Fraccionamiento de tejidos en sus principales constituyentes

FRACCIONAMIENTO DE TEJIDOS EN SUS PRINCIPALES

CONSTITUYENTES
PROPERTIES AND ANALYTICAL METHODS FOR THE
CHARACTERIZATION OF LIPID
Cely, Angela Carolina*; Ramos, Sebastian Eduardo**;Rivera, Miguel Andres***.
Fecha de entrega del informe: 13-11-14
Resumen: En la prctica se realiz el fraccionamiento qumico de diferentes muestras de tejido y rganos, por
medio de un proceso donde se obtuvieron cinco extractos, donde posteriormente, a travs de pruebas cualitativas
se realiz la determinacin de carbohidratos a travs de la prueba de lugol y de molish, lpidos a travs de la
prueba de Lieberman-Bukhardt, protenas a travs de la prueba de Millon y ninhidrina y cidos nucleicos a travs
de la prueba de pentosas. Los resultados variaron dependiendo el tipo y la naturaleza de tejido u rgano.

Palabras clave: lpidos carbohidratos protenas cidos nucleicos.

Abstract: In practice the chemical fractionation of different tissue samples and organs was carried out using a
process where five extracts where then obtained through qualitative carbohydrate determination tests were
performed using Lugol test and Molish , lipids through the Lieberman- proof Bukhardt proteins through Millon and
ninhydrin test and nucleic acids by pentose test . Results varied depending on the type and nature of the tissue or
organ.
Key words: Lipids Carbohydrates Proteins Nucleic acids.

Introduccin
Los procesos metablicos son realizados en
determinados rganos y/o tejidos, como son el
cerebro, rin, msculo, hgado, intestino delgado y
tejido adiposo. El hgado est involucrado en
diferentes actividades metablicas de los procesos
de carbohidratos, los lpidos y los cidos nucleicos [1].
En el metabolismo de los carbohidratos, la glucosa,
junto con los cidos grasos y los cuerpos cetnicos,
es la proveedora de energa ms importante del
organismo. La concentracin de la glucosa en la
sangre se mantiene en niveles de 4-6 mM. Los
aportantes de glucosa son el intestino, el hgado y los
riones. El hgado regula la composicin qumica de
la sangre y sintetiza varias protenas plasmticas.
El hgado, tambin puede formar glucosa por la
transformacin de otros azcares, por ejemplo, la
fructosa y la galactosa o a partir de otros metabolitos,
en especial los aminocidos.
El metabolismo de los lpidos en el hgado est
estrechamente
relacionado
con
el de
los
carbohidratos y el de los aminocidos. En la fase de
resorcin, el hgado convierte la glucosa y otros
monosacridos en cidos grasos por medio de la
acetil-CoA. El hgado tambin puede captar cidos
grasos de los quilomicrones que le son suministrados

desde el intestino
o a partir de complejos de
albmina y cidos grasos. Los cidos grasos
provenientes de ambas fuentes son transformados
en glicerolpidos, es decir, en grasas y fosfolpidos.
En la fase posresortiva, el metabolismo de los lpidos
cambia y el organismo hace uso de sus reservas. El
tejido adiposo libera entonces cidos grasos. Estos
son captados por el hgado y transformados
principalmente en cuerpos cetnicos [2].
El hgado distribuye varias clases de nutrientes a
otras partes del cuerpo. Debido a su flexibilidad
metablica, el hgado reduce las fluctuaciones de la
disponibilidad de los nutrientes que producen las
drsticas variaciones alimentarias y la alimentacin y
el ayuno intermitentes [3].
El msculo esqueltico est especializado en la
realizacin de un trabajo mecnico intermitente. Las
fuentes de energa que proporcionan ATP para la
contraccin muscular dependen en gran parte de la
actividad muscular y del estado fsico de la persona.
Durante el ayuno y la inanicin prolongada, parte de
la protena del msculo esqueltico se degrada para
proporcionar
aminocidos al hgado para la
gluconeognesis.

Fraccionamiento de tejidos en sus principales constituyentes

En contraste con el msculo esqueltico, el msculo

cardaco debe contraerse continuamente para
mantener el flujo sanguneo por todo el cuerpo. Para
mantener su continua operacin, el msculo cardaco
utiliza glucosa en el estado de alimentacin y cidos
grasos en el estado de ayuno. Por lo tanto, no es
sorprendente que el msculo cardaco est lleno de
mitocondrias. Puede utilizar tambin otras fuentes de
energa, como la glucosa, los cuerpos cetnicos, el
piruvato y el lactato. ste slo se produce en
pequeas cantidades en el msculo cardaco debido
a que la isoenzima de lactato deshidrogenasa de este
tejido se inhibe por las concentraciones elevadas de
su sustrato, el piruvato [4].

