Prctica No.

2 HEMOSTASIA Y GRUPO SANGUNEO

NOMBRES: Garca Marcelino Jos Antonio ______________
Jimnez Hernndez Ray Emanuel __________________
Jurez Soto Sinuhe Josafaf __________________
Prez Gmez Cesar Alejandro __________________
Rangel Rangel Diana Alejandra __________________
Zambrano Montiel Lilia Yolanda __________________
PROFESORES: Edith Araceli Cabrera Muoz
Ignacio Gonzlez Snchez
MATERIA: Laboratorio de Fisiologa
PRACTICA No 2. HEMOSTASIA Y GRUPO SANGUINEO

INTRODUCCIN
La sangre, un tejido conectivo lquido, posee tres funciones generales: transporte,
regulacin y proteccin llamada tambin tejido sanguneo, esta se compone de elemento
corpusculares (eritrocitos, leucocitos, y trombocitos) y el plasma.
1

El plasma sanguneo es la porcin liquida de la sangre en la que estn suspendidos los
elementos celulares.
2
El plasma sanguneo est compuesto por sustancias orgnicas e
inorgnicas:
Sustancias inorgnicas
a) Agua,
b) Sales minerales; o electrolitos

Sustancias orgnicas
a) Protenas plasmticas. Son de tres tipos: fibringeno, seroalbminas y
seroglobulinas. Proporcionan la viscosidad de la sangre y participan en la regulacin
del equilibrio cido bsico de la misma; en la defensa inmunolgica del organismo
(globulinas) y en la coagulacin sangunea (fibringeno).
b) Sustancias nutritivas. Aminocidos, glucosa, cidos grasos y glicerol, vitaminas.
c) Gases. El oxgeno, el dixido de carbono y el nitrgeno, se encuentran disueltos en el
plasma.
d) Productos del metabolismo protenico.
e) Hormonas y anticuerpos.
Como se ha mencionado anteriormente la sangre cumple con tres funciones principales
dentro de las cuales se encuentra la funcin de proteccin donde cabe destacar al proceso de
coagulacin que es una fase dentro de la hemostasia.

1
TORTORA, Gerard. J. ,Principios de anatoma y fisiologa, Ed. Medica Panamericana ,11ed, p.671
2
SILVERTHORN,Fisiologa Humana un Enfoque Integrado, Ed. Medica Panamericana, 4edicion, p. 536
Prctica No.2 HEMOSTASIA Y GRUPO SANGUNEO

Cuando hay lesin de un vaso sanguneo, se activan varios mecanismos fisiolgicos que
promueven la hemostasia, o el cese del sangrado (, sangre; , detencin). La
solucin de continuidad del revestimiento endotelial de un vaso expone a la sangre a
protenas colgeno del tejido conjuntivo subendotelial. Esto inicia tres mecanismos
hemostticos separados, pero que se superponen: 1) vasoconstriccin, 2) la formacin de un
tapn plaquetario y 3) la produccin de una red de protenas fibrina que penetran el tapn
plaquetario y lo rodean.
3

La coagulacin es una compleja cascada de reacciones enzimticas en la que cada factor
activa muchas molculas del siguiente segn una secuencia fija. Al final se produce una
gran cantidad de producto (la protena insoluble fibrina). Puede ser dividida en tres
procesos
1. Dos vas llamadas va extrnseca y va intrnseca (fig. 1), llevan a la formacin de
protrombinasa. Una vez sucedido esto, los pasos involucrados en los dos pasos
siguientes son iguales para ambas vas y se les denomina va final comn.
2. La protrombinasa convierte a la protrombina (una protena plasmtica formada por
el hgado en la enzima trombina.
3. La trombina convierte al fibringeno soluble (otra protena plasmtica formada por
el hgado) en fibrina insoluble. Esta forma la red el coagulo.
4

5


3
FOX, Stuart. I., Fisiologa Humana, Ed. Mac Graw Hill, 12 ed, p.410
4
TORTORA, Gerard. J. ,Principios de anatoma y fisiologa, Ed. Medica Panamericana ,11ed, p.686
5
FOX, Stuart. I., Fisiologa Humana, Ed. Mac Graw Hill, 12 ed, p.412
Prctica No.2 HEMOSTASIA Y GRUPO SANGUNEO

