4. Ilustre las reacciones por las cuales se puede sintetizar alanina.


228

Para proveer la energa que capacite al ser vivo para llevar a cabo sus procesos normales, se
requiere un combustible adecuado. La muerte por inanicin se produce cuando las reservas
energticas disponibles se agotan y ciertas formas de desnutricin se relacionan con un
desequilibrio de energa (marasmo). El almacenamiento excesivo del suministro de energa produce
obesidad, una de las enfermedades ms frecuentes de la sociedad occidental.

Para mantener un equilibrio de gasto y consumo de esta energa, es necesario promover, adems del
gasto basal, un el gasto energtico adicional. El consumo de energa se realiza mediante reacciones
oxidativas, por lo tanto es importante tener claro el concepto de oxidacin qumica, la cual se define
como la prdida de electrones y la reduccin como la ganancia de ellos. La oxidacin est siempre
acompaada por la reduccin de un aceptor de electrones. Este principio de oxidacin-reduccin se
aplica del mismo modo a todos los sistemas bioqumicos y es un concepto importante en la
comprensin de la naturaleza de la oxidacin biolgica. Es importante entender que numerosas
oxidaciones biolgicas pueden tener lugar sin la participacin del oxgeno molecular, caso en el cual,
el aceptor final de electrones provenientes de las reacciones de xido-reduccin es un compuesto
diferente al oxgeno.

En aquellas reacciones de xido-reduccin, en donde el oxgeno es el aceptor final de los electrones,
se conocen como sistema aerobios y se conoce como respiracin y se relaciona mutuamente con la
oxidacin de los alimentos para la produccin de energa. La respiracin es el proceso por el cual las
clulas obtienen energa, en forma de ATP y de la reaccin controlada del hidrgeno con el oxgeno
para formar agua.

En las reacciones de xido-reduccin de los sistemas biolgicos aerobios, los electrones deben ser
removidos de las macromolculas que componen los alimentos; estos electores deben llegar al
oxigeno molecular y lo hace mediante una mecanismo que se conoce como la cadena
transportadora de electrones o cadena respiratoria. Esta cadena est ubicada entre la membrana
externa e interna de la mitocondria. En este organelo, se integra los electrones y protones ms el
oxgeno molecular para forma ATP y agua, proceso que se conoce como fosforilacin oxidativa.
Cierto nmero de medicamentos, como el amobarbital y venenos como el cianuro y monxido de
carbono, inhiben la fosforilacin oxidativa, por lo general con consecuencias letales.

Los electrones que son transportados en la cadena respiratoria, proviene de los carbohidratos,
lpidos y protenas consumidos en al dieta.

El azcar glucosa es el carbohidrato ms importante. la mayor cantidad de carbohidratos
consumidos pasa al torrente sanguneo en forma de glucosa, esto conduce a analizar, que antes de
llegar a la circulacin sangunea, todos los carbohidratos se han convertido en glucosa, pero tambin
a partir de ella se sintetizan otros azcares de importancia biolgica como la ribosa, galactosa.
Existen situaciones metablicas que alteran la degradacin o sntesis de glucosa como es la diabetes
sacarina, galactosemia, enfermedades por almacenamiento del glucgeno e intolerancia a la lactosa.

La ruta principal de oxidacin de la glucosa es la glucolisis, en donde se produce piruvato, esta ruta se
puede hacer en presencia o ausencia de oxgeno ( la remocin de electrones es independiente
LECTURA COMPLEMENTARIA
Las actividades que aqu se presentan, son a nivel formativo y no cuantitativo (es decir, no generan calificacin).


229

suministro de oxgeno) y la cantidad de ATP formado a partir de la fosforilacin oxidativa es
mnima. La capacidad de la glucolisis para proporcionar ATP en forma anaerobia es importante
porque permite al msculo esqueltico trabajar con ms eficiencia (contraccin muscular).

Los lpidos son un grupo heterogneo de compuestos emparentados, real o potencialmente, por sus
propiedades fsicas, ms que por las qumicas. Tiene la propiedad comn de ser relativamente
insolubles ( pro sus grandes cadenas carbonada con enlaces C-C y C-H) y solubles en solventes
polares. Los lpidos son constituyentes importantes de la alimentacin no slo por su elevado
valor energtico, sin o tambin por las vitaminas liposolubles y los cidos grasos esenciales
contenidos en la grasa de los alimentos naturales.

