REBIOL 2012; 32(2):13 -19 (julio-diciembre 2012)

Revista Cientfica de la Facultad de Ciencias Biolgicas

Universidad Nacional de Trujillo. Trujillo. Per


Pag. 13

Capacidad remediadora de la raz de girasol,
Helianthus annuus, cuando es sometida a diferentes
concentraciones de plomo

Remedial capacity of Sunflower, root when submitted to different
concentrations of lead

Julio Chico-Ruiz
1
, Lisi Cerna-Rebaza De Chico
2
, Marlene Rodrguez- Espejo
1
,
Marlene Guerrero-Padilla
3

Laboratorio de Fisiologa y Cultivo de Tejidos Vegetales
1
, Laboratorio de Ecologa
3
. Universidad Nacional de
Trujillo. Universidad Csar Vallejo
2
. jchico22@gmail.com
1


RESUMEN

La fitorremediacin es la captacin de metales contaminantes por las races de las plantas y su acumulacin
en tallos y hojas, Las plantas seleccionadas se pueden utilizar para extraer los metales de suelo, de agua y de
sedimentos. El girasol es reportado por su capacidad de acumular metales y responder con una alta biomasa
radicular. Con los antecedentes expuestos se demostr la capacidad remediadora de las races de Helianthus
annus girasol. Se seleccionaron las plntulas de girasol con caractersticas semejantes, se transplantaron a
macetas de tecnopor de 1.5 kg de capacidad y cada una contena 50% de arena gruesa y 50% de arena fina. En
cada maceta se colocaron 3 plntulas y en total fueron 20 plantas por tratamiento. Las plntulas de 20 das de
crecimiento fueron sometidas a los siguientes tratamientos: 100 M Pb/Lt, 200 M Pb/L, 300 M Pb/L, 400
M Pb/L, 500 M Pb/L .Al trmino del experimento, las plantas fueron separadas en parte area y radicular y
se procesaron para determinar la concentracin de plomo en estos tejidos. Adems se tomaron medidas de
longitud de raz (en centmetros), tallo (en centmetros), peso fresco (en gramos) y peso seco (en gramos) de la
raz y el tallo, respectivamente. Cada alteracin morfolgica fue anotada (clorosis, quemaduras, deformacin de
hojas, etc). Se concluye que la longitud de la raz no se ve afectada por la concentracin de plomo y la mayor
concentracin se da en las races secundarias y son capaces de tolerar concentraciones de 500 mg/l de plomo.

Palabras clave: fitoremediacin, plomo, Helianthus annus, girasol

ABSTRACT

Phytoremediation is contaminating metals uptake by plant roots and their accumulation in stems and leaves,
selected plants can be used to extract metals from soil, water and sediments. The "sunflower" is reported by their
ability to accumulate metals and respond with high root biomass. With the above background remedial
demonstrated the ability of the roots of Helianthus annus "sunflower". Seedlings were selected "sunflower" with
similar characteristics, were transplanted to pots tecnopor of 1.5 kg capacity, each pot containing the substrate
consists of 50% sand and 50% coarse sand. In each pot and seedlings were placed three in totals were 20 plants
per treatment. Seedlings of 20 days of growth were subjected to the following treatments: 100 uM Pb/L, 200 uM
Pb /L, 300 uM Pb/L, 400 uM Pb/L, 500 uM Pb/L. Upon completion of the experiment, plants were separated
into shoot and root and processed to determine the concentration of lead in these tissues. Measures will be taken
root length (cm), stem (cm), fresh weight (in grams) and dry weight (in grams) of the root and stem, respectively.
Each morphological alteration was noted. (chlorosis, burns, leaf deformation, etc). It is concluded that the length
of the root is not affected by the concentration of lead and the highest concentration given in secondary roots and
are able to tolerate concentrations of 500mg/l of lead.

