I.

INTRODUCCIN
En la actualidad se hace cada vez ms frecuente el uso de especies o recursos vegetales
como solucin a diferentes problemas de salud, sin que estos usos hayan sido
confirmados cientficamente. Tal es el caso de Vasconcellea candicans, una especie
nativa adaptada a lugares subxerofticos en las lomas costeras. El ltex del gnero
Vasconcellea sp. ha sido usado como cicatrizante en la medicina tradicional, y el jugo de
Vasconcellea candicans es utilizado en el tratamiento de la uta. Por tal motivo en este
trabajo, se trata de dar una contribucin ms a los estudios de investigacin usando como
base la Vasconcellea candicans "mito"; recurso vegetal utilizado en la medicina
tradicional de nuestro pas, buscando demostrar la actividad cicatrizante del ltex, as
como disear una forma farmacutica de aplicacin tpica empleando como activo el
ltex seco; una base que igualmente utiliza un recurso natural, como la manteca del
cerdo; la misma que por sus caractersticas ha demostrado gran compatibilidad con la piel
humana.

No se ha encontrado evidencias escritas ni otros trabajos de investigacin relacionados

con el uso cicatrizante de Vasconcellea candicans y nicamente se han podido recoger
antecedentes del uso tradicional en algunos valles de la costa central de Lima, donde es
utilizado el jugo y ltex de la planta.

1.1 HIP

TESIS

El ltex seco de Vasconcellea candicans Gray mito, incorporado en una forma

farmacutica de aplicacin tpica, presenta actividad cicatrizante.

1.2 OBJETIVOS
1.2.1 Objetivo general
Demostrar la actividad cicatrizante de una forma farmacutica conteniendo el
ltex seco de Vasconcellea candicans Gray mito.

1.2.2 Objetivos especficos

Determinar la concentracin efectiva de mayor actividad cicatrizante en la

forma farmacutica de aplicacin tpica.

Disear y formular una forma farmacutica de aplicacin tpica

empleando como activo el ltex seco.
Realizar pruebas de tolerancia de la forma farmacutica.

II. MARCO TERICO

2.1. Caractersticas de la familia y gnero

De la familia Caricaceae destacan el gnero Carica que es monoespecfico, y el
gnero Vasconcellea, denominado papayas de montaa por su distribucin andina 1.

2.1.1. Familia Caricaceae

Comprende seis gneros y 36 especies, distribuidas a travs del trpico desde
el nivel del mar hasta los 3500 m. Carica papaya L. es la especie de mayor
importancia econmica de esta familia 2. En esta familia existe el gnero
Cylicomorpha, nativa de frica Ecuatorial, y el gnero Carica, Jacaratia,
Jarilla, Horovitzia y Vasconcellea, propios de Amrica del Sur y Amrica
Central. Los gneros ms representativos de la familia son Jacaratia con
siete y Vasconcellea con 21 especies3.

De esta familia tropical, muy abundante en Sudamrica, solo dos especies

son nativas del Oeste de frica. (Figura 1).

Caractersticas
Porte: rboles o arbustos con tallos blandos, poseen ltex lechoso; dioicos,
raros monoicos. Hojas: alternas, grandes, palmadas, largamente pecioladas,
sin estpulas. Flores: solitarias o en cimas, imperfectas, raros perfectas,
hipginas. Perianto: cliz en 5 spalos soldados, corola en 5 ptalos libres o
soldados. Androceo: 5-10 estambres libres, soldados a los ptalos. Gineceo:
ovario spero, 5 carpelos soldados. Estilo corto con 5 estigmas. Fruto: baya.
Semillas: endosperma oleoso, embrin recto 4.

Figura 1. Distribucin de la familia Caricaceae en el mundo.

2.1.2. Gnero Vasconcellea
El gnero Vasconcellea, considerado previamente una seccin del gnero
Carica, fue rehabilitado por Badillo (2000 - 2001), sobre la base de
caracteres morfolgicos y genticos. Con 21 de las 35 especies de Caricaceae,
Vasconcellea es el mayor de los seis gneros de la familia y su distribucin se
extiende a lo largo de la Cordillera de Los Andes en Sudamrica, con una
concentracin de especies en Ecuador, donde habitan 16, desde el nivel del
mar hasta cerca de los 3500 m5. En 2001, el nombre del gnero Vasconcella
se corrigi a Vasconcellea.

Carica papaya, a diferencia del gnero Vasconcellea, se caracteriza por tener

un ovario unilocular, tallo hueco, hoja con ms de siete venas, entre otros;
adems de la caracterizacin morfolgica y los resultados de tcnicas de
marcadores moleculares; su incompatibilidad para hibridar con las especies
Vasconcellea por tanto, apoya la nueva clasificacin 6.

Especies Vasconcellea se pueden encontrar en el medio silvestre en una

amplia gama de pisos ecolgicos secos tropicales, tierras bajas costeras (V.
parviflora), en los bosques hmedos subtropicales (V. weberbaueri) y las
regiones templadas (V. chilensis). Sin embargo, su centro de diversidad se
encuentra en los Andes desde Colombia a Per con un punto caliente en el
sur de Ecuador y Norte del Per7.

Vasconcellea sp

., frecuentemente referido como papaya de altura, son especies

particularmente comunes en los valles de las tierras altas de Ecuador y
Colombia, pero se pueden encontrar desde Venezuela hasta el norte de
Argentina. En comparaci

n con la papaya, la mayor

a de estas plantas tienden a ser m

s peque

as, menos suculentas y muy diferentes en el sabor

Una revisin taxonmica realizada mediante el anlisis AFLP, en la

Universidad de Gent determin que el gnero Vasconcellea, como una
delimitacin taxonmica, esta soportado incuestionablemente por varios
anlisis moleculares que lo confirman como un gnero independiente y no
como una seccin del gnero Carica; sin embargo, los aspectos morfolgicos
por si solos no son suficientes para la diferenciacin entre ambos. Este
estudio concluy que una identificacin, basada slo en caractersticas
vegetativas, resulta complicada para el gnero Vasconcellea, debido a la
plasticidad fenotpica y a la intercompatibilidad entre varias especies 9.

El gnero Vasconcellea es el segundo en importancia econmica, por tener

especies frutales conocidas comnmente como papayas de montaa o
papayuelas (Figura 2), distribuidas a lo largo de los Andes y el pie de monte
andino entre 300 y 3500 msnm. Ecuador y Colombia son los pases con
mayor diversidad en estas especies2.

