CMO SE EXPERIMENTA

Descripcin de experiencias
innovadoras para el trabajo
experimental.

Determinacin de vitamina E en aceites:

una experiencia didctica en Qumica
Analtica Instrumental
Armando Carrasquero-Durn,1 Elizabeth Regalado,1 Migdalia Guzmn1
y Petra Beatriz Navas2

Abstract
The analysis of vitamin E in edible vegetable oils has
been proposed as a didactic experience for analytical
chemistry laboratory. The Emmeric-Engel method
which is based in the reduction of ferric ions by
tocopherols, followed by complexing with o-Phenantroline to produce a red solution was employed. The
didactic experience has been divided into three steps:
Revision of aspects related with spectrophotometric
analysis, calculation and chemical behavior of vitamin E. The next step is the laboratory activity which
involves the construction of a calibration curve, oil
sample treatment and vitamin quantification. In the
last step results are calculates including an evaluation
of errors and analytical quality of results. This experience was carried out in the course of Projects in
Applied Chemistry showing its effectiveness.

Resumen
Se propone el anlisis de la vitamina E presente en
aceites vegetales comestibles como una experiencia
didctica para el laboratorio de qumica analtica. Se
emple el mtodo de Emmeric-Engel, que se basa
en la reduccin Fe3+-Fe2+ por accin de los tocoferoles presentes en la muestra y la formacin de un
complejo rojo Fe2+-o-Fenantrolina. La experiencia
didctica fue dividida en tres etapas: una revisin
terica inicial sobre los principios del anlisis, presentacin de resultados e informacin general sobre
la vitamina E. Posteriormente se realiza la actividad
de laboratorio que involucra la construccin de la
recta de calibracin, tratamiento de la muestra de
aceite y la cuantificacin. En la ltima etapa se
realizan los clculos para la presentacin de resulta-

1 Universidad Pedaggica Experimental Libertador. Departa mento de Qumica. Apartado 1017-Las Acacias. Maracay. Ve nezuela.
Correo electrnico: acarrasquerod@latinmail.com
2
Universidad Central de Venezuela, Facultad de Agronoma.
Departamento de Qumica. Maracay, Venezuela.
Recibido: 20 de octubre de 2003; aceptado: 24 de enero de
2004.
Septiembre de 2004

dos finales y se discute la calidad analtica de los

mismos. Esta experiencia fue aplicada en el curso de
Proyecto en Qumica Aplicada, demostrndose su
efectividad.
Introduccin
Los principios y tcnicas del anlisis espectrofotom trico en la regin visible del espectro electromagntico constituyen contenidos importantes en la mayora de los cursos de qumica analtica a nivel
universitario. En ese sentido, las clases tericas en las
que se describen las transiciones electrnicas responsables de la absorcin de radiacin, deben comple mentarse con actividades de laboratorio en las cuales
el alumno adems de aplicar dichos conocimientos,
adquiera destrezas en el manejo de equipos y ejecute
los clculos matemticos y estadsticos para la pre sentacin de los resultados.
Las disoluciones acuosas de iones complejos
coloridos como dicromatos, cromatos, iones cpricos ,
etctera, son usualmente empleadas para la construccin de espectros y rectas de calibracin; sin
embargo, tambin es necesario incorporar trabajos
de laboratorio en los que se realicen anlisis de
muestras verdaderas a fin de evidenciar la utilidad
prctica del conocimiento que se busca que adquieran los alumnos. Por ejemplo, en este trabajo se
propone el anlisis de la vitamina E presente en
aceites vegetales como una actividad novedosa que
puede ser atractiva al alumno, debido al elevado
inters que se tiene en la actualidad con respecto al
uso de antioxidantes naturales para desactivar los
radicales libres que deterioran los alimentos y que,
al ser consumidos, favorecen la degeneracin de
clulas acelerando el envejecimiento.
Las actividades de laboratorio deben ser integradoras, al complementar el aprendizaje de los principios especficos de la tcnica analtica con informa cin adicional que permita al alumno construir un
cuerpo completo de conocimientos. Por esta razn,
la experiencia didctica se ha diseado en varias
etapas, que cubren desde la adquisicin de conocimientos iniciales, hasta la presentacin final de los
resultados. Por lo tanto, el propsito de este trabajo
343

CMO SE EXPERIMENTA

R1

R2

R3

CH3

CH3

CH3

CH3

CH3

CH3

CH3

CH3

Figura 1. Tocoferoles (Fruton y Simmonds, 1961).

