Laboratorio Analtica II

Grupo A2 / Pareja 3

INFORME ANALTICO PRCTICA 12

1.- Informacin muestra.
Fecha anlisis:
Referencia muestra:
Aspecto de la muestra:
Referencia laboratorio:

24/10/2014
Refresco carbonatado aromatizado.
Lquido marrn oscuro con gas.
Laboratorio Analtica II, Universidad de Valencia.

2.- Objetivo del anlisis.

Estudiar la influencia de la composicin de la fase mvil sobre los cromatogramas obtenidos
mediante cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC) en fase inversa para mezclas de cafena y
cido benzoico con objeto de seleccionar la fase mvil ms adecuada para la determinacin de
cafena en bebidas refrescantes que la contengan. Llevar a cabo la determinacin de cafena
mediante HPLC en refrescos comerciales.
3.- Metodologa.
Tcnica analtica:
Instrumentacin empleada:
Mtodo:

Cromatografa de lquidos.
Cromatgrafo de lquidos con columna LiChrosphere RP18 y
detector UV-Vis
Calibracin sencilla o con estndares externos.

4.- Tabla de Resultados.

MUESTRA

[Cafena] (ppm)

M1

147.9076

M2

135.4608

M3

129.2956

MEDIA s

137.55479.48

5.- Resultado final.

Concentracin(ppm)

14020

MEDIA ts/ n
6.- Firmas.

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7.- Anexo.

Preparamos una disolucin patrn de cafena 1000ppm pesando aproximadamente 0.1g y aforando
en 100mL. El peso real fue 0.1018g.

Preparamos una disolucin patrn de cido benzoico 500ppm pesando aproximadamente 25mg y
aforando en 50mL. El peso real fue 0.0267g.

Preparamos una disolucin multicomponente de 50ppm de cafena y cido benzoico a partir de los
patrones anteriores . Los volmenes empleados se detallan en Tabla 1.

Luego preparamos los patrones para el calibrado en un intervalo de concentraciones entre 20100ppm en aforados de 10mL.Los volmenes empleados se detallan en Tabla 1.
Tabla 1. Volmenes empleados y concentraciones de las disoluciones preparadas.
PATRONES
V.Cafena 1000ppm(mL)
V.c.Benzoico 500ppm(mL)

Conc.(ppm)

P1

0.2

20

P2

0.4

40

P3

0.6

60

P4

0.8

80

P5

100

MULTI

1.25

2.5

50ppmcafena
50ppm c.Benzoico

Preparamos la muestra desgasificndola pues el oxgeno y Nitrgeno disuelto pueden provocar

burbujas y cuando el solvente entra en el detector produce picos falsos y desviaciones de la linea
base. Luego teniendo en cuenta que la concentracin esperada es 100ppm la diluimos al 50% para
situarla dentro del intervalo de calibrado.

Procedemos a la optimizacin de la fase mvil inyectando 20l de patrn multicomponente las

siguientes fases mviles:
a) 25% Acetonitrilo tampn actico-acetato a pH 3.
b) 25% Acetonitrilo tampn actico-acetato a pH 5.
a) 15% Acetonitrilo tampn actico-acetato a pH 3.

En el caso a) el cromatograma mostraba una buena eficiencia y selectividad. Los picos aparecan
suficientemente estrechos y separados para su correcto estudio y con un tiempo de retencin
aceptable.

En el caso b) el cromatograma presentaba un solapamiento de picos. Debido al cambio de pH el

c.benzoico al estar mas desprotonado y tener mas afinidad con la fase mvil disminuye su tiempo
de retencin provocando el solapamiento con la cafena.

En el caso c) el cromatograma mostraba buena eficiencia y selectividad pero mostraba unos

tiempos de retencin excesivamente largos.

La combinacin de Acetonitrilo y tampn mas adecuada es:

a) 25% Acetonitrilo tampn actico-acetato a pH 3.
2

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Procedemos a la determinacin de la cafena en muestra midiendo los patrones para el calibrado.

Las medidas se detallan en la tabla 2.
Tabla 2.Medidas de rea y tiempos de retencin de los patrones y muestras.

Conc. (ppm)

reas

T.R. (min.)

P1

20

54510246

1.817

P2

40

98717358

1.817

P3

60

128842262

1.833

P4

80

169522124

1.833

P5

100

319521469

1.817

Muestra 1

155377724

1.817

Muestra 2

143910308

1.833

Muestra 3

138230143

1.817

Representamos el rea obtenida de los patrones frente a la concentracin para realizar un ajuste
lineal. Grfica 1.
Grfica 1.Representacin del rea frente a la concentracin de los patrones. Ecuacin del ajuste lineal.
1,80E+8
1,60E+8
1,40E+8

REA

1,20E+8
1,00E+8
8,00E+7

f(x) = 1875802,6900x + 19107863,0000

R = 0,9953

6,00E+7
4,00E+7
20

30

40

50

60

70

80

CONCENTRACIN(ppm)

Decidimos eliminar del ajuste el punto P5 del patrn de 100ppm tras comprobar que su error era
muy superior al 5%.
(319521469206688132)
100=35.31%
206688132

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Con la ecuacin de calibrado solo nos queda la interpolacin y clculo de la concentracin teniendo
en cuenta la dilucin previa de la muestra y la concentracin real del patrn(101.8ppm). Todo queda
reflejado en la tabla 3 de resultados.
Tabla 2.Medidas de rea y tiempos de retencin de los patrones y muestras.
MUESTRAS
REA
INTERPOLACION
CONC. (ppm)

Correccin
(ppm)

M1

155377724

72.6462

145.2923

147.9076

M2

143910308

66.5328

133.0656

135.4608

M3

138230143

63.5047

127.0094

129.2956

MEDIA s

137.5547 9.48

MEDIA ts/ n

14020