Keywords: phytoremediation, lead, Helianthus anus, sunflower



Pag. 14


INTRODUCCIN

Uno de los problemas ms sealados por la sociedad a nivel mundial y que ocupa un lugar
prominente en los programas sociales y polticos es destacar la progresiva degradacin de los recursos
naturales causada por la diversidad de contaminantes txicos orgnicos e inorgnicos, en la atmsfera,
agua, suelo y subsuelo, procedentes de diversas actividades naturales y antropognicas, generando un
irremediable deterioro en el ambiente. En las ltimas dcadas el acelerado desarrollo industrial y
crecimiento de las poblaciones, han generado serios problemas de contaminacin por metales pesados,
provocando un incremento de su concentracin en el ambiente y su migracin a suelos no
contaminados, que deterioran la calidad del suelo, del aire y del agua
1

El suelo se puede degradar por sustancias nocivas que se almacenan e incluso influyen
negativamente en su comportamiento como es la disminucin del rendimiento de los cultivos con
posibles cambios en la composicin de sus tejidos con riesgo para la salud de los consumidores al
ingresar determinados elementos a la cadena trfica
2

La contaminacin por metales pesados han sido asociado a actividades industriales o mineras,
fundiciones, o suelos naturalmente ricos en metales debido a afloramientos minerales
3
adems de
refineras, aguas residuales, procesos nucleares y manufacturas de gran variedad de productos como
bateras, componentes elctricos, aleaciones de metales, plaguicidas y fertilizantes.
4
Los metales
pesados o elementos traza en general, tienen una densidad atmica que supera los 5 a 6 g cm
-3
,

tambin se considera metal pesado si su nmero atmico es superior a 20.
5
Los metales pesados como
el Cu, Pb, Zn, Ni, Se, As, Cd, Hg, etc. y algunos reactivos qumicos utilizados en las plantas de
procesamiento de minerales, no se degradan biolgicamente ni en la naturaleza, por lo que son
consideradas txicos para la mayor parte de organismos vivos
6,7
.
Despus de haber realizado investigaciones sobre la contaminacin de las aguas continentales en el
Per, se report que relaves mineros, drenajes cidos y aportes de slidos totales afectan a la mayora
de los recursos acuticos y suelos y por consiguiente a los productos agrcolas. Los relaves mineros
contienen los metales preciosos oro y plata y los metales bsicos cobre, plomo y zinc, siendo estos
minerales los que dominan la industria minera peruan.
8

El plomo (Pb) es un metal pesado de color azl grisceo inodoro, inspido, su nmero atmico es
82 y su masa atmica es 207,2 g/mol y no tiene valor fisiolgico conocido.
9
Adems el plomo es uno
de los mayores contaminantes del ambiente y altamente txico para el hombre. Su presencia en el
ambiente se debe principalmente a actividades antropognicas como la industria, minera, fundicin y
uso de gasolinas con plomo.
10
El Pb generado de esas actividades puede permanecer como residuo por
1000 a 3000 aos en suelos de clima templado, es as que los altos contenidos de Pb en el suelo
pueden provocar problemas de toxicidad en plantas, animales y humanos.
11

La preocupacin por la contaminacin ambiental ha motivado que los cientficos encuentren
alternativas que disminuyan o atenen los niveles de concentracin de los elementos ms txicos. La
Agencia de Proteccin del Ambiente (EPA) establece que si un suelo supera el lmite mximo
permitidos fijados en 300 a 500 mg de Pb kg
-1
debe ser remediado.
12
Desde el punto de vista biolgico,
se han planteado posibles soluciones a la contaminacin del ambiente, es el caso de la
fitorremediacin, la biorremediacin bacteriana y la ingeniera gentica.
13

La fitorremediacin es la captacin de metales contaminantes por las races de las plantas y su
acumulacin en tallos y hojas, Las plantas seleccionadas se pueden utilizar para extraer los metales de
suelo, de agua y de sedimentos, incluyendo el retiro de elementos radiactivos, y la mineralizacin
posible de los compuestos orgnicos txicos.
14
Hay diversas tcnicas del fitotoremediacin tales como
fitodegradacion, fitovolatilizacin, rizodegradacin, fitoestabilizacin, rizofiltracin y fitoextraccin
El xito de la fitorremediacin depende de identificar las especies vegetales que toleren el estrs,
que acumulen los metales pesados y produzcan cantidades grandes de biomasa. En general las plantas
que acumulan ms de 1000 mg/kg del Pb, se llaman los hiperacumuladoras; Un ejemplo de tales
plantas es Thlaspi rotundifolium, que puede acumular Pb hasta 8.200 mg/kg. Sin embargo, esta
especie no es satisfactoria para la fitorremediacin de Pb en los suelos contaminados debido a su tasa
de crecimiento lenta y produccin pequea de la biomasa.
15

