UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

FACULTAD DE INGENIERIA PESQUERA

DEPARTEMENTO ACADMICO DE ACUICULTURA
INFORME DE PRACTICA:
CULTIVO DE UNA MICROALGA (Dunaliella SP)
MEDIANTE LA TCNICA DE LA
MASIFICACION
CURSO :
ACUICULTURA I

PIURA - PERU
INTRODUCCION
Son llamadas microalgas a una gran cantidad de
especies que constituyen el fitoplancton que abarca
desde organismos auttrofos hasta microflagelados y
microciliados autrofos!
Su posicin taonmica ha sido de gran pol"mica
entre bot#nicos y $ologos% como e&emplo podemos
mencionar el grupo de los dinoflagelados% conocidos
por unos como microalgas y por otros como
proto$oarios!
'stas especies aportan un alto contenido nutricional
para peces% crust#ceos y moluscos% adem#s de ofrecer
facilidades de mane&o en sistemas de culti(o tanto en
laboratorio como en produccin a gran escala con fines
comerciales!
)ebido a esto es necesario culti(ar los di(ersos tipos
de microalgas d#ndoles las condiciones y
enriqueci"ndoles con los nutrientes necesarios para
darle mayor calidad a nuestros culti(os hidrobiologicos!
CULTIVO DE UNA MICROALGA MEDIANTE LA TCNICA DE LA
MASIFICACION
DUNALIELLA SP
1- DESCRI!A DETALLADAMENTE LA COMPOSICI"N DEL MEDIO DE
CULTIVO GUILLARD
TA!LA DEL MEDIO DE GUILLARD #F$%& (' STEIN( 1)*))
*utrientes +ayores Solucin ,rimaria
*a*-
.
/!0
*a1
2
,-
3
!1
2
- 4!0
*1
3
Cl 2!50
*a
2
SI-
.
!6*
2
- .
7 89(
7 89(
7 89(
7 89(
:calentar para disol(er;
Usar < ml de "stas soluciones por litro de agua de mar% para preparar el medio
=>92?!
Sugerencia: preparar el *a*-
.
&unto con *a1
2
,-
3 !
1
2
- en <44 ml
+etales Tra$a Solucin ,rimaria
CuS-
3
!01
2
-
@nS-
3
!/ 1
2
-
@nCl
2
CoCl
2
!51
2
-
+nCl
2
!31
2
-
*a
2
+n-
3
!21
2
-
4!6A 7 89(
2!2 7 89(
<!40 7 89(
<!4 7 89(
<A 7 89(
4!5. 7 89(
's con(eniente hacer las soluciones primarias en forma indi(idual% y con una
concentracin menor de <4
5
mas concentrada que en el medio =>9<2?
S+lu,i-n P.i/a.ia De Me0ale1 T.a2a
A C+n #Se,ue10.an0e F3..i,+& (Cl+.u.+ F3..i,+): )isol(er 0g del
secuestrante f"rrico en 644 ml de agua destilada y aBadir < ml de cada una
de las soluciones primarias de metales tra$a preparados anteriormenteC
aforar a un litro y asegurar que el p1 quede cerca de 3!0! use < ml de esta
solucin por cada litro de agua de mar para hacer el medio de culti(o! Agua
de mar filtrada :0% <4% etc!; y de ser posible irradiada con UD
! C+n EDTA 4 Cl+.u.+ F3..i,+ (FeCl56
%
O): disuel(a .!<0 g de >eCl!51
2
-
3!.5 de ')TA :*a
2
; en 644 ml de agua destilada% agregue < ml de cada una
de las soluciones stocE primarias de metales tra$a y afore a < litro% asegure
un p1 de 2!4
Use < ml de esta solucin por litro de agua de mar para preparar el medio
=f92?
S+lu,i-n P.i/a.ia De Vi0a/ina1
Solucin primarias de Fiotina: se prepara a partir de cristales de Fl% disol(er
<4 mg de Fiotina en 65 ml de agua destilada! 1aga esta solucin
ligeramente #cida para ser autocla(ada y mant"ngase en un congelador!
Solucin de Ditamina F
<2
: A partir de Cyanocobalamina U!S! de <44 mg9ml
solucin inyectable! Tomar < ml y aforarlo en <44 ml de agua destilada! La
solucin se acidifica para ser autocla(ada y se congela!
