Guia 5 METABOLISMO PDF

Universidad de los Andes - Laboratorio de Biologa Celular.
1

METABOLISMO
Fotosntesis, Respiracin y Fermentacin

OBJETIVOS

Comprender la importancia de la luz y el CO
2
como factores indispensables y
limitantes de la fotosntesis.
Evidenciar la presencia de pigmentos vegetales y entender su importancia en el
proceso de fotosntesis.
Demostrar la presencia de los productos de la fotosntesis (almidn) en plantas.
Evidenciar la respiracin aerbica en un ratn.
Observar el proceso de fermentacin de una levadura a diferentes temperaturas.

MARCO TERICO
El metabolismo tiene dos propsitos fundamentales: la generacin de energa para
poder realizar funciones vitales del organismo y la sntesis de molculas biolgicas. Para
conseguirlo, el metabolismo consiste en dos procesos diferenciados que no son
excluyentes, el anabolismo y el catabolismo. Los procesos anablicos son los que por
regla general requieren el aporte de energa mientras que los procesos catablicos son
aquellos que aportan energa (Sadava et al., 2011).

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MATERIALES QUE SE DEBEN LLEVAR A CLASE (por grupo)

1. Una hoja de espinaca
2. Cuatro hojas frescas de geranio: 3 expuestas a la luz y 1 expuestas a oscuridad
(mnimo 36 horas antes de la prctica).
3. Una cinta mtrica


2
PROCESOS ANABLICOS
(Fotosntesis)

La fotosntesis es la propiedad que presentan las plantas, bacterias (prpuras y verdes),
algunos protistas y las algas de combinar molculas inorgnicas (agua y dixido de
carbono) para formar molculas orgnicas ms complejas como la glucosa. En este
proceso las clulas que conforman a estos organismos capturan, por medio de
pigmentos, una pequea fraccin de la energa lumnica solar guardndola en forma de
enlace qumico dentro de las molculas orgnicas complejas que se sintetizan durante
este proceso. Estas molculas orgnicas ricas en energa como los carbohidratos son
utilizadas como fuente de energa (alimento) por los mismos organismos fotosintticos
(auttrofos) o por organismos no fotosintticos (hetertrofos) incapaces de realizar el
proceso de fotosntesis (Audesirk, 2004).

Gracias a la fotosntesis los seres vivos pueden aprovechar la energa solar
transformndola en alimento lo que permiti que la vida encontrara en el sol una
despensa casi inagotable de energa, solucionando sus requerimientos alimenticios y
permitindole expandirse, adaptarse y diversificarse (Sadava et al., 2010).

Para la realizacin de este fenmeno es necesario dixido de carbono, agua, luz y
pigmentos vegetales. Los pigmentos vegetales son varios tipos de molculas que
absorben luz de diferentes longitudes de onda y se encuentran ubicados principalmente
en las hojas, en el caso de las plantas. Estos pigmentos se localizan en organelos
intracelulares denominados cloroplastos, en el caso de los organismos fotosintticos
eucariticos como las plantas, algas y protistas; en el caso de los organismos
fotosintticos procariticos, como las bacterias prpuras y verdes, se encuentran
localizados en sistemas membranales dentro de sus clulas. (Audesirk, 2004).

El principal pigmento es la clorofila de la cual existen varios tipos: a, b, c, d y la
bacterioclorofila presente nicamente en las bacterias fotosintticas. La clorofila absorbe
fuertemente las longitudes de onda que corresponden al color violeta, azul y rojo, pero
refleja el verde por esto la mayora de las plantas y algas son verdes (Audesirk, 2004).

Otros pigmentos, denominados accesorios, que tambin se encuentran en el cloroplasto,
capturan la energa lumnica y la trasfieren a la clorofila; dentro de estos encontramos
los carotenoides que absorben las longitudes de onda correspondientes al azul y al
verde y reflejan el amarillo, el naranja o el rojo; las ficocianinas que absorben el verde y
el amarillo reflejan el azul y prpura.

Debido a que todas las longitudes de onda son absorbidas en algn grado ya sea por la
clorofila, carotenoides o ficocianinas, cualquier longitud de onda puede conducir la
fotosntesis. (Audesirk, 2004).

Clulas Guardianas o Estomticas.

