12 Jornada de Ps-Graduao e Pesquisa - ISSN 1982-2960

CALIBRAO DE EQUIPAMENTO, DA MARCA MINOLTA MODELO SPAD-

502, PARA A DETERMINAO DE PIGMENTOS EM FOLHAS DE
MACIEIRA FUJI SUPREMA

CALIBRATION OF MINOLTA SPAD-502 FOR THE DETERMINATION OF
PIGMENTS IN LEAVES OF APPLE 'FUJI SUPREMA'

Carlos Davi Santos e Silva
1
; Bianca Schveitzer
2
; Gentil Carneiro Gabardo
3
; Marcelo Couto
4
; Cristhian Leonardo
Fenili
5
, Caroline Esperana
6


1
Aluno de Doutorado do Programa de Ps-Graduao em Fisiologia Vegetal da Universidade Federal de
Pelotas, Departamento de Botnica, Caixa Postal 354, Capo do Leo,RS CEP: 96010-900,
carlosdavi_santos@yahoo.com.br;
2
Pesquisadora da Epagri/EECd, Dra. em Qumica, e-mail:
biancaschveitzer@epagri.sc.gov.br;
3
Eng. Agro. Mestrando em Produo Vegetal, UDESC-CAV, Lages/SC
ge.gabardo@gmail.com;
4
Eng. Agrnomo, D.S. Pesquisador EPAGRI, Caador, SC. e-mail:
marcelocouto@epagri.sc.gov.br;
5
Aluno do Curso de Agronomia da Universida Alto Vale Rio do Peixe,
Caado, SC. e-mail : cristhianfenili@hotmail.com;
6
Engr
a
. Agro. Mestranda em Produo Vegetal, UDESC-
CAV, Lages/SC. e-mail: carol.esperanca@hotmail.com;

RESUMO
As clorofilas e os carotenoides so pigmentos que desempenham papis essenciais no processo fotossinttico,
portanto, a quantificao dos teores de clorofila e carotenoides so relevantes em estudos relacionados a
prticas culturais e de manejo, visando caracterizar o potencial fotossinttico e, consequentemente, o
rendimento das espcies frutferas. Os teores desses pigmentos nas folhas so influenciados por diversos
fatores biticos e abiticos, estando diretamente relacionados com a atividade fotossinttica da planta e a
capacidade da folha em absorver luz. A espectrofotometria a tcnica mais utilizada para a quantificao dos
pigmentos fotossintticos, atravs da qual os pigmentos individuais so determinados a partir da extrao dos
mesmos da folha com uso de um solvente especfico. Porm, tcnicas pticas no destrutivas, in situ,
tornaram-se amplamente usadas para fornecer uma indicao relativa da concentrao desses pigmentos,
principalmente das clorofilas. Um exemplo o clorofilmentro porttil SPAD-502 (Konica Minolta, Osaka,
Japo) que tem sido investigado como instrumento para rpido diagnstico do estado nutricional de diversas
culturas em relao ao contedo de nitrognio e de clorofilas, agregando vantagens como a simplicidade no
uso, alm de possibilitar uma avaliao no-destrutiva de tecidos foliares. Mas apenas uma pequena frao
(cerca de 10 %) destes trabalhos estabeleceu a correlao entre o teor de clorofila extrado pelo mtodo
tradicional e a leitura SPAD. O objetivo desse trabalho foi avaliar a relao entre as leituras do SPAD-502 com
os teores de clorofila e carotenoides extraveis nas folhas da cultivar de macieira Fuji Suprema para validar o
uso deste equipamento como parmetro para estimar o teor relativo de clorofilas e carotenoides nas folhas
desta cultivar. As leituras efetuadas pelo SPAD-502 correlacionaram-se com as determinaes dos teores de
clorofila a e b; e com os teores de carotenoides totais de acordo com as equaes: Chl a y = 0,037x - 0,356
(R = 0,995); Chl b y = 0,009x - 0,025 (R = 0,984); e Car
t
y = 0,010x - 0,100 (R = 0,998), respectivamente, no
qual a varivel independente (x) representa as leituras analisadas pelo aparelho Minolta SPAD-502, que detm
de leituras indiretas de clorofila. Portanto, as leituras efetuadas pelo equipamento podem substituir, com boa
preciso, as determinaes tradicionais dos teores de clorofilas e carotenoides para a cultivar Fuji Suprema.


