Procedimentos Tcnicos

Cdigo: PROMIC-0006-1

Verso: 01

Pg: 1/4
TTULO: Coprocultura

NOME FUNO ASSINATURA DATA
ELABORADO POR
Dr. Renato de
Lacerda Barra
Filho
Biomdico

01/10/2009
DE ACORDO Dr. Ivo Fernandes
Gerente da Qualidade
Biomdico
20/10/2009
APROVADO POR
Dr. J ose Carlos
dos Santos
Diretor Executivo 30/10/2009
HISTRICO DAS REVISES
Verso Revisado por Data Assinatura Aprovado por Data Assinatura


REVALIDAO ANUAL
Verso Responsvel Data Verso Responsvel Data
1 Ivo 01/10/2013



1. NOME/ SINONMIAS/ MNE
CULTURA DE FEZES; PESQUISA DE ENTEROPATGENOS; CULTURA PARA SALMONELLA,
SHIGELLA, ESCHERICHIA COLI INVASORA E ESCHERICHIA COLI ENTEROPATOGNICA
CLSSICA.


2. PRINCPIO DO TESTE

O crescimento bacteriano em meios de cultura seletivos e diferenciais propicia o enriquecimento e o
desenvolvimento de patgenos de interesse nas gastroenterites (inflamao simultnea do estmago e
dos intestinos). A partir disto possvel a tipagem de bactrias enteropatognica (Salmonella spp,
Shigella spp, Escherichia coli invasora EIEC e Escherichia coli enteropatognica EPEC) presentes
na amostra.
Meios Utilizados:
Meios diferenciais utilizados para diferenciar bactrias fermentadoras e no fermentadoras da
lactose MacConkey (MC).
Meios seletivos utilizados para permitir crescimento apenas de Shigella spp. e Salmonella
spp., inibindo as outras bactrias. SS (Salmonella Shiguella).
Caldo de enriquecimento: Selenito.


3. SIGNIFICADO CLNICO

Diversos so os agentes que podem causar gastroenterites. Habitualmente, em cultura de fezes
pesquisada a presena de agentes mais comuns em nosso meio: Salmonella spp, Shigella spp,
alguns sorotipos de Escherichia coli e Campylobacter. Outros agentes podem ser pesquisados,
mais importante que sejam mencionados na solicitao mdica.


4. COLETA E TRATAMENTO DA AMOSTRA

4.1. Coleta da amostra: Fezes, 1 a 2 gramas (equivalente a 1 colher de sobremesa no incio do quadro
diarrico antes da antibioticoterapia, representa uma amostra ideal). Colocar em frasco com
conservante apropriado. importante ao paciente no encher o frasco para respeitar a diluio da
amostra no conservante.
4.2.1. Fezes sem conservante devem ser encaminhadas e processadas no mximo dentro de 1 hora
aps a coleta. Shigella spp. uma bactria muito frgil e no resiste por muito tempo sem conservante.



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4.2.2. Fezes com conservante podem ser mantidas temperatura ambiente por at 24 horas (Cary
Blair).
4.3. Volume mnimo para anlise: vide manual de coleta.
4.4. Rejeio de amostras: Amostras para cultura refrigeradas (exceo para pesquisa de antgenos).
4.5. Condies de acondicionamento: vide manual de coleta.
4.6. Tratamento e pr-tratamento da amostra: N/A


5. MATERIAL REQUERIDO

Estufa bacteriologica;
Microscpio tico;
Bico de Bunsen.
Placa estril.
Ala calibrada.
Lminas.
Mscara de proteo.
culos de segurana.
Luvas de procedimento.


6. REAGENTES

Placa de Mac Conkey (MC) pronto para uso

Placa de SS preparado

Caldo de Selenito pronto para uso

Antisoros - pronto para uso.



7. PROCEDIMENTO DETALHADO

7.1 Bacterioscopia:

Este tipo de exame pouco solicitado e utilizado para indicar a presena de Staphylococcus spp. e
leveduras nas amostras, j que estas no so recuperadas nos meios empregados na rotina
habitual de coprocultura.

7.2 Semeadura e Isolamento:

7.2.1 Semeadura:

7.2.1.1 Semear uma alada de fezes em um meio diferencial, em um meio seletivo e 3 a 4 aladas
em um caldo de enriquecimento.
7.2.1.2 Incubar as placas de MC e SS 35 +1C por 18 a 24 horas e o caldo de enriquecimento a
35 +1C por 12 a 18 horas.
7.2.1.3 Aps 12 a 18 horas de incubao, semear uma amostra da superfcie do caldo de
enriquecimento em uma placa de meio seletivo (SS).
7.2.1.4 As colnias suspeitas do primeiro plaqueamento so repicadas no meio de Rugai,
segundo identificao abaixo:

Mac Conkey colnias lactose negativa (transparente ou sem cor) suspeita de Salmonella
spp, Shigella spp. e algumas E.coli invasoras.



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Lactose positiva (cor-de-rosa) suspeita de E. coli.