Los estomas estn presentes en las hojas de todas las plantas superiores y en rganos de
plantas primitivas tales como musgos y hepticas. Son pequeas aberturas que se
encuentran principalmente en la epidermis de las hojas y de algunos tallos jvenes, las


3
cuales se encuentran flanqueadas por dos clulas epidrmicas especializadas en forma
semicircular o de media luna denominadas clulas guardianas o estomticas (Luttge et
al., 2000). La principal funcin de estas clulas es regular la apertura y el cierre de los
estomas y controlar la salida de agua de la planta.

FIGURA 1. Caractersticas de las clulas estomticas (Apertura y cierre de los estomas).
Tomado de: http://docentes.educacion.navarra.es/~metayosa/bach2/2biometabo4.html

Cromatografa

Esta tcnica de separacin consiste en la posibilidad de resolver los componentes en
solucin de una mezcla compleja de sustancias, utilizando su migracin diferencial
cuando se mueven en un medio poroso adsorbente. La migracin est determinada por
el deslizamiento de disolventes adecuados y la separacin por el hecho de que las
diversas sustancias que componen las mezclas se mueven en el medio poroso a
diferentes velocidades; estas velocidades dependen de las propiedades fisicoqumicas
de la sustancia, del medio poroso, del disolvente y de la temperatura
(http://elac.uca.edu.ni/pd/karlschen/files/745/2416/Cromatografia.pdf).

Cromatografa de reparto sobre papel

En esta cromatografa se emplea el papel como soporte poroso capilar, para la fase
estacionaria. Esta cromatografa es esencialmente un micro mtodo aplicable en
cantidades mnimas de sustancia; durante sta cromatografa las sustancias en examen
impulsadas por el disolvente migran a lo largo del entretejido formado por las fibras del
papel. Las fibras hmedas del papel permanecen fijas, mientras que el disolvente circula
sobre ellas siendo entonces la primera la fase estacionaria y la segunda la fase mvil.
(http://elac.uca.edu.ni/pd/karlschen/files/745/2416/Cromatografia.pdf).


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Figura 1. Cromatografa de reparto sobre papel: pigmentos vegetales. Tomado de:
http://www.panreac.com/new/esp/productos/practicas/practicas26.htm

Una gota de la solucin en examen conteniendo las sustancias que deben es adsorbida
por el papel (generalmente de filtro o cromatografa) a algunos centmetros del extremo
de la hoja de papel, despus de la evaporacin del disolvente el extremo de la hoja es
sumergido en la fase mvil, generalmente un disolvente orgnico. La fase mvil es
absorbida lentamente por el papel y cuando esta llega a la mezcla que se desea separar,
los componentes de dicha mezcla se desplazan de la posicin de partida a velocidades
diferentes. La operacin se detiene cuando el disolvente ha llegado a algunos
centmetros de distancia del extremo opuesto de la hoja.

Se establece una relacin entre la distancia recorrida por cada una de las diferentes
sustancias y por el disolvente, esta relacin denominada factor de retencin (Rf) es el
cociente de la distancia recorrida por la sustancia y la distancia recorrida por el
disolvente. Este valor resulta prcticamente caracterstico (entre 0-1) para una
determinada sustancia, siempre y cuando se mantengan las condiciones experimentales.

PROCESOS CATABLICOS
(Respiracin y Fermentacin)

El trmino respiracin es usado para definir dos funciones realizadas por los seres vivos,
relacionados pero diferentes. Una es el intercambio de gases realizado entre el individuo
y el medio. Ej.: inspiracin y expiracin en los animales pulmonados, intercambio
gaseoso en el agua por medio de branquias, etc. La otra funcin es a nivel intracelular,
donde hay reacciones qumicas de oxido-reduccin para liberar energa, CO
2
y H
2
O
principalmente, a partir de diferentes compuestos presentes en las clulas. En esta
prctica nos vamos a referir solamente a RESPIRACN CELULAR (Curtis, H et al.,
2008).