Palavras-chave: clorofilmentro porttil, clorofilas, carotenoides

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ABSTRACT

Chlorophylls and carotenoids play essential roles in the photosynthetic process, therefore the quantification of
chlorophyll and carotenoids are relevant related to cultural practices and management studies to characterize
the photosynthetic potential and hence the yield of fruit species. The contents of the leaves pigments are
influenced by various biotic and abiotic factors that directly related to the plant photosynthetic activity and the
ability of the leaf to absorb light. The spectrophotometry is the most widely technique used to measure
photosynthetic pigments, which individual dyes are determined removing of the leaves using a specific solvent.
However, non-destructive optical techniques in situ had become widely used to provide a relative indication of
the concentration of these pigments, especially the chlorophyll. An example is the chlorophyll reader portable
SPAD-502 (Konica Minolta, Osaka, Japan) that had been investigated for faster diagnosis of the nutritional
status of many crops in relation to nitrogen content and chlorophyll, adding advantages such as simplicity in
usage, and enables a non-destructive evaluation of leaf tissues. But only a small fraction (about 10%) of these
works established correlation between the chlorophyll content extracted by the traditional method and the SPAD
reading. The aim of this study was to evaluate the relation between SPAD-502 readings with the contents of
chlorophyll and extractable carotenoids of leaves from Fuji Supreme apple cultivar to validate the use of this
equipment as a parameter to estimate the relative chlorophylls and carotenoids content the leaves of this
cultivar. Readings taken by SPAD-502 correlated with the chlorophyll a and b determinations of the levels ; and
the content of carotenoids according to the equations: Chl a y = 0,037x - 0,356 (R = 0,995); Chl b y = 0,009x -
0,025 (R = 0,984); e Car
t
y = 0,010x - 0,100 (R = 0,998), respectively, in which the independent variable (x) is
checked by the machine reading the Minolta SPAD-502, which have indirect reading of chlorophyll. So the
readings did by the equipment can substitute with accuracy the traditional determination of the chlorophyll
leaves levels and carotenoid to Fuji Supreme apple tree.

Keywords: Portable chlorophyll reader, chlorophylls, carotenoids



INTRODUO
O contedo de pigmentos fotossintetizantes nas folhas das plantas indicativo do
estado funcional dos seus aparatos fotossintticos. As clorofilas, por exemplo, tem um papel
essencial na fotossntese, absorvendo luz e transferindo essa energia para outras
molculas. O teor de clorofilas nas folhas influenciado por diversos fatores biticos e
abiticos, estando diretamente relacionado com a atividade fotossinttica da planta e a
capacidade da folha em absorver luz (TAIZ e ZEIGER, 2010). Os carotenoides participam
desses processos como pigmentos acessrios. Portanto, a quantificao dos teores de
clorofila e carotenoides relevante em estudos de prticas culturais e de manejo, visando
caracterizar o potencial fotossinttico e, consequentemente, o rendimento das espcies
frutferas.
A espectrofotometria a tcnica mais utilizada para a quantificao dos pigmentos
fotossintticos, atravs da qual os pigmentos individuais so determinados a partir da

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extrao dos mesmos da folha com uso de um solvente especfico (MINOCHA, et al., 2009).
Porm, tcnicas pticas no destrutivas, in situ, tornaram-se amplamente usadas para
fornecer uma indicao relativa da concentrao desses pigmentos, principalmente das
clorofilas (PARRY et al., 2014). Um exemplo desse tipo de equipamento o modelo SPAD-
502 da marca Minolta (Konica Minolta, Osaka, Japo).
O funcionamento deste equipamento est baseado na quantificao da luz
transmitida pela folha em dois comprimentos de ondas com diferentes valores de
absorbncia da clorofila: vermelho em cerca de 650 nm, e o prximo a o infravermelho
(NIR), a cerca de 900 nm. Maior concentrao de clorofilas aumenta a absoro da radiao
vermelha (PARRY et al., 2014).
Embora este medidor seja porttil e adequado para uso em campo, ele permanece
subutilizado em estudos com frutferas, talvez porque as unidades de SPAD so difceis de
interpretar. De fato, os valores SPAD dependem no s do teor de clorofila, mas tambm em
outros aspectos da ptica da folha, que podem ser influenciados pela vrios fatores
ambientais e biolgicos (COSTE et al., 2010).
O medidor de clorofila Minolta SPAD-502 tem sido investigado como instrumento para
rpido diagnstico do estado nutricional de diversas culturas em relao ao contedo de
nitrognio e de clorofilas, agregando vantagens como a simplicidade no uso, alm de
possibilitar uma avaliao no destrutiva de tecidos foliares. Mas apenas uma pequena
frao (cerca de 10%) destes trabalhos se estabeleceu a correlao entre o teor de clorofila
extrado pelo mtodo tradicional e a leitura SPAD (UDDLING et al., 2007).
O objetivo desse trabalho foi avaliar a relao entre as leituras do SPAD-502 com os
teores de clorofila e carotenoides extraveis nas folhas da cultivar de macieira Fuji Suprema
para validar o uso deste equipamento como parmetro para estimar o teor relativo de
clorofilas e carotenoides nas folhas desta cultivar.