La largas cadenas carbonadas suministran mayor energa (ATP) que la glucosa. En el cuerpo
humano, las gras sirven como una fuente potencial de energa cuando se almacena en forma de t
ejido adiposo. Los lpidos tambin se combinan con protenas para formas las lipoprotenas, las
cuales son importantes, porque ayudan a transportar sustancia apolares en el torrente sanguneo y
en la linfa. El conocimiento de la bioqumica de los lpidos es importante para entender problemas
de salud pblica como la obesidad, colesterol alto y la aterosclerosis y proponer o recomendar
medidas en las cuales se incluyan la funcin biolgica de ciertos lpidos que contiene cidos grasos
poliinsaturados ( omegas) para la disminucin de estas enfermedades.

Hay un compuesto comn que se forma de la degradacin de la glucosa , protenas y de los lpidos
con cadenas de cidos grasos y es el acetilCoA. En organismos aerobios, esta sustancia es conducida
por complejos enzimticos hasta el interior de la mitocondria en donde se enlaza con sustancias
como el cido ctrico para comenzar las reacciones del ciclo de krebs. Las caractersticas ms
importantes de las reacciones de este ciclo son; se llevan a cabo reacciones de xido-reduccin ,
hay prdida y ganancia de electrones y protones, estos electrones y protones son aceptados por
coenzimas como el FAD+ y en NAD+ que ayudan a estos protones y electrones a llegar hasta la
cadena transportadora de electrones y mediante las reacciones de la fosforilacin oxidativa se
combinarse con el oxgeno para formar grandes cantidades de ATP.

Actividades formativas: Actividades formativas: Actividades formativas: Actividades formativas:

Una vez realizada la lectura, subraye aquellas palabras que tiene relacin con los temas de los
captulos 7 y 8 de la unidad y mediante un cuadro resumen, y sin referencias bibliogrficas, redacte
las principales caractersticas bioqumicas. S presentan dificultad, debe volver a revisar los
conceptos tericos de la unidad.

Describa el aporte o usos que desde su profesin, como qumico, ingeniero o tecnlogo y regente
de farmacia requiere del conocimiento de los temas mencionados en al lectura.


230

AUTOEVALUACIN UNIDAD 3

1. Cul es la diferencia entre organismos autotrficos y heterotrficos?

2. Cul es el significado en trminos descriptivos (no matemticos) de entalpa,
entropa y energa libre?

3. Cmo se puede calcular el cambio en energa libre a partir de la constante de
equilibrio de una reaccin?

4. Cmo se relaciona el cambio en energa libre con la diferencia de potenciales
de reduccin estndar de una reaccin de xido-reduccin?

5. Cul es la transformacin global que ocurre en la fotosntesis?

6. De las siguientes actividades metablicas cules podra sealar usted como
las ms bsicas? Indique aquellas que poseen las caractersticas ms generales
en todos los organismos.

a. Utilizacin de C.
b. Sntesis de triptfano.
c. Transformacin de nutrientes exgenos.
d. Catabolismo y anabolismo de macromolculas.
e. Absorcin de energa luminosa.
f. Transformacin de energa.
g. Sntesis y degradacin de biomolculas.

7. Explique brevemente cules son las actividades fundamentales que tienen lugar
en el curso del metabolismo.

8. Cite los factores que permiten controlar el metabolismo.

9. En qu consiste:
La compartamentalizacin.
La universalidad de las vas metablicas.

10. Explique en trminos generales como se puede prever el sentido de
reacciones cido-base y redox.

11. Explique qu significa el potencial de transferencia de grupos y cmo se usa
para predecir el curso de las reacciones de fosforilacin.

12. Plantee las razones que sealan la importancia del ATP en el metabolismo.

231

13. Explique el significado del concepto potencial de transferencia de grupo.
Cules son sus aplicaciones?

14. Efecte el balance de carbono, ATP y coenzimas, cuando una molcula de
sacarosa es oxidada anaerbicamente. Compare los valores con los obtenidos
cuando la sacarosa es oxidada completamente. Recuerde que la oxidacin
completa incluye gliclisis, ciclo de Krebs y fosforilacin oxidativa.

15. Calcule el nmero de ATP producido por la oxidacin anaerobia de 1.5 m
moles de Glucosa y comprelos con los obtenidos en la oxidacin aerobia de 0,75
m moles de Glucosa. Explique la razn de la diferencia.

16. Analice en forma comparativa la gliclisis con la va de las pentosas fosfato.
Proceda por etapas considerando adems de los aspectos mencionados en el
primer punto, las reacciones que se suceden.

