PESQUISA FAPESP 207 z 63

DNA com trs tas pode regular

expresso de certos genes
O efeito da
tripla hlice
H
quatro anos, o pesquisador
Eduardo Gorab, do Instituto
de Biocincias da Universi-
dade de So Paulo (IB-USP),
desenvolveu um mtodo que
usava um antigo anticorpo para reco-
nhecer um tipo raro de estrutura pre-
sente no material gentico de moscas
das espcies Rhynchosciara americana
e Drosophila melanogaster: molculas
de DNA compostas de trs tas entrela-
adas de bases nitrogenadas, em vez da
tradicional dupla hlice, a conformao
padro do cido desoxirribonucleico. A
inusitada tripla hlice se encontrava na
heterocromatina, regio cromossmica
em que o DNA permanece compactado
ao lado de protenas e de RNA, o cido ri-
bonucleico. Por isso, quando identicou
a tripla hlice no interior dessa regio,
Gorab suspeitou que ela pudesse estar
associada ao processo de desativao
de genes, de comum ocorrncia na he-
terocromatina. No entanto, um estudo
publicado em 27 de janeiro deste ano
na revista cientca Nature Structural &
Molecular Biology pelo brasileiro e cole-
gas da Europa e do Japo sugere novas
possibilidades para o papel das triplas
hlices no ncleo celular.
Com a ferramenta molecular criada
por Gorab, o grupo internacional de pes-
quisadores encontrou na cromatina de
embries de camundongos triplas hlices
BIOQUMICA y
Tripla hlice (em
rosa) identicada
em cromossomo de
mosca: modulao
de genes
formadas por cadeias de bases de confor-
mao ligeiramente diferente da identi-
cada no material gentico das moscas.
Em vez de trs tas espiraladas de DNA,
as clulas dos animais apresentavam duas
cadeias de DNA ligadas a uma de RNA.
Tais triplas hlices foram identicadas
num estgio bastante especfico e ini-
cial do processo de desenvolvimento do
embrio, quando este tinha somente de
duas a oito clulas. Nessa etapa da em-
briognese, a presena das triplas hlices
parecia aumentar a expresso de certos
genes importantes para essa fase do pro-
cesso. Em estgios mais avanados do
embrio, quando esse conjunto de genes
no era mais ativado, a ta de RNA aco-
plada s duas de
DNA tambm no
era mais detecta-
da. In vivo, tam-
bm vimos que,
quando estimul-
vamos a produo
da tripla hlice, a
expresso desses
genes aumentava,
arma Gorab. Os
resultados do tra-
balho no so uma
prova direta, cabal,
de que isso ocorra,
mas reforam essa
correlao." F
O
T
O

E
D
U
A
R
D
O

G
O
R
A
B
64 z MAIO DE 2013
INTRAMOLECULAR
Ocorre o despareamento das
duas tas (A e B) da molcula
padro de DNA em certo ponto
da sequncia. Um pedao do
DNA permanece com as duas
cadeias de bases nitrogenadas
pareadas enquanto outro
apresenta as tas soltas.
Uma das tas soltas se dobra
e se enrola ao trecho de DNA
que havia mantido as duas
cadeias pareadas
INTERMOLECULAR
A tripla hlice tambm pode se
formar em casos em que uma
das tas cedida por uma
segunda molcula de DNA.
Nessa situao, duas cadeias
oriundas de um DNA
convencional (C e D) se unem
a uma ta (E) que se
desprendeu de outro DNA.
No trabalho recente de Gorab,
essa terceira ta cedida por
uma molcula de RNA
Como se
forma a
tripla hlice
A estrutura pode se
originar de um nico
trecho de DNA
(intramolecular) ou
da interao de dois
cidos nucleicos
(intermolecular)
DOBRA
A
C
B
D
E
I
N
F
O
G
R

F
I
C
O

A
N
A

P
A
U
L
A

C
A
M
P
O
S

I
L
U
S
T
R
A

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G
A
B
R
I
E
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B
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A
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F
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T
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J
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A
N

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D
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I
G
U
E
Z