Tomar <ml de la solucin primaria de Fiotina y 4!< ml de la solucin stocE
primaria de F
<2
% aforar a <44 ml con agua destilada y aBadir 24 mg de Tiamina
1Cl!
Se pueden preparar ampolletas de 2%0 <4 ml y almacenarlas est"riles
:acidificas; en el congelador!
Use G ml de esta solucin por cada litro de agua de mar para preparar el
medio =f9<2?
P.e7a.a,i-n 8el !u99e. #T.i1&
Tome 04 g de =tris? y disu"l(ase en 244 ml de agua destilada y a&uste el p1 a /!2
en 1Cl! Use de < a 0ml por litro de medio antes de la autocla(e% a&ustando el p1 a
/!3 :recomendado usar < ml por litro cuando el p1 del medio es /!6 H A!2;
TA!LA DEL MEDIO DE CULTIVO (AGUA DULCE)
(Guilla.8( In: S0ein( 1)*))
Iuillard comunicacin personal a J! Steinn% <6/.! 1andbooE of phycological
methods% Culture +ethods and Iro8th +easurements! Cambridge at the
Uni(ersity ,ress: 33A pp
a! +acronutrientes:
CaCl
2
!1
2
- .5!/5 g9l
+gS-
3
!/1
2
- .5!6/ g9l
*a1C-
.
<2!54 g9l
K
2
1,-
3
A!/< g9l
*a*-
.
A0!4< g9l
*a
2
Si-
.
!61
2
- 2A!32 g9l
)e esta solucin rotulada como a se obtiene < ml y se le adiciona a < litro
de agua esterili$ada!
b! +icronutrientes:
*a
2
')TA 3!.5 g9l
>eCl
.
!51
2
- .!<0 g9l
CuS-
3
!01
2
- 4!4< g9l
@nS-
3
!/1
2
- 4!422 g9l
CoCl
2!
51
2
- 4!4< g9l
+nCl
2
!31
2
- 4!<A g9l
*a
2
+o-
3
!21
2
- 4!445 g9l
c! Ditaminas:
Thiamine! 1Cl 4!< mg9l
Fiotin 4!0 g9l
Cyanocobalamina 4!0 g9l
)e esta solucin rotulada como c% se obtiene < ml y se adiciona a < litro de
agua esterili$ada
d! Tris:
Tris :1ydroymethyl; H Aminomethano 04 g!9244 ml 1
2
- destilada
:Cuando el culti(o se encuentra a"nico el tris puede reempla$arse por
Ilycylaglycine;! )e esta solucin rotulada como d% obtener 2 ml y adicionar
al litro de agua esterili$ada que se esta preparando en culti(o% se debe
hacer a&uste de p1 a /!2 con 1Cl cuidadosamente para no obtener el p1
#cido!
S+lu,i-n !:1i,a 8e Nu0.ien0e1
*a*o /0 mg
,o
3
1
2
*a1
2
- 0 mg
Si-
2
*a
2
61
2
- <0 H .4 mg
S+lu,i-n 8e Me0ale1 T.a2a
*a
2
')TA 3!.5 mg!
Cl
.
>eI1
2
- .!<0 mg
So
3
CuS1
2
- 4!4< mg
So
3
@n/1
2
- 4!422 mg
Cl
2
+n31
2
- 4!4<A mg
+o-
2
*a221
2
- 4!445 mg
Cl
2
Co51
2
- 4!4< mg
S+lu,i-n 8e Vi0a/ina1
Cianolobalamina :F<2; 4!0 mg
Tiamina +c :F<; 4!< mg
Fiotina :(it! +; 4!0 mg
% DESCRI!A PUNTUALMENTE TODO EL SISTEMA DE
ACONDICIONAMIENTO REALI;ADO EN EL CULTIVO DE MICROALGAS
,ara el culti(o de la microalga )unaliella sp y para las dem#s microalgas% se lle(o
a cabo un acondicionamiento muy cuidadoso% dado que cualquier negligencia
cometida en el acondicionamiento podrLa ocasionar el fracaso de nuestros
culti(os!