17. Elabore un cuadro de las vas catablicas de los carbohidratos comparndolas
respecto a su localizacin celular, compuestos iniciales y terminales, metabolitos
intermedios que sirven como puntos de conexin con otras vas y su balance
energtico en trminos de ATP...

18. Explique en qu consisten las reacciones anaplerticas Cul es su
importancia? Cite un ejemplo.

19. Describa como sucede la fosforilacin oxidativa en eucariotes. Indique los
principales transportadores de e
-
, los sitios de fosforilacin y la accin de los
agentes desacoplantes.

20. Deduzca a partir de las reacciones que ocurren en la va del glicerol-3-fosfato,
cul es la utilidad de esta va.

21. Plantee las finalidades de la va de las pentosas fosfato.

22. Escriba las reacciones para el paso de piruvato a PEP en la gluconeognesis;
compare su costo energtico con el de la reaccin inversa.

23. Indique la secuencia de reacciones (incluyendo o no las frmulas) por las
cuales se realiza la gluconeognesis.

24. Identifique en los compuestos siguientes, cules son donadores de electrones
en la etapa luminosa de la fotosntesis.


232

25. Especifique en cada caso el tipo de organismo (anaerobio o aerobio) que lo
utiliza:
S.
HCO
-
3

O
2
.
H
2
O.
Isopropanol.
CO
2

Lactato
H
2
S.

26. Seleccione entre los siguientes compuestos, aquellos que actan en la etapa
luminosa de la fotosntesis; explique brevemente el papel de cada uno.
NADP
+
.
FAD.
O
2.

Clorofilas
Ribulosa-1,5-di P.
Citocromos.
Carotenoides.
Fitocromos.
Cmo se clasifican los lpidos? Ilustre con un ejemplo cada uno de los
tipos.

27. Mencione dos ejemplos de:

a. cidos grasos saturados.
b. cidos grasos mono insaturados.

28. cidos grasos poli insaturados. Compare, haciendo una tabla, la -oxidacin
con la biosntesis de los cidos grasos. Qu principio del metabolismo se
demuestra con esta comparacin?

29. Ilustre cmo actan las diferentes fosfolipasas. Considere una lecitina como
sustrato inicial.

30. Explique cmo acta la sintetasa de cidos grasos en la biosntesis de los
mismos.

31. Describa las principales reacciones del catabolismo de los fosfoglicridos.

32. Compare el catabolismo de los triglicridos con el de los fosfoglicridos en
cuanto a:

233

Produccin de energa.
Empleo de metabolitos intermedios en las vas biosintticas respectivas.

33. Explique cmo se realiza el catabolismo del colesterol.

34. Ilustre cmo se realiza la biosntesis de cidos grasos poliinsaturados en las
plantas, tomando el cido linolnico como ejemplo.
35. Compare la degradacin con la biosntesis del cido oleico.
36. Indique la correspondencia entre los compuestos de la columna A y el tipo de
compuesto sealado en la columna B. Los trminos de la columna B se pueden
utilizar dos veces o ninguna vez.
A B
1) Pepsina a) Lipasa
2) -cetoglutarato b) Intermediario en el ciclo de Krebs
3) Deshidrogenasa glutmica c) Intermediarios de fosfatos de pentosa
4) NADP
+
d) Proteasa
5) Quimotripsina e) Aminocido protico
6) NAD
+
f) -cetocido
7) Piruvato g)Coenzima de la deshidrogenasa biosinttca
8) Arginina h) Coenzima de la deshidrogenasa catablica

37. En cules vas metablicas se produce NADPH + H
+
? Cul es el papel de
este compuesto?

38. Esquematice el camino recorrido por el grupo -NH
2
de los aminocidos
durante su metabolismo. No es necesario escribir la secuencia de reacciones que
tienen lugar durante el proceso.

39. Analizando el ciclo de la urea, seale los principios generales del metabolismo
que usted pueda reconocer.

40. Ilustre sobre el ciclo de Krebs cules son los puntos de entrada de los
productos del catabolismo de los esqueletos carbonados de los aminocidos.
Esquematice el ciclo de Krebs empleando los nombres (no las estructuras) de sus
intermediarios.

41. Explique por qu el organismo debe eliminar el NH
4
producido durante el
catabolismo de los aminocidos. Cules diferencias existen entre los distintos
organismos respecto al mecanismo de excrecin?

4.2 Ilustre las reacciones por las cuales se biosintetizan el Asp y el Glu. Recuerde
cmo se sintetiza la Ala y establezca las analogas correspondientes.


