NOTIUNI DE ECOTOXICOLOGIE

SI
TEHNICI DE ECOTOXOCOLOGIE APLICATA

INTRODUCERE
Substantele toxice din mediu
Atunci cand eliberam substante toxice in mediu, nu numai organismul uman
are de suferit. In primul rand, avem de a face cu un fenomen foarte raspandit
cresterea concentratiilor anumitor toxice in lanturile trofice, care nu numai ca pune
in pericol viata animalelor, dar poate avea efect daunator si asupra organismelor
umane care consuma carnea acestor animale ce contin in organismul lor substantele
toxice intr-o concentratie foarte mare.
Vom prezenta deci notiuni despre modul in care organismele vegetale
si cele animale raspund toxinelor, si vom lua in discutie si un domeniu relativ nou al
stiintei, ecotoxicologia, care ne va ajuta sa intelegem mai bine aceste raspunsuri.

A. Modul de crestere al concentratiilor substantelor toxice in corpurile

animalelor
Daca un animal consuma in fiecare zi hrana ce contine o substanta
toxica, in anumite circumstante, acea substanta, in urma asimilarii ei, va ajunge sa
aiba o concentratie mult mai mare in corpul animalului decat avea in hrana. Acest
fenomen, numit bioconcentrare, poate duce la niveluri periculoase de substante
toxice in hrana. Sub ce circumstante va avea loc bioconcentrarea si cat de grava este
aceasta problema ?
Un animal creste asimiland in testuri noi hrana pe care o consuma. Chiar
si un animal care nu creste in marime va folosi o parte din hrana sa pentru a inlocui
tesuturile imbatranite. In general, numai o mica parte (10% din hrana consumata de
un organism animal) este retinuta in acest scop, restul fiind folosit ca substanta

energetica sau este excretata. Daca substanta toxica din hrana este retinuta intr-o
cantitate mai mare decat hrana insasi, atunci concentratia substantei toxice din corpul
animalului va creste treptat.
Unele substante toxice sunt usor excretate de animal, iar in aceste cazuri
nu va mai avea loc o bioconcentrare. De obicei substantele bioconcentreaza atunci
cand sunt stocate in anumite organe si tesuturi ale corpului. Spre exemplu, DDT-ul
bioconcentreaza pentru ca este stocat in tesuturile adipoase. Desi in organism este
retinuta numai o mica parte din hrana consumata de catre animale, o mare parte din
DDT-ul ingerat este asimilat, crescand astfel treptat si concentratia DDT-ului din
corpul animal.
Tendinta substantei toxice de a fi retinuta intr-o parte a corpului este de
obicei o proprietate a substantei, dar exista si anumite caracteristici ale animalului
care determina gradul de bioconcentrare. Cu cat este un animal mai ineficient in a-si
asimila hrana in tesuturi noi, cu atat el trebuie sa se hraneasca mai mult pentru a
creste. Daca deopotriva, un animal eficient si unul ineficient consuma aceeasi hrana
ce contine acelasi nivel de toxicitate, la fiecare kilogram cu care se va ingrasa,
animalul ineficient va ingera mai multa substanta toxica. Daca ambele animale
asimileaza in mod egal substanta toxica, cel ineficient va avea o concentratie mai
mare in corp.
Presupunand ca un animal in care au avut loc procese de bioconcentrare
a substantelor toxice devine el insusi hrana pentru un alt animal, atunci concentratia
toxicitatii din corpul celui de-al doilea animal poate ajunge la un nivel mult mai
ridicat urmand acelasi proces. In corpul celui de-al treilea animal consumandu-l pe
cel de-al doilea pot avea loc si mai multe procese de bioconcentrare, si asa mai
departe. Un astfel de segment de animale organizate in functie de animalele cu care
se hranesc se numeste lant trofic.
Cu cat se afla mai spre sfarsitul lantului trofic, cu atat mai mult este mai probabil ca
un animal sa aibe in tesuturi substante toxice la un nivel foarte ridicat.

La baza fiecarui lant trofic se afla plantele, care isi iau nutrientii din aer,
din ingrasamintele aflate in solul sau apa in care ele traiesc. Cantitatea de substanta
toxica ce va circula in lantul trofic va fi determinata in mare parte in functie de cat de
mult din aceasta substanta se afla in sol sau apa, de aici urmand sa inceapa procesul
de bioconcentrare. Cu cat este mai mare concentratia substantelor toxice in sol si apa,
cu atat mai mult ele vor fi preluate in cantitati mai mari de catre plante si transmise
mai departe animalelor erbivore, si celor carnivore.
In natura exista multe exemple de bioconcentrari. Cazul DDT-ului este
unul foarte bine cunoscut. In SUA, in 1960, s-a constatat ca vulturii golasi, pelicanii
albi, ulii peregrini si alte pasari rapitoare care consumau cantitati substantiale de
peste erau pe cale de disparitie. Acest lucru se datora faptului ca pasarile nu se mai
puteau inmulti din cauza concentratiei in exces de DDT din tesuturi. Aceste pasari nu
se hraneau de la fermele unde era folosit DDT-ul, ci ele se aflau la capatul unui lung
lant trofic, unde aveau loc procese de bioconcentrare a DDT-ului. DDT-ul era
transportat de catre apa de ploaie de la ferme catre ecosistemele in care pasarile
respective pradau.
Un alt exemplu de bioconcentrare a avut loc in zona arctica. In anii 1950
si la inceputurile anilor 1960, armele nucleare testate in atmosfera au condus la
caderea pulberii de Cesiu peste tundra. Lichenii au absorbit aceasta substanta
radioactiva, in final ea ajungand sa fie consumata de catre reni. Eschimosii care la
randul lor se hraneau cu carne de ren, aveau in corp o concentratie dubla de Cesiu
decat aveau renii, iar renii aveau una dubla fata de licheni.
Un ultim exemplu de bioconcentrare implica o mare tragedie umana. In
timpul anilor 1970, taranii japonezi care locuiau in satul Minimata au fost otraviti cu
Mercur deversat de la o fabrica de chimicale din apropiere. Localnicii se hranisera cu
peste in care bioconcentrase Mercurul respectiv. Rezultatul a fost aproximativ 50 de
morti agonizante si peste cateva mii de cazuri grave sau permanente de tulburari
nervoase.

B. Efectele ecologice ale substantelor toxice

Aproape toata atentia mass-mediei se indreapta asupra organismelor
umane atunci cand vine vorba despre substantele toxice. In rare cazuri, cum ar fi
ploaia acida sau interzicerea folosirii DDT-ului in USA, sunt efectele acestor subtante
toxice mult mai relevante asupra plantelor si animalelor decat asupra populatiei
umane. In ciuda acestui fapt, sunt destul de multe cazurile in care aceleasi substante
care ne ameninta si pe noi, pot dauna si naturii in acelasi timp.
Riscuri ecologice sau riscuri umane?
In timp ce egocentrismul uman ne plaseaza noua riscul, este important de
realizat si de inteles ca nivelul existentei umane depinde numai de multiplele
beneficii pe care ni le ofera niste ecosisteme naturale curate si sanatoase. Spre
exemplu padurile purifica aerul, reduc riscul inundatiilor si tempereaza climatul ;
insectele polenizeaza recoltele ; plantele tropicale sunt sursa multor medicamente
nou descoperite iar semintele salbatice au fost baza productivitatii agricole si vor
continua sa sustina efectele substantelor toxice asupra productia de hrana in timp ce
noi vom cauta noi surse de recolte in natura care pot coexista cu viitorul climat.
Asadar, exista motive intemeiate pentru ca ecotoxicologia, care cauta sa inteleaga
efectele nocive ale substantelor toxice, sa fie una dintre cele mai relevante ramuri
privind bunastarea umanitatii. In aceasta parte sunt luate in discutie unele diferente
dintre sanatatii umane si asupra mediului inconjurator, dar si unele intrebari care ii
preocupa pe ecotoxicologi.
Organismul uman este mult mai sensibil decat orice alt organism viu la
unele substante toxice. Radiatia este un exemplu relevant, avand in vedere ca in
general este nevoie de cel putin 10 ori aceeasi cantitate de radiatie (radiatia absorbita
pe unitatea de greutate corporala) pentru a avea acelasi efect asupra animalelor si
plantelor, cum are asupra oamenilor. Deci, daca oamenii ar fi protejati de nivelurile
periculoase de radiatii prin intarirea regulamentelor, atunci si alte organisme ar fi
protejate in acelasi timp. Acest lucru este adevarat nu numai datorita sensibilitatii

mari a oamenilor la radiatii, dar si datorita faptului ca ei sunt predispusi sa le

primeasca in cantitati mult mai mari decat plantele si animalele.
Pe de alta parte insa, in privinta altor substante, oamenii sunt mult mai
putin sensibili decat orice alt organism viu.S-a profitat de acest lucru, folosind
organismele sensibile ca sisteme de avertizare. Un exemplu cunoscut este cel al
folosirii canarilor in colivii ce catre mineri, canari care erau mai sensibili decat
minerii la gazele toxice emanate in mine si in puturi. In cazul in care canarii mureau,
minerii stiau ca trebuie sa iasa din mina. Exista multe pesticide care au un efect mult
mai nociv asupra insectelor (sau, precum DDT-ul dauneaza pasarilor pradatoare)
decat asupra oamenilor. Concentratiile anumitor metale precum Aluminiul sau
Seleniul pot omori pestii sau pasarile, dar asupra oamenilor nu au decat un efect
foarte putin notabil. In concluzie, sensibilitatea relativa a oamenilor si a altor creaturi
justifica apropierea egocentrica numai pentru anumite tipuri de substante, cum ar fi
izotopii radioactivi.
Un alt motiv pentru care suntem tot mai mult interesati de toxicitatea din
corpul uman decat aceea din alte corpuri vii se leaga de individualitatea umana.
Suntem interesati de fiecare persoana din populatia umana. Cand evaluam starea de
risc, incercam sa determinam cate persoane vor muri si cate vor suferi de anumite
boli. In paralel, in cazul unei specii vegetale sau animale, atentia se indreapta spre
supravietuirea speciei, si nu spre supravietuirea sau starea de sanatatea a acelui
organism individual. Am mai putea fi preocupati de totalitatea genelor din cadrul
speciei, de populatia locala, sau de o serie de indivizi cu o importanta economica
crescuta din cadrul speciei respective (cum sunt copacii care poti fi taiati). Deci, in
SUA , exista o lege data pentru protejarea speciilor puse in pericol, dar nu si pentru
organismele individuale puse in pericol. Numai in cazul in care o specie este pe cale
de disparitie, sau cand sunt protejate anumite animale mai speciale, precum balenele
sau pasarile cantatoare, abia atunci sunt portejate organismele individuale. Aceasta
idee privind atentia acordata organismelor individuale si cea acordata grupurilor de
organisme isi are radacinile in etica umana.

Este destul de semnificant ceea ce implica aceste diferente etice in

politica substantelor toxice. Deversarea reziduurilor toxice de la fabrici si uzine de
obicei nu ameninta o intreaga specie de plante sau animale pentru ca in general raza
pe care traiesc aceste animale si plante este mult mai extinsa decat cea afectata de
emisiile fabricilor respective (desi multi indivizi ai anumitor specii pot muri din
pricina acestor reziduuri toxice). O exceptie este atunci cand un poluant este deversat
in vecinatatea unei specii a carui habitat se intinde pe o mica raza geografica. Dar,
chiar si in cazul in care specia ar trai intr-o arie mai extinsa, o politica de protectie
numai a speciilor poate conduce la pierderi majore. Majoritatea speciilor sunt
compuse din multe populatii distincte, acestea fiind compuse la randul lor din indivizi
ai aceleiasi specii care traiesc si se inmultesc impreuna. Deoarece populatiile sunt cel
mai des unice din punct de vedere genetic, pierderea unei populatii poate fi aproape
ireversibila ca pierdere a unei specii. Din pacate, Legea pentru Potejarea Speciilor
Puse in Pericol nu prevede si protejarea populatiilor, si deci deseurile toxice pot duce
la pierderea unor gene rare sau cu o mare importanta in cadrul unei specii.

Scopul ecotoxicologiei
Lucrurile anterior discutate sustin importanta si provocarea pe care o
reprezinta ecotoxicologia. Aceasta stiinta are cateva scopuri majore. Unul dintre ele
este sa indentifice indicatorii de avertizare din timp cum erau canarii in minepentru ca noi sa ne putem da seama cand incepem sa supraincarcam mediul cu
substante toxice. Asemenea indicatori ne pot preveni in privinta unor riscuri, fie ele
umane, fie ecologice. De exemplu, anumite specii de salamandra sunt sensibile la
ploaia acida, lucru care i-a facut pe unii cercetatori sa creada ca moartea lor este un
avertisment pentru stricaciunea padurilor ce va urma foarte rapid.
Anumite specii de organisme au fost identificate ca fiind folositoare in mod
special ca indicator al riscului starii de sanatate umana in privinta apei contaminate.
In anumite cazuri, indicatorul este o specie care traieste in ape poluate, asa cum
este Escherichia coli ,o bacterie des intalnita in apele contaminate din canalizari. In

alt caz, disparitia unei populatii de plante sau animale care nu tolereaza conditiile
poluate indica o problema urgenta. Acesta este si cazul din Kesterson Wildlife
Refuge din San Joaquin Valley, California, unde au fost observate concentratii mari
de Seleniu atunci cand pestii si pasarile acvatice au inceput sa moara.
Un al doilea scop al ecotoxicologiei este sa inteleaga atunci cand o
specie sau o populatie genetic diferita este amenintata de o substanta. Acest lucru este
mai greu decat poate parea, pentru ca nu se stie intotdeauna cat stres poate suporta o
populatie inainte ca ea sa dispara. In privinta acestei investigatii importante,
ecotoxicologia combina fortele sale cu stiinta nou dezvoltata a conservarii biologice.
Al treilea si cel mai provocator tel este sa inteleaga cum poate afecta raul
facut unei specii intreg ecosistemul din care face ea parte. Un ecosistem este mai mult
decat o colectie de specii care impart acelasi spatiu si se pradeaza unele pe altele.Prin
interactiunile ce au loc intr-un ecosistem, el indeplineste functii pe care indivizii nu
le-ar putea realiza singuri. Aceste functii includ circuitul si stocarea nutrientilor in
natura, exploatarea eficienta a energiei solare, prevenirea eroziunii solului si
mentinerea conditiilor climatice locale favorabile. Conditiile aceste nu sunt necesare
numai pentru ca un ecosistem sa poata prospera, dar confera multe beneficii si
umanitatii, precum am mentinonat mai sus. Cand anumite specii sau populatii din
cadrul unui ecosistem sunt amenintate, acelasi lucru se poate intampla si cu
integritatea ecosistemului, iar speciile trebuie sa acorde atentie acestei amenintari caci
vietile noastre depind de mentinerea intr-o stare cat mai buna a acelor ecosisteme.

1. Analogii i diferene ntre toxicologie i ecotoxicologie

( dupa Persoone G.)
Evoluia a adus treptat o specie, numit om, mai presus de alte creaturi vii de
pe Pamant (cel puin n msura n care inteligena este n cauz).

Este logic i motivat, prin urmare, preocuprile cu privire la efectele negative

ale substanelor chimice artificiale asupra oamenilor sa aiba rangul mult mai mare
dect considerentele ecotoxicologice n evaluarea pericolelor.
n contrast cu toxicologia, care se concentreaz pe protecia speciei umane
(considerat de noi insine a fi cele mai importante creaturi de pe Pmnt),
ecotoxicologia se refer la protecia i bunstarea a mai multe milioane de specii
mprtiate pe o varietate de habitate terestre i acvatice, i a comunitilor biologice
cuprinznd ecosistemele i procesele.

Astfel, ecotoxicologia, de asemenea,

abordeaz n mod indirect, bunstarea i n cele din urm supravieuirea omenirii

deoarece substanele chimice nocive pot degrada ecosistemele n msura n care
mediul nu mai poate ndeplini nevoile umane de baz.
Noi recunoatem universalitatea de trai a proceselor, deoarece recunoatem c
toate formele de via au anumite caracteristici de baz n comun. Cu toate acestea,
ne confruntm cu o gam foarte larg de tipuri i forme de via. Experiena a
demonstrat c, n general, cu ct sunt mai mari diferenele de form i funcie, cu att
sunt mai mari diferenele n rspuns la substane chimice strine. Aceste diferene
sunt baza de toxicitate selectiv i sunt generate de diferenele n :
(i)

modul de absorbie a substanelor chimice,

(ii)

ratele de penetrare chimice, metabolismul i excreia,

(iii)

reaciea chimic la locul toxic i mecanismul de reacie,

(iv)

a habitatelor specifice din biota care determin potenialul de expunerea

la substane chimice.

Aceleai caracteristici sunt importante n toxicologia uman n determinarea

riscului la anumite segmente ale societii, dar seria de rspunsuri este, evident, mult
mai mare n ecotoxicologie.
Cercetarea toxicologic uman, este, prin definiie, limitat la nivel de specie i
de cele mai multe ori interesul nostru este ndreptat la nivel individual. Cu toate

acestea, multe informaii sunt extrapolate de la cercetarea cu animale precum i date

epidemiologice umane.
Ecotoxicologia, prin contrast, cuprinde speciile i nivelurile de infra-specii,
precum i impactul asupra structurii i funcia de biota la nivel de supraorganism (ex.
populaii, comuniti i ecosisteme), toate pot fi supuse la o varietate infinit de
variabile de mediu i interaciuni.
ntruct pierderile de viei umane este una foarte ngrijortoare, dispariia a
civa indivizi ntr-o populaie de plante sau animale nu este considerat grav, atta
timp ct buna funcionare a populaiei, comunitilor i ecosistemelor rmane
neafectat.
Ecotoxicologia, prin urmare, i focuseaz atenia pe procesele i interrelaiile
structurii i funciei n populaii, comuniti i ecosisteme.
Cairns (1980) a subliniat c, dei ecosistemele naturale pot avea att de mult
redundan funcional , dispariia unor specii nu duce neaprat la afectarea funciei,
ci este posibil s afecteze funcia ecosistemului fr a ucide de fapt organisme.

Despre testele TOXICOLOGICE ( pentru produsele farmaceutice, de uz uman)

Cercetarile farmaceutice cuprind mai multe etape:
1. Etapa preclinica:

screening farmaceutic
teste de toxicitate acuta
teste de toxicitate cronica
2. Etapa clinica

studiul pe subiecti sanatosi

studiul pe voluntari bolnavi de boala ce urmareste a fi tratata.
In etapa preclinica se lucreaza pe animale.
In cadrul testelor de toxicitate acuta se determina ce procent din animale moare
la adminstrarea unei anumite doze a substantei respective. Prin reprezentarea
mortalitatii (%) in functie de log D se obtine un grafic de forma unei curbe gaussiene

care prezinta un maxim al subiectilor morti la o concentratie a medicamentului egala

cu DL50, valoare la care mor jumatate din subiecti. 90% din intreaga populatie va
deceda la concentratii ale medicamentului cuprinse intre valorile DL50-2 si
DL50+2, unde reprezinta deviatia standard a DL50. In restul de 10% intra indivizii
foarte sensibili, care mor la concentratii ale substantei mai mici decat DL 50-2 si
indivizii deosebit de rezistenti, care mor la concentratii foarte ridicate ale
medicamentului, ce depasesc DL50+2.
DL reprezinta doza letala, doza care determina moartea unui anumit numar de
subiecti: DL99 (moartea a 99% dintre subiecti), DL50 (moartea a 50% din subiecti),
DL1 (moartea a 1% din subiecti).
DE reprezinta doza eficace, doza la care obtinem efectul scontat la intensitate
maxima. DE50 reprezinta doza la care se obtien jumatate din efectul maxim.
Se calculeaza indicele terapeutic I.T. = DL50 / DE50. Regulamentele OMS
prevad ca un medicament este sigur d.p.d.v. terapeutic daca I.T. > 10. Daca I.T. este
mai mic decat 10 putem trage concluzia ca medicamentul determina multe reactii
adverse, mai ales toxice. Pentru medicamentele anticanceroase se admite un I.T.
cuprins intre 2 si 3.
DL50 variaza in linii mari de la o specie la alta. Daca DL 50 este mai mic,
medicamentul are o toxicitate mai mare. Datorita variabilitatii intre specii, trebuie
determinat DE50. DL50, I.T. la cel putin 3 specii, dintre care macar una sa nu fie
rozatoare. Spre exemplu, se poate lucra pe iepuri, sobolani si broaste.
Determinarea toxicitatii cronice se face prin adminstrarea dozei eficace la
animale pe o perioada indelungata (peste 2 ani). Apoi se sacrifica animalul, se
dozeaza concentratiile sangvine si se preleveaza probe din organe (ficat, rinichi,
materie cerebrala) si se studiaza modificarile morfologice.
In faza clinica se observa cum reactioneaza substanta pe subiectii umani. Mai
intai se studiaza pe indivizi sanatosi, apoi pe voluntari care sufera de boala respectiva.
Abia apoi medicamentul este inregistrat in tara respectiva.

OMS spune ca un medicament nu poate fi indeajuns cunoscut nici la 5 ani dupa

punerea lui in terapeutica (d.p.d.v. al sigurantei si nu al eficacitatii terapeutice).
(preluare internet:
http://www.google.ro/url?sa=t&rct=j&q=teste%20de%20toxicitate%20acuta&source=web&cd=6&sqi=2&ved=0CEcQFjAF&url=http%3
A%2F%2Fwww.umfiasi.ro%2FScoalaDoctorala%2FStudiiAprofundate%2FSuport%2520Cursuri%2FEvaluarea%2520toxicologica%2520a%2520me
dicamentului.ppt&ei=VOQPT4OAMdT04QSb55X3Aw&usg=AFQjCNH05JY-35zOFehoyl31dGrOfy8ICw&cad=rja )

2. Evaluarea expunerii versus evaluarea efectelor (Pericolul)

Determinarea "pericolului", pe care o anumit substan chimic o poate
reprezenta pentru om i alte biote este de obicei abordat n ceea ce privete
magnitudinea (concentrarea), frecvena i durata de expunere la magnitudine, msura
i durata efectelor toxice pe care xenobioticele le au pe fiintele vii. Expunerea, pe de
alt parte, este determinat de o varietate de factori, inclusiv de distribuie sau de
repartizare a substanelor chimice din mediul nconjurtor (cum ar fi sol, sediment,
ap i aer), transformarea sau degradarea substanelor chimice i libera circulaie a
mediului care conine aceti ageni. Constatarea acestor factori este "evaluarea
expunerii" care dicteaz magnitudinea efectelor potenial periculoase.
O dat ce o evaluare a riscurilor a fost identificat calitativ, natura efectelor
adverse i relaia cantitativ doz-rspuns a fost definit, este posibil s se evalueze
riscul componentelor, proceselor i indivizilor n cadrul sistemului.
Cea mai important caracteristic de evaluare a riscurilor, aa cum s-a subliniat
n toate comentariile recente pe aceast tem, este determinarea (sau estimarea)
msurii n care concentraiile unui anumit produs chimic eliberat n mediul ambiant
(i.e. expunere) se suprapune n timp i spaiu cu acestea care sunt toxice (i.e.
periculoase) pentru organismele selectate, populaii i ecosisteme. n prezent, att
expunerea ct i efectele xenobioticelor n mediul natural pot fi doar estimate cu
aproximare i ntr-un mod foarte crud din cauza numrului infinit de variabile
implicate. Variabilele provin din structura complex a ecosistemelor biologice i
interdependenele dintre numeroasele componente ale acestora i cile multivariate de
distribuie ale produselor chimice n mediul nconjurtor.

3. Medii terestre versus medii acvatice

Din punct de vedere ecologic, mediile terestre, n multe privine, sunt similare
cu mediile acvatice, deoarece componentele vii la ambele sunt structurate n acela
mod. Speciile de plante i animale sunt grupate n populaii, care, la rndul su sunt
bine organizate n comuniti biologice. Ambele tipuri de ecosisteme ndeplinesc
aceeai funcie de baz; i anume, producia primar (fotosintetic), consumul i
creterea productivitii ca producie secundar, i degradarea i ciclul nutrienilor ca
legturi majore n toate tipurile de lanuri alimentare.
Chiar dac o parte considerabil a speciilor care populeaz ecosistemele
terestre i acvatice sunt foarte strns legate filogenetic, abordarea pentru a studia
efectele substanelor chimice este, totui, foarte diferit pentru aceste dou medii.
Acest lucru rezult din moduri destul de diferite de expunere a biotei la produse
chimice n cele dou tipuri de ecosisteme.
n ecosistemele terestre, expunerea la poluanii prezeni n aer pare s afecteze
n mod direct doar mediul vegetal; animalele sunt ntr-adevr, contaminate n
principal prin absorbia de substane toxice prin intermediul lanului alimentar. n
ecosistemele acvatice, fauna i flora pelagic sunt continuu n contact cu substanele
chimice dizolvate sau suspendate n coloana de ap; absorbia lanului alimentar pare
s fie secundar sau cel puin mult mai lent dect cea de la contaminarea direct.
Suspensiile solide n mediul acvatic au o contribuie asupra speciilor acvatice la fel de
mare cum o are praful asupra speciilor terestre. n ambele tipuri de ecosisteme, totui,
biota care traiete n sol/sedimente poate fi intoxicat de expunerea la contact i
ingestia de particule contaminate. Acest contact mai intens ofer mobilitate
substanelor chimice depuse astfel nct acestea formeaz lanul trofic i
reechilibreaz materialele deranjate cu, coloana de ap.
Cantitile de substane chimice care pot fi efectuate de fiecare mediu (aer, ap
sau sol) nu sunt comparabile. Mai mult, dinamica lor, biodisponibilitatea i soarta
final n fiecare mediu poate fi radical diferite. Ca rezultat, metode experimentale

pentru a determina potenialele efectele ale poluanilor sunt destul de diferite pentru
organismele terestre i acvatice i vor fi tratate separat n alt parte n acest volum.

4. Necesitatea i dificultatea de testare la diferite niveluri ale organizrii

biologice

n 1983, Cairns a adresat ntrebarea "Sunt testele toxicitii la o singur specie

adecvate pentru estimarea pericolului pentru mediu? El a menionat c "la fiecare
nivel succesiv de organizare biologic, proprieti noi, prea c nu ar fi fost
evideniate chiar de cel mai intens i atent examen al nivelurilor inferioare ale
organizaiei ". Cairns n mod corect a concluzionat c, pn n present "Nu exist nici
o dovad tiinific justificat pentru a indica gradul de fiabilitate cu care se pot folosi
teste pe specii pentru a prezice rspunsuri la niveluri mai ridicate de "organizare
biologic. Pn n urm cu civa ani, biotestele asupra organismelor int nonumane s-au limitat aproape exclusiv la teste de laborator asupra speciilor selectate
(chiar de vrst sau dimensiune) expuse pentru perioade fixe de timp la concentraii
constante de toxicitate ntr-un set predeterminat de condiii fizico-chimice.
Principalul motiv pentru aceasta este c istoric, ecotoxicologia, a inceput ca un
vlstar de toxicologie uman. Iniial,

interesul in toxicitate a fost clasamentul

produselor chimice pentru un numr foarte limitat de specii test care au fost de interes
economic direct sau estetice pentru om. Standardizarea condiiilor de test a oferit
sprijin pentru soluionarea litigiilor n controlul polurii acvatice (Mount i Gillett,
1982) i in regulamentul pesticidelor (Tucker i Crabtree, 1970). Interesant, aceste
teste au avut puin n comun cu realitatea de impact asupra populaiei i a
comunitilor care primesc expunerea la substane toxice stocastice multiple n
condiii fizico-chimice diferite, fr referire la specia, vrsta, mrimea sau ali factori.
Creterea ngrijortoare a polurii n anii 1960, din fericire, paralel cu o dezvoltare
rapid a ecologiei, a fcut omenirea contien de necesitatea de a analiza impactul
potenial al substanelor chimice asupra mediului natural la nivel de ecosistem, mai

mult, dect la un singur nivel de specii. Toate componentele biologice ale sistemelor,
interacionnd sunt expuse la risc, simultan sau succesiv, pentru diferite concentraii
ale xenobioticelor din diferite perioade de timp n cadrul site-specific, dar, de
asemenea, variabile, condiiilor de mediu. Astfel, att efecte directe ct i indirecte au
fost de ateptat i confirmate.
Cercetrile extinse de-a lungul ultimei decade au artat c abordri
ecosistemice pentru evaluarea pericolelor sunt foarte greu de pus n practic.
Dificultatea provine din numrul de variabile implicate n testarea de multispecii, fie
n laborator (microcosmos sau mesocosm) sau n condiii reale de mediu (studii de
teren). Acesta este un obstacol major n calea repetabilitii testelor i, ca rezultat, la
potenialul lor de predicie. Din punct de vedere practic, exist incontestabil o relaie
invers ntre "realism ecologic" pe de o parte i simplitatea de testare pe de alt parte,
cum este ilustrat n figura 17.1.
Aceast relaie invers susine dictonul c o nelegere a mecanismelor toxice
se realizeaz prin progresul descendent n complexitate (de exemplu, de la organism
la nivel fiziologic, la organe i n cele din urm la nivel molecular), ntruct rezultatul
evenimentului toxicologic poate fi pe deplin neles doar prin progresul ascendent la
sistemul mai complex. Inhibiia enzimatic este de importan doar dac aceasta
cauzeaz organelor i sistemelor fiziologice s eueze n moduri care fac organismul
mai puin capabil s functioneze n cadrul comunitii. Alegoria, "din lipsa unui cui. .
. regatul a fost pierdut ilustreaz conceptul vital al cii critice pentru o component a
unui sistem care a dus la un efect advers; nu fiecare cui pierdut se ncadreaz n regat.
Acest concept este deosebit de relevant n contextul reexaminrii. Este posibil s se
concentreze pe mecanisme ntr-un singur organism n timp ce nelegerea relaiilor
funcionale ale sistemelor pe multe componente biologice de complexitate mai mare.
De exemplu, un set separat de teste n vitro pot stabili c substanele chimice ptrund
n organism, supravieuiesc n sistemele sale diverse, i inhib o enzim cheie. Dac
am tii c enzima se gsete n organe specifice cu conexiuni functionale la rezultate
negative, nu ar mai fi nevoie s testm fiecare organism n parte pentru a prezice

efectele adverse. n specia uman un inhibitor al acetilcolinesterazei priveaz efectiv

inima de stimulare, priveaz creierul de oxigen i duce la deces. La alte specii acela
sistem enzimatic poate avea conexiuni diferite mecaniciste, organele pot fi mai mult
sau mai puin redundante i importante pentru vitalitatea organismelor i individual
pot avea doar un rol infinitezimal n populaie, comunitate sau ecosistem.

s
i
m
p
l
i
t
a
t
e

Specii unice
Teste
enzim
atice

Teste
specifice de
organe

Biotest
ideal

Teste fiziologice
Trasor
ncorporare
Teste
lot

Rennoire
continua
minospecific

Comunitate
multispecii
gnotobiotice
Comunitate
multispecii naturale
Ecosisteme controlate

Studii de teren

Realism ecologic

Astfel, testele noastre la niveluri mai sczute ne ajut s nelegem caracterul

selectiv de toxicitate, aspecte comparative de fiziologie, i poate chiar ceva despre
relaiile funcionale n cadrul populaiilor i a sistemelor mai mari. Cu toate acestea,
acelai tip de testare ne spune ceva despre rezultatul real; cunotinele noastre de
relaii ecologice sunt att de incomplete nct orice concluzie formulat n acest sens
poate fi puin mai mult dect speculaie.

Cu un deceniu sau mai mult n urm, compensaia pentru ignoran a fost

realizat prin utilizarea unor factori de siguran sau a factorilor de aplicare (Mount
i Gillett, 1982). Pragmatic, standardele stabilite cu ajutorul factorilor de arbitrare,
cum ar fi 100 sau 1000 au fost eficiente n reducerea polurii i refacerea "livability"
biologic de mediu. Nu tim nc dac aceast abordare a fost punct de vedere invalid
economic (supra-reglementare) sau necorespunztor ecologic (De exemplu, pierderea
nedescoperit de specii trebuie s respecte standarde necorespunztoare).
n timpul decadelor anilor 1960 i 1970, speciile i efectele habitatelor
specifice care au fost descoperite au revoluionat gndirea despre problemele
mediului. Toxicitatea direct a pesticidelor pentru psri i peti a fost printre primele
bazine de mediu traversate, dar care a fost repede umbrit de toxicitatea letal
cronic privind hranirea unor nevertebrate contaminate, care la rndul su a fost
depit de ngrijorarea cu privire la toxicitatea non-letal cronic, a pesticidelor i a
altor substane toxice pentru psri i peti aa cum se vede n efectele
comportamentale i de reproducere. Acestea au servit drept avertismente de
potenialele pericolele pentru om, pentru propria bunstare i au ilustrat conexiuni
ecologice ignorate anterior n graba antropocentric.
Un sistem multispecific brut, dar eficient a fost conceput de Metcalfe et al.
(197I)- un "iaz ferm", ecosistem model sau microcosmos, pentru a demonstra aceste
conexiuni. Dei acest sistem special de testare a fost etichetat ca o "grmad de
deeuri ecologice", daca ar fi fost angajat nainte de introducerea insecticidelor de
hidrocarburi clorinate, DDT nu ar fi fost niciodat folosit pe o scar s paial i masa
att de mare pe glob. La aproximativ acelai timp, diverse alte sisteme au fost
excizate din domenii i iazuri ca s examineze, printre altele, rspunsul ecosistemului
la stres i reziduuri radioactive. mpreun, aceste seturi de teste au stimulat testarea
multispecie i tehnologia microcosmos ca o abordare legitim de evaluarea funciilor
biologice superioare i a rezultatelor.

