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Figura 1 Um esquema do gene e da protena CFTR. O gene CFTR transcrito num RNAm de 6.5 kb
que por sua vez traduzido numa protena com 1480 aminocidos que se encontra na regio apical das
clulas epiteliais. Adaptado de Tsui & Durie, 1997
TIPOS DE MUTAES
Aproximadamente 2000 variaes de sequncia no gene CFTR e sua mutao
F508, j foram identificadas. Estas mutaes se localizam ao longo da regio
codificante do gene e em sua regio promotora. Contudo, existem regies em
que as mutaes ocorrem comumente como no domnio de ligao de
nucleotdeos (NBD), no domnio regulador (R) e em regies que correspondem
a aminocidos ou domnios importantes para o funcionamento estrutural da
protena (Rowntree & Harris 2003).
As variaes de sequncia relacionadas a fibrose cstica so variaes
pontuais e afetam poucos nucleotdeos. Os rearranjos cromossmicos, como
inseres e delees, correspondem somente a 1%. Estes rearranjos afetam
milhares de pares de bases.
Os tipos de mutaes so:
na membrana apical de clulas epiteliais (Welch et al, 2001). Com isso foi
possvel identificar e classificar as diversas mutaes de acordo com a
repercusso quantitativa e/ou qualitativa que essas alteraes apresentam a
nvel celular. Atualmente so identificadas 6 classes de mutaes no CFTR.
Classe I:Nesta classe encontram-se todas as mutaes que afetam a
biossntese da protena CFTR. Englobam as mutaes nonsense, frameshift,
que altera o local de Splicing, ou as que alteram o cdon de incio da traduo.
Produzem uma protena defeituosa, ou truncada que so reconhecidas no
Retculo Endoplasmtico (RE) por protenas chaperones, estas protenas
degradam as protenas truncadas rapidamente, consequentemente no e
observa protenas CFTR na membrana celular.
Classe II: a principal mutao em fibrocsticos. Ocorre uma alterao na
maturao, provocando um processamento defeituoso da protena a um
misfolding incorreto. As protenas imaturas traduzidas ficam retidas no RE e e
no passam para o aparelho de Golgi para serem glicosiladas, ocorrendo uma
falha de protenas funcionais na membrana. Estas protenas afetadas saem
diretamente do RE para o citosol para serem degradadas no proteossoma.
Devido ausncia de protenas na membrana, as mutaes desta classe
esto associadas a fentipos de FC graves.
Classe III: mutaes que causam uma alterao na regulao do canal de Cl-.
As mutaes no gene CFTR que ocorrem nesta classe esto localizadas nos
domnios NBD1 e NBD2 da protena, impedindo a ligao de ATP a estes
domnios e a sua hidrlise, necessria para a ativao do canal.
Classe IV: Englobam casos em que o gene codifica uma protena CFTR que
corretamente traduzida, processada, transportada e inserida na membrana
apical e que responde a estmulos, contudo, a conduo de Cl- reduzida.
Estas mutaes (geralmente missense) esto localizadas nos domnios
transmembranares (Membrane-spanning domains MSD) que participam na
formao do canal inico. Assim, quando existe uma mutao desta classe, h
uma diminuio do fluxo inico.
Classe V: as mutaes desta classe conduzem a uma produo de protenas
normais mas em nveis reduzidos devido a uma desregulao da transcrio e
esto associadas a um fentipo de FC moderado. Englobam as mutaes no
promotor que reduzem a transcrio, splicing alternativo e uma maturao
ineficiente da protena. Um splicing anormal pode resultar em ausncia de
RNAm normal ou em nveis muito baixos, variando entre pacientes e mesmo
entre rgos de um mesmo paciente.
Classe VI: incluem as mutaes que diminuem a estabilidade da protena
CFTR, tais como mutaes nonsense ou frameshift que causam a deleo dos
ltimos 70-98 bp da zona C-terminal da protena, e mutaes que afetam a
regulao de outros canais. As mutaes desta classe esto associadas a um
fentipo grave de FC.
TABELA DAS CLASSES DE MUTAES DO GENE CFTR
Classe
Efeito
II
III
IV
Quantidades normais de
protena CFTR no
funcional na membrana
apical
Quantidade normal de
protena CFTR com funo
residual na membrana apical
Efeito na
protena CFTR
Exemplos de
mutaes
c.1624G>T (G542X)
Sntese anormal de
c.3846G>A (W1282X)
protena
c.1585-1G>A
F508del
Processamento e
c.3909C>G (N1303K)
trfego anormal
c.3773_3774insT
c.1652G>A (G551D)
c.1679G>C (R560T)
Regulao defetiva
c.1475C>T (S492F)
Reduo da
condutncia
Quantidade reduzida de
protena CFTR funcional na
membrana apical
Reduo de
sntese/trfego
VI
Diminuio da
estabilidade
Adaptado de O'Sullivan & Freedman, 2009, Culling & Ogle, 2010, Rogan et al., 2011.
c.350G>A (R117H)
c.1040G>C (R347P)
c.1000C>T (R334W)
IVS8T5
c.1364C>A (A455E)
c.3717+12191C>T
c.4234C>T (Q1412X)
c.4196_4197delTC
c.4147_4148insA
Mecanismo
mutacional
Nonsense
Frameshift
Splice
Missense
Deleo de
aminocidos
Missense
Missense
Missense
Splice
Nonsense
Frameshift
REFERNCIAS
Bartoszewski, R.A., Jablonsky, M., Bartoszewska, S., Stevenson, L., Dai, Q.,
Kappes, J., Collawn, J.F. & Bebok, Z. (2010) A synonymous single
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Cystic Fibrosis Fundation (2012) Patient Registry: Annual Data Report 2011.).
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Cystic Fibrosis Mutation Database (2011) http://www.genet.sickkids.on.ca/app.
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Rowntree, R.K. & Harris, A. (2003) The phenotypic consequences of CFTR
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