234

4.3 Ilustre cmo se sintetiza GIn. Recuerde la biosntesis de Asn y deduzca las
reacciones que tienen lugar.

4.4 Ilustre por medio de reacciones generales, las principales vas degradativas de
los grupos -NH
2
y -COOH de los aminocidos.

4.5 Demuestre con las reacciones apropiadas, cmo se sintetizan Glu, Asn y Ala.


Para ampliar algunos conceptos tratados sobre catabolismo de carbohidratos
consulte:
1. The source of muscular energy/ Rodolfo Margaria.- - Scientific American.- - Vol
226, 1972.- - p84.
2. Cytochrome C and the evolution of energy metabolism/ Richard E. Dikerson.- -
Scientific American.- - vol 242, 1980.- - p137
3. How ceil make A TP/ Peter C. Hinkle, Richard. E. McCaity.- - Sclentlflc
American. vol 238, 1978.- - p104.
Para ampliar algunos conceptos tratados sobre metabolismo de carbohidratos
consulte:
1. The photosyntetic membrane / Kenneth R. Miller.- - Scientific American. - - Vol
241.1979.- p100.
2. How cells make ATP / Peter C. Hinkie, Richard, E. McCarty.- - Scientific
American-Vol 238, 1978.- - p104.
3. The absortion of light in photosyntesis/ Rajni Govindjee Govindjee. - - Scientific
American.- Vol 231, 1974.- - p68.
4. The path of carbon in photosyntesis / James A Bassham. - - Scientific American.
- Vol 206, 1962.- - p88.
Para ampliar algunos conceptos tratados sobre metabolismo de aminocidos
consulte:
1. Aminoacid biosynthesis and its regulation / H.E. Unbarger.- - Annual Revlew
In Biochemlstry.- - Vol 47, 1978.- - p533-606.
2. Regulation of aminoacid metabollsm / HE. Umbarger. - - Annual Revlew In
Biochemlstry. - - Vol 38, 1969.- - p323-370.


235

BIBLIOGRAFIA USADA EN LA ACTUALIZACION DE LA UNIDAD 3

Munera, R. (2008). Bioqumica. Palmira: Universidad Nacional Abierta y a
distancia.

Prez, G. Navarro, Y. (1992). Bioqumica. Santa Fe de Bogot DC: Unisur.

Plummer, D. (1981). Bioqumica Prctica. Londres: Editorial McGraw-Hill.


236

INFORMACIN DE RETORNO EJERCICIOS POR CAPTULOS

Captulo 1:
1. a. El pI es de 7.68, este es el resultado de analizar los grupos ionizables de
todos los aminocidos del pptido.
b. Rta: El pI es de 7.94 es el resultado de analizar los grupos ionizables de todos
los aminocidos del pptido.
2. 2. Rta: La grfica 1 corresponde a un aminocido cido, los cuales aportan cargas
negativas debido a la disociacin del grupo carboxilo. La grfica 2 corresponde a
un aminocido bsico, los cuales aportan cargas positivas debido a la
protonacin del grupo amino.
3. Rta: la capacidad buffer es el ion zwiterrion.
4. Rta: Aminocido cido el glutmico, aminocido no polar la cisteina
Captulo 2:
1. tipo de estructura es secundaria en hoja plegada (beta-lmina), est formada por
dos cadena polipeptdicas y por lo tanto los puentes de hidrogeno deben ser
intermoleculares.
2. La protena X1, sea una albmina
3. Rta: opciones 2 y 4.
Captulo 3:
3. RECTA VALORES A (SIN INHIBIDOR):
Km = 0.71 mM
Vmx= 16.66mM/seg.
RECTA VALORES B (CON INHIBIDOR):
Km = 0.71 mM
Vmx= 2.5mM/seg.
Inhibicin reversible no competitiva.
Captulo 4:
1. La Inosina es derivada de la adenina, y sta pertenece al grupo de bases
nitrogenadas de las purinas.
2. a con 6, b con 5, c con 1, d con 5, e con 3y 4, f con 2, g 3 y 4 .
3. 1 con b, 2 con e, 3 con c, 4 con a, 5 con d.

Captulo 5:
1. De acuerdo a las estructuras qumicas de la guanina y citosina, estas al unirse,
lo hacen por 3 puentes de hidrogeno.