5. Teste pe specii
Dei experiena profesional de testare cu mai multe specii crete rapid,
protocoale standardizate pentru teste multispecie devin disponibile greu. Deoarece
testele de ncredere, bine testate i / sau de cost-eficient experimental la nivel de
ecosistem, care pot fi folosite pe o baz de rutin au lipsit, testarea ecotoxicologic
pentru a sprijini toate evalurile naionale i internaionale de pericol a substanelor
chimice se bazeaz nc n totalitate pe teste pe specii, cea mai mare parte fiind ntr-o
abordare secvenial.
n principiu, specia candidat trebuie s fie reprezentativ din biota diferitelor
ecosisteme naturale, cu o sensibilitate comparabil, care s posede comunitii de
conexiuni funcionale, i s fie suficient de cuprinztoare i reprezentativ din toate
prile critice ale ecosistemelor naturale. Din nefericire, suntem departe de atingerea
acestui obiectiv. Doar cteva specii au fost sau pot fi meninute n laborator.
Buikema i Benfield (1979) subliniaz c lipsa de informaii ecologice
necesare pentru a stabili populaiile de laborator reprezint o problem serioas n
creterea varietii sau speciei potenialului candidat pentru testarea ecotoxicologic.
Speciile de animale cele mai utilizate pe scar larg pentru testarea n Statele Unite
ale Americii includ cinci mamifere, cinci psri, apte peti, dou insecte terestre,
nou artropode acvatice i o molusc (Kenaga, 1978). Majoritatea testelor pn n
prezent au fost efectuate pe peti, nu numai pentru c acest grup este considerat a fi
cel mai bine neles pentru mediul acvatic, dar, de asemenea, (i, probabil, mai ales)
din cauza interesului direct pe care omul l are asupra petelui (Cairns, 1982). De
asemenea, se pare c multe dintre speciile de rutin utilizate pentru testarea toxicitii
sunt, printre colegii lor n mediul natural, cele cu cel mai mici nevoi ecologice i cea
mai mare toleran n ceea ce privete mai multe variabile de mediu (euryspecies);
acest implicit le face mai uor de meninut i mnuit n laborator.
Ar trebui subliniat faptul c metodologia i standardizarea procedurilor de
testare, chiar i pentru cele de rutin, este adesea foarte slab. Maid (1983) indic
faptul c, dei cteva exerciii de intercalibrare au fost efectuate, cele mai multe au

fost un eec complet, fie pentru c protocoalele experimentale au fost inadecvate, fie
din cauza eecului de a nelege unele dintre cerinele de baz ecologice ale speciei
testate. Pentru mediul acvatic, doar trei sp. au trecut cu succes testele de comparaie
din laborator; acestea sunt Daphnia magna i Brachydania reria, bioteste pe termen
scurt aplicate pe mediului acvatic dulcicol (Cabridenc, 1979a,b) i Artemia salina
teste pe termen scurt din mediul marin (Vanhaecke and Persoone, 1982).
"Ecologie realism-simplitate" relaia invers pentru abordarea ecosistemic
este, din pcate valabil la nivelul pe specii. Persoone (1980) a demonstrat n mod
clar paradoxul dintre biologie i abordarea economic n selectarea speciilor i
stabilirea unor protocoale pentru testele de toxicitate (Figura 17.2). Abordarea
biologic (care este una logic) are ca scop maximim reprezentativitate ecologic i
sensibilitatea testelor. Selecia speciei reprezentative testate (dificil de a menine i
mui) i criteriile sensibile (creterea sau reproducerea) duc automat la metodele de
testare i experimente complicate pe termen lung scumpe.
Abordarea economic, este singurul test realist si de rutin a unui numr mare
de substane chimice, si care se bazeaz pe teste simple, pe termen scurt cu un numr
limitat de specii care sunt uor de crescut i pe criterii simple de evaluare
(de exemplu, letalitate). Dup cum s-a menionat mai devreme, aceast strategie de
testare, are rezultate n timp rapid i prompte, in timp lipsete insa de
reprezentativitate, completivitate i sensibilitate.
Macek et al. (1978), care au revizuit tipurile de teste in ceea ce priveste
toxicitate acvatic furnizeaz date utile pentru estimarea sau procnozarea toxicitii
substanelor chimice pentru organismele acvatice, a lucrat la o matrice informativa
bazat pe ase criterii de evaluare (semnificaii ecologice, tiinifice i de aprare
juridic, disponibilitatea metodelor de rutin, de utilitate predictive, aplicabilitatea
general simplitate i costuri); aceasta este reprodusa n tabelul 1. Letalitate, n ciuda
faptului ca pare imatur, este util mai presus de toate obiectivele considerate, att
ntr-o singur specie, precum i testele multispeciei.

Minim
Alegeri economice

Costuri

Durata

Gradul de experien
al perosnalului

Echipament

TEST

Alegerea
organismelor

Recrutarea organismelor i ntreinerea

materialelor

Alegerea criteriilor

Reprezentare
ecologic

Sensibilitate

Alegeri biologice
Maxim

Figura 2. Interdependenele dintre factorii care determin alegerea metodelor de

testare biologic (Persoone, 1980)

Tabel 1. Evaluarea consensului de la utilitatea relativ a testelor de toxicitate simple i

complexe utilizate n evaluarea riscului asociat cu apariia substanelor chimice n mediul
acvatic (MACEK, 1978)
Test

Semnifi- Aprar

Disponi-

Predictive

Aplica

caie

bilitate

de

bilitate tate

relativ

ecologic

tiinif

sau rutina utilitate

genera

prezent

ic

costuri

i metodelor

Simpli-

Utilizarea

legal
Sisteme
simple
Letalitate

33

36

35

22

24

26

100

33

30

23

20

25

14

82

36

30

21

27

24

82

Acumulare de 27

32

22

24

17

14

77

acut
Embrion
Larv
Reproducere

reziduuri
Teste algale

30

23

26

18

14

20

74

Orlanoleptic

14

25

25

27

13

15

67

Structur

18

21

23

17

16

22

66

21

13

10

16

44

Histologic

10

10

20

10

13

10

41

Fiziologic

i 12

10

13

19

40

11

11

25

Activitate
Comportamen
t

biochimic
In vitro

Sisteme
complexe
Cmp

34

24

18

21

21

69

Diversitate

26

19

25

15

20

10

65

Bentonic

21

18

12

18

17

12

56

Microcosm

19

10

15

14

17

48

6. Necesitatea evalurii expunerii

n scopul de a face cea mai bun utilizare a testelor pe specii, n a prezice cum
o anumit substan chimic poate influena biota n condiii naturale de mediu,
inerenele toxicitatii xenobioticelor (determinate experimental) ar trebui s fie legate
de cantitatea produsului chimic care va ajunge organismului n conformitate cu
condiiile predominante de expunere. n proiectele de evaluare a riscurilor (de
exemplu, OCDE, 1982), expunerea este determinat ca "prezicerea de distribuie a
mediului" (PED) i "concentraia previzibil n mediu" (PEC). PED se bazeaz pe o
serie de caracteristici fizico-chimice (cum ar fi solubilitatea n ap, presiunea
vaporilor, masa molecular relativ, adsorbie a solului i coeficientul de partiie
octanol-ap coeficientul).Aceasta ofer o estimare a distribuiei chimice dn cadrul
compartimentelor de mediu: aer, ap, sol / sedimente, i biota. Complementar PEC
vizeaz predicia cantitativ a concentraiilor reale a chimice care ar putea fi atinse n
pri distincte ale ecosistemului.
PED se bazeaz pe un numr limitat de parametri. Acesta este de obicei simplu
de determinat.PEC este mult mai dificil de estimat deoarece acesta necesit informaii
cu privire la volumele de producie, modele de descrcare a gestiunii i o cunoatere
aprofundat a apelor receptoare (fluxuri, caracteristici, locatii, etc).
7. Teste toxicologice pe termen scurt
Ne dorim s protejm speciile care nu au fost testate, deoarece acestea sunt pe
cale de dispariie (Ospreys de exemplu), fizic dificil, dac nu chiar imposibil de
cultur (balene albastre, arbori sequoia), sau pur i simplu nu tim. Un astfel de
organism ar putea fi "specia cheie" de care funcia ecosistemului depinde (de
exemplu, o detritivore care faciliteaz de nutrienii dintr-un iaz sau pdure, sau un
prdtor de nivel superior care structureaz ecosistemul de selecie a przii). Chiar i
pentru a identifica un astfel de organism trebuiesc ani de lucru n domeniu i studiu
de laborator. Rareori studiile de toxicitate ofer oportunitatea de a evalua impactul
asupra acestor organisme, precum i sistemele pe care le sprijin, deoarece a face
acest lucru duce la experimente n "timp biogeochimice".

Punctul de vedere pe termen scurt al omului n ceea ce priveste studiile

ecologice i biogeochimice stau la inima ecotoxicologiei. Imposibilitatea de a avea o
viziune pe termen lung a rezultatelor de intrri n antropice rezultate n probleme de
mediu au fost descoperite dup ce au progresat aproape la eco-catastrof. Poluarea
global prin precipitare acid i modificarea stratosferica sunt adesea citate ca
exemple de fenomene pentru care att rspunsurile de prevenire sunt destul de
dificile. Substanele chimice sintetice organice, cum ar fi DDT, PCB i esteri ftalat,
sunt acum distribuite pe scar larg n mediul nconjurtor.Aceste substane chimice
s-au acumulat i biomagnificat n unele ecosisteme, ceea ce poate duce la modificarea
treptata a compoziiei speciilor dintr-un ecosistem.Eforturile susinute au restaurat
specii de peti sau psri unor astfel de habitate, dar altele nc mai sufer din cauza
impactului de produse chimice mult timp dup ce acestea au fost "reglementate"sau
"interzise".
Prin urmare,

n teorie, se pot selecta speciile cu ciclurile de via si cu

reproducerea scurta, cum ar fi Daphnia magna L. ( generatie de cateva zile) sau spp
Arabidopsis. (semina la samanta timp de aproximativ 30 de zile). Cu toate acestea,
acesti gandaci ridica intrebarea "sunt speciile critice afectate pe durat lung de via
sau nu au cerine multi-sezoniere pentru funcii critice?".Perioada n care sistemele
testelor pe specii multiple si microcosmosurile pot fi meninut entr-o stare de
funcionare adecvat este adesea departe de dorit. Cum s-ar putea dezvolta apoi "pe
termen scurt" teste pentru efectele ecotoxicologice ? Exist cteva cursuri din care s
se faca aleageri; ignorand fenomenanul pe termen lung (multisezoonal sau mai multe
generaii); ignorand interaciunile multi-speciilor; ignorand speciile criptice i
procesele; sau presupunand c factorii de mare siguran (l00 sau 1000) sunt adecvati.
Pragmatic, aa cum sa menionat mai devreme, aplicarea factorilor de siguran a
servit bine pentru un timp, insa problemele economice ptrund si n protecia
mediului, n urma unei crize de energie la nivel global i a unei scderi bruste a
preurilor n ambele naiuni industriale n curs de dezvoltare, iar problema suprareglementarii nu este retoric.

Studii nepublicate de Munte i co-lucrtorii si i analize similare de ai mari

susintori de baze de date, au relevat cteva caracteristici de toxicitate comparative
care ofer ncurajarea prudent n ceea ce priveste posibilitile de testare
ecotoxicologic ntr-un interval de timp mai scurt. De exemplu, este posibila testarea
"clusterelor" organismelor i a extrapola la o valoare a unui LCO teoretic (letalitate a
organismului grad zero) (Gillett, nepublicate). Aceast "cluster" este o serie de specii
(de exemplu, pstrvul curcubeu, D.magna , i Bluegill, obolan sau alb, prepeli de
Virginia, i housefly), pentru care dozele proporionale (mg / kg) sau expunerile
(mg/m3) sunt disponibile. Pentru acestea exist o anumit nelegere a relaiei de
rspuns toxic la clasa de chimice implicate n testare. Astfel, pentru metale grele, ar
putea fi incluse micro-organismele sensibile(cum ar fi E. coli) . Dac se doreste
fitotoxicitatea sau o preocupare,ar putea fi utilizata o alga.
Rspndirea de date LD 50 sau LC50 din cluster este folosit pentru a estima
toxicitatea selectiv, n timp ce valoarea medie a estimrilor calitative este estimat
(de exemplu, foarte toxice, toxice moderat, etc). Analiza provizorie a unei baze mari
de date de la Departamentul de Interne al Statelor Unite, Serviciile peti i viaa
slbatic arat c exist o variaie mare ntre pstrvul curcubeu sub o varietate de
condiii de ncercare (temperatur, vrst sau dimensiune, duritate, salinitate, pH, etc
.) dect exist n rndul tuturor petilor testai (Johnson i Finley, 1980). Astfel, un
suspect pe care orice test de laborator nu l dezvluie este sensibilitatea specific, dar
este unloc simplu n ceea ce privete chimicalele printre calitatea speciilor. Despre ct
mai multe informaii sunt colectate de la clusterul de testare (concepute pentru a
asigura rspndirea taxonomic n rspuns) de la mai multe teste extinse. Cu toate
acestea, atunci cnd este o mare selectivitate (gam larg n rspuns) sau un poluant
este suspectat de a afecta mai multe medii, apoi utilizarea unui cluster mai mare (5-8
specii) este recomandabil.
O a doua abordare presupune c letalitatea cronic apare la aproximativ un
ordin de magnitudine mai mic dect n expunerea de toxicitate acut. Efecte nonletale, dar grave asupra reproducerii i comportamentului pot fi cu dou ordine de

mrime mai mic dect mortalitatea sau morbiditatea. Fr o nelegere corect a

ecologiei chimice i relaiilor de comportament, nu poate fi sigur c ntreruperea nu
va avea loc ca un rezultat direct sau indirect de chimicale n mediul nconjurtor. Cu
toate acestea, n practic, utilizarea aceastei valori estimat cronic (1 / 10 din cele mai
mici CL50) se proteja multe specii. Cu toate acestea, nu suntem ncreztori niciodat
despre modul n care multe speciile sunt protejate sau de importana lor funcional.
Mai multe specii i studii microscopice ofer o scurttur n ceea ce privete
investigarea acestor relaii funcionale, chiar dac aceste teste necesit frecvent
sptmni sau luni pentru completare i analiz. Odat ce testele preliminare pe specii
i datele fizice au furnizat estimri ale expunerii cronice i rspunsuri cronice,
ecosistemul model poate fi folosit pentru a confirma activitatea unei substane
chimice sau a unui amestec candidat sau pentru a demonstra sigurana, cel puin n
condiiile de testare. Noi nu tim cu certitudine ce se poate extrapola de la un set de
teste dat (specii, condiiile de habitat) pentru alii. Prin urmare, sistemele cele mai
probabil a fi expuse i / sau anticipate s fie sensibile la o anumit clas de produse
chimice ar trebui s fie testate mai nti.
Atenie deosebit trebuie acordat att pentru funciile complexe ( producie
primar, ciclul nutrienilor, etc.) ct i compoziiei speciilor. De exemplu, Harte i al
(1980) a constatat c microorganismele lotice din producia primar i ciclul azotului
n rezervorul sursei, dincolo de momentul n care diatomeele sensibile au fost
eliminate i nlocuite de alga albastr-verde. Prezena organismelor nedorite
(Anabaena sp.) nu a fost gsit printr-o simpl analiz funcional.
Aceast revizuire a nceput prin a sublinia faptul c obiectivele din
ecotoxicologie difer semnificativ de cele din toxicologia uman. S-a ncercat s se
demonstreze c preocuprile cu privire la abordrile de testare depind de
simplificarea biologic pentru rspunsuri rapide. n acelai timp, complexitatea
sistemelor i speciile care le formeaz cer o atenie deosebit, ce poate fi acordat
numai n cazul n care le putem gsi prin mijloace economice, precise i simple, de
determinare a rspunsurilor la concentraiile de substane toxice poteniale.

( preluare: Testare toxicologic versus ecotoxicologic, Cap. 17, GUIDO PERSOONE SI JAMES
GILLElTT).

Bibliografie

- Buikema, A.L. Jr., and Benfield, E.F. (1979). Use of macroinvertebrate life history information in
toxicity tests. J. Fish. Res. Bd. Can., 36, 321-8.
- Cabridenc, R. (1979a). Inter-laboratory ring test concerning the study of ecotoxicity of a
chemical substance with respect to Daphnia. Commission of the European Communities.
Study D.8368, 18 p.
- Cabridenc, R. (1979b). Inter-laboratory ring test concerning the study of the ecotoxicity of a
chemical substance with respect to the fish. Commission of the European Communities.
Study D.8368, 18 p.
- Cairns, J. Jr. (1980). Beyond single species toxicity testing. Mar. Environ. Res., 3, 157-9.
- Cairns, J. Jr. (1982). Predictive and reactive systems for aquatic ecosystem quality control. In:
Scientific Basis of Water-Resource Management, Geophysics Study Committee, National
Research Council, National Academy Press, Washington, D.C., pp. 72-84.
- Cairns, J. Jr. (1983). Are single species toxicity tests alone adequate for estimating environmental
hazard? Hydrobiologia, 100,47-57.
- Calamari, D., Chiaudani, G., and Vighi, M. (1985). Methods for measuring the effects of
chemicals on aquatic plants. In: Vouk, B., Butler, G.c., Hoel, D.G., and Peakall, D.H.
(Eds), Methodsfor Estimating Risk of Chemical Injury: Human and Non-Human Biota and
Ecosystems, SCOPE 26, John Wiley & Sons, New York, pp. 549-71.
- Harte, J., Levy, D., Rees, J., and Saagebarth, E. (1980). Making microcosms an effective
assessment tool. In: Giesy, J. (Ed.), Microcosms in Ecological Research, DOE Symposium
No. 52, US Technical Information Service, Springfield, VA, pp. 105-7.
- Johnson, W.W., and Finley, M.T. (1980). Handbook of Acute Toxicity of Chemicals to Fish
and Aquatic Invertebrates, Resource Publication Series, No. 37, US Fish and Wildlife
Service, Washington, D.C., 98 p.
- Kenaga, E.E. (1978). Test organisms and methods useful for early assessment of acute
toxicity of chemicals. Environ. Sci. Tech., 12, 1322-8.
- Macek, K., Birge, W., Mayer. F.L., Buikema, A.OL. Jr., and Maki, A.W. (1978). Discussion
Session Synopsis. In: Cairns, J. Jr., Dickson, K.L., and Maki, A.W. (Eds), Estimating the
Hazard of Chemical Substances to Aquatic Life, ASTM, Special Technical Publication 657,

American Society for Testing and Materials, Philadelphia, pp. 27-32.

- Maki, A. (1983). Exotoxicology--<:ritical needs and credibility. Environ. Toxicol. Chem., 2,
259-60. Toxicological versus Ecotoxicological Testing 299
- Metcalfe, RL, Sangha, G.K., and Kapoor, l.P. (1971). Model ecosystem for the evaluation of
pesticide degradability and ecological magnification. Environ. Sci. Technol., 5, 709-13.
- Mount, D.l., and Gillett, J.W. (1982). Progress in research on ecotoxicology. In: Mason, W.T.
(Ed.), Research on Fish and Wildlife Habitat, EPA-600/8-82-022, US Environmental Protection
Agency, Washington, D.C., pp. 143-64.
- OECD (1982). Guidelines for Ecotoxicologic Testing of Chemicals, Organization for Economic
Cooperation and Development, Paris.
- Persoone, G. (1980). Standardization of aquatic bioassays: comprises between biological and
economical criteria. In: Klaverkamp, J.F., Leonhard, S.L., and Marshall, K.E. (Eds), Proceedings of
the 6th Annual Aquatic Toxicity Workshop, Winnipeg, Canada, Can. Tech. Rep.
Fish. Aquat. Sci., pp. 111-22.
- Tucker, R.K., and Crabtree, D.G. (1970). Handbook of Toxicity of Pesticides to Wildlife,
Resource Publication Series No. 84, US Fish and Wildlife Service, Washington, D.C.,
131 p.
- Vanhaecke, P., and Persoone, G. (1982). Report on an intercalibration exercise on a shortterm
standard toxicity test with Artemia nauplii. In: Leclerc, H., and Dive, D. (Eds), Les
tests de toxicite aigue en milieu aquatique, volume 106, Editions INSERM, pp. 359-76.

Traseele si bioacumularea substantelor toxice

(Luca A., Tofan L., 2011)
1. Caracteristici generale
Bioconcentrarea reprezinta

procesul in urma caruia un compus

chimic

atinge concentratii mai mari intr-un organism fata de compartimentele abiotice,

preluarea compusului de catre organism realizandu-se printr-un mecanism direct. Se
obisnuieste sa se foloseasca termenul de bioconcentrare in cazul cresterii
concentratiei xenobioticelor in organismele acvatice fata de concentratia din
apa.(1)
Bioacumularea se produce prin cresterea concentratiei poluantilor in
organismele vii, fata de biotopul in care se gasesc. Trecerea lor din apa in
organisme are loc direct, prin piele si prin branhii. Termenul poate fi extins si
pentru organismele terestre daca se refera la trecerea compusilor chimici direct
din aer sau din sol, prin patrundere transfoliara sau trans radiculara in cazul
organismelor vegetale si prin inhalare in cazul organismelor animale. (1)
Bioamplificarea descrie procesul ce are loc atunci cand principala sursa
de bioacumulare este hrana. Ea este de obicei importanta pentru acei compusi
care ating concentratii mari in hrana si foarte scazute in compartimentele
abiotice cu care organismul se afla in contact, cum ar fi apa pentru organismele
acvatice, aerul pentru organismele terestre si solul si sedimentele pentru
organismele bentice si din sol. (1)
Bioamplificarea este prin urmare un fenomen de transfer si amplificare biologica
a'poluarii' in interiorul biocenozelor contaminate.
Un alt criteriu de diferentiere a acestor termeni se bazeaza pe valoarea
factorului de bioconcentrare. Acest factor se defineste prin raportul dintre
concentratia
in organismul contaminat (compartimentul i) si

compusului chimic
concentratia compusului in

compartimentul din care este preluat (j). O valoare subunitara a acestui factor (0<
Cy <l) indica un proces de bioacumulare a compusului, in timp ce o valoare
supraunitara (Cy>l) desemneaza un proces de bioconcentrare a sa (Vadineanu,
1990). (1)
Din punct de vedere al diferentelor existente in preluarea, eliminarea si
bioconcentrarea lor, compusii chimici au fost impartiti in urmatoarele clase, cu
proprietati fizico-chimice distincte : compusi organici, metale si compusi
organometalici. La randul, lor metalele pot fi impartite in doua subcategorii:
compusi esentiali si neesentiali. in categoria microelementelor esentiale sunt
incluse: cuprul, fierul, cromul, manganul, cobaltul, nichelul, seleniul, molibdenul si
zincul. Aceste metale detin un rol important in metabolismul organismelor
vegetale si animale dar, atunci cand concentratiile lor depasesc valorile normale,
apar dezechilibre ce afecteaza sanatatea, cresterea si reproducerea organismelor
respective, putandu-se solda chiar cu moartea acestora. (1)
Poluanii organici persiteni sunt substane chimice persistente n mediu, care se
bioacumuleaz prin lanuri trofice i reprezint un risc din cauza efectelor adverse
asupra sntii oamenilor i asupra mediului nconjurtor. (2)
Aceste substane sunt grupate astfel:
Pesticide: aldrin, dieldrin, endrin, clordan, heptaclor, toxafen, DDT, mirex,
hexaclorobenzen.
Produse chimice industriale: policlorobifenili, hexaclorobenzen.
Produse secundare: policlorobifenili, hexaclorobenzen, policlorodibenzodioxine,
policlorodibenzofurani. (2)
La lista anterioar s-au adugat i policloronaftalinele, policloroparafinele,
difenileterii polibromurai, difenileterii policlorurai, hexaclorociclohexan (lindan) i
hidrocarburile aromatice policiclice.
n anul 2001 mai mult de 90 de ri au semnat un tratat prin care se angajeaz s
elimine sau s reduc producia, utilizarea i rspndirea celor 12 substane din
duzina murdar: aldrin, dieldrin, endrin, clordan, heptaclor, toxafen, DDT, mirex,

hexaclorobenzen,

policlorobifenili,

policlorodibenzodioxine,

policlorodibenzofurani.(2)
Pentru a putea penetra un organism, substantele toxice trebuie sa patrunda cel
putin printr-un strat de celule. Rata de limitare a procesului de absortie poate fi
studiata la organismele unicelulare, de unde s-au si aflat multe despre motilitatea si
bioacumularea substantelor toxice. In cazul in care celulele se organizeaza intr-o
membrana simpla sau complexa, procesul bioacumularii se complica. Transportul
transepitelial al substantelor chimice e studiat comparand mediul extern cu un fluid
corporal ( sange ) care serveste ca vector ( indicator ) pentru substantele toxice care ar
putea fi stocate si metabolizate in tesuturi. Membrana celulara este alcatuita dintr-un
bistrat fosfolipidic in care sunt incorporate numeroase lanuri proteice,care pot media
transportul unor substante ca ioni, zaharuri, amino- acizi si agenti xenobiotici. Alta
metoda de transport celular o reprezinta canalele ionice, aceste au declansatoare
chimice sau voltaice care le controleaza activitatea de deschidere si inchidere. Multe
xenobiotice se misca prin difuzie pasiva prin membrana plasmatica, proces care ar
putea fi limitat de solubilitatea lipidica a membranei. (3)
Celulele dintr-un epiteliu pot transporta substantele intr-o ordine specifica,
ionii care intra in celula prin canalele ionice din zona apicala pot fi eliberati in sange
printr-o pompa localizata in zona bazala. Studii recente arata ca proteinele
transportoare intracelulare ar fi responsabile pentru translocarea urmelor de metale
(Zn) de-a lungul celulelor epiteliului. In unele cazuri substantele toxice se combina
cu proteine ceea ce determina diferente ale gradientelor de concentratie dintre mediul
extern si celule. (3) pg.70

2. Rutele bioacumularii substantelor toxice

La animalele terestre exista trei cai prin care un agent toxic se poate infiltra si
crea depozite in organism: piele, plamani si tractul gastro-intestinal. Epiteliul
sistemului respirator si digestiv este specializat in adsorbtia selectiva a moleculelor si
de aceea este mult mai vulnerabil in fata agresiunilor substantelor toxice. La

animalele acvatice branhiile au rol in respiratie si in reglarea electrolitilor si pot

introduce substante dizolvate in organism prin difuzie, sau prin pompele de ioni. (3)
pg.71
Dupa preluare, compusii chimici sunt transportati in diferite compartimente ale
corpului de catre sange, limfa sau hemolimfa. Transportul in interiorul organismului
se realizeaza prin mecanisme de difuzie pasiva prin membrane sau, in cazul
compusilor foarte lipofili, prin legare de anumite molecule de

transport ca, de

exemplu, de lipoproteine. Dupa ce sufera o degradare partiala, fragmentele de

lipoproteine sunt preluate de unele celule, ca hepatocitele, prin endocitoza. Aceste
fragmente sunt asociate cu compusii lipofili (hidrofobi), ce patrund in acest mod in
interiorul celulelor. Multi compusi sunt astfel distribuiti in diferite compartimente ale
organismului dupa preluare. (1)
Compusii organici se distribuie intre diferite componente ale sangelui si limfei
in functie de structurile lor (care sunt determinate pentru solubilitate). Astfe,
compusii puternic lipofili, se vor asocia cu lipoproteinele si membranele celulelor din
sange. Compusii polari vor avea tendinta sa se dizolve mai mult in apa, asociindu-se
intr-o mica masura cu lipoproteinele si membranele celulare. Prin urmare, pentru un
compus chimic ce a patruns in organism exista urmatoarele tipuri de centri spre care
acesta se poate indrepta:
Centrii de actiune (toxica) - in aceste regiuni compusii toxici interactioneaza
cu o macromolecula endogena (proteina sau ADN) sau o anumita structura ( de
exemplu membrana celulara), interactie urmata de aparitia efectelor toxice in intregul
organism (compusul chimic actioneaza la nivelul organismului). (1)
Centrii de metabolizare - metabolizarea xenobioticelor este realizata in acesti
centri cu ajutorul enzimelor. De obicei, in urma metabolizarii se

produce

detoxifierea organismului dar, in unele cazuri, are loc si cresterea efectului toxic al
compusului initial. (1)
Centrii de stocare - sunt zonele in care compusii chimici preluati de organism
se afla intr-o stare inerta din punct de vedere toxicologic. (1)

Centrii de excretie - pot fi excretafi compusii chimici originari sau produsii

lor de metabolizare (metaboliti, compusi de conjugare). (1)

2.1. Pielea
Este privita ca o bariera naturala impotriva agentilor agresivi. Desi
bioacumularea se petrece mai lent decat in alte tesuturi pielea reprezinta o ruta
importanta pentru intrarea agentilor straini in corp. Prima bariera o constituie stratul
epidermal care contine cheratina si un suport lipidic. Solventii organici pot trece
acesta bariera solubilizand constituentii lipidici. Foarte eficiente sunt moleculele ca
dimetil-sulfoxid, cloroform si metanol.(ex: DDT pudra are permeabilitate redusa, dar
cand este dizolvata in kerosen are o adsorbtie mare la niveleu pielii). (3) pg.72
Patologia asociata expunerii la substante ca difenil policlorurat si tetra cloro
dibenzo dioxina este data de hipercheratinizarea pielii si de degradarea progresiva a
glandelor sebacee. Pielea poate fi sursa unor enzime de grad I si II care pot
metaboliza substantele chimice ( UDP- uridine difosfat, glucoronosil-transferaza,
sulfataza) . Pielea mai poate suferii schimbari patologice cauzate de radiatia
ultravioleta provenita natural sau de la surse artificiale. Lumina Uv e impartita in
functie de lungimea de unda : UV A 320nm 400nm, UV B 290nm 320nm,
UV C <290nm absorbanta maxima a UV de catre proteine si ADN. Cu toate ca
puterea de absorbanta a UV creste exponential la lungimi de unda mai mari, provoaca
pagube mici sau chiar deloc, iar lumina UV devine un indicator al adsorbtiei
moleculare specifice. Expunerea indelungata la radiatie UV provoaca cancere variind
de la persoana la persoana si de pigmentatia pielii. (3) pg.72

2.2. Plamanii
La mamifere sistemul respirator e alcatuit din canalul nazo-faringian, regiunea
traheo-bronhiala si plamanul. Tractul superior are functia de a filtra particulele mari
si de a le retine in secretii mucoase. Particulele mari au tendinta sa se loveasca de
peretii tractului nazo-faringian, in schimb, particulele mai mici de 1m ajung in

tractul respirator de unde migreaza in regiunea pulmonara alcatuita din ramificatii ale
bronhiilor, ce ajung pana la diametrul de 0,5 1 mm si care se tremina cu sacii
alveolari si alveole pulmonare, insumand 80% din capacitatea totala a plamanului de
5,7 l. Substantele toxice absorbite de plaman sunt in general gaze, desi afectiunile
majore sunt cauzate de particule (alumino-silicate, asbest, plumb). (3) pg.73
Absorbtia gazelor de catre plaman e dependenta de solubilitatea acestora in
apa. Compusii ca acidul sulfuric si acidul clorhidric sunt foarte solubili in apa si sunt
absorbiti imediat de mucoasele tractului respirator. Conform legii lui Henry,
cantitatea de gaz dizolvat intr-un lichid e direct proportionala cu presiunea partiala a
gazului in faza gazoasa, pana cand se atinge saturatia in lichid. Gazele cu un raport
scazut gaz:sange ( O3 ) se echilibreaza rapid cu sangele, incarcarea sangelui fiind
limitata de rata fluxului de sange. In repaus cantitatea de aer inspirat si expirat e de
500 cm3, la adultii in repaus respiratia are o rata de 16 ori pe minut ceea ce inseamna
o rata totala a ventilatiei de aproximativ 8 litri/minut. . (3) pg.73

Ozonul produce o iritaie trectoare a sistemului respirator, dnd natere la

tuse, iritarea nasului i a gtului, scurtarea respiraiei i dureri de piept, cnd se
respir profund. Astfel, chiar persoanele tinere i sntoase sufer adesea de astfel de
simptome, atunci cnd fac micare n aer liber, precum mersul pe biciclet sau
jogging. (6) pag 37. Se estimeaz c expunerea ndelungat la nivele nalte de ozon
duce la mbtrnirea prematur a esuturilor plmnilor. La nivel molecular, ozonul
atac rapid substanele coninnd compui cu legturi C=C, aa cum apar n
esuturile plmnului.(6) pag 38.

Organizaia Mondial a Sntii (OMS), ca i majoritatea rilor, au legiferat

standarde care reglementeaz concentraiile atmosferice maxime de bioxid de sulf,
bioxid de azot si monoxid de carbon, precum i de ozon, iar n unele cazuri i sulful
total, deoarece toate aceste gaze au efecte asupra sntii, cnd sunt n concentraii
suficient de mari. Aceste valori sunt prezentate mai jos: (6) pag 38.
Standardul OMS de calitate a aerului pentru poluantii gazosi
Poluant

Standard O.M.S.