Figura 2. Frutos de diversas especies del gnero Vasconcellea10

En la clasificaci

n actual (Badillo, 2001)

Vasconcellea

comprende 20 especies y un h

brido,

Vasconcellea x heilbornii

el que, a pesar de la frecuente ausencia de la reproducci

n sexual; es generalmente considerado como especie. Las especies de

Vasconcellea

(Tabla 1) son plantas silvestres, semi-dom

sticos o domesticadas, con un h

bito arbustivo o arb

reo. Las plantas son generalmente dioicas, pero a veces monoicas o pol

gamas. El tallo medular es en su mayor

a simple o poco ramificado, en algunas especies se cubre con est

pulas espinosas, mientras que las hojas se concentran en una corona terminal.
Las hojas son grandes o muy grandes, y pueden variar ampliamente en su
forma. Todos los

rganos producen un l

tex blanco que contiene ciste

na endopeptidasas. Las flores son pent

meras de color blanco, verde, amarillo, naranja o p

talos rosa. El fruto es una baya con forma variable, en dimensi

n y color

11

. En comparaci

n con su conocido primo tropical, la papaya (

Carica papaya

L.), tienden a ser m

s peque

as, menos suculentas y muy diferentes, pero a menudo muy agradable, en el

sabor

12

Tabla 1. Especies del gnero Vasconcellea8

Taxn
V. candicans V. cauliflora V. chilensis
V. crassipetala V. cundinamarcensis V.
glandulosa V. goudotiana V. x
heilbonrnii V. horovitziana V.
longiflora V. microcarpa V. monoica V.
omnilingua V. palandensis V. parviflora
V. pulchra V. querciflora V.
sphaerocarpa V. sprecei V. stipulata V.
weberbaueri

2.1.3 Descripci

n de la especie

a. Descripcin botnica.
Especie nativa del Per crece al estado silvestre en las vertientes
occidentales de los Andes y lomas de la costa (700-2000 m). Es un rbol
de hasta 6 metros de alto, sus frutos (Figura 3) son de forma ovoideelongadas (10-15 cm de largo por 3-4 cm de ancho) 13. Especie dioica, es
decir con flores masculinas y femeninas que se forman en distintas plantas
(Figura 4)14. Planta xeroftica, de tallo grueso muy ramificado con
abundante ltex; de hojas grandes poco lobadas, siendo el haz de color
verde oscuro y el envs revestido de un tomento blanco y caducifolio
durante el verano. El fruto es una baya, despuntado hacia el extremo
opuesto del pedicelo; la pulpa de sabor agridulce es consumida por los
pobladores de los alrededores de la zona donde crecen los arbustos, as
como por ocasionales visitantes. Cumple un papel importante como
captador natural de agua de niebla, productor primario importante
conjuntamente con el estrato arbreo-arbustivo. Hbitat y nicho ecolgico
de organismos importantes, cumpliendo un papel en el funcionamiento del
ecosistema natural de las lomas costeras.

Figura 3. Fruto verde y hojas de Vasconcellea candicans

Figura 4. Flor de Vasconcellea candicans mito

Figura 5. Vasconcellea candicans mito en la provincia de Canta, departamento de

Lima.

Es una especie que puede vivir bajo condiciones de deficiencia de agua

(Figura 5), ya que esta slo est disponible cuando las lomas est cubierta
por la densa neblina que cubre nuestra costa durante los meses de Julio a
Octubre. Esta especie tambin se caracteriza porque sus frutos son
comestibles y su ltex puede ser usado en la cura de algunas
enfermedades; sin embargo, el sobrepastoreo y la deficiente regeneracin
de nuevos individuos, por fallas en la germinacin natural de sus semillas
la han puesto en peligro; vive bien en suelos arenosos cidos con materia
orgnica donde el pH edfico se encontr en un rango muy amplio 4,4 a
5,89 (Figura 6). Est relacionada con otras especies arbreas y arbustivas;
el nmero de semillas est en relacin directa con el tamao del fruto, lo
que se debe tener en cuenta, especialmente cuando existe mayor cantidad
de plantas machos que de hembras en las reas muestreadas 15.

Figura 6. Plantacin de Vasconcellea candicans (mito) en Zona de Paraso- Jos

Carlos Maritegui (VMT Lima, Octubre 2007)

b. Distribuci

Per
Caracterstico de los andes occidentales y los valles interandinos del Per.
En la costa est circunscrita a los ecosistemas de Lomas. El suelo de la
Lomas de Lcumo (Lima) donde se desarrolla una poblacin de
Vasconcellea candicans, se caracteriza por tener un pH de 6,5 y una
conductividad elctrica de 2,18 mmhos.cm-1, condiciones apropiadas para
el crecimiento de la vegetacin. En cuanto a la textura del suelo presenta
70% de arena, 28% de limo y 2% de arcilla, es decir un suelo franco
arenoso y con un contenido de fosforo relativamente alto de, 61,3 ppm,
caracterstica tpica por cuanto los suelos de la costa presentan un bajo nivel
de este macronutriente14.

2.2 Ltex de la familia Caricaceae

Todos los miembros de la familia Caricaceae poseen laticferos y diferentes
composiciones en sus enzimas. Cuando una planta es daada, se libera un ltex que
funciona como un mecanismo de defensa para defenderse de los depredadores;
contiene diversas protenas tales como quitinasas y los inhibidores de la proteasa.
Caricaceae suelen almacenar enormes cantidades de cistena proteinasas en sus
laticferos. Estas proteinasas muestran capacidad de descomponer las protenas 6.

El ltex de Caricaceae contiene enzimas proteolticas, localizados en la fruta, que se

utilizan etnofarmacolgicamente para tratar trastornos digestivos. Algunas de estas
protenas presentan propiedades proliferativas cuando se probaron en clulas de
mamferos, lo que sugiere un papel en la reconstruccin del tejido herido 16.

Cistena proteinasas participan en prcticamente todos los aspectos de la fisiologa

vegetal y el desarrollo. Estos juegan un papel en el desarrollo, senescencia, muerte
programada de clulas, el almacenamiento y la movilizacin de protenas
germinales, y en respuesta a diversos tipos de estrs ambiental. En

esta revisi

n, nos centramos con un grupo de enzimas de defensa de la planta que se producen

en el tejido germinal de Caricaceae. Estas enzimas producen una respuesta
protectora en la fruta no madura despu

s del esfuerzo f

sico. En el trabajo de investigaci

n de Salas C., se propone que estas enzimas siguen una estrategia similar a la serina
proteinasas de mam

feros que participan en la coagulaci

n sangu

nea y la curaci

n de heridas; adem

s, se muestra evidencia del papel farmacol

gico de la ciste

na proteinasa de plantas en la cicatrizaci

n de heridas de mam

feros, inmunomodulaci

n, trastornos digestivos y las alteraciones neopl

sicas

17

2.3 Usos
El Consejo Nacional de Investigacin (1989) clasifica el potencial de estas especies
Vasconcellea en tres niveles: el uso directo de los frutos sabrosos y de alta calidad, el
uso de la variabilidad gentica como materia prima para la creacin de nuevos
frutos Vasconcellea y, finalmente, til en los programas de crianza para la mejora de
la papaya con el fin de extender el rango de cultivo mediante el uso de la dotacin
gentica de la capacidad de adaptacin fra y mejorar la produccin de papaya, y el
uso de genes de resistencia12.

