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ESTANDARIZACIN DE LA TCNICA ESPECTROFOTOMTRICA (UV-VIS)
PARA LA CUANTIFICACIN DE ANTRAQUINONAS PRESENTES EN

PRODUCTOS A BASE DE Aloe vera
JHON ELMER BUSTAMANTE BOTERO

LUIS MAURICIO CARRASCAL
UNIVERSIDAD TECNOLGICA DE PEREIRA

FACULTAD DE TECNOLOGA
ESCUELA DE QUMICA
PROGRAMA DE TECNOLOGIA QUMICA
PEREIRA
2010
1

PRODUCTOS A BASE DE Aloe vera

TRABAJO DE GRADO
Requisito final para optar al ttulo de tecnlogo en Qumica
DIRECTOR:
Gloria Edith Guerrero lvarez
UNIVERSIDAD TECNOLGICA DE PEREIRA

FACULTAD DE TECNOLOGA
ESCUELA DE QUMICA
PROGRAMA DE TECNOLOGIA QUMICA
PEREIRA
2010
NOTA DE ACEPTACIN DE TRABAJO DE GRADO

PRODUCTOS A BASE ALOE VERA
Presentado por:
Los suscritos director y jurado del presente trabajo de grado, una vez realizada la
versin escrita y presenciado la sustentacin oral, decidimos otorgar:
La nota de:
________________________________
Con la connotacin:
________________________________
Para constancia firmamos en la ciudad de Pereira hoy:
Director:
Gloria Edith Guerrero lvarez
_________________________________
Jurado:
Firma:
_________________________________
Jurado:
Firma:
_________________________________
AGRADECIMIENTOS
A Dios y a nuestras familias por el apoyo incondicional.

A la directora Gloria Edith Guerrero por brindarnos la oportunidad de realizar el trabajo
de grado en su grupo de investigacin y por los consejos que recibimos durante la
elaboracin del mismo y a Juan Pablo Arrubla por las asesoras recibidas.
A nuestros amigos y conocidos por sus consejos, compaa y apoyo durante la carrera.
Al laboratorio de aguas y alimentos y en especial al profesor Ariel Felipe Arcila por
prestarnos su colaboracin en el desarrollo del trabajo.
A cada uno de los profesores que nos dieron clases, por habernos brindado sus
orientaciones acadmicas y humanas.
CONTENIDO
Pag.
RESUMEN.
11
JUSTIFICACIN.
12
OBJETIVOS.
14
OBJETIVO GENERAL.
14
OBJETIVOS ESPECFICOS.
14
1. MARCO DEANTECEDENTES
15
1.1. EXTRACCIN ANTRAQUINONAS
15
1.2.CUANTIFICACIN.
16
2. MARCO TERICO.
17
2.1. ESTANDARIZACIN.
17
2.1.1. Linealidad y rango.
17
2.1.2.Precisin.
18
2.1.3. Exactitud.
19
2.1.4. Limite de deteccin.
20
2.1.5. Limite de cuantificacin.
20
2.1.5.1. Mtodo basado en la relacin seal/ruido
20
2.1.5.2. Mtodo Basado en la Desviacin Estndar de la Respuesta

del Blanco y la Pendiente de la Recta de Calibrado.
21
2.1.5.3. Mtodo Basado en la Extrapolacin de la Recta de

Calibrado a concentracin Cero.
21
2.1.6. Sensibilidad.
21
2.2. COMPUESTOS ANTRACENICOS VEGETALES.
21
2.2.1. Clasificacin.
21
2.2.2. Compuestos antraquinonicos.
22
3.
2.2.2.1. Definicin.
22
2.2.2.2. Antraquinonas presentes en el aloe vera.
23
2.2.2.3. Propiedades generales y caracterizacin de las antraquinonas.
24
2.3. ALOE VERA.
25
2.3.1. Planta de aloe vera.
25
2.3.2. Descripcin.
26
2.3.3. Produccin mundial.
27
2.3.4. Composicin qumica.
28
2.3.4.1. Compuestos antioxidantes.
30
2.3.4.1.1. Cromonas.
30
2.3.4.1.2. Antraquinonas.
30
2.3.5. Usos del aloe vera.
31
2.3.6. Control de calidad.
32
2.3.6.1. Requerimientos fisicoqumicos y biolgicos para el

control de calidad en el gel de Aloe vera
32
2.3.6.2. Reglamentacin nacional del control de calidad de productos

con Aloe vera
33
2.4. FUNDAMENTO DE LA TCNICA INSTRUMENTAL
33
2.4.1. Espectroscopia UV-VIS.
33
2.4.1.1. Caractersticas de un espectrofotmetro.
34
2.4.1.2. Obtencin de un espectro de absorcin.
35
2.4.4.3 Aplicaciones.
36
SECCIN EXPERIMENTAL.
37
3.1.1. Estndar.
37
3.1.2. Muestra de anlisis.
37
3.1.3. Espectrofotmetro.
37
6
3.1.4. Ultrasonido.
37
3.1.5. Rotaevaporador
38
3.2.EXPERIMENTAL PREVIA A LA ESTANDARIZACIN.
38
3.2.1. Limite de deteccin.
38
3.2.2. Limite de cuantificacin.
39
3.2.3. Curvas de calibracion.
40
3.2.4. Sencibilidad.
40
3.2.5. Linealidad.
40
3.2.6. Intervalo de trabajo o lineal.
40
3.3. EXTRACIN DEL ANALITO Y OBTENCIN DEL DERIVADO

ANTRAQUINONICO.
40
3.4. PROCEDIMIENTO DE ESTANDARIZACIN.
42
3.4.1 Exactitud.
42
3.4.2. Precisin.
42
3.4.2.1. Repetibilidad.
42
3.4.2.2. Repetibilidad intermedia.
42
3.4.2.3.Reproducibilidad.
42
3.4.3.Recuperacin.
42
3.4.4. Verificacin de la estandarizacin.
43
3.5. ANALISIS PRELIMINAR POR CROMATOGRAFIA LIQUIDA

DE ALTA EFICIENCIA
43
4. RESULTADOS Y DISCUCIN.
44
4.1.BARRIDO ESPECTRAL.
44
4.2. CONDICIONES PARA LA OBTENCION DEL DERIVADO

ANTRAQUINONICO
44
4.3.CALIBRACIN.
45
7
4.4.PARAMETROS DE LA ESTANDARIZACIN.
47
4.4.1. Precisin.
47
4.4.2. recuperacin.
48
4.4.3. Determinacin de la exactitud con estndar.
48
4.4.4. Exactitud interlaboratorio.
49
4.5.TIEMPO Y COSTO DEL ANALISIS.
49
4.6. DETERMINACIN POR CROMATOGRAFA LIQUIDA

DE ALTA EFICIENCIA.
50
4.7.DISCUCIN GENERAL.
50
4.7.1. Interferencias
51
5. CONCLUSIONES.
53
6. RECOMENDACIONES.
54
BIBLIGRAFIA.
55
ANEXOS.
61
INDICE DE TABLAS
Tabla No. 1: Clasificacin botnica de la planta de A. vera
Pg.
26
Tabla No. 2: Composicin Qumica del Aloe vera.
28
Tabla No. 3: Requerimientos fisicoqumicos y biolgicos para el control de

calidad en el gel de Aloe vera.
31
Tabla No. 4: Datos correspondientes a la curva de calibracin del estndar de alona. 45

Tabla No. 5: Datos estadsticos para la calibracin del mtodo.
45
Tabla No. 6: Parmetros para la determinacin de la precisin en trminos de

repetibilidad, repetibilidad intermedia y reproducibilidad.
46
Tabla No. 7: Lecturas para determinar recuperacin, con adicin de

estndar alto y bajo.
47
Tabla No. 8: Parmetros para la determinacin de la exactitud a tres niveles de

concentracin.
47
Tabla No. 9: Presentacin de los resultados para la determinacin de la exactitud

interlaboratorios.
48
Tabla No. 10: Concentraciones de cada nivel inyectado.
49
Tabla No. 11: Resumen de los resultados obtenidos con diferentes metodologas
para la determinacin de Alona.
50
INDICE DE FIGURAS
Figura No. 1: Estudios en los que se divide la precisin.
Pg.
18
Figura No. 2: Ncleos bsicos de compuestos antracnicos
21
Figura No. 3: Enumeracin de los carbonos en el ncleo de las antraquinonas
21
Figura No. 4: Reaccin de derivatizacin de antraquinonas.
23
Figura No. 5: Hidrlisis oxidativa de antraquinonas
24
Figura No. 6: Planta de Aloe vera
25
Figura No. 7: Interior de una hoja de Aloe vera (A) y partes principales de una
hoja de Aloe vera (B)
26
Figura No. 8: Estructura de la Aloeresin A.
29
Figura No. 9: Estructuras de la Alona A y Alona B.
30
Figura No. 10: Principales partes de un espectrofotmetro
33
Figura No. 11: Espectrofotmetro UV-VIS, SPECTRONIC
36
Figura No. 12: Equipo ULTRAsonik
36
Figura No. 13: Rota evaporador (Heidolph-Laborota 4003).
37
Figura No. 14: Procedimiento para la extraccin y cuantificacin de antraquinonas

en A. vera, metodologa 1.
39
Figura No. 15: Procedimiento para la extraccin y cuantificacin de antraquinonas

en A. vera, metodologa 2.
40
Figura No 16: Espectro de absorcin de concentracin media de estndar de Alona. 43

Figura No 17: Solucin de derivados antraquinnicos en la determinacin 1,
con hidrxido de potasio y en la determinacin 2, con solucin
metanlica de acetato de magnesio.
44
Figura No. 18: Curvas de calibracin de los derivados antraquinnicos obtenidos

por medio de las metodologas 1 y 2.
44
10
RESMEN
En el presente proyecto se documenta la tcnica de extraccin de compuestos
antraquinnicos del muclago de Aloe vera, y el desarrollo de la estandarizacin de una
tcnica espectrofotomtrica UV-VIS, que permita la cuantificacin de estos analitos en
los productos que contengan Aloe vera, calculando los parmetros estadsticos
necesarios para esto, como lo son la precisin, linealidad, limite de deteccin y limite de
cuantificacin, sensibilidad y limite de linealidad; logrando valores aceptables de estas
medidas, indicando que la tcnica muestra concordancia entre anlisis. La
determinacin espectrofotomtrica UV-VIS cumple con la normatividad establecida por
el Instituto Nacional de Vigilancia de Medicamentos y Alimentos (INVIMA), la cual se
basa en lo estipulado por la Pharmcopeia Europea para el anlisis de antraquinonas
totales.
Como muestra real, se utiliz un producto comercial consistente en un jugo concentrado
de muclago de Aloe vera, y una muestra natural analizada directamente del muclago de
una penca de Aloe vera, las cuales fueron analizadas despus de que la tcnica fue
estandarizada y posteriormente se realiz el derivado antraquinnico, se obtuvieron los
siguientes resultados: 452 mg Alona/Kg de muestra para el producto comercial y para
la muestra natural se hizo un anlisis realizando tres variaciones en la metodologa de
extraccin, los datos obtenidos fueron: 187,1 mg Alona/Kg de muestra, 662,04 mg
Alona/Kg de muestra y 19077,23 mg Alona/Kg de muestra.
11
JUSTIFICACIN
De las ms de 400 especies de Aloe vera que existen, actualmente slo se comercializan,
el Aloe barbadensis Miller y el Aloe aborescens que son las ms conocidas, [39, 40].
Los mercados ms atractivos para productos de Aloe son los Estados Unidos, Francia,
Reino Unido, Alemania, Italia, Canad, Japn, Espaa, Suecia y Corea. El mercado
mundial del Aloe es muy diverso, comprendiendo tres reas principalmente:
Alimenticia, farmacolgica y cosmtica. Los productos que se generan en las anteriores
industrias son: Bebidas nutritivas, crema hidratante para manos y cuerpo, agente
curativo en los cosmticos y los medicamentos, concentrados para bebidas,
acondicionadores, shampoo, gel y acbar liofilizado, [42, 43, 44].
En Colombia existe un excelente potencial para producir grandes volmenes de Aloe
vera con el fin de cubrir el dficit en la oferta del acbar, pasta de Aloe, gel fresco, gel
liofilizado en el mercado nacional e internacional, retribuyndose en beneficios
laborales, econmicos, tecnolgicos y comerciales para todos los actores que
intervienen en esta cadena productiva. El cultivo de la sbila en Colombia lo realizan en
su mayora pequeos productores, grupos de mujeres y productores independientes, los
cuales se han dedicado a cultivar la Sbila como una opcin econmica pero que
atraviesa dificultades en su comercializacin, por lo que reviste especial importancia el
anlisis y diseo de estrategias para este subsector que lo preparen para insertarse en el
creciente mercado nacional e internacional, [42].
De los cultivos presentes en el Eje Cafetero y de la elaboracin de productos a base de
Aloe vera, especficamente en Pereira, no se cuenta con antecedentes slidos de los
cuales se pueda disponer de informacin significativa en estos campos; Sin embargo se
sabe que de las 406,1 hectreas cultivadas de Aloe vera en Colombia, el 1,95 % se
encuentra en esta regin, y respecto a la elaboracin y comercializacin de productos
que contengan A. vera se conocen pocas empresas dedicadas a esto; la comercializacin
de los productos a nivel regional y nacional presenta dificultades, principalmente debido
a que muy pocas cuentan con el aval del Instituto Nacional de Vigilancia de
Medicamentos y Alimentos (INVIMA) respecto al contenido de alona, el cual no debe
sobrepasar los 50 mg/L, lo anterior debido a que este compuesto posee acciones
laxantes y en mayores proporciones puede ser cancergeno, [29].
La estandarizacin es un procedimiento estadstico que consiste en verificar y
documentar, que exista un alto grado de seguridad en la obtencin de resultados que
deberan ser precisos y exactos dentro de las especificaciones y los atributos de calidad
previamente establecidos. La caracterizacin de antraquinonas se realiza por diferentes
tcnicas, como lo son: Ensayo de Brntranger, ensayo con acetato de magnesio
alcohlico, ensayo de reduccin moderada, ensayo de reduccin drstica, y la
cuantificacin de los derivados se realiza principalmente por: Espectrofotometra UV12
VIS y Cromatografa lquida de alta eficiencia (CLAE). En este trabajo se utiliz la

metodologa sugerida por el INVIMA la cual se basa en lo establecido por la
Pharmacopeia Britnica, [59, 60]; la metodologa consiste principalmente en el
desarrollo de un derivado antraquinnico, y posterior anlisis espectrofotomtrico, [4,5].
A nivel regional y nacional son pocos los laboratorios que brindan el servicio tcnico de
anlisis de alona; por lo tanto se realiz la estandarizacin de la tcnica
espectrofotomtrica UV-VIS para cuantificar antraquinonas totales con el fin de
contribuir a que los productores de la regin cumplan con los requerimientos del
INVIMA; adems de ofrecer este servicio, se espera dar un asesoramiento a los
cultivadores de la regin con el fin de que puedan implementar buenos procesos de
transformacin del Aloe vera en productos alimenticios.
13
OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Estandarizar la tcnica por espectrofotometra UV-VIS para la cuantificacin de
compuestos antraquinnicos totales presentes en productos que contengan Aloe
vera.
OBJETIVOS ESPECFICOS
Implementar un mtodo anlisis para la obtencin y cuantificacin de derivados
antraquinnicos totales por espectrofotometra UV-VIS
Determinar experimentalmente los valores de los parmetros: precisin,
linealidad, lmite de deteccin y cuantificacin, sensibilidad y correlacin lineal
con el fin de establecer un comprobable grado de confianza para el anlisis de
antraquinnicas en las condiciones del laboratorio de anlisis y alimentos de la
Universidad Tecnolgica de Pereira.
Realizar el anlisis de cuantificacin en una muestra o producto que contenga
Aloe vera para establecer si el mtodo es adecuado para la determinacin de
antraquinonas.
14
1. MARCO DE ANTECEDANTES
1.1 Extraccin de antraquinonas