Perioada de timp

SO2

350 g/m3

1 ora

NO2

150 g/m3

24 ore

CO

30 mg/m3

1 ora

30 mg/m3

8 ore

150-200 g/m3

1 ora

100-120 g/m3

8 ore

O3

CO desi are solubilitate redusa in apa, afinitatea sa pentru hemoglobina face sa

fie rapid absorbit de sange. O3 si NO2 penetreaza plamanii unde isi exercita actiunea
toxica prin formarea de radicali liberi insolubili ca superoxizi, OH- , O2-. NO2 poate
vatama deasemenea prin formarea de acid azotic si azotos cu lichidul alveolar.
Prezenta xenobioticelor stimuleaza chemotactic si patologic activitatea sistemului
imunitar. Macrofagele implicate in activitatea fagocitara, elibereaza oxidanti
puternici, care, in combinatie cu procesul patologic pot creste potentialul de vatamare
a tesutului datorita activitatii oxidante ridicate. (3) pg.73
O serie de afectiuni respiratorii au fost legate de inhalarea de metale si compusi
ai metalelor proveniti din fum si vapori. Absorbtia Cd prin intermediul cailor
respiratorii poate reprezenta pana la 30% din totalul inglobat de catre un individ,
fumatorii asimiland o cantitate dubla de Cd din cauza fumului de tigara. CdO este
produs

in

timpul

fabricarii

bateriilor

electrice,

sticlei,

in

fabricarea

semiconductorilor si in urma galvanizarii. CdO se organizeaza in particule fine,

capabile sa ajunga pana la alveolele pulmonare si sa provoace edem pulmonar,
fibroza membranelor alveolare si emfizem. (3) pg.73-74
Cadmiul a fost gasit responsabil de producerea unei game largi de afectiuni
biochimice si fiziologice la oameni si animelele de laborator. Cd este un produs de
minerit obtinut prin topirea plumbului si zincului si poate fi gasit in sol datorita
insecticidelor si fungicidelor pe baza de Cd utilizate in agricultura .Cd este un metal
cancerigen, la care oamenii sunt expusi prin intermediul mancarii contaminate, apei
sau aerului. Expunerea cronica la Cd duce la nefrotoxicitate, osteoporoza, boli
cardiovasculare, necroza testiculara, cancer prostatic si testicular(Yu et al., 2007;
Diana, 2008). Organele tinta ale mamiferele expuse la Cd sunt testiculele, ficatul si
rinichii inlocuind multe dintre metalele antioxidante esentiale organismului precum
seleniu. Stresul oxidativ apare ca urmare a peroxidarii membranelor lipidice ale
organelor in urma acumularii cadmiului (4)
Carbonat de nichel (NiCO4) este un lichid volatil, foarte toxic, folosit la
rafinarea si placarea cu Ni. Poate provoca simptome variind de la greata, dureri in

piept, cianoza pana la colapsul respirator, edem cerebral sau chiar moartea.
Expunerile pe termen lung la compusii nichelului din rafinarii au fost corelate cu
cancerul nazal si pulmonar.
Inhalarea de compusi pe baza de Cr hexavalent ca CrO2-4 si bicromat Cr2O72rezultati in urma topirii Cr si a proceselor de palcare, provoaca iritatii bronhiale, la
expunerile de scurta durata , si cancer pulmonar la expunerile indelungate.
Expunerea la praful de beriliu (Be) din aer poate aparea in urma operatiilor de
fabricare a ceramicii si a aliajelor si in timpul extragerilor miniere. Particulele de Be
intra in aleveole unde genereaza granuloame care pot degenera in fibroza interstitiala.
(3) pg.73-74

2.3. Branhiile
Organismele acvatice pot fi expuse unor concentratii crescute de compusi
xenobiotici fie in urma unor emisii accidentale sau a unora continue, datorita
carora nivelul se pastreaza la valori crescute o perioada lunga de timp. Calea
principala de preluare este cea directa, prin piele si branhii. Produsii de
metabolizare sunt eliminati tot in apa, astfel ca bioconcentrarea este rezultatul net
al proceselor de preluare si eliminare a compusilor chimici de catre organism.(1)
Branhiile sunt principalele organe respiratorii ale animalelor acvatice si sunt
captusite de un epiteliu subtire, care are rol de a minimiza distanta dintre mediul
extern oxigenat si fluidele corpului. Variaza de la simple anexe ale pielii pana la
structuri elaborate, formate din numeroase falduri sau lamele, inchise intr-o camera
branhiala care e ventilata de un flux continuu de apa. Ca si plamanii, branhile sunt
organe ce asigura o suprafata cat mai mare pentru respiratie, fiind locul schimburilor
gazoase, contribuind si la reglarea unor functii ca reglarea presiunii osmotice sau
ionice. La pestii de apa dulce electrolitii sunt transportati de celule transportoare la
epiteliul branhial, iar excesul de apa acumulat prin intermediul osmozei este excretat
cu ajutorul rinichilor sau protorinichilor. Pestii marini beau apa de mare pentru a

compensa pierderea de apa prin osmoza iar epiteliul intestinal va elimina excesul de
electroliti. (3)
La nivelul branhiilor, schimbul de gaze si substante dizolvate este facilitata de
un contracurent, in care circulatia sangelui prin lamele este opusa debitului de apa
trecut pe la suprafata branhiilor. Curgerea laminara creaza un strat limita care adera
intim la suprafata branhiala. Multe din reactiile chimice aparute la suprafata
branhiilor sunt determinate de chimia stratului bariera. Bistratul lipidic care intra in
componenta membranelor celulare include fosfolipide, glicolipide si colesterol.
Capetele hidrofile ale membranei fosfolipidice sunt bogate in compusi azotati care
actioneaza ca liant in legarea cationilor, in special a urmelor de metale. (3) pag.74-75
Difuzia pasiva reprezinta calea principala de preluare a compusilor organici din
mediul abiotic. Ea are loc datorita diferentei dintre fugacitatile unui compus in cele
doua medii: mediul apos si mediul biologic. Procesul de bioconcentrare nu poate fi
descris pe baza existentei unui gradient de concentratie intre cele doua medii, deoarece
in acest mod nu se poate explica atingerea unor concentratii mai mari in

organism

fata de mediul abiotic, cand concentratiile in acesta din urma sunt mai mici decat in
organism. (1)

Fugacitatea unui compus este data de raportul dintre concentratia sa intr-un

anumit compartiment si capacitatea de stocare a sa in acel compartiment. Compusii
organici au concentratii mici in apa, dar si capacitatea lor de stocare in apa este mica
(datorita solubilitatii reduse a lor), astfel ca fugacitatea are valori relativ mari.

Concentratia acestor compusi in organism este in mod normal mica insa, cum
capacitatea lor de stocare este mare, se obtine o valoare mica pentru fugacitatea
acestora. Astfel, compusii chimici vor difuza in sensul scaderii fugacitatii lor, din apa in
organism. Alte mecanisme de preluare a compusilor chimici din mediu sunt:
traversarea membranei biologice mediata de un transportor, permeabilizare prin
compexare, traversarea membranei prin canale ionice, prin pompe ionice sau prin
endocitoza.
Incorporate in membrana sunt proteine, care pot traversa membrana externa
indeplinand roluri de canal ionic, transportand urme de metale in plus fata de
electrolitii fiziologici. S-a aratat ca ionu H+ si alti ioni metalici concureaza cu ionul
Ca2+ pentru a forma legaturi la suprafata branhiilor. Ca2+ este responsabil cu
mentinerea integritatii legaturilor celulare in epiteliul branhial, iar carenta lui poate
marii permeabilitatea pentru electroliti si apa. Efectele fiziologice ale aluminiului
asupra branhiilor sunt intens studiate datorita toxicitatii pe care o are la pestii de apa
dulce. Aluminiul are o speciatie ridicata cu compusii hidroxilici in special la valori
ridicate ale Ph-ului. Aceste conditii se pot intalnii la suprafata branhiilor, unde
hidroxidul de Al [Al(OH3)] se poate precipita. Poate aparea combinarea aluminiului
cu compusi functionali de pe suprafata membranelor celulare ca fosfotidilcolina si
fosfotidilserina. Expunerea la aluminiu este asociata cu o pierdere de ioni de Na2+ si
Cl- prin epiteliul branhiilor. Fierul actioneaza similar si poate altera permeabilitatea
membranara prin formarea de compusi ferici insolubili. (3) pag.76
Bioacumularea produsilor chimici din apa se realizeaza printr-o serie de
procese chimice, fizice si biologice complexe, care incep,de exemplu, cu difuzia
pasiva din apa, la nivelul branhiilor, in sistemul circulator pana la depunerea in
tesutul adipos. Conell,W 1988 Bioaccumulation of chemicals by aquatic organisms
(5)
Cele mai rapide bioacumulate sunt clorohidrocarburile si hidrocarburile
policilcice aromatice (PAH), care au KO/W cuprins intre 2 6,5. Bioconcentrarea
poate fi caracterizata prin factorul de bioconcentrare, respectiv Concentratia in

organism/Concentratia in apa, pana la echilibru. Preluarea compusilor lipofilici la

organismele acvatice, are loc pe calea intrarii oxigenului in organism, branhiile fiind
structurile primare implicate in aceste procese, apoi sistemul circulator ce ajuta in
transportul compusilor spre tesuturile grase unde sunt retinuti. Ulterior compusii fiind
metabolizati in compusi mai oxigenati si solubili in apa si apoi excretati. Conell,W
1988 Bioaccumulation of chemicals by aquatic organisms (5)
Numerosi cecetatori au aratat ca ratele de preluare a hidrocarburilor difera de la
o specie la alta datorita ratelor de filtrare diferita si diferentelor de continuturi lipidice
si

habitat.

Augenfeld,J,M1980

Effects

of

Prudhoe

Bay

crude

oil

contamination,Capuzzo J,M,1987 Biological effects of petroleum hydrocarbons.Clark

R.C.,Finley J.S. 1974 (5)
Lee et al. au detectat in tesutul branhial la Mytilus edulis concentratiile cele
mai mari de naftalina si benzo--piren (marcate radioactiv) in timpul experimentului.
Ei au emis ipoteza ca branhiile sunt structura principala implicata in preluarea
hidrocarburilor, datorita prezentei unui strat micelar la nivelul tesutului branhial,
capabil sa absoarba compusii hidrofobici de genul hidrocarburilor. Odata adsorbite,
hidrocarburile pot fi transferate si altor tesuturi. Transferate apoi in apa de mare
curata,

midiile

elimina

rapid

atat

naftalina

cat

si

benzo--

pirenul.Lee,R.F;Sauerheber,R and Benson 1972 Petroleum hydrocarbons (5)

Experimentul lui Neff pe Rangia cuneata prezinta acumularea si eliminarea a 4
compusi poliaromatici: fenantren, naftalina, crisen si benzo alfa- piren. Dintre
acestia fenantrenul a fost absorbit cel mai rapid dar eliminat cel mai lent. In schimb
naftalina, desi preluata cu rapiditate, a fost eliminata aproape la fel de rapid, astfel ca
acumularea neta a fost redusa. Autorul sugereaza ca preluarea si acumularea
hidrocarburilor petroliere sunt dependente de solubilitatea si coeficientii de partitie
octanol/apa caracteristici hidrocarburilor specifice. Din cei 4 compusi urmariti,
naftalina are solubilitatea cea mai mare, si coeficientul K OW favorizeaza eliberarea
rapida atunci cand concentratia din mediu scade la valori de fond. Benzo alfa-

pirenul are o solubilitate scazuta, nu este usor accesibil, dar K OW favorizeaza

eliminarea sa lenta dupa adsorbire.Neff J.M.1985 (5)
Si alte studii privind acumularea compusilor aromatici la bivalvele marine au pus in
evidenta faptul ca moleculele aromatice cu greutate moleculara mica, cum sunt
naftalina si alkil-naftalina se acumuleaza si se elimina rapid, spre deosebire de
moleculele aromatice cu greutate moleculara mare ca: antracen, fluoren, benzo-alfaantracen si benzo-alfa-piren, care prezinta o rata scazuta de prelucrare si o eliminare
lenta. (5)
Eliminarea compusilor lipofilici din sistemele biologice are loc prin
convertirea lor ca urmare a proceselor de reducere, oxidare, hidroliza si conjugare in
metaboliti mai solubili in apa. Aceasta se realizeaza de catre oxigenaza cu functie
mixta, mediata de citocromul P450, care oxideaza astfel de compusi lipofilici prin
procesele de hidroxilare, O-dealkilare, N- dealkilare si epoxidare. Metabolizarea unor
compusi poate duce la formarea de metaboliti mai toxici decat compusul initial, care
datorita legarii lor de macromolecule celulare pot poseda un efect carcinogen,
mutagen sau teratogen. (5) pag 55-57

2.4.Sistemul digestiv
Principala functie a sistemului digestiv este aceea a absorbtiei moleculare, in
acest sens intestinul subtire avand o suprafata desfasurata de 240 m2, dubla fata de
cea a plamanului. Absorbtia substantelor toxice poate aparea pe intreaga lungime a
tractului digestiv inclusiv prin intermediul orificiului bucal si anal, desi la majoritatea
mamiferelor absorbtia se face la nivelul intestinului subtire. Sistemul gastro intestinal
are mecanisme specializate de transport pentru anumiti nutrienti ca grasimile,
carbohidratii, aminoacizi si Na,Fe,Ca. Odata patrunse in sistemul gastro-intestinal
substantele chimice se afla intr-un mediu hidric cu Ph variabil, absorbtia lor fiind
puternic influentata de Ph. In cazul unui agent toxic organic (baza sau acid) acesta
este foarte probabil sa fie absorbit ca forma nepolara a acidului sau bazei conjugate.
Acizii organici disociaza in anionul A- si cationul H+, iar bazele organice se combina

cu cationii H+ rezultand BH+. Rata disocierii e influentata de pH si de constanta de

disociere Ka dupa ecuatia Henderson Hasselbach.
HA H+ + A-

HB+ H+ + B

Ka =

Ka =

log Ka = log [

log Ka = log ]

log Ka = log (H+) + log

log Ka = log (H+) + log

-log (H+) = -log Ka + log

-log (H+) = -log Ka + log

pH = pKa + log

pH = pKa + log

Acizi slabi

Baze slabe

-relatia dintre constanta de disociere pKa si pH pentru acizi si baze slabePentru un acid slab precum acidul benzoic, cu o constanta de disociere pKa =4,
raportul dintre forma ionizata si forma neionizata in stomac, la pH 2, va fi 100 si va
favoriza absorbtia. Acelasi raport intre forma ionizata si cea neionizata dar la un pH
6, in intestinul subtire va fi de 0,01 si nu va favoriza absorbtia. Cu toate acestea,
suprafata mare a intestinului subtire favorizeaza absorbtia unor cantitati de acid
benzoic. (3) pag.77

3. Absorbtia agentilor toxici de catre plante

In ecosistemele terestre plantele au cea mai mare biomasa si de aceea
bioacumularea in acesti producatori primari prezinta o importanta deosebita. Cele mai
multe studii au vizat procesele de preluare, transport si metabolism a compusilor
chimici de tipul erbicidelor organice, fungicidelor, insecticidelor si metalelor. (7),
pag 24
Utilizarea unor cantiti tot mai mari de ingraminte chimice, recurgerea la aplicarea
de pesticide i insecticide au condus la obinerea de producii agricole spectaculoase.

Din nefericire, creterea productivitii a fost nsoit de contaminarea solurilor i a

mediului acvatic cu diferii compui - azot, fosfor, DDT.

Plantele transmit semnale mai subtile, dar foarte importante n determinarea

calitii mediului. n ultimele decenii, studiile asupra plantelor au fost aprofundate
prin analize morfologice, biochimice i chiar simple observaii, descoperindu-se
parametrii importani ai sntii mediului nconjurtor. (7)
Un organism vegetal poate fi considerat:

reactor la aciunea unui poluant;

acumulator al acestuia (nu este necesar s manifeste anumite simptome,

dar trebuie s acumuleze poluantul, prezentnd o concentraie mult crescut a

acestuia n esuturi).
n general, plantele expuse la concentraii sczute de poluani absorb o
cantitate mai mare din acetia dect cele expuse la concentraii mari care sunt toxice
i afecteaz grav sau chiar omoar diferite pri ale plantei. (7)
Un biomonitor furnizeaz informaii asupra prezenei poluantului i este de
ateptat s ofere informaii adiionale i asupra efectelor corelate cu intensitatea
expunerii la aciunea acestuia. Bioacumularea unui poluant n esuturi este
considerat un biomonitor. Exist diferene ntre specii precum i ntre indivizii
aceleiai specii n ceea ce privete capacitatea genetic de a prelua, absorbi, asimila i
elabora reacii de rspuns la diveri poluani atmosferici. De aceea, speciile i
indivizii prezint sensibiliti diferite la aciunea acestora din urm. (7)

Un bioindicator reprezint un organism sau un rspuns biologic care relev

prezena unui anume poluant prin apariia unor simptome tipice sau a unor
manifestri cuantificabile. Pentru a putea fi utilizat ca bioindicator, o specie trebuie
s prezinte o reacie caracteristic la aciunea unui anume poluant, care s nu fie
confundat cu cea produs de ali factori de stres. (7), pag 24

Poluant

Caile de intrare a poluantilor in plante

SO2

90% absorbit de stomate

NH3/NH4

depozitele hidratate de azot sunt absorbite de

radacini, NH3 intra prin stomatele frunzelor
unde se dizolva si formeaza NH4

patrunde prin stomate in frunzele batrane unde

se dizolva in apa din parenchimul frunzei si
transportat la marginile frunzei cu ajutorul
vaporilor

rezultati

in

urma

transpiratiei,

provocand necroze
H2O2

patrunde sub forma de gaz prin intermediul

stomatelor, si depozitat in spatiul apoplastic al
peretilor celulari

Substante organice

mono-tetra clorobifenilii sunt transmisibili la

semivolatile

plante sub forma gazoasa in timp ce policlorobifenilii sunt absorbiti in forma solida si
aerosoli, acumulandu-se sub forma de depozite
si revolatilizate si timpul sezonului cald

Plantele sunt expuse contaminantilor in diferite moduri: dupa aplicarea

pesticidelor, datorita depunerilor atmosferice umede si uscate, utilizarii in agricultura
a namolului rezultat dupa epurarea apelor, depunerii deseurilor toxice si contaminarii
solului si apelor subterane. Modalitatile de expunere, biodisponibilitatea si procesele
de acumulare in ecosistemele terestre sunt deosebit de complicate. (1)
Agentii toxici pot invada plantele prin intermediul sistemului radicular si/sau
prin sistemul foliar, unde se pot fixa de stratul de ceara de la suprafata frunzelor.
Viteza de absorbtie si acumulare variaza in functie de proprietatile fizico-chimice ale
poluantului cat si de conditiile de mediu: temperatura, umiditate, UV, grosimea
stratului protector al frunzei. Plantele vascularizate pot absorbi prin intermediul
stomatelor, substantele poluante aflate in stare gazoasa, sau in depozite uscate sau
hidratate in cazul SO2, NH3, H2O2, HF si pentru unele substante organice semivolatile
ca PCBs, DDT si lindan. (3) pag.78

3.1. Preluarea radiculara

Compusii hidrofili sunt de obicei preluati de catre radacini odata cu apa.
Principala cale de transport a compusilor preluati este cea a sevei brute, prin vasele
lemnoase (xilem); transportul este indus de procesul de evapotranspiratie. Apa este
absorbita din 'solutia din sol' in tesutul exterior al radacinii si, miscandu-se spre
centrul radacinii intalneste endodermul. Pentru a ajunge la xilem, compusii chimici
trebuie sa strabata endodermul si aceasta trecere prin porii tesutului depinde de
polaritatea si conformatia lor moleculara. Unii compusi pot fi adsorbiti, legati sau
metabolizati in endoderm, inainte de a ajunge la xilem. Cei care ajung la xilem vor fi
transportati spre organele supraterane ale plantei. In timpul transportului ei pot
reactiona cu diferitele tesuturi ale plantei sau pot fi distribuiti intre acestea. in plus, se
pot degrada sau pot fi eliberati in atmosfera prin stomate. (1)

3.2. Preluarea foliara

Partile supraterane ale plantei, inclusiv frunzele, sunt acoperite de
epiderma, un tesut protector ce actioneaza ca o bariera in ceea ce priveste
pierderea apei de catre planta si patrunderea particulelor din atmosfera. Suprafata
frunzelor prezinta de asemenea stomate, mici pori care se deschid si se inchid in
functie de conditiile de mediu. Ele joaca un rol important in procesele de schimb de
gaze si in eliminarea apei prin transpiratie. Compusii chimici pot patrunde in
frunze prin epiderma sau prin stomate. Caile de preluare foliara a contaminantilor
constau in:
-aplicarea directa, ca in cazul utilizarii pesticidelor;
-depunerea odata cu praful sau materia particulata din atmosfera;
-preluarea din faza gazoasa prin absorbtie epidermica sau prin stomate. (1)
Compusii chimici depusi pe frunze pot fi distribuiti la nivelul epidermei, de
unde pot fi apoi deplasati. Compusii cu o solubilitate mare in apa sunt mai degraba
transportati in planta prin vasele liberiene (floemul) odata cu seva elaborata, de la
frunze la celelalte organe, in timp ce compusii mai hidrofobi tind sa ramana in
epiderma frunzelor. Permeabilitatea lor prin epiderma prezinta mari variatii in
functie de specie si conditiile de mediu. Compusii chimici care patrund in planta
prin stomate au in general o presiune de vapori (Pv) mare. Cei cu valori mici ale
presiunii de vapori si solubilitatii in apa tind sa se adsoarba puternic pe aerosoli si
particulele de sol, particule ce pot fi depozitate pe partile supraterane ale plantei si
constituie,

prin

urmare,

cale

de

expunere

pentru

alte

organisme.

Fractiuni importante din unii compusi chimici precum dioxinele, hidrocarburile

aromatice polinucleare si derivatii policlorobifenilici pot fi astfel asociate cu
particulele de aerosol si se pot depune cu usurinta. (1)
Depunerea de particule pe supratata foliara determina si absorbtia altor
poluanti ca metalele grele, radionuclee, hidrocarburi policiclice aromatice si sulf care
se leaga de cuticulele frunzelor. (Veijalainen 1988). Colmatarea porilor stomatelor de
catre pulberi fine pot afecta ciclurile apei si al dioxidului de carbon ale plantei. Apele

pluviale pot determina levigarea elementelor de pe suprafata plantelor, care mai apoi
sunt transferate in sol unde ajung in contact cu sistemul radicular al plantei. (3) pag
78
Dintre posibilitile de evaluare i biosupraveghere prin biointegrare,
biomarkeri, bioindicatori i bioacumulatori, arborii ofer o gam larg de informaii
ca bioindicatori sau bioacumulatori: curente; sintetice; complexe; perene; spaiale.
Informaiile curente se observ pe frunzele arborilor bioindicatori sub forma de: i)
pete mici de arsuri, care apar imediat dup ploile acide; ii) decolorri pale, restrnse
care avertizeaz asupra apariiei polurii cu dioxid de sulf, clor, fluor, ozon, plumb;
iii) decolorri din ce n ce mai evidente i mai mari, care se transform n necroze i
se extind, odat cu creterea coninutului de noxe n aer; iv) subdezvoltarea frunzelor
i malformri cnd noxele ating pragul de toxicitate. Aceste informaii sunt oferite pe
parcursul ntregului sezon de vegetaie n cazul foioaselor sau al rinoaselor cu
frunze cztoare, sau n permanen, n cazul rinoaselor ori a foioaselor cu frunze
sempervirescente, cum este Viburnum ritidophylum. (8)
Arborii nregistreaz i respectiv acumuleaz secund de secund, zi de zi, lun
de lun, alterrile morfologice (bioindicatorii) ori biochimice (bioacumulatorii),
reflectnd sintetic, de exemplu stadiul i evoluia procesului de ptrundere a
dioxidului de sulf prin stomate, de desprindere a magneziului din molecula clorofilei
(n condiii de umiditate ridicat) i transformarea ei n feofitina, ori chiar (n
concentraii mrite) desprinderea fitolului i formarea de feoforbid. (8)
Informaiile asigurate de arbori sunt polivalente. Aceeai frunz a unui arbore
bioindicator poate evidenia n funcie de felul decolorrilor ori necrozrilor, efectele
urmtoarelor tipuri de substane: i) sulfului - internervare; ii) clorului i fluorului perimetrale i apicale cu ndoirea marginilor frunzelor; iii) ozonului - verde deschise
difuze, luminoase pn la brun-rocate pe partea superioar a frunzei; iv) plumbului cenuii, negricioase la baza limbului. (8)
Aceeai prob de frunze a unui arbore bioacumulator prin analize foliare ne
indic cu mare precizie: i) efectele toxice ale sulfului, clorului, fluorului, plumbului,

cuprului, zincului, natriului, manganului etc.; ii) nivelurile optime, critice ori de
caren a substanelor nutritive - azotul, fosforul, potasiul, calciul, magneziul - i
chiar a microelementelor - fierul, borul, cuprul, zincul, cobaltul, molibdenul,
manganul i clorul. (8)

Informatiile arborilor sunt perene, deoarece ct timp triesc, bioindicatorii i

bioacumulatorii relev cu fidelitate i consecven, prin analize foliare - calitatea
aerului i prin simptomele foliare - efectele noxelor asupra arborilor. Frunzele
decolorate, sau necrozate, ale arborilor bioindicatori, evideniaz suprafaa pdurilor
expuse efectelor poluantului i evoluia n timp i spaiu a acestor efecte. Ca
bioindicatori, arborii prezint pe frunze simptome specifice ale subnutriiei, cnd
substanele nutritive coboar la nivelul carenei la: N, P, K, Ca, Mg, ori urc la pragul
de toxicitate cu S, Cl, F, O3, Pb. Aceste simptome foliare indic nu numai substana

toxic sau la nivelul carenei ci i intensitatea procesului de toxicitate ori de caren,

ceea ce permite prognoze utile pentru prevenirea extinderii efectelor negative.(8) pag
69
O3 afecteaza cuticula frunzelor reactionand cu acizii grasi si astfel deteriorand
stratul de ceara. Respiratia plantei nu este afectata de O 3, acesta patrunde prin porii
stomatelor in camera substomatala, unde are loc o scadere a concentratiei de O 3,
indicand un anumit grad de detoxifiere. Produsii fotooxidati se absorb prin stomate
unde se dizolva in lichidul extracelular. (3) pag78
Simptomele cauzate de poluarea cu ozon troposferic apar de obicei intre
nervurile de pe suprafata anterioara a frunzelor batrane si adulte, dar pot afecta si
ambele suprafete foliare in cazul unor specii. Tipul si severitatea intoxicatiei cu O3
depinde de anumiti factori precum timpul de expunere si concentratia in mediu a
poluantului, factorii climatici si genotipul plantei. Simptomatica poate aparea la
anumite specii in anumite conditii , acestea putand diferii de la o specie la alta. In
urma expunerilor zilnice la O3 troposferic simptomele clasice de pistruiala, patare,
bronzare si inrosire a suprafetei foliare sunt treptat mascate de necroza si cloroza. (9)

necroza frunzei de vita-de-vie

cloroza frunzei de dovleac

Peroxil-acetil nitrat-ul este transportat de vaporii rezultati in urma respiratiei

plantei, afectand gruparile sulfat din componenta proteinelor cat si bistratul
fosfolipidic. Aproape 90% din totalul SO2 e absorbit prin stomate, ceea ce reprezinta
un fenomen anormal, absorbtia SO2 realizandu-se prin intermediul sistemului
radicular. (3) pag78
Concentraia metalelor n plante variaz n funcie de tipul esutului vegetal:
fruct, frunz, tulpin sau rdcin. Fructele i cartofii acumuleaz n msur mai mic

metalele, n timp ce legumele (salata de exemplu) pot acumula concentraii mari de

metale. n urma unor experimente s-au observat reacii diferite ale unor specii de
plante la prezena metalelor. Plante ca varza, elina, sfecla, porumbul, piersicul
colecteaz mult plumb, iar Allium cepa - ceapa, poate acumula mercur mai mult dect
alte plante. (7) pag.26-27
Cuprul se acumuleaz n principal n legumele rdcinoase (morcov, elin,
ptrunjel, pstrnac). Fructele proaspete pot conine maximum 0,5 mg/kg As, 0,05
mg/kg Cd, 0,5 mg/kg Pb, 5 mg/kg Zn, 5 mg/kg Cu, 0,05 mg/kg Hg. (7)
Legumele proaspete pot conine pn la 0,5 mg/kg Pb, 0,5 mg/kg As, 0,1
mg/kg Cd, 0,05 mg/kg Hg, 5,0 mg/kg Cu. n scopul evalurii toxicitii unui compus,
se apreciaz n final efectele poluanilor asupra populaiilor, comunitilor i
ntregului ecosistem. n schem se pot observa nivelurile la care acioneaz un
poluant, ncepnd cu structura celular pn la nivelurile supraindividuale de
organizare a viului - populaii, biocenoze, ecosisteme. Avnd n vedere c att
structurile individuale ct i cele supraindividuale sunt sisteme deschise, efectund
continuu schimb de materie i energie cu mediul, este lesne de neles rapiditatea i
complexitatea mijloacelor cu care poate aciona un poluant asupra oricrei fiine vii.

- Acumularea unor metale grele n frunze de pin - seciune microscopic

- Depuneri solide n frunz de pin - vedere la microscop

(TIIN I COMPLEXITATE COALA PE ROI pag.26-27)

4. Bioacumularea la nivel celular si tisular

Rareori substantele toxice pot manifesta efecte toxice fara a intra in masa
tisulara. De exemplu, productia in exces de mucus la pesti poate aparea ca urmare a
prezentei aluminiului pe suprafata epiteliului branhial, inhiband astfel schimbul de
gaze. In general agentii toxici trebuie sa traverseze atat compartimentul hidric cat si
cel lipidic. Prima bariera in calea pouantilor o reprezinta membrana plasmatica, o
membrana tipica de 80 grosime, alcatuita dintr-un bistrat fosfolipidic, pe suprafata
careia se diverse proteine transportoare. (3)
Apa si moleculele organice de mici dimensiuni pot difuza de-a lungul
membranei prin intermediul unor pori mici (0,2-0,4nm). Regiunile nepolare ale
lipidelor si proteinelor sunt alcatuite din lungi lanturi carbohidrate, in cazul lipidelor,
si din lanturile de aminoacizi ce intra in compozitia proteinelor, acestea reprezentand
cea mai mare parte a membranei. Capetele hidrofile ale fosfolipidelor si lanturile
polare ale aminoacizilor costituenti ai proteinelor, constitue suprafata membranara,
care asigura legatura intre compartimentele hidrice din ambele medii (intren/extern).
(3) pag78-79

Compusii organici nepolari sunt foarte solubili in lipide si pot traversa

membrana plasmatica cu usurinta. Acesta tendinta de a migra din faza apoasa in faza
lipidica se numeste hidrofobicitate si e influentata de coeficientul Octanol : Apa.
Trecerea substantelor chimice prin stratul lipidic al membranei este limitat in
principal de masa moleculara si de solubilitatea compusului. Alti factori ar fi
grosimea si suprafata membranei. Legea lui Fick defineste procesul general al
difuziei:

unde:
D este rata difuziei, C0/Ci gradientul de concentratie, MW greutatea moleculara, s
solubilitatea in membrana, A suprafata membranara, d grosimea membranei.
In tesuturile respiratorii ca branhiile si plamanii, solubilitatea substantelor
chimice in membrana poate deveni mai putin importanta datorita suprafetei
membranare mari (A) si a grosimii mici (d), iar la animalele terestre s e reprezentat
de solubilitatea compusului in sange. (3) pag 80

4.1 Modelul mono-compartimentat

Bioacumularea unei substante toxice de catre un organism, poate fi scrisa sub
forma unei ecuatii de echilibru a maselor, unde rata neta de acumulare este diferenta
dintre rata de bioacumulare si rata de excretie.
CB

CM

(1)

CB,CM concentratiile toxice in corp, respectiv in mediu

K1, K2 constantele de acumulare si de eliminare

B = k1Cm k2Cb

(2) unde CB concentratia substantei toxice in organism;

CM concentratia substantei in mediu, K1,K2 constantele de acumulare si de

excretie
Integrarea relatiei 2 va rezulta:

CB =

CM (1-

) unde CB - este concentratia substantei toxice in organism la

momentul t
La concentratii scazute ale agentului toxic, bioacumularea ramane un proces de
prim plan, chiar daca rata de absorbtie e proportionala cu concentratia din mediu. Pe
masura ce concentratia agentului toxic creste, se atinge o faza de stagnare unde rata
de acumulare se apropie de rata de excretie, si bioacumularea substantei toxice de
catre organism ajunge in faza de platou. ( fig 3.5)
k1Cm = k2CB

si

=k1CM k2CB = 0

In acest moment sistemul se afla intr-o stare de mobilitate 0. (3) pag 81

Urmarind in continuare evolutia expunerii, rata expunerii K1CM, ajungand la 0, rata
de eliminare devine:
= -k2CB

, si daca e integrata CB = C0e-k2t unde C0 este concentratia in

organism la inceputul procesului de eliminare.

Forma logaritmica a ecuatiei: log CB = log C0
egala cu k2 /2,3 (fig 3.6)

, graficul fiind linie abrupta

Alt mod in care ar putea fi exprimata aceasta informatie ar fi timpul biologic de

injumatatire, (t

).

Acesta reprezinta timpul necesar unui organism sa elimine

jumatate din cantitatea de substanta toxica din organism. Intr-un model mono
compartimentat reprezinta timpul in care C0 este redus cu jumatate. Prin urmare:
ln

= lnC0 kt

si

t=

La organismele pluricelulare, modelul mono compartimentat este un caz special care

poate fi aproximat numai sub anumite circumstante, de exemplu a) unde substanta
toxica ramane neschimbata in sistemul circulator si nu este ,(sau foarte putin)
absorbita de catre tesuturi, sau b) unde substanta toxica difuzeza liber din sange in
tesuturi, fara a intampina limitari ale ratei de absorbtie. (3) pag 83.