El consumo de los frutos en la actualidad, se hace en forma cruda o preparada como

en jugos, nctares, dulces, conservas y otros productos agroindustriales, en los cuales
El
ltex dede
lasazcar
plantasrealza
de este
gnero no ha sido ampliamente estudiado. Entre las
la adicin
el aroma.
fuentes consultadas, nicamente se encontraron publicaciones acerca del chamburo
(V. cundinamarcencis) y del babaco (V. x heilborniivar. babaco). El ltex del babaco
fue definido por Marcillo (2005) como un fluido lechoso de color blanquecino, no
muy denso, presente en hojas, tallo y frutos, descripcin que puede aplicarse al
Aun
poseen
una gran
cantidad
de posibilidades
subutilizadas;
una de stas se
ltex de
las dems
plantas
del genero
Vasconcellea
9.
relaciona con la extraccin y caracterizacin de un complejo proteoltico conocido
como babacana a partir del ltex de sus frutos, el cual tendra una actividad
proteoltica hasta 20 veces superior a la actividad de la papana obtenida de Carica
papaya. Si se considera que el creciente negocio mundial relacionado con la papana,
actualmente, se calcula en unos 100 millones de dlares anuales, se puede prever que
existe
un mercado potencial
muy importante
paraCaricaceae
la babacana,
porfruta
tenerinmadura
las mismas
V. cundinamarcencis
es una especie
de la familia
cuya
aplicaciones
contiene ltexindustriales.
con grandes cantidades de cistena proteinasas. Una de las fracciones
de ltex que contienen estas enzimas ha demostrado mejorar la cicatrizacin de las
heridas de la piel y acelerar la curacin de la lcera gstrica inducido
qumicamente18. El contenido de protenas en el ltex de babaco es de un 13,14 % 9.

La resistencia ante algunas enfermedades importantes, como las que son producidas
por los hongos Fusarium y los nematodos Meloidogyne, est presente en varias
especies del gnero Vasconcellea. Por tal motivo, estas plantas pueden ser utilizadas
en
la reproduccin
o eldecultivo
de especies
la papaya o elestudiado;
babaco, que
son muy
El ltex
de las plantas
este gnero
no ha como
sido ampliamente
sin embargo
susceptibles
a
dichas
enfermedades,
a
manera
de
plantas
husped
en
una
el ltex de Vasconcellea se define como un fluido lechoso de color blanquecino, no
reproduccin
por injertos
o como
de genes
paracomo
la obtencin
dedel
plantas
muy denso, presente
en hojas,
tallofuente
y frutos.
Se tiene
referencia
contenido
transgnicas.
porcentual de humedad, protenas, lpidos y carbohidratos del ltex de babaco:
79,24; 13,14; 2,18 y 3,01% respectivamente 9.

Adicionalmente, se podr

a ampliar la base gen

tica del g

nero

Vasconcellea

gracias a la facilidad de cruzamiento entre especies y las constantes mutaciones som

ticas que se dan en la propagaci

n vegetativa

1, 9, 12

Existen plantas medicinales que estn siendo aplicadas en forma de polvo para tratar
tpicamente la uta; tambin como emplasto, cocimientos y lavados, tales como el
mito (Vasconcellea candicans). El mito se utiliza contra la uta y se aplica el jugo de
la planta en la zona afectada19. Poco se sabe acerca de los valores medicinales de las
especies Vasconcellea, a pesar que la FAO (1992) menciona el uso del fruto para el
tratamiento de la esclerosis arterial y el uso de ltex contra la micosis de piel y el
plano de la verruga, tambin se inform que el ltex tiene uso como antihelmntico
y para curar enteritis, diabetes y enfermedades del hgado 6.

2.4 Cicatrizacin
La cicatrizacin empieza cuando se forma una herida, siendo esta una lesin del
cuerpo que, de forma caracterstica, consiste en una laceracin o infraccin de una
membrana, con el dao de los tejidos subyacentes 20.

La cicatrizacin es un proceso de regeneracin que da como resultado una cicatriz.

Los sucesos que aqu intervienen dependen del tipo de herida, su extensin, la
naturaleza del agente vulnerante y el grado de contaminacin bacteriana 21. La
agregacin plaquetaria en el entorno de la matriz de fibrina forma un cogulo 20. Se
lleva a cabo en tres fases distintas (Figura 7) 22.

2.5. Fitoqumica
No se conocen estudios anteriores fitoqumicos realizados en Vasconcellea
candicans. Existen estudios fitoqumicos que se han realizado en otras especies del
gnero Vasconcellea como: Vasconcellea cundinamarcensis y Vasconcellea stipulata
donde sus frutos estn compuestos por: agua, carbohidratos (fructosa, glucosa y
sacarosa), minerales (calcio, fosforo y hierro), pigmentos carotenoides, cidos
orgnicos (cido ascrbico, cido mlico y cido ctrico), enzimas (papana,
quimiopapana, invertasa y peroxidasa), vitaminas y alcaloides 23. Tambin existen
estudios realizados en el ltex de Vasconcellea sp. donde se evidenci estar
compuesto por enzimas proteinasas6, 9, 16, 17.

2.6. Pomada

Figura 7. Fases del proceso de Cicatrizacin.

III. PARTE EXPERIMENTAL

3.1. Material, equipo y reactivos

3.1.1. Material e insumos qumicos
Material e instrumentos de laboratorio
Fruto verde de Vasconcellea candicans Gray
Cera de abejas
Aceite de ajonjol
Manteca de cerdo
Alcohol medicinal
Propilparabeno
Las pomadas constituyen un grupo de preparados farmacuticos muy heterogneos,
Acido benzoico
caracterizado por su consistencia semislida. Estn destinadas a ser aplicadas sobre la
piel o sobre
ciertas mucosas
con 6.5%
el fin de ejercer una accin local o de dar lugar a la
Pentobarbital
sdico
penetracin cutnea de los medicamentos que contienen. Todos los preparados de
Jeringas
1mLestn englobados como pomadas, pero a menudo se
consistencia
semislida
utilizan otras
denominaciones
ms especficas,
relacionadas
sus caractersticas
Crema
depilatoria Depil
pieles sensibles
(Aloecon
vera)
fisicoqumicas y su consistencia ms o menos blanda. Segn la Farmacopea Europea
Silica
gelcategoras
60 GF Merck
se distinguen
varias
de pomadas, como: Pomadas propiamente dichas,
cremas, geles y pastas24.
3.1.2. Reactivos
Metanol Q.P., agua destilada, etanol 96%, acetato de etilo Q.P., n-hexano
Q.P., diclorometano Q.P., cloroformo Q.P., n-butanol Q.P., ter de petrleo
Q.P., reactivos: gelatina, ninhidrina, cloruro frrico, Shinoda, Liebermann Burchard, Draguendorff, Mayer, Poppof, Biuret, yodoplatinato, vainillina,
Salkowsky, Fehling, Tollens, Shiff, 2,4 dinitrofenilhidrazina e hidroxilamina.

3.1.3. Material biolgico

Ratones albinos hembras de la especie Mus musculus y de la cepa
Balb/c/CNPB; de aproximadamente 2 meses de edad y peso entre 25 a 30 g
(Anexo 2).

3.1.4. Equipos

 Cocinilla Elctrica.
Estufa Memmert de lecho esttico.
Balanza analtica Mettler Toledo .
Equipo de ciruga local.
Lmpara UV.
Termmetro manual.
pH metro.
Aparato de tensin (Figura 8)21.