Existen a nivel internacional diversos estudios respecto a la estandarizacin de mtodos
para la determinacin de antraquinonas en diferentes plantas (Cassia fistula, Senna
alata, Rubia teinctorum, Morinda citrifolia), en estos procedimientos se evalan
principalmente los parmetros de linealidad, sensibilidad, lmites de deteccin y
cuantificacin, y sensibilidad, [4, 7, 76, 77, 78]. Para la determinacin de antraquinonas
en productos que contenga A. vera, se utiliza la metodologa sugerida por la
Pharmacopeia Europea del ao 1995, [59, 60]. Sin embargo, no hay an estudios en
donde se reporte la estandarizacin de esta extraccin, sino diferentes investigaciones en
donde se lleva a cabo el anlisis de contenido de antraquinonas, [8-17].
Se encontraron varios mtodos de extraccin para de antraquinonas, los procedimientos
usados para el aislamiento de estas sustancias dependen del tipo de ncleo de inters,
es decir si se desea obtener las agliconas, los glicsidos, las formas reducidas o las
formas oxidadas. La agliconas presentes en la muestra vegetal se extraen con solventes
poco polares como ter etlico o benceno. Los compuestos glicosdicos se extraen ya sea
con etanol, agua o mezclas de etanol-agua. Cuando se desee extraer las formas
reducidas, debe tenerse precaucin especial, ya que la sola presencia del oxgeno del
aire produce la oxidacin, en este sentido es aconsejable trabajar en atmsferas inertes
como por ejemplo, una atmsfera de nitrgeno. El proceso de oxidacin es tambin
bastante rpido en soluciones alcalinas, y en estas condiciones se forman diantronas,
poliantronas y por supuesto antraquinonas, [1, 18].
[Temiyaputra, W.; and et al] realizan la comparacin de diferentes tcnicas de
extraccin de antraquinonas existentes en las races de la planta: Morinda sp, los
mtodos de extraccin utilizados fueron: Equipo soxhlet, se experimentaron adems tres
mtodos ms de extraccin; se prob con solventes de tipo industrial, etanol absoluto,
acetona, y acetato de etilo; extraccin con vapor a presin, y extraccin slido-lquido,
[6]. En las antraquinonas presentes en el Aloe vera, no es suficiente los anteriores
mtodos de extraccin, puesto las antraquinonas adems de estar libres, se encuentran
glicosidadas, por lo tanto se requiere un paso previo consistente en la hidrlisis de estas,
y separacin de los glucsidos en una fase polar. Por ejemplo los autores (Sakulpanich,
A.; and Gritsanapan, W.) realizaron solo la extraccin de glicsidos antraquinnicos
presente en la Cassia fistula, para esto separaron previamente las agliconas y
continuaron con el procedimiento descrito en el trabajo desarrollado, [4].
Para la extraccin de las antraquinonas tanto libres como glicosidadas en el A. vera, es
decir las antraquinonas totales, algunos autores, [4, 5, 7] se guan para la extraccin y
cuantificacin en una tcnica analtica basada en la reaccin de Borntrager que es el
fundamento terico de los procedimientos descritos en la literatura para cuantificar
antraquinonas totales, el cual consiste principalmente en el desarrollo de un derivado
15
antraquinnico con un metal en solucin y despus la lectura en un espectrofotmetro

UV-VIS.
1.2 Cuantificacin
Para la cuantificacin de antraquinonas se han utilizado diferentes mtodos
instrumentales, entre ellos el espectrofotomtrico, esta es una tcnica que permite
cuantificar las antraquinonas totales presentes en la matriz a analizar; al respecto se
encuentra diversos estudios realizados, [7-13]; Los mtodos cromatogrficos permiten
una identificacin ms especfica de estos analitos, como por ejemplo los ismeros A y
B de la Alona, para evidenciar lo anterior se muestra como en el estudio realizado por
los autores, (Genovese, S.; et al), se desarrolla una identificacin de las diferentes
antraquinonas por cromatografa lquida de alta eficiencia (CLAE) presentes en la
corteza de Rhamnus alpinus L. (Rhamnaceae). Adems en esta tcnica no se requiera la
preparacin de derivados como si se realiza en la espectrofotomtrica, permitiendo as
la lectura de los compuestos en la regin ultravioleta a una longitud de onda de 356 nm:
Existen otros estudios en donde se aplican tcnicas cromatogrficas, generando
identificacin de diferentes antraquinonas en diversas plantas, [14-20].
16
2. MARCO TERICO
2.1 ESTANDARIZACIN
Estandarizar un mtodo de anlisis consiste en verificar y documentar, que este
conduzca con un alto grado de seguridad, a la obtencin de resultados precisos y
exactos dentro de las especificaciones y los atributos de calidad previamente
establecidos, [21]. La estandarizacin de las metodologas analticas, junto con otras
actividades englobadas en la gran rea del aseguramiento de la calidad permite
conseguir calidad, otorgando la confianza necesaria a la vez que confieren un grado
elevado de comparabilidad entre los resultados de los anlisis qumicos.
El anlisis se considera hoy en da un proceso mediante el cual se obtiene informacin.
Se realizan millones de anlisis cada da en el mundo en los mbitos ms variados:
anlisis de productos manufacturados, naturales, anlisis medioambientales, clnicos,
forenses, qumicos y fsicos. En todos ellos se requiere una confianza en los resultados
obtenidos
La estandarizacin del mtodo debe detectar la presencia de error en los resultados
emitidos. Los requisitos analticos para un uso determinado establecen los parmetros o
criterios de calidad del mtodo a utilizar para resolver el problema. Estos criterios de
calidad, llamados performance characteristics o figures of merit, pueden ser de
tipo estadstico. En estos figuran los parmetros fundamentales de exactitud
(relacionados con la trazabilidad) y precisin (relacionados con la incertidumbre) y los
secundarios de selectividad, sensibilidad, limites de deteccin y cuantificacin, [21].
2.1.1 Linealidad y Rango.
La linealidad es la capacidad del mtodo de proporcionar resultados que son
directamente (o por medio de transformaciones matemticas) proporcionales a la
concentracin del analito en la muestra dentro del rango establecido. Siempre que sea
posible se buscar respuesta del tipo lineal que facilitar su trazado, interpolacin e
interpretacin.
El rango es el intervalo entre la concentracin superior e inferior de analito para el cual
se ha demostrado la correcta precisin, exactitud y linealidad del mtodo descrito.
Aunque el proceso lgico consistira en evaluar cuales son los limites de concentracin
en los que el mtodo analtico pierde su linealidad, normalmente se toma como punto de
partida un intervalo de concentraciones ya establecido de acuerdo con la experiencia, el
conocimiento analtico de la tcnica empleada y principalmente en funcin de las
especificaciones [21, 22].
Para evaluar la linealidad existen unos criterios mnimos aplicables a cualquier
procedimiento:
Dentro del rango establecido se recomienda estudiar al menos 4 niveles de
concentracin. Estadsticamente lo correcto seria analizar las muestras de forma
aleatoria, no obstante, se establece como criterio prctico analizarlas en sentido
creciente de concentracin para minimizar posibles efectos memoria en el equipo. Para
17
realizar los anlisis se recomienda hacer pesadas independientes, ya que as se elimina

el posible error sistemtico que se podra arrastrar partiendo de una sola pesada y
realizando diluciones. No obstante, para evaluar la linealidad en las impurezas se suelen
utilizar sucesivas diluciones ya que normalmente se trabaja en niveles de concentracin
muy bajos y esto dificultara las pesadas [21].
Con los resultados del estudio de la linealidad se prepara una tabla relacionando las
concentraciones x y la respuesta y. La relacin entre ambas variables se expresa
matemticamente como una recta de regresin del tipo y = bx + a, obtenida por un
mtodo de ajuste. Si la recta no pasa cerca del origen de coordenadas significa que el
mtodo a evaluar esta afectado por un error sistemtico por defecto o por exceso en el
intervalo estudiado. Si existen diferencias apreciables entre los valores experimentales y
los puntos de la recta significa que la linealidad no es buena.
En la recta de regresin y = bx + a, x es la concentracin, y la respuesta, b el valor de la
pendiente y, a el termino independiente. La pendiente b se encuentra relacionada con la
sensibilidad del mtodo de forma que a mayor pendiente mayor sensibilidad (respuesta
del mtodo frente a los cambios de la concentracin del analito). El termino
independiente a, u ordenada en el origen, es la interseccin de la recta con el eje de las
ordenadas y es indicativo del error sistemtico, no difiriendo estadsticamente de cero
en caso de no existir sesgo. El coeficiente de correlacin (r) indica el grado de relacin
entre la variable x (concentracin), y la variable y (respuesta). Su valor mximo es 1, si r
es cercano a la unidad significa que existe correlacin con una probabilidad elevada. Un
valor nulo indica ausencia de relacin lineal entre variables. El valor recomendable para
el coeficiente de correlacin es 0,999, aunque en el caso de impurezas se admite
0,990, [21].
2.1.2 Precisin.
Este parmetro expresa el grado de concordancia (grado de dispersin) entre una serie
de medidas de tomas mltiples a partir de una misma homognea en las condiciones
prescritas [21]. Usualmente este parmetro se expresa en trminos de la Desviacin
Estndar (SD), Desviacin Estndar Relativa (RSD) o Coeficiente de Variacin (CV)
[22].
La procedencia de las muestras destinadas al estudio de la precisin puede ser de
muestras reales o preparadas en el laboratorio. La importancia de evaluar este parmetro
es la de conocer la variabilidad o el mas-menos del mtodo de ensayo. Esta variabilidad
es debida a errores aleatorios inherentes a todo mtodo de ensayo. Como consecuencia
de la existencia de estos errores, los anlisis efectuados sobre muestras idnticas, en las
mismas circunstancias, no conducen generalmente a resultados idnticos. Los factores
susceptibles a influir sobre los resultados de un ensayo no pueden ser siempre
controlados (analista, equipo instrumental, reactivos, tiempo, etc.), [21, 24].
En la figura 1 se muestra los diferentes tipos de resultados que engloba la precisin.
18
Figura 1. Estudios en los que se divide la precisin.

La repetibilidad se expresa matemticamente por el coeficiente de variacin (desviacin
estndar relativa) de una serie de medidas. Uno de los factores que ms influye en la
repetibilidad del mtodo de anlisis es la concentracin del analito, ya que la desviacin
estndar de las respuestas obtenidas aumenta al disminuir la concentracin del analito.
La repetibilidad instrumental estudia la variabilidad debida nicamente al instrumento y
se determina analizando repetidamente una misma muestra de forma consecutiva de 6 a
10 veces. El ensayo de la repetibilidad del mtodo se efecta sobre una serie de
alcuotas de una muestra homognea que se analiza independientemente desde el
principio (preparacin de muestra) hasta el final (lectura de resultados) por el mismo
instrumento y el mismo analista, los resultados de la repetibilidad instrumental
dependen del instrumento, por ejemplo no se puede obtener el mismo coeficiente de
variacin con un equipo de doble haz que con uno de haz sencillo. Cuanto mayor sea la
manipulacin de la muestra ms probable es que la variabilidad del mtodo aumente.
Con la precisin intermedia se determina la variabilidad del mtodo efectuando una
serie de anlisis sobre la misma muestra, en un mismo laboratorio pero en condiciones
operativas diferentes.
La reproducibilidad permite verificar que el mtodo de anlisis proporciona los mismos
resultados en diferentes laboratorios, [21].
2.1.3 Exactitud.
La exactitud de un procedimiento analtico expresa la proximidad entre le valor que es
aceptado convencionalmente como valor verdadero o un valor de referencia y el valor
experimental encontrado. Se expresara como porcentaje de recuperacin en la
valoracin de una cantidad conocida de analito aadida sobre la muestra o como la
diferencia entre la media obtenida y el valor aceptado como verdadero junto a los
intervalos de confianza, [21].
La recuperacin esperada depende de la matriz de la muestra, del procedimiento de
preparacin de la muestra y de la concentracin del analito en la misma. Aunque es
deseable alcanzar valores de recuperacin cercanos al 100%, en algunas muestras de
matrices complejas solo se obtienen valores del 50, 80 o 90%. En estos casos es
importante que aunque la recuperacin sea baja, la precisin del mtodo sea alta ya que
19
entonces puede intentar aplicarse un factor de correccin. La desviacin de la exactitud