4.2. Modelul dublu compartimentat

De regula, curba timp-curs a concentratiei substantei toxice in plasma, dupa
o introducere rapida ( prin injectare), este mai degraba o curba decat o linie dreapta.
O astfel de traiectorie curba este rezultatul distributiei toxifiantului in mai multe
compartimente. Cel mai simplu model este cel dublu-compartimentat, unde substanta
toxica se raspandeste rapid in plasma si tesuturi, dar transformarea metabolica si
excretia se produc lent. Ecuatia diferentiala pentru acest model este:
= k21CT k12CP k2CP unde :
Cp , CT concentratiile substatei toxice in

plasma si tesut

K2 = (ke + km); si ke constanta de eliminare

km constanta de metabolizare
k12 si k21 constantele pentru distributia din plasma in tesut, si din tesut in plasma
fig 3.7
Integrarea relatiei va rezulta:

CP = Ae-t + Be-t unde A,B, si sunt constantele

complexe ale k12, k21, si k2, in alte cuvinte,

A = C0 x ( k12) /

B = C0 x (k12 ) /

si

+ = k12 + k21 + k2s

O reprezentare grafica a CP versus timp, rezulta o curba bifazica, cu doua portiuni
liniare, o faza de distributie abrupta cu graficul , si o faza de eliminare superficiala
avand graficul ( figura 3.8 )
In graficul curbei integrate, portiunea initiala reprezinta atat distributia cat si
eliminarea, pe cand portiunile terminale reprezinta numai eliminarea. Curba de
eliminare poate fi extrapolata la t=0, si poate fi separata de restul graficului pentru a
releva numai caracteristicile graficului de distributie.A si B sunt coordonatele fazelor
de distributie si eliminare., , A si B pot fi derivate grafic iar de la la aceste valori
k12 , k21 si k2 pot fi determinate dupa cum urmeaza:
K21 =

k12 = + k21(-k2) ;

k2 =

Capacitatea unei substante de a migra din sange in diferite compartimente

tisulare se datoreaza caracteristicilor fizico-chimice. O molecula hidrofila e mult mai
probabil sa ramana in fluxul sanguin, pe cand moleculele mici, hidrofobe vor fi rapid
distribuite catre tesuturile lipidice. Acest fenomen e caracteristic conceptului de
volum de distributie. (3) pag 83-85

4.2 Volumul de distributie

Daca o doza cunoscuta de agent toxic este introdusa in fluxul sanguin al unui
organism, putem estima volumul ocupat de substanta toxica masurand concentratia
substantei toxice la echilibru in sange, dar inainte de a difuza in alte tesuturi. Pentru
un model mono compartimentat, volumul de distributie,Vd, poate fi calculat:
Vd =

unde C0 este concentratia substantei toxice la momentul 0

Volumul de distributie este o masurare ipotetica deoarece poate descrie volume

mult mai mari. Ca atare este mai corect sa se exprime ca volumul aparent de
distributie. O valoare ridicata a Vd indica prezenta substantelor hidrofobe care au

legaturi puternice cu proteine si lipide, iar substantele cu proprietati slabe de legare

va indica un volum de distributie scazut.
Analiza concentratiilor substantelor toxice din compartimentele mari de mediu,
( apa, sediment, bentos, plancton) se poate realiza direct, prin prelevarea de probe din
mediu, iar mobilitatea sistemului (rata constantelor) poate fi estimata cu o serie de
metode ca: fluxul de izotopi, estimarea fugacitatii, si estimari bazate pe analiza
substantelor toxice in diferite medii de-a lungul timpului.(3) pag 86

4.3 Concentratia letala

Pentru anumite substante chimice, toxicitatea relativa poate fi influentata de
caracteristicile fizico-chimice ale acestora. O substanta cu o potenta toxica scazuta,
dar cu o rata de acumulate mare, poate emite simptome toxice mai rapid decat un
agent cu toxicitate ridicata dar cu o bioacumulare lenta. In toxicologia acvatica,
concentratia letala e definita de concentratia molara a substantei toxice in organism la
momentul decesului. Datele arata ca substantele chimice cu un raport octanol apa K
o/w

ridicat, au o concentratile letala ridicata la organismele cu continut bogat in

grasimi. In situatiile in care bioacumularea se datoreaza in special din hrana, pentru o

perioada de timp t, si la o concentratie a agentului toxic c, supravietuirea poate fi
exprimata prin: (3) pag 90

S(t,c) =
o

unde S(t,c) - timpul de supravietuire exprimat in zile, la

concentratie externa c, - rata mortalitatii

naturale (zile-1), LC50(t) concentratia letala mediana, b panta functiei de

supravietuire.
Bioacumularea poate fi descrisa si de ecuatia de elimiare a modelului
monocompartimentat:
D(t,c) = (k1 / k2) = (1-

) unde D(t,c) concentratia substantei toxice in organism

in urma expunerii unui numar de zile (t), la o constanta (b) a concentratiei (c) in

hrana, k1 constanta de acumulare (zile -1), k2 constanta de eliminare (zile -1). In

acest caz, relatia dintre timp si toxicitate poate fi exprimata:
LC50(t) =

si LC50 = LBB(k2/k1)

unde:

LC50 ultima valoare a LC50 , LBB(letal body burden) concentratia letala

LC50(t) este concentratia letala mediana dupa un numar t de zile de expunere
(3) pag 92

Figura 3.11 arata consecintele schimbarii diferitilor parametrii, efectuate in studiul

toxocokinetic (3) pag 86.

Bibliografie:
- Abd El-Rahman El-Shahat; Attia Gabr; Abdel-Raheim Meki & El-Saed Mehana
Altered Testicular Morphology and Oxidative Stress Induced by Cadmium in
Experimental Rats and Protective Effect of Simultaneous Green Tea Extract 2009
- Alina Senegeac, ,Fenomenul de poluare. Bioacumularea poluanilor n plante 2009
(7)
- Bolea A V, Danut Chira, Popa M, Mantale C, Pepelea D, Gancz V, Surdu A,
Iacoban C. - ARBORII BIOINDICATORI SI BIOACUMULATORI DE SINTEZA
N ECOSISTEMUL FORESTIER (8)
- David A. Wright; Pamela Welbourn Environmental Toxicology. cap.Routes and
kinetics of toxicant uptake (3)
- Tofan L., 2004 - Studiul adaptarilor fiziologice la specii reprezentative de moluste
bivalve din Marea Neagra in conditii normale si in prezenta unor factori de stres cu
caracter cronic pag 55-57 (5)
-http://www.scritube.com/geografie/ecologie/PROCESELE-DE-BIOACUMULAREBIOC32559.php (1)
- http://www.naturalist.ro/stiinta-si-tehnologie/poluanti-organici-persistenti-2/

(2)

- http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0717-95022009000300020 (4)
http://www.spms.pub.ro/fisiere/depoluare/curs/cap02.pdf (6)
http://www.ars.usda.gov/Main/docs.htm?docid=12462

(9)

Metode de anticipare a toxicitii

Relaii cantitative structur-activitate

Relaiile cantitative structur-activitate (QSAR) sunt modele cantitative care se

refer la variaia n msurile de activitate ntr-o serie de compui chimici, a variaiei
n structura chimic ntre compuii n serie. Utilizarea QSAR n studiu i identificarea
unor poteniale substane chimice toxice primete o atenie sporit, dup cum o
demonstreaz mai multe comentarii recente (de exemplu, McKinney, 1985; Hansch,
1985; Enslein, 1984; Birge i Cassidy, 1983).
Dei majoritatea larg aplicate pentru proiectarea de droguri, modelele QSAR
sunt acum exploatate n mod eficient de ctre alte domenii de cercetare mpotriva
cancerului (Nasr et al., 1984) la toxicologia acvatic (Birge i Cassidy, 1983).
Principalul factor limitativ n aplicarea sistemelor QSAR pare a fi incapacitatea de a
delimita cantitativ rspunsuri biologice cu acelai grad de precizie, cum este posibil
pentru descriptorii moleculari (Birge i Cassidy, 1983). Acest lucru se datoreaz
faptului c multe dintre rspunsurile biologice utilizate pn n prezent n sistemele
QSAR sunt rezultatul interaciunii unei manifestri toxice variate i, prin urmare, nu
sunt la fel de absolute ca parametri fizico-chimici folosii pentru a defini descriptorii
molecul.
Modelele folosite n gama QSAR de aditivitate simpl n cazul n care fiecare
parametru este independent de toate celelalte (e.g. modelul Free-Wilson (Free i
Wilson, 1964), n comparaie cu modele complicate de recunoatere a formelor n
care datele multivariate de activitate sunt legate de diferite structuri chimice i
parametrii fizico-chimici. Aceste modele ofer ambele clasificri calitative (care
indic existena unui efect sau probabilitatea apariiei acestuia) i date cantitative (ex.
un index de severitate probabil a unui efect). Cu toate acestea, clasificarea calitativ
trebuie s se fac n acelai timp sau nainte de orice analiz cantitativ. n predicii

calitative, fiecare compus este repartizat la o clasa (activ VS. nonactiv, sinergic vs.
antagonist, etc.).
De obicei, unui compus i este dat o valoare pentru probabilitatea sa de
apartenen la fiecare clas. Unele metode de model de recunoatere-model de
analiz discriminant-sunt folosite pentru a determina o relaie ntre atribuirea de
clas i descriptorul molecular care indic valori fizico-chimice i / sau
caracteristicile structurale ale substanelor chimice.
QSAR are un potenial de utilizare n stabilirea prioritilor, evaluarea
toxicitii i analizei de risc, dar este necesar mult mai mult dezvoltare. Exist
deficiene n bazele de date de toxicitate, care sunt disponibile pentru studii QSAR i
deficiene n metodele utilizate pentru structuri chimice codare i cuantificarea
activitilor biologice pentru analize de calculator care trebuie s fie depite nainte
ca QSAR s poat fi pe deplin exploatat n toxicologie.

Prezicerea unor niveluri sigure de expunerea la substane chimice

Un obiectiv major al toxicologiei este stabilirea unor niveluri de expunere
chimice care nu vor provoca daune ireversibile la om. Niveluri sigure de expunere
sunt de obicei determinate prin extrapolarea datelor toxicologiei mamiferelor la
situaia omului.
Adesea este avantajos s se prevad niveluri chimice de expunere, sigure,
bazate pe rezultate test pe termen scurt, sau s fie finalizat nainte de o evaluare
complet a siguranei. Astfel de situaii includ:

laborator i etapa de producie pilot n dezvoltarea sau fabricarea unei

substane chimice noi;

atunci cnd doar cantiti foarte mici de substan chimic trebuie s fie
produse;

atunci cnd expunerea pe termen scurt sau limitat este ateptat n

timpul utilizrii produsului chimic;

atunci cnd eliberarea accidental sau expunerea la un produs chimic

are loc nainte ca evaluarea siguranei s fie finalizat.

O varietate de metode au fost propuse pentru estimarea nivelurilor sigure de

expunere pentru produse chimice (a se vedea Sanockij, capitolul 20, acest volum). Cu
toate acestea, metodele sunt limitate la familiile de produse chimice cu proprieti
bine nelese i care nu sunt suspectate de a avea efecte ntrziate sau pe termen lung.
Limitarea primar la stabilirea de rutin a nivelurilor de expunere n condiii de
siguran la testele pe termen scurt, este lipsa de validare suficient de corelare a
testelor pe termen scurt, cu efecte pe termen lung. n prezent, este adesea dificil sau
imposibil, s se extrapoleze relaii doz-efect (rspuns) n ntregul organism din
testele pe termen scurt, cu orice grad de precizie sau de ncredere.
( preluare: Teste de toxicitate pe termen scurt pentru efectele non-genotoxice
Editat de Bourdeau P. et al.
@ 1990 DOMENIU. Publicat de John Wiley & Sons Ltd ).
Bibliografie

Birge, W.J. i Cassidy, R.A. (1983). Relaii structur-activitate n toxicologiea acvatic

.Fund. App. Toxicol., 3, 359--68.

Enslein, K. (1984). Estimarea de parametrii toxicologici de relaii structur-activitate.

Pharmacol. Rev., 36(2), 13IS-135S.

Free, S.M. i Wilson, J.W. (1964). Contribuia matematic a studiilor structur- activitate.1.
Med. Chem., 7, 395-9.

Hansch, C. (1985). Paradigm QSAR n proiectarea de molecule mai puin toxice. Drug
Metab. Rev., 15(7), 1279-94.

McKinney, J.D. (Ed.) (1985). Monografie despre corelaia structur-activitate n studiile de

mecanism i toxicologiei predictive. Environ. Health Perspect., 61,

Nasr, M., Paull, K.D. i Narayanan, V.L. (1984). Corelaii structur -activitate asistate de
calculator. Adv. Pharmacol. Chemo., 20, 123-90.

Capitolul: Metalele toxice si mediul

Introducere
n lucrarea de fa sunt prezentate semnificaiile i sursele metalelor grele i ale
substanelor chimice i mijloacele prin care acestea afecteaz mediul nconjurtor i
sntatea uman, dar i cteva sfaturi de reducere a impactului negativ al acestora.
Scopul lucrrii este acela de a corela principalele substane toxice cu aciunile prin
care acestea sunt eliberate n mediu i ulterior sunt asimilate de organismul uman.
Obiectivele acestei lucrri sunt redate de: cunoaterea principalelor metale
toxice, produse petrochimice i solveni i prezentarea, cu precdere a surselor i
stabilirea legturii lor cu multiple afeciuni. Un alt obiectiv este acela de a accentua
problemele de mediu actuale i gradul de periculozitate al acestor elemente chimice.
De asemenea se urmrete i evidenierea efectelor ireversibile asupra sntii
umane.
Metale grele este un termen ce desemneaz metalele care au o densintate mai
mare dect 5kg/dm, i sunt n general toxice, rezidurile lor producnd
poluarea mediului nconjurtor i efecte negative asupra organismului uman.
Produsele
petrolul i gazele

chimice

sunt derivate

ale

combustibilor

fosili,

naturale (produse petrochimice) , i ntr-o msur mai mic,

crbunele. Acestea sunt utilizate n producia de aproape toate bunurile de consum

i bunuri industriale.
Studiul se bazeaz pe date concrete extrase din diferite surse bibliografice cu
privire asupra definirii metalelor toxice, produselor petrochimice i solvenilor i
identificarea principalelor surselor de provenien. Toate materialele de baz au fost
lecturate, transpuse n filtrul propriu i redate ca atare n aceast lucrare.

Capitolul I: Metalele toxice

n categoria metalelor grele intr o serie de elemente chimice, cu mare
toxicitate pentru organismele vii. Efectul toxic se manifest la depirea unui
anumit prag sub care unele (Co, Cu, Fe, Ni, Zn) pot fi chiar componente eseniale ale
unor proteine implicate n diferite ci metabolice. Astfel, dac alimentele ar fi
complet lipsite de metale atunci ar aprea deficiene nutriionale.1
Metalele grele se gsesc n diferite concentraii n sol, ap, aer, alimente de
origine vegetal sau animal, n funcie de diferii factori care determin poluarea
acestora. Aerul poate fi o surs de contaminare reprezentnd o cale de vehiculare a
metalelor i de depunere a lor pe sol, plante (de exemplu emisia de plumb de la
automobile). Contaminarea cu metale grele a aerului este rezultatul numeroaselor
activiti antropogene: combustia crbunelui, petrolului, producia de metale
neferoase, producerea de oel i fier, producia de ciment, instalaii pentru epurarea
gazelor reziduale, acumularea i incinerarea deeurilor etc.

Apa poate fi o important surs de contaminare, ca

urmare a deversrilor (Foto. 1), activitii staiilor de
epurare

i preepurare, descrcrii apelor de

canalizare, a deeurilor menajere. Duritatea apei i

coninutul

de

compui

organici

pot

determina

mbogirea acesteia cu plumbul din conductele strbtute.2

Foto. 1: Poluarea apelor de la Rosia Montana cu metale grele
Sursa: http://www.unescomania.ro
De asemenea, o important surs de contaminare cu metale grele a alimentelor
poate fi contactul cu mainile, instalaiile sau utilajele de prelucrare, pstrarea
1
2

Lee, Susan, 1990

Banu, C., 1982

conservelor n ambalaje metalice. Pentru om o important surs de intoxicri o

reprezint i specificul locului de munc, ducnd la apriia unor boli profesionale n
anumite industrii.
1.1.Semnificaia i sursele de metale toxice
Termenul de metale urm se refer la metalele care sunt prezente att n
mediul nconjurtor ct i n corpul uman n concentraii foarte mici, cum ar fi
cuprul, fierul

zincul.

Metalele

grele sunt acele metale

urm

ale

cror densiti sunt de cel puin de cinci ori mai mari dect apa, de exemplu
cadmiu, plumb i mercur. 3 Metalele toxice sunt acele metale ale cror concentraii
n mediul natural sunt considerate a fi duntoare, cel puin pentru unii oameni.
Metalele au multe proprieti ce fac obiectul de studiu al importanei pentru
sntatea uman. De exemplu, unele metale sunt eseniale pentru o buna sanatate, iar
deficienta lor

poate duce

la

boli. De exemplu,

insuficiena

fierului

cauzeaz amenia. n acelai timp, metalele care sunt necesare pentru o sntate bun
n cantiti mici, pot deveni toxice dac sunt ingerate n doze mari. Molibdenul este
necesar pentru ca anumite enzime s funcioneze corect, dar n cantiti prea mari
poate conduce la gut. n cele din urm, unele metale, cum ar fi plumbul, nu
au funcii cunoscute n organism i orice expunere intern poate fi duntoare.
O alt proprietate important a metalelor este faptul c nu se degradeaz
niciodat. Spre

deosebire

de muli

polunani organici care

se

descompun

odat cu expunerea la lumina soarelui sau la cldur, metalele persist. Ele pot
fi ngropate n depozite

de

deeuri sau splate n sedimente, ns

nu dispar n

ntregime i rmn ntotdeauna o ameninare cae urmeaz s fie ameliorat n viitor.

Metalele au fost prezente n pmnt nc de la nceputul su, cu multe miliarde
de ani n urm. Ele se regsesc n aproape toate tipurile de roci, i sunt concentrate n
minereuri din ntreaga lume, n funcie de istoria geologic a regiunii. Ele sunt aduse
la suprafa n
3

Harte, J. i colab, 1991

mod

natural prin eroziune i

prin

activitatea

vulcanic,

apoi sunt splate n praie iar n cele din urm sunt depuse cu sedimentele n
ruri, lacuri i oceane. Acolo sunt ncorporate n roci sedimentare, care, n cele din
urm sunt nlate spre suprafaa pentru a porni din nou ciclul . Aciunile umane au
modificat foarte mult ciclul natural al metalelor, i n multe cazuri, contribuiile
oamenilor sunt mult mai mari dect cele ale surselor naturale.
Unele dintre modurile n care oamenii mobilizeaz metalele sunt evidente,
altele sunt destul de subtile. Arderea crbunelui i uleiul de pres dau cantitile vaste
de

metale n

aer,

ai combustibilului. nainte
intenionat n benzin pentru

deoarece
de anii
a

1970,

preveni

acestea

sunt contaminani naturali

plumbul a
btile

de

fost adugat
motor, astfel

mod

mainile au

devenit cea mai mare surs de plumb (Foto. 1, 2).

Foto. 1, 2 : Autovehicule (Sursa: Ecomagazin)

Un exemplu de poluare a aerului este situaia de la Copa Mic, Sibiu (Foto.3).
Oraul a avut reputaia de cel mai poluat ora din Europa pn la accidentul nuclear
de la Cernobl . Aceasta a fost datorat emisiilor de la dou fabrici din zona:
Carbosin, deschis din 1936 pn n 1993, care a produs negru de fum; emisiile sale
au afectat zona timp de aproape 60 de ani, lsnd urme de cenu pe case, copaci,
animale i restul. Aceste urme nc sunt vizibile i astzi. Sometra, cealalt surs de
poluare, mai puin vizibil dar mult mai serioas din punctul de vedere al impactului
asupra sntii localnicilor.
Foto. 3: Copii jucndu-se la Copa Mic
(Sursa: www.adevarul.ro)

La Copa Mic, dumanul cel mai mare este ns invizibil. Zilnic, un cocktail
otrvitor de dioxid de sulf, metale grele i pulberi n suspensie, emis de courile
fabricii de prelucrare a zincului i a plumbului Sometra, nvluie localitatea ntr-o
cea toxic.
Emisiile de la topitorie au contribuit la incidena ridicat a cancerului pulmonar i al
impotenei, precum i o speran de via cu nou ani mai mic dect media
naional.
Minereurile de rafinare, arderea gunoiului i producia de ciment sunt alte
surse importante de

metale suportate

de aer. Produsele scoase

din

uz care

conin metale sunt ngropate cu cenua care contine metal de la arderea crbunelui
i de la arderea gunoiului. Aceste depozite de deeuri pot duce de multe ori, la
scurgerea metalelor n

apa subteran. Ploaia acid, cauzat n mare msur

de arderea combustibililor, dizolv aluminiul din roci de suprafa i din sol i l spal
n lacuri i ruri. mpreun cu acidul, aluminiul contribuie la moartea petelui din
nord-est i Canada.
Unele dintre modalitile subtile de introducere a metalelor n mediu sunt
utilizarea ngrmintelor i a pesticidelor (Foto. 4) i ploaia acid. Arsenicul a
fost mult timp o component a pesticidelor, i cu toate
c utilizarea

sa

este acum n

declin,

contaminarea permanent a

multor

livezilor i lanuri a avut loc.

Foto. 4: Tratarea culturilor agricole cu

pesticide
(Sursa: www.geography.wisc.edu)

Cadmiul se folosete n aliajele inox, n tehnica dentar, colorant n emailarea

vaselor etc. Folosirea de ngrminte cu reziduuri de cadmiu duce la acumularea
acestuia n sol, de unde este preluat de plante, migrnd rapid n organele acestora.
Acest lucru poate deveni cea mai important surs de expunere la cadmiu n
viitor. Orezul, grul acumuleaz cantiti mari de cadmiu.4
Mercurul i cadmiul se acumuleaz n fito i zooplancton, molute crustacee,
insecte acvatice, specii de peti rezisteni la prezena lui.
Zincul prezint un rol biologic important, dar n cazul unor cantiti ridicate
determin efecte toxice. Este utilizat sub form de compui (oxid, sulfur, sulfat,
clorur) n diferite ntrebuinri industriale. Folosirea insecticidelor i fungicidelor pe
baz de compui organici ai zincului duc la contaminarea produselor agroalimentare
i a furajelor. Se acumuleaz n fasole, porumb, sorg. Cuprul este utilizat n
tratamente fitosanitare (combaterea algelor verzi n bazine, a maladiilor viei de vie),
precum i n industrie. Se acumuleaz n principal n legumele rdcinoase.
Un exemplu concret n acest sens este cazul SUA, unde n statul agricol Iowa
cnd ncepand cu anul 2008 a fost consemnat un numar de 2.000.000 de mori
misterioase, ce sunt foarte probabil conectate cu boli provenite din nite ncruciri
ale seminelor modificate genetic. Important de menionat despre statul Iowa este
faptul c aici se gsesc cteva dintre cele mai ntinse ferme agricole din lume,
cultivndu-se porumb pe 32 de milioane de acri de teren agricol, iar peste 99 % dintre
seminele folosite sunt sunt tratate cu ngraminte cu coninut ridicat de metale
toxice.
Odat aflate n mediu, metalele pot gasi nenumrate modalitti de ptrundere
n corp prin intermediul apei potabile, al alimentelor i prin aerul respirabil.
n

timpul

ederii

apei peste

noapte n instalaii de

uz

casnic, se

pot

infiltra plumb i cadmiu din evi i articulaii lor de lipire, acestea putnd s apar
n cafeaua de dimineata.
4

Gherghi, A. i colab., 2001

Apa mai poate fi poluat i din evile deteriorate (Foto.5), dac evile conin
plumb, atunci acest metal otrvitor poate ajunge n apa potabil (Foto.6), evile din
cupru sau cele din fier acoperite cu cupru nu ar trebui folosite cnd valoarea PH-ului
este mai mic de 7, n aceast situaie este foarte posibil ca o cantitate otrvitoare de
cupru s fie splat de evi i conducte din cauza coroziunii rapide. n cantiti mari,
cuprul reprezint un risc asupra sntii, n special la copii.

Foto.5: Conduct deteriorat

Foto. 6: Ap potabil

Sursa: www.maramedia.ro

Sursa: www.radiotargujiu.ro

Organismele, cum ar fi bacteriile pot lua mercur inofensiv i l pot transforma

in metil mercur duntor, care este absorbit i concentrat de ctre pete care apoi
este consumat de oameni. Metalele eliberate n aer prin adierea de vnt n jos
pe culturile alimentare, se pot impune n diet. Prelucrarea produselor alimentare le
pune

pe

acestea

metal. Masini, rafinrii, topitorii, centrale

contact

cu

electrice pomp

echipamentul de
pot

elibera

aer

plumb, arsenic, cadmiu, nichel i o serie de alte substane.

Deseori, oamenii se trezesc urmrii de acest process atunci cnd sunt blocai
pe autostrazi n orele de vrf ale traficului, respirnd aceti compui periculoi n tot
acest timp. Si fumul de tutun care contine
cadmiu, arsenic, zinc, crom, nichel, seleniu, si plumb este inhalat att de fumatori ct
si nefumatorii din jur. Acestea sunt doar cteva dintre multele exemple de ci de
expunere n organism.

1.2. Efectele asupra sntii umane

Toxicitatea metalelor grele reprezint o situaie medical puin ntlnit, dar
totui semnificativ clinic. Dac nu este recunoscut i tratat corespunztor, poate
determina morbiditate i mortalitate semnificative. Tabelul periodic al elementelor
conine 105 elemente, din care 80 sunt considerate metale i pentru mai puin de 30
dintre ele au fost descrise efecte toxice la om. Unele metale grele sunt eseniale n
diferite procese biochimice (ex. Zn, Cu, Cr, Fe, Mn necesare n cantiti mici pentru
organism, dar care devin toxice pentru organism n cantiti mari). Altor metale li s-a
gasit utilizare terapeutic n medicin.
Metale exercit efectele lor n multe feluri, dar de obicei supra celuleleor
corpului. Unele

reacii chimice perturb, altele blocheaz

absorbia de substane

nutritive eseniale, n timp ce altele schimb formele de compui chimici vitali,

facndu-le inutile. Unele metale se leag de nutrienii din stomac,

prevenind

absorbtia lor n organism. Rezultatul acestor aciuni depinde de metalul specific i de

organele implicate.
Aproape toate organele sunt implicate n toxicitatea prin metalele grele; cele
mai afectate organe sunt: sistemul nervos central, sistemul nervos periferic, sistemul
gastrointestinal, hematopoetic, renal i cardiovascular; n mai mic msur,
toxicitatea Pb implic sistemul musculoscheletal i reproductiv; tipul organului
afectat i severitatea afectrii variaz cu metalul implicat, vrsta individului i
nivelul toxicitii.5
Intoxicaia

acut de metale nu este un

lucru

de

experiena

public.

Lucrtorii expui la metale la locul de munc (Foto. 7) pot suferi afeciuni pulmonare,
boli de piele i simptome gastro-intestinale de la un scurt contact cu concentraii
ridicate.

Soghoian, S., 2006

Foto. 7: Exploatarea minereului de cupru de la Roia Poieni

Ocazional, metalele pot

fi

introduse n

produsele

alimentare prin

dizolvarea de containere metalice de alimente acide. Simptomele sunt tipice de

intoxicaie alimentar: vrsturi i diaree, de obicei n curs de cteva ore mai
trziu, toi cei care au mncat la masa.
Intoxicaiile cronice de la expunerea pe termen lung la niveluri sczute de
metale este de interes mai mare dect efectele acute. Unele metale se acumuleaza in
organism de-a lungul timpului, ajungnd la concentraii toxice, dup ani de expunere.
Cadmiu, de exemplu, se acumuleaz n rinichi i dup mai muli ani poate provoca
boli

de

rinichi. Plumbul, mercurul de

metil, i compuii

organici de

staniu

provoc degenerarea lent a creierului. Arsenicul poate afecta sistemul nervos

periferic, ceea ce duce la senzaii de furnicturi, durere, i eventuala pierdere a
Foto. 8: Plmni afectai de cancer
Sursa: www.ghidcabinet.ro

controlului

muscular

extremiti. Anii

pulberi metalice provoc esut

de

expunere la

cicatricial

plmni (fibroz pulmonar), mpreun cu

dificulti progresive

n respiraie.Afectiunile la ficat, rinichi i piele pot fi, de asemenea, cauzate de

expunerea la

metale

persistente

diferite, cum

ar

fi cromul, seleniul, cadmiul, nichelul i arsenul.

Cancerul

este

un

alt tip de efect

cronic.

Asenicul, beriliu,

cadmiul,

cromul, nichelul i praful pot cauza cancer pulmonar (Foto.8).

Arsenicul poate, probabil, de asemenea, cauza cancer de piele dac este
nghiit. Alte metale cu coninut de compui sunt cauze suspecte de cancer, dar datele
nu

sunt nc suficiente pentru a

dovedii

acest

lucru. Mutatiile

sunt schimbari

in materialul genetic, care pot duce la cancer i la diferite boli sau sunt daune
genetice n generaiile ulterioare (cum ar fi boli mentale sau handicapuri fizice) n
cazul n care apar mutaii n celulele de reproducere din ovare sau testicule. Plumbul,
cadmiul, cromul, seleniul, nichelul, arsenul au

produs mutaii n testele

de

laborator de celule umane, dar nu au dus la o anumit boal genetic, doar cancerul a
fost definitiv legate de expunerea la metal.
Un grup de final de efecte pot s apar n dezvoltarea embrionului i a
copilului nou-nscut. Aceste etape ale dezvoltrii umane sunt deosebit de vulnerabile,
deoarece structurile-cheie ale sistemului nervos sunt n curs de formare i diviziunea
celular rapid are loc pe tot corpul la un moment n care materialul genetic este
relativ neprotejat. Expunerea la mercur de metil sau plumb la acest moment poate
provoca malformaii severe n dezvoltare, inclusiv plasarea incorect a structurilor
cerebrale,

paralizie cerebrala severa, orbire,

precum

i dezvoltarea

slab

limbajului sau chiar inexistent. Expunerea la plumb a copiilor a fost legat de un

IQ sczut.

Saturnismul la

copii, un

fenomen mult

la convulsii, leziuni ale creierului sau chiar la moarte.

prea comun, poate

duce

1.3. Moduri elementare de a reduce expunerea la metale i la polunanii coneci

1. Fumul de tutun este o surs de multe metale. Eliminarea fumului de tutun de
ctre personale fumtoare n aer liber (Foto. 9) duce la reinerea acestuia de ctre cele
nefumtoare.
Foto.9: Fum de tutun

Sursa:www.cerceteaza.com

2. Industriile, cum ar fi rafinriile, uzinele chimice, productori de ciment,

centralele electrice i topitoriile de pres emit cantiti mari de metale n atmosfer i
n ap. Se recomand petrecerea ct mai puin timp posibil, n imediata vecintate a
surselor respective (Foto. 10).n special, nu lsai copiii s utilizeze locuri de joac n
direciavntului

dinspre aceaste fabrici. Micile magazine de

cromare

se

gsesc

pretutindeni n orae i ar trebui s fie evitate n mod regulat.

Foto. 10: Aezri omeneti n apropierea Uzinei de
anvelope Michelin Frana
Sursa: Geographie, Pitte J.-R.

3. Mainile emit metale, n special plumb provenit de la vehicule mai mari prin
arderea benzinei cu plumb. Copiii ar trebui s evite locurile de joac de lng strzi
intens circulate i de lng autostrzi.
4. Murdria i praful conin deseori particule de metal. Splai-v minile i
asigurai-v copiii se

spele

pe

mini nainte

de

mas.

5. n apa rmas peste noapte n conducte tinde s se acumuleze metale de la

instalaiile sanitare. Pornete de ap pentru cteva minute n dimineaa de la toate
robinetele din care apa este consumat. (Apa poate fi colectate n recipiente pentru
udarea

plantele.)

6. n apa cald se dizolv mai multe metale dect n apa rece. Utilizai
ntotdeauna ap
7. Acordai
public

cu

atenie la anunuri

ap

rece pentru

gtit.

publice de

contaminare. Aprovizionarea

populaiei este

informeze consumatorii atunci

cnd

necesar

nivelurile

ca,

de

n multe

contaminani

cazuri s
din

apa

potabil depesc cotele permise. Ocazional, i alimentele pot fi contaminate.

Capitolul II: Substanele petrochimice
n

zilele

msur, de

noastre, societile tehnologice

industria

chimic. n

cele

din

moderne

depind,

urm, produsele

ntr-o mare

chimice

sunt

utilizate n producia de aproape toate bunurile de consum i bunuri industrialealimentare,

medicamente, cosmetice,

cherestea,

aparate, combustibili, materiale

plastice, echipamente electronice, textile, hrtie i multe alte produse. n timp ce

majoritatea dintre noi, probabil, cred c vopselele i pesticidele sunt produse
chimice, relaia

dintre produsele chimice i anumite produse finite, cum ar fi

calculatoarele poate fi neclar. Dar trebuie luat n considerare faptul c toate prilecarcas de plastic i tastatura, microcipuri, cabluri, ecranul acoperit cu sticl, i cu tub
catodic

sau afiaj cu cristale lichide, toate sunt produse finale din procesul de

fabricaie chimic.

Bazele industriei

chimice sunt combustibilii

fosili,

petrolul i gazele naturale, n special, i ntr-o msur mai mic, crbunele. n timp
ce o

proporie

major de

combustibili

fosili este

ars pentru

energie pentru centralele

furniza

electrice i

automobile, aproximativ 10% din gazele naturale i din petrol pe care le folosim este
canalizat ctre produse chimice (Foto. 11).
Foto. 11: Industria petrochimic: de la materii prime la produse finite

Materii prime

Produse chimice de baz

Produse chimice industriale

Energie

Fabrici

Bunuri de consum

Surse i produse
Produsele de zi cu zi cum sunt jucriile, detergenii ncep ca materii prime, care
sunt transformate n produse chimice printr-un proces intermediar. Acestea, la rndul
lor, sunt supuse la o varietate de reacii pentru a produce produsele chimice
dorite, care pot fi produse finite n sine, cum ar fi vopselele sau lichide de
curare, sau care pot fi utilizate n fabricarea de alte bunuri.
2.1.1. Materii prime
n timp ce unele materii prime utilizate n producia de produse chimice sunt
obinute

prin minerit de

metal apar

mod

natural i

pmnt,

cele

substanele

depozite minerale n
mai

multe dintre

chimice folosite

sunt derivate n principal din petrol i

gaze

naturale

(Foto.