es describir esta propuesta por medio de un ejemplo

real desarrollado en el Laboratorio de Qumica Aplicada de la Universidad Pedaggica Experimental
Libertador.
Descripcin de la experiencia didctica
A diferencia de las prcticas de laboratorio tradicionales, en las cuales el alumno se limita a comprobar
el cumplimiento de un principio o ley, aqu se busca
un aprendizaje integral, que abarque distintos aspectos de la qumica que le permitan integrar armnicamente toda la informacin. Por esta razn, la
actividad de laboratorio se ha diseado como una
experiencia didctica de tres etapas:
Etapa I: Obtencin del conocimiento bsico
sobre la sustancia a analizar, tcnicas
analticas espectrofotomtricas y principio
qumico del anlisis
La vitamina E
Es una vitamina liposoluble cuya frmula molecular

es C29H50O2 (PM = 430.69 gmol1) y est constituida

por ocho compuestos diferentes, cuatro de ellos co nocidos como tocoferoles , , y (figura 1). Una
de las principales funciones de esta vitamina se
asocia a su poder antioxidante, que protege a los
tejidos de los efectos nocivos de las toxinas ambientales y previene el envejecimiento celular. Igualmente, protege a las membranas biolgicas, a los nervios,
msculos y sistema cardiovascular, y ayuda al organismo a alcanzar un uso ptimo de la vitamina A
(Fruton y Simmons, 1961).
Las propiedades antioxidantes de esta molcula
se relacionan con la presencia del grupo hidroxilo
enlazado al carbono C-6 del anillo aromtico (Ca rrasquero y col., 1998), en el cual la unin hidrge no-oxgeno puede sufrir una fractura homoltica, con
la produccin de un radical sobre el anillo bencnico, que se estabiliza por medio de la resonancia del
electrn no compartido y de esta forma reduce la
velocidad de iniciacin o propagacin de la reaccin
en cadena (Cortez, 1998).
Los aceites provenientes del germen de maz o
trigo y de las semillas de girasol constituyen fuentes
naturales de vitamina E; no obstante, los procesos de
extraccin y refinacin pueden destruir esta vitamina lo que hace a los aceites refinados ms susceptibles al deterioro por rancidez. Por esta razn se
incorporan antioxidantes sintticos, con el consecuente riesgo para la salud de quienes consuman
estos productos. Por ello, es importante para la in dustria aceitera poder cuantificar con precisin y
exactitud convenientes los niveles de tocoferoles
presentes en los aceites refinados.
Cuantificacin de la Vitamina por el Mtodo Colorimtrico
de Emmeric-Engel (Tsen, 1961 ).
Este mtodo se emplea para la determinacin de
tocoferoles totales y se basa en la capacidad reduc tora de estos compuestos orgnicos. Los tocoferoles
presentes en una muestra de aceite son extrados y

Figura 2. Reaccin redox para la determinacin de vitamina E

344

Educacin Qumica 15[x]

CMO SE EXPERIMENTA

purificados de otros compuestos reductores y luego origen (a) de la ecuacin de regresin se obtienen de
tratados con una solucin estndar de iones frricos las siguientes ecuaciones (Miller y Miller, 1993):
que contiene adems un exceso de 1,10-Fenantrolina
(figura 2). Los iones ferrosos producidos por la re [(xi x )( yi y )]
duccin del Fe3+ se complejan con la fenantrolina
b= i
(1)
para producir un in complejo soluble de color rojo,
(xi x )2

cuya concentracin es directamente proporcional al

i
contenido inicial de tocoferoles totales en el aceite
Para establecer el error de los valores de b y a,
analizado. De all que ste sea un mtodo indirecto se en primer lugar el estadstico S x/x aplicando la
para la cuantificacin de la vitamina E (Quaife y ecuacin (3):
Harris, 1948).
(y i y i )2
Aun cuando es un mtodo analtico desarrollado

