Université Abou Bekr Belkaïd Année 2008/2009

Faculté des sciences

Département de Biologie moléculaire et cellulaire.

3éme année LMD option Biochimie

Examen final Corrigé

Nom : Prénom :

Exercice 1 : A partir du tableau ci-dessous, calculer la molarité et la normalité des différentes

solutions. Indiquer comment préparer 1 litre de solution N de chaque solution.

Acide M (g.mol-1) Densité Pureté en % M N Solution 1 N

CH3CO2H 60.05 1.05 99.7 17.4 17.4 57 ml
HCl 36.46 1.18 37 12 12 83 ml
H3PO4 98 1.68 84 14.4 43.2 23 ml
H2SO4 98.08 1.83 95 17.6 35.5 28 ml

Exercice 2 : Les protéines de réserve des graines ont été étudiées chez le lupin blanc. Pour cela,
elles ont été extraites puis purifiées à partir de graines mures d'une part et de graines
immatures (en cours de formation) d'autre part. Pour ces dernières, trois stades de
développement de la graine ont été retenus appelés 1, 2 et 3.

En fin de purification, les protéines appelées globulines ont été séparées sur une résine
anionique contenant le groupement -O-CH2-CH2-NH+-(CH2-CH3)2 équilibrée dans un
tampon phosphate de potassium 25 mM de pH 7,5. Plusieurs fractions ont ainsi été obtenues
en utilisant un gradient de sel par palier avec KCl 0M, 0,15M, 0,3M puis 1M.

1- La fraction protéique obtenue avec le KCl 0,3 M (fraction C) a été plus spécialement
étudiée. Pour cela, 200 ml de la fraction ont été prélevés auxquels on a ajouté de l'acide
trichloroacétique.

a- Quel est le rôle de cet acide ?

Réponse : Précipiter les protéines pour concentrer l’extrait

b- Quelle volume d'acide en solution à 50 % faut-il utiliser pour amener la concentration

finale des prélèvements à 10 % d'acide trichloroacétique ?

Réponse : 50 ml.

c- Après une heure à 4°C, le mélange a été centrifugé et le culot lavé avec un mélange éther-
alcool (1:1 ; v:v).

Quel est le rôle de ce mélange ?

Réponse : Laver le culot pour éliminer les traces d’acide trichloroacétique.

d- Le dernier culot a été repris dans 100 ml d'un tampon constitué de : tampon Tris-HCl 0,5 M
de pH 6,8 ; de SDS 10 % ; de glycérol (100:30:10 ; v :v :v). Calculez le pourcentage final du
SDS dans l'échantillon.

Réponse : 2.14 %

e- Calculez le pourcentage de glycérol.

Réponse : 7.1 %

f- Comment prépare-t-on 25 ml de SDS à 10 % à partir de la poudre commerciale ?

Réponse : 2.5 g de poudre dans une fiole de 100 ml, puis de l’eau qsp 100 ml.

2- Une électrophorèse a été effectuée en présence de SDS pour les fractions C obtenues pour
les trois stades des graines immatures et pour celle obtenue avec les graines mûre (les chiffres
indiquent les masses moléculaires).

a- A partir de cette électrophorèse, proposez une hypothèse pour expliquer les évènements qui
seraient intervenus entre les stades 1, 2 et 3 d'une part puis dans la graine mûre d'autre part.

Réponse :Stade 1 : Synthèse d’une pré-protéine de 81000 kDa

Stade 2 : Maturation de la protéine avec élimination d’un peptide de 3000 kDa

Stade 3 : Fin de cette maturation.

Entre le stade 3 et la graine mature, différents événements conduisent à trois sous-unités

possibles avec des clivages différents ou successifs et formation de liaisons disulfures.
b- Quel est l'effet du mercaptoéthanol sur les polypeptides de la graine mûre ?

Réponse : Ruptures des ponts disulfures. Chaque sous-unité est constituée de 2 polypeptides
69000 ou 66000 ou 42000 tous associés à un polypeptide de 20000.

c- Proposez sous forme d'un schéma une structure quaternaire probable pour cette protéine
dans la graine mûre (on considère que la fraction obtenue est pure).

Réponse :

Plusieurs schémas sont possibles montrant les ponts disulfures. Un polypeptide de 69000 ou
66000 ou 62000 associé par ce type de liaisons avec un polypeptide de 20000. Cela fait donc
trois types de sous-unités.