12); prin

urmare industria chimic este denumit

n

mod

obinuit

industria

petrochimic iar produsele sunt numite petrochimice.

Foto. 12: Extracia petrolului din Marea Caspic
Sursa: www.romanialibera.ro
nainte de 1940, industria petrochimic a fost n esen inexistent.
Produsele chimice de baz industriale s-au obinut prin distilarea de produse
agricole, cum ar fi melasa, precum i prin prelucrarea gudronului din huil. Dup al
II-lea Rzboi Mondial, au fost dezvoltate metode noi i mbuntite pentru obinerea
produselor chimice de baz, din petrol i din gaze naturale, rezultnd creterea
rapid a industriei petrochimice. n 1950, de exemplu, aproximativ 2 milioane de tone
de produse chimice de baz au fost produse petrochimice; n 1986, producia a
crescut la aproape 100 de milioane de tone.

Astzi, n timp ce unele produse sunt nc derivate din celuloz de prelucrare

i din gudron de huil, mai mult de 90% (n greutate) din produsele chimice organice
sunt produse petrochimice. Mai mult dect att, o parte considerabil din produsele
chimice anorganice, cum ar fi amoniacul i sulful, sunt produse din petrol i din gaze
naturale. nainte de 1930, amoniacul a fost produs din gaze de hidrogen generate in
timpul produciei de cocs (crbune prelucrat). n present, aproximativ jumtate din
cantitatea de sulf produs, este recuperat de la rafinrii care produc gaze naturale i
petrol, ce conin hidrogen sulfurat. Restul este extras direct din minele de sulf.
2.1.2. Produsele Chimice
Compui chimici pot fi separai n dou grupuri n funcie de prezena (sau
absena)

carbonului.

principiu, sunt

Compuii

alctuii

cu hidrogen. Substanele

organici, adesea

din atomi

de

numii

carbon,

anorganice, pe de

alt

de

hidrocarburi,
obicei, n

parte, nu au

asociere
la

baz

carbonul. Exemple de substane anorganice i organice sunt prezentate n tabelul de

mai jos (Fig. 1).
Substane anorganice

Substane organice

Acizi: acid clorhidric,

Alifactice: etilena,

acid sulfuric

acid acetic,

Baze: hidroxid de sodium,

clorura de metilen,

hidoxid de amoniu
Metale: aluminiu,

formadelhida
Aromatice: benzen,

crom
Sruri: clorur de sodiu

DDT,
PCBs

Fig. 1: Substane anorganice i organice

Etilena i benzenul, mpreun cu propilena, butelina, toluenul i xilenul sunt
substane chimice importante de baz organic folosite n industriile de fabricaie
sau sunt transformate n produse chimice, cum ar fi solveni industriali sau materiale

plastice. Acidul clorhidric i sulfuric, produse chimice anorganice majore, sunt larg
utilizate ca reactani n procesele industriale, dar nu sunt ncorporate n produsul
final. n

schimb,anumite

constitueni critici ale

metale si halogeni, cum

ar

produselor finite ecologice, la

fi

clorul i brom, sunt

fel

ca

pesticide organoclorurate. (Adugarea de halogeni a n produsele ecologice prezint

riscuri pentru sntatea uman i pentru mediu).
Produsele chimice i produsele aliat pentru industrie (industria chimic este
clasificat de ctre Departamentul de Comer al SUA) produc aproximativ 500 de
milioane de tone de produse chimice n opt categorii de produse: produse chimice
industriale anorganice; rini sintetice; materiale plastice, sapunuri, produse de
toalet i detergeni; vopsele; medicamente; produse chimice industriale ecologice;
produse chimice agricole i produse chimice diverse.
Producia de aceste produse chimice este o afacere mare. Industria
chimic de fabricaie este a patra cea mai mare din Statele Unite depit (n dolari)
numai de

echipamente de transport, produse alimentare, precum i produse

petroliere i crbune

(combustibili industriali). O valoare de aproximativ 2000

miliarde dolari de bunuri sunt fabricate produse i livrate in Statele Unite,

anual, produsele chimice reprezentnd aproximativ 10% din total (206 miliarde
dolari) n 1986.6
Cei mai muli dintre noi ar fi de acord c mainile noastre de splat, uor de
ntreinut, remediile pentru alergie, esturi, carti brosate - toate produsele au
fost fcute de industria petrochimica - au fcut viaa mai uoar sau mai bun
pentru noi. Din
plaje i psri

pcate, aerul murdar, puuri

acopeite

cu

ulei,

precum

cu ap
i alte

potabil
dovezi de

contaminate,
poluare au

devenit familiare pentru industria de petrol i de produse chimice.

Produsele chimice ptrund n mediu ca rezultat al actiunilor intenionate, ca
n cazul pesticidelor; sau al

actiunilor de rutin, ca emisiile de gaze i a

efluenilor solizi i lichizi, precum i scurgeri accidentale, cum ar fi deversarea de

6

Harte, J. i colab, 1991

petrol din supertancul Exxon Valdez (Foto. 13) cnd 40 de milioane de litri de petrol
s-au scurs, zona de coast a fost afectat pe o lungime de 1.900 km, fauna i flora
marin (Foto. 14) au fost distruse masiv (se estimeaz c au murit, printre altele,
250.000 de psri i 22 de balene).7

Foto. 13: Pat de petrol

Foto. 14: Pasare afectat de petrol

Sursa: www.wired.com
n continuare, vor fi prezentate unele dintre problemele asociate cu un grup
de produse chimice. Solveni sunt un grup comun de produse chimice utilizate n
aproape orice activitate uman, de la setrile de industrie grea la atelierul de acas.
Unele dintre aceste substante chimice au fost gasite ca fiind contaminani n ap i, n
special n zonele cu concentraii grele de electronice sau industrii de calculator. Unele
sunt poluani aerobi i, ca atare, pot fi distribuite pe scar larg. Deoarece solvenii
sunt att de comuni i dispersati, aproape toata lumea este expusa la un moment dat la
aceste substane, care provoac o varietate de efecte negative asupra sanatatii.
2.2. Solvenii
Solveni sunt un grup de substane chimice care au multe utilizri variate n
industrie i acas. Cuvntul "solvent" este, n general, definit ca fiind un lichid folosit
pentru a dizolva alte substane, o definiie care include apa ca solvent.
Aici se restrnge sensul su la un grup de compui organici (hidrocarburi), care
sunt folosii pentru a dizolva alte hidrocarburi, cum ar fi gudronul, ceara, uleiuri
i alte produse petrochimice. Deoarece solvenii evapor rapid i nu las nici reziduri,

Pitte, J.R., 1988

acestea sunt utilizate pentru a spla praful de la piese electronice de precizie i

prelucrate. Solveni sunt, de asemenea, utilizai pentru vopselele subiri (Foto. 15) i
cleiuri, esturi curate, uleiuri i cear extrase din materiale de impure. Acestea sunt,
de asemenea, folosite n multe produse de uz casnic i n medicamente (Foto. 16).

Foto. 15: Vopsele

Foto. 16: Medicamente

Sursa: www.casamea.ro

Sursa: www.dcnews.ro

2.2.1. Tipuri de solveni

Varietatea de solveni disponibili pentru industrie i de uz casnic este mare.
Sute de solveni individuali sunt folosii pentru a face peste 30.000 de amestecuri de
proprietate, care au devenit cunoscute prin numele lor comerciale, cum ar fi Chlorox
(clor nlbitor), freon (CFC) i Arctic (clorur de metil sau clormetanul). Solveni mai
frecveni se ncadreaz n cinci categorii generale. Acestea sunt alcoolii (cum ar fi
methanol i alcool izopropilic), acetone (cum ar fi metiletilceton i aceton),
alifatice

("chain") hidrocarburi (cum

ar

fi hexan), aromatice ("inel") hidrocarburi (cum ar fi benzen, toluen i xilen), i n

final hidrocarburi

halogenate (cum

de metilen i CFC). Alte

grupuri mai

ar

fi

tricloretilen,

clorur

puin frecvent utilizate de

solveni

organici sunt eterii de glicol si acetai.

Cei mai muli solveni sunt periculoi: unii sunt inflamabili, alii pot exploda
pur i simplu, unii sunt corozivi i cei mai muli sunt toxici. n general, solvenii care
conin halogeni (clor, fluor, brom i iod) sunt mai puin capabili de a se aprinde,
exploda, sau de a coroda rezervoarele i conductele dect solveni organici. Solvenii

cel mai frecvent utilizai sunt cei clorurat-halogenai . Din pcate, solvenii clorurai,
ca i majoritatea celorlali solveni halogenai, sunt toxici.
Cu toate acestea, cererea de solveni clorurai n 1987 a fost de 1,5 miliarde
de

lire

sterline. Doar

1%

sunt

refolosii

sau

reciclai, ntruct aproximativ 94% sunt n cele din urm eliberai n mediul
nconjurtor, mai ales n aer.8 Restul este ncorporat n diverse produse, cum ar
fi plasticul, policlorura de vinil, CFC i folia de plastic. Aproape toate cererile de
solveni clorurai este completat de doar patru produse chimice: clorura de metilen,
tricloretan, tricloretilena i tetracloroetilen. Aceste patru substane chimice sunt
folosite fie n mod direct, sau sunt prelucrate ulterior pentru a produce mai multe
specialiti de solveni, materiale plastice i produse farmaceutice.
Cererea de solveni clorurai este n scdere din cauza creterea nivelului de
reciclare, schimbrilor tehnologice i de substituia lor cu substane mai puin toxice
pe baza de solveni ap . Cu toate acestea, solvenii clorurai vor continua s fie
utilizai n cantiti mari pentru anii care vor veni. Aceti solveni sunt folosii n
timpul fabricrii multor produse varietate de zi cu zi, i este nevoie de timp pentru a
gasi produse chimice mai putin toxice ce substitut i a le integra n procesele
industriale. Solveni clorurai sunt, de asemenea, folosii de o mulime de mici i
mijlocii afaceri, deoarece este dificil s investeasc n programele de reciclare. n cele
din urm, solveni clorurai sunt relativ ieftini, pentru industrii pentru c multe dintre
costurile asociate cu contaminarea si curarea solvenilor clorurai nu sunt suportate
n mod direct de ctre utilizatorii de produse chimice. Astfel, industriile nu au nici o
reducere a utilizrii acestor solveni.
2.2.2. Efectele asupra sntii umane i asupra mediului
Efectele asupra sntii umane cauzate de expunerea la solveni pot include
afeciuni la nivelul pielii, ficatului, sngelui, sistemului nervos central i uneori, la

Andrews, L., Snyder, R., 1986

nivelul plmanilor i rinichilor. Unii solveni sunt iritani, n timp ce alii pot cauza
cancerul. n general, solvenii sunt evaporai la temperatura camerei, apoi sunt
inhalai prin respiraie. Dar, scurgerea lor n rezervoare de stocare subteran, de
suprafa i ndiguire sau scurgerile accidentale au expus un numr semnificativ
de persoane la solveni, prin intermediul apelor subterane.
Solvenii pot fi, de asemenea, absorbiti n organism la contactul cu pielea, dei
aceasta este o cale de expunere minor pentru majoritatea oamenilor. Solvenii vrsati
pe celulele pielii din benzine, uleiuri i grsimi , cauzeaz nroirea sau descuamarea
pielii (Foto. 17).

Dup
obicei se

ce se

oprete expunerea, pielea,

vindeca

singur.

Unii

solveni sunt alergeni i cauzeaz

dermatite alergice n

rndul

sensibile, chiar dac acestea

persoanelor

nu ating de

fapt

solventul.
Foto. 17: Piele afectat de solveni
Sursa: www.financiarul.ro
Inhalarea de vapori de solvent, chiar i pentru perioade foarte scurte, poate
duce la iritarea plmnilor i gtului, la edem pulmonar, ameeli, confuzie, vedere
nceoat,

nervozitate, somnolen sau

insomnie, grea,

vrsturi, dezorientare, confuzie, bti neregulate ale inimii i chiar la pierderea

cunotinei i la moarte.
Multe

dintre

aceste

simptome trec repede atunci

cnd

expunerea se

oprete. Unele simptome ale expunerii acute nu poate fi simtite imediat. Anumii
solveni clorurai , de exemplu, pot cauza afeciuni ntrziate ale plmnilor , ficatului
i ale

rinichilor. Substanele

de supraexpunere

chimice care nu

au capacitatea

produc simptome
redus

imediate

de avertizare,

deoarece concentraiile periculoase nu pot fi detectate de oameni supraexpui.

Expunerile repetate la unii solveni pot duce la bronit cronic, leziuni

permanente ale ficatului i leziuni renale si la probleme neurologice permanente.
Solvenii pot afecta capacitatea organismului de a produce snge, n timp ce unii pot
afecta sistemul imunitar. Muli solveni clorurai frecvent ntlnii, inclusiv benzenul,
tricloretilena, tetracloroetilen i clorura de metilen, sunt suspectate de provocarea
cancerului. Unii solveni sunt cauza, sau sunt suspectai de provocerea defecte la
nastere. De exemplu, eterul de glicol a fost recent descoperit ca fiind cauza
malformaiilor congenitale i a problemelor de reproducere la animalele de testare.
Cei mai muli solveni trec uor de la mam la ft, expunnd astfel copiii nenscui la
compui cu potenial toxic.
Oamenii n cauz ,ar trebui s nvee cu privire la expunerea la solveni
compoziia, denumirile tiinifice, toxicitatea i gradul de risc asociat cu toi solvenii
pe

care i folosesc. Fiele tehnice ale materialelor (MSDS), care conin aceste

informaii ar trebui s fie uor accesibile pentru persoanele expuse solvenilor la locul
de munc. Din pcate, compoziia chimic exact a amestecurilor de solvent nu poate
fi disponibil i informaiile prezentate cu privire la toxicitatea MSD

pot fi

incomplete sau confuze.

Consumatorii pot gsi mult mai dificil informaii cu privire la pericolele toxice
asociate cu straturile de protecie arhitecturale (vopseaua casei), de art i artizanat
i materiale consumabile de curare. Etichetele produselor de consum nu sunt n
prezent solicitate la lista de ingrediente specifice cu coninut de solveni.
n California, prin dreptul de a cunoate regulamentul se ncerc informarea
consumatorilor cu privire la prezena substanelor chimice n produsele care
cauzeaz cancer

sau malformaii

congenitale. Dar eficacitatea legii nu a

fost

demonstrat, deoarece nu toate produsele de consum sunt etichetate n mod clar. De

asemenea, cancerul i defectele de

la

natere sunt un

subset nesemnificativ

de

probleme poteniale asociate cu solveni n produsele de consum. Un raport emis de

ctre Departamentul de Servicii de Sanatate din California prevede faptul c peste
60 de solveni diferii sunt utilizai n mod obinuit n produsele de consum. Solvenii

cei mai des ntlnii n produsele destinate consumatorilor sunt: etanol, alcool
izopropilic, kerosen, propilen glicol, isobitan, butan i propan, din care nici unul nu
sunt extrem de toxice sau nu sunt cunoscute de a provoca cancer sau defecte de
natere, dar aproximativ 250 de tone pe zi din aceste materiale sunt eliberate n aer n
California n fiecare an.
Unii dintre aceti solveni sunt considerai frecvent ca fiind

cauza gravelor

probleme de mediu atunci cnd sunt eliberai n aerul urban. Muli solveni volatili
contribuie la formarea ozonului urban, n timp ce alii , inclusiv CFC-urile,
tricloretan i tetraclorura

de

carbon,contribuie la epuizarea

stratului

de

ozon

stratosferic. Solvenii clorurai sunt adesea persisteni n sol i n ap, ceea ce duce la
problemele de mediu asociate cu bioconcentrare i cu poluarea apelor subterane.
Uneori, solveni eliberai
chimice

sau

n mediul

nconjurtor se

amestec cu produse

se degradeaz, pentru a forma mai multe produse toxice. De

exemplu, tricloretanul se degradeaz n sol pentru a
forma clorur de vinil.
De asemenea i produsele cosmetice uzuale
conin substane extrem de toxice. Muli oameni
urmeaz diete extreme i realizeaz zilnic diferite

metode de detoxifiere, i apoi, dup toate acestea, folosesc produse cosmetice

chimice. De multe ori, ingredientele chimice ale cosmeticelor i ale produselor de
ngrijire corporal sunt toxice i au efecte dezastruoase asupra sntii noastre (Foto.
18).
Foto. 18: Posibile urme lasate de cosmetice
Sursa: www.aamaay.blogspot.com
Pielea este cel mai mare organ al corpului nostru. Este un nveli viu, care
respir i are o mare capacitate de absorbie. Pielea practic absoarbe produsele
aplicate pe suprafaa ei. Dac acestea conin ingrediente benefice, efectele folosirii
lor vor fi benefice. Dar dac aceste produse conin substane chimice toxice, acestea
au efecte adverse att asupra pielii, ct i asupra organelor interne ale corpului

nostru. n special efectele cumulative, care apar dup muli ani de folosire a unui
produs, transform elementarele noastre obiceiuri de igien ntr-un stil de via
sinuciga

care

ne

apropie

de

boal

de

moarte.9

Solvenii din unele spunuri, ampoane, geluri de du distrug bariera

protectoare a pielii, degreseaz puternic pielea i favorizeaz ptrunderea substanelor
toxice. Odat ptrunse n piele, acestea ajung n microcapilarele sanguine, n vasele
limfatice i apoi n fluxul sanguin, care le rspndete peste tot: n creier, ficat,
rinichi, muchi. Dac rujul ajunge n gur, enzimele din saliv i stomac reuesc
s-l descompun. ns dac substanele ajung n fluxul sanguin, acolo nu exist nici
un fel de protecie, a precizat Richard Bence, un biochimist care a studiat timp de
trei ani substanele prezente n cosmetice. nc nu se tie ce efect au toate aceste
substane chimice atunci cnd sunt amestecate, a indicat specialistul
Femeile absorb anual 2-3 kilograme de substane toxice prin intermediul
produselor

cosmetice

uzuale.

Rutina zilnic a femeilor implic folosirea demachiantului, a cremei de fa, a

produselor de machiaj i a altor produse pentru igien, multe dintre acestea coninnd
componente toxice. Afectate nu sunt numai femeile, ci i brbaii, pentru c i
produsele destinate lor (crem sau spum de ras, after-shave, ampon) au aceleai
ingrediente periculoase. Dar cel mai grav este c astfel de substane se regsesc
inclusiv n produsele destinate ngrijirii copiilor. Faptul c produsele cosmetice sunt
fcute s stea mult pe raft, spre deosebire de produsele alimentare, contribuie la
toxicitatea lor i la potenialul cancerigen ridicat.Produsele cosmetice sunt adesea
nite cocktailuri de chimicale cu aciune cancerigen, iritani ai pielii.
Pn cnd produsele vor fi etichetate n mod clar, permind oamenilor s fac
alegeri n cunotin de cauz, consumatorii doresc s cumpere produse pe baz de
ap de ori de cte ori acestea sunt disponibile i eficiente. Atunci cnd nu sunt
disponibile produsele pe baz de ap, trebuie s nvee numele solvenilor utilizai n

www.aamaay.blogspot.com

complonena diferitelor produse i s ncerce s le aleag pe cele care sunt cel mai
puin toxice pentru oameni i pentru mediul nconjurtor.

2.2.3. Modaliti de evitare a substanelor toxice

1. Crestei aportul de fibre din diet prin consumul regulat de cereale integrale,
fructe i

legume

naturale.

Fibrele alimentare ajut sistemul

digestiv s

elimine toxinele din organism;

2. Bei ct mai multa ap (de preferint mbuteliat);
3. Urmai frecvent cure pentru detoxifierea organismului, ajutnd astfel la eliminarea
toxinelor;
4. Aerisii locuina pentru a reduce expunerea la gaze naturale, fum de igara i alte
substane chimice;
5. Citii eticheta produselor cosmetice i de ngrijire personal deoarece majoritatea
conin substane petrochimice duntoare, parabeni, conservani i aditivi artificiali
care vor influena negativ sntatea.
Concluzii
n urma realizrii acestei lucrri de analiz a metalelor toxice si a produselor
petrochimice, mai exact a interactiunii om-elemente chimice prin diferite activiti cu
character economic, se pot trage cteva concluzii.
Att metalele grele ct i produsele petrochimice sunt utilizate pentru
producerea bunurilor casnice, a energiei sau a produselor de consum. ns ambele au
efecte nocive ireversibile asupra mediului i sntii umane.
Metalele grele se gsesc n diferite concentraii n sol, ap, aer, alimente de
origine vegetal sau animal, n funcie de diferii factori care determin poluarea
acestora. Metale

afecteaz, de obicei supra celulelor corpului. Aproape toate

organele pot fi afectate: sistemul nervos central, sistemul nervos periferic, sistemul

gastrointestinal, hematopoetic, renal i cardiovascular, sistemul musculoscheletal i

reproductiv.
Produsele chimice sunt utilizate n producia de aproape toate bunurile de
consum i bunuri industriale i n produsele alimentare. Produsele de zi cu zi cum
sunt jucriile, detergenii ncep ca materii prime, care sunt transformate n produse
chimice printr-un proces intermediar. Acestea, la rndul lor, sunt supuse la o
varietate de reacii pentru a produce produsele chimice dorite.
Efectele asupra sntii umane cauzate de expunerea la solveni sunt redate de
afeciuni la nivelul pielii, ficatului, sngelui, sistemului nervos central i uneori, la
nivelul plmanilor i rinichilor. Cancerul poate fi o consecin a expunerii
ndelungate la metalele toxice sau la solveni.
Protecia

mediului

ambiant

constituie

problema

major

societii

contemporane Cunoaterea influenei activitii umane asupra ecosistemelor naturale

,cu menionarea surselor de poluare i a efectelor lor fizice ,este de strict actualitate.
Ea este impus mai ales de implicaiile nefaste ale deteriorrii mediului asupra
calitii vieii oamenilor.
Bibliografie:
Andrews, L.S., Snyder, R., (1986), Toxic effects of solvents and vapors, Editura
Macmillan, New York
Banu, C. i colab (1982), Produsele alimentare i nocuitatea lor, Editura Tehnica,
Bucureti.
Catan, L., (2002), Posibiliti de reducere a coninutului de metale grele din
produsele horticole industrializate, Hortinform 7/119, Bucureti.
Gherghi, A., (2001), Biochimia i fiziologia legumelor i fructelor. Ed. II-a
revzut i completat, Editura Academiei Romne, Bucureti.
Harte, J. i colab, (1991), Toxics A to Z- A Guide to everyday pollution hazards,
Editura Univerity of California Press, Berkeley, Los Angeles, London.

 Lee, M. Susan, (1990), Metals in foods. A literature survey, No. 12, The British
Food
Manufacturing Industries Research Association, Surrey, UK.
Pitte, J.-R. i colab, (1988), Geographie, Editura Nathan, Paris.
Soghoian, S., (2006), Toxicity, Heavy Metals, St. Louis, Missouri.
www.bibliotecascolara.ro
www.financiarul.ro
www.emedicine.com
www.aamaay.blogspot.com

SUBSTANTELE TOXICE DIN PRODUSELE DE CONSUM

INTRODUCERE

Capitolul Substantele toxice din produsele de consum trateaza problema

substantelor chimice toxice pe care le intalnim zilnic in produsele de consum.
Subcapitolul Ingrediente inerte prezinta pericolul pe care il prezinta aceste
substante asupra organismului uman, produsele in care intalnim aceste substante
asupra organismului uman, produsele unde se intalnesc aceste substante, precum si
care sunt cele mai toxice substante din produsele pesticide.
Articolul EPA Reducerea expunerii la pesticide in scoli, Agentia Nationala
pentru Protectia Mediului SUA atrage atentia asupra pericolului la care sunt expusi
atat elevii cat si muncitorii datorita folosirii pesticidelor in scoli.
Subcapitolul Hobby-urile si mestesugurile avertizeaza asupra pericolelor
existente in produsele de arta si mestesugarie precum si care sunt cele mai
periculoase metale grele folosite in arta consumabila.
In Subcapitolul Unele produse asemanatoare am prezentat deseurile
periculoase rezultate dn diverse substante cum ar fi plasticele sau pesticidele.
Subcapitolul Hartie versus plastic prezinta care dintre cele doua produse
este mai toxic si polueaza intr-o cantitate mai mare. Aceeasi situatie este prezentata
si in ultimul subcapitol De unica folosinta versus bumbac.

Zilnic produsele de uz caznic contribuie intr-o buna masura la expunerea

noastra la substantele chimice toxice.
Astfel de produse cum ar fi covorul, arta si furniturile (de birou, de croitorierechizita de birou) mestesugaresti,.si produsele fluide de curatenie emit substante
toxice in aer.
Multe dintre aceste pericole sunt ascuns; acolo poate nu sunt atasate etichete
pentru ca consumatorul sa citeasca si sa afle despre un posibil pericol.

Alte

produse pot fi folosite in siguranta, dar in timpul fabricarii lor sau in urma depozitarii
urmatoare/vanzarii urmatoare substantele toxice sunt eliberate in aer si apa.
Este important sa se recunoasca acest pericol pentru mediu la fel cum este si
pericolul recunoscul ca fiind mai mult personal-asociat cu utilizarea unui produs care
emite substante chimice toxice.
Acest capitol descrie cateva dintre pericolele ascunse si ofera o simpla
introducere la unele probleme de mediu pe care consumatorii trebuie sa le ia in
considerare atunci cand isi aleg produsele alternative.

A.

Ingredientele inerte

In lumea de etichetare a produselor, cuvantul inert poate fi la fel de inselator

ca si cuvintele degresat (slab) sau natural de pe produsele alimentare. Acolo mai
bine de 1000 ingrediente inerte sunt adaugate pesticidelor, produselor de curatare,
produselor de imbunatatire pentru a le face mai sprayabile, tartinabile, lipicioase,
alunecoase sau mai putin concentrate..

Figura 1. Produse de curatare ce contin ingredient inerte

Sursa: http://www.infocuratenie.ro

Cu toate ca/desi aceste componente inerte nu sunt active in sensul ca nu de ele

depinde uciderea daunatorilor adresati, culoarea unui perete, sau eliminarea
murdariei, insa multe sunt chimice sau biologic active. Cu alte cuvinte, ingredientele
inerte pot fi toxice sau pot cauza probleme de mediu. Din 1200 substante inerte
cunoscute de catre EPA ca fiind utilizate in produsele pesticide, peste 100 sunt de
interes toxicologic incusiv (incluzand) fenolul, tetracloroetilena, clorura de metil si
tetraclorura de carbon. De asemenea, ingredientele inerte sunt utilizate in produsele
industriale si de consum.

Figura 2: Insigna Agentiei Nationale pentru Protectia Mediului SUA

Sursa: www.epa.gov

Clorura de metil, xilena, metil-etil-cetona, acetone si tetracloroetiena au fost

raportate ca fiind utilizate ca ingredient inerte in anumite produse de la furnituri
(rechizite de birou) si pantofi la substantele de curatat covoare.
Chiar crezut utilizarea lor este larg rspndit, adesea este dificil pentru a afla
ce ingrediente inerte sunt utilizate n anumite produse. Acest lucru se datoreaza
faptului ca producatorii selecteaza ingredientele inerte de rand (inferioare) privind
preturile si disponibilitatea de produse chimice corespunzatoare in momentul in care

un grup de produse se fabrica. Astfel, un grup de produse poate sa contina un alt

ingredient inert decat un alt grup fabricat cu doua luni mai tarziu.
Ingredientele inerte au primit putine controale de reglementare deoarece
regulamentale au fost in mod traditional axate pe ingredientele active. Ingredientele
inerte utilizate in pesticide, de exemplu, fac exceptie de la cerintele de toleranta care
specifica cat de mult reziduu/resturi dintr-un produs pesticid poate fi lasat pe
produsele alimentare.
Pesticidele sunt substane folosite pentru a preveni, distruge, respinge sau
atenua orice duntori variind de la insecte, animale i buruieni la microorganisme,
cum ar fi ciuperci, mucegaiuri, bacterii i virusuri.
Licenta EPA sau registrele pentru utilizarea in stricta conformitate cu directia
de echitetare a produselor pesticidelor pe baza revizuirii de studii tiinifice cu
privire la pesticide vor sa stabileasca c acestea nu vor prezenta riscuri excesive
pentru sntatea uman sau pentru mediu. EPA controleaza pesticidele mai mari
pentru a se asigura c acestea respect standardele actuale de siguran i ia msuri
pentru a reduce riscurile acolo unde este nevoie. Pentru pesticidele utilizate pe
produse alimentare, EPA stabilete limite cu privire la cat de multe reziduuri de
pesticide poate rmne n sau pe produsele alimentare. EPA stabilete, de asemenea,
standarde pentru a proteja lucrtorii care pot fi expuse la pesticide la locul de
munc. EPA fabric pentru a promova un mijloc sigur de combatere a duntorilor
prin cercetare, educaie public, i de parteneriate public-privat.

Figura 3: Tratarea produselor alimentare cu pesticide

Sursa: http://www.ecomagazin.ro

EPA (Environmental Pretection Agency) a cerut recent producatorilor de

pesticide reetichetarea produselor pentru a identifica cele mai toxice 50 ingrediente
inerte. EPA incurajeaza, de asemenea, producatorii de pesticide de a inlocui cu cele
mai putin toxice ingredient inerte pe cele mai toxice ingredient inerte ori de cate ori
este posibil.
Poluani provin din surse diferite i introdudusi in aer, ap i sol ntr-o
varietate de moduri. Rolul EPA este de a proteja plantele, animalele, oamenii,
animalele slbatice, viaa acvatic, i a mediului de efectele negative ale poluantilor
i a substanelor toxice cu rol negativ asupra sntii lor. n conformitate cu o gam
larg de statute federale, EPA adun date asupra sntii / siguranei i expunerii,
efectueaza teste necesare, i controale asupra expunerile umane i a mediului la
substanele chimice numeroase. n conformitate cu aceste legi, EPA regleaz
producia i distribuia de produse chimice industriale i comerciale, n scopul de a
asigura ce substantele chimice puse la dispoziie pentru vnzarea i utilizarea n
Statele Unite, nu duneaz sntii umane sau a mediului. Odata cu reglementarea
acestor substane, agenia a creat bazele de date i documente care n continuare
informeaza poporul american cu privire la efectele i prevalena unor astfel de
substane.

Misiune Ageniei pentru Protecia Mediului Statele Unite este de a proteja

sntatea oamenilor i a mediului. Din 1970, EPA a lucrat pentru un mediu mai
curat, mai sntos pentru poporul american.

Reducerea expunerii la pesticide n coli. Articol EPA.

Pesticidelor joac un rol important n protecia produselor alimentare i
controlul bolilor, dar pot fi, de asemenea, duntoare pentru sntatea uman.
Termenul de pesticid include insecticide, erbicide, fungicide, dezinfectani i diferite
substane foarte utilizate pentru eliminarea tuturor duntori. Pesticidele sunt
adesea aplicate n coli pentru a menine conditiile de salubritate si pentru a elimina
populatiile de insecte i roztoare. Este posibila reducerea expunerii copiilor i a
personalului la pesticide i de efectele poteniale asupra sntiipe care acestea le
provoac prin reducerea pesticidelor regulate pulverizare printr-un program al
gestionrii integrate a duntorilor (MIP).
MIP este o tehnic alternativ pentru eliminarea insectelor i roztoarelor,
care mpiedic accesul lor la sursele de hran, ap i adpost. Aceste strategii ofer
o maibuna relatie cost-eficienta, comparativ cu optiunile traditionale pentru
eliminarea duntorilor. Utilizarea MIP n coli poate reduce expunerea lucrtorilor
si a elevilor la pesticide.
Figura 4: Avertisment asupra utilizarii pesticidelor in scoli
Sursa: www.epa.gov

Expunerea la pesticide n coli

Expunerea la pesticide n coli a fost legata de aparitia de boli la angajai i

elevi, dei putin frecvente. S-a demonstrat c incidena bolilor cauzate de expunerea
la pesticide n coli este mai frecventa de personalul coalii decat la copii, deoarece
este probabil ca acestia sa manevreze primii pesticidele. Cu toate acestea, copiii sunt
deosebit de sensibili la toxicitatea pesticidelor, deoarece multe dintre organele lor nu
sunt nc pe deplin dezvoltate.
Expunerea la pesticide poate provoca tuse, dificulti de respiraie iritare,
grea, vrsturi, dureri de cap i ochi. n mod similar, exist tot mai multe dovezi c
expunerea in mod indelungata a adultilor la pesticide este asociat cu efectele asupra
sntii cronice, cum ar fi cancerul si probleme neurologice i de reproducere.
Walter A. Alarcon, MD, de la Institutul National pentru Securitate si Sanatate,
precum si Centrele SUA pentru Controlul si Prevenirea Bolilor, Cincinnati, si colegii
sai au examinat in perioada 1998 2002, 2593 persoane boli acute legate asociate
cu expunerea la pesticide din scoala. Informatiile au fost colectate de la Institutul
National pentru Securitate si Healths Sentinel Eveniment sistemul de notificare
pentru Riscuri ocupationale program de pesticide (Sensor) program de pesticide,
California, Departamentul de pesticide Regulamentul (CDPR), si toxice de
Supraveghere a Sistemului de expunere (TESS).

