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Prctica N
CROMATOGRAFA
DOCENTE
Q.F. Carmen Fernndez Arroyo
INTRODUCCIN
El botnico Mickhail Tsweet (1872-1919) tambin conocido por su nombre latinizado,
Tiselius, emple por primera vez el trmino Cromatografa (del griego chroma y
graphein que significan respectivamente coloe y escribir).
La Cromatografa es una tcnica de separacin extraordinariamente verstil, que se
aplica para la separacin, deteccin y cuantificacin de una amplia variedad de
sustancias coloreadas e incoloras como gases, iones orgnicos, aminocidos, azcares,
lpidos, drogas, esteroides, protenas, polisacridos y otros.
La Cromatografa se basa en el fraccionamiento de una muestra entre una fase mvil
que puede ser un lquido o un gas y una fase estacionaria que puede ser un lquido o
un slido. Fase mvil + fase estacionaria + muestra= sistema cromatogrfico.
El mtodo consiste en depositar la muestra a analizar o separar, en un lugar de la fase
estacionaria (siembra o punteo), la fase estacionaria con la muestra se introduce en la
fase mvil y los componentes de la muestra se distribuyen entre la fase estacionaria y
la mvil.
Luego que las sustancias han sido separadas sobre la fase estacionaria, estas pueden
ser detectadas o visualizadas mediante reveladores, constituyendo el cromatograma.
OBJETIVOS
Identificar los colores de la clorofila y de los aminocidos, en este caso a travs de
un revelador.
MARCO TERICO
Tipos de cromatografa
Segn el fenmeno fsico y segn el estado fsico de las fases que intervienen:
a) Cromatografa de ADSORCION: cuando la fase estacionaria es un slido y la
separacin o desplazamiento de las sustancias depende del equilibrio de
adsorcin- desorcin. Para que dos o ms sustancias de una mezcla se separen por
cromatografa intervienen varios factores: estructura qumica, solubilidad en el
solvente, etc.
b) Cromatografa de PARTICIN: si es un lquido que se encuentra soportado en un
slido inerte, se trata de la cromatografa de particin. El soluto se reparte entra en
la fase mvil (lquido o gas) y la fase estacionaria.
c) Cromatografa de INTERCAMBIOS IONICOS: Se lleva a cabo con capas delgadas de
columnas rellenas de resinas. Esta tcnica depende del intercambio de iones entre
la fase mvil y los iones de la fase estacionaria. La fase estacionaria es un slido
insoluble el cual puede intercambiar irreversiblemente cationes y aniones con una
solucin. Una mezcla de iones es sorbida en la fase estacionaria y desarrollada con
una fase mvil inica, los iones son atrados mediante fuerzas electrostticas.
Tcnicas de Cromatografa
a) Cromatografa plana: la fase estacionaria se sita sobre una placa plana o sobre
un papel. Las principales caractersticas son:
Cromatografa en papel
Cromatografa en capa fina
b) Cromatografa en columna: la fase estacionaria se situa dentro de una columna.
Segn el fluido empleado como fase mvil se distinguen:
Cromatografa de lquidos
Cromatografa de gases
Cromatografa de fluidos superespecficos
I. CROMATOGRAFA DE PARTICIN O REPARTO SOBRE PAPEL
Cromatografa en papel: el papel acta como soporte de la fase estacionaria,
cromatografa de particin.
El procedimiento, consiste en colocar una gota de solucin de mezcla a separar cerca
del borde inferior de una hoja o tira de papel filtro.
El papel se introduce entonces en una cmara hermtica cuya atmsfera est saturada
de disolvente y agua.
El papel puede disponerse en la mezcla sumergido en la mezcla disolvente, de forma
que el frente de la misma lo atraviesa hacia arriba (tecnica ascendente), o bien de
modo que el disolvente, cuyo recipiente est, en este caso, en la parte superior de la
cmara, recorre hacia abajo el papel (tcnica descendente).
A medida que el disolvente se desplaza, los componentes tambin recorren el papel
con velocidades variables, que dependen principalmente de las diferencias de sus
coeficientes de reparto entre las fases: acuosa (capa de hidratacin de las fibras de la
celulosa) y orgnica. Tras desecacin de las tiras de papel de filtro, las posiciones de los
componentes separados pueden averiguarse mediante el uso de reveladores
apropiados.
Determinacin de Rf:
La relacin entre la distancia recorrida sobre el papel por un componente de la
solucin problema y la distancia recorrida por el disolvente se designa Rf, factor de
retencin (Rf) llamado tambin relacin de frentes, el cual es caracterstico de cada
componente especfico.
Los disolventes q dan resultados ms satisfactorios son los parcialmente miscibles en
el agua, como el fenol, n-butanol y alcohol amlico.
MATERIALES Y REACTIVOS
PARTE EXPERIMENTAL
CLOROFILA
AMINOCIDOS
Preparamos
la
muestra
problema
que
es
la
metioninda y glicina; y la
muestra patrn que es la
metionina, glicina y lisina.
Otra muestra problema es la
glicina y lisina.