Figura 8. Aparato de Tensin

3.2. Metodologa
Estudio explicativo de diseo experimental.

3.2.1. Formaci

n de la herida:

Se utiliz el mtodo de incisin cintura escapular paralelo al eje longitudinal

del ratn; en animal previamente anestesiado.

Fundamento: es la medida de la fuerza de tensin necesaria para abrir una

herida incisa de un centmetro de largo hecha en el tercio anterior del lomo
de un ratn21.

3.3. Obtencin del ltex de la planta

3.3.1. Recoleccin e identificacin de la planta.
Se recolectaron los frutos verdes de la especie Vasconcellea candicans en el
departamento de Lima, provincia de Canta, distrito de Arahuay (2450
msnm), confirmndose su identidad con el certificado emitido por el Museo
de Historia Natural (Anexo 1).

3.3.2. Tratamiento de la planta

Se procedi a envolver los frutos en papel aluminio, bajo resguardo del sol y
luego fueron transportados al laboratorio. Se quitaron las ramas y hojas del
fruto recolectado y se procedi a lavarlos con agua, se desinfectaron con
solucin de alcohol etlico al 5% y se enjuagaron con agua destilada
dejndolos secar a temperatura ambiente. (Figura 9)

Figura 9. Fruto verde de Vasconcellea candicans desinfectados y secos.

3.3.3. Obtenci

n del l

tex fluido y l

tex seco

Una vez obtenido los frutos verdes limpios, se procedi a hacer incisiones
sobre el exocarpo de 1 a 2 mm de profundidad; se recibi el ltex en una
cpsula limpia. Se tuvo que manejar con cuidado ya que el ltex se solidifica
en menos de 5 segundos. (Figura 10)

Figura 10. Fruto de V. candicans en el que se han realizado cortes para obtener su
ltex.

El ltex debi ser procesado inmediatamente despus de su extraccin, ya que

el objetivo es preservar la actividad enzimtica. Se procedi a pesar la cpsula
con el ltex, luego se coloc en estufa Memmert de lecho esttico a 40C por
24 horas9. (Figura 11 y 12)

Figura 12. Cpsulas con ltex seco a 40C por 24 horas.

El ltex seco present un aspecto granulado amarillento y no se pegaba a las
paredes de la cpsula. Se pes la cpsula y luego se coloc en mortero para
pulverizar el ltex seco lentamente; obtenindose un polvo de color blanco a
blanco amarillento (Figura13). El ltex pulverizado se almacen en un
envase de vidrio color mbar bien cerrado a temperatura aproximadade 5C.

Figura 11. Cpsula con ltex solidificado

Figura 13. Ltex seco pulverizado

En la figura 14, se presenta un diagrama de bloques para la obtencin del
ltex seco, a partir de los frutos verdes:

Frutos verdes de
Vasconcellea candicans
Lavado y desinfeccin

Recoleccin del ltex

Secado 24h, 40C

Restos de Frutos

H2O

Desecho
Desecho

Reduccin de tamao de
partcula

Almacenamiento 5C
Figura 14. Diagrama del proceso para la obtencin de ltex seco de Vasconcellea
candicans

3.3.4. Anlisis fisicoqumico del ltex seco

a. Prueba de solubilidad
Muestra problema: Ltex seco de Vasconcellea candicans
Procedimiento: Se coloc en cada tubo de ensayo 2mg de ltex seco y
adicion 0,5 mL de solvente, se agit por 2 a 3 minutos.
Solventes utilizados: agua destilada, metanol, alcohol etlico 96,
acetato de etilo, diclorometano, n-hexano, cloroformo, n-butanol, ter de
petrleo.

b. Marcha fitoqumica (Tabla 2)

Muestra problema: Ltex seco de Vasconcellea candicans
Procedimiento: se coloc en cada tubo de ensayo 2 mg de ltex
seco y adicion 0,5 mL de metanol, se agit por 2 a 3 minutos.
Reactivo usados:

Tabla 2. Marcha fitoqu

mica

Reactivo
Gelatina
Ninhidrina
Cloruro frrico

Identificacin de :
Taninos
Aminocidos libres
Compuestos fenlicos / Taninos

Shinoda + Mg + HCl
Liebermann Burchard
Draguendorff, Mayer, Popoff,
Sonnenschein y yodoplatinato
Agua
Alfa naftol + HSO4
Salkowsky + cloroformo
Fehling y Tollens
2,4 dinitrofenilhidrazina e
hidroxilamina
Biuret
Vainillina
Schiff

Flavonoides
Esteroides
Alcaloides
Saponinas
Carbohidratos
Colesterol
Azcares reductores
Aldehdos y cetonas
Protenas
Esteroides
Aldehdos

c. Identificacin cromatogrfica
Identificacin de compuestos fenlicos
1. Muestra: Ltex seco de Vasconcellea candicans
2. Preparacin de las muestras: se utiliz 1 g de ltex seco de
Vasconcellea candicans y reconstituy con 2 mL de metanol para
la muestra A y con 2 mL de agua destilada para la muestra B.

3. Sistemas de solventes: metanol: diclorometano (1:4).

4. Soporte: Slica gel 60 GF
5. Revelador:
i. UV: Se calent la placa previamente, por 5 minutos, en
estufa a 60C, luego se observ bajo luz UV a 254 y 365 m.

ii. Tricloruro frrico: se aspers el revelador, calent por 5

minutos en estufa a 60C y se observ.

3.4. Dise

o de la Forma Farmac

utica

Para el diseo se tom como principal referencia que la forma farmacutica a

elaborar sera utilizada tpicamente como cicatrizante; por tal motivo esta debera
contar con poder de penetracin a travs de la piel, por lo que se pens en una forma
farmacutica semislida como una pomada que permitiera la fcil incorporacin del
ltex seco. Se realiz una revisin bibliogrfica acerca de formas farmacuticas que
faciliten la incorporacin de ltex seco de origen vegetal que rena caractersticas
como innovacin en el uso de excipientes, facilidad de incorporacin, extensibilidad,
aspecto, tolerabilidad a la piel humana, compatibilidad con el ltex seco y
estabilidad. Por tal motivo se consider como principal componente a la manteca de
cerdo, por ser un compuesto lipdico con alta compatibilidad con la piel humana y
por su fcil mezcla con otras grasas naturales.

Se tom como referencia la investigacin de Jurez J., en donde la siguiente base de

formulacin ofreci mejores caractersticas de estabilidad y homogeneidad:

Manteca de Cerdo 45%

Cera de abejas 20%
Aceite de ssamo 35%
Esta base posee buenas caractersticas de viscosidad y consistencia. Esta base
estudiada, fue sometida a estudios de estabilidad a largo y corto plazo concluyendo
en la necesidad de utilizacin de conservadores y antioxidantes, manteniendo un
producto con sus caractersticas fsicas y organolpticas a travs del tiempo. No
presenta reacciones de sensibilidad ni inflamacin en la piel humana. Como
conservante se utiliz propilparabeno y antioxidante cido benzoico 25.