MIP poate ajuta la promovarea unui mediu de nvare sntos

Pentru a gestiona i controla insecte i roztoare, este nevoie de o abordare

cu multiple faete
Chiar daca pesticidele reduc temporar expunerea populaiei la insecte i
roztoare, acestea se ntorc de multe ori n acelai loc, dac pot gsi hran, ap i
adpost.
Prin urmare, este necesar s se aplice alte msuri pentru a elimina insecte i
roztoare n coli, la locul de munc i case. O abordare multilateral, cum ar fi

MIP, este esenial pentru a gestiona i a elimina insectele i roztoarele n mod

eficient de oriunde.

Recomandri pentru a reduce expunerea la pesticide n coli

Gestionarea integrat a duntorilor (MIP) este o alternativ la utilizarea de
rutina a pesticidelor. MIP subliniaz, mai multe elemente pentru a gestiona n mod
eficient i de a elimina insectele i roztoarele oriunde fr a recurge, ca de obicei la
utilizarea de substane chimice. Punerea n aplicare a IPM reduce utilizrii
pesticidelor n coli, spre deosebire de opiuni tradiionale pentru a reduce insecte i
roztoare. Pentru a pune n aplicare MIP n coala dumneavoastr, putei ncepe s
elaborati o politic i liniile directoare procedurale pentru programul de insecte i
roztoare de control n coal. Aceast politic, nsoit de orientrile de procedur
ar trebui s includ urmtoarele 8 trepte MIP:
1. S numeasc un manager de combatere a duntorilor
2. Inspectarea instalatiilor pentru a determina problemele cu insecte i roztoare
3. Identificarea cauzelor care cauzeaza aparitia insectelor i roztoarelor
4. Eliminati sursele ce atrag daunatorii
5. n cazul n care metodele nontoxice nu dau rezultatele asteptate, folositi pesticidele n

conformitate cu urmtoarele principii: - Utilizai pesticide mai puin toxice

-Numai lucrtorii instruii i calificai trebuie s manipuleze i s aplice pesticide.
6. Pstrai o eviden exact de evaluare i documentul de eficacitatea
a programului MIP
7. Educarea comunitii colare cu privire la pesticide i MIP.
8. Anuntarea atunci cnd se folosesc pesticide i se facrecomandri cu
privind revenirea in sali.

Ingredientele inerte din produsele de consum nu au primit aproape nicio

atentie. Chiar daca acestea sunt de obicei substante nontoxice cum ar fi de exemplu
apa acest lucru nu este intocmai. Oamenii care sufera de alergie sau alte reactii

anormale folosind produse de consum ar trebui sa contacteze medical. In timp ce

trateaza un pacient un medic poate fi in masura de a convinge o companies a divulge
ce tipuri de chimicale a utilizat ca ingredient inerte pentru un anumit produs. Este de
ajutor aducerea produsului in ambalajul originar in cabinetul medicului. Din pacate,
identificarea ingredientelor inerte utilizate in produsele comune atunci cand nu sunt
raportate reactii adverse este aproape imposibila.

B.

Hobby-urile si mestesugurile

Ce poate fi mai placut decat orele de straduinta pe un proiect special intr-un

atelier sau crearea unui zid frumos agatat din ceara si colorat in bucatarie?
Care crede, in acest moment, pericolelor toxice asociate cu arta si cu
mestesugurile? Pe deasupra, arta si materialele mestesugaresti pot fi periculoase
pentru sanatatea dumneavoastra si pot pune chiar si viata in pericol.
Multe creatii artistice si material mestesugaresti sunt incarcate cu pigmenti cu
continut de metale grele si cu solventi periculosi. Unele procese emit gaze toxice in
aer, in timp ce altele scalda mestesugarul cu radiatii ultraviolete intense. Aici vom
prezenta pe scurt cele mai frecvente pericole asociate cu mestesugurile consumabile.
La sfarsitul capitolului, oferim, de asemenea referinte si numere de telefoane
pentru a salva persoanele care folosesc arta si mestesugurile consumabile stabilind
riscul asociat cu fiecare situatie in parte.
Metalele grele cum ar fi plumbul, cadmiul si cromul sunt de obicei gasite in
arta si mestesugurile consumabille. Plumbul este folosit in anumite glazuri ceramice
si in materialele de vitralii. Cadmiul este folosit in aliajele de lipit argintul si glazuri
ceramic. Arseniul, cadmiul, cromul, cobaltul, plumbul, magneziul si zincul sunt toate
utilizate in pigmentii vopselelor, coloranti si glazuri ceramice.
Plumbul este un cancerigen bine cunoscut care afecteaz sistemul hormonal.
Este uor absorbit prin piele i se depoziteaz n oase. Poate provoca probleme

comportamentale, de memorie i de limbaj, dar poate conduce i la o cretere a

agresivitii. Cei mai vulnerabili sunt copiii i femeile nsrcinate.
Figura 5.Produsele de consum ce contin plumb
S
ursa:
www.
epa.g
ov

L
a
pri
ma
ved
ere,
plu
mbul nu mai pare a starni ingrijorare de cand nu mai este folosit in vopsele. Insa, la
o analiza mai atenta, poti descoperi ca plumbul se gaseste si in apa potabila, in
cheile de la masina, in cosmetice, gazon artificial si in alte produse. Acesta ajunge in
aerul pe care il respiram, acumulandu-se in praf. Pentru a reduce expunerea la
plumb este indicat sa verifici daca apa pe care o bei contine plumb, sa iti lasi
incaltarile la usa si sa stergi praful frecvent folosind materiale umede.
Cadmiu poate avea efecte nocive asupra organismului uman atat in cazul
expunerii acute cat si in cazul celei de lunga durata. Este un element care are
proprietatea de a se acumula in organismul uman o data cu varsta si este foarte
greu eliminat de organism. Principalele sintome care apar la expunerea de scurta
durata sunt: greata, varsaturi, dureri abdominale. In cadrul expunerii de lunga
durata pot fi afectat: Plamani: emfizeme pulmonare, cresterea riscului de cancer
pulmonar, Ficatul: in general pe termen lung ficatul este protejat impotriva
intoxicarii cu Cadmiu care este legat de MT si depozita in rinichi (MT poate lega

pana la 7 atomi de Cd), Rinichii: datorita acumularii in rinichi a Cd pe termen lung

pot apare disfunctii glomerulare si tubular, disfunctii renale. Datorita faptului ca
rinichi sunt organele care regleaza cantitatea de saruri in organism, in cazul
intoxicatiei cu Cadmiu pot apare dereglari majori a concentratiai anumitori ioni.
Poate apare o eliminare a Ca care poate duce la decalcifierea oaselor, Sistemul
osos: decalcifierea oaselor etc.

Multe alte substante in afara metalelor grele sunt, de asemenea comune.

Toluenul, Xylena, clorura de metal, distillate din petrol, eterii de glycol, cetona si
chiar benzenele sunt cativa dintre ingredient utilizati in ulei si solventii de baza ai
vopselelor, markarurilor.
Formaldelhida este utilizata ca un conservant in multe vopsele acrilice,
tesaturilor si produse fotografice.
Formaldehida: o substan iritant, cancerigen, folosit n industria mobilei.
La un moment dat, formaldehida a fost eliminat din producia mobilei, ns se
folosete la scar larg sub form de conservant i dezinfectant n ampoane, lac de
unghii, ntritori pentru unghii i produse pentru creterea prului. Provoac alergii,
ameeal, dureri de cap i dureri cumulate. In cazul expunerilor repetate poate irita
pielea si chiar provoaca astm si cancer. Este considerat halucinogen de ctre
IARC (International Agency for Research on Cancer) i probabil cancerigen de
ctre EPA (Environmental Protection Agency). Prezena ei este adeseori mascat,
datorit faptului c intr n componena altor ingrediente, precum hidantoin, ori
surfactani, cum ar fi lauril sulfatul de sodiu. Este de asemenea bine de tiut c
produsul mai apare i sub numele de formalin sau MDM.
Hidrochinona este utilizata in chimicalele pentru developat fotografiile.
Azbestul izoleaza cuptoarele si contamineaza talcul si soapstone (steatite/talc-sist).
Cuptoarele emit gaze precum dioxidul de carbon, dioxid de sulf, formaldelhina,
florin, crom, plumb si metale grele.

Radiatiile ultarviolete expuse in arta provin de la surse precum sudura cu arc

electric, arce de carbon, fotografie grafica, imprimare si copiere.
Alte substante extreme de toxice din produsele zilnice de consum sunt:
Policlorura de vinil (PVC) este adesea asociata cu ftalati adaugati in plastic
pentru ca acesta sa fie mai moale, care sunt suspectati ca ar cauza cancer la animale
si oameni. PVC-ul se gaseste in foarte multe produse: saltele de patut, jucarii
gonflabile pentru piscine, papusi, bavete, jucarii de baie, podea din vinil, cortina
pentru dus si altele. In unele cazuri este imposibil sa te feresti de acestea, astfel ca
este indicat sa inlocuiesti cat mai multe cu unele mai sigure. Spre exemplu, alege
jucarii de baie si cortine pentru dus facute din etilen vinil acetat (EVA).
Flatatii. Acestia se gasesc in materiale de constructie care contin PVC, in
dispozitive medicale, in diverse obiecte de scoala si birou, precum si in parfumuri
(face ca acestea sa persiste in aer mai mult timp dupa ce au fost pulverizate). Iar
problema este una serioasa, afectand sanatatea copiilor din ce in ce mai des
(expunerea la ftalati in perioada prenatala a fost legata de probleme de dezvoltare).
Substantele ignifuge. Acestea sunt unele dintre cele mai comune surse de
toxicitate din locuinte, putand fi gasite in electronice, covoare, saltele si scaune auto
pentru bebelusi. Daca substantele ignifuge ar ramane unde au fost puse initial, nu ar
fi nicio problema, dar ele ajung in aer si de acolo in organismul nostru. Cercetatorii
au gasit astfel de substante si in corpul nou-nascutilor, studiile legand aceste
chimicale de probleme de fertilitate si reproducere si de defecte neurologice si de
dezvoltare.
Unele companii producatoare au inceput sa foloseasca si substante mai putin
nocive, astfel ca ne putem interesa la producator (sau eventual la comerciant) asupra
materialelor ignifuge utilizat.
Acesta este doar varful icebergului! Exista literalmente sute de produse de art
i mestesuguri de pe pia, care contin multe toxine. Acestea pot fi respirate, inghitite,
sau aborbite prin piele de utilizatorii increzatori. Desi atistii profesionisti si mesterii,
profesorii de arta si studentii de arta se confrunta cu cele mai mari pericole, deoarece

acestia sunt expusi n mod constant la aceste produse, ei tind s fie mai bine informati
cu privire la aceste riscuri. Acestia sunt probabil mai in masura sa ia masuri pentru a
se proteja decat persoanele care se ocupa si de elevi i de vrstnici folosind materiale
de la centrul comunitar.
Oamenii care folosesc obiecte de art i mestesuguri ar trebui din timp sa
invete ce produse chimice daunatoare pot fi utilizate i s ia msuri pentru a evita
expunerea. Acest lucru nu este o sarcina dificila asa cum era cu doar cativa ani in
urma. In anul 1998, a fost adoptat un proiect de lege care necesita comisiilor pentru
siguranta produsului din SUA de a reglementa etichetarea materialelor de arta si
mestesugaresti pentru pericolele asupra sanatatii. Noua lege prevede c atat copiii
mici, cat si persoanele n vrst i persoanele cu handicap trebuie s fie luate in
considerare in etichetarea unui produs.
Din pacate, obiecte de art i mestesugurile au o viata lunga poate cu ani
inainte ca toate produsele de pe piata sa fie etichetate corespunzator. Intre timp cauta
produse care poarta AP sau CP reali. Aceste obiecte pot fi folosite in siguranta si de
catre copii mici cu cateva exceptii. De exemplu, emailurile de metal, glazurile de
ceramic, i argile care conin talc pot purta sigiliul, dar nu ar trebui s fie utilizate de
ctre copii mici.
Experii sugereaz pasionailor sa urmeze aceste reguli:
1.

Lucreaza intr-o zona bine aerisita. O fereastr deschis, nu poate asigura o

aerisire adecvat. Un ventilator de evacuare care ventileaza din exterior ofera deseori
o ventilatie suficienta, dar consulta un expert inainte de a-l instala. Evita lucrul ntrun subsol inchis sau garaj.
2.

Substituie cu materiale non-toxice pe cele toxice ori de cte ori este posibil.

3.

Evita folosirea de aerosoli, pulberi uscate, sau alte forme de produse care sunt

dificil de aplicat cu precizie.

4.

Nu manca, bea, sau fuma n ncperi de lucru atunci cnd utilizati materiale

periculoase.

5.

Nu lsai recipientele de art i accesoriile de mestesugarie deschise n jurul

camerei, i curatati repede scurgerile. Pastreaza camera de lucru curata.

Au fost scrise mai multe cri pentru amatori, precum i artist profesionisti cu privire
la pericolele bunurilor de art. De asemenea, mai multe organizaii sunt disponibile
pentru a ajuta oamenii care folosesc materiale de art i mestesugarie sa le foloseasca
n condiii de siguran.

C.

Unele produse asemanatoare

Ori de cte ori le cumpram, sau utilizeazm produse de curatare, ne asumm o

povar de poluare. Acest lucru nu poate fi evitat.

Periculoasele deseuri se obtin din domeniul produciei de produse comune,
cum ar fi din tesatura de poliester, pulovere acril, aparate de bucatarie, si cani de lapte
din plastic. Tabelul 1 enumer unele dintre produsele comune pe care le folosim i
deeurile periculoase care le creeaz, multe dintre care sunt discutate n toat aceast
carte.
Produsele enumerate n tabelul 1 sunt comune i pot fi chiar necesare pentru
oameni pentru a tri confortabil. Cu toate acestea, este posibil pentru oamenii sa
minimalizeze povara lor poluare cu cateva cunostinte, unele cumprturi inteligente,
i unele planificate n avans. Nu incercam aici a rspunde la toate ntrebrile care pot
aprea, dar prezentam cteva din problemele pe care un consumator le-ar putea lua n
considerare atunci cnd ncearc s aleaga produsele alternatice. Analiza noastr de
aici nu este definitiv, ci mai degrab este destinata s ncurajeze oamenii s se
gndeasca la criteriile pentru a face alegeri ecologice de consum.

Tabel nr 1.
Produsul

Deseuri periculaose

Plasticele

Compui organici de clor i solveni

Pesticidele

Compusi organici de clor i compui organici de

fosfat

Drogurile

Solveni organici i reziduuri, i metale grele (sunt

comune mercurul i zincul)

Vopselele

Metale grele, pigmenti, solventi si reziduuri organice

Uleiul si benzina

Fenol, benzen, i ali compui organice; amoniac,

sare, acizi, si lichide caustice.

Metalele

Plumb, mercur, zinc, fluor, cianur, acid i alcaline,

solveni, pigmeni, srurile, ulei i fenol.

Articolele din Piele

Solveni organici i chronium.

Textilele

Metale grele, vopsele, compui organici de clor, i

solveni

D.Hrtie versus plastic

Cea mai comun ntrebare, poate, a cumprtorilor de produse alimentare, n

zilele noastre, este hrtie sau plastic ? Sacoa cu cel mai mic grad de plouare poate
s nu fie tocmai cea din hrtie, dac este unanim acceptat. Industria lemnului i a
hrtiei se gsete n top 5 poluani, n Statele Unite. Cnd este comparat dup
greutate, plasticul este produsul cu cele mai puine deeuri toxice. Dar lucrul acesta
nu spune toat povestea. n general, emanaiile toxice din timpul fabricrii hrtiei
sunt caustice. Poate s ard la contact i poate chiar s distrug o populaie cu peti,
expus acestui fapt. n orice caz, cele mai multe deeuri toxice, rezultate din
fabricarea hrtiei, nu cauzeaz alte efecte de lung durat, cu efecte asupra sntii
oamenilor.
n contrast, o parte dintre deeurile asociate cu fabricarea plasticelor este
persistent n mediul nconjurtor i tinde s cauzeze cancer i alte probleme de lung
durat asupra sntii, expunnd oamenii, animalele i plantele. n plus, cnd
plasticul este ars, fumul tinde s fie mai periculos pentru sntate, dect cel rezulat
din arderea hrtiei.

Figura 6: Indemn Protejeaza mediul!

Sursa:http://www.amosnews.ro

Dovezile, bazate pe cantitatea polurii, emise n raport cu masa materialului, nu

au luat, de asemenea, n considerare modul n care sacii sunt refolosii sau ce se
ntmpl cu ei dup eliminarea lor. Poate fi un argument faptul c sacii, probabil, sunt
refolosii, att timp ct asta rmne, adesea, cea mai potrivit alegere. Dac sacii din
hrtie sunt reciclai, alegerea hrtiei poate fi, ns, i mai potrivit. Din pcate, acea
hrtie maron din care sunt fcui sacii din hrtie din magazine sunt de slab calitate,
aadar, acetia intr un pic sub semnul ntrebrii. O dat ce sacii sunt fcui pentru
depozit, este o mic diferen ntre ei. Hrtia poate avea o durat de timp remarcabil
ntr-un depozit urban. Atta vreme ct depozitul este localizat ntr-o zon de coast,
hrtia capt ntietate. Ea se dezintegreaz repede, n drumul ei spre ap, pe cnd
plasticul persist i devine un pericol pentru viaa maritim. Din fericire, chestiunea
poate fi evitat complet, prin alegerea unei alternative care, n acest caz, ar fi o
canava (estur din bumbac) sau o mpletitur din sfori drept saco pentru
cumprturi, ce poate fi dus la depozit i refolosit de sute de ori nainte s se uzeze.
Aceast discuie arat c n alegerea produselor alternative, ar trebui sa fie
puse urmtoarele ntrebri:
1.

Ct de des va fi reutilizat produsul nainte de a fi aruncat? Este o exceptie a

celui ce poate fi reutilizat.

2.

Poate fi el reciclat? Este o exceptie a celui care poate fi reciclat.

3.

Cat de toxice sunt deeurile produse emise n timpul fabricrii sau eliminarii.

4.

Exista o alternativa mai buna?

Cum sa nu compari hartia cu plasticul? Cupe de plastic izolate sunt realizate

folosind stiren expandat cu CFC sau pentan. Ar trebuie sa fie evitata umplerea
cupelor cu CFC, lansarea de CFC conduce la distrugerea ozonulu stratosferic. Astfel,
paharul de plastic poate efectua mai puina poluare parial din cauz c sunt necesare
mai puine materii prime i energie mai puina pentru fabricarea. Multe pahare de
plastic pot fi de asemenea reciclate ntruct acoperirile i cleiurile utilizate pentru a
face pahare de hrtie interfera cu reciclarea. Ambele cupe mprtesc dezavantajul
c acestea sunt produse de unic folosin. Ca o alternativ la pahare de unic
folosin aduce o can ceramic reutilizabila la cafenea n fiecare diminea. Factorii
implicai n alegerea dintre plastic si hrtie sunt afiati n figura 4.

Pungile de plastic dispar in aproape 30 de ani;

Hartia este reciclabila, dar un functionar obisnuit arunca la gunoi 55-70 de kg de
hartie pe an.

E. De unica folosinta versus bumbac

Scutecele de unica folosinta sunt o afacere de succes n SUA. Intruct acestea

au fost folosite doar o dat pe timpul cltoriilor, mai mult de 80 % din multime
poarta acum excusiv scutece de unica folosinta. Acolo hrtia i produsele din plastic
au revoluionat loc de munc. In cazul n care problema deeurilor toxice este doar
considerat pe scutec, scutecele de bumbac i de unic folosin poarta poveri similare
polurii. Cu toate acestea, copilul va trece in medie prin peste 170 de scutece de unic
folosin, fiecare scutec este achizitionat si reutilizat. Fabricarea de scutece de unic
folosin pentru a satisface suficient nevoile unui copil tipic utilizeaz mai multe
materii prime i creeaza mai multe deeuri la fabricaie mai mult dect o face
fabricarea scutecelor de bumbac. Scutece de bumbac utilizeaz mai mult energie i

ap i contribuie mai fluent la instalaiile de epurare a apelor uzate decat scutece de

unica folosinta. Cu toate acestea, cantitatea de deeuri asociate cu producerea,
utilizarea, eliminarea de scutece de unica folosinta, astfel c copleete de a folosi
scutece de bumbac, care vin n mod clar nainte dintr-o perspectiv de mediu. n plus,
scutece de unica folosinta aduga deeuri umane la depozitele municipale, care nu au
fost concepute pentru a gestiona astfel de deeuri ntr-un mod sntos. Ca atare, unii
oameni de stiinta se tem c apele subterane locale pot deveni contaminate cu bacterii,
virusuri, i alti ageni patogeni. Aceste microorganisme amenin, de asemenea,
starea de sntate a persoanelor care lucreaz n depozitele de deeuri, ei sunt
capabili de a persista mult timp dupa ce autobasculanta este nchis, ceea ce face
utilizarea viitoare a autobasculantelor riscanta. Scutecele de unic folosin utilizate,
de asemenea, ia o mare parte din spaiu, la depozitul de deeuri municipale deja
aglomerate. Exist un consens n rndul persoanelor care gestioneaz gropile
municipale faptul ca scutece de unica folosinta sunt o problem n cretere. In timp ce
productorii de scutece de unic folosin experimenteaz cu reciclarea scutecelor de
unic folosin utilizate, reciclarea scutecului nu este nc practicat comercial. In
anumite circumstane, ar putea fi necesar sau mult mai convenabil de a folosi de
unica folosinta. De exemplu, n cazul n care instalaiile de curare nu sunt
disponibile sau n imposibilitatea de a stoca scutece folosite mai trziu pentru
camioneta, folosirea scutecelor de unica folosinta poate fi adecvat. Figura 5 prezint
factorii implicai n alegerea ntre scutece de unic folosin i a celor de bumbac. Ori
de cte ori produsele sunt achiziionate, consumatorii care doresc s reduc la
minimum sarcina lor de poluare ar trebui s lucreze prin intermediul proceselor de
gndire asemntoare. Din fericire, informaiile care permit consumatorilor
posibilitatea de a face o alegere devin din ce n mai disponibile.

Scutecele textile trebuie spalate, si totusi polueaza mai putin mediul

decat cele de unica folosinta?

Scutecele de unica folosinta polueaza mediul de doua ori. Prima data in faza
de fabricatie, cand rezulta ape uzate industriale, precum si poluarea rezultata in
urma productiei chimicalelor si materialelor sintetice utilizate. Pentru obtinerea
materiilor prime se defriseaza zone intinse de padure plantand in loc arbori de
esenta lemnoasa moale, care perturba echilibrul ecologic. Hrtia folosita provine din
copaci, la creterea crora se folosesc ngrminte, apa si energie mecanica.
Plasticul provine din pcur, care este o sursa de energie care nu se rennoiete.
Dupa folosin multi mpacheteaz scutecele in pungi de plastic, fapt care
ngreuneaz procesul de degradare a scutecului. Primele scutece refolosibile din anii
1970 inca nu s-au degradat. Scutecele de unica folosin sunt folosite pentru cteva
ore, si dup aceea sta 100 de ani in groapa de gunoi.
Scutecele de unica folosinta polueaza mediul si pe parcursul transportului,
care deja inseamna mai multa poluare decat spalarea scutecelor textile. Iar daca
spalam cu detergenti naturali biodegradabili, reducem la minim poluarea.
Prin folosirea scutecelor de unica folosinta rezulta o cantitate mare de deseuri,
care nu sunt biodegradabile. In ultimul timp producatorii de scutece au scos pe piata
scutece care se numesc biodegradabile, dar de regula acestea se descompun foarte
greu sau nu sunt complet biodegradabile, iar componentele rezultate din
biodegradare intra in panza freatica.
Este nevoie de 200 de ani pt un scutec de unica folosinta sa se descompuna.
Si scutecele refolosibile polueaz mediul ntr-un fel. Dar nu in aceeai msur
ca si scutecele de unica folosin. Un scutec refolosibil se poate folosi chiar de 200
de ori, si se descompune in 6 luni. Scutecele refolosibile polueaz mediul in special
prin splare. Dar putem face eforturi ca splatul sa fie fcut cat mai ecologic: prin
splarea cu detergeni ecologici, soda de rufe, si prin omiterea balsamului de rufe.
Daca splm la temperaturi cat mai mici, sub 60 de grade, putem sa economisim
energie. Si uscatul scutecelor pe usctor de rufe si nu in maina de uscat este mai
ecologic. Un scutec refolosibil poate servi chiar si doi copii. Deci in general putem
sa spunem ca in jur de 30-40 de scutece refolosibile sunt de ajuns pentru doi copii.

CONCLUZII

Ingredientele inerte pot fi tozice sau pot cauza probleme de mediu avand, de
asemenea, proprietati toxice la fel ca si ingredinetele active. Agentia Nationala pentru
Protectia Mediului SUA a declarat peste 100 de ingrediente inerte ca fiind de interes
toxicologic printre acestea numarandu-se si fenolul sau clorula de metil.
Un alt pericol pentru sanatatea umana se poate gasi in arta si in materialele
mestesugaresti, intrucat multe creatii artistice si materiale mestesugaresti sunt
incarcate cu pigmenti cu continut de metale grele si diversi solventi.
Desi hartia este un produs mai poluant pentru mediu decat plasticul intrucat
ocupa suprafete imense, aceasta este reciclabila si nu cauzeaza efecte de lunga durata
asupra sanatatii omenesti. In schimb deseurile cauzate de fabricarea plasticelor tind sa
cauzeze cancer si alte efecte de lunga durata asupa sanatatii.
Intre a alege a folosi un scutec de unica folosinta si unul de bumbac se
incurajeaza folosirea celor refolosibile intrucat intrucat scutecele de unica folosinta
sunt foarte poluante pentru mediu.
BIBLIOGRAFIE
John Haste, Cheryl Holdren, Richard Schmeider, Christine Shinley, University of
California Press, Berkeley, Los Angeles, London, 1991, A guide to everyday pollution hazards.
Earthworks Press. 1989. 50 Things You Can Do To Help Save the Earth. Berkeley, CA.
HOCKING, MARTIN B. Paper versus Polystyrene: A Complex Choice. Science
251:504-505.
MCCANN, MICHAEL. 1985, Health Hazards Manual for Artists. New York :Lyons
Burford.
ROSSOL, MONONA, 1990. The Artists Complete Health and Safety Guide. New York:
Allworth Press.
http://www.amosnews.ro
www.epa.gov

http://www.ecomagazin.ro

Figura nr. 1

SUBSTANTELE TOXICE DIN ALIMENTE

Introducere
Sunt prezentate nenumratele ci n care suntem expui toxinelor prin
consumul de alimente.
Vom examina prima dat aditivii alimentari, explicnd unele dintre motivele
pentru care aceste substane sunt adugate produselor alimentare, msura n care
reglementrile ne protejeaz de ele, i unele modaliti de bun sim de a reduce
expunerea inutil. Apoi vom discuta despre modul n care un element special n
regimul multor oameni alcoolul crete sensibilitatea lor la alte toxine la care pot fi
expui.
n cele din urm, ne uitm la ceea ce este n prezent o problem foarte
controversat gradul n care substanele perfect naturale n regimul nostru pot
provoca mai mult de un risc pentru sntate dect poluanii, n general, mai de temut,
cum ar fi pesticidele sintetice i alte substane chimice industriale.

Capitolul I. Aditivii alimentari

1.1.Ce sunt E-urile?
Conform normelor oficiale, prin aditivi
alimentari se nelege orice substan care n
mod normal nu este consumat ca aliment n
sine i care nu este utilizat ca ingredient
alimentar caracteristic, avnd sau nu o valoare
nutritiv, prin a crei adugare intenionat la produsele alimentare n scopuri
tehnologice pe parcursul procesului de fabricare, prelucrare, preparare, tratament,
ambalare a unor asemenea produse alimentare, devine o component a acestor
produse alimentare. E-urile sunt acei aditivi adugai n alimente cu rol de ndulcitori,
colorani, emulgatori, conservani. Muli dintre acetia erau folosii i nainte de 1989.

Alinierea la normele Uniunii Europene a presupus folosirea codurilor de tip E

pentru aditivii alimentari.
Numeroase organisme internaionale de sntate au tras ns serioase semnale
de alarm cu privire la aceste adaosuri sintetice, declarndu-le toxice. Folosirea lor
ndelungat sau improprie poate duce, n timp, la formarea unor afeciuni grave care
nu mai pot fi tratate. Potrivit rapoartelor organizaiilor internaionale, mortalitatea n
rndul populaiei globului, cauzat de consumul alimentelor mbogite cu substane
artificiale, se afl pe locul al III-lea, dup consumul de droguri i medicamente i
dup accidentele de circulaie. n Romnia numrul bolnavilor de cancer se afl ntr-o
continu cretere i se estimeaz c aceast afeciune va deveni n scurt timp boala
mileniului III mpotriva creia nu exist nc premisele c se va descoperi un
antidot.
1.2.Aditivii alimentari si sanatatea
Este de la sine neles faptul c aprovizionarea cu alimente este curat i
sntoas. Deci, citim de
multe ori cu consternare
c, un aditiv alimentar
comun se dovedete a fi
nesntos. Din fericire, n
ziua de azi majoritatea
aditivilor

alimentari

nu

sunt periculoi, iar cei noi

sunt atent testai nainte de a fi acceptai pe pia. Cu toate acestea, exist muli aditivi
chimici utilizai n mod obinuit, care se presupune c sunt siguri, pentru nici un alt
motiv dect acela c nimeni nu s-a plns de vreo boal, ca urmare a utilizrii lor de-a
lungul anilor. Acestea sunt substane chimice cunoscute ca fiind n general
recunoscute ca fiind sigure, sau GRAS*. Odat ce o substan este listat ca GRAS,
aceasta nu este supus unor reglementri specifice. Administraia alimentelor i

medicamentelor (FDA) prevede doar ca "buna practic de fabricaie" s fie utilizat

pentru substanele GRAS.
Termenul de aditiv alimentar nu este foarte specific. Acesta include aceste
substane chimice adugate intenionat n produsele alimentare, contaminani din
materialele de ambalare, de pesticide sau reziduuri de medicamente de animale, i
produse chimice prezente n apa utilizat pentru procesul produciei. Culorile
produselor alimentare sunt considerate separat n cadrul Amendamentului aditivilor
color (1960) la Actul alimentar, consumului de droguri, i cosmetice. Reziduurile de
la noile medicamente pentru animale sunt de asemenea luate n considerare separat n
cadrul legislaiei.
Contrar credinei populare, aditivii alimentari nu sunt o inovaie modern. Srarea
crnii a fost prima dintre multele tehnici de conservare utilizate de-a lungul secolelor
pentru a pstra carnea i a nu se strica. Dar chimia modern a furnizat o serie de
substane noi care pot fi utilizate n conservarea produsele alimentare. La nceputul
anilor 1900, acidul boric, formaldehida, srurile de plumb, i acidul salicilic erau
comuni, dar totui aditivi toxici alimentari.
n 1958, Amendamentul aditivilor alimentari a adoptat Legea Alimente i
Medicamente Pure, care a cerut productorilor s fac teste extinse nainte ca orice
nou aditiv alimentar s fie comercializat. Dar aditivii alimentari care au fost n
folosin pentru o lung perioad de timp i cei care au fost considerai siguri de ctre
"oamenii de tiin calificai", n condiii normale de utilizare au fost scutii de la
testarea premarket.
Ca rspuns la Amendamentul Aditivilor Alimentari, FDA* a ntocmit o list de
substane care s-au gndit a fi sigure. Lista a fost apoi inclus ntr-un chestionar care
a fost trimis la aproximativ 900 oameni de tiin. Puin peste de o treime din cei
crora le-au fost trimise chestionarele au rspuns, i doar aproximativ 100 de
rspunsuri coninea comentarii substaniale. Din aceste date insuficiente, lista GRAS
a fost finalizat. Din 1969 FDA a nceput s revizuiasc literatura tiinific ca s
determine sigurana substanelor GRAS. La mijlocul anului 1987, mai puin de 500

substane au fost examinate, 48 au afirmarea n ateptare GRAS, nu pentru c ele sunt

nesigure, ci pentru c prea puin se cunoate despre substanele chimice pentru a se
stabili dac acestea sunt sigure. Lista n ateptare cuprinde aditivi utilizai pe scar
larg cum ar fi cofeina, BHT* i BHA*, mutar, gelatin, i acid citric.
Amendamentul Aditivilor alimentari conine, de asemenea, controversata clauza
Delaney*, care prevede c nici un aditiv nu este considerat a fi sigur n cazul n care
se constat c induce cancer atunci cnd este ingerat de om sau animal. Clauza
Delaney definete "siguri" n termeni absolui rigizi. O substan chimic fie cauzeaz
cancer sau nu. Dac testele bine efectuate arat c aceasta cauzeaz cancer, n orice
cantitate, aceasta trebuie s mearg, o perioad. Desigur, nimeni nu vrea cancer cauzat de substanele chimice adugate n produsele alimentare. Dar clauza Delaney
nu permite n nici o consideraie s se acorde posibilele beneficii care pot fi derivate
din utilizarea aditivilor care cauzeaz cancer. De exemplu, se presupune c un produs
chimic a fost dezvoltat s distrug aflatoxina din alimentele preparate. Acum, s
presupunem c aceast substan chimic s-a dovedit a produce cancer n
laboratoarele de animale, dar folosind numai doze masive; doze foarte mici de
aflatoxin sunt capabile de a produce cancer la oameni. Astfel, folosirea acestei noi
substane chimice de a distruge aflatoxin poate fi o idee bun. Cu toate acestea,
deoarece substanele chimice noi cauzeaz cancer, acestea nu pot fi folosite,
indiferent de ct de mult aflatoxin poate preveni inducerea de cancer.
Acesta este unul dintre cele mai importante motive de ce clauza Delaney nu este
controversat. Totui, aceasta rmne n cri. Ce membru al Congresului ar dori s
fie pus pe nregistrri ca favoriznd adugarea de cancer cauzat de substanele
chimice din alimente?
n practic, paii fcui de FDA n aceast problem, a fost prin a ignora pur i
simplu potenialul cancer cauzat de aditivii alimentari pe care i determin agenii,
prezentnd un risc aproape nesemnificativ pentru populaia care consum alimentele.
Doar atunci cnd membrii publicului cred c exist un risc reprezentat de ctre un

aditiv specific, presiunea este inacceptabil de mare asupra ageniei de a-i apra
decizia lor.
Culorile alimentelor trebuie s fie testate riguros nainte de a fi listate ca fiind
acceptabile de ctre FDA. Numai apte colorani sintetici sunt certificai pentru a fi
utilizai n produsele alimentare. Controversa nc mai exist n ceea ce privete
cancerul cauzat de proprietile tuturor acestor vopsele. Culoarea galben nr.5 este
renumit a provoca reacii alergice, n special aspirina-sensibil n rndul oamenilor.
Muli oameni susin c, coloranii sintetici sunt complet inutili. De exemplu,
norvegienii au interzis utilizarea tuturor coloranilor sintetici n 1979, i ei par
neperturbai cu privire

la consumul de hot-dogi gri. Multe vopsele alimentare

provenite din surse naturale sunt disponibile, dar acestea sunt scumpe pentru a fi
utilizate, sunt ineficiente pentru anumite aplicaii, i nu redau strlucirea culorilor pe
care o fac coloranii sintetici. De asemenea, multe culori alimentare naturale nu au
fost supuse testelor de toxicitate.
Dei mai mult de 2800 substane sunt utilizate ca aditivi alimentari, marea
majoritate sunt folosite n cantiti foarte mici. Zaharoza, siropul de porumb,
dextroza, sarea, piperul negru, caramelul, dioxidul de carbon, acidul citric, amidonul
modificat, bicarbonatul de sodiu, drojdiile, i mutarul galben reprezint 95% din
greutatea tuturor aditivilor utilizai n Statele Unite. Desigur, consumatorul de rnd
este preocupat de restul de 5%. Care dintre acestea sunt de fapt sigure a fi mncate?
Nu exist nici o ndoial c unele dintre ele sunt benefice, cele mai multe sunt
inofensive, i cteva pot cauza probleme de sntate neprevzute. De exemplu,
colorantul rou Nr.3, glutamatul monosodic (MSG), sulfiii, i nitraii sunt aditivi
alimentari care pot fi potenial duntori pentru populaie ca un ntreg sau pentru
segmente deosebit de sensibile ale populaiei, n special la copii i persoanele cu
alergii.
Cu alimentele prelucrate, reprezentnd peste jumtate din alimentele consumate n
Statele Unite ale Americii, ngrijorarea n legtur cu efectele asupra sntii ale
aditivilor alimentari nu este greit. Cu toate acestea, dependena de produsele

alimentare procesate este, n multe feluri, voluntar. Aditivii alimentari sunt folosii,
deoarece oamenii vor fast-food, snack food, alimente n afara-sezonului, alimente
ieftine, i alimente care pot fi stocate n cmar pentru perioade lungi de timp. i
oamenii doresc ca aceast hran s arate apetisant i s aibe o textur normal,
mpreun cu sigurana de a fi mncate.
De departe cel mai bun mod pentru a
minimiza expunerea la aditivii alimentari
este de a folosi, produsele alimentare
neprelucrate, proaspete, chiar cultivate
ecologic ori de cte ori este posibil. n
plus, produsele alimentare neprelucrate
adesea au un gust mai bun i sunt
superioare nutritiv. Prepararea alimentelor
proaspete poate lua, de asemenea, mai puin efort dect dac ncercm s fim la
curent cu sfaturi fr sfrit despre ce aditivi alimentari trebuie evitai, sau s purtm
ghidul cu noi n jurul magazinului alimentar.
1.3.Cei mai periculosi aditivi
Organizaiile mondiale de sntate au fcut deja o list cu cei mai periculoi
aditivi prezeni n produsele alimentare. Majoritatea rilor care i folosesc sunt
contiente de nocivitatea lor i fac, sau au fcut deja, demersuri legislative pentru a-i
scoate de pe pia.
E123 - este interzis n Statele Unite ale Americii i n fostele state sovietice.
Se gsete n bomboane, jeleuri, dropsuri mentolate, brnzeturi topite i creme de
brnz. Este considerat cel mai puternic cancerigen dintre aditivi. n aceeai categorie
face parte i E 110, care intr n componena dulciurilor, mai ales a prafurilor de
budinc colorndu-le ntr-un galben atrgtor, apetisant, cunoscut i sub numele de
apus de soare.

