poltica c&T Experimentaoy

Rotas
alternativas
Esforo de pesquisa para substituir o uso de
animais em testes comea a mostrar resultados

anha musculatura no pas uma articulao entre laboratrios pblicos, grupos

de pesquisa e rgos governamentais
para reduzir ou substituir o uso de
animais em testes de segurana e eficcia de
produtos. O esforo foi deflagrado em 2012, com
a criao pelo governo federal da Rede Nacional
de Mtodos Alternativos (Renama) e o lanamento de uma chamada de projetos pelo Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico
e Tecnolgico (CNPq), que contemplou 10 projetos de pesquisa no mbito da Renama. Todos
esto em andamento e tm focos diversos, como
a produo de kits de pele artificial para testes de
sensibilidade de cosmticos, estudos com larvas
capazes de substituir mamferos em exames de
toxicidade ou a reduo do nmero de roedores
no controle de qualidade de vacinas. Trs laboratrios fazem parte do ncleo central da Renama.
Um deles o Laboratrio Nacional de Biocincias
(LNBio), em Campinas. Os outros ficam no Rio
de Janeiro: o Instituto Nacional de Controle de
26 z junho DE 2014

Qualidade em Sade (INCQS), vinculado Fundao Oswaldo Cruz, e o Instituto Nacional de

Metrologia, Qualidade e Tecnologia (Inmetro).
Em maro, essa estrutura ainda em fase de
consolidao foi desafiada a cumprir uma meta ambiciosa: dar suporte para a substituio
progressiva, nos prximos cinco anos, do uso
de animais em testes, sempre que existir uma
alternativa validada. Para novos mtodos ainda
no validados, esse processo envolver o Centro
Brasileiro de Validao de Mtodos Alternativos
(Bracvam) e toda a estrutura da Renama. A substituio foi decidida pelo Conselho Nacional de
Controle da Experimentao Animal (Concea),
instituio colegiada vinculada ao Ministrio da
Cincia, Tecnologia e Inovao (MCTI), responsvel desde 2009 por estabelecer normas para
a experimentao animal no Brasil e substituir
animais para propsitos cientficos e didticos
quando existirem recursos alternativos. Em maio,
o Concea recebeu do Bracvam a primeira recomendao de mtodos alternativos j validados

foto eduardo cesar

Fabrcio Marques

Pele cultivada
artificialmente por
pesquisadores da USP:
objetivo criar kit
comercial para testes
de cosmticos

e aceitos internacionalmente. So 17 tcnicas,

que envolvem sensibilidade cutnea, potencial
de irritao e corroso ocular e toxicidade. A
resoluo permitir que o pas efetivamente adote
mtodos alternativos em testes de agrotxicos,
cosmticos e medicamentos, diz o coordenador
do Concea, Jos Mauro Granjeiro.
O maior potencial para a substituio de animais por mtodos alternativos no est nas pesquisas cientficas de cunho acadmico, mas sim
nos testes exigidos pelas agncias regulatrias
para garantir a segurana e a eficcia de produtos. Os experimentos com animais feitos para
averiguar hipteses cientficas so idealizados
de forma independente pelos pesquisadores:
cada um tem a sua pergunta especfica e idealiza um conjunto peculiar de experimentos para
respond-la. Portanto, muito mais difcil padroniz-los, explica Eduardo Pagani, pesquisador e gerente de desenvolvimento de frmacos
do LNBio. J os testes exigidos por agncias do
mundo inteiro para cosmticos e outros produ-

