UNIVERSIDAD TCNICA PARTICULAR DE LOJA

Microbiologa I
Nombre: Fernando Serrano Tamay.
Lcda.: Bioq. Zorayda Toledo.
Fecha: 27/05/2009.

Tincin de Ziehl-Neelsen
La tincin de Ziehl-Neelsen (BAAR) es una tcnica de tincin diferencial rpida y
econmica, para la identificacin de microorganismos patgenos, fue descrita por
primera vez por dos mdicos alemanes, Franz Ziehl (1859 a 1926), un bacterilogo y
Friedrich Neelsen (1854 to 1894), un patlogo (1)
Las paredes celulares de ciertos parsitos y bacterias contienen cidos grasos de cadena
larga (50 a 90 tomos de carbono) que les confieren la propiedad de resistir la
decoloracn con alcohol-cido, despus de la tincin con colorantes bsicos. Por esto
se denominan cido-alcohol resistentes. Las micobacterias como M. Tuberculosis y M.
Marinum y los parsitos coccdeos como Cryptosporidium se caracterizan por sus
propiedades de cido-alcohol resistencia. La coloracin clsica de Ziehl-Neelsen
requiere calentamiento para que el colorante atraviese la pared bacteriana que contiene
ceras. (2)
Tcnica:
1. Hacer un frotis de la muestra de esputo.
2. Dejar el frotis sobre el puente de tincin.
3. Aplicar fucsina-fenicada durante cinco minutos.
4. Calentar con un mechero hasta la emisin de vapores (3-5 minutos).
1. Se requiere el tiempo adecuado para que la fucsina fenicada penetre y
tia la pared celular de la bacteria. No deje que hierva o se seque el
colorante.
2. Lave suavemente el colorante de cada portaobjetos con agua corriente
fra hasta que toda la tincin libre quede lavada. Lave suavemente de
manera que el extendido no se barra del portaobjetos. Retire el exceso de
agua.
5. Decolorar con alcohol-cido durante tres minutos.

1. Enjuague con agua una vez ms los portaobjetos y quite el exceso de

agua. Si los portaobjetos an estn rosa, aplique una cantidad adicional
de la solucin decolorante de 1 a 3 minutos.
6. Aplicar azul de metileno durante 1 minuto.
1. Aplique la solucin de contraste, azul de metileno, durante 1 minuto.
7. Enjuagar con agua
8. Finalmente, coloque cada portaobjetos en una gradilla a que sequen al aire.
9. Colocar una pequea gota de aceite de inmersin y haga la observacin al
microscopio con 10 x 100

Tcnica de la Oxidasa
Una oxidasa es una enzima que cataliza una reaccin de oxidacin/reduccin
empleando oxgeno molecular (O2) como aceptor de electrones. En estas reacciones el
oxgeno se reduce a agua (H2O) o a perxido de hidrgeno (H2O2). Las oxidasas son una
subclase de las oxidorreductasas. (3)
Esta tcnica sirve para determinar la presencia de enzimas oxidasas. La reaccin de la
oxidasa se debe a la presencia de un sistema citocromooxidasa que activa la oxidacin
del citocromo que es reducido por el oxgeno molecular que produce agua o perxido de
hidrgeno segn la especie bacteriana. El oxgeno acta por tanto como aceptor final de
electrones en la cadena transportadora de electrones. Asmismo, la presencia de oxidasa
va ligada a la produccin de catalasa, ya que sta degrada el perxido de hidrgeno que
se produce como consecuencia de la reduccin del oxgeno y cuya acumulacin es
txica. (4)
La prueba de la oxidasa se usa sobre todo para:

Identificar todas las especies de Neisseria (+)

Diferenciar Pseudomonas de los miembros oxidasa negativos de las
enterobacterias.

Tcnica:
1. Mtodo en placa directa

Agregar directamente 2-3 gotas de reactivo a algunas colonias. No inundar toda

la placa y no invertirla.

Observar los cambios de color. Con el reactivo de Kovacs la reaccin se produce

en unos 10-15 segundos, mientras que con el de Gordon y McLeod es dentro de
los 10-30 minutos.

2. Mtodo indirecto sobre papel

Colocar un trozo de papel de filtro de 3x3cm aproximadamente en una placa de

Petri.

Agregar 2-3 gotas del reactivo de Kovacs en el centro del papel.

Extender con el asa de siembra una colonia sobre el papel impregnado.

La reaccin de color positiva se produce a los 5-10 segundos.

Tcnica de la Catalasa
Se utiliza para comprobar la presencia del enzima catalasa que se encuentra en la
mayora de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas que contienen citocromo. La
principal excepcin es Streptococcus. (5)
El perxido de hidrgeno se produce al utilizar la bacteria el azcar por va oxidativa.
Al ser ste un compuesto muy oxidante las bacterias la eliminan mediante la produccin
de la enzima catalasa.
Originariamente, esta prueba era utilizada para diferenciar entre los siguientes gneros:

Streptococcus (-) de Micrococcus (+) y/o Staphylococcus (+).

Bacillus (+) de Clostridium (-).

Lysteria monocytogenes (+) y/o Corynebacterium (+, con las excepciones de

C.pyogenes y C.haemolyticum, ambos -) de Erysipelothrix (-) (5)

Tcnica:
1.
2.
3.
4.

Coloque una gota del agua oxigenada sobre un porta-objetos limpio

Con el asa tome una muestra del cultivo bacteriano en estudio
Emulsifique la colonia en la gota del perxido de hidrgeno
Si la colonia de bacterias estudiadas tiene la enzima, el perxido de hidrgeno se
desdoblar en H2O y O2 este ltimo es liberado al exterior y se traduce como la
aparicin de burbujas de manera inmediata en la suspensin. Si las bacterias
estudiadas no tienen la enzima no se liberaran las burbujas o son liberadas de
una forma retardada

BIBLIOGRAFIA:

es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n_de_Ziehl_Neelsen

www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioTinciones.htm

es.wikipedia.org/wiki/Oxidasa

www.joseacortes.com/microbiologia/pruebasbioq/oxidasa.htm

www.joseacortes.com/microbiologia/pruebasbioq/catalasa.htm