por exceso se produce cuando existen interferencias y la selectividad del mtodo no es
la adecuada, entonces se obtienen resultados superiores al valor verdadero. En este caso,
si es posible, se debera modificar las condiciones del mtodo para optimizar la
selectividad o bien cambiar a otro alternativo que sea selectivo. La desviacin de la
exactitud por defecto suele producirse cuando la matriz de la muestra es compleja y la
extraccin del analito requiere varios pasos obtenindose recuperaciones mas bajas.
Cuando esto ocurre sera conveniente intentar optimizar la preparacin de la muestra
para mejorar el factor de recuperacin, [21].
2.1.4 Limite de Deteccin (LD).
El lmite de deteccin se define como la mnima cantidad de analito en la muestra que
se puede detectar aunque no necesariamente cuantificar bajo las condiciones
experimentales establecidas, [21].
El lmite de deteccin es un trmino solo cualitativo. No debe confundirse este trmino
con otro al que normalmente se asocia, la sensibilidad, ya que esta es la capacidad de un
mtodo de anlisis para discriminar pequeas diferencias en concentracin o masa del
analito. Una alta sensibilidad del mtodo analtico no siempre permite suponer
inferiores lmites de deteccin, ya que lo que definira este lmite es la relacin entre el
ruido y la seal debida al analito, [21].
2.1.5 Limite de Cuantificacin (LC).
El lmite de cuantificacin de un mtodo, corresponde a la mnima cantidad de analito
presente en la muestra que se puede cuantificar, bajo las condiciones experimentales
descritas, con una adecuada precisin y exactitud.
El limite de cuantificacin es un termino cuantitativo, encontrndose entre este y el
limite de deteccin un rango de concentraciones en el que si bien no puede cuantificarse
el analito en cuestin con razonable certeza, si puede detectarse su presencia sin incurrir
en falsos positivos, [21].
Existen diversos mtodos de anlisis y equipos instrumentales, dependiendo de cada
uno se elige el mtodo para hallar tanto el lmite de deteccin como el de cuantificacin,
en los siguientes prrafos se mencionaran algunos mtodos para hallarlos.
2.1.5.1 Mtodo Basado en la Relacin Seal/Ruido.
Uno de los empleados, requiere que el procedimiento de anlisis sea instrumental y que
proporcione una seal blanco, un ruido de fondo o una lnea de base, es decir una seal
residual a concentracin de cero analito (espectrofotometra UV-visible). Este
procedimiento presenta la desventaja de que en numerosas ocasiones al llevar a cabo la
comprobacin experimental del LC calculado, se observa que es posible obtener
resultados igualmente precisos y exactos aun cuando se desciende mas en la
concentracin limite, [21].
20
2.1.5.2 Mtodo Basado en la Desviacin Estndar de la Respuesta del Blanco y la

Pendiente de la Recta de Calibrado.
De acuerdo con la IUPAC, puede calcularse el LD y LC de un mtodo analtico a partir
del conocimiento de la desviacin estndar atribuible a la respuesta de una muestra y la
pendiente de la recta de calibrado del analito. La expresin a aplicar para este clculo
vara en funcin de si el mtodo instrumental empleado corrige la seal frente a un
blanco (mtodos espectrofotomtricos) o no (mtodos cromatogrficos), [21].
2.1.5.3 Mtodo Basado en la Extrapolacin de la Recta de Calibrado a
concentracin Cero.
Se trata de un procedimiento aplicable tambin a mtodos analticos instrumentales que
proporcionan resultados numricos y dirigido a evitar el calculo, en ocasiones costoso
en tiempo, de la seal media del blanco y su desviacin estndar. Utilizando como en el
anterior la pendiente de la recta de calibrado, pero en este caso sustituye el valor real de
un blanco, por la extrapolacin de dicha recta, [21].
2.1.6 Sensibilidad.
Es una medida del factor de respuesta del instrumento como una funcin de la
concentracin [22]. En contraste con el limite de deteccin, la sensibilidad de un
mtodo esta definida como la habilidad para distinguir entre diferentes concentraciones.
Para mtodos donde la respuesta con respecto a la concentracin es una funcin lineal,
la sensibilidad es constante con respecto a la concentracin y es igual a la pendiente de
la curva de calibracin. Contrariamente a las funciones lineales, la sensibilidad de
mtodos cuando su respuesta es no-lineal cambia con la concentracin del analito [23,
24].
2.2 Compuestos Antracnicos vegetales
2.2.1 Clasificacin
Los compuestos antracnicos vegetales pueden clasificarse segn su estado de
oxidacin en siete grupos estructurales, [25, 26]:
a.
b.
c.
d.
e.
f.
g.
Antraquinonas
Antronas
Diantronas
Antranoles
Oxantronas
Naftodiantronas
Antrahidroquinonas
La Figura 2. Muestra las estructuras bsicas de estas siete clases de compuestos

antracnicos.
21
Antronas
Antranoles
Antraquinonas
Oxantronas
Antrahidroquinonas
Diantronas
Naftadiantronas
Figura 2. Ncleos bsicos de compuestos antracnicos, [26]

2.2.2 Compuestos antraquinnicos
2.2.2.1 Definicin
Las antraquinonas son una clase de metabolitos secundarios vegetales con una
funcionalidad p-quinoide en un ncleo antracnico, cuyos carbonos se enumeran tal
como se muestra en la figura 3, [26].
Figura 3. Enumeracin de los carbonos en el ncleo de las antraquinonas.

22
La antraquinona o 9,10 dioxoantraceno es un compuesto aromtico, derivado del

antraceno. Sus sinnimos en la industria y el comercio son 9,10-antraceno diona,
antradiona, antraceno-9,10-quinona. Las antraquinonas se encuentran en forma natural
en algunas plantas (Rubiarbo, Espino Cerval y el gnero Aloe), hongos, lquenes e
insectos, donde sirve como esqueleto bsico para sus pigmentos, [25].
Los derivados naturales de las antraquinonas son glucsidos con accin laxante y
purgante sumamente potente. En la teraputica farmacolgica, las antraquinonas
pertenecen a la categora de catrticos y se usan en la terapia contra el estreimiento. Un
derivado de la antraquinona, la antralina es un irritante utilizado en dermatologa para
combatir la psoriasis. Son sustancias que forman parte de la composicin de algunos
medicamentos de homeopata cuyas principales indicaciones son: Factor activo en el
metabolismo energtico, favorece la desoxidacin, trastornos gastrointestinales, [27,
28].
2.2.2.2 Antraquinonas presentes en el Aloe vera.
Las antraquinonas del Aloe vera son uno de sus componentes ms efectivos, tienen una
amplia gama de funciones. Poseen propiedades laxantes, analgsicas y adems tienen
propiedades bactericidas y antivricas. Su combinacin en el Aloe hace que tengan un
efecto analgsico, es lo que hace que el Aloe vera tenga propiedades analgsicas en el
dolor y las quemaduras, [29].
La primera en ser descubierta fue la alona, por sus propiedades laxantes, pero esta
antraquinona es solo una de las muchas que se pueden encontrar en el Aloe vera. Si se
toma en estado puro es un fuerte laxante; combinada con el muclago del Aloe es menos
fuerte, [29].
Las principales antraquinonas en el Aloe vera y sus caractersticas son, [28, 29]:
Barbalona, isobarbalona, antraceno, antranol y cido alotico: Son resinas de la
planta que no combaten el dolor como la alona, pero poseen actividad bactericida.
Emodina y emodina de Aloe: Tambin tienen propiedades laxantes como la alona,
otras son eficaces contra las infecciones, son bactericidas y fungicidas.
Aceite etreo: Posee las mismas cualidades que el ter, pero no su toxicidad.
Alona: Tiene actividad laxante, analgsica.
cido alotico: Tiene accin bactericida y antivrica, neutraliza las toxinas bacterianas.
cido crisofnico: Es un derivado de la emodina de Aloe, se emplea en el tratamiento
de las enfermedades de la piel, por ejemplo en la psoriasis, contra los hongos cutneos.
Es un poderoso fungicida para la piel.
cido cinmico: Con cualidades fungicidas y es un potente limpiador. Resulta
especialmente indicado para descomponer tejidos necrticos y como calmante del dolor.
23
Resistonoles: Alcoholes que derivan del cido cinmico, tienen propiedades

bactericidas.
2.2.2.3 Propiedades generales y caracterizacin de las antraquinonas, [1,30]:
- Las agliconas antraquinnicas son compuestos slidos, cuyo color va desde el amarillo
al pardo rojizo.
- Son solubles en solventes orgnicos: ter, cloroformo, alcohol caliente, benceno.
- Los glucsidos antraquinnicos son cristalizados, estas tienen un color ms plido que
la aglicona correspondiente y son solubles en agua caliente y soluciones
hidroalcohlicas.
- Para poner en evidencia estos principios antraquinnicos se recurre a la reaccin de
Borrntraeger que se basa en extraer las antraquinnicas mediante solventes orgnicos,
las que luego son tratadas con solucin alcalina (NH4OH, KOH, NaOH,
(CH3COO)2Mg): rojo cereza en la fase acuosa. La reaccin de Brntraeger solo la dan
positiva las antraquinonas en su forma oxidada (Figura 4); las formas reducidas deben
oxidarse previamente; las formas combinadas deben hidrolizarse a modo de liberar las
agliconas y en casos combinados y reducidos, a la vez, debe practicarse una hidrlisis
oxidativa, (Figura 5)
Antraquinona
Complejo formado
M= Mg+2
Figura 4. Reaccin de derivatizacin de antraquinonas.
24
FeCl3
HCl
Antraquinonas libres
+
Azcares libres
Figura 5. Hidrlisis oxidativa de antraquinonas

- A las antronas y antranoles, se les practica la reaccin de Schouteten, la cual consiste
princiaplmente en: Realizar una extraccin acuosa en caliente, adicionar brax, para
observar finalmente una fluorescencia verde amarillenta.
2.3 Aloe vera
2.3.1 Planta de Aloe vera
El Aloe vera es un gnero de plantas que abarca ms de 400 especies. Suelen tener tallos
cortos, hojas carnosas lanceoladas que se disponen formando rosetones en el extremo
apical de los tallos, y flores tubulares de color rojo o amarillo agrupadas en densos
ramilletes, [2].
La planta de Aloe vera (Figura 6), presenta aspecto suculento, el rizoma es largo y el
tallo es corto, en torno al cual se agrupan un rosetn de hojas que pueden formar de 12 a
16 niveles. Su tamao puede variar de 30 cm a 3 m dependiendo de la variedad. Las
hojas son finamente lanceoladas de 30 a 60 cm de longitud; son turgentes, verdes,
mrgenes con dientes espinosos separados. El fruto es capsular, las semillas son
numerosas y negras. Las plantas alcanzan su madurez alrededor de los cuatro aos de
edad y pueden llegar a vivir alrededor de unos doce aos, [31, 32].
El Aloe vera anteriormente era utilizada por sus propiedades medicinales y teraputicas
sin ningn entendimiento claro o anlisis cientfico de cada una de sus propiedades. En
la actualidad, se usa en muchos lugares del mundo en la medicina moderna para tratar
mltiples enfermedades, por ejemplo: Acta eficazmente contra los dolores dentales y
de las encas, neuralgias, aftas, laringitis, disfona amigdalitis, anginas, placas y
cualquier afeccin bucal o farngea; cura las heridas necrosantes, como las quemaduras;
cura las pequeas heridas de las enfermedades eruptivas de los nios como el
sarampin, la varicela, la escarlatina; reduce los efectos de las alergias, indigestin,
acidez estomacal, gastritis, lceras duodenales y estomacales, lceras oculares,
hemorroides, afecciones del aparto digestivo, descongestionando el estmago, el
intestino delgado, el hgado, los riones y el pncreas; es un gran antiviral debido al
25
polisacrido glucomanano, entre otras; adems de ser utilizada en la industria

cosmetolgica, farmacutica y alimentaria, [33, 34].
2.3.2 Descripcin
En la clasificacin botnica de la planta de Aloe vera (Tabla 1.), esta se ubica en la
familia de las Aloaceae, relacionndose con la familia del lirio y a las plantas, tales
como ajo, cebolla, y esprrago, que son reconocidas como plantas medicinales. El Aloe
vera es una planta perenne y xeroftica; la primera por que se desarrolla a largo plazo y
la segunda porque se adapta a vivir en reas de poca disponibilidad de agua y se
caracteriza por poseer tejidos para el almacenamiento de agua, por lo tanto, prefiere las
condiciones ridas muy secas, la mayora de ellas se originan en el frica, [35, 36, 37].
Figura 6. Planta de Aloe vera
La planta contiene dos materiales separados del jugo, un ltex amarillo (exudado),
extrado de los paquetes vasculares en la ensambladura entre la corteza y los
prendederos, y un gel mucilaginoso transparente, sacado de la pulpa interna (Figura 7)
[36].
26
Figura 7. Interior de una hoja de Aloe vera (A) y partes principales de una hoja de Aloe
vera (B), [36]
La nomenclatura del Aloe vera, ha sido muy confusa, y la planta se ha conocido bajo
una variedad de nombres, de 12 especies existentes por lo menos hay cuatro especies
principales que tiene caractersticas medicinales: Aloe Barbadensis Miller, Aloe perryi
Baker, Aloe ferox y Aloe arborescens, [38].
Tabla 1. Clasificacin botnica de la planta de A. vera [36].