E 330 - produce afeciuni ale cavitii bucale i are aciune cancerigen

puternic. Se gsete n cele mai multe sucuri care se afl n comer.
E 102 - este un alt colorant care se gsete n dulciuri, mai ales n budinci. Are
de asemenea aciune cancerigen.
Aceast list a fost realizat cu ajutorul unui raport ntocmit de Oficiul
Consumatorilor din Piaa Comun European. Lista nu este complet, urmnd a se
face cercetri pentru descoperirea altor aditivi nocivi.
Aditivii alimentari sunt mprii n 24 de categorii, dintre care enumerm
pe cele mai rspndite:
ndulcitori - nlocuiesc zahrul;
Colorani - pentru a da o culoare mai apetisant;
Acidifiani - dau un gust uor acid;
Corectorii de aciditate - cresc sau diminueaz aciditatea;
Emulsificatori - asigur un amestec omogen ntre ap i grsimile
alimentare;
Conservani - ntrzie sau mpiedic alterarea alimentelor;
Corectorii de gust i de miros - mbuntesc mirosul i gustul
alimentelor;
Propulsori - gaze care servesc la expulzarea alimentelor din ambalaje;
Antioxidani - limiteaz oxidarea alimentelor sensibile la contactul cu
aerul.

Capitolul II. Alcoolul

2.1. De ce alcoolul i alte substane chimice nu se amestec
Se estimeaz c 10% din populaia Statelor Unite face abuz de alcool. Aportul
cronic de alcool (sau, mai tehnic, etanol) este legat de afectarea ficatului, sistemului
nervos, sistemului cardiovascular, i sistemului imunitar. Consumul de alcool regulat
combinat cu fumatul este, de asemenea, legat de cancer al capului i gtului.
Sindromul de alcool fetal, un set de defecte congenitale care pot afecta copiii
femeilor care beau, primete o atenie sporit, n principal, deoarece cercettorii au
stabilit c, chiar i consumul de alcool moderat n timpul sarcinii este asociat cu
efecte adverse asupra greutii la natere i dezvoltarea timpurie a copilului. n timp
ce abuzul de alcool are, ntr-adevr efecte adverse asupra sntii i consecine
sociale, vom discuta n schimb aici, despre cum consumul de alcool regulat poate
modifica sensibilitatea la efectele altor toxine.
Consumul regulat de alcool, cum ar fi consumul moderat de trei zile pe
sptaman, timp de cteva luni sau ani, poate conduce la schimbri n ct de repede i
prin care ci substanele chimice sunt defalcate n interiorul corpului. n mare parte,
acelai mod n care schimb exerciiile fizice obinuite corpul pentru a se adapta la
mai multe exerciii, expunerea cronic la etanol determin organismul s se schimbe,
astfel nct s gestioneze sarcina cea mai grea. Aceste schimbri sunt reflectate n
modul n care organismul descompune etanolul. Acesta este defalcat n organism prin
dou seturi de enzime cunoscute sub numele de alcool dehidrogenat (ADH) i
sistemul microzomal de etanol oxidant (MEOS). ADH* este calea major pentru
metabolizarea etanolului. Aceast enzim este situat n principal n ficat, i acolo
exist o cantitate fix din ea. n timp ce un bazin mai mare de ADH nu poate fi creat,
acesta poate fi distrus att de consumul abuziv de alcool i, eventual, prin toxine.
Atunci cnd cantiti mici de etanol trec prin ficat, ADH este adesea capabil de a
procesa majoritatea din el. Ceva n plus fa de capacitatea ADH ului se scurge pe la
MEOS*.

MEOS este de asemenea situat n ficat, dar spre deosebire de ADH, mai mult din
el poate fi produs de organism la cerere. O doz regulat de etanol peste cantitatea
mic ce poate fi prelucrat de ctre ADH stimuleaz una din multele tipuri de
enzime care alctuiesc MEOS pn este creat suficient pentru a ndeplini cererea
crescut. Totusi aceast enzim, nu este foarte selectiv, ea prelucreaz o mare
varietate de substane, inclusiv multe medicamente comune i substane chimice. Mai
mult, stimularea unei enzime tip din grupul MEOS stimuleaz producerea altor
enzime chimice metabolizatoare n MEOS, prin urmare metabolismul este accelerat
de o mare varietate de droguri i substane chimice. Este important s ne amintim c
metabolismul unei substane chimice poate face un toxic s fie inofensiv sau ofensiv.
n consecin, persoanele care consum regulat alcool pot fi mai mult sau mai puin
predispuse dect un nebutor la efectele toxice cu care se confrunt. Sensibilitatea
crescut la un produs chimic poate fi cauzat de concurena pentru capacitatea
enzimatica existent (ADH sau MEOS) sau de capacitatea sporit de a bioactiva
produsele chimice. De exemplu, MEOS detoxifica barbituricele. Cu toate acestea,
enzima care detoxifica drogurile este mult mai atras de etanol. Aa c, atunci cnd
etanolul i barbituricele sunt luate mpreun, etanolul preia rapid capacitatea de
metabolizare a MEOS. Barbituricele bioactiv este lsat n circulaie de la etanolul
redus. Din acest motiv, doza letal de barbiturice este de aproape 50% mai sczut n
cazul n care medicamentul este ingerat, mpreun cu etanolul.
Acest proces, de asemenea, apare atunci cnd expunerea la etanol i toxine sunt
simultane. Xilen-ul ofer un exemplu interesant de astfel de interaciune. Xilen-ul
este atras de esutul adipos din organism. Atunci cnd o persoan este expus la xilen,
de obicei, ntr-un mediu industrial, cea mai mare parte chimic este rapid scoas din
snge i este temporar sechestrat n esutul gras al persoanei nainte de a fi
metabolizat. Deoarece xilen-ul este metabolizat, acesta este eliberat uor din spatele
esutului gras n fluxul sanguin. n acest fel, o concentraie constant de xilen este
meninut n fluxul sanguin pn cnd totul este eliminat din depozitele adipoase.
Etanolul este metabolizat de ctre aceeai enzima de care xilen este, dar din nou,

enzima este mult mai atras de etanol. Aa c, atunci cnd o persoan expus la xilen
n timpul zilei consum o butur alcoolic n cursul serii, xilen-ul brusc nu are nici o
cale metabolic disponibil pentru detoxifiere. ntr-adevr, concentraiile sanguine de
xilen au fost gsite la dublu atunci cnd etanolul este ingerat la cteva ore dup
expunerea iniial la xilen. O astfel de cretere poate avea ca rezultat simptome toxice
datorate otrvirii cu xilen.
n contrast, cei care consum alcool n mod regulat sunt mai puin sensibili la
efectele substanelor chimice metabolizate de ctre MEOS, n momentele n care nu
exist etanol n organismul lor. Acest lucru se datoreaz faptului c un bazin mai
mare de enzime este disponibil la detoxifierea drogurilor i substanelor chimice
dect ar fi prezente ntr-un nebautor. Cu toate acestea, aportul cronic de alcool poate
crete sensibilitatea unei persoane de a-i face ru de la substanele chimice care sunt
netoxice atunci cnd sunt ingerate sau inhalate, dar care sunt toxice atunci cnd sunt
bioactivate. De exemplu, s-a observat c alcoolicii afieaz o sensibilitate mult mai
mare la otrvirea cu tetraclorur de carbon. Acest lucru se datoreaz faptului c
alcoolicii tind s aib un bazin mult mai mare de enzime disponibile s modifice
tetraclorura de carbon n metabolitul su toxic.
Aceste exemple ilustreaz modul n care consumul de alcool regulat poate
influena sensibilitatea individual la toxice. Distrugerea, stimularea, sau inhibarea
enzimelor joac adesea un rol crucial n determinarea sensibilitii individuale de a li
se face ru n urma expunerii chimice.
2.2. Consumul de alcool si cancerul
Abuzul de alcool este frecvent menionat ca fiind un factor de risc n apariia
cancerelor. Cel mai frecvent asociaz cancerul hepatic (att prin agresiunea toxic
direct, dar i prin favorizarea apariiei cirozei, a crei evoluie este, ntr-un mare
procent din cazuri, spre cancer), ns, n combinaie cu fumatul poate cauza: cancere
de cavitate bucal, de limb, de gt, laringe i esofag. La femei s-a observat existena
unei corelaii ntre consumul exagerat de alcool i apariia cancerului mamar.

Alcoolul este metabolizat n organism la nivel hepatic (90%), prin intermediul

enzimei alcool dehidrogenaz, iar 10% se elimin prin respiraie nemodificat i la
nivel renal. Dac ficatul este supus unui proces intensiv i prelungit de metabolizare a
alcoolului (cum se ntmpl n organismul butorilor cronici) are loc o afectare
tisular hepatic, cu consecine grave, cum ar fi apariia ficatului gras, sau steatozic
(acesta, n timp, determin dezvoltarea cirozei hepatice). Absorbia alcoolului are loc
la mai multe nivele ale tubului digestiv, n proporii diferite, astfel c 20% se
absoarbe gastric, iar 80% se absoarbe intestinal. Prezena n cantiti mari a alcoolului
va duce n final la afectarea mucoasei gastro-intestinale, cu scderea capacitii ei de
funcionare (procesul de absorbie al nutrienilor eseniali organismului fiind astfel
afectat).
Alcoolul va favoriza apariia unui dezechilibru n organism datorat faptului c
scade capacitatea de absorbie a nutrienilor, crete ns necesarul caloric i afecteaz
utilizarea i depozitarea substanelor ce reuesc totui s fie preluate de ctre esuturi.
Este de reinut c regimul alimentar al unui alcoolic este de obicei deficitar n
substane nutritive i vitamine, acest lucru afectnd i mai mult statusul nutriional.
O alt categorie de boli datorate consumului exagerat de etanol o reprezint
cele cardio-vasculare, cum ar fi hipertensiune arterial sau cardiomiopatia.
Cardiomiopatia apare ca rezultat direct al agresiunii toxice asupra miocardului, ns
poate s apar i prin aciunea combinat a alcoolului cu alimentaia deficitar, fumat
sau hipertensiune arterial. Specialitii au observat c aceast patologie apare n
special dup un consum de 80 grame alcool pur/zi, mai mult de 5 ani. Accidentul
vascular cerebral are i el printre ali multipli factori de risc i consumul cronic de
alcool.
Medicii recomand pacienilor s consume alcool cu moderaie, cantitile
ideale fiind maxim un pahar/zi n cazul femeilor i 2 n cazul brbailor.

Capitolul III. Produsele alimentare i cancerul.

Ct de mult este natura de vin ?
Pesticidele i ali contaminani chimici gsii n mediul nostru au ajuns sub
focul greu de la oameni de tiin i grupuri de interes public din cauza
ameninrii ce o poate reprezenta pentru sntatea noastr. n ultimii ani, un
contraargument a fost formulat cu vigoare n cretere. Se afirm, ntr-un cuvnt, c
ameninarea cancerului de la substanele chimice sintetice, n mediul nostru a fost
mult exagerat i c multe alimente conin cantiti mai mari de substane naturale
care cauzeaz cancer dect cele pentru care industria chimic este responsabil.
Cel mai puternic susintor al acestui argument este biochimistul Bruce Ames,
care a dezvoltat testul Ames pentru depistarea substanelor care cauzeaz cancer
prin depistarea substanelor care produc mutaii n bacterii. Pentru a clarifica
raionamentul su, este util s se ia n considerare trei categorii de ingrediente
potenial- cauzatoare de cancer din alimentele noastre i ap:
1. Poluanii: Acetia includ reziduuri de pesticide n alimente i o varietate de
urme de metale i de ali poluani chimici gsii n apa potabil. Acetia
apar n mediul nostru, nu pentru c ei sunt produii activitilor umane.
2. Aditivii: acetia includ substane, cum ar fi nitraii, pentru conservarea
alimentelor, sau clor, pentru tratarea apei. Ele sunt n mod deliberat
adugate produselor noastre alimentare i n ap, pentru unele scopuri
benefice.
3. Toxinele Naturii: acestea includ numeroase ingrediente naturale ale
produselor alimentare. Unele dintre acestea sunt o parte inevitabil a
produsului alimentar sau sunt produse prin cultivarea plantelor, atunci cnd
sunt stresate de insecte sau de ciuperci. Altele sunt produse de mucegaiuri
care pot contamina produsele alimentare (cum ar fi aflatoxina produs de
mucegaiul Aspergillus flavus), i nc altele sunt produse atunci cnd
produsele alimentare sunt gtite, fermentate, sau pot deveni rncede.

Ames susine c ameninarea de la categoriile 1 i 2 au fost mult

exagerate i c muli bani sunt risipii i teama este generat n mod inutil din
cauza guvernului, tiinei, i ateniei dat de mass-media toxicelor din aceste
categorii. El continu s declare c pericolele din categoria 3 le depeste pe
cele ale primelor dou. n special, acesta susine c valoarea pesticidelor n
alimentele naturale, cum ar fi ciupercile, multe ierburi i condimente, elina,
cartofii, fasolea Lima, i multe alte fructe i legume depesc cu mult cantitatea
de pesticide pe care le primim din cauza utilizrii pesticidelor sintetice. n timp
ce cancerul este cauzat de cele mai multe dintre ele deoarece nu au fost testate
n mod corespunztor, el afirm c pesticidele naturale sunt mult mai
abundente n dieta medie, si c acestea reprezint o ameninare mai mare
pentru noi dect pesticidele sintetice. Mai mult, pentru a pune problema
pesticidelor n perspectiv, Ames ajunge la concluzia c ameninarea de la
toate pesticidele respective, naturale sau sintetice, este nesemnificativ la starea
de sntate a populaiei n comparaie cu ameninarea din cauza fumatului,
alcoolului, grsimilor alimentare i pericolelor nondietetice .
Nu ar trebui s fie o surpriz faptul c unele fructe, nucile i legumele
conin substane chimice naturale, care sunt otrvitoare pentru cel puin cteva
animale care pot mnca aceste alimente. Astfel de produse chimice acioneaz
ca aprare a plantelor de a nu fi mncate.
Aa cum selecia natural a condus la evoluia de epi pe porcii spinoi
carapacelor pe estoase, aceasta a dus la aprarea chimic pentru plante. De
multe ori, aprarea chimic este att de nociv pentru unele animale c acestea
evit s le mnce complet, dar dovezile lui Ames indic faptul c alimentele
perfect gustoase pot fi periculoase, de asemenea.
Exist puine ndoieli printre oamenii de tiin, si anume, c
ameninarea cancerului pentru sntatea uman de la fumat, o depete cu
mult pe cea de la produsele chimice din categoriile 1 i 2. Mai controversat
este concluzia lui Ames, cea despre poluanii chimici si aditivi i mai ales

concluzia lui cu privire la ameninarea la adresa sntii de la pesticidele

naturale, fa de cele fabricate industrial. Au existat numeroase critici din
scrierile sale, mai imperioase dect cele care sunt enumerate aici.
1.

Estimrile privind potenialul cauzator de cancer din cele mai multe dintre
substanele chimice, n toate cele trei categorii sunt foarte incerte. Relativ
puine pesticide naturale din produsele alimentare au fost testate pentru a
determina ct de puternice sunt pentru a cauza cancerul, precum i pentru cele
care au fost testate, exist incertitudini mari n interpretarea rezultatelor. Avnd
n vedere aceste incertitudini, criticii argumenteaz c nu este adecvat de a
concluziona c temerile n privina poluanilor chimici sintetici i aditivilor
sunt nefondate. O filosofie mai bine n condiii de siguran dect mi pare
ru" ar justifica faptul c noi cel puin meninem nivelul nostru actual de
ngrijorare asupra acestor substane.

2.

Ames exagereaz

n privina cantitilor de alimente mucegite i a

ingredientelor naturale cauzatoare de cancer n regimul omului tipic. De

exemplu, criticii lui Ames acuz c el i asum de zece sau mai multe ori c
att ciupercile ct i busuiocul n dieta medie conin substane chimice,
potenial toxice naturale i sunt importante pentru argumentele lui Ames. Mai
mult dect att, el poate a subestimat cantitatea de pesticide sintetice, n dieta
medie, deoarece cele dou pesticide pe care el le-a utilizat n principal pentru a
obine doza lui estimativ, au fost DDT-ul* i dibromura de etilen (EDB),
ambele fiind interzise n Statele Unite ale Americii. Pesticidele sintetice
utilizate pe scar larg astzi sunt susceptibile de a fi mai abundente n dieta
dect aceste dou substane.
3.

Oamenii pot alege ce tip de alimente s consume, ntruct adesea ei nu au nici

o alegere cu privire la ceea ce contamineaz aerul pe care l respir i apa pe
care o beau. Prin urmare, riscul de la toxinele naturii n diet i riscul de la
poluare difer printr-o cale important, ns subiectiv. De asemenea, oamenii

care beneficiaz de la poluare nu sunt de multe ori aceiai ca i cei care sufer
riscul, ntruct riscurile i beneficiile asociate cu dieta apar la acelai individ.
Astfel, din punct de vedere etic aceste dou situaii sunt destul de diferite.
Oricare ar fi riscul de la toxinele naturii n dieta noastr este ntr-adevr i,
indiferent dac aceasta depete pe cea de la poluanii chimici, trebuie s
mncm, dar nu trebuie s polum mediul nostru att de neglijent cum o
facem noi acum. O astfel de poluare pune n pericol sntatea. Prin urmare,
putem i ar trebui s lum acum msuri puternice pentru a reduce poluarea.
4.

Evaluarea lui Ames asupra riscului relativ a dietei i a poluanilor chimici se

bazeaz exclusiv pe riscul de cancer. Substanele chimice n mediul nostru (n
toate cele trei categorii) prezint numeroase alte ameninri de sntate n afar
de cancer, inclusiv leziuni hepatice, de reproducere i de insuficien
pulmonar, pot afecta sistemul nervos i slbirea sistemului imunitar al
organismului natural. Declaraiile despre prioritatea pe care guvernul ar trebui
s o dea la oricare dintre cele trei categorii de toxine ar trebui s se bazeze pe
cunotine ale tuturor riscurilor de sntate, nu doar cele ale cancerului. n timp
ce n literatura de specialitate, Ames precizeaz atent c argumentele sale se
refer doar la riscul de cancer, presa public raporteaz asupra rezultatelor sale
c de multe ori nu reuesc s califice argumentul. Ca urmare, publicul este
determinat s cread c Ames spune c pesticidele naturii sunt mai mult de o
ameninare la adresa sntii totale dect sunt pesticidele industriale.

5.

Argumentele lui Ames se refer numai la adresa sntii umane i ignor

ameninarea de poluare la alte organisme vii cu care mprim aceast planet.
Exemple de daune ecologice majore de la pesticide, cum ar fi DDT sau de la
ploi acide ar trebui s ne conving c noi periclitam alte forme de via atunci
cnd polum mediul nconjurtor. Produsele Chimice pot modifica, de
asemenea climatul nostru i stratul de ozon stratosferic, care ne protejeaz de
radiaiile ultraviolete, pune astfel n pericol viaa. Pentru muli oameni de

tiin, acestea sunt motive suficiente pentru nivelul actual de ngrijorare fa

de poluanii chimici.
Ames dovedete c riscul cancerului de la poluanii chimici i a aditivilor este
nesemnificativ raportat cu cea de la toxinele naturii, poate sau nu poate suporta testul
timpului. Cu toate acestea, el a efectuat un serviciu util evideniind faptul c "natural"
nu nseamn neaprat "sntos". n acest caz prudena ar dicta fcnd toate ncercrile
rezonabile pentru minimizarea expunerii la aceti contaminani chimici din mediul
care par s reprezinte un risc grav pentru sntate. Aceasta ar dicta, de asemenea, c
ngrijirile rezonabile trebuie luate pentru a minimiza consumul de alimente mucegite
i alte articole alimentare care pot prezenta un risc pentru sntate.
Substane n alimente, care s-au dovedit a produce tumori canceroase:

unele mase plastice cu care se ambaleaz alimentele;

pesticidele - substane care se folosesc pentru combaterea duntorilor n

agricultur;

ngrmintele chimice, ca i adaosurile de nitrai i nitrii folosite pentru

conservarea alimentelor, mai ales n combinaie cu alimentele bogate n
proteine (carne i produse animale, de exemplu), mai ales dac aceste
alimente sunt prjite sau sunt consumate mpreun cu buturi carbogazoase;

toxinele unor ciuperci care se pot forma pe alimentele care nu mai sunt
foarte proaspete;

substanele care se formeaz n urma afumrii sau prjirii alimentelor i,

n general, n alimentele nclzite peste 3500C. Astfel, consumarea crnii
i a petelui care au fost afumate reprezint un risc crescut de formare a
maladiilor canceroase ale sistemului digestive;

grsimile sau produsele din carne consumate n cantiti mari cresc riscul
de apariie a cancerului;

3.1.Alimentele - otrav
Consumul ndelungat de alimente, care au n compoziie aditivi obinui pe cale
sintetic, supune organismul la un adevarat bombardament chimic care afecteaz

organele interne. Pentru a se apra, acesta ajunge s produc anticorpi peste msur,
care n cele din urm particip i ei la vtmarea organelor. n cazurile nefericite
rezultatul acestor procese este distrugerea iremediabil a sistemului imunitar i
apariia unor tumori maligne sau benigne.
Studiile de specialitate arat c sunt cteva produse a cror folosire
ndelungat favorizeaz crearea unui astfel de dezechilibru n organism. Folosirea lor
ntmpltoare, pentru o perioad limitat de timp nu are efect dunator.
Margarina - are o structur molecular identic cu cea a
plasticului
Este un produs aprut n al doilea rzboi mondial, atunci cnd untul ncepuse
s devin inaccesibil. Cercettorii americani au descoperit accidental, c dac se
nclzete la 150 de grade Celsius un amestec de uleiuri vegetale, n prezena
hidrogenului i folosind catalizatori de nichel, se obine un produs alb, asemntor
untului, cu o structur molecular identic cu cea a plasticului, pe care l-au botezat
margarin, dup numele soiei (Margot) unuia dintre savani. Din acel moment i
pn acum progresul tehnologic a permis ca produsul, cu ajutorul substanelor
sintetice, s fie din ce n ce mai apetisant i mai atrgtor. Mirosul de lapte al
margarinei e obinut pe cale chimic. Grsimile care se afl n compoziia ei sunt ns
greu asimilate de organism care, pentru a face fa solicitrii, utilizeaz o cantitate
mare de energie. Sistemul imunitar este astfel neglijat i se creeaz o mai mare
sensibilitate la infecii, la intoxicaii i la mbolnvirea de cancer. De asemenea, n
procesul de metabolizare a grsimilor ficatul este solicitat excesiv, favoriznd
hepatita.
Aspartamul - un ndulcitor care poate ucide n 70 de feluri
Este unul din alimentele cele mai controversate. Fiind deosebit de concentrat,
el lezeaz organele digestive pe care le oblig s prelucreze o cantitate prea mare de
energie. Pentru c nu poate fi prelucrat tot, o parte trece imediat n snge, prin

intestinul subire, provoac hiperglicemie, ceea ce oblig pancreasul s produc n

exces insulin. n acest fel organismul este dereglat crendu-se stri de oboseal i de
agitaie. Pe termen lung, consumul n exces de zahr expune la grip, boli de plmni,
infecii urinare i intestinale. Lipsa de calciu apare i ea n timp, mai ales dac
consumul regulat de zahr este nsoit i de un stres puternic. Caria dentar apare la
peste 94% din populaia care consum produse cu zahr. De ase ori mai mult dect
n urm cu 200 de ani, nainte de descoperirea zahrului. Cauza nu este ns, cum se
credea, faptul c zahrul i dulciurile favorizeaz dezvoltarea bacteriilor pe dini, ci
perturbarea unui lan de procese metabolice ale calciului.
O alt problem este obezitatea, care se instaleaz frecvent la marii
consumatori de dulciuri. Acest lucru se produce, dei zahrul nu este att de bogat n
calorii pe ct s-ar crede, dar are darul de a perturba echilibrul hormonal, ceea ce duce
la creterea apetitului i la dezvoltarea n exces a esutului adipos.
Contieni de toate aceste probleme, productorii au inventat substitueni ai
zahrului. Paradoxal ns, muli dintre ei sunt cu mult mai nocivi. Aspartamul (E 950
i E 951) este un ndulcitor des folosit i poate fi sursa a peste 70 de tipuri de boli
mortale.
Supele concentrate i boala Alzheimer
Conin n exces glutamatul de sodiu, E 621, considerat de specialiti dintre cele
mai cancerigene substane. Supele se obin prin deshidratarea ciorbelor i a supelor
preparate normal, n cantiti industriale, pn rezult un praf, care ulterior este
amestecat cu substane chimice (colorani, aromatizani, conservani i glutamat de
sodiu), dup care se ambaleaz n vid, sau sub form de cubulee. Glutamatul de
sodiu se vinde productorilor sub form de cristale albe, fr gust i se combin
ntotdeauna cu ali aditivi chimici, aromatizani. Se folosete i pentru conservarea
laptelui, brnzeturilor, mezelurilor i ciupercilor. Organizaii de profil din Uniunea
European duc o intens campanie de interzicere a acestei substane. Opinia public
din USA a fost informat de US Food & Drug Administration c glutamatul de sodiu
este unul dintre principalii factori care produc boala Alzheimer. Injeciile cu

glutamat, efectuate pe animale, n laborator, au distrus celulele nervoase din creierul

cobailor, cinilor i maimuelor.
Guma de mestecat i berea - inamici ai stomacului
Chiar i n acest produs destinat cu precdere copiilor, productorii au gsit de
cuviin s introduc n ingrediente, nu mai puin de 7-8 tipuri de substane chimice,
multe dintre ele fiind pe lista celor suspecte sau declarate deja ca fiind nocive. ntr-o
pastil de gum se pot gsi: E 171, E 320, E 330, E 420, E 421, E 422, E 950, E 951,
E 967 i alte asemenea chimicale. Persoanele care mestec regulat gum i pentru o
vreme ndelungat se expun urmtoarelor afeciuni: colesterol (E 320), boli ale
aparatului bucal (E 330) i cancer (E 950 si E 951).
Chiar dac multe dintre ele sunt declarate a fi produse naturale, majoritatea
buturilor rcoritoare au n componena lor i aditivi chimici. Cel mai des folosit este
acidul citric (E 330) sau sarea de lmie precum i nlocuitorii de zahr ca aspartanul.
Coloranii folosii (E 110 si E 102) sunt i ei declarai toxici.
Buturile alcoolice, cum ar fi berea i vinul, sunt saturate de metabilsufit, care
d limpezime, dar care atac aparatul digestiv. La bere, n procesul de pasteurizare
sunt folosite substane chimice care provoac migrene.
Concluzii

Glosar
ADH:

alcool

dehidrogenat

BHA:

Butilat

de hidroxianizol

BHT: Butilat de hidroxitoluen

CLAUZA DELANEY: este un amendament (1958) la Legea Alimentelor,
Drogurilor i Cosmeticelor din 1938, numit dup

Congresmanul James

Delaney din New York. Ea spune: "Secretariatul Administraiei drogurilor i

alimentelor nu trebuie s aprobe pentru folosin n alimente niciun aditiv
chimic gsit a induce cancer la om, sau, dup teste, gsit a induce cancer la
animale.
DDT: Diclor-Difenil-Tricloretanul
FDA: Administraia drogurilor i alimentelor
GRAS: n general recunoscute ca fiind sigure - (Generally recognized as safe);
MEOS: sistemul microzomal de etanol oxidant
Bibliografie
Cheryl Holdren, Christine Shirley, John Harte, Richard Schneider, 1991,
Toxics A to Z; A

Guide to Everyday Pollution Hazards, University of

California Press, Berkeley Los Angeles, London: 61-66;

http://zupernews.wordpress.com/2010/05/26/cei-mai-periculosi-aditiviialimentari/
http://www.sfatulmedicului.ro/
http://logos.md/2008/07/25/e-urile-si-sanatatea-ce-sunt-aditivii-alimentari/
http://www.drpro.ro/2010/07/aditivii-alimentari/
http://www.armonianaturii.ro/Aditivii-alimentari-nocivi-

sanatatii.html*articleID_277- articol

Partea a II-a

TEHNICI DE ECOTOXICOLOGIE APLICATA

Introducere
Determinarea toxicitii efluenilor i a reziduurilor cu ajutorul biotestelor
este destul de ngreunat de necesitatea meninerii unui numr suficient de mare de
organisme-test in cadrul unor culturi de organisme. In consecin, aceste teste pot fi
realizate numai n laboratoare specializate, dar ntr-un numr limitat, datorit costului
ridicat al mentinerii permanente a culturilor de organisme vii.
Importana

aplicrii

acestei

noi

tehnologii

de

microbioteste

pentru

determinarea gradului de toxicitate i/sau nivelului de poluare a mediului este dat de

simplitatea i rapiditatea realizrii testelor comparativ cu cele clasice, ct i avantajul
obinerii rapide a unor loturi de organisme-test, eliminnd astfel culturile de
organisme.
Pentru determinarea toxicitatii acute a diferitelor probe prelevate din mediul
inconjurator, in ecotoxicologia acvatica au aparut tehnologii noi, care reduc mult
costurile necesare realizarii testelor. Ceea ce aduce nou utilizarea microbiotestelor
TOXKIT este realizarea unor teste de rutin, rapide, la un pre de cost sczut i fr
necesitatea unui echipament sofisticat, prin folosirea formelor de viata latente ale
unor specii din biota acvatica, sub forma de chisti, ca material biologic de pornire.
Asemenea forme criptobiotice pot fi meninute pentru lungi perioade de timp fr a-i
pierde viabilitatea i eclozate la nevoie, ntr-un timp relativ scurt ( 1-72 h).
Rezultatele aplicarii microbiotestelor intr-o gama larga de organisme-test
(apartinand tuturor nivelelor trofice :producator-consumator-descompunator) si pe
medii diferite (ape de suprafata/ freatice, sedimente, reziduuri contaminate), au servit
la stabilirea unui sistem de clasificare a toxicitii probelor de ap analizate, conform
metodologiei descrise de Guido Persoone ( Persoone et all, 2003).