Ma0e.iale1
Fiotero
>luorescente
Termmetro
Inculo o cepa
Aireador
< pali globo
Cocina el"ctrica
Fotellas de (idrio y pl#stico de
044 ml% <044 ml y .444 ml
Sustancias +adres: *itrgeno
y >sforo
Agua de mar esterili$ada
,ipetas
>iolas
En El !i+0e.+
'ste inicialmente presentaba el inoculo o cepa de donde se etraerLa las muestras
para el culti(o% y que posteriormente albergarLa a todos los culti(os de las
microalgas a culti(ar!
A,+n8i,i+na/ien0+ Qu</i,+
De1in9e,,i-n- se lle(o a cabo en las botellas a utili$ar que fueron de (idrio y
pl#stico! Las botellas de (idrio y de pl#stico fueron desinfectadas con hipoclorito
de sodio o le&La% detergentes% las cuales fueron necesarias colocarles un tapn
hecho de algodn para e(itar el ingreso de microorganismos!
E10e.ili2a,i-n- "sta se lle(o a cabo en el agua de mar a usar% para esterili$arla
solo era necesario de&ar que el agua haga un pequeBo burbu&eo% sin de&arlo que
ebullicione debido a que se precipitarLan los fosfatos y las sales minerales% si esto
sucedLa% era necesario (ol(er a esterili$ar una nue(a muestra de agua!
A,+n8i,i+na/ien0+ F<1i,+
'n el interior del biotero se acondiciono un fluorescente el cual estaba iluminado
las 23 horas del dLa% con el propsito de dar energLa e iluminacin a los culti(os
para reali$ar la fotosLntesis!
Tambi"n se coloco un termmetro para poder lle(ar el control diario de la
temperatura!
>ue necesario obtener un aireador o agitador% el cual al final de la manguera del
aireador se le coloco un pali globo para que pueda tener las condiciones
necesarias de aireacin a los culti(os% de la misma manera e(itar la sedimentacin
de las microalgas!
=- >C"MO SE 6A LOGRADO CONTROLAR LA CONTAMINACI"N DE SU
CULTIVO?
Se logro controlar la contaminacin del culti(o de )unaliella sp% debido a las
siguientes ra$ones:
'l medio de culti(o que se uso fue el medio de culti(o Iuillard!
,ara cada botella de cada masificacin se coloc un tapn de algodn el
cual e(itaba el ingreso de microorganismos% solamente se permitLa el paso
de la manguera del aireador!
Las botellas fueron desinfectadas con 1ipoclorito de Sodio o le&La% con
detergentes% alcohol!
Al momento de reali$ar la masificacin% la persona que manipulaba los
culti(os tenLa que estar en buen estado de salud% asL como e(itar los
estornudos% e(itar el habla% e(itar el acercamiento del inculo con la cara o
boca!
Las pipeta y la fiola debLan estar desinfectadas
'l agua de mar a usar para las masificaciones debLan de estar
completamente est"riles!
)urante las 23 horas del dLa el culti(o permanecLa en el interior del biotero%
el cual solamente se sacaba para lle(ar a cabo la siguiente masificacin!
@- >CUAL 6A SIDO EL EFECTO DE LA TEMPERATURA REGISTRADA
DURANTE EL EBPERIMENTO( SO!RE EL DESARROLLO DE CULTIVO DE LA
MICROALGA?
1
e.
EC7e.i/en0+
Se reali$ un primer eperimento el cual se de&aron los culti(os en la parte
eterna del laboratorio% para lo cual se lle(o a cabo los mismos procedimientos de
culti(o% usando la misma t"cnica!
'stos culti(os fueron depositados en el interior de una tolda para darle mayor
temperatura% tambi"n se les coloco fluorescentes a medio metro de distancia de
los culti(os% pero se noto diferentes cambios de temperaturas muy bruscos que
(ariaban de 23MC a .2MC% y como consecuencia ocasiono la decoloracin de las
microalgas% de un color (erde p#lido a un color transparente en solo pocos dLas
ocasionando el colapso y fracaso de los culti(os por lo que se (io la necesidad de
(ol(er a culti(ar pero esta (e$ se tu(o un mayor control de temperatura debido que
los culti(os fueron colocados en el laboratorio en el interior de un biotero!
%
8+
EC7e.i/en0+ en el LaD+.a0+.i+
)urante el tiempo que duro el 2
do
eperimento% la temperatura ha sido un factor
fLsico muy importante para el desarrollo de la microalga% debido que su efecto ha
sido satisfactorio% ya que se mantu(o dentro del rango ptimo para el desarrollo de
la microalga culti(ada!