Con esta base se prepararon cremas con buena textura y de color amarillento, y de
olor suave. Se elaboraron pomadas en concentraciones de 1, 5 y 10% de ltex seco
de Vasconcellea candicans.

La incorporaci

n del l

tex seco se facilit

debido que este contiene resinas o grasas, mostrando una buena textura,
uniformidad en la distribuci

n y facilidad de aplicaci

n o extensi

n.

3.4.1 Prueba de Tolerancia de las bases25

Se decidi someter a prueba de tolerancia a la pomada base y a la pomada
con ltex seco de Vasconcellea candicans.

a. Test Epicutneo abierto o de alergenicidad

Este tuvo como objetivo determinar la dosis que se requiere para inducir
la sensibilizacin. Para esto se tomaron 3 ratones albinos hembras (Mus
musculus), con peso promedio de 30 g cada uno, a los que se les depil
el lomo, lugar en el que se les aplic 0,1 gramos, de las bases con los
extractos vegetales, cinco veces al da durante 4 semanas. Las figuras 15
y 16, muestran la prueba en los ratones.

Figura 15. Ratn mostrando zona depilada

Figura 16. Test epicutneo en ratn de la base con el ltex seco

b. Ensayo de sensibilizaci

n e irritaci

n en humanos

La prueba se realiz en voluntarios humanos con consentimiento

informado. Trabajamos con dos grupos de 5 individuos cada uno, en
quines se seleccion una zona de la piel del antebrazo que no tuviera
vellosidad. A un grupo se le aplic la base sola y al otro la base con el
ltex seco incorporado.

Para la aplicacin del producto se delimit una zona de 2 cm 2 y se le

aplic un gramo del producto a ensayar extendindolo en la zona
delimitada. Una vez aplicado el producto, se cubri la zona con una
lmina de polietileno transparente y se dej en contacto por siete das.
Las zonas de aplicacin fueron observadas al momento de aplicar los
productos y si no se presentaba ninguna reaccin aguda se continuaba la
observacin diaria; en caso contrario se tendra que haber procedido a
dar por terminada la prueba en ese voluntario 25. Las pruebas se muestran
en las Figura 17, 18, 19 y 20.

Figura 18. Voluntarios mostrando zona con aplicacin de la base.

Figura 17. Voluntarios mostrando zona delimitada para el ensayo de

sensibilizacin.

Figura 19. Voluntario mostrando zona de aplicacin con una lmina de

polietileno.

Figura 20. Voluntarios mostrando zona con aplicacin de las

pomadas con ltex seco.

3.5. Comprobaci

n del efecto cicatrizante en el producto terminado

Modelo de experimentacin: Incisin cintura escapular paralelo al eje longitudinal

del ratn, en animal previamente anestesiado 21.

Fundamento: es la medida de la fuerza de tensin necesaria para abrir una herida

incisa de un centmetro de largo hecha en el tercio anterior del lomo de un ratn.

Muestra problema: Pomada de ltex seco de Vasconcellea candicans al 1, 5 y 10%.

Animales de experimentacin: 35 especmenes de Mus musculus (ratn albino)

divididos en 5 grupos: grupo placebo, control, concentracin 1, 5 y 10%. La muestra
est constituida por animales de la cepa Balb/c/CNPB; hembras de
aproximadamente 2 meses de edad y peso entre 25 a 30 g.

Preparacin de muestras
a. Formulacin: Pomada de ltex seco de Vasconcellea candicans al 1, 5 y 10%.
b. Placebo de formulacin: Base de pomada.
Procedimiento21:
a. Se depil el lomo de los ratones en un rea aproximada de dos centmetros
cuadrados 24 horas antes del test con el fin de descartar una reaccin alrgica con la
crema depilatoria. (Figura 21)

Figura 21. Ratn con lomo depilado.

b. Se conserv a los animales con agua y comida ad libitum.
c. Se coloc a los ratones en jaulas individuales y se pesaron (Figura 22).

Figura 22. Ratones depilados en jaulas individuales.

d. Se anestesiaron los animales con pentobarbital sdico con una dosis de 50 mg/kg
de peso.

e. Se desinfect el rea depilada y realiz una incisin de 1 cm de largo en el tercio

anterior del lomo y perpendicular al eje longitudinal del ratn.

f. Se afrontaron los bordes dela herida con un punto de sutura (Figura 23) en la parte
central de la incisin.

Figura 23. Punto de sutura en lomo de ratn.

g. Se administr en forma tpica (Figura 24) la primera dosis del tratamiento (0,1 g
aprox.), repitindose cada 12 horas, hasta el trmino del periodo de aplicacin (4
aplicaciones).

Figura 24. Aplicacin tpica de pomada con ltex seco de

Vasconcellea candicans en lomo de ratn.

h. Pasadas 48 horas, se sacrific al ratn con una sobredosis de pentobarbital sdico.

i. Inmediatamente despus de la muerte del ratn se retir el punto de sutura (Figura
25).

Figura 25. Herida cicatrizada en lomo de ratn.

j. Se hizo una argolla con seda negra a 0,5 cm de los bordes de la herida con el fin de
pasar una aguja por ella a fin de ejercer la tensin necesaria para abrir la herida.

k. Se coloc al animal en posicin cubito ventral sobre el aparato de tensin. (Figura

26)

Figura 26. Ratn con dos argollas de hilo seda negra en aparato de
tensin.
l. Se dej caer el lquido al vaso de plstico del equipo y anot el nivel en que la
herida se abri. (Figura 27)

Figura 27. Ratn en aparato de tensin.

m. El valor anotado corresponde a los mililitros de agua utilizados, este dato se

considera como peso no como volumen, haciendo la equivalencia de : 1 mL = 1
gramo, al estar ejerciendo tensin se considera como fuerza, es decir
1 ml agua = 1 gramo fuerza.
n. Se realizaron los clculos de la fuerza de tensin de acuerdo a la frmula de % de
actividad cicatrizante y el anlisis estadstico respectivo.
o. El clculo de la actividad cicatrizante se determin mediante la siguiente frmula:

% Actividad cicatrizante = [ (WbSt WbSc) / WbSc ] x 100

Donde:
WbSc = Fuerza promedio para abrir la herida del grupo control tratado (Control)
WbSt= Fuerza promedio para abrir la herida del grupo tratado

3.5.1. Determinaci

n de la actividad cicatrizante

21

a. Para la determinacin de la actividad cicatrizante se utilizaron 43 ratones en

total.
b. Inicialmente se dividieron en 5 grupos de 7 ratones cada uno.
c. Durante los ensayos de determinacin de la actividad cicatrizante hubieron
algunos errores los cuales nos obligaron a disminuir el nmero de datos en
algunos grupos. As fue que luego de concluir con el ensayo para la
determinacin de la actividad cicatrizante se tenan grupos con menos de 7
datos. Por esta razn, se decidi aumentar el nmero de datos en los grupos,
realizando un nuevo ensayo para aumentar el nmero de datos en aquellos
grupos que tenan menos de 6 datos.