CLASIFICACIN BOTNICA
Vegetal
Reino
Aloaceae
Familia
Aloe
Gnero
vera
Especie
Nombre Cientfico Aloe vera
Sbila
Nombre Comn
2.3.3 Produccin Mundial

De las ms de 400 especies de Aloe vera que existen, actualmente slo se comercializan,
el Aloe barbadensis Miller y el Aloe aborescens que son las ms conocidas, [39, 40]. La
planta del gnero Aloe crece en reas tropicales y no puede sobrevivir a temperaturas de
congelacin, [41].
27
En Estados Unidos, la mayor parte es cultivada en el Valle del Ro Grande del sur de
Tejas, en Florida y en el sur de California. Internacionalmente, el Aloe se puede
encontrar en Mxico, en los pases a lo largo del pacfico, la India, Amrica del sur,
Amrica central, el Caribe, frica y Australia. Los mercados ms atractivos para
productos de Aloe son los Estados Unidos, Francia, Reino Unido, Alemania, Italia,
Canad, Japn, Espaa, Suecia y Corea, [42].
El uso comercial original de la planta de Aloe estaba en la produccin de una sustancia
celuloide llamada Alona, una savia amarilla usada durante muchos aos como laxante
(Figura 5). Este producto se convirti en un sinnimo del nombre Aloe y se registr en
el campo comercial, tcnico y gubernamental a principios del siglo XX. Esta
terminologa cre mucha confusin cuando el otro ingrediente principal del Aloe, el gel
semislido transparente, fue estabilizado y puesto a la venta. A comienzos de los aos
50, este gel de Aloe haba ganado importancia en la produccin de bebidas nutritivas,
crema hidratante, agente curativo en los cosmticos y los medicamentos, [43].
El mercado mundial del Aloe contina en plena expansin. El mercado mundial de Aloe,
produce derivados y productos con Aloe; segn estimaciones privadas, tiene un giro de
negocio a nivel mundial de 27 mil millones de dlares anuales. Su valor es muy elevado
por la influencia del valor final en cosmticos que contienen Aloe y por la alta
incidencia en la facturacin que presentan las 10 mayores corporaciones
estadounidenses en este negocio, generando incrementos sustanciales en el valor de
mercado de los productos finales vendidos. En el mercado mundial del Aloe hay una
alta demanda en sus diferentes presentaciones. El comercio mundial de materias primas
de Aloe est estimado en unos 180 millones de dlares. Los nmeros son imprecisos
todava, dado que el Aloe no posee una clasificacin arancelaria propia y se encuentra
comprendido junto a otros saborizantes y extractos de plantas varias, no pudindose
determinar en forma fehaciente su valor de transaccin, [43].
La industria del Aloe vera en la actualidad cuenta con mucha ms fuerza; existen
industrias dedicadas a la elaboracin de todo tipo de productos para diferentes reas:
alimenticia, farmacolgica, cosmtica, entre otras. Hoy por hoy se comercializan
infinidad de productos a base de aloe; concentrados para bebidas, acondicionadores y
shampoo, cremas para manos y cuerpo, jugos, cosmticos, gel liofilizado, entre otros,
[43, 44].
2.3.4 Composicin Qumica
Con efecto de dar una explicacin de las numerosas aplicaciones que tiene el A. vera, es
necesario examinar las propiedades fsicas y qumicas de la planta. La planta contiene
entre el 99 y 99.5 por ciento de agua con un pH promedio de 4.5. La materia slida
remanente contiene aproximadamente 75 ingredientes diferentes donde se incluyen
vitaminas, minerales, enzimas, azcares, antraquinonas o compuestos fenlicos, lignina,
saponinas, esteroles, aminocidos y cido saliclico. Se hace una descripcin mas
detallada a continuacin en la Tabla 2., [2, 39, 45]:
28
29
Tabla 2. Composicin Qumica del Aloe vera.

2.3.4.1 COMPUESTOS ANTIOXIDANTES
Son generalmente clasificados en dos grupos principales:
a. Las cromonas.
b. Las antroquinonas.
2.3.4.1.1 CROMONAS.
Las cromonas, (Figura 8) son componentes bioactivos en fuentes naturales, se utilizan
como antiinflamatorios y antibiticos. Dentro de ellos se encuentra la Aloesin, tambin
denominada Aloeresin B y el Aloeresin A [12,14]. Adems entre los derivados del
aloesin se han encontrado componentes con una potente capacidad antioxidante [46].
Figura 8. Estructura de la Aloeresin A.

2.3.4.1.2 ANTRAQUINONAS.
Las antraquinonas (Figura 9) son compuestos aromticos polihidroxilados, que
constituyen el numeroso grupo de sustancias polifenlicas que conforman la base y la
fuente de una importante cantidad de colorantes. Las antroquinonas pueden encontrarse
en la corteza y la raz de diversos gneros y especies de las familias: Leguminosas,
30
Rubiaceas, Lilaceas. Dentro de las antraquinonas se encuentran la Alona llamada

tambin Barbalona; la Isobarbalona y la Aloemodina [35, 47].
Figura 9. Estructuras de la Alona A y Alona B.

2.3.5 Usos del Aloe vera
El Aloe vera ha sido utilizado en la medicina tradicional para el tratamiento de muchas
enfermedades. Es conocido como un buen antiinflamatorio, gracias a la accin de la
manosa-6-fosfato presente en su gel y como un poderoso cicatrizante del tejido epitelial,
debido a la actividad de sus aminocidos que estimulan la produccin de nuevas clulas
y a la habilidad de sus enzimas para promover la regeneracin de la piel, [31, 48]. El gel
de Aloe vera es usado en el tratamiento de heridas, quemaduras e irritaciones en la piel
en general, [2, 31, 45, 49]. El A. vera tiene una extensa aplicacin en la industria
cosmtica donde es considerada como un emoliente efectivo, tanto para la piel como
para el cabello, [31, 50, 51].
El uso del A. vera ha sido descrito en el campo de la medicina veterinaria. El extracto
del gel ha sido usado en el tratamiento de muchos animales en casos externos tales
como alergias, abscesos, infecciones por hongos, varios tipos de inflamaciones, dolores
y comezn, [31, 52, 53]. En numerosos estudios se ha reportado el uso del aloe en la
cura de las lceras gstricas, problemas gastrointestinales y de riones, gracias a su
efecto antisptico. Muchas evidencias cientficas sugieren adems que el A. vera
incrementa la fuerza de la contraccin cardiaca decreciendo los niveles de colesterol y
triglicridos, revirtiendo desordenes cardiovasculares y estimulando la regeneracin
celular, [31, 54, 55]. Estudios recientes indican que el A. vera puede usarse en el
tratamiento de enfermedades como el VIH-SIDA. Esto es atribuido a las propiedades
antivirales e inmunolgicas de un grupo de polisacridos que actan directamente en las
clulas del sistema inmunolgico, activando y estimulando macrfagos, monolitos,
anticuerpos y clulas-T, [31, 52, 56].
As mismo, el Aloe vera se ha usado en tratamientos del cncer, donde ha demostrado
que tiene un efecto positivo en la inhibicin de crecimiento de tumores, [31, 57].
Investigaciones realizadas en Espaa revelaron que el gel de la planta tropical puede
usarse como una capa que adems de ser comestible, protege la calidad de las frutas
frescas. El gel, que al parecer no afecta el gusto ni la apariencia de los alimentos,
31
promete ser una alternativa natural segura frente a los preservativos sintticos. Las
pruebas que se llevaron a cabo utilizando uvas, demostraron que las que se envolvieron
en el gel del aloe, se preservaron por mas de 35 das mientras que las que no se
envolvieron en el gel, empezaron a deteriorarse 7 das despus de haber sido
almacenadas, [51].
2.3.6 Control de calidad
Segn la ASC (Aloe Science Council) y OMS (Organizacin Mundial de la Salud),
respecto al control de calidad, el gel de Aloe, debe cumplir los siguientes
requerimientos:
2.3.6.1 Tabla 3. Requerimientos fisicoqumicos y biolgicos para el control de
calidad en el gel de Aloe vera, [59-71].
PARMETRO
Apariencia
Olor
Sabor
Densidad
ndice de
refraccin
Residuo seco
Slidos totales
Humedad
pH
ndice de acidez
Calcio
Magnesio
Plomo
Cadmio
Aerobios totales
Hongos y
levaduras
Enterobacterias
Salmonella spp
Staphylococcus
spp
Patgenos
VALOR
Lquido transparente incoloro
Caracterstico
Ligeramente amargo
1.009 1.013 (20C). 0.99 1.02 (25C)
1.3320 1.3380
(0.75 1.50) %
(0.85-1.55) %
98.5 %
3.5-6.5
Mx. 3.0 (mg KOH/g muestra)
(23.3-52.3) mg/dL
(3.2- 4.7) mg/dL
Mx. 10 mg/Kg
Mx. 0.3 mg/Kg
Mx. 100 UFC/mL
Mx. 10 UFC/mL
Mx. 10 UFC/mL
Ausente
Ausente
Ausentes en 1 g
Respecto a los compuestos antraquinnicos la Unin Europea ha fijado un lmite

mximo para la concentracin de alona permitidos en alimentos y bebidas (CEE
Directiva del Consejo 88/388). La concentracin mxima permitida es de 0,1 mg / kg,
con excepcin de bebidas alcohlicas en las cuales el lmite se ha fijado en 50 mg / kg.
[67]
32
2.3.6.2 Reglamentacin Nacional del control de calidad de productos con Aloe vera
El instituto nacional para la vigilancia de medicamentos y alimentos (INVIMA) es una
institucin gubernamental que busca garantizar la Salud Pblica en Colombia,
ejerciendo inspeccin, vigilancia y control sanitario de carcter tcnico-cientfico sobre
los asuntos de su competencia. Respecto a la normatividad sobre el contenido de alona
en los productos a base de Aloe vera solo se conoce un documento (Anexo 1) en donde
se sugiere adoptar la norma estipulada en Europa y se recomienda el uso de la tcnica
espectrofotomtrica UV-VIS registrada en la farmacopea britnica para la
cuantificacin de alona, [59, 60]. Como ente coordina la elaboracin de normas de
calidad con otras entidades especializadas, se necesita ver al INVIMA como
abastecedor de informacin mas bien que solamente un regulador. Es ideal que se
homologue la tcnica y se adapte lo ms pronto con el fin de que se logre el valor
agregado en los productos a base de Aloe vera generando as un importantsimo avance
para la masiva distribucin a nivel nacional e internacional, [58].
2.4 Fundamento de la tcnica instrumental
2.4.1 Espectroscopa UV-VIS
Las tcnicas espectroscpicas se basan en la interaccin de la radiacin
electromagntica con la materia. A travs de esta interaccin las molculas pueden
pasar de un estado energtico, m, a otro estado energtico distinto, l, absorbiendo una
cantidad de energa radiante igual a la diferencia energtica existente entre los dos
niveles: El Em, [49]. Para conseguir esto, las molculas absorben un fotn de una
radiacin tal que:
Esquema 1. Transicin electrnica entre el nivel de energa Em y El.

Estos trnsitos energticos son los que dan origen a los espectros que, en definitiva, no
son ms que el registro de las distintas longitudes de onda a las que se producen estos
trnsitos energticos.
Debido a la existencia de diferentes tipos de energa: de los electrones entre si, de los
movimientos vibracionales de las molculas, de la rotacin de las mismas, entre otros;
las molculas pueden interaccionar con radiaciones electromagnticas de un rango muy
amplio de longitudes de onda, dando lugar a distintos tipos de espectroscopas segn las
diferentes regiones, [72].
33
La espectroscopia UV-Visible (espectros electrnicos), se debe a la transicin de los

electrones ms externos de los tomos de las molculas, desde niveles fundamentales a
niveles ms altos de energa. Esta tcnica es complementaria de la espectrometra de
fluorescencia, que trata con transiciones desde el estado excitado al estado basal, [72].
Para el anlisis cuantitativo se basa en la Ley de Beer-Lambert
Donde es la absortividad molar (una medida de la radiacin absorbida), que es un

valor constante para cada sustancia a cada longitud de onda, y en unas condiciones
experimentales determinadas; tambin se denomina coeficiente de extincin molar
si, como es frecuente, la concentracin se expresa en moles por litro. Si se opera, por
tanto, a una longitud de onda dada y con una cubeta de un determinado espesor, l , la
absorbancia A, medible directamente, es proporcional a la concentracin molar de la
muestra, c, lo que constituye el fundamento del anlisis espectrofotomtrico
cuantitativo, [73]
Existen, sin embargo, distintos factores que afectan al cumplimiento de la ley de
Lambert-Beer, especialmente a concentraciones elevadas. Por ello antes de proceder al
anlisis de una muestra es preciso comprobar experimentalmente el rango de
concentraciones en que dicha ley se cumple, obteniendo la curva de calibrado que
relaciona las absorbancias con las concentraciones, [73]
2.4.1.1 Caractersticas de un espectrofotmetro
Figura 10. Principales partes de un espectrofotmetro.