Sx/ y = i
hace muchos aos, que en la actualidad ha sido
(3)
n2

sustituido por mtodos cromatogrficos ms avanza

dos, desde un punto de vista didctico es muy ade El numerador representa la sumatoria del cuacuado para que el alumno adquiera conocimientos
sobre los procesos redox presentes en la naturaleza drado de los residuales de yi, es decir, la diferencia
y su utilidad en la cuantificacin de sustancias de entre el valor medido (yi) y el que se obtiene de aplicar
^). El nmero de patrones
inters. Asimismo, los reactivos y equipos requeridos la ecuacin de la recta (y
i
son poco sofisticados, de relativo bajo costo y de empleados para la recta de calibracin est repreamplio uso en los laboratorios de qumica analtica sentado por n. Los errores de la pendiente y el
intercepto, Sb y Sa, se obtienen por las siguientes
de muchas universidades.
La presencia de otras sustancias reductoras en el ecuaciones:
aceite, tales como carotenoides, colorantes sinttiS x/y
(xi )2
cos, etctera, pueden afectar el resultado de la deter - Sb =
(4)
i
Sa = S x / y
(5)
minacin, por lo que deben ser eliminadas; para esto
(x i x )2
n (xi x )2

existen distintos mtodos como la destilacin, hidroi

i
genacin, cromatografa preparativa y lavado con
La ecuacin de regresin toma la siguiente forma:
cidos. Estos mtodos deben ser discutidos por los
alumnos a fin de establecer las ventajas y desventajas
de cada uno en cuanto a eficiencia, costo y posibili mgVit.E
dad de realizacin en funcin a las condiciones de Absorbancia = (b t
Sb) 14g aceite + (a t
Sa) (6)
cada laboratorio. Desde un punto de vista didctico,
A partir de estos clculos, el alumno debe deteresta etapa de purificacin ofrece al alumno la oportunidad de adquirir conocimientos en cuanto al minar la concentracin de vitamina E. El error aso efecto de las interferencias en una determina- ciado a dicha concentracin (S x) se calcula con la
cin analtica y de los mtodos qumicos y fsicos ecuacin (7).
disponibles para reducir el efecto negativo de estas
1
sustancias.
2

Un componente importante de la experiencia

S x/y 1 1
( y y) 2

+ +
Sx =
(7)
didctica se relaciona con los clculos que se realizan
b m n b 2 (x i x )2

para presentar los resultados. Es necesario que el

i
alumno reconozca que toda medicin lleva asociado
El valor de m corresponde al nmero de repetiun error (Spiridonov y Lopatkin, 1973) que se cuantifica a travs de procedimientos matemticos y es - ciones realizadas; x e y representan la concentracin
de vitamina E en el aceite y la absorbancia. Cuando
tadsticos.
En ese sentido, se hace uso de una recta de el alumno ejecute todos los clculos, debe reprecalibracin y partir de su ecuacin de regresin se sentar el resultado tomando en cuenta el intervalo
determina el contenido total de vitamina en una de confianza, el cual se determina de la manera
muestra de aceite, de acuerdo con los siguientes usual, por medio del estadstico t de student para
procedimientos: La pendiente (b) y ordenada en el n-2 grados de libertad y una probabilidad .
Septiembre de 2004

345

CMO SE EXPERIMENTA

Solucin madre de
0,5 mg/mL

Solucin de trabajo de
0,01 mg/mL

Figura 3. Pasos para la preparacin de los patrones de la recta de calibracin.

Etapa II: Ejecucin del anlisis de vitamina E

en una muestra de aceite vegetal comercial
Es recomendable que la muestra que analicen los
alumnos sea un aceite comercial que usen en sus
casas y que seale en su composicin el contenido
de vitamina E. Para la recta de calibracin se puede
emplear una mezcla de tocoferoles grado analtico
comercial pero debido a su elevado costo, puede
sustituirse por una cpsula de vitamina E que se
expende en las farmacias locales. Estas cpsulas con
un contenido de vitamina E de 400 mg fueron empleadas para este trabajo.
El procedimiento se divide en tres partes. En la
primera (figura 3) se preparan los patrones para
la curva de calibracin. Posteriormente (figura 4) la
muestra de aceite es disuelta en ter y tratada con
cido sulfrico para extraer los pigmentos hidrosolubles y otras sustancias interferentes. En la ltima
etapa (figura 5), tanto los patrones como la muestra
tratada se hacen reaccionar con la mezcla de cloruro
frrico y 1,10-Fenantrolina para producir el complejo
rojo, cuya absorbancia se mide a = 510 nm en un
epectrofotmetro Spectronic 20 u otro adecuado. E
necesario sealar que el 100% de transmitancia debe
ajustarse con la solucin que no contiene vitamina E,
ya que es posible que el inFe 3+ se reduzca fotoqumicamente a in Fe2+; por esta razn, el desarrollo del
color debe realizarse en la oscuridad y se puede
emplear cido fosfrico a fin de complejar al F 3+.