De acuerdo a lo anterior se tienen los siguientes grupos:

Grupo I: Control (cicatrizacin normal)
Sustancia aplicada: ninguna
Nmero de animales evaluados: 7
Nmero de datos obtenidos: 7
Grupo II: Placebo
Sustancia aplicada: Pomada base
Nmero de animales evaluados: 7
Nmero de datos obtenidos: 6
Grupo III: Pomada 1%
Sustancia aplicada: Pomada con ltex seco de Vasconcellea
candicans al 1%
Nmero de animales evaluados: 10
Nmero de datos obtenidos: 7

Grupo IV: Pomada 5%

IV. RESULTADOS
Sustancia aplicada: Pomada con ltex seco de Vasconcellea
candicans al 5%
4.1. Taxonoma
Se confirm
Nmero
la de
identidad
animales
deevaluados:
Vasconcellea
9 candicans por el Museo de Historia
Natural de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos (Anexo 1):
Nmero de datos obtenidos: 7
Divisin:
Grupo
Magnoliophyta
V: Pomada10%
Clase:Sustancia
Magnoliopsida
aplicada: Pomada con ltex seco de Vasconcellea
Orden:
candicans
Violales al 10%
Familia:
Nmero
Caricaceae
de animales evaluados: 10
Nmero
de datos obtenidos: 6
Gnero:
Vasconcellea
Especie: Vasconcellea candicans (A. Gray) A. DC
Sin (=Todos
Carica
loscandicans
grupos fueron
A. Gray)
evaluados segn el procedimiento descrito para la
determinacin de la actividad cicatrizante 3.5.
Esta especie tambin es conocida por los siguientes nombres vulgares:mito,
papaya silvestre, odeque13, uliucana, jerju10, chungay, toronche y
chicote9.

4.2. Obtencin del ltex fluido y ltex seco

Tabla 3. Cantidad de producto y ltex recolectado.
Muestra de Vasconcellea Peso
Apariencia
candicans
Fruto Verde
3,12 Kg
Frutos verdes de forma
elptica.
Ltex recolectado
14,109 g
Blanco mate brilloso
Ltex seco

5,528 g

Rendimiento del ltex seco: 0.18%

Amarillo a amarillo
anaranjado.

4.3 An

lisis fisicoqu

mico del l

tex seco de

Vasconcellea candicans

Tabla 4. Prueba de solubilidad

Solventes
Calificacin
Agua destilada
+++
Metanol
++++
Alcohol etlico 96
++
Acetato de etilo
+
Diclorometano
N-hexano
Cloroformo
N-butanol
ter de petrleo
Tabla 5. Marcha fitoqumica
Compuesto
Reactivo
Taninos
Gelatina
Aminocidos libres
Ninhidrina

Resultado
Soluble
Muy soluble
Poco soluble
Muy poco soluble
Insoluble
Insoluble
Insoluble
Insoluble
Insoluble

Resultado
Ninguno
Coloracin prpura
intenso
Compuestos fenlicos Cloruro frrico
Coloracin rojiza
Flavonoides
Shinoda + Mg + HCl Ninguno
Esteroides
Liebermann
Coloracin naranja
Burchard
rojizo
Alcaloides
Draguendorff
Precipitado naranja
blancuzco
Alcaloides
Mayer
Precipitado blanco
Alcaloides
Popoff
Precipitado amarillo
Alcaloides
Sonnenschein
Ninguno
Alcaloides
Yodoplatinato
Ninguno
Saponinas
Agua
Burbujas
Carbohidratos
Alfa naftol + HSO4
Anillo morado rojizo
Colesterol
Salkowsky +
Coloracin rojiza
cloroformo
Azcares reductores Fehling
Verde rojizo
Azcares reductores Tollens
Espejo de plata
Aldehdos y cetonas 2,4
Precipitado amarillo
dinitrofenilhidrazina
Aldehdos y cetonas Hidroxilamina
Precipitado blanco
Protenas
Biuret
Coloracin morada
Vainillina
Esteroides
Ninguno
Aldehdos
Schiff
Coloracin morada

Calificacin
++++
++++
+
+
+
+
++
++
++
++
++
+
+
+++
++

Tabla 6. Identificaci

n cromatogr

fica de compuestos fen

licos

Mtodo
Fase mvil
Soporte
Revelador

Cromatografa de capa fina

Metanol: Diclorometano (1:4)
Silica gel 60 GF
Luz UV y tricloruro frrico

4.4. Diseo y elaboracin de la forma farmacutica

Forma farmacutica de uso tpico: Pomada
Nmero de formulaciones: 4
Tipos (concentraciones): Placebo, 1 (A), 5 (B) y 10 (C) %.
Volumen: 20 g

Tabla 7. Formulaciones cuali- cuantitativas

Concentracin

Placebo

Componentes

Total

Ltex seco de Pomada base* cido

Vasconcellea
benzoico
candicans
19.58 g
0,4 g

Apariencia
Propilparabeno
0,02 g

20 g

Pomada blanca
a blanca
amarillenta
griscea
homognea de
consistencia
pastosa, olor
tpico.
A
0,2 g
19.38 g
0,4 g
0,02 g
20 g
Pomada
amarillenta
anaranjada
homognea de
consistencia
pastosa, olor
tpico.
B
1g
18.58 g
0,4 g
0,02 g
20 g
Pomada
anaranjada
ligeramente
marrn
*Pomada base compuesto por: Manteca de Cerdo (45%) + Cera de abejas (20%) + Aceite de ssamo
homognea de
(35%)
consistencia
pastosa, olor
tpico.
C
2g
17.58 g
0,4 g
0,02 g
20 g
Pomada

Elaboraci

n de las Pomadas

Se fundi la cera de abejas en una

cpsula a 65 C.

Se incorpor la manteca de cerdo y

luego el aceite de ajonjol a 32 C.
Se mezcl bien

Se incorpor el ltex seco, cido

benzoico y propilparabeno.
Se homogeniz

Pomada de ltex seco de Vasconcellea

candicans.

Figura 28. Diagrama del proceso de elaboracin de las pomadas

El pH de todas estas pomadas estuvo en el rango de: 5,8 6,1.
Empaque primario: Envase de polietileno de alta densidad de 45 mL de capacidad.

4.4.1. Prueba de tolerancia de las bases

a. Test epicutneo abierto o de alergenicidad

(a) y (b)

Figura 29: a y b. Resultado del test epicutneo en ratones con

pomadas con ltex seco de Vasconcellea candicans.

b. Ensayo de sensibilizacin e irritacin en humanos

Los resultados de este ensayo permitieron establecer que las

formulaciones con ltex seco de Vasconcellea candicans, no producan
reacciones de sensibilizacin (Figura 29: a y b)

Los resultados observados, de esta prueba en voluntarios sanos,

permitieron establecer que tanto la base sola, como la que contiene ltex
seco de Vasconcellea candicans no producan reacciones de
sensibilizacin (Figura 30: c y d)

(c) y (d)
Figura 30: c y d. Voluntarios mostrando los resultados del ensayo de sensibilizacin e
irritacin en humanos, para la pomada base y base con ltex seco, respectivamente.