34
El instrumento utilizado en la espectrometra ultravioleta-visible se llama

espectrofotmetro UV-Vis, (Figura 10). Mide la intensidad de luz que pasa a travs de
una muestra (I), y la compara con la intensidad de luz antes de pasar a travs de la
muestra (Io). La relacin I / Io se llama transmitancia, y se expresa habitualmente como
un porcentaje (%T). La absorbancia (A) se basa en la transmisin:
A = - log (%T)
Las partes bsicas de un espectrofotmetro son una fuente de luz, un soporte para la
muestra, una rejilla de difraccin o monocromador para separar las diferentes
longitudes de onda de la luz, y un detector. El detector suele ser un fotodiodo o un
dispositivo de carga acoplada (CCD). Los fotodiodos se usan con monocromadores, que
filtran la luz de modo que una sola longitud de onda alcanza el detector. Las rejillas de
difraccin se utilizan con CCDs, que recogen la luz de diferentes longitudes de onda en
pxeles,
[73].
Un espectrofotmetro puede ser nico o de doble haz. En un instrumento de un solo
haz, toda la luz pasa a travs de la clula muestra. La Io debe medirse retirando la
muestra. Este fue el primer diseo, y todava est en uso en la enseanza y laboratorios
industriales,[72,73].
En un instrumento de doble haz, la luz se divide en dos haces antes de llegar a la
muestra. Un haz se utiliza como referencia, y el otro haz de luz pasa a travs de la
muestra. Algunos instrumentos de doble haz tienen dos detectores (fotodiodos), y el haz
de referencia y el de la muestra se miden al mismo tiempo. En otros instrumentos, los
dos haces pasan a travs de un bloqueador que impide el paso de un haz. El detector
alterna entre la medida del haz de muestra y la del haz de referencia.
Las muestras para espectrofotometra UV-Vis suelen ser lquidas, aunque la absorbancia
de los gases e incluso de los slidos tambin puede medirse. Las muestras son colocadas
en una clula transparente, conocida como cubeta. Estas suelen ser rectangulares, con
una anchura interior de 1 cm. Esta anchura se convierte en la longitud de ruta, L, en la
Ley de Beer-Lambert. Tambin se pueden usar tubos de ensayo como cubetas en
algunos instrumentos. Las mejores cubetas estn hechas con cuarzo de alta calidad,
aunque son comunes las de vidrio o plstico. El cristal y la mayora de los plsticos
absorben en el UV, lo que limita su utilidad para longitudes de onda visible, [72, 73].
2.4.4.2 Obtencin de un espectro de absorcin
El espectro de absorcin es una representacin grfica que indica cantidad de luz
absorbida () a diferentes valores de longitudes de onda ().
A partir de una solucin diluida de un compuesto, cuya absorbancia mxima entra
dentro del rango de medida del espectrofotmetro, se ver el valor de absorbancia a
diferentes longitudes de onda frente a un blanco que contenga el disolvente de la
solucin de la muestra a caracterizar. A partir del espectro de absorcin se obtendr el
35
valor de al que el compuesto presenta mayor absorbancia (max). Dicho se utilizar

a la hora de hacer determinaciones cualitativas y cuantitativas del compuesto.
El espectro de absorcin de un cromforo depende, fundamentalmente, de la estructura
qumica de la molcula; no obstante, hay una gran cantidad de factores que originan
variaciones en los valores de max y M, entre los que se incluye el pH, la polaridad del
solvente o molculas vecinas y la orientacin de los cromforos vecinos; y cada uno
afecta de forma particular. Las longitudes de onda de los picos de absorcin pueden
correlacionarse con los tipos de enlace en una determinada molcula, y son valiosos
para determinar los grupos funcionales dentro de la molcula. La naturaleza del
disolvente, el pH de la solucin, la temperatura, la concentracin de electrolitos, y la
presencia de sustancias interferentes pueden influir en los espectros de absorcin de los
compuestos, as como las variaciones en la anchura de la hendidura (ancho de banda
efectivo) en el espectrofotmetro, [72].
2.4.4.3 Aplicaciones
La espectrometra UV/Vis se utiliza habitualmente en la determinacin cuantitativa de
soluciones de iones metlicos de transicin y compuestos orgnicos muy conjugados.
Soluciones de iones metlicos de transicin
Las soluciones de iones metlicos de transicin pueden ser coloreadas (es decir,
absorben la luz visible) debido a que los electrones en los tomos de metal se pueden
excitar desde un estado electrnico a otro. El color de las soluciones de iones metlicos
se ve muy afectado por la presencia de otras especies, como algunos aniones o ligandos,
[74, 75].
Compuestos orgnicos
Los compuestos orgnicos, especialmente aquellos con un alto grado de conjugacin,
tambin absorben luz en las regiones del espectro electromagntico visible o
ultravioleta. Los disolventes para estas determinaciones son a menudo el agua para los
compuestos solubles en agua, o el etanol para compuestos orgnicos solubles. Los
disolventes orgnicos pueden tener una significativa absorcin de UV, por lo que no
todos los disolventes son adecuados para su uso en espectrometra UV. El etanol
absorbe muy dbilmente en la mayora de longitudes de onda. La polaridad y el pH del
disolvente pueden afectar la absorcin del espectro de un compuesto orgnico, [74, 75].
36
3. Seccin Experimental
3.1. Materiales y equipos.
3.1.1. Estndar
Se emplearon estndares comerciales de alona marca B6906-SIGMA al 97 % y 50 %
de pureza.
3.1.2. Muestra de anlisis
Como muestras reales se utilizaron un jugo comercial concentrado de muclago de Aloe
vera y mucilago de hojas frescas de Aloe vera que se almacenaron en una nevera a 4
C.
3.1.3. Espectrofotmetro.
El anlisis se realiz en un espectrofotmetro UV-VIS de doble haz, marca
SPECTRONIC el cual fue prestado por el laboratorio de Aguas y Alimentos de la
Universidad Tecnolgica de Pereira. Las muestras fueron analizadas a una longitud de
onda de 515 nm la cual se estableci a travs del valor mximo de absorcin obtenido al
someter el estndar de alona derivatizado a un barrido en el espectrofotmetro, [5].
Figura 11. Espectrofotmetro UV-VIS, SPECTRONIC , (Foto tomada por los

autores)
3.1.4. Ultrasonido.
Se utiliz un ultrasonido marca Ultrasonido (Cleaner-Model 19H)
Figura 12. Equipo ULTRAsonik (Foto tomada por los autores).

37
3.1.5. Rotaevaporador
Rota evaporador (Heidolph-Laborota 4003).
Figura 13. (Foto tomada por los autores)

3.2. PARTE EXPERIMENTAL PREVIA A LA ESTANDARIZACIN.
Antes del proceso de estandarizacin se establecieron por mediciones programadas los
siguientes parmetros, esto se hizo con las dos metodologas descritas en las Figuras 14
y 15.
3.2.1. LIMITE DE DETECCIN.
Se determinaron 10 blancos independientes fortificados a la menor concentracin
aceptable medida cada una a la vez. , [84].
Con el lote de datos se calcul: el promedio aritmtico (X m), la desviacin estndar (s),
el coeficiente de variacin (% CV).
El lmite de deteccin del mtodo se calculo 3 veces la desviacin estndar LD = 3s
3.2.2. LIMITE DE CUANTIFICACIN.
Se midieron de igual forma 10 blancos independientes fortificados a la menor
concentracin aceptable medida cada una a la vez, [84].
El lmite de cuantificacin se calcul como 10 veces la desviacin estndar LC = 10s.
3.2.3. CURVAS DE CALIBRACIN
A partir del estndar, se realizaron los respectivos clculos para pesar la cantidad
correspondiente con el fin de obtener varios patrones, cubriendo concentraciones desde
2,0 hasta 200 ppm de los derivados antraquinnicos. Se realizaron varias curvas en el
desarrollo de la estandarizacin, en las cuales se fue afinando progresivamente la
metodologa del trabajo. [83]
38
3.2.4. SENSIBILIDAD.
Se realiz una curva de calibracin de la cual se tomo la pendiente como la sensibilidad,
[83].
3.2.5. LINEALIDAD.
Se leyeron patrones a diferentes concentraciones con el fin de examinar la correlacin
entre ellos (coeficiente de correlacin) y observar la linealidad que presentaban, [83].
3.2.6. INTERVALO DE TRABAJO O LINEAL.
Se estableci un rango de trabajo el cual cumpliera con la linealidad necesaria,
establecido por la norma del INVIMA (ANEXO 1), [83].
3.3 Extraccin del analito y obtencin del derivado antraquinnico.
Para la extraccin y obtencin del derivado antraquinnico se evaluaron dos
metodologas: la primera metodologa fue la sugerida por lo autores (Snchez, V.;
Santa, J), [5]; (Figura 14), y la segunda metodologa basada en el trabajo de los
investigadores: (Sakulpanich, A.; Gritsanapan, W.), (Figura 15), [4].
39
Figura 14. Procedimiento para la extraccin y cuantificacin

De antraquinonas en A. vera, metodologa 1.
40
Figura 15. Procedimiento para la extraccin y cuantificacin

De antraquinonas en A. vera, metodologa 2.
41
3.4 PROCEDIMIENTO DE ESTANDARIZACIN.

El proceso de estandarizacin consisti en la corrida de las muestras y el registro de los
resultados necesarios para la determinacin de los parmetros de estandarizacin. Los
ensayos pueden ser continuos o alternos, con una diferencia mxima de 3 das entre un
ensayo y otro (viernes-lunes), [82].
3.4.1. EXACTITUD.
Se midieron 2 rplicas de cada estndar, a tres concentraciones tericas diferentes,
durante 7 das, [82].
Eb: Estndar bajo, cercano al LC.
Em: Estndar medio, cerca del 50 % del rango de trabajo.
Ea: Estndar alto, cerca del 80 % del rango de trabajo.
Con lo cual se calculo: promedio Xm, desviacin estndar s, coeficiente de variacin %
CV y porcentaje de error % E.
3.4.2. PRECISIN.
Para la determinacin de la precisin se realiz en funcin de:
3.4.2.1 Repetibilidad: La cual consisti en medir 2 rplicas de cada estndar (estndar
bajo Eb, estndar medio Em y estndar alto Ea) y de cada muestra, durante 5 das, con
los cuales se calcul: promedio X m, desviacin estndar s, coeficiente de variacin %
CV y porcentaje de error % E, [82].
3.4.2.2 Repetibilidad intermedia: Se analiz el grupo de patrones o muestras dos
veces el mismo da por el analista responsable (en la maana y en la tarde), se ley en
un equipo diferente, [82].
Para cada grupo de datos se calcul: Xm, s, % CV y % E.
3.4.2.3 Reproducibilidad: El analista sustituto analiz, por duplicado, el grupo de
estndares y muestras durante dos das en la estandarizacin, [82].
Para cada grupo de datos se calculo: Xm, s, % CV y % E.
3.4.3. RECUPERACIN.
Determinacin de la reactividad cruzada, expresada como Porcentaje de recuperacin
(%R), Se analiz por duplicado, durante 7 das, dos muestras reales, una cuya
concentracin fue menor del 50% del rango de trabajo (M1) y otra cuya concentracin
estaba por encima del 50% del rango de trabajo (M2), [82]. La recuperacin se
determino utilizando la siguiente ecuacin:
Ecuacin: %R=((Cmuetra+estndar*V-Cmuestra*V)/Cestandar*V)*100 .
42
3.4.4. VERIFICACIN DE LA ESTANDARIZACIN (ANLISIS DE LA

MUESTRA).
Despus de que la tcnica fue estandarizada, y la muestra real fue derivatizada, se hizo
su anlisis espectrofotomtrico a las mismas condiciones a las que se analizaron los
patrones. Posteriormente se confront con anlisis realizados por un laboratorio externo
con el que se pudo medir la exactitud del mtodo con respecto a dicho laboratorio, en
donde ofertan el servicio.
3.5. Anlisis preliminar por Cromatografa Lquida de Alta de Eficiencia (CLAE)
Se hizo un anlisis por cromatografa lquida de alta eficiencia con el ESTNDAR de
alona marca SIGMA al 97 %; realizndose una curva de 4 puntos, en donde se cubri
una concentracin desde 8,38 hasta 100,56 mg alona/L. la preparacin de los patrones
fue en una solucin metanlica, y las condiciones del equipo utilizado fueron, [20].
Bomba: Hitachi L-2130 Pump.
Solvente: Acetonitrilo agua (25:75)
Columna: RP-18, longitud: 55 mm, endcapped (3 m)
Detector: Hitachi L-2420 UV-VIS
Longitud de onda: 359 nm
43
4. RESULTADOS Y DISCUSIN
4.1 BARRIDO ESPECTRAL
Se prepar una solucin del derivado antraquinnico de concentracin media, siguiendo
el procedimiento establecido en el numeral 3.3; el barrido espectral se realiz en un
espectrofotmetro UV-VIS de doble haz, marca SPECTRONIC . Se logr observar
que el mximo de absorcin se presentaba a 515 nm (Figura 14), siendo consecuente
este resultado con el registrado en la literatura, [4].
Figura 16. Espectro de absorcin de concentracin media de estndar de Alona.

4.2
CONDICIONES
ANTRAQUINNICO
PARA
LA
OBTENCIN
DEL
DERIVADO
Se evaluaron dos diferentes condiciones. La principal variacin se observ en el cambio

del pH de la reaccin que para la metodologa 1 se fij con hidrxido de potasio
(pH=11), mientras que en la metodologa 2 se fij con acetato de magnesio generando
un pH=7,6, en esta metodologa se cambio el solvente de extraccin de las
antraquinonas por una solucin Etanol-Agua (1:1).
Los resultados se evidencian en la generacin de color; para una misma concentracin
de alona con el mtodo dos se apreci una mayor intensidad del color lo que indica una
mejor eficiencia en la obtencin del derivado antraquinnico (Figura 17) aumentando la
sensibilidad espectrofotomtrica. Igualmente se corrobora en las curvas de calibracin
obtenidas, que para el mtodo uno arroj un coeficiente de correlacin de 0,994
mientras que para el mtodo dos con acetato de Magnesio fue de 0,9998, indicando una
mayor linealidad debida a una mayor correlacin entre las variables (Figura 18).
44
0,045
0,04
0,035
0,03
0,025
0,02
0,015
0,01
0,005
0
Absorbancia
Absorbancia
Figura 17. Solucin de derivados antraquinnicos en la determinacin 1, con

hidrxido de potasio y en la determinacin 2, con solucin metanlica de acetato de
magnesio.
y = 0,0001x + 0,028
R = 0,994
50
Concentracin en mg/L
100
0,090
0,080
0,070
0,060
0,050
0,040
0,030
0,020
0,010
0,000
y = 3,955*10-4- 0,0004
R = 0,999
150
100
200
Concentracin (mg/L)
Figura 18. Curvas de calibracin de los derivados antraquinnicos obtenidos por

medio de las metodologas 1 y 2.
4.3. CALIBRACIN
Para la calibracin del mtodo espectrofotomtrico se prepar el derivado
antraquinnico con las dos metodologas utilizando un patrn de alona de pureza del 50
% marca sigma, a partir de esta se hicieron las respectivas diluciones de 2,0 hasta las
200 mg/L de Alona.
Despus de realizar las respectivas de calibracin por los dos mtodos y segn las
evidencias mostradas en el numeral 4.2, se decidi seguir trabajando con el protocolo
establecido en la metodologa dos, y para la cual se utiliz el patrn de alona al 97 %
de pureza; obtenindose las siguientes lecturas, (ANEXO 6).
45
300
Concentracin absorbancia
0
0,000
2
0,001
20
0,007
40
0,015
80
0,031
100
0,039
200
0,079
Tabla 4. Datos correspondientes a la curva de calibracin del estndar de alona.
La ecuacin de regresin lineal calculada de acuerdo a los datos obtenidos en la Tabla 4
fue la siguiente:
y=3,955x10-4-0,0004
Los resultados del anlisis estadstico realizado a la tcnica espectrofotomtrica para la
cuantificacin de derivados antraquinnicos de la curva con Acetato de Magnesio,
fueron:
PARMETRO
2
VALOR
0,9998
1,06
35,13
3,20
10,66
R
SD (ppm*)
RSD (%)
LD (ppm*)
LC (ppm*)
SENSIBILIDAD
3,96E-04
(Absorbancia/ppm)
200
LOL (ppm)
* Obtenido del tratamiento matemtico de las tablas, ver: (ANEXO 5).
Tabla 5. Datos estadsticos para la calibracin del mtodo 2.
De acuerdo con los datos obtenidos:

El valor de R2 se acerc mucho al valor ideal el cual es 1, esto indica que la curva de
calibracin se aproxima con una lnea recta, indicando alta correlacin entre las
variables, [74, 75]
Segn la desviacin estndar (SD) y de desviacin estndar relativa (RSD), el mtodo
es repetible y reproducible. Puesto que el valor de RSD no sobrepasa el 50 % y la
desviacin de los datos no sobrepasa las 5 ppm.
El LD reportado es aceptable ya que este es el mnimo cambio reportado por el equipo
espectrofotomtrico lo que permite tener un rango de probabilidad de error muy
46
pequeo. Adems este parmetro es un dato cualitativo permitiendo identificar si el

analito de inters se encuentra presente o no, as sea a bajas concentraciones en la
muestra a analizar minimizando el riesgo de cometer falsos positivos y falsos negativos,
[74, 75]
El LC reportado es aceptable, debido a que este es el lmite inferior para las medidas
cuantitativas precisas, que para efectos de la tcnica permite tener lecturas de bajas
concentraciones por debajo del valor mximo permitido de 50 ppm exigido por el
INVIMA (Anexo 1). Con este LC se evitan errores a la hora de cuantificar el analito de
la muestra, [74, 75].
La sensibilidad del mtodo se tom como la pendiente de la curva de calibracin, la
curva tiene una buena sensibilidad ya que a mayor pendiente mejor sensibilidad. Lo que
indica que puede detectar pequeos cambios o variaciones en la concentracin de forma
precisa y clara en las muestra a analizar, [74, 75].
El lmite de linealidad reportado es ideal, debido a que el rango de concentraciones que
se cubre hasta este punto es adecuado para determinar si la muestra a analizar cumple
con lo exigido por la norma, (Anexo 1).
4.4. PARMETROS DE LA ESTANDARIZACIN

4.4.1 PRECISIN.
Los parmetros de precisin fueron obtenidos al trabajar estadsticamente los resultados
(ver ANEXO 5), se presentan en la siguiente tabla:
Precisin
Reproducibilidad
101,31
1,46
102,15
99,62
1,44
Parmetros estadsticos
Repetibilidad
Repetibilidad intermedia
promedio
97,51
81,08
desviacin
3,36
9,57
lmite superior
99,62
92,03
lmite inferior
92,03
74,34
porcentaje de error
coeficiente de variacin
3,45
11,81
porcentaje de
recuperacin
Tabla 6. Parmetros para la determinacin de la precisin en trminos de
repetibilidad, repetibilidad intermedia y reproducibilidad.
Segn los valores de precisin, el mtodo tiene buena repetibilidad y reproducibilidad
bajo las mismas condiciones de anlisis; el mismo analista y el mismo instrumento;
destacndose la influencia en la variacin de los datos al cambiar alguna de estas, segn
los valores obtenidos de repetibilidad intermedia (mayor al 5%).
47
4.4.2 RECUPERACIN
A continuacin se presentan los parmetros con los que se calcul el porcentaje de
reactividad cruzada, segn los resultados obtenidos. (ver ANEXO 5).
recuperacin
Recuperacin alta
Recuperacin baja
118,33 3,14
48,04 2,66
3,39
2,88
129,56
51,58
119,84
33,88
2,86
6,00
Parmetros
Promedio (ppm)
Desviacin (ppm)
lmite superior (ppm)
lmite inferior (ppm)
porcentaje de error
porcentaje de
recuperacin
99,61
166,60
Tabla 7. Lecturas para determinar recuperacin, con adicin de estndar alto y
bajo.
De acuerdo con los resultados en la tabla 6, los valores de recuperacin indicaron que
el procedimiento de extraccin fue efectivo en las condiciones de trabajo establecidas
debido que el criterio de aceptacin es que la recuperacin este en un rango de 98% al
102%, [73,75], teniendo en cuenta que a bajas concentraciones (por debajo de 15 ppm
aprox.) las interferencias tienen una incidencia importante en el anlisis, esto se ve
reflejado en la recuperacin con el estndar bajo el cual report una recuperacin por
encima del 100%, ya que una pequea variacin a estas concentraciones bajas implica
un cambio alto en la lectura debido a la alta sensibilidad de la determinacin.
4.4.3 DETERMINACIN DE LA EXACTITUD CON ESTNDAR
Se presenta los datos promedios obtenidos para la determinacin de la exactitud, todos
los datos obtenidos experimentalmente, (ver ANEXO 5).
Parmetros
Exactitud
Baja
Media
Alta
Promedio (ppm)
11,85
50,73
97,51
Desviacin (ppm)
2,81
1,30
3,36
lmite superior (ppm)
16,18
51,58
99,62
8,60
49,05
92,03
porcentaje de error
18,48
1,47
2,49
23,75
2,57
3,44
porcentaje de recuperacin
Tabla 8. Parmetros para la determinacin de la exactitud a tres niveles de
concentracin.
Segn los valores de exactitud, el mtodo es exacto en un rango de concentraciones
media y alta, dentro de las cuales estn las mnimas concentraciones de antraquinonas,
permitidas en la normatividad internacional la cual abarca a la norma vigente en el pas,
(ANEXO 1)
48
4.4.4 EXACTITUD INTERLABORATORIO.

Se realiz la verificacin del resultado respecto a un laboratorio externo, donde se
utiliz la misma muestra; las determinaciones arrojaron los siguientes resultados:
laboratorio
laboratorio Oleoqumica
referencia
Promedio (ppm)
479,18 36,02
470
Desviacin (ppm)
14,51
Lmite superior (ppm)
487,56
462,43
porcentaje de error
1,95
coeficiente de
variacin
3,03
Tabla 9. Presentacin de los resultados para la determinacin de la exactitud
interlaboratorios.
La verificacin de la tcnica espectrofotomtrica estandarizada, se realiz con la
determinacin de alona en un jugo comercial enriquecido en A. vera, que segn su
anlisis (tabla 8) se observa que el mtodo es exacto en comparacin con el resultado
reportado por el laboratorio externo ya que el porcentaje de error no supera el 5 % [73,
75]. El valor obtenido del producto supera el valor mximo permitido por lo estipulado
con la normatividad vigente, informe que se le suministr al empresario para que realice
los correctivos necesarios, contribuyendo de esta manera al soporte tcnico del sector
agroindustrial de Aloe vera de la Regin.
4.5 TIEMPO Y COSTOS DEL ANLISIS

Se hizo un estimado con base en los costos ABC o costos directos. Estos costos
equivalen a los costos de personal, materiales, uso de equipos y servicios pblicos (en la
UTP los laboratorios no pagan servicios pblicos ni arriendo, pero un 20% de lo que
cobran por anlisis es apropiado por la Universidad).
En estos costos no se tuvo en cuenta las ganancias o recaudos para reinversin en el
laboratorio.
MATERIAL O REACTIVO UTILIZADO

CIDO CLORHDRICO
CLORURO FRRICO
ULTRASONIDO
TER DE PETRLEO
ROTAVAPORADOR
BALANZA
ETANOL ABSOLUTO
SOLUCIN METANLICA DE ACETATO DE
MAGNESIO
49
PRECIO POR
MUESTRA
$ 4.408,00
$ 269,12
$ 694,00
$ 290,00
$ 500,00
$ 694,00
$ 491,84
$ 800,00
ESPECTROFOTMETRO
ANALISTA
DIRECCIN TCNICA
ESTANDARIZACIN (1 muestra)
PORCENTAJE PARA GASTOS ADMINISTRACIN DE
LA UTP (20 %)
TOTAL
$ 2314,81
$ 20.000,00
$ 25.000,00
$ 20000,00
$ 15092,30
$ 90.553,81
Despus de que la tcnica fue estandarizada, el laboratorio de Oleoqumica tiene una

herramienta eficaz y econmica para realizar anlisis de alona, obteniendo resultados
confiables y repetibles.
4.6. DETERMINACIN POR CROMATOGRAFA LQUIDA DE ALTA
EFICIENCIA
Despus de realizar la respectiva preparacin de los patrones, y siguiendo el protocolo
establecido por (Zonta, P.; and et al), [68]. con algunas modificaciones segn las
condiciones del equipo utilizado, se obtuvo la siguiente curva:
rea
1
2
3
4
Concentracin
(mg/L)
8,38
41,9
83,8
100,56
Tabla 10. Concentraciones de cada nivel inyectado

Esta determinacin preliminar fue importante debido a que gener unas bases
experimentales que permitirn no solo identificar, confirmar y luego de una previa
estandarizacin, cuantificar alona de manera mucho ms sensible y rpido por este
mtodo en comparacin con el espectrofotomtrico, otra de las ventajas de esta tcnica
instrumental fue la especfica respecto con la espectrofotomtrica debido a que permite
identificar cada ismero de la alona y cada antraquinona presente en el muclago o
producto comercial; sin embargo normalmente la cuantificacin de alona se realiza por
el mtodo desarrollado en el presente trabajo, debido a que es el exigido por el Instituto
Nacional de Vigilancia de Medicamentos y Alimentos - (INVIMA) en su normatividad
basada en la Pharmacopeia Europea, (ANEXO 1).
4.7. DISCUSIN GENERAL.
Finalmente se cumpli con el objetivo de la estandarizacin para la cuantificacin de
antraquinonas; sin embargo en el transcurso del trabajo se observ que dependiendo del
tipo de muestra que se trabajara como por ejemplo: Jugo concentrado, muclago, jugo
de Aloe, variaban las condiciones de anlisis, puesto que cada matriz requera un modo
diferente de trabajo dependiendo de las condiciones principalmente fsicas de la
50
muestra; al momento de realizar la extraccin se evaluaron diferentes condiciones con el

fin de observar con cual se obtena un mejor resultado a la hora de preparar el derivado
antraquinnico: Las variaciones consistieron en la aplicacin de reflujo a la hora de la
derivatizacin y en variar la condicin de la muestra a analizar ya fuera seca o hmeda,
lo resultados obtenidos fueron:
METODOLOGA
Sin reflujo
Reflujo en base
hmeda
Reflujo en base seca
VALOR (mg de alona/Kg de

muestra)
187,1
662,04
19077,23
Tabla 11. Resumen de los resultados obtenidos con diferentes metodologas para la
determinacin de Alona.
Los resultados presentados en la Tabla 11, muestran una diferencia debido a los
cambios que fueron realizados en las metodologas; el bajo valor obtenido en el anlisis
sin reflujo es debido principalmente a que no se gener totalmente la hidrlisis de los
glicsidos antraquinonicos, los cuales no quedaron disponibles completamente para la
formacin de la solucin coloreada que representara la verdadera cantidad de
antraquinonas totales, adems la matriz utilizada es de caracterstica altamente viscosa,
lo cual puede intervenir por fenmeno de atrapamiento, reteniendo el analito a extraer y
por lo tanto no siendo lo suficientemente significativo la cantidad obtenida del mismo;
con el fin de mejorar la hidrlisis, y de que se asegurara la completa liberacin de las
agliconas, se procedi a un reflujo, que como se observa en el segundo valor de la tabla
permiti obtener un dato mucho mayor en comparacin con el registrado por el anlisis
sin reflujo, esto debido a que se produjo una mayor hidrlisis y por lo tanto se present
mayor cantidad de antraquinonas liberadas vindose este hecho reflejado en el resultado
obtenido; finalmente se quiso contemplar la incidencia de la humedad de la muestra,
este anlisis se hizo con reflujo y teniendo la muestra seca, el resultado fue alto, lo
anterior debido a que la cantidad de analito analizado en este caso, estaba en mayor
concentracin, puesto se encontraba libre de agua, que adems podra presentar
interferencias a la hora de la extraccin.
Con el anterior trabajo realizado, se establecen bases importantes para desarrollar una
estandarizacin de la extraccin de antraquinonas con el fin de evaluar las mejores
condiciones de las variables que intervienen en el procedimiento, con el propsito de
obtener un proceso mucho ms efectivo y significativo al realizar la extraccin de estos
analitos.
4.7.1 INTERFERENCIAS
Las interferencias se pueden originar en la fase pre-analtica y en la fase analtica de las
pruebas [24]. Las interferencias pre-analticas se pueden producir en cualquiera de estas
fases: Al momento de la toma de la muestra, si se va analizar el muclago de un penca
51
de sbila cmo tal; cuando la conservacin de la muestra no se hace a temperaturas