La temperatura registrada se mantenLa en el rango de 20 H 2/ MC% el cual permiti
que las microalgas se reproducieran satisfactoriamente% en el transcurso de los
dLas se noto el cambio de la coloracin de (erde p#lida a otra coloracin (erde
oscura! 'l cual indicaba que el culti(o marchaba en buenas condiciones!
'sta temperatura se dio gracias a la iluminacin de los fluorescentes colocados en
el interior del biotero!
E- DESCRI!A DIARIAMENTE EL DESARROLLO DEL CULTIVO (PUNTUALICE
LA VARIACI"N DEL COLOR ) DESPUS DE CADA MASIFICACI"N
MASIFICACI"NES DE Dunaliella SP
1
ERA
MASIFICACION A EFF /l (1F$11$%FF@)
< ml de *itrgeno para 044 ml de agua de mar
< ml de >sforo para 044 ml de agua de mar
<54 ml del inculo de )unaliella sp
.04 ml de agua de mar
D<a1
Te/7e.a0u.a1
):FF a/ G 11:FF a/ @:FF 7/ G 5:FF 7/
<49<<92443 25 MC 2/ MC
<<9<<92443 20 MC 2/ MC
<29<292443 25 MC 25!0 MC
<09<<92443 25 MC 25!0 MC
<59<<92443 20!0 MC 25 MC
</9<<92443 25 MC 2/ MC
Cuando se lle(o a cabo la primera masificacin se noto que el color era (erde
p#lido% y a medida que iban pasando los dLas se obser(aba que la coloracin de
las microalgas de nuestra especie )unaliella sp! iba tomando la coloracin (erde
mas intenso y al mismo tiempo se notaba la e(aporacin del agua!
% MASIFICACION 1EFF /l (1*$11$%FF@)
2 ml de *itrgeno para <444 ml de agua de mar
2 ml de >sforo para <444 ml de agua de mar
Se e(aporo 24 ml de agua por lo que se cont con 364 ml del inculo de
)unaliella sp de la primera masificacin
<444 ml de agua de mar
D<a1
Te/7e.a0u.a1
):FF a/ G 11:FF a/ @:FF 7/ G 5:FF 7/
</9<<92443 25 MC 2/ MC
<A9<<92443 20 MC 2/ MC
<69<292443 25 MC NNN
229<<92443 25 MC NNN
2.9<<92443 20!0 MC 25 MC
239<<92443 2/ MC 2/ MC
= MASIFICACION =FFF /l (%@$11$%FF@)
. ml de *itrgeno para <044 ml de agua de mar
. ml de >sforo para <044 ml de agua de mar
Se e(aporo 00 ml de agua por lo que se cont con <3.0 ml del inculo de
)unaliella sp de la primera masificacin
<044 ml de agua de mar
D<a1
Te/7e.a0u.a1
):FF a/ G 11:FF a/ @:FF 7/ G 5:FF 7/
239<<92443 25 MC 2/ MC
209<<92443 25 MC 2/ MC
259<292443 25 MC NNN
269<<92443 25 MC NNN
.49<<92443 25 MC 25 MC
4<9<292443 25 MC 2/ MC
429<292443 25 MC 25!0 MC
4.9<292443 25 MC 2/ MC
459<292443 25 MC 2/ MC
4/9<292443 25 MC 2/ MC
4A9<292443 25 MC 2/ MC
P+.,en0aHe 8e EIa7+.a,i-n 8e aJua en la1 Ma1i9i,a,i+ne1
1
e.a
Ma1i9i,a,i-n (EFF /l)
)e los 0<4 ml de la <
ra
masificacin se e(aporo <4 ml de agua quedando 364 ml
de agua% entonces tenemos
0<4 ml NNNNNNNNNNNNNNNNNNN<44 7
364 ml NNNNNNNNNNNNNNNNNNN
O 65 7% entonces 1e eIa7+.+ el @K del total de agua
%
8a
Ma1i9i,a,i-n (1EFF /l)
364 ml P <444 ml de agua O <364 ml de agua
)e los <364 ml de la 2
da
masificacin se e(aporo 00 ml de agua quedando <3.0 ml
de agua% entonces tenemos
<364 ml NNNNNNNNNNNNNNNNNNN<44 7
<3.0 ml NNNNNNNNNNNNNNNNNNN
O 65!.< 7% entonces 1e eIa7+.+ el =5)K del total de agua
=
.a
Ma1i9i,a,i-n (=FFF /l)
<3.0 ml P <044 ml de agua O 26.0 ml de agua
)e los 26.0 ml de la 2
da
masificacin se e(aporo <40 ml de agua quedando <3.0
ml de agua% entonces tenemos
26.0 ml NNNNNNNNNNNNNNNNNNN<44 7
2A.4 ml NNNNNNNNNNNNNNNNNNN
O 65!32 7% entonces 1e eIa7+.+ el =ELK del total de agua
CONCLUSIONES GENERALES
'l cambio de color es un factor determinante del progreso del culti(o% a
mayor coloracin (erde% la )unaliella sp se esta desarrollando en me&ores
condiciones ambientales!