Figura 4. Preparacin y purificacin de la muestra.

Etapa III: Presentacin de resultados

Una vez que los alumnos han ejecutado las determinaciones, se procede a la presentacin de resultados,
para lo cual se deben realizar los clculos sealados
en la primera etapa de esta experiencia didctica.
S

Figura 5. Desarrollo del color y cuantificacin.

346

Ejecucin de la experiencia didctica

A fin de ejemplificar la aplicacin de esta experiencia didctica, se presentan los resultados del anlisis
de vitamina E realizados por un equipo de dos
estudiantes del curso Proyecto en Qumica Aplicada.
El anlisis se realiz sobre una muestra de aceite
comestible de girasol con un contenido indicado de
vitamina E de 12 mg/l4 g de aceite.
Recta de calibracin
La recta de calibracin presenta un coeficiente de
correlacin significativo ( = 0.05) con una ordenada
en el origen igual a cero, por lo que se puede afirmar
que se cumple con la Ley de Beer-Lambert en el
intervalo de concentraciones evaluado. Para calcular
Educacin Qumica 15[x]

CMO SE EXPERIMENTA

8,4.10

(5 2)

0,700
R 2 = 0 ,9 97
0,600
0,500
A b s o rb an cia

la pendiente ( b) y la ordenada en el origen ( a) se

utilizaron los datos del cuadro 1, y se obtuvieron los
resultados mostrados en la figura 6.
Al aplicar las ecuaciones (1) y (2) se obtienen los
siguientes valores b = 0,026 y a = 0,005. Para determinar los errores asociados se hace uso de los datos
mostrados en el cuadro 2. La columna identificada
como, corresponde a los valores de absorbancia que
se obtienen sustituyendo las concentraciones de vitamina E en la ecuacin ^
yi = 0,026 [Vit. E] + 0,005.
Al calcular el estadstico Sx/y se tiene:

0,400
0,300
0,200

Sx y =

= 0,017,

0,100

con este resultado se pueden calcular los errores de

a (Sa) y b (Sb) de la siguiente forma:

0,000
0 ,0

1 0 ,0

2 0 ,0

3 0 ,0

mg Vit E / 1 4 g a c eite

Sb =

0.017
= 8 10- 4
401.8

Sa = 0.017

1029
= 0.012
5(401.8)

Por lo tanto, la ecuacin de la recta de calibra cin es:

Figura 6. Recta de calibracin para la determinacin colorimtrica de vitamina E.

Cuadro 1. Datos para el clculo de a y b.

_
_
mg Vit. E/ Absorbancia xi x
yi y
14 g aceite

_
_
[(xi x)(yi y)]

_
(xi x)2

0.0

0.000

11.2

0.296

3.315

125.44

3.5

0.090

7.7

0.206

1.586

59.29

mg Vit. E
+ (0.005 0.038)
14 g aceite

10.5

0.290

0.7

0.006

0.004

0.49

17.5

0.440

6.3

0.144

0.907

39.69

Los lmites de confianza fueron calculados utilizando un valor de t = 3.18 para tres grados de libertad
( = 0.05).

24.5

0.658

13.3

0.362

Absorbanci a = (0.026 0.003)

Clculo de la concentracin de vitamina E

en la muestra de aceite
Los resultados del anlisis de vitamina E se presentan
en el cuadro 3; los valores de transmitancia son
convertidos en absorbancias utilizando la ecuacin:
A = Log(I)
Primer caso: Una sola determinacin. Aqu se considera que se ha realizado una sola medicin, por
lo que m = 1. La absorbancia obtenida fue de 0.357.
Se obtiene un contenido de vitamina E igual a
El error asociado a esta concentracin se obtiene
por medio de la ecuacin (7):

0.017 1 1
(0.357)
+ +
= 0 .8

2
0.026 1 5 (0.0026) (401.8)

Septiembre de 2004

176.89
401.80

Cuadro 2. Datos para el clculo de los errores asociados a b y a.