adecuadas; lapsos largos de tiempo entre la derivatizacin y el momento del anlisis
espectrofotomtrico, y al momento mismo del procedimiento de extraccin
(dependiendo de la muestra, puede ser muclago o producto comercial) y la
derivatizacin debida a la calidad de los reactivos utilizados. Estas interferencias se
pueden controlar, primero capacitando al personal que toma la muestra, minimizando el
tiempo para el anlisis y mantenindola refrigerada. El analista debe recibir la muestra y
mantenerla refrigerada. Al momento de la extraccin, el reactivo debe cumplir con una
calidad previamente establecida, en caso de ser solvente reutilizado, debe ser procesado
para eliminar contaminaciones. Los reactivos de la derivatizacin, cmo lo son el
acetato de magnesio y el cido clorhdrico, deben prepararse peridicamente con el fin
de asegurar ptimos resultados en el procedimiento, adems el cido se debe normalizar
como mnimo cada mes con el fin de tener la certeza de su concentracin.
Las interferencias analticas se pueden clasificar en: interferencias que cambian la
concentracin del analito e interferencias que afectan el equipo o sus componentes. Las
interferencias que cambian la concentracin del analito, pueden ser debidas a partculas
de gel en la solucin preparada, por tal motivo se aconseja la filtracin de la solucin
cuando esto se presente, adems a la hora de la determinacin limpiar las celdas de
medicin cuidadosamente con el fin de evitar en la pared de la celda la presencia de
sustancias que no permitan la correcta incidencia del haz de luz del espectrofotmetro.
Respecto a las interferencias que pueden afectar los componentes del equipo, se
controlan a partir del cuidado que se le d a la manipulacin de las soluciones que se
vayan a medir en el equipo, evitando salpicaduras de las mismas que puedan causar
daos irreparables en el instrumento.
Es muy importante tener en cuenta los puntos en que se generan las anteriores
interferencias, con el fin de tener mayor cuidado en estas etapas, para asegurar un buen
procedimiento de extraccin y cuantificacin de las antraquinonas.
52
5. CONCLUSIONES
Se estandariz la tcnica espectrofotomtrica UV-VIS para la identificacin y
cuantificacin de antraquinonas totales en productos a base de A. vera.
La mejor metodologa para obtener el derivado antraquinnico fue la
metodologa dos, debido que presenta mejor sensibilidad y correlacion entre las
variables.
La tcnica espectrofotomtrica UV-VIS, para el anlisis de alona presenta
valores satisfactorios para los parmetros estadsticos necesarios en la
cuantificacin del analito. R2 cercano a la unidad, con un valor de 0.9998; los
valores se encuentran dentro de 2 SD, y un RSD que no sobrepasa el lmite de
50 ppm.
Los lmites de deteccin y de cuantificacin son de 3,2 ppm y 10,66 ppm,
respectivamente. Lo que permite una adecuada cuantificacin de alona debido a
que para efectos de la tcnica permite tener lecturas de bajas concentraciones,
rango de los valores aceptados para cumplir con la normatividad exigida por el
INVIMA, previniendo los falsos positivos y falsos negativos.
La sensibilidad de 3,955E-04 (absorbancia/ppm), indica que puede detectar
pequeos cambios o variaciones en la concentracin de forma precisa y clara en
las muestra a analizar.
Con la estandarizacin de la tcnica espectrofotomtrica UV-VIS, se
proporciona una herramienta de anlisis con la cul se puede reportar resultados
confiables y repetibles, la cual es necesaria en el laboratorio de oleoqumica,
donde se realizan investigaciones con el Aloe vera, adems del servicio de
anlisis se puede brindar como valor agregado en el asesoramiento a el sector
agroindustrial del aloe vera respecto a las estrategias que se pueden adoptar en
pro de mejorar sus productos para que cumplan con la normatividad estipulada.
La recuperacin del 99,61 %, permite tener una buena representatividad del
analito al finalizar el procedimiento de extraccin para la posterior
cuantificacin.
La exactitud fue de 1,95 %, mostrando que el mtodo desarrollado puede arrojar
resultados exactos con respecto anlisis realizados por laboratorios externos,
generando confianza y veracidad en los resultados.
El control de las interferencias se hace principalmente a la hora de la extraccin,
teniendo cuidado de evitar la inclusin de partculas que puedan contaminar la
solucin coloreada, adems tener en cuenta la calidad de los reactivos, puesto
que se vern reflejados en los resultados.
La metodologa que mejor efectividad demostr a la hora de realizar la
extraccin del analito fue en la que se utiliz reflujo y en donde la muestra
analizada se encontraba seca.
53
6. RECOMENDACIONES
Se recomienda estandarizar la metodologa de extraccin del analito del

muclago de Aloe vera, teniendo en cuenta las nuevas modificaciones incluidas
en este trabajo.
Se recomienda trabajar en condiciones de laboratorio controladas como son las
de temperatura y humedad puesto estas pueden alterar las lecturas y por ende
introducir errores en los resultados.
Se recomienda estudiar y trabajar las diferentes presentaciones y productos que
puedan contener el analito con el fin de conocer las diferentes naturalezas de las
matrices y poder hacer un exitoso y efectivo clean up apropiado para cada
muestra.
Se recomienda continuar con el estudio de las antraquinonas presentes en el Aloe
vera, mediante otros mtodos instrumentales como lo puede ser la cromatografa
lquida de alta eficiencia (CLAE).
Se recomienda estudiar algn procedimiento experimental que permita la
purificacin del acbar, con el fin de generar un producto, que se pueda
comercializar.
54
BIBLIOGRAFA
[1] Martnez, A. Quinonas y compuestos relacionados. Universidad de Antioquia, curso
de farmacognosia y fitoqumica, 2005.
[2] Bozzi, A.; Perrin, C.; Austin, S.; Arce, F. Quality and authenticity of commercial
aloe vera gel powders. Food chemistry, 2006.
[3] Kuzuya, H.; Tamai, I.; Beppu, H.; Shimpo, K.; Chihara, K. Determination of
aloenin, barbaloin and isobarbaloin in Aloe species by micellar electrokinetic
chromatography. Journal of Chromatography B, 752, 91-97, 2001.
[4] Sakulpanich, A.; Gritsanapan, W. Determination of Anthaquinone Glycoside
Content in Cassia fistula Leaf Extracts for Alternative Source of Laxative Drug.
International Journal of Biomedical and Pharmaceutical Sciences, 2009.
[5] Snchez, V.; Santa, J. Estudio de antraquinonas presentes en extractos de muclago
de Aloe vera de plantas cultivadas en la regin cafetera. Pereira, Universidad
Tecnolgica de Pereira. Facultad de Tecnologa. 2009. (Tesis: Tecnologa Qumica).
[6] Temiyaputra, W.; and et al. Influence of Anthraquinone Extraction Techniques from
Morinda sp. On Extraction Efficency. Kasetsart J. (Nat. Sci.) 42: 118-126 (2008).
[7] Barrese, Y.; and et al. Desarrollo de una tcnica analtica para cuantificar las
antraquinonas presentes en la Senna alata (L.) Roxb. (Guacamaya francesa). REV.
CUBANA PLANT MED 2005; 10 (3-4).
[8] Usai, M.; Marchetti, M. Antraquinone distribution in the hypogeal apparatus of
Rubia peregrine L. growing wild in Sardinia. Natural Product Research, 2010; 24 (7),
pp 626-632.
[9] Whetsel, K. Specthrophotometric determation of anthraquinone and benzantrone.
Anal. Chem., 1953, 25 (9), pp 13341337.
[10] Mohammed, A.; and et al. Emodin, A naturally ocuring anthraquinone: Its isolation
and specthrophotometric determination in Rumex Cyprius plant. Spectroscopy Letter,
1998, 29 (8), pp 1539-1543.
[11] Xiao, C.; Hong, L. Determination of total anthraquinones in heatlh foods by direct
ultraviolet specthrophotometry. Sichuan provincial center for disease prevention and
control, Chengdu 610041, China. DOI: CNKI:SUN:ZSPZ.0.2007-01-012.
[12] Vasudevan, D.; and et al. Development and validation of spectrophotometric
method for chrysophanol in gel formulations. International Journal of Pharmaceutical
Sciences. Vol. 2 (1), 2007, 1-6.
55
[13] Nejati, M. Spectrophotometric determination of trace amount of copper (II) ion

based on complexation whit an antraquinone derivate. Departament of chemistry,
faculty of sciences, zabol university, 2006.
[14] Malik, S.; and et al. Qualitative and quantitative analysis of anthraquinone
derivates in rhizomes of tissue culture-raised Rheum emodi wall. Plants. Institute of
Himalayan Bioresource Technology, Palampur 176061 (H. P.), India, 2009.
[15] Kuo, C.; Wen, S. Analysis of nine rhubarb anthraquinone ad bianthrones by
micellar electrokinetic chromatography using experimental design. School of Pharmacy,
College of Medicine, National Taiwan University, 1 Jen-Ai Road, Section 1, Taipei
10018, Taiwan, 2003.
[16] Charles, I.; Sonia, L. A Chromatographic study of the anthraquinones of Rhamus
alaternus L.I. extraction, isolation and identification of the aglycones, American
University of Beirut, 1980, Vol 18 (1), pp. 49-55.
[17] Brody, T.; and et al. A chromatographic study of the anthraquinone derivatives of
curacao Moe. Journal of the amarican pharmaceutical association, 2006, Vol. 39 (12),
pp 666-669.
[18] Genovese, S.; and et al. Comparision of three different extraction methods and
HPLC determination of the anthraquinones aloe-emodine, emodine, Rheine,
chrysophanol and physcione in the bark of Rhamnus alpines L. (Rhamnaceae).
Departimento di Scienze del farmaco, universit degli studi G. DAnnunzio ChietiPescara, via dei vestini 31, 66100 Chieti (CH), Italy.
[19] Turner, C.; and et al. Evaluation and comparison of commercially available Aloe
vera L. products using size exclusion chromatography with refractive index and multiangle laser light scattering detection. International Immunopharmacology 4 (2004)
17271737
[20] Zonta, P.; Bogoni, P.; Masotti, P.; Micali, G. High-performance liquid
chromatographic profiles of aloe constituents and determination of aloin in beverages,
with reference to the EEC regulation for flavouring substances
Journal of
Chromatography A, Volume 718, Issue 1, 1 December 1995, Pages 99-106.
[21] AGUIRRE ORTEGA, L., et al., Validacin de mtodos analticos, ed. A.E.F.
Industria. 2001, espaa.
[22] COY, G.A., Protocolo. Estandarizacin de mtodos analticos, ed. I.D.E.A.M.P.F.
Ambiental. 1999, Bogot. 4 - 5.
56
[23] RIUS, F.X., et al., La validacin de mtodos analiticos. Revista Tcnicas de