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MATERIAL E MTODOS

Os experimentos foram realizados na Empresa de Pesquisa Agropecuria e Extenso
Rural de Santa Catarina Epagri, Estao Experimental de Caador EECd, Caador, SC
Em pomar experimental foram coletadas folhas completamente expandidas com tamanhos
similares, expostas luz solar e posicionadas na poro mediana de ramos dispostos no
tero mdio de todo o permetro da copa das plantas, ao final da estao de
desenvolvimento vegetativo da macieira (abril-2014). As folhas foram classificadas em cinco
tonalidades diferentes denominadas de 1 a 5, sendo que na tonalidade 1, folhas com menor
intensidade verde e na tonalidade 5 verde mais intenso. Em seguida as folhas, foram
acondicionadas individualmente em papel alumnio e colocadas em caixa de isopor com
gelo, e levadas imediatamente para o laboratrio de Ensaio Qumico para serem analisadas.
Em sala fechada e equipada com luz verde, foram retiradas quatro fatias de um dos lados da
nervura centra das folhas com auxlio de uma tesoura. Com o aparelho SPAD-502 foram
realizadas leituras das fatias foliares. Em seguida, procedeu-se a extrao dos pigmentos
das quatro fatias foliares atravs de macerao utilizando-se um cadinho de porcelana e
adio de etanol 95%. As extraes foram feitas a partir de aproximadamente 150 mg de
massa fresca foliar, sendo filtradas em papel filtro completando o volume de 50 mL de
bales volumtricos previamente envoltos com alumnio. Alquotas de 1,0 mL foram retiradas
dos bales e efetuadas as leituras de suas absorbncias em espectrofotmetro UV-visvel,
da marca Varian modelo 50 Cary, temperatura ambiente (+/- 22C), em 470, 664 e 648nm,
em cubeta de vidro.
Os teores dos pigmentos foram determinados pelas equaes de Lichtenthaler (1987)
e expressos em mg g
-1
de massa fresca. Os dados obtidos foram submetidos anlise de
correlao linear simples. Equaes de correlao e coeficientes de mltiplas determinaes
(R
2
) foram calculados usando o recurso de planilha grfica Microsoft Excel.

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RESULTADOS E DISCUSSO

Aps as leituras com o aparelho SPAD-502, observou-se que as tonalidades das
folhas de macieira Fuji Suprema ficaram compreendidas por intervalos discretos de acordo
com as tonalidades estudadas, com a tonalidade 1 (+/- 20 unidades SPAD); 2 (+/- 29
unidades SPAD); 3 (+/- 39 unidades SPAD) 4 (+/- 48 unidades SPAD) e 5 (+/- 58 unidades
SPAD).
Na Figura 1 mostrada a relao entre as leituras de SPAD e as concentraes
clorofila a.

y = 0,037x - 0,356
R = 0,995
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
1,2
1,4
1,6
1,8
2
20 30 40 50 60
C
l
o
r
o
f
i
l
a

a

(
m
g

g
-
1
M
F
)
Unidades SPAD

Figura 1- Curva de calibrao para o medidor porttil de clorofilas SPAD-502 versus a consentrao de
Clorofia a (Chl a) em folhas de macieira (Malus domestica Borkh.) Fuji Suprema. Caador, SC, 2014. MF =
matria fresca

Observou-se elevado ajuste linear dos parmetros avaliados pela regresso
polinomial com valor de coeficiente de determinao (R
2
) de 99,50%, evidenciando uma

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forte correlao positiva. Com base na equao y= 0, 037x - 0, 356, pode-se estimar o teor
de clorofila a em folhas da cultivar Fuji Suprema a partir das leituras SPAD efetuadas nas
mesmas condies ambientais do presente experimento. Como exemplo pode-se citar uma
leitura de 55 unidades SPAD que podem ser transformadas diretamente em 1, 679 mg de
clorofila a por grama de matria foliar fresca.