tos so sempre feitos de acordo com mtodos

padronizados. Neles, h mais espao para propor
alternativas que no usem animais, observa. A
exigncia dos testes in vivo para registro de medicamentos e cosmticos comeou na dcada
de 1960, aps o conhecido acidente com a substncia talidomida. O medicamento foi vendido
no mundo todo com a indicao de combater o
enjoo em grvidas. Milhares de mes que usaram
o remdio tiveram filhos com deformaes. J o
movimento para substituir os modelos animais
por mtodos alternativos ganhou fora em 2003,
quando a Europa props o banimento do uso em
testes de cosmticos, e demorou duas dcadas
para ser implementado.
Os projetos sobre mtodos alternativos apoiados pelo MCTI em 2012 foram divididos em duas
vertentes. Numa delas, a meta foi identificar grupos que j trabalhavam com mtodos alternativos e apoiar estudos realizados por eles. Nove
projetos de grupos de So Paulo, Bahia, Gois,
Rio de Janeiro, Santa Catarina e Rio Grande do
pESQUISA FAPESP 220 z 27

Sul foram selecionados. Uma segunda vertente

tinha foco especfico: desenvolver competncia
no Brasil para produzir em escala industrial kits
de pele humana cultivada, utilizados pela indstria de cosmticos para testes de segurana de
seus produtos, mas cuja importao se tornou
um problema no Brasil. Acontece que os kits com
clulas vivas deterioram em poucos dias e a demora nos trmites alfandegrios frequentemente
inviabiliza sua aquisio o que leva as indstrias
a realizar tais testes no exterior.

projeto contemplado foi o de um grupo

da Faculdade de Cincias Farmacuticas
da USP, liderado por Silvya Stuchi-Maria
Engler, que comeou a produzir pele artificial
em meados dos anos 2000, com apoio da FAPESP (ver Pesquisa FAPESP n 166). Produzida
a partir de clulas retiradas de doadores, a pele
reproduz os mesmos tecidos biolgicos da humana e pode ser utilizada para avaliar a toxicidade
e a eficcia de novos compostos para frmacos
e produtos cosmticos. Originalmente, a pesquisa sobre pele cultivada buscava dar suporte
a outra linha de investigao em que Silvya est
envolvida: o estudo de molculas capazes de deter o melanoma, tumor de pele muito agressivo.
Logo percebemos que a pele poderia ajudar as
empresas, afirma. Os kits so uma alternativa
para testes de cosmticos, mas bom lembrar
que o uso de animais segue imprescindvel, por
exemplo, em testes para o desenvolvimento de
medicamentos, observa Silvya.
O Instituto Butantan, com sua vocao para desenvolver e produzir soros e vacinas, vem diminuindo a quantidade de animais, como camundongos e cobaias, utilizados para o controle de
qualidade. Esse esforo j levou, entre outros avan28 z junho DE 2014

Busca de
modelos
alternativos
importante
para criar
mtodos mais
eficientes,
diz Maria
Jos Giannini

os, reduo em mais de 60% do uso de

camundongos em testes de qualidade da
vacina recombinante contra a hepatite B,
graas criao de um teste imunoenzimtico com funes equivalentes. O trabalho
do instituto habilitou-o a apresentar um
projeto no edital da Renama, envolvendo
vrios mtodos alternativos para controle
de qualidade de vacinas e soros. Numa das
frentes de pesquisa, o objetivo reduzir o
nmero de animais nos testes em lotes da
vacina de difteria e ttano, com a adoo
de um ensaio in vitro para detectar a atividade imunognica. Em outra, a meta
substituir ensaios em cobaias por ensaios
em clulas no controle da anatoxina diftrica toxina da difteria que mantm
atividade imunognica, embora no seja mais txica. Um terceiro foco a adaptao para vacinas
produzidas pelo instituto de um kit que substitui
o uso de coelhos em testes de pirognios, contaminantes que causam febre e podem ser oriundos
de microrganismos ou aglomerados proteicos. Em
quarto lugar, procura-se reduzir o uso de camundongos na sorologia para vacina de coqueluche a
ideia utilizar para a doena os mesmos animais
usados para dosar anticorpos contra difteria e ttano. A reduo do nmero sensvel: de 170 animais por lote de vacina para apenas seis cobaias.
Por fim, o Butantan j est obtendo xito em
uma tcnica com potencial para substituir o uso
de camundongos por um ensaio imunoenzimtico
numa etapa da produo da vacina contra a raiva. A reduo e a substituio de animais um
caminho sem volta, diz o qumico Wagner Quintilio, pesquisador do Butantan responsvel pelo
projeto. Existe a presso da sociedade e dos comits de tica em pesquisa, que no permitem o