laboratorio, 2000. 252: p. 382-385.
[24] RILEY, C.M. and T.W. ROSANKE, Development and validation of analytical
methods. 1 ed, ed. E. Science. 1996, Great Britain.
[25] W.C EVANS. PHARMACOGNOSY TREASE AND EVANS. London N.W UK
13 Edicin. WB Saunders Company Limited. 1996. Pp. 612
[26] Brown, J. P. (1980). A review of the genetic effects of naturally occurring
flavonoids, anthraquinones and related compounds. MUTATION RESEARCH 75, 243247.
[27] Mbwambo, Z.W., Luyengi, L. and Kinghorn, D. (1996). Phytochemicals: A
glimpse into their structural and biological variation. INTERNATIONAL JOURNAL
OF PHARMACOGNOSY. 34. 344-348.
[28] Licoln, T., Zeiger, E. Secondary Metabolites and Plant Defense. Plant
Physiology, Fourth Edition, Sinauer Associates, Inc. 2006. Captulo 13.
[29] R, Croteau. T.M Kutchan. N. G. Lewis. Natural Products (Secondary
Metabolites). En: Buchanan, Gruissem, Jones (editors) Biochemestry and Molecular
Biology of Plants. American Society of Plant Physiologist. Rockville, Maryland,
Estandos Unidos. 2000. Captulo 24.
[30] Biblioteca digital de la universidad de chile. Drogas con hetersidos
antraquinnicos.
(Disponible
en:
http://mazinger.sisib.uchile.cl/repositorio/ap/ciencias_quimicas_y_farmceuticas/apbot
farm2c/montesm02/10.html)
[31] Eshun, K.; He, Q. Aloe vera: a avaluable ingredient for the food, pharmaceutical
and cosmetic industries-A review. Critical Reviews in food science and nutrition, 44
(2), 91-96, 2004.
[32] Bernal, Y.; Correa, J. Especies vegetales promisorias; convenio Andrs Bello
(Colombia), 342, 1994.
[33] Garca, H. Flora medicinal de Colombia (Colombia), 171-173. 1992.
[34] DUKE, James. La Farmacia Natural. 1 ed. Fulton: Rodale, 1998. p 70.
[35] Kojo Eshum, Quian He. (2004). Critical Reviews. In Food Science And Nutrition,
Vol. 44, No. 2, pp 91-97.
57
[36] lvarez, K.; Varn, J. F. Obtencin de algunos parmetros de referencia del suelo
y del muclago del Aloe vera cultivado en el corregimiento de Combia municipio de
Pereira Risaralda. Pereira, Universidad Tecnolgica de Pereira. Facultad de Tecnologa.
2006. (Tesis: Tecnologa Qumica).
[37] El cultivo de la sbila (Aloe barbadensis) (2006) disponible en la pgina:
http://www.agronegocios.gob.sv/comoproducir/guias/sabila.pdf
[38] Consulta realizada el 2 de Septiembre de 2010. Disponible
http://www.agroinformacion.com/leer-contenido.aspx?articulos=1180.
en:
[39] Atherton, P. Aloe vera: magic or medicine?. Nursing standard, 12(41), 49-54. 1998.
[40] Agarwala, O. P. Whole leaf Aloe gel vs. Standard Aloe gel. Drug & Cosmetic
Industry, 160 (2), 22-27, 1997.
[41] vila, L. M.; Daz, J.A. Sondeo del Mercado mundial de sbila (Aloe vera)
(Colombia), 2002.
[42] Avaro, D. El mercado mundial del Aloe. Artculos y noticias de Hoodia, Aloe,
Noni y Cha en espaol. 1232, 1, 2005.
[43] Garca, H. Flora medicinal de Colombia (Colombia), 171-173. 1992.
[44] DUKE, James. La Farmacia Natural. 1 ed. Fulton: Rodale, 1998. p 70.
[45] Gampel, R. Propiedades y utilidad del Aloe vera. Conocer Arganzuela, 117, 2002.
[46] Yagi A, Kabash A (2002) 957-60 Okamura N. Antioxidant, free radical scavenging
and anti-inflammatory effects of aloesin derivatives in Aloe vera. Faculty of Pharmacy
and Pharmaceutical Sciences, Fukuyama University, Gakuen-cho, Japan. Pp 957-60
[47] Vizoso, A.; Garca, A. y otros. (2000). Derivados antraquinnicos del Aloe vera L.
Tamizaje Genotoxico. pp. 46-50.
[48] Davis, R.; Didonato, J.; Hartman, G.; Haas, R. Antiinflammatory and wound
healing activity of a growth substance in Aloe vera. Journal of the American Pediatric
Medical Association, 84, 2-80. 1994.
[49] Sims, R.; Zymmermann, E. Effect of Aloe vera on herpes simplex and herpes virus
(strain zoster). Aloe vera of American archives, 1,239-240, 1985.
[50] Gjerstad, G. Chemical studies of Aloe vera juice. Advancing frontiers of plant
sciences, 28,1971.
[51] Feil, C. Aloe cosmetics (USA) Bestways, 108, 44-49, 1980.
58
[52] Northway, R.B. Experimental use of Aloe vera extract in clinical practice.
Veterinary Medicine / Small Animal Clinician, 70:89, 1975.
[53] Anderson, B. Aloe vera juice: A veterinary medicament?. The compendium on
continuing education for the practicing veterinarian, 5, s364-s368, 1983.
[54] He, Q.; Changhong, L.; Kojo, E.; Tian, Z. Quality and safety assurance in the
processing of aloe vera gel juice. Food control, 16, 95-104, 2005.
[55] Blitz, J.; Smith, J.; Gerard, J. Aloe vera gel in pectic ulcer therapy: preliminary
report. Journal of the American Osteopathic association, 62, 731- 735, 1963.
[56] Pittman, J. Immune enhancing effects of aloe. Health consciousness, 13, 1-28 y 30.
[57] Wolfgang, W. Healing with aloe. Ennsthaler, 44, 3-5, 1995.
[58] Montoya, F. Alona. Aloe Sab, Universidad Cooperativa de Colombia, 2006.
(Presentacin realizada en el II encuentro nacional sabilero, Bucaramanga).
[59] British Pharmacopeia xx. v.i, 1980:20-1.
[60] USP XXIII Pharmacopeia National Formulary. The United Pharmacopeia
Convention Inc. Pp. 42, 1995.
[61] Especificaciones de Calidad del Extracto acuoso de Aloe. CIDEM 1997.
[62] Luengas, P. Aloe vera. Grupo de investigacin de tecnologa de productos
naturales, Universidad Nacional de Colombia, 2006. (Presentacin realizada en el II
encuentro nacional sabilero, Bucaramanga).
[63] MIONES, J., "Manual de tcnicas instrumentales", Crculo editor Universo.
1978.
[64] Abril, N.; Brcena, A.; et al. Espectrofotometra: Espectros de absorcin y
cuantificacin colorimtrica de biomolculas, Universidad de Rabanales, departamento
de bioqumica y biologa molecular. 2000.
[65] Consulta realizada el 18 de mayo de 2010, a las 10:22 p.m, (disponible en:
http://www.espectrometria.com/espectrometra_ultravioleta-visible)
[66] Skoog, D.; West, D. FUNDAMENTOS DE QUMICA ANALTCA. Ed.
THOMSON, 8. Captulo 26. P.p 797-799. 2009.
[67] Bozzi, A.; Perrin, S. and Austin, F. Quality and authenticity of commercial Aloe
vera gen powders. Food Chemestry 103 (2007) 22-30.
59
[68] Kiathevest, K.; and et al. Extraction and concentration of anthraquinones from
roots of Morinda citrofolio by non-ionic surfactant solution. Separation and Purification
Technology. Department of Chemical Engineering. Faculty of Engineering
Chulalongkorn University, Patumwan, Payathat, Bangkok, 10330, Tahiland.
[69] Fuentes V, Granda M. Desarrollo de una tcnica analtica para cuantificar las
antraquinonas presentes en la Cassia alata L. (Guacamaya francesa) Conozca las plantas
medicinales. La Habana: Editorial Cientfico-Tcnica; 1997.
[70] Cuba. Ministerio de Salud Pblica. NRSP No. 312. Medicamentos de origen
vegetal: extractos fluidos y tinturas. Mtodos de ensayos. La Habana: MINSAP; 1992.
[71] Larinova M, Gonzlez-Quevedo Rodrguez M, Corral A, Fuest V. Estudio
comparativo de las hojas y de los extractos de Aloe arborescensis y Aloe barbadensis.
Parte 1. Actividad cicatrizante y compuestos antraquinnicos. Rev Cubana Farm. 1989;
23(3):270-7.
[72] Gutirrez R, Roa ML. Determinacin de algunos compuestos qumicos en cuatro
plantas arbreas forrajeras. Rev Col Cienc Pec. 2003; 16: 2.
[73] Ministerio de Ambiente, Vivienda y Desarrollo Territorial. Estandarizacin de
mtodos analticos, IDEAM, 2006. Versin 2.
[74] Miller, J.; Miller, J.; Estadstica y Quimiometra para Qumica Analtica.
PEARSON EDUCACIN, S.A Ed. 4, 2002.
[75] Eurachem METODOS ANALITICOS ADECUADOS A SU PROPOSITO, gua de
laboratorio para validacion de mtodos y tpicos. Ed.1. 1998
[76] Panichayupakaranant, P. Standardization of Senna alata leaf extracts. Faculty of
Pharmaceutical Sciences, Prince of Songkla University. 2010.
[77] Banyai, P.; Kuzovikina, N. HPLC Analysis of Alizarin and Purpurin Produced by
Rubia tinctorum L. Hairy Root Cultures. Chrormatographia. 2006, 63, S111S114.
[78] Nelson, O.; Senseman, C. Quantitative Determination of Anthraquinone. Ind. Eng.
Chem. 1922, 14 (10), pp 956-957.
60
ANEXOS
ANEXO 1. Resolucin del INVIMA, respecto al contenido de Alona en productos
a base de Aloe vera.
61
ANEXO 2. Frmulas
Parmetro
Smbol
o
Frmula
n
Media
Xi
i 1
n
n
Desviacin
estndar
(Xi
Varianza
Coeficiente de
variacin
%CV
Error
%E
i 1
n 1
( Xi
X )2
n 1
%CV
%E
X )2
s
x100
X
( Experimental Terico)
x100
Terico
a. Clculo de la adicin:
Ca (Vm Va ) CpVa
CaVm
Va
Cp Ca
Ca: Concentracin a adicionar (mg/L)

Cp: Concentracin del estndar (mg/L)
Vm: Volumen de muestra (mL)
Recuperacin
%R
Va: Volumen adicionado (mL)

Criterio: Que Va no exceda el 5% del volumen de
la muestra
b. Clculo porcentaje de recuperacin
%R
A(Vs V ) ( BVs )
x100
CxV
A: Concentracin medida del compuesto en la

muestra a la que se le ha hecho la adicin conocida
del analito
B: Concentracin base del componente en la
62
Parmetro
Smbol
o
Frmula
muestra
C: Concentracin del componente en la solucin
con adicin conocida del analito
Vs: Volumen de la muestra antes de la adicin
conocida del analito
V: Volumen de la solucin con adicin conocida
utilizada.
63
ANEXO 3. Resultado de anlisis de Alona realizado por TECNIMICRO Ltda.
64
ANEXO 4. Valores crticos T, para rechazo de datos
ANEXO 5. TABLAS DE LAS DETERMINACIN DE LOS PARMETROS

PARA LA ESTANDARIZACIN
LMITE DE DETECCIN Y CUANTIFICACIN (Lectura de blancos
enriquecidos.)
Blanco
Absorbancia
1
2
0 0,001
3
4
5
6
7
8
9
10
0 0,001 0,001 0,001 0,001 0,001 0,001 0,001
PRECISIN
REPETIBILIDAD (Lecturas de estndares a diferentes concentraciones)
concentracin 08/06/2010 09/06/2010 10/06/2010 11/06/2010 15/06/2010 16/06/2010 17/06/2010

0,003
0,005
0,006
10
0,005
0,004
0,004
0,003
0,02
0,02
0,019
50
0,02
0,02
0,019
0,036
0,039
0,037
100
0,039
0,039
0,039
REPETIBILIDAD INTERMEDIA (Lectura de estndar alto en el laboratorio de
suelos de la UTP.)
Coeficiente de
variacin
Fecha
concentracin
absorbancia
promedio desviacin
21/07/2010
100
0,036 0,03 0,029
0,032
0,00378
REPRODUCIBILIDAD (Lecturas del estndar alto por el analista sustituto.)
concentracin 16/06/2010 17/06/2010 18/06/2010.
100
0,04
0,039
0,04
65
11,95
RECUPERACIN
Recuperacin alta. (Lecturas de la determinacin de recuperacin con adicin alta
de estndar)
fecha
Absorbancia
25/06/2010 28/06/2010 29/06/2010 30/06/2010 01/07/2010 02/07/2010

0,044
0,047
0,047
0,047
0,047
0,051
Recuperacin baja. (Lecturas de la determinacin de recuperacin con adicin

baja de estndar)
Fecha
Absorbancia
12/07/2010 13/07/2010 14/07/2010 15/07/2010 16/07/2010 19/07/2010 21/07/2010

0,019
0,013
0,02
0,019
0,018
0,017
0,013
ANEXO 6. CURVAS DE CALIBRACIN

Curvas realizados por el mtodo 1
0,06
absorbancia
0,05
0,04
0,03
0,02
0,01
0
0
50
100
150
concentracin en mg/L
0,06
0,05
0,04
0,03
0,02
0,01
0
0
50
100
concentracion en mg/L
150
curva 2 realizada con hidroxido de potasio
200
y = 0,0001x + 0,0353
R = 0,9721
0,05
0,04
absorbancia
absorbancia
200
y = 0,0001x + 0,035
R = 0,9758
0,03
0,02
0,01
66
0
0
20
40
60
curva 3 realiza con hidroxido de potasio
80
100
120
y = 0,0001x + 0,0288
R = 0,9947
absorbancia
0,07
0,06
0,05
0,04
0,03
0,02
0,01
0
0
20
40
60
80
100
120
y = 0,0001x + 0,0469
R = 0,8578
Curvas realizados por el mtodo 2.

0,25
absorbancia
0,2
0,15
0,1
0,05
0
0
50
100
concentracin en mg /L
150
200
curva 1 realizada con magnesio
absorbancia
0,12
0,1
0,08
0,06
0,04
0,02
0
-0,02 0
50
100
150
absorbancia
250
y = 0,0009x + 0,0345
R = 0,9997
200
250
y = 0,0005x - 0,0028
R = 0,9965
0,04
0,035
0,03
0,025
0,02
0,015
0,01
0,005
0
-20
20
40
60
67
80
100
120
y = 0,0003x + 0,001
R = 0,9972
absorbancia
0,08
0,07
0,06
0,05
0,04
0,03
0,02
0,01
0
0
50
100
150
68
200
250
y = 0,0004x + 0,0007
R = 0,9994

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ESTANDARIZACIN DE LA TCNICA ESPECTROFOTOMTRICA (UV-VIS)

PARA LA CUANTIFICACIN DE ANTRAQUINONAS PRESENTES EN

JHON ELMER BUSTAMANTE BOTERO

UNIVERSIDAD TECNOLGICA DE PEREIRA

ESTANDARIZACIN DE LA TCNICA ESPECTROFOTOMTRICA (UV-VIS)

JHON ELMER BUSTAMANTE BOTERO

UNIVERSIDAD TECNOLGICA DE PEREIRA

NOTA DE ACEPTACIN DE TRABAJO DE GRADO

Para constancia firmamos en la ciudad de Pereira hoy:

A Dios y a nuestras familias por el apoyo incondicional.

1.1. EXTRACCIN ANTRAQUINONAS

2.1.1. Linealidad y rango.

2.1.4. Limite de deteccin.

2.1.5. Limite de cuantificacin.

2.1.5.1. Mtodo basado en la relacin seal/ruido

2.1.5.2. Mtodo Basado en la Desviacin Estndar de la Respuesta

2.1.5.3. Mtodo Basado en la Extrapolacin de la Recta de

2.2. COMPUESTOS ANTRACENICOS VEGETALES.

2.2.2. Compuestos antraquinonicos.

2.2.2.2. Antraquinonas presentes en el aloe vera.

2.2.2.3. Propiedades generales y caracterizacin de las antraquinonas.

2.3. ALOE VERA.

2.3.1. Planta de aloe vera.

2.3.3. Produccin mundial.

2.3.4. Composicin qumica.

2.3.4.1. Compuestos antioxidantes.

2.3.5. Usos del aloe vera.

2.3.6. Control de calidad.

2.3.6.1. Requerimientos fisicoqumicos y biolgicos para el

2.3.6.2. Reglamentacin nacional del control de calidad de productos

2.4. FUNDAMENTO DE LA TCNICA INSTRUMENTAL

2.4.1. Espectroscopia UV-VIS.

2.4.1.1. Caractersticas de un espectrofotmetro.

2.4.1.2. Obtencin de un espectro de absorcin.

3.1.2. Muestra de anlisis.

3.2.EXPERIMENTAL PREVIA A LA ESTANDARIZACIN.

3.2.1. Limite de deteccin.

3.2.2. Limite de cuantificacin.

3.2.3. Curvas de calibracion.

3.2.6. Intervalo de trabajo o lineal.

3.3. EXTRACIN DEL ANALITO Y OBTENCIN DEL DERIVADO

3.4.2.2. Repetibilidad intermedia.

3.4.4. Verificacin de la estandarizacin.

3.5. ANALISIS PRELIMINAR POR CROMATOGRAFIA LIQUIDA

4.2. CONDICIONES PARA LA OBTENCION DEL DERIVADO

4.4.3. Determinacin de la exactitud con estndar.

4.4.4. Exactitud interlaboratorio.

4.5.TIEMPO Y COSTO DEL ANALISIS.

4.6. DETERMINACIN POR CROMATOGRAFA LIQUIDA

Tabla No. 1: Clasificacin botnica de la planta de A. vera

Tabla No. 2: Composicin Qumica del Aloe vera.

Tabla No. 3: Requerimientos fisicoqumicos y biolgicos para el control de

Tabla No. 4: Datos correspondientes a la curva de calibracin del estndar de alona. 45

Tabla No. 6: Parmetros para la determinacin de la precisin en trminos de

Tabla No. 7: Lecturas para determinar recuperacin, con adicin de

Tabla No. 8: Parmetros para la determinacin de la exactitud a tres niveles de

Tabla No. 9: Presentacin de los resultados para la determinacin de la exactitud

Tabla No. 10: Concentraciones de cada nivel inyectado.

Figura No. 1: Estudios en los que se divide la precisin.

Figura No. 2: Ncleos bsicos de compuestos antracnicos

Figura No. 3: Enumeracin de los carbonos en el ncleo de las antraquinonas

Figura No. 4: Reaccin de derivatizacin de antraquinonas.

Figura No. 5: Hidrlisis oxidativa de antraquinonas