Se reporta que algunas especies pertenecientes a las Asteraceas, toleran altos niveles de metales
pesados en comparacin con otros grupos taxonmicos y se les ha propuesto como especies
fitoremediadoras.
16,17
Helianthus annuus girasol pertenece a la familia de las Asteraceae , posee una

Pag. 15

facilidad de manejo en su cultivo, se adapta fcilmente a un amplio intervalo en la variacin de
temperatura. La poca de la siembra es variable y depende de las caractersticas climatolgicas de cada
regin. Es una planta anual, con un desarrollo vigoroso en todos sus rganos, dentro de esta especie
existen numerosos tipos o subespecies cultivadas como plantas ornamentales, oleaginosas y
forrajeras.
1

El girasol es reportado por su capacidad de acumular metales y responder con una alta biomasa
radicular no obstante una baja tolerancia al cromo comparado con otras plantas acumuladoras.
18
Se
relaciona al plomo con la actividad de la proteasa en cotiledones de girasol, concluyendo como un
agente txico que inhibe la actividad de stos.
19
El girasol tiene la capacidad de acumular altas
concentraciones de uranio y cadmio en sus tejidos (principalmente tallo y raz) con una razonable
tolerancia,
20
es por esta razn que el girasol se emplea en los procesos de fitorremediacin acumulando
y reciclando dichos metales excesivos de los suelos y promoviendo la limpieza ambiental.
21

Con los antecedentes expuestos y con la intencin de estudiar Helianthus annuu L.como planta
potencial para fitoacumular plomo en sus tejidos y as dar una solucin biolgica a la gran
problemtica ambiental de los suelos contaminados, el objetivo del presente trabajo fue demostrar la
capacidad remediadora de las races de Helianthus annus girasol

MATERIAL Y MTODOS

Material de estudio
Las semillas de H. annus girasol fueron colectadas de la localidad de Barraza, provincia de
Trujillo, Regin La Libertad.
Escarificacin y desinfeccin de semilla
La escarificacin de semillas de testa muy dura, consisti en retirar de forma manual, un pequeo
fragmento de la testa para que una parte del embrin quede expuesta, para as aprovechar al mximo
su capacidad germinativa. De esta manera se induce una germinacin ms rpida de este tipo de
semillas, cuya dura testa puede retrasar la germinacin.
Antes de su germinacin, las semillas deben desinfestarse. Para su desinfestacin, las semillas se
lavaron con detergente en polvo (2% de detergente en 100 ml de agua) y se enjugaron con agua
corriente. Posteriormente, stas se colocaron en una solucin de etanol al 70% (20 - 30 seg.), se
enjuagan con agua desionizada estril y se colocan en una solucin al 10% (p/v) de hipoclorito de
sodio comercial (20 - 30 min). Las semillas tratadas se enjuagan 3 o 4 veces ms con agua
desionizada estril. En la Tabla 1 se muestran las condiciones particulares para cada especie.

Tabla 1. Condiciones de escarificacin y desinfestacin establecidas para germinar las semillas de girasol

Tratamientos Escarificacin Alcohol Cloro
1 SI 30 seg

30 minutos
2 NO
1 SI 20 seg

20 minutos
2 NO

Germinacin de la semilla de girasol
El sustrato empleado para la germinacin fue arena de ro fina la cual fue esterilizada
previamente, el sustrato se deposit en 200 vasitos plsticos (tamao de vaso nmero 7), por cada
vasito se coloc 2 semillas, las cuales se mantenan hmedas con agua destilada y en condiciones
semicontroladas de invernadero hasta llegar a 10 das de crecimiento a esa edad el modo de riego se
reemplazar por soluciones nutritivas diluidas a la cuarta parte (Hoagland) y se aplic por la tcnica
del riego por goteo, hasta los 20 das de edad, en la que present el primer par de hojas verdaderas,
posteriormente se procedi al transplante.
Transplante de girasol
Se seleccionaron las plntulas con caractersticas semejantes en tamao, color, dimetro del tallo y
nmero de hojas, se transplantaron a macetas de tecnopor de 1.5 kg. de capacidad, cada maceta
contena el sustrato de crecimiento, el cual estuvo conformado por 50% de arena gruesa y 50% de
arena fina, ambas desinfectadas y esterilizadas antes del transplante. En cada maceta se colocaron 3