4.5 Determinaci

n de la actividad cicatrizante

Tabla 8. Determinacin de la actividad cicatrizante

Nro. de animal

1
2
3
4
5
6
7
Promedio
SD =

Grupo I
15,1 mL
16,5 mL
17,2 mL
23 mL
13,2 mL
21,8 mL
18,6 mL
17,9 mL
3,51

Fuerza de tensin ejercida (mL de

agua)
Grupo II
24,5 mL
19,2 mL
16,4 mL
27,8 mL
23,2 mL
20,5 mL
21,93 mL
4,06

Grupo III
38,2 mL
26,5 mL
34,3 mL
27,2 mL
34,8 mL
24,5 mL
36,2 mL
31,67 mL
5,44

Grupo IV
39,6 mL
49,5 mL
35,5 mL
44,8 mL
37,6 mL
51,7 mL
42,8 mL
43,07 mL
6,02

Grupo V
44,6 mL
29,8 mL
37,7 mL
41,2 mL
27,5 mL
35,8 mL
36,1 mL
6,55

4.6. Clculo de la actividad cicatrizante (%).

Tabla 9. Comparacin de la actividad cicatrizante de la pomada con ltex seco en
relacin al grupo control
Sustancia aplicada

Actividad cicatrizante %

Placebo (Pomada base)

Pomada con ltex seco al 1%
Pomada con ltex seco al 5%
Pomada con ltex seco al 10%

22.51
76.93
140.61
101.68

Tabla 10. Comparacin de la actividad cicatrizante de la pomada con ltex seco en

relacin al grupo placebo (pomada base).
Sustancia aplicada

Actividad cicatrizante %

Pomada con ltex seco al 1%

Pomada con ltex seco al 5%
Pomada con ltex seco al 10%

44.41
96.39
64.61

4.7. An

lisis estad

stico

Tabla 11. Niveles medios y dispersin de la fuerza de tensin ejercida en los ensayos
de determinacin de la actividad cicatrizante de las pomadas con ltex seco.

Control

Pomada base

10

Media

17,9

21,93

31,67

43,07

36,1

DS

3,51

4,06

5,44

6,02

6,55

ES

1,33

1,66

2,06

2,28

2,67

CV

19,61

18,51

17,18

13,97

18,14

Dnde:
n = Nmero de datos
Media
cicatrizante

= Promedio de las fuerzas de tensin en la determinacin del efecto

DS = Desviacin estndar
ES = Error estndar
CV = Coeficiente de variacin
A juzgar por el coeficiente de variacin, la dispersin de los datos estn entre 13,97%
(Pomada al 5%) a 19,61 (Grupo control), lo cual indica confiabilidad de las
observaciones, a pesar del tamao reducido de los grupos.

Tabla 12. Anlisis de varianza para contrastar las medias de fuerza obtenidas en los
ensayos de determinacin de la actividad cicatrizante con las pomadas con ltex
seco.
Fuente de
variacin

Suma de
cuadrados

Grados de
libertad

Cuadrado
medio

Entre grupos 2852,83

713,21

26,02

< 0,001

Dentro de
grupos
Total

767,55

28

27,41

3620,38

32

El an

lisis de varianza muestra diferencias altamente significativas (p<0,001) entre las medias
de fuerza del uso de las pomadas.

Tabla 13. Comparacin de medias de fuerza de tensin para los grupos de

pomadas de ltex seco frente al grupo control: Prueba de Dunnet.
Pomada (%)

Diferencias

DMSD

Pomada base
1
5
10

4,03
13,77
25,17
18,2

7,5
7,25
7,25
7,5

La nica diferencia no significativa esta entre la pomada base y el grupo control, las
dems diferencias s son significativas.

Tabla 14. Anlisis de varianza para contrastar las medias de fuerza entre la
base de la pomada y las pomadas con ltex seco.
Fuente de
variacin
Entre grupos
Dentro de
grupos
Total

Suma de
cuadrados
1792,08
693,46

Grados de
libertad
3
22

Cuadrado
medio
597,36
31,52

2485,54

25

18,95
-

< 0,001
-

Este anlisis demuestra que hay diferencias altamente significativas entre las medias de
los 4 grupos considerados.

Tabla 15. Comparacin de medias de fuerza de tensin para los grupos de

pomadas con ltex seco frente a la pomada base: Prueba de Dunnet.

Pomada (%)

Diferencias

DMSD

1
5
10

9,74
21,14
14,17

7,9
7,9
8,16

V. DISCUSION

El ltex del gnero Vasconcellea sp. ha sido usado como cicatrizante en la medicina
tradicional como tambin otros ltex de diversas plantas 26, 27. Tambin, existe
informacin que el jugo del Vasconcellea candicans es utilizado en el tratamiento local
de la uta19, 23, 28-30.

En Caricaceae, el sangrado de ltex sigue a un proceso de injuria en la fruta hasta que se

forma un cogulo alrededor de la zona de la herida. Este fenmeno se asemeja a la
coagulacin sangunea y la formacin de cogulos durante heridas en mamferos. Hemos
propuesto que estos dos fenmenos tienen similitudes y que las proteasas de ltex pueden
jugar un papel similar al de los factores de coagulacin de la sangre, dotados con
actividad proteoltica. Con base a este supuesto, es posible que los metabolitos de la
planta que van a intervenir en el proceso de curacin garanticen la formacin de
cogulos en mamferos. Esto est respaldado por los estudios en los que se menciona el
uso del fruto de Caricaceae para el tratamiento de quemaduras o lceras en la piel 16.

El ltex de Caricaceae contiene enzimas proteolticas, localizados en la fruta, algunas de

estas protenas presentan propiedades proliferativas cuando se probaron en clulas de
mamferos, lo que sugiere un papel en la reconstruccin del tejido herido 16. En el trabajo
de investigacin de Salas C., se muestra evidencia del papel farmacolgico de proteinasas
de plantas en la cicatrizacin de heridas de mamferos, inmunomodulacin, trastornos
digestivos y las alteraciones neoplsicas 17.

V. cundinamarcencis es una especie de la familia Caricaceae cuya fruta inmadura

contiene ltex con grandes cantidades de cistena proteinasas, que ha demostrado
mejorar la cicatrizacin de las heridas de la piel y acelerar la curacin de lcera gstrica
inducido qumicamente18.

Como
parte todas
del desarrollo
de la parte
activa, sea procedi
obtener
el son
ltexsignificativas.
seco de
Igualmente
las diferencias
con respecto
la base dea la
pomada
Vasconcellea candicans obtenindose un rendimiento de 0,18% (Tabla 3) con

respecto al fruto verde, cantidad similar con el rendimiento de obtenci

n de l

tex seco de

V. stipulata

de 0,2%, especie del mismo g

nero

31

. El l

tex en forma de polvo se conserva adecuadamente, aumenta su vida

til y facilita su manipulaci

n y almacenaje, con respecto al producto fresco. La t

cnica usada para el secado en estufa a 40

C por 24 horas nos garantiz

una mejor preservaci

n de la actividad espec

fica del l

tex

Cabe mencionar que, no existen trabajos de investigacin de solubilidad y anlisis

fitoquimico del ltex seco del gnero Vasconcellea, ms si trabajos de investigacin sobre
la actividad proteica del ltex del mismo gnero 9, 11, 31. De acuerdo a estas
investigaciones, el ltex seco es soluble en agua y posee enzimas proteolticas,
coincidiendo as con nuestra prueba de solubilidad al dar positivo en solventes polares
(tabla 4) y los compuestos encontrados en la marcha fitoqumica (tabla 5).