^
yi= Absorbancia
mg Vit. E/
yi
yi y^i
(yi y^i)2
14 g aceite
0.0

0.000

0.000

0.000

0,000

3.5

0.096

0.090

0.006

3.6.105

10.5

0.278

0.290

0.012

1.4.104

17.5

0.460

0.440

0.020

4.0.104

24.5

0.642

0.658

0.016

2.6.104

0.054

8.4.104

Cuadro 3. Resultados experimentales.

mg Vit E 0.354
=
= 13.6
14 g aceite 0.026

Sx =

4.815
10.627

Muestra

Transmitancia

Absorbancia

0.44

0.357

0.46

0.337

0.43

0.367

Media

0.354
347

CMO SE EXPERIMENTA

Finalmente, la concentracin de vitamina E en

el aceite es: 13.7 0.8 mg/14 g aceite.
Segundo caso: Mltiples determinaciones. El anlisis se
realiz por triplicado y se obtuvo una absorbancia
promedio de 0,354 Se deduce que el contenido de
la vitamina es:
mg Vit. E 0.354
=
= 13.6.
14g aceite 0.0026

Para el clculo el error (Sx) se debe tener en

cuenta que m = 3. Por lo tanto:

Sx =

0,017 1 1
(0,354) 2
+ +
= 0,7
2
0,026 3 5 (0,026) (401,8)

En este caso se debe informar un contenido de

vitamina E igual a 13.6 0.7 mg/14 g de aceite. Si
se comparan ambos resultados, el alumno puede
observar que al hacer mltiples repeticiones de la
determinacin, se obtiene un error menor que en el
caso de hace una nica determinacin. Esto se refleja
Sx
en el coeficiente de variacin ( CV =
100), que en
X
el primer caso es del 5.8 %, mientras que en el anlisis
mltiple disminuye hasta 5.1%, con lo que se logra
una mayor precisin.
En ambos casos se obtienen valores muy cercanos al sealado por el fabricante (12 1 mg/14 g).
Todo esto permite iniciar en el aula una discusin
sobre los conceptos de precisin, exactitud y el
efecto que sobre ellas tiene la ejecucin correcta o
incorrecta de la tcnica. Es decir, los estudiantes
deben hacer una lista de las posibles fuentes de
errores determinados e indeterminados en este tipo
de anlisis.
La prctica de laboratorio debe concluirse con
un informe donde los estudiantes expongan sus re sultados y analicen de manera crtica las cualidades
y defectos del mtodo analtico y propongan otros
que pudieran emplearse para el mismo propsito.
En nuestro caso, los alumnos presentaron, ante el
resto de sus compaeros, un seminario donde expu sieron su trabajo y respondieron las preguntas for muladas por el docente y los alumnos. Esta ltima

348

fase es muy importante para lograr la integracin del

grupo ya que permite que todos reciban la informacin de los trabajos realizados por distintos grupos.
Conclusiones
Con la realizacin de esta experiencia didctica, los
alumnos adquieren un conocimiento ms profundo
sobre las propiedades antioxidantes de la vitamina
E, los principios y tcnicas del anlisis espectrofotomtrico, as como las operaciones bsicas del laboratorio de qumica analtica. Adems, el uso de procedimientos matemticos para la presentacin de
resultados contribuye a promover la necesidad
de indicar en cada resultado la magnitud del error
cometido y el efecto de este error en la calidad del
resultado.
Asimismo se busca ofrecer a los estudiantes y
profesores de qumica analtica bsica e instrumental
una actividad de laboratorio que consume poco
tiempo y recursos, pero que da la oportunidad de
enfrentarse al anlisis de una muestra real en la que
es necesario ejecutar tratamientos previos de purificacin y aislamiento de la sustancia de inters.


Referencias bibliogrficas
Carrasquero, A. M. Salazar y P.B. Navas, Antioxidant properties of a grape fruit seed extract on
vegetable oils, J. Sci. Food. Agric., 77, 463-467,
1998.
Cortez, L. (1998). Bioqumica fundamental. FPUVAUCV, Caracas, 1998, 851 p.
Fruton, J.S. y S. Simmonds. General Biochemistry. John
Wiley and Sons, London, 1961, 1077 p.
Miller, J.C. y J.N. Miller, Estadstica para qumica
analtica. Addison Wesley Iberoamericana. 2da.
edicin. Mxico, 1993, 211 p.
Quaife, M. y P. Harris, Chemical assay of foods for
vitamin E content, Analytical Chemistry, 20(12)
1221-1224, 1948.
Spiridonov, V.P. y A.A. Lopatkin, Tratamiento matemtico de datos fsico-qumicos. Editorial Mir, Mosc, 1973, 207 p.
Tsen. H., An improved spectrophotometric method
for the determination of tocopherols using 4,7diphenyl-1,10-Phenantroline, Analytical Chemistry, 33(7) 849-852, 1961.

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