Cuando la sangre se extrae de los vasos sanguneos permanece un tiempo corto en estado
lquido, posteriormente se coagula y adquiere una consistencia gelatinosa densa; el volumen
se retrae (cogulo) y se libera un lquido denominado suero sanguneo.
Los anticoagulantes son sustancias de diferente composicin qumica que evitan que se
lleven a cabo los procesos de coagulacin, ejemplos de esto son el citrato de sodio y la
heparina.
Grupos sanguneos
Ante una prdida abundante de sangre - por un accidente traumtico o por una
intervencin quirrgica se requiere inyectar una cantidad de este lquido tisular para
completar el volumen normal del paciente; de esta manera sus funciones vitales continan
desarrollndose normalmente. La sangre que se emplea debe poseer ciertas caractersticas
como el de pertenecer a un determinado grupo sanguneo: O (universal), A, B o AB y
que adems sea del grupo Rh (+) o Rh (-).La sangre de cualquier ser humano pertenece a
uno de los cuatro grupos antes mencionados.
6

La clasificacin hecha en los cuatro grupos sanguneos se basa en la presencia o ausencia de
dos antgenos (aglutingenos) A y B en los eritrocitos.
Se denominan antgenos a cualquier sustancia extraa que se introduzca al organismo. El
sistema inmunolgico elabora sustancias llamadas anticuerpos que reaccionan frente al
antgeno introducido, con la finalidad de neutralizarlo o destruirlo, si aquellos tienen efectos
nocivos para el cuerpo humano. A los antgenos sanguneos A y B conocidos tambin
como aglutingenos y a los anticuerpos (globulinas plasmticas antiA y antiB) presentes en
el plasma sanguneo tambin se les conoce como aglutininas, reaccionan entre s
produciendo cuando se encuentran juntos, la aglutinacin, acumulacin o agregacin de los
eritrocitos.
Si la aglutinacin de los eritrocitos se realiza en forma abundante y masiva, entonces stos
pueden formar tapones que cierran el paso de la sangre a travs de los vasos sanguneos ms
pequeos (arteriolas y capilares) ocasionando la falta de irrigacin sangunea a tejidos y
rganos, produciendo, en casi todos los casos, la muerte del individuo.
La persona que tiene grupo sanguneo AB, denominado tambin receptor universal,
puede recibir sangre de los otros tres grupos sanguneos, pues el plasma carece de
aglutininas y en consecuencia, no podr aglutinar a los eritrocitos del donador.
Existe otro antgeno sanguneo denominado Rh (factor Rh). Cuando una madre Rh (-) gesta
un producto de padre Rh (+) y, durante el embarazo se produce por diversas circunstancias
un leve contacto entre la sangre fetal y la sangre materna (pequeas roturas de vasos
corinicos fetales), el sistema inmunolgico materno desarrolla anticuerpos contra el factor

6
MONTALVO, Cesar, E., Tejido sanguneo y hematopoyesis, Facultad de Medicina UNAM, p.16
Prctica No.2 HEMOSTASIA Y GRUPO SANGUNEO

Rh (+), por lo tanto en la sangre de la madre circularn estos anticuerpos. Si en una segunda
gestacin la madre vuelve a concebir un producto Rh (+) los eritrocitos del feto sern
atacados por los anticuerpos anti Rh (+) y experimentarn destruccin (hemlisis),
producindose lo que se conoce como eritroblastosis fetal que, en los casos de una gran
existencia de los mismos puede ocasionar la muerte del recin nacido.
HIPTESIS

o Si adicionamos un anticoagulante a la sangre entonces esta presenta e fenmeno de
coagulacin independientemente del tiempo que transcurra despus de haberla
extrado.
o Si sometemos la sangre recin extrada a temperaturas con diferencias radicales a las
que se encuentra normalmente esta no coagulara, o lo har pero en un rango muy
amplio de tiempo.
o Si mantenemos la sangre extrada a 37C entonces coagulara en un tiempo
determinado siempre y cuando no est en relacin con un anticoagulante.

OBJETIVOS

Valorar, en el laboratorio, las diversas etapas del proceso de hemostasia mediante
tcnicas in vitro e in vivo.
Desencadenar e inhibir in vitro el proceso de la coagulacin sangunea,
modificando variables fisiolgicas como la temperatura y la concentracin de calcio
en el medio.
Observar en el microscopio al polmero de fibrina.
Manejar adecuadamente las muestras de sangre humana.
Observar la reaccin de aglutinacin en muestras de sangre al mezclarlas con
antisueros del sistema AB0 y del sistema Rh.
Determinar los diferentes tipos sanguneos de muestras obtenidas de los alumnos.
Determinar la frecuencia de los grupos sanguneos en la poblacin estudiada y
compararla con otras poblaciones ya reportadas.






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MATERIALES Y METODOS
Biolgico
Aproximadamente 5 mL de sangre obtenida por venipuncin.
Sangre obtenida por puncin con lanceta.