La solubilidad del ltex seco (Tabla 4) de Vasconcellea candicans nos permite confirmar
las caractersticas propias de estos compuestos y as poderlos identificar. En los ensayos
de solubilidad se comprob la naturaleza polar de los componentes presentes en el ltex
seco, siendo la solubilidad de ste superior en metanol y agua, y en menor grado en
Alcohol etlico 96.

En la marcha fitoqumica (Tabla 5) se comprob la presencia de aminocidos libres,

compuestos fenlicos y protenas. En menor proporcin se identific a saponinas,
carbohidratos, colesterol, azcares reductores y compuestos con grupos aldehdos.

Sobre los dems compuestos encontrados en la marcha fitoqumica, se puede relacionar a

que son componentes comunes en ltex de diversas plantas 21, 32, 33. Adems, los
compuestos fenlicos y alcaloides se conoce que poseen actividad cicatrizante en otras
especies vegetales21, 34.

De otro lado, se confirm la presencia de compuestos fenlicos mediante la identificacin

cromatogrfica (Tabla 6), luego de probar la fase mvil recomendada de metanol:
diclorometano (1:4).

Luego de caracterizar el l

tex seco de

Vasconcellea candicans

, se procedi

a la elaboraci

n de una forma farmac

utica tipo pomada, tomando en cuenta que el l

tex seco se pueda incorporar f

cilmente a la base, se aplique con facilidad en la piel del paciente, posea estabilidad
conocida, extensibilidad y tolerancia con la piel humana. Realizando una b

squeda bibliogr

fica se tom

como principal excipiente de la base a la manteca de cerdo, compuesto lip

dico con alta compatibilidad con la piel humana y de f

cil mezcla con otras grasas naturales

25

. Se logr

una buena incorporaci

n del l

tex seco dando una pomada de aspecto homog

neo. Se mantuvo la proporci

n de excipientes en la Pomada base usado en la investigaci

n de Ju

rez J.: manteca de cerdo (45%); cera de abejas (20%) y aceite de ajonjol

(35%), (Tabla 7). Como se puede visualizar en las diferentes formulaciones, se

elaboraron cuatro pomadas donde se incorporaron el

cido benzoico como antioxidante, para evitar el enranciamiento de la manteca, el

propilparabeno como conservante en concentraciones conocidas

25

y el l

tex seco.

Debido a que no existen trabajos de investigacin sobre actividad cicatrizantes de ltex

seco del gnero Vasconcellea, la eleccin de las concentraciones de las pomadas usadas
en este estudio, fueron al 1, 5 y 10%, en orden de tomar un rango amplio y asegurar una
actividad cicatrizante mxima dentro de este. La eleccin de este rango se vio
influenciada al revisar investigaciones de actividad cicatrizantes de diferentes plantas,
entre stas el trabajo de sangre de drago de Lpez L 21. El proceso de elaboracin de la
pomada (Figura 28) fue establecida en base a la caracterstica lipoflica de la mayora de
excipientes de las formulaciones y teniendo en cuenta su punto de fusin. La prueba de
pH de la pomada fue conforme a lo esperado para una forma farmacutica de uso tpico,
ya que debe ser neutro o dbilmente acido 35.

En la prueba tolerancia de las bases, tanto la pomada base y las que contienen ltex seco,
usadas en este estudio, no presentaron reacciones de alergenicidad, sensibilidad ni
inflamacin tanto en ratones como en humanos respectivamente (Figura 29: a y b).

Finalmente, se comprob la actividad cicatrizante en el producto final empleando el

mtodo de la incisin de la cintura escapular paralelo al eje longitudinal del ratn en

animal previamente anestesiado. Se trabaj

con las pomadas conteniendo las diferentes concentraciones de l

tex, compar

ndolas con un grupo control y un grupo placebo (pomada base), demostrando que poseen
actividad cicatrizante las pomadas con l

tex seco, mas no la pomada base; comprob

ndose que existe una diferencia significativa (Tabla 12 al 15) en la actividad cicatrizante
de los tres grupos de pomadas con l

tex al administrarse por 48 horas. En nuestro estudio la dosis efectiva media o de mayor
efecto cicatrizante fue en la pomada al 5% de l

tex seco, pues al incrementar la concentraci

n al 10% no se observ

un efecto dosis dependiente (Tabla 9 al 10).

VI. CONCLUSIONES

1. Las pomadas con ltex seco de Vasconcellea candicans poseen actividad

cicatrizante.

2. La forma farmacutica diseada como pomada conteniendo el ltex seco de

Vasconcellea candicans al 5%, presenta efecto cicatrizante mayor al efecto observado
con respecto a las dems concentraciones de al 1 y 10%.

3. La forma farmacutica de pomada diseada, de aplicacin tpica con actividad

Del cicatrizante
anlisis estadstico
se puede
rescatar que como
los coeficientes
de variacin
hallados en las
incorpora
satisfactoriamente
activo al ltex
seco de Vasconcellea
pomadas,
indican que los datos obtenidos son confiables, teniendo como mximo un
candicans.
coeficiente de variacin mediano de 19,61%, lo cual puede explicarse por el tamao
reducido de los grupos y del variado nmero de datos que se tiene para cada grupo (Tabla
11).
4. La pomada base y la pomada con diferentes concentraciones de ltex seco de
Vasconcellea candicans poseen tolerabilidad a la piel humana.

Los anlisis de varianza realizados indican que s existe una diferencia significativa entre
grupos por dosis y respecto al grupo control reflejado en las fuerzas de tensin obtenidas
y en los porcentajes de actividad cicatrizante hallados respecto al control. (Tabla 12 y 14).
La prueba de Dunnet comprueba las diferencias de todos los grupos respecto al control y
a la vez se verifica que la pomada base no ejerce efecto cicatrizante al no existir una
diferencia significativa respecto al control (Cuadro 13 y 15).

VII. RECOMENDACIONES

1. Continuar con los estudios de la especie para determinar las estructuras de los
activos responsables de la actividad cicatrizante del ltex seco.

2. Realizar estudios de estabilidad a largo plazo de las formulaciones con ltex seco
de Vasconcellea candicans acorde a los parmetros de la Directiva de Estabilidades
vigentes de nuestra Autoridad Sanitaria.

3. Emplear la formulacin diseada, para estudios clnicos posteriores, a fin de

determinar su utilidad en la cicatrizacin de heridas en humanos.

4. Realizar la caracterizacin de las enzimas proteolticas contenidas en el ltex seco

de Vasconcellea candicans.

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Anexos