Todos los sistemas vivos necesitan energa para realizar los diferentes procesos
metablicos que su existencia implica: por lo tanto, son expertos en conversiones
energticas a partir de diferentes fuentes exteriores a ellos. Los carbohidratos son
compuestos de alto valor energtico principalmente utilizados por los organismos. Son
la materia prima para la sntesis de una gran variedad de compuestos orgnicos tales
como: esteroides, aminocidos, purinas, pirimidinas, lpidos complejos, polisacridos,
etc. El el combustible ms utilizado para satisfacer los requerimientos de las clulas es
la glucosa. Cualquier carbohidrato debe ser convertido a glucosa o formas similares de
esta para entrar en las rutas catablicas de la clula. Otros compuestos como protenas y
lpidos se degradan en diferentes compuestos ms sencillos como aminocidos y cidos


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grasos respectivamente, los cuales pueden entrar por diferentes vas al metabolismo
celular (Curtis, H et al.,2008).

El primer paso en el catabolismo de la glucosa es su degradacin hasta cido pirvico,
el cual puede ser utilizado en diferentes vas segn las necesidades y condiciones de la
clula y adems segn el tipo de enzimas que ella posea. Estas vas conforman la
respiracin celular y pueden ser de dos tipos aerbica y anaerbica (Curtis, H et al.,
2008).

Metabolismo Aerbico

Una vez producido el cido pirvico o piruvato (rico en energa), mediante ciertas
reacciones se convierte en Acetil-CoA (Acetil-Coenzima A). Este producto es
fundamental en el Ciclo de Krebs, donde se libera la energa necesaria para la
produccin de molculas energticas similares al ATP, tales como: NADH (Nicotin-
adenin dinucletido reducido) y FADH
2
(Flavina-adenina-dinucletido reducido). Estas
molculas se oxidan en la cadena respiratoria mitocondrial, para producir ATP a partir
de ADP. En este ltimo proceso hay un transporte de electrones de niveles energticos
altos a niveles ms bajos, en donde se tiene como aceptor final de electrones al oxgeno
molecular O
2
producindose finalmente molculas de agua.

Metabolismo Anaerbico

Este tipo de metabolismo se da sin presencia de O
2
libre y puede ser realizado por
clulas animales (Ej: msculos en ejercicio continuo) y por microorganismos como
bacterias y levaduras (Cooper, 2007). Uno de los procesos mediante el cual el cido
pirvico puede ser metabolizado en ausencia de oxgeno es la fermentacin. Se da por la
necesidad de reciclar la molcula NAD y ocurre por diferentes vas. Las dos vas ms
comunes son la fermentacin lctica y la fermentacin alcohlica. Aunque ninguna
produce energa en forma de ATP, remueven los electrones del NADH para que ste
pueda seguir actuando como aceptor de electrones en la gliclisis. La fermentacin
lctica tiene como producto final lactato, se da en clulas del msculo esqueltico y en
algunas bacterias utilizadas en la fabricacin de quesos. En la fermentacin alcohlica se
obtiene como producto final etanol y se libera CO
2
; sta se da principalmente en
levaduras y es muy utilizada en la industria vincola y cervecera (Sadava et al, 2011).

GLUCOSA + 2ADP + 2Pi ! 2 LACTATO + 2ATP

GLUCOSA + 2ADP + 2Pi ! 2ETANOL + 2CO
2
+ 2ATP

Algunas bacterias usan solo algunos pasos del ciclo de Krebs y de la cadena
transportadora de electrones para metabolizar el piruvato. Este proceso es conocido
como respiracin anaerobia y la diferencia radica en que utilizan como aceptor final de
electrones molculas diferentes al oxigeno como NO
3
-
, NO
2
-
y SO
4
2-
(Wen Dar J, 2009).


6
PRECAUSIN !!!!
COMPUESTOS TXICOS

COMPUESTO RIESGOS/PELIGRO PRECAUCIONES
NaOH Extremadamente corrosivo
Provoca quemaduras graves
Altamente irritante
Muy peligroso si se ingiere o se inhala
Guantes
Gafas de seguridad
Fenolftalena Altamente inflamable
Irritante
Muy buena ventilacin
Guantes
Gafas de seguridad

COMPUESTO RIESGOS/PELIGRO PRECAUCIONES
ter de petrleo Fcilmente inflamable
Provoca quemaduras graves
Altamente irritante
Guantes

Benceno Fcilmente inflamable
Irritante
Provoca quemaduras
Guantes

Acetona Fcilmente inflamable
Irritante
Guantes

PROCEDIMIENTO

1. FOTOSNTESIS

1. 1 CROMATOGRAFA DE REPARTO.