La temperatura debe de ser estable% no debe de eistir cambios bruscos de
temperatura% ya que esto podrLa ser mortal para las microalgas
Cuando se da un acondicionamiento adecuado y se e(ita la contaminacin%
el culti(o progresa grandemente!
Se recomienda traba&ar en laboratorio% siendo me&or colocar los medios de
culti(o en el interior de un bioterio% controlando la temperatura
constantemente
Se recomienda que la persona que manipulea las masificaciones no debe
de estar enferma% ni acercar las cepas y culti(os cerca de la cara o boca
debido a los microorganismos que poseemos y que podrLan contaminar el
culti(o
,ara e(itar la contaminacin se debe tener como principio general la
desinfeccin de los materiales a usar como botellas% fiolas% pipetas% etcC asi
como la esterili$acin del agua de mar para el caso de la )unaliella sp
DISCUSIONES
A mayor (olumen de masificacin se obtendr# menores cantidades de
e(aporacin de agua!
*o se debe de hacer her(ir el agua porque si esto sucede el agua quedar#
inacti(a para la masificacin!
Cuando se lle(o a cabo el primer eperimento colocando los medios de
culti(os en la parte eterior del laboratorio% resulto la muerte total de las
microalgas debido a que no se pudo tener un control de la temperatura!
*o se logro determinar la absor(ancia y tramitancia debido que el
laboratorio principal no se encontraba en las condiciones b#sicas para
lle(ar a cabo estas determinaciones% adem#s no se podLa tener acceso a
los equipos necesarios!
Al finali$ar las practicas de masificaciones% se logro obtener (olQmenes
mayores de inculos% los cuales deben de ser apro(echados y no de&arlos
morir!
!I!LIOGRAFMA
http:99888!fao!org9docrep9field944.9AF3/.S9AF3/.S42!htmRtbl<.
http:99888!cibnor!m9colecciones9malgas9eintro!php
888!google!com
888!yahoo!com
http:99888!fao!org9docrep9field944.9AF3/.S9AF3/.S44!htm
+anual de produccin de algasC S'*AI+
Iilbert Fernab" :<6AA; Acuicultura! Dol! <% 5A< p#g
ANEBOS
1 CONSIDERACIONES GENERALES DE LOS CULTIVOS DE MICROALGAS
+uchos factores contribuyen para el desarrollo ptimo de los culti(os de
microalgas% algunos de "stos afectan las caracterLsticas del crecimiento!
Los recipientes de culti(o m#s comQnmente usados son de materiales no ticos
como las ca&as de ,etri% matraces 'rlenmeyer% matraces >erenbacE% carboys o
garrafas% etc!% adecuados para culti(os de laboratorio! ,ara culti(os a gran escala
los recipientes de pl#stico% madera y concreto son los m#s recomendables%
incluyendo los estanques rQsticos en #reas rurales son los sistemas m#s
econmicos!
'n culti(os masi(os la aireacin es un factor muy importante para la
homogeni$acin de los nutrientes y para e(itar la sedimentacin de las
microalgas! Las diatomeas suelen acumularse en lugares donde el agua no se
me$cla% esto tambi"n depende de la forma del recipiente de culti(o que cuando no
es adecuado retarda el crecimiento!
