Polimorfismo de Longitud de Fragmentos de Restriccin (RFLP)

El RFLP se denomina como la variacin en las bases nitrogenadas en el sitio

donde una enzima de restriccin corta un segmento de ADN. Estas variaciones
afectan el tamao de los fragmentos que resultan del corte.

Las enzimas de restriccin, tambin conocidas como endonucleasas, son enzimas
que cortan los enlaces fosfodister del material gentico a partir de una secuencia
que reconocen, son enzimas bacterianas especficas de 4 a 8 pares de bases,
permiten cortar ADN de doble cadena, donde reconocen secuencias palindrmicas
(secuencias que se leen igual en ambas direcciones).

Con el propsito de identificar personas y establecer relaciones de parentesco, el
genetista ingls Alec Jeffrey, llev a cabo un procedimiento que consista en
extraer ADN de los tejidos humanos, cortarlos en fragmentos de desigual tamao
y separarlos en un campo elctrico, teniendo como resultado final una serie de
bandas.

El ADN Fingerprint es una tcnica utilizada para saber si una muestra de ADN
pertenece a cierta persona. Al igual que una huella digital el ADN de cada persona
es nico, o mejor dicho, la secuencia de los pares de bases del ADN es nica para
cada persona.

Cientficos son capaces de identificar a una persona solamente por el
ordenamiento de los pares de bases de su ADN. El ADN Fingerprint es usado en
casos de paternidad y maternidad para identificar a los padres de un nio. Otra
aplicacin es en la medicina forense en casos de identificacin de vctimas y
establecer la inocencia o culpabilidad de los sospechosos. Y una tercera
aplicacin sera como identificacin personal, pero por el momento el Fingerprint
es muy complejo y costoso para usarse como identificacin personal.


Reaccin en Cadena de la Polimerasa (PCR)

En Abril de 1983, Kary Mullis dio a conocer la Tcnica de reaccin en cadena de la
Polimerasa o PCR que es una tcnica para la sntesis in vitro de secuencias
especficas de DNA con la cual la insuficiente cantidad de ADN ya no es un
problema en los procedimientos de Biologa Molecular ni en los procedimientos de
diagnstico basados en el estudio de DNA.

La idea basica de la tecnica es sintetizar muchas veces un pedazo o fragmento de
ADN utilizando una polimerasa que puede trabajar a temperaturas muy elevadas,
ya que proviene de la bacteria Thermus aquaticus que vive a altas temperaturas
(79C a 85C), de ahi su nombre comercial ms conocido: taq polimerasa. Cuando
hacemos una reaccion de PCR simulamos lo que sucede en una clula cuando se
sintetiza el ADN y en el tubo se mezclan todos los ingredientes necesarios para
hacerlo: la polimerasa, el ADN del organismo que queremos estudiar donde se
encuentra el fragmento que queremos sintetizar , los oligonucleotidos (llamados
tambin primers, iniciadores, cebadores, oligos, etc.) necesarios para que se
inicie la transcripcion, dinucleotidos (dNTPs), y las condiciones para que la enzima
trabaje adecuadamente (cierto pH, determinadas cantidades de magnesio en
forma de MgCl2, KCl, y pueden necesitarse otras sales o reactivos, dependiendo
de cada polimerasa). Esta tecnica tan ingeniosa tiene muchisimas aplicaciones
distintas y se ha convertido en una herramienta muy importante en la biologa
molecular; sus aplicaciones van desde la genetica de poblaciones, evolucin
molecular y genomica hasta la medicina forense.

La tcnica se basa en la replicacin del ADN en los organismos eucariotas
realizada por la DNA polimerasa. Estas enzimas realizan la sntesis de una
cadena complementaria de DNA en el sentido 5- 3 usando un molde de cadena
sencilla, pero a partir de una regin de doble cadena. Para crear esta regin doble
cadena se usan los denominados iniciadores (primers). Son una pareja de
oligonucletidos sintetizados de manera que sean complementarios a cada uno de
los extremos 3 del fragmento de DNA que se desea amplificar.

Partiendo de este principio, la reaccin en Cadena de la Polimerasa se basa en la
repeticin de un ciclo formado por tres etapas:

1 Desnaturalizacin del ADN doble cadena
2 Hibridacin de los iniciadores en el extremo 3 especfica de cada una de las
hebras
3 Extensin del cebador por accin de la DNA polimerasa

Se estima que los 23 pares de cromosomas en el humano contienen un total de
30, 000 a 50, 000 genes, los cuales codifican para una protena en particular. Slo
el 5% comprende el ADN cromosomal mientras que el 95% es no codificante.
Existen secuencias que se han dispersado en el genoma despus de una
transcripcin inversa a partir de ARN. La transcriptasa inversa es una enzima que
produce ADN tomando como molde ARN. Posteriormente estas copias de ADN
pueden ingresar en los cromosomas.