MATERIALES
INSTRUMENTAL
BSICO
SOLUCIONES MATERIAL
BIOLGICO
Papel de filtro.
Tubos de ensayo.
Algodn

Disolvente ter de petrleo,
acetona y benceno

Hojas verdes de
espinaca.

1.1.1 Montaje

Tome la tira de papel para cromatografa y trace una lnea CON LPIZ a 2 cm de uno de
los bordes.


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Disolvente

1.2. NECESIDAD DE LUZ Y CO
2

MATERIALES
INSTRUMENTAL BSICO SOLUCIONES MATERIAL BIOLGICO

2 probetas de 100ml
Fuente de luz (Lmpara).
Metro

Agua destilada.
Solucin bicarbonato 5%.

Egeria sp..
Corte un pedazo pequeo de hoja de espinaca
Colquelo y macrelo sobre la lnea

Agregue 2 mL de disolvente en un tubo de ensayo.
Introduzca el papel de filtro asegurndose de que
el pigmento no quede sumergido en la solucin y
est en posicin completamente vertical

Tape el tubo de ensayo y gurdelo en oscuridad
durante 10 minutos

Mida la distancia recorrida por el disolvente y la recorrida por cada pigmento.
Rf = DP (Distancia recorrida por los pigmentos)
DD (Distancia recorrida por el disolvente)


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Coloque las dos probetas paralelas. Ubique una fuente de luz a 5 cm de distancia.

Tome nota del nmero de burbujas de O
2
que se liberan CADA MINUTO
DURANTE 5 MINUTOS del extremo cortado en cada rama en los dos tubos.

Repita el ltimo paso variando la distancia a
50cm y 100cm de la fuente de luz.

ADVERTENCIA: Es importante al realizar el montaje que no queden burbujas de aire
en la probeta; si al cabo de los primeros cinco minutos hay burbujas contar cuantas
hay y a partir de ellas se empiezan a contar las que van apareciendo y al final se le
restan las burbujas inciales.

Haga dos cortes de 1 o 2 cm de las terminaciones
de la planta en sentido diagonal.

Agregue a cada
probeta 50 mL de:


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1.3. RESERVAS DE ALMIDN EN CLOROPLASTOS.

MATERIALES

Beaker 500m
Pinzas

Lugol.
Alcohol/H2O 50/50.

2 Hojas frescas de geranio
- 1 hoja expuesta a la luz.
- 1 hoja en total oscuridad.

Colocar una hoja de geranio en luz y una hoja en oscuridad

24 horas antes de la prctica

Luz

Oscuridad

Sumerja las hojas en 200 ml de alcohol/agua (proporcin 1:1)

Hervir hasta que las hojas se vean amarillas (permeables al lugol)

Luego colocar las hojas en una caja de petri con lugol durante 5 minutos.
Si hay almidn se observara la coloracin caracterstica de esta reaccin.

Observe y registre la diferencia en los grnulos de almidn de las dos hojas


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1.4 APERTURA DE ESTOMAS

MATERIALES

Caja de petri
Cuchilla nueva
Lminas
Laminillas
Gotero plstico

NaCl 10%.

2 Hojas frescas de Geranio

Colocar en la caja de petri una hoja de geranio en agua destilada y la otra en NaCl

Agua destilada

NaCl 10%

Dejar las hojas sumergidas en cada solucin durante 15 minutos

Realizar cortes en la superficie de cada hoja sin perforarlas

Observar cada corte al microscopio.
Realizar bsqueda de estomas y ver las diferencias en las dos hojas


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2. RESPIRACIN CELULAR

2.1 Respiracin Aerbica

MATERIALES

Bomba de aire
3 Fiolas
3 Tapones de caucho
Tubos de vidrio para
hacer conexin.
Plastilina para tapar los
escapes del montaje.

Perlas de NaOH
Fenolftaleina

Ratn

Por el uso de especmenes animales, se realizarn 2 pruebas demostrativas para
todo el curso.