SS Incolor (com ou sem o centro negro) suspeita de Salmonella spp.
Incolor suspeita de Shigella spp.
Colnias amarela suspeita de Escherichia coli.
Repicar no mnimo 1 a 3 colnias com morfologia diferente, de cada placa, no meio de
Rugai.

7.2.1.5. Incubar a placa semeada do caldo de enriquecimento e os meios de Rugai a 35 + 1C por
18 a 24 horas.

7.2.1.6. Quando na leitura do Rugai houver suspeita de algum patgeno significativo, realizar provas
bioqumicas complementares (se necessrio) e soroaglutinao (quadro 7.1).
E.coli identificar o sorogrupo a que pertence. A EPEC s ser pesquisada em
crianas com at 2 anos de idade.
Salmonella spp. deve ser feita aglutinao (antgeno somtico e flagelar) para
confirmar a identificao. Para identificar a espcie, devem ser realizada provas
bioqumicas. Ver quadro ...
Shigella spp. deve ser feita aglutinao para identificar as diferentes espcies,
Inicialmente de ser feita a soroaglutinao para S fflexneri e S. sonnei, se negativas,
realizar soroaglutinao para S. boydii e S. dysenteriae.

Obs.: Se existir forte suspeita de Salmonella spp ou Shigella spp. pela aparncia no Rugai
e no houve aglutinao com nenhum anti-soro, transferir a suspenso para um outro
tubo e aquecer em gua fervente por 10 minutos, deixar esfriar e repetir novamente a
aglutinao.


Quadro 7.1 - Testes para a identificao das espcies de Salmonella spp.

PROVAS Salmonella
choleraesui s
Salmonella
typhi
Salmonella
sorotipo
enteritidis
Salmonella
paratyphi
Gs de
glicose
+ - + +
H2S + + + -
Lisina + + + -


7.2.1.7 A partir da placa semeada do caldo de enriquecimento, repicar no meio de Rugai as
colnias suspeitas e incubar a 35 +1 C por mais 18 a 24 horas.

7.2.1.8. Liberar o resultado das bactrias confirmadas por meio de soroaglutinao.

7.2.1.9. Ler os meios de Rugai repicados da placa proveniente da semeadura do caldo de
enriquecimento e proceder soroaglutinao quando necessria para confirmar a identificao.


8 CLCULOS/ LIBERAO DOS RESULTADOS

Resultado Negativo
No houve crescimento de patgenos; Salmonella spp, Shigella spp, E.coli enteropatognicas
(...sorogrupos pesquisados), E.coli enterohemorrgica (...sorogrupos pesquisados).
Resultado positivo
Salmonella spp ....




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Obs.: A presena de leuccitos na bacterioscopia ou na pesquisa de leuccitos nas fezes sugere
bactria invasivas (p. ex.: Shigella, EIEC); j a ausncia de leuccitos sugere diarrias toxignicas
(p. ex.:Salmonella, Vibrio).

9 CONTROLE DE QUALIDADE

Os meios de cultura empregados devem ser controlados quanto a sua esterilidade, capacidade de
permitir o crescimento dos patgenos importantes e capacidade de inibio (meios seletivos).
Os kits ou anti-soros s sero utilizados mediante apresentao do certificado de validao do
fabricante (vide plano de qualidade do setor).


10 INTERVALO DE REFERNCIA

Negativo


11 INTERVALO CRTICO

N/A


12 CONFIABILIDADE ANALTICA

No possvel, muitas vezes, isolar e identificar todos os possveis patgenos presentes nas
fezes.
Na rotina de coprocultura devem ser pesquisados os agentes mais freqentes na sua populao.
No tem sentido pesquisar agentes raros, a no ser que haja suspeita clnica ou um surto. Neste
ltimo caso, deve ser adicionado um meio mais seletivo para o isolamento desse agente em
questo.


13 INTERFERENTES

A bacterioscopia no pode ser feita com amostra em meio de transporte, pois este prejudica a
colorao e causa interferncia no mtodo. A semeadura de grandes quantidades de amostra pode
causar a viragem do pH dos meios e no permitir a obteno de colnias isoladas. Algumas cepas
de EPEC podem apresentar aglutinao inespecfica com todos os antisoros (cepas
autoaglutinveis). Nestes casos re-isolar a cepa e repetir a sorologia. Caso a auto-aglutinao se
repita o resultado inconclusivo.


14 INTERVENES

N/A


15 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

1. Oplustil P.; Carmen; Zoccoli M,;Cssia; Tobouti R.;Nina; Sinto I.;Sumiko Procedimentos
Bsicos em Microbiologia Clnica 1Edio Sarvier, 2000.
2. Murray.R. Patrick ; Baron, J . Ellen; Pfaller, A. Michael; Tenover, C. Fred; Yolken, H. Robert.
Manual of Clinical Microbiology 7 Edio American Society for Microbiology, 1999.
3. Koneman, W. Elmer; Allen, D. Stephen; J anda, M. William; Schreckenberger, C. Paul; Winn, C.
Washington J r. Diagnstico Microbiolgico 5 Edio MEDSI 2001.