E

G
I
U
L
I
A

B
I
F
F
I
PESQUISA FAPESP 207 z 65
Desde os anos
1950, as
inusitadas triplas
hlices so alvo
de estudos,
mas sua funo
ainda no bem
conhecida
Projeto
Aspectos moleculares da heterocromatina em es-
pcies da famlia Sciaridae (Diptera: Nematocera)
(2008/50653-2); Modalidade Linha Regular de Auxlio
a Projeto de Pesquisa; Coord. Eduardo Gorab IB/USP;
Investimento R$ 165.485,11(FAPESP).
Artigo cientco
FADLOUN, A. et al. Chromatin signatures and retrotrans-
poson proling in mouse embryos reveal regulation of
LINE-1 by RNA. Nature Structural & Molecular Biology.
27 jan. 2013.
Estrutura de DNA
qudruplo: possvel ligao
com o cncer
Segundo uma das autoras do estudo, a
pesquisadora Maria-Elena Torres-Padilla,
do Instituto de Gentica e de Biologia
Molecular e Celular (IGBMC), de Estras-
burgo, Frana, o possvel efeito regula-
trio da tripla hlice se manifesta nesse
estgio do desenvolvimento embrionrio
sobre uma arquitetura atpica da croma-
tina. Por denio, a cromatina apresenta
duas formas distintas: uma ativa, a eucro-
matina, em que o DNA est acessvel e
pode ser expresso por protenas regula-
trias; e uma inativa, a mencionada hete-
rocromatina, na qual o material gentico
est compactado e no pode ser utilizado.
No trabalho com as clulas embrio-
nrias dos roedores, a cromatina se en-
contrava em um estgio atpico, interme-
dirio entre suas duas formas, mas que
podia ser acessado e regulado pela tripla
hlice. Estvamos procurando por um
mecanismo regulatrio ligado ao RNA
que teria impacto sobre a estrutura ou
a conformao da cromatina, explica
Maria-Elena. Como o RNA forma uma
tripla hlice com o DNA, ele era um bom
candidato a desempenhar esse papel.
Embora o fenmeno da formao de
molculas de DNA com mais de duas tas
de cidos nucleicos seja estudado desde
a dcada de 1950, os bioqumicos passa-
ram a ter uma melhor compreenso dos
mecanismos que podem levar ao surgi-
mento desse tipo de material gentico
menos convencional apenas nos ltimos
10 ou 15 anos. As triplas hlices tendem
a se formar em regies do genoma em
que ocorrem seguidas repeties de uma
base, embora haja tambm outras possi-
bilidades, diz Gorab. Ou seja, trechos do
DNA ricos em sequncias com um nico
nucleotdeo, como TTTTT (para a base ti-
mina) ou AAAAA (adenina), so candida-
tos a abrigarem hlices com mais de duas
tas. Como cerca de metade do genoma
de mamferos composto por sequncias
repetitivas, formadas por elementos m-
veis (transposons e retrotransposons) que
podem mudar de lugar ou se autocopiar
ao longo do genoma, a presena desse tipo
de estrutura no deve ser to rara assim.
DNA QUDRUPLO
Um DNA com trs tas pode se formar
de mais de uma maneira. No estudo de
Gorab com as moscas, a tripla hlice se
originou do despareamento das duas tas
que compem a molcula padro de DNA
a partir de um certo ponto da sequncia.
Um pedao do DNA permanece com as
duas cadeias de bases nitrogenadas pa-
readas enquanto outro apresenta as tas
soltas. Uma dessas tas soltas, no entanto,
se dobra e se liga ao trecho de DNA que
havia mantido as duas cadeias pareadas.
Dessa forma, surge uma molcula de ci-
do desoxirribonucleico com trs tas, to-
das originrias de uma nica molcula.
Esse o DNA triplo intramolecular.
H tambm o DNA triplo intermole-
cular, quando uma das tas cedida por
uma segunda molcula de DNA. Nesse
caso, a tripla hlice tem duas cadeias vin-
das de um DNA convencional mais uma
ta que se desprendeu de outro DNA. No
trabalho com os camundongos em que
Maria-Elena usou o anticorpo criado por
Gorab, a terceira ta do DNA foi cedida
por uma molcula de RNA, que normal-
mente apresenta apenas uma cadeia de
bases. Nossa metodologia pode identi-
car vrias formas de cidos nucleicos
triplos, diz o pesquisador da USP.
No h evidncias de que a formao
de estruturas genticas ainda pouco co-
nhecidas, como a tripla hlice, esteja re-
lacionada necessariamente com o apare-
cimento de doenas. Em tese, elementos
que atuam como moduladores da ativi-
dade de genes podem trazer efeitos tan-
to positivos como negativos. Um estudo
publicado em janeiro deste ano na revis-
ta Nature Chemistry identicou hlices
qudruplas de DNA, outra conformao
pouco usual dessa molcula, em clulas
humanas com cncer. A descoberta pode
ser til para a compreenso do processo
de aparecimento dos tumores e talvez
at para o desenvolvimento de novas
abordagens teraputicas.
Com quatro fitas entrelaadas, esse
tipo de DNA se forma em trechos do ge-
noma ricos na base nitrogenada guanina,
representada pela letra G. Por isso, recebe
o nome de quadruplexos-G ou quartetos-
-G. A pesquisa indica que os quaduple-
xos ocorrem com maior frequncia em
genes de clulas que esto se dividindo
rapidamente, como as de cncer, disse,
na ocasio, Shankar Balasubramanian, da
Universidade de Cambridge, principal
autor do estudo. Para ns, isso refora
fortemente um novo paradigma, o de usar
essas estruturas com quatro tas como
alvos para tratamentos personalizados
no futuro. n Marcos Pivetta