1. Coloque el componente respectivo en cada una de las 3 fiolas:

2. Adapte los tapones a cada fiola con los tubos y mangueras


12

3. Conecte la bomba de aire al tomacorriente una vez haya realizado el montaje
4. Compruebe que no haya escape de aire desde la salida de aire de la bomba hasta
el final del montaje.
5. Anote los cambios en el color de la fenoftalena.

El O
2
y CO
2
del aire conducidos por la bomba, llegan a la fiola donde se encuentran
las perlas de NaOH que reaccionan con el CO
2
, atrapndolo y evitando que pase a
la fiola del ratn. Esto asegura que el CO
2
que pasa a la tercera fiola es producido
nicamente por el ratn. La reaccin que se lleva a cabo es:

CO
2
+ NaOH ==> NaHCO
3

Al liberarse CO
2
de la fiola del ratn, pasa a la tercera fiola donde se disuelve
lentamente en el agua formando acido carbnico:

CO
2
+ H
2
O ==> H
2
CO
3

Lo que permite evidenciar la produccin de CO
2
es la fenolftalena, la cual es
utilizada en qumica como un indicador de pH.


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2.2 FERMENTACIN ALCOHLICA

MATERIALES

4 Tubos de Anaerobiosis
Congelador -20C
Nevera 4C
Incubadora 37C.

Solucin de Glucosa 29%

Suspensin de Levadura
Activada 19%.

Mezcle en un recipiente suspensin de levadura activada y solucin de glucosa
en una proporcin 50/50

Llene 4 tubos de anaerobiosis con esta solucin.

Marque cada tubo con el nmero de su mesa y la temperatura colquelo en la
temperatura que le corresponda por 30 minutos.

Saque los tubos e inmediatamente marque el nivel de desplazamiento de la
mezcla en la parte superior del tubo, que corresponde a la produccin de gas
(CO
2
) por la levadura.
Mida el desplazamiento de cada tubo y antelo en la tabla de resultados.

-20 4 37 18


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BIBLIOGRAFA

Audesirk, T. & Audesirk, G. (2004). Biology. (5th. Ed.). N. J. Prentice Hall. (pp. 128-
137).
Curtis, H., Barnes, N. S., Schnexk, G., Flores, & Massarini, A. (2008) Biologa (7a
ed). Argentina, Buenos Aires.: Editorial Mdica Panamericana S.A.
Sadava, D., D. M. Hillis, H. C. Heller, and M. R. Berenbaum. (2010). Life. The
Science of Biology. (9th ed). W. H. Freeman company
Luttge, U. Kluge, M & Bauer, G. (2000). Botnica (1ra Edicin). Madrid.
Interamericana Mcgraw-Hill. (pp. 109-135).
Wen Dar Jean, Tsung-Yen Leu, Chung-Yi Lee, Ta-Jen Chu, Silk Yu Lin and Wung
Yang Shieh. Pseudidiomarina marina sp. nov. and Pseudidiomarina tainanensis sp. nov.
and reclassification of Idiomarina homiensis and Idiomarina salinarum as
Pseudidiomarina homiensis comb. nov. and Pseudidiomarina salinarum comb. nov.,
respectively. Int J Syst Evol Microbiol 2009;59: 53-59; DOI 10.1099/ijs.0.001180-0.
Cromatografa y sus aplicaciones. Consultado el 15de diciembre de 2010 en:
http://elac.uca.edu.ni/pd/karlschen/files/745/2416/Cromatografia.pdf

BIBLIOGRAFA RECOMENDADA PARA LA PRCTICA

La bibliografa que encontrar a continuacin puede hallarla en la biblioteca. Recuerde
que los libros que se sugieren no son los nicos que puede llevar a clase, usted es libre
de llevar otros textos que le permitan responder las preguntas del informe. No olvide
que es OBLIGATORIO llevar libros de consulta al laboratorio.

Madigan, M. T., Martinko, J. M., y Parker, J. (2003). Brock biology of
microorganisms. Upper Saddle River, NJ. Prentice Hall. 10th ed.
Cooper, G. M. 2001. La clula. 2da edicin. Editorial Marban.
Raven, P.H., (2005) Biology of plants. New York. W.H. Freeman. 7th ed.
Sadava, Heller, Orians, Purves, Hillis. (2008). Life: The Science of Biology.
Sunderland, MA. W.H. Freeman 8th ed.

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