-tro factor importante es la penetracin de la lu$ en el culti(oC en los culti(os
masi(os la profundidad es tan grande que la intensidad de la lu$ insidente no es
suficiente para la fotosLntesis% hasta el fondo del tanque! 'n los culti(os masi(os a
la intemperie la penetracin de la lu$ es m#s efecti(a% pero se debe reducir la
intensidad de la lu$ fuerte% cubriendo estos estanques con una malla! 'n culti(os a
gran escala es recomendable la inyeccin de C-
2
:4!07; para contribuir al
proceso fotosint"tico!
'l crecimiento y la di(isin celular son afectados por la intensidad de la lu$ y el
fotoperLodo :horas de iluminacin y oscuridad; en relacin tambi"n a la
temperatura% por e&emplo en )iatomeas a 24SC y <%444 lu se obtiene un
crecimiento fa(orable!
TaDla NN 1: Ca.a,0e.<10i,a1 De AlJuna1 De La1 E17e,ie1 De AlJa1
Uni,elula.e1 U0ili2a8a1 En A,ua,ul0u.a (C+ll-M+.ale1 '( 1)L=)
I'*'R- CICL-
T'+,'RATURA
-,TI+A
)IA+'TR-
+')I-
,haeodactylum
:diatomea;
<4 h 20SC <4!3T
SEeletonema
:diatomea;
<.!< h <ASC U24T
)unaliella
:cloroficea;
23 h <5SC </!AT
Chlorella
:cloroficea;
/!/ h 20SC 0T
Tetraselmis
:cloroficea;
<A h <ASC <A!3T
+onochrysis
:crisoficea;
<0!. h 24H20SC <4T
Isochrysis
:crisoficea;
.4!2 h 24SC <4!2T
'stas especies se han utili$ado en acuicultura marina dados su (alor nutriti(o y
digestibilidad% adem#s de su capacidad para crecer en culti(os masi(os! La
duracin del ciclo celular como los requerimientos de temperatura son
susceptibles de (ariacin mediante seleccin de (ariedades!
TA!LA NN % ReOue.i/ien0+1 PRINCIPALES DE LOS CULTIVOS DE
MICROALGAS
R'VU'RI+I'*T-S
C-+,U'ST-S
VUI+IC-S
DAL-R'S
>Lsicos
Lu$
2%444 H
3%444 lu
Temperatura <0 H 22SC
Salinidad 4!./
p1 / H 6
Redo
*utriti(os C C-
2
C-
.
g9<44 ml
-% 1 -
2
1
2
- g9<44 ml
* *
2
*1
3
P *-
.
g9<44 ml
, ,-
3
g9<44 ml
S S-
3
g9<44 ml
*a% K% Ca% +g Sales g9<44 ml
>e% @n% +n% F% Fr% Si Sales mg9<44 ml
Cu% Co% Cl% I% Sr% Rb%
Al% et
Sales Tg9<44 ml
Ditaminas
F
<2
% tiamina%
biotina
Tg9<44 ml
'n esta tabla *M < se eponen los requerimientos principales de los culti(os de
microalgas y sus (alores aproimados! 'n cada caso habr# que estudiar los
requerimientos particulares de la especie y de la (ariedad que se (aya a culti(ar
en las condiciones concretas de culti(o que se (an a utili$ar% por lo que estos
datos son slo orientacin :Kinne% <6/6;!
'n la tabla *M 2 se muestran las caracterLsticas de algunas de las especies de
microalgas unicelulares utili$adas en acuacultura para la nutricin de moluscos y
crust#ceos!
Adem#s del control de los par#metros antes mencionados es necesario considerar
que para el establecimiento de un sistema de produccin de alimento (i(o es
importante el dominio de las t"cnicas de aislamiento% purificacin y mantenimiento
de cepas% asL como el conocimiento de la fisiologLa% ciclo de (ida% bioquLmica% etc!
de las especies para determinar su factibilidad de culti(o y sobre todo su
contenido nutricional para poder lle(arse a ni(eles masi(os de produccin para
fines acuaculturales! La Tabla A muestra algunos de los principales requerimientos
de los culti(os de microalgas!
% MEDIOS DE CULTIVO
Se han desarrollado diferentes medios para el culti(o de microalgas que (an
desde las frmulas para enriquecer el agua de mar natural% hasta el uso de
medios artificiales que permitan resultados constantes en contraste con los
resultados tan (ariables que brinda el uso del agua de mar natural que entre otros
factores depende del lugar donde se colecta "sta% y el tiempo de almacenamiento
de la misma!