Resultados y discusin
1. Fraccionamiento de rganos y/o tejido.

2. Carbohidratos.
2.1. Prueba de Lugol.
Se realiz, la prueba de lugol con la muestra sin
hidrolizar y con hidrlisis (vase tabla 2.1).
.
Tabla 2.1. Prueba de Lugol.
Tejido
/rgano
Hgado
de pollo I
Hgado
de pollo
II
Hgado
de res
Carne
de pollo

M1

M2

Sin
hidrlisis

Con
hidrlisis

Sin
hidrlisis

Con
hidrlisis

Positivo

Positivo

Negativo

Negativo

Negativo

Negativo

Positivo

Negativo

Positivo

Positivo

Positivo

Positivo

Negativo

Negativo

Negativo

Negativo

En la prctica realizada se utilizaron cuatro muestras:

hgado de pollo I, hgado de pollo II, hgado de res y
carne de pollo. Para cada muestra se realiz el
fraccionamiento qumico, obteniendo los extractos, y
M5que contenan carbohidratos (M1 y M2), lpidos
(M3), protenas (M4) y cidos nucleicos (M5) (vase
grfica 1.1 y tabla 1.1).

Para la prueba de lugol, la formacin de una

coloracin naranja, indica que no hay presente
polisacridos. La coloracin azul indica la presencia
de almidn y la coloracin rojiza o violeta la presencia
de glucgeno o dextrinas (vase grfica 2.1).

Grfica 1.1. Extractos obtenidos en el fraccionamiento de

Grfica 2.1. Prueba positiva, negativa y reaccin de lugol.

la muestra.

Tabla 1.1. Extractos obtenidos en el fraccionamiento de la

muestra de hgado de pollo.
Tejido
/rgano

Hgado
de pollo
I
Hgado
de pollo
II
Hgado
de
res
Carne
de pollo

Peso
rgano
/tejido
(g)

Peso
seco

Peso
seco

Peso
seco

Peso
seco

Peso
seco

M1

M2

M3

M4

M5

(g)

(g)

(g)

(g)

(g)

8,3435

0,479

0,008

0,054

3,82

0,015

8,316

0,371

0,098

0,050

5,265

0,010

8,054

0,416

0,3

0,175

1,5

0,012

8,054

0,276

0,137

Para la caracterizacin de los extractos, se realizaron

las siguientes pruebas.

Para el caso del extracto 1, la prueba fue positiva

para los tejidos de hgado de pollo I e hgado de res,
puesto que presentaron una coloracin rojiza y
negativa para el hgado de pollo II y carne de pollo,
puesto que presentaron una coloracin naranja o se
mantuvo la coloracin del lugol.
Para el caso del extracto 2, la prueba fue positiva
para los tejidos de hgado de pollo II e hgado de res,
puesto que presentaron una coloracin rojiza o violeta
y negativa para el hgado de pollo I puesto que se
mantuvo la coloracin del lugol y carne de pollo
puesto que no se obtuvo dicho extracto.

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3. Lpidos.
2.2. Prueba de Molish.
Para esta prueba, la formacin de dos fases con un
anillo violeta, indica la presencia de carbohidratos
(vase grfica 2.2 y tabla 2.2).
Tabla 2.2. Prueba de Molish.
Tejido
/rgano
Hgado
de pollo I
Hgado
de pollo
II
Hgado
de res
Carne
de pollo

M1

M2

Positivo

Positivo

Positivo

Positivo

Positivo

Positivo

Positivo

Negativo

Grfica 2.1. Prueba y reaccin de Molish.

3.1. Prueba de Lieberman-Bukhardt.

La prueba realizada para el hgado de pollo I y el
hgado de pollo ll, en el minuto 1, se observ la
formacin de dos fases, donde la fase superior era de
coloracin caf. Al minuto 15, esta fase superior tom
una coloracin verdosa.
Para la muestra de hgado de res, al minuto 1, se
formaron dos fases donde la superior tom una
coloracin verdosa. Al transcurrir 15 minutos, las
fases tomaron una coloracin rojiza y caf.
El extracto 3 no fue obtenido de la muestra de carne
de pollo.
Grfica 2.1. Reaccin de Lieberman-Bukhardt.