Cristalera y material
1 Papel filtro de forma circular.
1 cronmetro.
Torundas de algodn.
Alcohol.
5 tubos de ensaye de 1 x 10 cm.
1 gradilla.
1 recipiente para hielo.
1 termmetro.
1 liga para torniquete.
2 vasos de precipitados de 250 mL.
Hielo.
Solucin de citrato de sodio al 4%.
Solucin de cloruro de calcio al
4%.
6 portaobjetos.
1 cubreobjetos.
1 tringulo de vidrio o 3 varillas
cortas.
1 caja de Petri.
1 microscopio ptico.
Agua destilada.
Solucin de azul de metileno al
1%.
Lancetas estriles (una por cada
integrante del equipo).
Palillos.
Suero anti-A.
Suero anti-AB.
Suero anti-B.
Suero anti-D.











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RESULTADOS Y ANLISIS DE RESULTADOS:
1. FASE VASCULAR Y PLAQUETARIA
El sujeto de prueba complet el proceso de hemostasia en un tiempo de 1.4 min. Se observa
una disminucin en el dimetro de la mancha formada por la sangre a medida que el tiempo
transcurre. Se observan 8 manchas de sangre sobre el papel siendo las ltimas dos casi
imperceptibles.
2. FASE PLASMTICA
a) EFECTO DE LA TEMPERATURA
HIELO(A) 37C(B) 60C(C)
COAGULACIN NO SI NO
TIEMPO DE
COAGULACIN
- 7 min 30 seg -

Slo se aprecia la coagulacin en la muestra que hemos llamado B.

MUESTRA COAGULACIN A 37C TIEMPO DE
COAGULACIN
A SI 45 seg
C NO -

Al pasar los tubos que contienen la muestra A y B al bao Mara de 37C slo coagula la
muestra A que previamente haba sido sumergida en un bao de hielo. La muestra C no
coagula despus de haber estado en un bao caliente, a pesar de que el nuevo bao tenga la
temperatura propicia para que inicie la formacin del coagulo.
b) EFECTO DEL CALCIO
Se observa que al agregar citrato de calcio y dejar en incubacin durante 15 min no ocurre la
coagulacin. Al agregar la disolucin de CaCl
2
y mezclar suavemente se observa de
inmediato la aparicin de una masa slida en el tubo con sangre, lo cual sugiere la
formacin de un coagulo de la sangre al entrar en contacto con el in Ca
2+





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c) FORMACIN DE FIBRINA

La muestra se obtuvo mediante la tcnica descrita en el protocolo. Se observa un mejor
detalle de la maya de fibrina teida por el azul de metileno. Tiene la apariencia de una
telaraa fina. No se observan otras formas en el espacio circundante. Es observada en el
microscopio ptico con un aumento de 40x.
3. GRUPO SANGUINEO

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Como se puede observar en la determinacin del grupo sanguneo fue necesario suministrar
un antisuero y observar en cual se produca una aglutinacin, en el caso de todos los
miembros de nuestro equipo se pudo examinar que hubo una aglutinacin con respecto al
antisuero D, lo que se interpreta que nuestro grupo sanguneo corresponde al O
+
.
DISCUSIN DE RESULTADOS
A. Fase vascular y plaquetaria
La hemostasia es el fenmeno fisiolgico que detiene el sangrado. La hemostasia es un
mecanismo de defensa que junto con la respuesta inflamatoria y de reparacin ayudan a
proteger la integridad del sistema vascular despus de una lesin tisular. Se inicia a los pocos
segundos de producirse la lesin interaccionando las plaquetas y la pared vascular y tiene
una importancia enorme para detener la salida de sangre en los capilares, arteriolas
pequeas y vnulas. Se produce una vasoconstriccin derivando la sangre fuera del rea
lesionada. Las plaquetas se adhieren al vaso lesionado y se agrupan formando el tapn
plaquetar. As se sella la lesin de la pared y cede temporalmente la hemorragia.
7

Es por tanto que al haberse pinchado el dedo con la lanceta se inicia la primera fase de la
hemostasia, una lesin a nivel tisular desencadena una serie de eventos a partir de la
vasoconstriccin y la formacin de un tapn permanente para evitar el desangrado, de esta
manera se sustenta lo observado sobre la disminucin del dimetro de las gotas de sangre
sobre el papel filtro en un tiempo aproximado de 1.4 min hasta que estas desaparecen
tenuemente.