Los medios artificiales se usan principalmente para fines eperimentales% ya que
como se ha mencionado% brinda resultados constantes% aunque eisten algunas
especies que no crecen en medios artificiales por factores desconocidos que
afectan su crecimiento% las principales frmulas utili$adas (an desde el agua de
+iguel% que data de <6<4% desarrollada por AllenN*elsonC el medio de 'ndN
Schereiber de <6.3% hasta frmulas especLficas para familias como la frmula del
Laboratorio 1asEins de *ue(a WorE para diatomeas% ,ro(asoli et al!% <6/0C
+atthiesen X Thorner% <655C +cIachlan% <6/.C Iuillard >!% <6/.C )roop% <6/0%
<6/6C Schoene% <6A2% etc! Las principales formulaciones de los medios de culti(o%
tanto de mantenimiento de cepas como de produccin masi(a :minerales%
enriquecidos y org#nicos;% se describen desde la Tabla 6 hasta la Tabla <5!
'l fitoplancton se desarrolla y multiplica en relacin de las condiciones
fisicoquLmicas del medio! 'n t"rminos generales son los macronutrientes o
factores limitantes del crecimiento el carbono% *itrgeno% >sforo% Silicio%
+agnesio% ,otasio y Calcio% que se requieren en cantidades relati(amente
grandes% mientras que los llamados micronutrientes :>ierro% +anganeso% Cobre%
@inc% Sodio% +olibdeno% Cloro y Cobalto; se necesitan en menores cantidades!
'isten otros medios que incluyen en su composicin sustancias org#nicas
:(itaminas% amino#cidos; necesarios para aquellas especies de microalgas
Autrofas% es decir que no sinteti$an por medio de la fotosLntesis este tipo de
compuestos y resultan factores que pueden limitar su crecimientoC tal es el caso
de ,latimonas% Chrysophytas y algunas Facillariophyceas!
.! T'C*ICAS )' AISLA+I'*T- W ,URI>ICACI-*
+uchos m"todos se han desarrollado para obtener culti(os monoespecLficos :de
una sola especie; y a"nicos :libres de contaminantes;! A continuacin se brinda
una bre(e descripcin de algunos de los principales m"todos que se utili$an para
aislar y purificar microalgas :-! Umebayashi% <6/0; :>ig! <;!
1) Ai1la/ien0+
,ipeteo capilar: Se utili$a para separar microalgas mayores de <4T% mediante
una pipeta construLda con un tubo capilar% a tra("s del microscopio ptico se
=pesca? las c"lulas y se separan en pequeBas gotas de nutrientes colocados
alrededor de una Ca&a de ,etri o en portaob&etos escabados!
Rayado de ,lacas de Agar: Se transfieren pequeBas gotas de plancton con
una asa de siembra% etendiendo por estrLas :rompiendo un poco el agar;! 'ste
agar se prepara con una solucin nutriti(a para microalgas y con una relacin de
<H<!07 89( de agar disuelto en el medio nutriti(o% se incuba la placa ba&o
iluminacin a <AH24S! )e este primer crecimiento se transfiere a tubos con agar
inclinado sembrando por estrLas o bien% se transfiere a medios lLquidos en
subculti(os sucesi(os para su purificacin% de tal manera que en cada dilucin se
redu$ca el nQmero de organismos en una gota% es recomendable combinar la
t"cnica de diluciones con la de transferencia en placa de agar o tubo inclinado
para obtener culti(os clonales :de una sola colonia o c"lula; y poder establecer el
culti(o monoespecLfico! )espu"s de <4 dLas% pequeBas colonias aparecen sobre
la superficie del agar% que se pueden transferir mediante el +"todo de 1ocEing o
de la micropipeta a medios lLquidos!
%) Pu.i9i,a,i-n
Como ya se mencion al describir las t"cnicas de aislamiento% estas mismas nos
permiten purificar el culti(o a tra("s de las resiembras clonales sucesi(as% pero
adem#s es recomendable entre otros m"todos el uso de antibiticos para eliminar
otros microorganismos% generalmente de tipo bacteriano que est"n contaminando
el culti(o de microalgas de nuestro inter"s! 'n el inciso 0 de este mismo capLtulo
correspondiente a +"todos de 'sterili$acin se amplian las alternati(as!