Captulo 6:

237

1. El valor de energa libre + 0.953.
2.

3.
G
= 5.044 Kcal/mol G = +21.11 KJ/mol
4. Rta: la reaccin b.

Captulo 7:

1. Reaccin 1 por F: O. 2 y 5 fosforilacin a nivel de sustrato. Para este punto, se
requiere que el estudiante recuerde las etapas de la glucolisis.
2. debe relacionar la formacin de AcetilCoA mitocondrial.
3. Fruc-1-6-Di-P por accin de una aldolasa (liasa) se fracciona la hexosa en dos
triosas.
4. 72 molculas
5. 6480.00 molculas de ATP.

Captulo 8:
1. 97 molculas de ATP.
5. 3 veces.

Captulo 9:

1. Rta: cido asprtico + H2O fumarato + NH
4

2. Rta: serina + alfa-cetoglutarato alfa-cetocido+ cido glutmico
3. Rta: puntos de entrada: acetilCoA, oxalacetato, fumarato, SuccinilcoA, alfa
cetoglutrico.
4. Rta: piruvato + cido glutmico alanina + alfa-cetoglutarato.


238

BIBLIOGRAFA USADA EN LA ELABORACION DEL MODULO EDICION 1
(Prez, G. Navarro, Y. (1992). Bioqumica. Santa Fe de Bogot DC: Unisur.)

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2. Aminoacid biosynthesis and its regulation / H.E. Umbarger. - - Annual
Review of Biochemistry. Vol.47, 1978.
3. Aminoacid catabolism. En: the biochemistry of plant / Mendel Mazelis. New
York: Academic press, 1980. Vol.5.
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la secuencia en la cadena A de la insulina)/F. Sangeryotros. S.I., Vol.53,
No.353, 1963.
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9. Biochemists handbook / Long Cyril. London: Spon, 1961.
10. Bioenergetics / Albert Lehninger. New York: Benjamin Press, 1965.
11. The biological synthesis of cholesterol? Konrad Bloch. Sclence. Vol. 150,
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12. Bioqumica / Albert Lehninger. Barcelona: Omega, 1978.
13. Bioqumica / C. Robert Bohiski. Bogot: Fondo Educativo Interamericano,
1978.
14. Bioqumica experimental! Gerard Litwack. Barcelona: Omega, 1967.
15. Bioqumica experimental! Rogelio Hernndez M. Mxico: Limusa, 1979.
16. Bioqumica prctica / David Plumer. S.I.: McGraw Hill, 1981.
17. Bromatologa, Zootcnica y alimentacin animal! Luis Revuelta G.
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18. The C4-dicarboxylic acid pathway of photosynthesis en: Progress ln phyto-
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22. Contribucin al estudio de los inhibidores de tripsina presentes en a semilla
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23. Cytochrome C and the evolution of energy metabolism / Richard Dickerson.
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25. The energy cycle of the biosphere / M. George Woodwell. Scientlfic
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27. Enzymes / J. Haldone. Cambridge: Paperback, 1965.
28. Enzymes / Malcom Dixon y otros. Londres: Logmans Green, 1958.
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30. La estructura tridimensional de una enzima en: las bases moleculares de la
vida / D.C. Phillips. San Francisco: Freeman, 1968.
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colombianas / Fernando Acevedo. Bogot: Universidad Nacional, 1973. (Tesis).
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33. Fatty acid synthesis and its regulation / S.J. Wakil y otros. Annual Review of
Blochemistry. Vol. 52, No. 537, 1983.
34. The genetic activity of mitochondria and chloroplast. (caractersticas y
actividad gentica de DNA extracromosmico) / V.W. Goodenough.
Sclentlflc American. Vol. 223, No. 22, 1970.
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238, No. 104, 1978.
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Krebs. Advances of enzymology. VoL3, No. 191, 1943.
43. International Union of Biochemistry: nomenclature commitee: enzyme
nomenclature 1984 / Edwin Webb. Orlando : Academic Press, 1984.
44. Introduccin al estudio de la composicin de los alimentos. Luz A. Kairuz de
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synthease from rat kver microsomes / G. Suzue y otros. Journal of
Biological Chemistry. Vol. 247, No. 6781, 1972.
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1967.
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52. Methods for the determination of the aminoacid sequence in peptides (uso
del fenilisotiocianato en la determinacin de N-tern) / P.Ednan. Vol.4, No. 283,
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S.D. Watson y otros. Nature. Vol.171, No.737, 1953.
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estructura de DNA) / A.M. Maxam y otros.- - New York: National Academic
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56. The nitrogen cycle / C.C. Delwiche. Vol. 223, No. 136, 1970.
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DNA del virus X 174) / S.C. Fidees. Scientific American. Vol. 237, No. 55,
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Bernard Axeirod. 3 ed. New York: Academic Press, 1967. Vol.1.
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