Pag. 16

plntulas, las que represent la unidad muestral. Las plntulas fueron semicontroladas en condiciones
de invernadero. En total fueron 20 plantas por tratamiento.
Tratamientos de las plntulas con soluciones de plomo
Las plntulas de 20 das de crecimiento de H. annuus L. girasol fueron sometidas a los
siguientes tratamientos:

0 M Pb/Lt solucin.. Tratamiento 1 (T1) Control
100 M Pb/Lt solucin.. Tratamiento 2 (T2)
200 M Pb/Lt solucin Tratamiento 3 (T3)
300 M Pb/Lt solucin Tratamiento 4 (T4)
400 M Pb/Lt solucin Tratamiento 5 (T5)
500 M Pb/Lt solucin Tratamiento 6 (T6)

Cada tratamiento consiste de soluciones nutritivas diluidas en agua destilada. Dependiendo de cada
tratamiento, se le aadir concentraciones de plomo en forma de nitrato de plomo Pb(NO
3
)
2
a la
solucin nutritiva. Se tendr cuidado con el pH, el cual debe permanecer entre 5.5 y 6.5, de lo
contrario ser corregido con HCl 1N y KOH 20 N.
Cada tratamiento estuvo en forma se solucin, los cuales fueron vertidos en cada grupo de plantas
por la tcnica de riego por goteo.
Duracin del experimento:
La duracin del presente experimento ser de 5 semanas con el fin de registrar el comportamiento
de las plantas de H. annuus L. sometidos a los diferentes tratamientos.
Las fechas programadas de evaluacin sern las siguientes:

A los 15 das despus del transplante, contando con plantas de 35 das de edad.
A los 35 das despus del transplante.

Anlisis Cuantitativos de acumulacin de plomo
Al trmino del experimento, las plantas fueron cuidadosamente extradas de las macetas,
separndose la parte area y radicular, se lavaron con agua corriente para eliminar los residuos de
suelo, posteriormente se procesaron para determinar la concentracin de plomo en estos tejidos. Se
utiliz para ello el equipo de espectrofotometra de absorcin atmica.
Anlisis de crecimiento
Se tomaron medidas de longitud de raz (en centmetros), tallo (en centmetros), peso fresco (en
gramos) y peso seco (en gramos) de la raz y el tallo, respectivamente.
Cada alteracin morfolgica tambin fue anotada. (clorosis, quemaduras, deformacin de hojas,
etc).
Anlisis estadstico:
Los datos fueron procesados estadsticamente utilizando promedio, desviacin estandar, ANAVA
y Tukey (P < 0.05) para determinar las diferencias significativas entre los tratamientos asignados y
tomando en cuenta las tres repeticiones establecidas, utilizando el programa estadstico Statgraphics
Plus 5.1.

RESULTADOS Y DISCUSIN

Los mecanismos de fitotoxicidad por plomo se relacionan con cambios en la permeabilidad de las
membranas celulares, reacciones de grupos sulfihidrilo (- SH) con cationes y con la afinidad para
reaccionar con grupos fosfato y grupos activos de ADP o ATP
22
. Este autor afirma que la toxicidad
que causa el plomo hacia una especie de planta, vara en funcin de su genotipo as como de las
condiciones experimentales a las que stas son sometidas.
En la tabla 2 observamos que la longitud de la raz de girasol no se ve afectada cuando se aumenta
la concentracin de plomo. As a concentraciones de 500 M la longitud de la raz (5.01) es el doble al
del control (2.73) y el contenido de plomo es de 3.010 mg g
-1
. Tambin se hizo un anlisis si el plomo
se acumulaba por igual en las races de girasol, encontrndose una ligera diferencia entre las races

Pag. 17

finas (dimetros menores a 2mm) que acumularon 5430 g g
-1
en peso seco en relacin a las races
gruesas (dimetro mayor a 2mm) en la que se acumul plomo en la cantidad de 4340 g g
-1
(Tabla 3)

Tabla 2. . Efecto del tratamiento del plomo sobre la longitud de la raz y su acumulacin en la misma en
Helianthus annus a los 35 das

Concentracin
(uM)
longitud de raz
(cm)
Contenido de plomo
mg g
-1

0
100
200
300
400
500
2.730.17
a

2.600.11
ab

2.750.17
bc

3.830.10
cd

4.640.08
d

5.010.08
e

0.0020.001
a
1.0800.06
b

1.2120.08
b

2.2560.13
c

2.8070.12
d

3.0100.13
e


Las letras diferentes indican diferencias entre tratamientos a una p <0.

