Université Abou Bekr Belkaïd Tlemcen

Enseignants : A.Bedrane& F.Lahfa

Dialyse et réactions colorées des protéines

I- Détermination du caractère macromoléculaire d’une molécule :

 Découper 2 sacs de dialyse de 20cm chacun les tremper dans l’eau distillée pour les ouvrir.
 Fermer une des deux extrémités en faisant un double nœud le plus prés possible du bord.
 Dans un sac, mettre 3ml de solution colorée, dans l’autre, 3ml de solution protéique. . fermer les 2 sacs au dessus des
deux solutions.
 Placer les sacs de dialyse dans un cristallisoir contenant de l’eau distillée et mettre sous agitation magnétique.
 Au minimum 1 heure après, observer et conclure
 La mise en évidence des protéines est réalisée comme suit avec la réaction du biuret (Voir TP réactions colorées des
protéines.)
-tube n°1 :2ml d’eau distillée (témoin).
-tube n°2 :2ml de solution protéique.
-tube n°3 :2mld’eau distillée prélevée dans le cristallisoir avant de mettre sous agitation
magnétique.
-tube n°4 :2ml d’eau distillée prélevée dans le cristallisoir en fin de dialyse (=milieu de contre
dialyse)

 ajouter dans chaque tube 1 ml de solution de NaOH à 20 %.

 homogénéiser puis verser goutte à goutte une solution de CUSO4 à 1%.
 observer et conclure.
 préciser l’intérêt de plusieurs témoins.
.
II- réactions colorées des protéines :

La mise en évidence des protéines dans une solution ; nécessite l’utilisation de réactions spécifiques. Nous en étudierons
certaines
1-réaction de biuret

 Mettre 100mg d’urée dans un tube à essai (en verre)

 Chauffer jusqu’à la fusion. L’urée se prend en masse et de l’ammoniac est dégagé.
 Laisser refroidir puis dissoudre le résidu blanc avec 2ml de NaOH à 10% Chauffer légèrement pour faciliter la
dissolution.
 Homogénéiser, puis ajouter goutte à goutte une solution de CUSO4 à 1%
 Observer et conclure

 Réaliser la série suivante

-tube n°1= 2ml de solution protéique.
-tube n°2= 2ml de solution de glycocolle
-tube n°3= 2ml d’eau distillée (témoin)
-ajouter à chaque tube 1ml de solution de NaOH à 20%.
- homogénéiser et ajouter goutte à goutte la solution de CUSO4 à 1%.
-observer et conclure.

2-réaction à la ninhydrine

La ninhydrine est fournie prête à l’emploi

-tube n°1= 1ml de solution protéique.
-tube n°2= 1ml de solution de glycocolle.
-tube n°3= 1ml d’eau distillée.
-ajouter à chaque tube 0,5ml de ninhydrine à1%
-homogénéiser et porter au bain-marie bouillant pendant 15min.
-observer et conclure.

3-réaction Xanthoprotéique :

Réaliser la série suivante :

-tube n°1= 1ml de solution inconnu x.
-tube n°2= 1ml de solution protéique (ovalbumine).
 -tube n°3 = 1ml de solution de glycocolle.
-tube n°4= 1ml de solution de phénylalanine ou de tryptophane.
-tube n°5= 1ml d’eau distillée.
-ajouter à chaque tube 0,5ml d’acide nitrique (précaution lors du prélèvement)
-observer et conclure.
-porter au bain-marie bouillant pendant 2mn.
-observer et conclure.

III- Conclusion générale :

Il est demandé aux étudiants :

 de discuter les résultats à l’échelle moléculaire.
 de préciser dans quel cadre et/ou à quelle fin chacune des techniques étudiées pour les différents thèmes abordés peut
être utilisée.
 de préciser en justifiant votre réponse et ce pour chacun des thèmes, si les différents techniques étudiées peuvent être
utilisées pour l’étude des protéines membranaires.