fotos 1 e 2 eduardo cesar 3 lo ramos 4 wikimedia commons

bactrias e fungos patgenos. Tem um sistema

imune para o reconhecimento e a eliminao de
patgenos com alta semelhana ao dos vertebrados. Alm disso, seu genoma foi completamente
sequenciado, o que ainda no o caso do Galleria, afirma Maria Jos. Os dois modelos esto
sendo testados para avaliar a virulncia de fungos Paracoccidioides, endmicos na Amrica Latina. Outros modelos, como o do peixe zebrafish,
sero testados. Em 2010,
a Pr-reitoria de Pesquisa da Unesp, cuja titular
a professora Maria Jos,
organizou em So Paulo
O uso de animais imprescindvel no
um frum internacional
desenvolvimento de medicamentos,
para discutir alternativas
a testes de toxicidade
diz Silvya Stuchi, da USP
com animais, que trouxe
autoridades como Thomas
Hartung, diretor do Cena fim de criar e testar tcnicas que reduzam o uso tro de Alternativas aos Testes em Animais, da
de animais. Maria Jos supervisora da ps-dou- Universidade Johns Hopkins. A busca de modetoranda Liliana Scorzoni, responsvel por uma los alternativos importante tambm para desenpesquisa sobre modelos capazes de substituir volver mtodos mais eficientes. Modelos animais
mamferos por outros organismos em testes de tm limitaes e, s vezes, no so suficientes
virulncia de micrbios e a eficcia de drogas. O para garantir a segurana, como se pode ver com
front mais adiantado o do Galleria mellonella, es- medicamentos aprovados que acabam retirados
pcie de inseto lepidptero, cuja larva til para do mercado, diz Maria Jos.
A deciso do Concea de impulsionar o recoverificar a atividade de determinadas substncias.
de fcil manuseio e pode minimizar o uso de nhecimento de mtodos alternativos validados
animais, diz Maria Jos, que tambm membro foi uma resposta a uma petio da organizao
do Conselho Superior da FAPESP. A larva tem no governamentalHumane Society Internaclulas semelhantes s do sistema imunolgico. tional, que reivindicava o banimento de ensaios
Quando se injeta uma substncia txica, ela rea- em animais para cosmticos. No estado de So
ge e escurece, afirma. A expectativa de que o Paulo, ensaios em animais para cosmticos esGalleria substitua outros animais, como ratos e to proibidos por uma lei estadual sancionada
camundongos, em pelo menos alguma etapa dos em janeiro de 2014. O Concea, que no aceitou
o pedido, entendeu que acelerar a implantao
testes de toxicidade e virulncia.
Outro modelo alternativo na mira do grupo de tcnicas alternativas promover maior reduda Unesp o C. elegans, nematdeo de um mil- o no uso de animais que apenas a proibio
metro de comprimento sensvel infeco por exclusiva do uso de animais para anlise de cosuso exagerado de animais. H tambm a presso
econmica. Criar os animais em condies adequadas custa caro e ocupa muito espao, afirma.
J o projeto do grupo liderado pela micologista Maria Jos Giannini, professora da Faculdade
de Cincias Farmacuticas de Araraquara, da
Universidade Estadual Paulista (Unesp), prev
a criao do Centro para o Desenvolvimento e
Validao de Mtodos Alternativos (Cedevam),