La fig. 1 y tabla 2 muestran el efecto de la concentracin de plomo en la elongacin de raz y tallo
de H. annus. Aqu se observ un incremento en la longitud del tallo y la raz, por efecto del plomo, an
en las concentraciones ms altas. Se estudi el efecto del plomo en la germinacin de semillas y
crecimiento de plantas de una especie hiperacumuladora, Brassica pekinensis Rupr
.11
Sus resultados
mostraron que an con altas concentraciones de plomo (1000 g/mL), la germinacin no vari
significativamente con respecto al control, pero la elongacin de las races y brotes se vio afectada
reduciendo la longitud a la mitad con respecto al control sin plomo, observando mayores efectos
negativos en las races. Se demostr que esta especie tiene capacidad para hiperacumular plomo en sus
tejidos pero que es sensible a concentraciones de plomo mayores a 1000g/mL




Fig. 1. Efecto de la concentracin de Pb en la elongacin de races y tallos de H. annus despus de 5
semanas de incubacin. Los valores representan la media ( DS) de 5 repeticiones


En contraste con estos los resultados
11
los obtenidos en el presente trabajo muestran que el girasol
tiene capacidad para crecer en concentraciones de plomo soluble de hasta 500 mg/L, sin efectos
significativos en la elongacin de races y tallos aunque el tallo present una ligera disminucin en la
longitud al aumentar la concentracin de plomo, no hubo gran diferencia con respecto al control.

Tabla 3. Contenidos de plomo en las races de girasol. Se evalu la raz principal y las races secundarias.
Los datos estn expresados en g g
-1




Pag. 18


Raz Contenido de Pb
Ug g
-1
peso seco
Finas (D<2mm)
Gruesas (D>2mm)
54302330
43402380




Fig. 2. ndices de tolerancia a diferentes concentraciones de Pb para H. annus. Los valores representan la
media ( DS) de 5 repeticiones

Se define la tolerancia a la presencia de un contaminante como las adaptaciones que tienen ciertas
especies para crecer y reproducirse en lugares fuertemente contaminados
23
. Se sugiere que la principal
razn para que la longitud de la raz sea usada como una medida para determinar la capacidad de una
planta para tolerar metales, es que la raz es ms sensible a elementos txicos en el ambiente, debido a
que es un rgano especializado en la absorcin
11
. Por tal motivo, es el primer rgano en estar sometido
a la presencia de diferentes contaminantes y, por lo tanto, el primero en presentar efectos txicos.
La Fig. 2 muestra los ndices de tolerancia obtenidos con respecto a diferentes concentraciones de
plomo, este ndice puede compararse con el 100% que se obtiene a partir de las plantas control que no
estuvieron expuestas a la presencia de plomo, mostrando que esta especie no solo es tolerante, si no
que la presencia de concentraciones de plomo en el rango de 100 a 250 mg/L estimula la elongacin
de la raz 20%, con respecto al control.


Fig. 3. Acumulacin de Pb en races y tallos de H. annus despus de 5 semanas de incubacin. Los valores
representan la media ( DS) de 5 repeticiones

En la Fig. 3 se muestra la acumulacin de Pb en races y tallos de girasol. Se observ que la
acumulacin de Pb en tejidos aument junto con el incremento en la concentracin de Pb en el medio
de cultivo, observndose cantidades superiores en races que en tallos, estos resultados son similares a
los que plantean que el plomo es principalmente almacenado en el sistema radicular en comparacin

Pag. 19

con las partes areas, ya que primero es absorbido por las races y posteriormente es translocado a las
partes areas
24
.

CONCLUSIONES

La longitud de la raz no se ve afectada por la concentracin de plomo y la mayor concentracin
se da en las races secundarias.
Las races de girasol son capaces de tolerar concentraciones de 500 mg/l de plomo.
En relacin con el tallos, las races son las que acumulan la mayor cantidad de plomo