7
http://www.scartd.org/arxius/hemostasia_05.pdf (consultado 26/08/14 a las 17:20 hrs.)
Prctica No.2 HEMOSTASIA Y GRUPO SANGUNEO

B. Fase plasmtica
a) Efecto de la temperatura
Tiempo de coagulacin es la duracin necesaria para la coagulacin de la sangre in vitro:
comprende el tiempo de activacin de los factores de contacto, de tromboplastina,
de trombina y de fibrinoformacin Segn el mtodo utilizado el tiempo de coagulacin es de
5 a 10 minutos. En tubo de ensayo es de 7 minutos a 37 centgrados de temperatura.
8

Sustentndonos en lo anterior podemos decir entonces que el tubo que se encontraba a 37C
coagulo debido a que se encontraba a una temperatura ptima (temperatura corporal).
Por otro lado los tubos que se encontraban a 60C y en el bao de hielo no coagularon
debido a que pudo existir una inhibicin enzimtica por parte de alguna enzima involucrada
en el proceso de coagulacin recordando que las enzimas son protenas, molculas frgiles,
sensibles, y que a altas temperaturas sufren lo que conocemos como su desnaturalizacin, y
que una enzima desnaturalizada, es decir, en la que slo se mantiene su estructura primaria,
no tiene capacidad para catalizar una reaccin; en general, la temperatura crtica de las
enzimas oscila entre los 55 y los 60 C
9
; sin embargo en el bao de hielo no hubo un
reaccin de coagulacin ya que la velocidad de reaccin enzimtica a bajas temperaturas es
casi nula por tanto en este caso el proceso de coagulacin tampoco fue observado. Ahora
bien aunado a lo anterior tambin se explica porque el tubo que se encontraba en el bao de
hielo al someterlo a un bao de 37C coagulo en cambio el de 60c no lo hizo debido a que
tal vez sus enzimas presentes en el factor de coagulacin ya se encontraban desnaturalizadas
y no podan cumplir ya con su funcin.
b) Efecto del calcio
En el tubo que se suministr citrato de calcio despus de haberlo dejado un periodo de
tiempo en el bao de 37C no hubo coagulacin ms sin embargo despus de aadirle CaCl2
la coagulacin fue inmediata debido a que la concentracin de Ca
2+
aumento, ya que es bien
sabido que el citrato de sodio produce quelacion del calcio. Por este medio, las
concentraciones de Ca
2+
en la sangre que pueden participar en la secuencia de coagulacin
se disminuyen, y se inhibe la coagulacin
10
.

C. Grupos sanguneos

En trminos de los antgenos presentes sobre la superficie de los eritrocitos, una persona
puede ser tipo A (con solo antgenos A), tipo B (con solo antgenos B), tipo AB (con
antgenos tanto A como B), o tipo O (sin antgenos A y B). El tipo de sangre de cada persona
A, B u O denota los antgenos presentes en la superficie del eritrocito
11
, de tal manera
que podemos determinar el grupo sanguneo a partir de lo anterior planteado ya que al

8
http://www.portalesmedicos.com/diccionario_medico/index.php/Coagulacion (consultado 26/08/14 a las
17:33 hrs.)
9
http://www.biologiasur.org/apuntes/base-fisico-quimica/base/enzimas/regulacion.html (consultado
26/08/14 a las 17:51 hrs.)
10
FOX, Stuart. I., Fisiologa Humana, Ed. Mac Graw Hill, 12 ed, p.413
11
FOX, Stuart. I., Fisiologa Humana, Ed. Mac Graw Hill, 12 ed, p.408
Prctica No.2 HEMOSTASIA Y GRUPO SANGUNEO

suministrar los suero correspondientes que contiene las aglutininas, los aglutingenos
presentes en los eritrocitos tendern a aglutinarse permitindonos as determinar el tipo
sanguneo; por ejemplo si suministramos antisuero A y produce aglutinacin entonces se
trata de un grupo sanguneo A, lo mismo sucede con el B, sin embargo si aglutina al
suministrar antisuero A y antisuero B se trata de un grupo AB si no aglutina ni en A, ni en B
se trata de un grupo sanguneo O; ahora bien para determina el factor Rh se suministra un
antisuero D si hay aglutinacin es un Rh + si no un Rh -.
De esta manera al hacer nuestra determinacin de grupo sanguneo todos los miembros del
equipo obtuvieron aglutinacin solo suministrando antisuero D lo que se traduce a que
todos tenemos un grupo sanguneo O
+
.

CONCLUSIONES
Se determinaron los grupos sanguneos, al observar la aglutinacin de las clulas
sanguneas con los diferentes sueros de prueba.
Se inhibi el proceso natural de coagulacin sangunea al modificar algunas variables
importantes como la temperatura y la concentracin de iones Ca+
Se observ con claridad el polmero fibrina al microscopio siendo este esencial en el
ltimo proceso de la hemostasia, que es la transformacin de fibringeno en fibrina.
La hemostasia es un proceso fisiolgico natural, que detiene el sangrado tras una
lesin tisular, produciendo un producto gelatinoso llamado coagulo.


BIBLIOGRAFIA
FOX, Stuart. I., Fisiologa Humana, Ed. Mac Graw Hill, 12 ed
MONTALVO, Cesar, E., Tejido sanguneo y hematopoyesis, Facultad de Medicina
UNAM
TORTORA, Gerard. J. ,Principios de anatoma y fisiologa, Ed. Medica Panamericana
,11ed