A Figura 2 tambm apresenta ajuste linear entre as unidades SPAD e os teores de
clorofila b.

y = 0,009x - 0,025
R = 0,984
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
20 30 40 50 60
C
l
o
r
o
f
i
l
a

b

(
m
g

g
-
1
M
F
)
Unidades SPAD

Figura 2- Curva de calibrao para o medidor porttil de clorofilas SPAD-502 versus a consentrao de
Clorofia b (Chl b) em folhas de macieira (Malus domestica Borkh.) Fuji Suprema. Caador, SC, 2014.MF =
matria fresca

A regresso polinomial linear mostrou uma relao entre os parmetros com valor de
(R
2
) de 98,4% evidenciando tambm uma forte correlao positiva. Com base na equao
y= 0, 009x - 0, 025, pode-se prontamente estimar o teor de clorofila b em folhas da cultivar
Fuji Suprema diretamente a partir das leituras SPAD efetuadas nas mesmas condies
ambientais do presente experimento. Como exemplo pode-se citar a mesma leitura de 55
unidades SPAD que prontamente podem ser transformadas em 0,47 mg de clorofila b por
grama de matria foliar fresca.

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J na Figura 3 pode ser observado que tambm houve um forte ajuste linear entre as
unidades SPAD e os teores de carotenoides totais.

y = 0,010x - 0,100
R = 0,998
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
20 30 40 50 60 C
a
r
o
t
e
n
o
i
d
e
s

t
o
t
a
i
s

(
m
g

g
-
1
M
F
)
Unidades SPAD

Figura 3- Curva de calibrao para o medidor porttil de clorofilas SPAD-502 versus a consentrao de
Carotenoides totais (Car
t
) em folhas de macieira (Malus domestica Borkh.) Fuji Suprema. Caador, SC, 2014.
MF = matria fresca

A regresso polinomial linear mostrou uma relao entre os parmetros com valor de
(R
2
) de 99,8% evidenciando tambm uma forte correlao positiva. Com base na equao
y= 0,010x - 0,100, pode-se estimar o teor de carotenoides totais em folhas da cultivar Fuji
Suprema diretamente a partir das leituras SPAD efetuadas nas mesmas condies
ambientais do presente experimento. Como exemplo pode-se citar a mesma leitura de 55
unidades SPAD que prontamente podem ser transformadas em 0,45 mg de carotenoides
totais por grama de matria foliar fresca.
Relaes semelhantes entre a concentrao desses trs pigmentos foliares e leituras
SPAD foram estabelecidas com outras espcies de plantas (YADAVA 1986; MARQUARD e
TIPTON, 1987; SCHAPER e CHACKO, 1991; ZOTARELLI et al., 2003; NEVES et al., 2005;
MARTINS et al., 2010 ).
Os mtodos tradicionais de extrao de clorofilas e carotenoides de folhas usando
solventes qumicos, alm de serem mtodos destrutivos, exigem condies de laboratrio e
mo-de-obra qualificada e intensiva, alm de serem demorados e caros. Estes resultados,
bem como os outros mencionados anteriormente, indicam que o SPAD-502 pode ser
utilizado para estimar com preciso as concentraes de pigmentos foliares.

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A importncia dessa relao pode ter muitas aplicaes para cultivar do estudo, visto
que as concentraes dos pigmentos mudam em resposta a fatores externos, como luz e as
atividades de poda influenciam na interceptao de luz pela planta, a quantificao das
concentraes de clorofilas e carotenoides rpida no campo pode fornecer informaes
importantes sobre o crescimento e plasticidade fisiolgica das plantas em resposta a
mudanas de ambientes (LARCHER, 1995;. RICHARDSON et al., 2002).
A quantidade de radiao solar absorvida por uma folha em grande parte uma
funo das concentraes foliares de pigmentos fotossintticos. Baixas concentraes de
clorofilas podem, por conseguinte, limitar diretamente o potencial fotossinttico e, portanto a
produo (FILELLA et al., 1995). Um medidor SPAD ideal para a conduo de um pomar
de macieiras e outras frutferas na medida em que requer um mnimo de treinamento no seu
uso. A anlise rpida (1 a 2 segundos por leitura) permitindo que muitas plantas sejam
avaliadas num nico dia. importante ressaltar que as medidas no so destrutivas e
invasivas e permitem amostragens repetitivas peridicas (LOH et al., 2002;. RICHARDSON
et al., 2002). Porem, o equipamento necessita ser calibrado para a determinao dos
pigmentos para cada um das cultivares de interesse.


CONCLUSO / CONSIDERAES FINAIS

A relao verificada entre a leitura com o SPAD-502 e os teores de pigmentos
extraveis evidencia que as leituras efetuadas com o SPAD-502 estimam adequadamente o
grau de tonalidades das folhas de macieiras Fuji Suprema. Portanto, as leituras efetuadas
pelo equipamento podem substituir, com boa preciso, as determinaes tradicionais dos
teores de clorofilas e carotenoides para a cultivar Fuji Suprema.





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