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

1. Pineda R. Presencia de hongos micorrzicos arbusculares y contribucin de Glomusintraradices en la
absorcin y translocacin de cinc y cobre en Helianthus annuus L. girasol crecido en un suelo
contaminado con residuos de mina. Tesis de doctorado en Biotecnologa. Universidad de Colima-
Tecomn. Colima, Mxico. 2004.
2. Porta A. Evaluacin de la contaminacin ambiental mediante indicadores biolgicos de tipo molecular.
En: XV Cong Nacional de Agua, AGOSBA-COFAP en Mxico. 1994; p.52.
3. Kachenko A. Heavy metal tolerance in common fern species. Australian. J Botany 2007; 2: 63-73.
4. Roane TM, Perpper M. Microbial remediation of metals and Bioremediation Principles and Applications.
J Bioremediation 1996; 21: 312-340.
5. Reigosa M, Pedrol N, Snchez A. La Ecofisiologa Vegetal una Ciencia de Sntesis. Edit. Thomson.
Espaa. 2004.
6. Leland HV, Copenhauver ED, Wilfer DJ. Heavy Metal and other trace elements. J Water & Pollut 1999;
17: 1635-1656.
7. Gastaadui H. Evaluacin de la Contaminacin Ambiental por metales pesados en playas del distrito de
Salaverry. Tesis de doctorado en Ciencias. Escuela de Postgrado de la Universidad Nacional de Trujillo.
Trujillo.Per. 2003.
8. Alva J, Parra D. Evaluacin del Potencial de Licuacin de Suelos en Chimbote, Per. Proc. 9th Panam
Conf Soil Mech Fdn Eng. Via del Mar 1991; p.22-26.
9. Garca F. Monitorizacin de metales de inters medioambiental. Tesis de Doctorado en Medio Ambiente.
San Salvador. 2000.
10. Chaney RL, Ryan JA. Risk Based Standards for Arsenic, Lead and Cadmium in Urban Soils. (ISBN 3-
926959-63-0) Dechema, Frankfurt. J Pollut 1994; 18: 5-6.
11. Rodrguez FH, Rodrguez-Absi J. Mtodos de anlisis de suelos y plantas. Criterios de Interpretacin. Ed.
Trilla. Mxico. 2006.
12. Environmental Protection Agency (EPA). Soil Screening Guidance. Technical Background Document.
U.S. Gov. Print. Office, Washington, D. C. USEPA Rep. 540/R-95/128. 1996.
13. Flores Y, Cortes A. Bioabsorcin de metales pesados por Salvinia natans de los lixiviados de relleno
sanitario Combeima de Ibagu. Rev Tumbaga 2006; 89-100.
14. Tsao T. Overview of phytotechnologies. Adv Biochem J Eng. Biotechnol 2003; 78: 1-46.
15. Hong-Yun P, Sheng-Ke T, Yang X. Changes of root morphology and Pb uptake by two species of
Elsholtzia under Pb toxicity. J Zhejiang University Science 2005; 6:546-552.
16. Xiong ZT. Bioaccumulation and physiological effects of excess lead in a roadside pioneer species
Sonchus oleraceus L. Environm Pollut 1997; 97(3): 275-279.
17. Davies F, Jr. Jeffrey T, Puryear D, Newton RJ, Egilla NJ, Saraiva G. Mycorrhizal fungi enhance
accumulation and tolerance of chromium in sunflower (Helianthus annus L.). Plant Physioly 2001; 158:
777-786.
18. Shahandeh H, Hossner RL. Plant screening for chromium phytoremediation. Intern J Phytoremediation
2000; 2: 269-286.
19. Pena L, Tomaro M, Gallegos S. Effect of different metals on protease activity in sunflower cotyledons.
Electronic J Biotech 2006; 9(3): 3-18.
20. Simona J, Lupino P, Antunez R, Zezzy M. Metal Contamination Effects on Sunflower (Helianthus
annuus L.) Growth and Protein Expression in Leaves during Development. J Agricul & Food Chemistry
2006; 1(54): 8623-8630.
21. Lin J, Jiang W, Liu D. Accumulation of copper by roots, hypocotyls, cotyledons and leaves of sunflower
(Helianthus annuus L.). Bioresour Technol 2003; 86: 151-155.
22. Alloway BJ. Heavy metals in soils. John Wiley and Sons, Inc. New York. 1990.
23. Baker AJM, Reeves RD, Hajar ASM. Heavy metal accumulation and tolerance in British populations of
the metallophyte Thlaspi caerulescens J. & C. Presl (Brassicaceae). New Phytologist 1994; 127: 61-68
24. Sharma P, Dubey RS. Lead toxicity in plants Brazilian J Plant Physiol 2005; 17(1): 35-52