1 e 2 Produo de
pele artificial pelo
grupo da professora
Silvya Stuchi-Maria
Engler, da USP
3 e 4 Zebrafish e
Galleria mellonella,
cuja larva pode
substituir animais em
testes de toxicidade:
modelos alternativos

pESQUISA FAPESP 220 z 29

Cultura de clulas
para o ensaio de
citotoxicidade para
anatoxina diftrica
que substitui o uso
de cobaias no
controle de
qualidade da vacina
contra difteria

mticos, j que praticamente no se usam mais

animais para este fim. O banimento completo
colocaria em xeque a segurana da populao,
diz o mdico e biofsico Marcelo Morales, professor da Universidade Federal do Rio de Janeiro
(UFRJ) e ex-coordenador do Concea. Ele pode
inviabilizar o desenvolvimento de cosmticos
com ingredientes novos ou molculas descobertas na nossa biodiversidade que contenham
contaminantes desconhecidos, afirma. Luiz
Henrique do Canto Pereira, coordenador-geral
de biotecnologia e sade do MCTI, afirma que
o banimento poderia prejudicar a estratgia definida pelo MCTI de substituir, reduzir e refinar
o uso de animais em testes sempre que isso for
possvel. A campanha pelo banimento atropela
o esforo que estamos fazendo desde 2011, quando comeamos a conceber essa iniciativa, para
organizar no pas uma rede estruturada, capaz
de validar e disseminar de forma mais ampla os
mtodos alternativos, incluindo no apenas cosmticos mas tambm frmacos e agrotxicos,
afirma. Mesmo na Europa h salvaguardas que
permitem a realizao de testes se houver riscos
sade da populao.

quem veja certo aodamento no prazo de

cinco anos para a substituio estipulado
pelo Concea. Comeamos recentemente
a investir no desenvolvimento de mtodos alternativos aqui no Brasil e agora corremos o risco
de morrer na praia se no tivermos resultados
imediatos, diz Maria Jos Giannini, da Unesp.
As empresas, pressionadas pelo prazo, podero importar tcnicas em vez de usar a expertise nacional. Isso j acontece hoje. Empresas de
cosmticos afirmam que no fazem testes com
animais no Brasil. Mas fazem em outros pases,
para garantir a segurana dos produtos, explica.
30 z junho DE 2014

A expectativa de Octavio Presgrave, coordenador do Bracvam, de que prticas aceitas

internacionalmente tenham aprovao rpida.
Para a validao interna ser necessrio demonstrar que os registros j obtidos no exterior se reproduzem em testes feitos nos nossos laboratrios, afirma Presgrave, que pesquisador do
Instituto Nacional de Controle de Qualidade em
Sade (INCQS). Segundo ele, o prazo de cinco
anos factvel. tempo suficiente para que as
empresas e laboratrios se adaptem,
diz. Em outros casos, o trabalho do
Bracvam ser mais demorado.
o caso, por exemplo, do protocolo
Banimento
Het-Cam, que busca substituir o uso
completo de
de coelhos por uma membrana do
ovo de galinha na identificao de
testes de
compostos corrosivos ou muito irritantes. O mtodo, criado na Eucosmticos
ropa em 1985, aceito apenas como
pr-teste na Frana e na Alemanha.
pe em xeque
O processo do Het-Cam ser o prisegurana da
meiro estudo de validao no Brasil
seguindo preceitos internacionais,
populao,
afirma Presgrave. Quando deixamos de usar animal num teste, h
diz Marcelo
um ganho tico importante. Mas um
novo mtodo tambm significa criar
Morales
conhecimento. Desenvolvemos inovaes na busca de mtodos mais fidedignos e sensveis, afirma.
Em outra frente para reduzir o uso de animais
em testes de laboratrio, o LNBio recebeu recursos do MCTI para criar um ncleo de testes in
silico, para reduzir o uso de animais na pesquisa
de medicamentos. In silico refere-se ao silcio
utilizado em circuitos integrados e significa em
computador. Essa expresso foi criada em analogia s expresses in vivo e in vitro, utilizadas h

fotos1 eduardo cesar 2 miguel boyayan

uso injustificvel de animal em projetos previsivelmente destinados ao fracasso.

