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DOCENTE
SOLEDAD LLAEZ BUSTAMANTE
INTRODUCCIN
Las enzimas son protenas biocatalizadoras, sensibles de modificar su actividad por la alteracin
de las condiciones de su medio de accin ya que actan solo bajo condiciones definidas de pH,
temperatura, concentracin de sustratos, cofactores, etc. Sobre los cofactores hay que recordar
que las enzimas para su actividad requieren de sustancias no proteicas que pueden ser de
naturaleza orgnica (coenzimas) o inorgnicas (minerales) los que cumplen funciones especficas
como la de coordinar entre el centro activo de la enzima con el sustrato antes de la
transformacin de este a producto. Hay medicamentos que actan como competidores de las
vitaminas las que son coenzimas y por tanto bloquean la accin de las enzimas a lo que es ms
inhiben la sntesis de las enzimas especficos, por ejemplo el Metrotexato (MTX), empleado para
el tratamiento de la leucemia y artritis reumatoide que libera al folato de la enzima hidrofolato
reductasa.
OBJETIVOS
Demostrar el efecto de los factores: Concentracin de sustrato, concentracin de enzima, pH y
temperatura sobre la actividad enzimtica de la Amilasa salival sobre el almidn.
MATERIALES Y REACTIVOS
PIPETA
BALANZA
GRADILLA
MATERIALES:
REACTIVOS:
-
Solucin de almidn al 1%
Enzima: Solucin de alfa amilasa salival dializada 1%
Solucin buffer fosfato 0.1M a pH 4.6, 6.8 y 9.0
Solucin Yodo yodurada (Lugol)
Solucin cloruro de sodio 0.2%
TERMMETRO
VARILLA
COCINA
PISETA
FIOLA
POTENCIMETRO DE pH
VASO PRECIPITADO
TUBO DE
ENSAYO
PROCEDIMIENTO
REACTIVO
SOL. ALMIDN 1%
BUFFER pH 4.6
1
-
1
-
1
-
1
5
1
-
1.5
-
1
-
1
-
1
-
BUFFER pH 6.8
BUFFER pH 9.0
SOL. NaCl
AGUA DESTILADA
5
1.4
2.6
5
1.4
2.0
5
1.4
2.0
1.4
2.0
5
1.4
2.4
5
1.4
1.5
5
3.4
5
1.4
2.0
5
1.4
2.0
1
0.0
2
0.6
3
0.6
4
0.6
5
0.2
6
0.6
7
0.6
8
0.6
9
0.6
MEZCLAR BIEN CADA TUBO SIN RETIRARLO DEL MEDIO EN QUE SE ENCUENTRAN
Continuar la incubacin, considerando un control de 20 minutos, desde el momento que
el preparado enzimtico fue agregado a cada tubo.
Cumplido el tiempo exacto de 20 minutos, medir 0.5ml de cada tubo y aadir a la
BATERA N2 tal como se indica en la siguiente tabla.
B. BATERA N2
TUBO
REACTIVO
SOL. HCl 0.5N (ml)
SOL. LUGOL (ml)
INCUBADO (ml)
2.5
5.0
0.5
2.5
5.0
0.5
2.5
5.0
0.5
2.5
5.0
0.5
2.5
5.0
0.5
2.5
5.0
0.5
2.5
5.0
0.5
2.5
5.0
0.5
2.5
5.0
0.5
MEZCLAR Y OBSERVAR
RESULTADOS E INTERPRETACION:
CONCLUSIN
CUESTIONARIO