4. Protenas.
4.1. Prueba de Millon.

La prueba de Molish fue negativa nicamente para el

extracto 2 de la carne de pollo debido a que este no
fue obtenido.

En esta prueba, la presencia del grupo hidroxifenlico

en la molcula proteica presente en la solucin forma
un complejo con el mercurio presente en el reactivo
de millon. Este complejo presenta una coloracin
rojiza. Para las diferentes muestras empleadas, en
todas se observ la formacin del complejo coloreado
que se atribuye al complejo xido de mercurio y fenol.

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Tabla 2.2. Prueba de Millon.

Tejido
/rgano
Hgado
de pollo I
Hgado
de pollo II
Hgado
de res
Carne
de pollo

Grfica 2.1. Prueba de Ninhidrina.

M4
Positivo
Positivo
Positivo
Positivo

Grfica 2.1. Prueba y reaccin de Millon.

5. Protenas.
5.1. Prueba de Pentosas.
Esta prueba es positiva cuando en la solucin, al
realizarse la acidificacin y posteriormente la adicin
de bencidina, presenta una coloracin. Esta prueba
fue positiva para la muestra de hgado de res, donde
present una coloracin amarilla tenue.
Tabla 2.2. Prueba de Pentosas.
4.2. Prueba de Ninhidrina.
Para esta prueba, se observ la positividad si la
solucin tom una coloracin amarilla o violeta. Esta
coloracin se atribuye a la reaccin de la ninhidrina
con molculas que presentan un grupo amino y un
grupo carboxilo libre. Todas las muestras presentaron
dicha coloracin amarilla.
Tabla 2.2. Prueba de Ninhidrina.
Tejido
/rgano

M4

Hgado
de pollo I
Hgado
de pollo
II
Hgado
de res
Carne
de pollo

Positivo

Tejido
/rgano

M5

Hgado
de pollo I
Hgado
de pollo
II
Hgado
de res
Carne
de pollo

Negativo
Negativo

Positivo
Negativo

Grfica 2.1. Prueba de Pentosas.

Positivo

Positivo
Positivo

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6. Anlisis adicional.
El glucgeno es el hidrato de carbono de
almacenamiento de energa de los vertebrados. Se
encuentra abundantemente en las clulas hepticas y
musculares. El glucgeno puede constituir hasta el
8-10 % del peso seco de las clulas hepticas y el
2-3 % de las clulas musculares.
Los lpidos se pueden clasificar en saponificables e
insaponificables. Los lpidos saponificables son las
grasas, ceras, fosfolpidos, esfingolpidos. Los lpidos
insaponificables son los terpenos, esteroides y
prostaglandinas [5].
Si en la muestra de protenas estuviesen presentes
sales de amonio, el uso de la prueba de ninhidrina es
incorrecta puesto que dan la ninhidrina se oxida y
reduce intramolecularmente en presencia de
amoniaco, generndose el color caracterstico de la
positividad de esta prueba. Por este tipo de
interferencia, es adecuado usar la prueba de millon si
en la solucin est presente la tirosina.

Conclusiones
* Segn las pruebas realizadas, en la muestra de
hgado de pollo I y II estn presentes monosacridos,
glucgeno, lpidos y protenas.
* Las pruebas realizadas dan indicios que en la
muestra de hgado de res estn presentes
monosacridos, glucgeno, lpidos, protenas y cidos
nucleicos.
* Las pruebas realizadas indican que en la muestra
de carne de pollo estn presentes carbohidratos y
protenas.

[1] MCKEE, T, MCKEE, James R. Bioqumica: la base molecular de la

vida. 3 ed. McGraw-Hill interamericana. Espaa. Pg. 333-335.
[2] MATHEWS, C. VAN HOLDE, K. AHERN, K. Bioqumica, 3ed.
Pearson Addison Wesley. Espaa. 2005. Pg. 363-364.
[3] MLLER ESTERL, Werner. Bioqumica Fundamentos para medicina
y Ciencias de la vida. Editorial Revert. Espaa. 2008. Pg. 37-38.
[4] MATUSSEK, R. SCHNEPEL, F. STEINER, G. Anlisis de los
alimentos. 2a ed. Editorial Acribia. Espaa. Pg. 70-72.
[5] NELSON,D. COX, M. Lehninger Principios de Bioqumica. 4a ed.
OMEGA. Mxico. Pg 398-399.