O LNBio divulgou no ms passado os resultados de um edital que franqueou a empresas, institutos de pesquisa e universidades a possibilidade
de realizar testes in silico no laboratrio. Foram
recebidas 19 propostas de sete empresas. Todas
foram aprovadas e, nos prximos meses, vamos
iniciar os testes, diz Tiago Sobreira, pesquisador de bioinformtica do
LNBio responsvel pela
parte operacional dos testes in silico. As empresas
Testes in silico evitam desperdcio de manifestaram o interesse
de participar da chamatempo e dinheiro e o uso injustificvel
da e agora negociaro os
termos dessa participao,
de animais, afirma Pagani, do LNBio
que inclui a proteo de
segredos industriais. Entre os contemplados esto
tambm podem ajudar a avaliar se uma determi- laboratrios, como Farmanguinhos, Cristlia e
nada molcula, mesmo com potencial, tem mes- Eurofarma, e indstrias de cosmticos, como
mo chances de ser absorvida pelo organismo se Boticrio e Natura. Quem desenvolve frmaadministrada, por via oral. Estimativas clssicas cos diz que demora 15 anos e custa R$ 1 bilho
do conta de que de 5 mil a 10 mil molculas so para colocar um produto no mercado. O Brasil
inicialmente avaliadas para potencial atividade tem um dficit comercial farmacutico de R$ 6
em um alvo; 250 so sintetizadas e iniciam testes bilhes por ano. Precisamos gerar um esforo
em animais; cinco iniciam os testes clnicos em pblico para os brasileiros desenvolverem rehumanos e apenas uma chega ao mercado como mdios aqui, diz Pagani.
medicamento. A ideia dos testes in silico diminuir ainda mais o nmero de substncias que
implementao de mtodos alternativos
so submetidas a testes em animais pela eliminadepende da existncia de laboratrios reo rpida daquelas que se mostrarem inviveis.
conhecidos nas chamadas boas prticas
Trata-se de um filtro que evita o desperdcio de de laboratrio (BPL), mas eles ainda so poucos
tempo, recursos financeiros e principalmente o no Brasil. As boas prticas contribuem para a
rastreabilidade e, portanto, para a confiana no
estudo realizado. A confiabilidade dos mtodos
alternativos tambm ser garantida pela realizao de comparaes entre os laboratrios da
Renama, diz o coordenador do Concea, Jos
Mauro Granjeiro, responsvel por essa rea no
Inmetro. Recentemente, o Inmetro coordenou
uma comparao entre cinco laboratrios da rede,
com apoio de uma consultoria internacional com
experincia Centro Europeu para Validao de
Mtodos Alternativos (Ecvam, na sigla em ingls) , cujos resultados esto sendo analisados.
A ampliao dos estudos sobre mtodos alternativos depender de um reforo no financiamento aos grupos de pesquisa envolvidos, observa
Luiz Henrique Canto, do MCTI. Conseguimos
desenhar uma estrutura e comeamos a avanar
e o MCTI vem envidando todos os esforos,inclusive buscando apoio no Congresso por meio
de emendas parlamentares, para o fortalecimento da Renama. Acreditamos que essa iniciativa
poder beneficiar em muito o desenvolvimento
cientfico e tecnolgico do pas na rea das cin2
cias da vida, afirma. n
bastante tempo. Testes in silico envolvem simulaes em computador para avaliar, por exemplo,
se molculas candidatas a novos medicamentos
tm realmente essa vocao. O computador pode
comparar a estrutura da molcula candidata com
a de outras j testadas e cujas caractersticas esto
armazenadas em bancos de dados para definir se
vale a pena prosseguir com seu desenvolvimento, diz Eduardo Pagani, do LNBio. Estes testes

Rato de laboratrio:
pesquisas buscam
substitu-lo por testes
in vitro ou reduzir seu
uso no controle de
qualidade de vacinas

pESQUISA FAPESP 220 z 31