Microbioteste specifice :
ALGALTOXKIT FTM : test de inhibitie a cresterii algale - 72h, utilizand alga verde
Selenastrum capricornutum (redenumita Raphidocelis subcapitata , iar mai recent
Pseudokirchneriella subcapitata). Acest microbiotest corespunde normativelor
OECD si ISO.
DAPHTOXKIT FTM magna : test de toxicitate acuta - 24-48h, utilizand crustaceul
cladocer Daphnia magna. Acest microbiotest corespunde normativelor OECD si ISO.
DAPHTOXKIT FTM pulex : test de toxicitate acuta - 24-48h, utilizand crustaceul
cladocer Daphnia pulex. Acest microbiotest corespunde normativelor OECD si ISO.
CERIODAPHTOXKIT FTM: test de toxicitate acuta - 24h, utilizand crustaceul
cladocer Ceriodaphnia dubia. Acest microbiotest corespunde normativelor USEPA .
THAMNOTOXKIT FTM : test de toxicitate acuta - 24h, utilizand crustaceul
anostraceu Thamnocephalus platyurus. Acest microbiotest este pe cale de a fi
incorporate in normativele unor tari privind testele de toxicitate acuta.
ROTOXKIT FTM : test de toxicitate acuta - 24h, utilizand ritiferul Brachionus
calyciflorus. Acest microbiotest corespunde normativelor ASTM Standard E1440-91.
ROTOXKIT FTM short-chronic : test de toxicitate cronica- scurta ( reproducere) de
48h , utilizand rotiferul Brachionus calyciflorus. Acest microbiotest corespunde
normativelor franceze AFNOR .
PROTOXKIT FTM : test de toxicitate cronica ( inhibitie a cresterii) 24 h, utilizand
protozoarul ciliat Tetrahymena thermophila. Testul bazat pe Tetrahymena sp. este
prioritar in atentia OECD.
OSTRACODTOXKIT FTM : test de toxicitate cronica ( mortalitate/ inhibitia
cresterii)- 6 zile, utilizand ostracodul Heterocypris incongruens. Acest test cu
ostracode este primul microbiotest de contact direct pentru solurile si sedimentele
contaminate.
RAPIDTOXKITTM : test de toxicitate de 1 ora, bazat pe larvele crustaceului
anostraceu Thamnocephalus platyurus, pentru determinarea rapida a contaminarii

apelor.
PHYTOTOXKITTM : microbiotest de germinare si prima dezvoltare -72h , cu
utilizarea a 3 plante superioare( 1 monocotiledonata si 2 dicotiledonate).
2.1. Utilizarea microalgelor n dezvoltarea microbiotestelor Toxkit.

Ca productori de oxigen i fiind o surs de hran pentru alte nivele trofice,

sntatea microalgelor este esenial n asigurarea stabilitii ecosistemelor acvatice.
Recunoscnd necesitatea protejrii acestui nivel trofic de baz mpotriva
agresiunilor datorate polurii chimice s-au dezvoltat o serie de teste de fitotoxicitate
n flacoane, nca din 1970.
O echip de la Universitatea din Bergen (Norvegia) a fost prima care a folosit
un procedeu miniaturizat pentru a raporta ,, concentraiile prag ale efectelor toxice
pentru Chlamydomonas reinhardi expus pentru 48 ore la o serie de diluii de petrol.
ntr-o lucrare de pionierat n acest domeniu din 1978, autorii au evideniat
avantajele folosirii microtvielor:
- simplitate;
- cost sczut;
- potenial de cercetare rapid
BLAISE i colaboratorii [14,15] au descris tehnica unui microtest algal de
inhibiie a creterii, de 8 zile, cu microalga Selenastrum capricornutum. Un grup de
cercettori suedezi a studiat efectele unor tehnici variate de sterilizare a apelor
reziduale cu ajutorul rspunsului la toxicitate a dou clorofite S.capricornutum si
Monoraphidium pusillum, prin determinarea vizual a lui EC 100 (cea mai mic
concentraie fr cretere detectabil) dup 14 zile de cretere n tvi cu microdiluii.
Deoarece testele de expunere cronic cu durat prea mare pot fi afectate de unii
factori (schimbarea pH, combinaia substanelor chimice din exudatele algale,
adaptarea algal, degradarea algal, fotodegradarea xenobioticelor testate) care pot

altera toxicitatea original a probelor de mediu, microtestul de inhibiie a creterii

algale a fost scurtat la un test de 4 zile.
Un test de toxicitate cu microtav de 96 compartimente cu o expunere de 72
ore folosind msurtoarea fotometric a biomasei algale pentru nregistrarea creterii
de Selenastrum capricornutum i Scenedesmus subspicatus, a fost dezvoltat si
optimizat n Germania.
Datorit complexitaii testelor algale convenionale, au fost fcute ncercri n
cteva laboratoare, n diferite ri, menite s dezvolte teste de toxicitate alternative
cu microalge; obiectivul major al acestor studii a fost s fac testele mai puin
consumatoare de timp, mai uor de folosit, s reduc spaiul de lucru i cantitatea
de materiale necesare.
Laboratorul principal n aceste eforturi a fost Centrul Canadian de Mediu
,,SAINT LAURENT din Montreal, care in 1980 realizase deja un test miniaturizat de
toxicitate algal n plci de microtitrare cu 96 de compartimente.
Eforturile doctorului BLAISE i colaboratorilor n perfecionarea, validarea i
aplicarea noului lor microbiotest algal i promovarea folosirii lui la nivel internaional
au avut ca rezultat peste 20 de lucrri ale Centrului ,,SAINT LAURENT asupra
testelor algale cu microtvi i mai mult de 60 de articole privind aplicarea n lumea
ntreag a noii tehnici.
Rspunsul toxic al oricrui biotest este influenat de unii factori, cum sunt:
- de procedur (condiii de lumin, temperatur, substana inoculat, timp de
expunere, mediu);
- de laborator (presiune atmosferic, echipament, ndemnarea operatorului);
- de probele de testat (metale, substane organice, reziduri, etc.);
- de alga specific de testare.
n general, procedurile cu expunere de lung durat apar mai sensibile dect
metodele cu expunere rapid.

Testele bazate pe microtav genereaz rezultate corecte dac sunt realizate cu

atenie.
Mai multe avertismente, factori de influenare, probleme poteniale i
interferenele legate de aceste microbioteste au fost publicate n literatur. Aceste
probleme sunt urmtoarele:
- evaporarea la nivelul compartimentelor ;
- efectul de ,,margine(rata de evaporare la compartimentele marginale este
mai mare dect la acelea localizate central);
- raportul volumetric al vasului experimental cu mediul nutritiv;
- aderena chimic la compartimentele tvii;
- substanele volatile;
- probele de testare colorate;
- schimburile gazoase n compartimentele microtvii;
- pH-ul.
n 1992, microbiotestul algal a fost aprobat formal de Ministerul Mediului
Canadian, ca procedur recomandat pentru teste de inhibiie a creterii, folosind alga
de ap dulce-Selenastrum capricornutum.
Totui, n ciuda numeroaselor avantaje, microtestele algale cu microtvi nu au
putut nlocui testele algale standard aprobate de organizaiile internaionale de
omologare (O.E.C.D., I.S.O., E.U.).
Datorit necesitii urgente a unui microbiotest al crui cost s fie acceptabil ca
o alternativ la testele algale standard pentru testare de rutin, Laboratorul de
Cercetare Biologic a Polurii Acvatice (L.A.B.R.A.P.) al Universitii GHENT din
Belgia a iniiat cercetarea asupra dezvoltrii TOXKIT-ului cu microalge, avnd
urmtoarele obiective:
-dezvoltarea unui nou test de toxicitate algal (analog TOXKIT-urilor cu specii
de nevertebrate) care s fie independent de cultura unui stoc viu de microalge;
-miniaturizarea procedurii de testare ntr-un microbiotest cu pre sczut;

-proiectarea unui procedeu rapid pentru determinarea biomasei algale, cu

sensibilitate i precizie acceptabile.
Primul obiectiv i anume, INDEPENDENA FA DE CULTURA UNUI
STOC VIU AL SPECIILOR DE TESTARE s-a fcut prin tehnica de imobilizare
folosind granule de alginat.
Metodele pentru imobilizare si demobilizare a microalgelor descrise in
literatura tiinific au fost perfecionate i optimizate n L.A.B.RA.P. pentru
aplicarea cu cele mai folosite specii algale :
Selenastrum capricornutum (acum denumit Raphidocelis subcapitata). Cercetarea
experimental a relevat c dup cteva luni de stocare n mediu potrivit, n frigider (
la 4C), la ntuneric, microalgele demobilizate din granulele de alginat i-au reluat
creterea imediat. Rata de cretere dup 72 ore s-a gsit a fi la fel de ridicat ca i la
algele luate din culturi vii, n faza de cretere exponenial

Concomitent cu cercetarea de imobilizare, stocare i demobilizare a lui

Selenastrum capricornutum , aspectele tehnologice ale noului test algal au fost
investigate n profunzime.Datorit unor constrngeri inerente n folosirea tvilor cu
mai multe compartimente drept containere de testare, experimentarea extensiv s-a
fcut cu tuburi de sticl de 10 ml ca fiole de testare. Tuburile au fost umplute
aproximativ 2/3 din volumul lor cu alge i suspensie toxic, nchise cu dop de cauciuc
i plasate orizontal sub o baterie de tuburi luminoase, pe un dispozitiv basculant
(pentru a ine algele ntr-o continu suspensie).
Biomasa algal a fost determinat zilnic, ntr-o perioad de expunere de 3 zile,
prin msurarea densitii optice( D.O.), a suspensiilor algale, cu ajutorul
colorimetrului la 670nm.
Aceast nou procedur de testare simpl i rapid a fost atractiv pentru
cteva motive. Pe lng evitarea culturii stoc (prin folosirea microalgelor
demobilizate din granule de alginat), noul microbiotest cere spaiu mic, echipament

puin i nregistrarea zilnic a densitaii optice ( D.O.) n tuburile de sticl dureaz

mai puin de 10min. pentru fiecare test.
Microbiotestul algal n tuburi a fost ncercat la nceput pe un numr de compui
puri. Acest studiu a relevat c nivelele efectului la 72 ore s-au corelat bine cu acelea
obinute la testrile algale standard n flacoane. Totui, cnd noua tehnic a fost
aplicat pe mostre reale, rezultatele la cele dou tipuri de testare, au diferit destul de
mult. Aceasta, probabil datorit tuburilor de testare nchise (plasate orizontal pe
dispozitivul basculant) care exclud schimburile gazoase cu mediul nconjurtor.
n plus, microbiotestul n tub, sufer de un al doilea neajuns major i anume
precizia sczut a msurtorilor D.O. ntre 0 si 24 ore. Densitatea

optic a

suspensiilor algale coninand 1.104 celule /ml (concentratia de pornire impus n cele
mai multe testri standard) msurata n tuburi de 16mm diametru, ntr-adevr apare s
fie la pragul de sensibilitate al echipamentului de msurare; n consecin, primele
valori de ncredere ale densittii optice, pot fi obinute numai dup 48 ore de cretere
algal .n cele din urm, tehnica testrii n tub a fost abandonat i au fost cutate
recipiente de testare alternative care, ntocmai ca i flacoanele Erlenmeyer nchise cu
bumbac, ar permite schimburi gazoase suficiente i deasemenea ar permite msurtori
zilnice rapide i precise ale creterii algale. Aceast cercetare a condus n ultima
instan la selecia unor ,,celule spectrofotometrice de 10 cm lungime. Ca i n
procedeul cu tuburi de sticl, celulele de 10 cm pot servi ca recipiente de testare,
deasemenea permit msurarea direct a densitaii optice n celule cu ajutorul unui
colorimetru convenional sau spectrofotometru prevzut cu un dispozitiv de
meninere a celulelor lungi.
Un nou microbiotest algal ALGALTOXKIT, a fost eleborat n L.A.B.R.A.P,
bazat pe celule lungi si cu urmatoarele caracteristici:
Biotestul este realizat cu 18 celule lungi din polistiren.
Fiecare test cuprinde o diluie de control, 5 diluii toxice, fiecare din ele fiind n
triplu exemplar.

Toate celulele sunt dotate cu un capac articulat central. Acest capac, pe de o

parte, permite celulelor s fie nchise pentru agitare (pentru omogenizarea suspensiei
algale anterior msuratorilor D.O.) i pe de alt parte, le ine pe jumtate deschise n
timpul perioadei de incubaie pentru a permite schimburile gazoase.
Dup inocularea cu alge i diluii toxice, celulele sunt plasate ntr-o tav
transparenta i partea deschis este acoperit cu o folie contra evaporrii.n mod
asemntor dopului de bumbac, la testul cu flacon, aceast folie are un triplu rol de
mpiedicare a contaminarii, de micorare a evaporrii, totui permind un schimb
gazos suficient cu mediul nconjurator.
Noua tehnic cu celulele lungi a fost pentru prima dat folosit n determinarea
variabilitii creterii algale n 18 celule aezate ntr-o tav. Fiecare celul este
inoculat cu 25ml suspensie algal (1.104 celule/ml) obinut din granule de alginat.
Tvile sunt plasate ntr-o camer cu temperatur controlat (incubator) la 240C, n
faa unui panou cu tuburi luminoase (lmpi fluorescente albe) furniznd 800 luci la
suprafaa tvilor.
Experimente repetate au artat un excelent acord al creterii algale n celulele
individuale, coeficientul de variaie al densittii optice n cele 18 celule, dup 72 ore
de incubaie, fiind mai mic de 4. n timpul experimentelor ulterioare cu celule lungi
s-a evideniat c rata de cretere a microalgelor nu se schimb semnificativ dup
cteva luni de stocare a granulelor algale. Coeficientul de variaie al creterii algale
medii n trei celule de control pentru un total de 64 de teste individuale de toxicitate a
fost de numai 16. n cele din urm tehnica cu celule lungi s-a modelat ntr -un
Algaltoxkit, similar testului TOXKIT folosit pentru speciile de nevertebrate.
Fiecare echipament conine materiale suficiente pentru a realiza dou teste
complete:
- 2 tvie cu 18 celule lungi n fiecare
- 2 tuburi cu granule algale ntr-un mediu de stocare specific
- 2 celule mai lungi (una pentru calibrarea echipamentului de msurare, a doua
pentru determinarea densitaii optice a suspensiei algale concentrate);

- o fiol cu granule de alge;

- 5 flacoane de sticl cu mediu de cultur algal concentrat.
Mediul de cretere algal are exact aceeai compoziie cu mediul recomandat
n O.E.C.D.

GUIDELINE 201 pentru testarea toxicitii cu microalge i este

preparat prin simpla turnarea a coninutului din flacoanele de sticl cu mediu de

cultur concentrat, ntr-un flacon calibrat i completat pn la semnul de 1litru cu ap
deionizat sau distilat.
Manualul detaliat de procedur operaional standard al noului microbiotest
algal indic c pregtirea testului ncepe cu dizolvarea matricei de alginat a
granulelor algale.
Algele sunt eliberate dup aproximativ 15 minute de agitare i sunt mai nti
curate de matricea dizolvat prin centrifugare. Dup aceasta se cltesc n apa
deionizat, sunt centrifugate a doua oar i repuse n acelai tub cu mediul de cultur
algal. Numrul exact de alge este apoi determinat prin D.O., prin conversie de la
D.O. n numr de alge cu ajutorul unui tabel de regresiune inclus n echipament ( care
arat raportul ntre densitatea optic i numrul de alge). n continuare suspensia
concentrat este diluat la exact 1.106 celule /ml. Un milimetru din aceast suspensie
algal concentrat va fi n cele din urm adugat la diluii toxice, preparate n
flacoane calibrate de 100ml, pentru a obine concentraia de 1.104 celule/ml de
ncepere a testelor de cretere, care este recomandat n testele algale standard. Dup
transferul algelor si diluiilor toxice n celulele lungi, ultimile sunt plasate n tvi, n
poziie pe jumtate deschis i acoperite cu folia mpotriva evaporrii.
Tviele sunt incubate timp de 3 zile n condiii standard de temperatur i
lumin prescrise n ghiduri. Densitatea optic este msurat zilnic n fiecare celul
lung i datele sunt nregistrate pe foi furnizate de TOXKIT.
Aplicarea pe scar larg a procedurii anterioare n LABRAP a relevat faptul c
dup 3 zile de incubare, creterea microalgelor n celulele lungi a ntrecut factorul
minim de multiplicare (de 16 ori) impus de ghidurile O.E.C.D i I.S.O.

Aceast cretere s-a realizat chiar fr o agitare continu a celulelor lungi. De

fapt, experimentele au ncercat s determine influena agitrii normale, intermitente a
celulelor, de cteva ori pe zi. Aceste ncercri au relevat c o agitare pe zi ( n
momentul msurrii densitii optice) a fost suficient pentru atingerea factorului de
multiplicarea de 16 ori.
ALGALTOXKIT-ul s-a ntmplat s fie finalizat n L.A.B.R.A.P aproape
concomitent cu 2 noi TOXKIT-uri pentru nevertebrate (Daphtoxkit magna i
Daphtoxkit pulex).
Ca rezultat, experimente comparative asupra sensibilitii celor trei noi TOXKITuri fa de cea a testelor standard convenionale cu aceleai specii de testare, au
putut fi realizate n paralel pe substane chimice i probe naturale.
Avantajele testului ALGALTOXKIT pot fi sistematizate astfel:
1.

Noul test algal folosete microalge care sunt imobilizate n granule de alginat,

n care ele triesc timp de cateva luni fr a-i pierde viabilitatea. Consecina practic
major a stocrii materialului de testare viu sub form imobilizat este c, realizarea
acestui test devine independent de cultura i meninerea speciilor de testare.Un
avantaj suplimentar pentru testul ALGATOXKIT fa de TOXKIT-ul cu nevertebrate
este c testele algale pot ncepe imediat dup demobilizarea algelor, de exemplu dup
o jumtate de or de la adugarea mediului de dizolvare n tuburi cu granule algale.
2.

Specia algal selectat pentru ALGALTOXKIT este clorophitul unicelular

Selenastrum capricornutum (mai nou numit Raphidocelis subcapitata ). Aceasta este

specia cea mai des folosit n testele de toxicitate cu microalge i este specia
recomandat n cele mai multe ghiduri naionale i internaionale.
3.

Noul microbiotest algal folosete fiole lungi care pot fi folosite pentru o

determinare rapid i direct a creterii algale prin msurarea D.O. n colorimetru sau
spectrofotometru dotat cu un dispozitiv de meninere a celulelor de 10cm.

4.

Celulele lungi n tavi ocup doar o treime din spaiul necesar pentru testul

standard n flacoane. n consecin, numrul de teste care pot fi realizate simultan se

poate tripla.
5.

Rezultatele primei validri indic c sensibilitatea testului ALGALTOXKIT

este aceeai cu a testului standard realizat n flacoane Erlenmeyer i c repetabilitatea

testului este excelent.
6.

Costul realizrii testelor ALGATOXKIT este substanial mai mic dect al

oricrui test convenional cu microalge. S-a calculat c testul ALGALTOXKIT poate

fi realizat la un cost de numai 25 dintr-un test algal standard.
7.

Speciile de testare, mediul de testare i protocolul de testare al

ALGALTOXKIT

au

fost

selectate

urmreasc

prescripiile

ghidurilor

internaionale precum O.E.C.D. i I.S.O, facnd din ALGALTOXKIT o alternativ

acceptabil pentru testarea de rutin.
Poate fi menionat n acest stadiu c ALGALTOXKIT (DAPHTOXKIT) este
acum disponibil comercial ntr-o versiune coninnd materiale pentru realizarea a 2
teste complete de 72 ore. Pentru a ine costurile echipamentului pentru acest
microbiotest ct mai jos posibil, incubatorul pentru testele TOXKIT a fost dotat cu un
sistem de iluminarea lateral. Incubatorul pentru ALGALTOXKIT permite realizarea
concomitent a 2 teste algale. Trsturile atractive i costul sczut al noului
microbiotest algal trebuie totui s fie puse n comparaie cu limitrile datorate
lungului proces de testare.
De aceea este imperativ necesar ca o validare suplimentar pe compui puri
precum i pe probe naturale s determine importana i limitele ALGALTOXKITului.
Cercetarea intensiv de validare continu n L.A.B.R.A.P.i este deasemenea
n progres n cateva laboratoare din diferite ri pentru stabilirea potenialului complet
al acestui promitor nou test TOXKIT. ntre sfaritul anului 1970 i mijlocul anului
1980, 3 recenzii cuprinztoare asupra testelor de toxicitate cu nevertebrate au fost
publicate de MURPHY, BUIKEMA i CAIRNS, PERSOONE i colaboratorii, i un

articol la zi asupra testrii toxicitii n biotopul acvatic a fost scris 10ani mai trziu
de MALTBY si CALOW. Ultimul articol a relevat c, de fapt, practica, biotestului
nu s-a schimbat prea mult de la cele 4 articole anterioare.

2.2. Utilizarea nevertebratelor ( crustaceilor de ap dulce) n dezvoltarea

microbiotestelor

Nevertebratele au fost organisme de testare mult mai folosite dect petii;

majoritatea testelor au fost bioteste de scurt durat; din cele 18 grupe toxonomice de
nevertebrate asupra crora s-au publicat date efective, cladocerele i n particular
Daphnia au fost animalele cele mai des testate.
n recenta carte de ecotoxicologie, articolul asupra testelor de toxicitate cu
nevertebratele de ap dulce descris de PERSOONE i JANSSEN [13] , indic, c,
testele cu Daphnia sunt de fapt singurele tipuri de bioteste cu nevertebrate de ap
dulce care sunt formal aprobate de organizaiile internaionale ( O.E.C.D. si I.S.O.) i
c testele cu ,, purici de ap sunt mpreun cu cele cu peti cele mai folosite teste
pentru testarea de rutin n ntreaga lume.
Indiferend de metoda sau de speciile recomandate, toate testele au aceleai
dezavantaje enumerate de SNELL si JANSSEN [10] i anume:
- probleme n cultura organismelor de testare;
- disponibilitatea, variabilitatea raspunsului;
- variabilitatea rspunsului;
- necesitatea unor volume mari de testare;
- un spaiu mare de lucru cerut ;
- costul ridicat al execuiei testelor
Aceste probleme care devin critice oricnd se ridic necesitatea unei testri de
rutin au stimulat dezvoltarea aa-numitelor microbioteste, un termen generic
introdus de BLAISE pentru a caracteriza toate testele de toxicitate la microscara.

Primul succes n dezvoltarea testului standard care a fost independent de

sarcina culturii si mentinerii unui stoc viu de organisme de testare a fost obinut de
VANHAECKE i colaboratorii n L.A.B.R.A.P. (Laboratorul pentru cercetarea
biologic a polurii acvatice) la Universitatea din GHENT-Belgia.
Un microbiotest rapid de toxicitate ARC-test cu nauplii de la crustaceii marini
Artemia salina (redenumiti Artemia franciscana ) a fost efectuat plecnd de la forme
,,criptobiotice de ou (chiti). Dup cum a fost subliniat de ctre VAN
STEERTEGEN i PERSSONE [6], folosirea stadiilor latente ale speciilor de
nevertebrate acvatice ca material biologic pentru testele de toxicitate are numeroase
avantaje.
Pe lang ocolirea problemelor de procurare i meninere a stocului viu al
organismelor de testare, sntos i n numr suficient, aceast nou abordare
furnizeaz o biot de testare cu caracteristici uniforme i elimin diferenele n
sensibilitate rezultate din variaia condiiilor de cultur a stocului viu.
Primul test de toxicitate bazat pe chiti care a folosit crustaceul Artemia
salina,interesant din punct de vedere fiziologic i ecologic, a declanat dezvoltarea n
L.A.B.R.A.P. de microbioteste suplimentare bazate pe conceptul oulelor latente.
Totui, acest obiectiv s-a dovedit a fi un drum, cu un mare numr de obstacole. Spre
deosebire de chisturile de Artemia salina, care pot fi recoltate n cantitate mare n
locuri naturale saline i care sunt comercializate n scop de acvacultur, nici un alt fel
de ou latent al vreunei alte specii potrivite nu pare s fie gsit n natur ntr-un numr
suficient s satisfac necesitile pentru testarea toxicitii. n consecin, dezvoltarea
altor microbioteste bazate pe chiti a trebuit s rezolve toate problemele biologice i
tehnologice eseniale n producia controlat, stocarea controlat, nmulirea
controlat a stadiilor cryptobiotice ale speciilor candidate.
A durat pn n 1989, nainte ca dou teste de toxicitate folosind chiti s fie
desvrite, bazate pe rotiferul de ap dulce (Brachionus rubens) mai trziu nlocuit
de (Brachionus calicyflorus) i un rotifer marin (Brachionus plicatilis).

Economia de timp i costul sczut al noii generaii de microbioteste fr

cultur stoc a fost exemplificat pentru prima dat de un experiment vast asupra
influenei condiiilor experimentale asupra sensibilitii organismelor testate.
Investigaii recente au cuprins mai mult de 300 bioteste reproduse care s-au bazat pe
dou specii marine de testare cu chiti (A.franciscana si B. plicatilis) i pe obisnuita
Daphnia magna din testul rapid.
Studiul a confirmat speciile i specificitatea chimic a efectelor toxice i din
nou a atras atentia asupra importanei influenei condiiilor de mediu asupra
pragurilor toxice, care au fost gsite variind de pn la 2 ordine de mrime.
Pentru a standardiza mai bine tehnologia noului microbiotest, a reduce costurile i
a spori uurina folosirii, L.A.B.R.A.P s-a strduit s miniaturizeze testele bazate
pe chiti n TOXKIT-uri.
Pe lang materialul biologic sub forma de oua latente, TOXKIT-ul este dotat
cu o apa dulce standard pentru incubarea chitilor i pentru prepararea seriilor de
diluii toxice i cu tvie multicompartimentate cu vase de testare miniaturizate.
Protocoalele TOXKIT au fost elaborate i promovate n L.A.B.R.A.P. pentru a
realiza o precizie adecvat a lui ARTOXKIT M si ROTOKIT F i M.
A existat un interes internaional considerabil pentru noile microbioteste, dar a
fost necesars se determine dac TOXKIT-urile erau satisfctoare din punct de
vedere al aplicabilitii i preciziei. De aceea, n 1989 un exerciiu de intercalibrare sa lansat aproape concomitent n Europa, S.U.A. i Canada. TOXKIT-urile au fost
trimise la aproximativ 200 de laboratoare care au exprimat interes n realizarea
testelor TOXKIT, folosindu-se de sulfatul de cupru.
Datele i informaiile furnizate de 183 de laboratoare care garantau rezultatele
lor au fost analizate n detaliu i concluziile exerciiului au fost publicate.
Studiul extensiv de intercalibrare a relevat c 60 pn la 80 dintre
participani au fost capabili s execute cu succes testele; repetabilitatea a variat de la
un test TOXKIT la altul i a variat de la cel puin 25 pn la 68. Datorit

comentariilor i datelor furnizate de participani, echipele de cercetare de la

L.A.B.R.A.P. au fost capabile s rezolve problemele de variabilitate, conducnd la
comercializarea unor versiuni mbuntite ale TOXKIT-ului la sfritul anului 1991.
Lund n considerare necesitatea realizrii unui microbiotest de ap dulce cu un
crustaceu pelagic, cercetarea a fost iniiat n L.A.B.R.A.P pe un test de toxicitate
bazat pe chisturi i anume cu anostraceul de ap dulce Streptocephalus proboscideus.
Testul STREPTOXKIT F care a fost dezvoltat n cele din urm, a fost n principiu
analog cu testul ARTOXKIT M, exceptnd incubarea n ap dulce i mediul de
testare.
Datorit sponsorizrii de ctre Comunitatea european i de ctre 2 organizaii
de mediu din FLANDRA (Belgia), un studiu de 3 ani de validare a microbiotestului
a fost experimentat de ctre L.A.B.R.A.P, ocupndu-se cu monitorizarea riscului acut
al deeurilor apelor de suprafa, sedimentelor de ru i al apelor uzate industriale.
Bateria de testare era compus din 3 microbioteste cu biot aparinnd unor
grupe filogenotice diferite: un test bacterian (MICROTOX), un test pe rotifere
(ROTOXKIT F) i un microbiotest pe crustacee (STREPTOXKIT F).
Pentru a se obine o sensibilitate mai mare i o mai bun incubare, ultimul test
a fost nlocuit spre sfritul studiului de THAMNOTOXKIT F. Teste rapide s-au
efectuat n paralel pe Daphnia magna, pe un numr restrns de probe.
intele i obiectivele efortului intens de cercetare au fost:
1. Evaluarea potenialului i limitelor noilor microbioteste TOXKIT pentru
detectarea i cuantificarea unui risc acut de contaminare a mediului;
2. Determinarea aplicabilitii noilor microbioteste n monotorizarea de rutin
a toxicitii rezidurilor solide i lichide;
3. Compararea sensibilitii noilor tehnologii de bioteste cu aceea a testelor de
toxicitate conventionale;
4. Stabilirea relaiei dintre efectele toxice i cauzele lor chimice;

n cele din urm, n jur de 350 de probe naturale recoltate de la 24 surse de

deeuri, 23 puuri 16 instalaii de purificare, 36 ruri i 25 instalaii industriale au fost
analizate din punct de vedere ecotoxicologic i chimic. Toate observaiile i cifrele
acestui studiu de biomonitorizare au fost redate n detaliu ntr-un raport final de 600
pagini la E.E.C. Studiul de validare A.C.E a relevat c o mic baterie cu
microbioteste de pre sczut a fost capabil s determine i s cuantifice riscul acut al
probelor complexe de mediu.
Un semnal de risc s-a obinut n toate probele toxice, chiar numai cu doua
microbioteste i anume cel bacterian i crustacean. n schimb, o mai extins baterie a
aprut a fi necesar pentru determinarea intensitii riscului. Totui pentru o
nelegere ecologic n evaluarea riscului locurilor contaminate, autorii accentueaz
necesitatea, lrgirii bateriei de testare cu teste de pre sczut bazate pe specii din alte
grupe filogenetice, n principal microalge.
n plus, studiul de validare A.C.E a confirmat c microbiotestele sunt potrivite
pentru nregistrarea de rutin a toxicitaii. Pe lang preul de cost sczut, testele la
microscar permit manipularea mai multor probe pe zi i cer un spaiu mic de lucru.
Comparaia sensibilitii microbiotestelor cu bacterii, rotifere sau crustacee, cu a
testului convenional cu Daphnia magna a confirmat necesitatea unei baterii de teste.
n decursul anului 1990, microbiotestele TOXKIT au fost ncorporate gradual
n variate studii de monitorizare a apelor uzate, deeurilor terestre i sedimentelor de
ru. Mai recent, ROTOXKIT-ul F i THAMNOTOXKIT-ul F au fost selectate de
Ministerul Mediului Canadian pentru introducerea ntr-o baterie de 5 microbioteste
pentru monitorizarea efectelor acvatice ale industriei miniere.
Pe lang aplicarea testelor bazate pe chiti n detecia i cuantificarea
impactului acut al factorilor poluani de mediu, potenialul de prezicere al
microbiotestelor TOXKIT, c prime teste de evaluare, a fost explorat n toxicologia
uman. n cadrul unui studiu de evaluare a toxicitii celulare n vitro, o iniiativ a
societii scandinave de toxicologie celular, toxicitatea acut a 50 de substane

chimice a fost determinat cu ajutorul ctorva teste bazate pe chiti i cu testul rapid
cu DAPHNIA, iar rezultatele au fost comparate cu datele din literatur asupra dozelor
letale umane.

Cercetarea a relevat c, bateria de teste acvatice folosit a fost cel

puin la fel de exact ca i testele convenionale pe oareci sau obolani n prezicerea

riscului acut la oameni. O cantitate important de date privind toxicitatea a fost
treptat generat de ctre L.A.B.R.A.P. asupra sensibilitii microbiotestelor pe
crustacee folosind

crustaceii

Streptocephalus proboscideus i Thamnocephalus

platyurus, pe substane chimice i variate tipuri de probe din mediu.

Pentru a

compara sensibilitatea testelor TOXKIT pe crustacee cu aceea a testelor de toxicitate

standard rapide cu cladocerul Daphnia magna, ecuaiile de regresiune au fost
calculate de la 146 perechi de date provenite de la 5 studii diferite. Aceste analize
statistice au relevat c, coeficienii de corelaie se niruie de la 0,874 la 0,92 i c, n
majoritatea cazurilor, raporturile ntre testele convenionale i microbioteste au fost n
interiorul unui factor de 2.
Teste raportate la L.A.B.R.A.P au artat c precizia microbiotestelor pe
crustacee i deci gradul lor de standardizare au fost foarte satisfcatoare. Coeficientul
de variaie cu THAMNOTOXKIT pentru 10 teste repetate de acelai operator cu
dicromatul de potasiu a fost mai mic de 13,5. La scurt timp dup apariia pe pia a
testului ROTOXKIT F, acest test la microscar a fost supus n Canada la o evaluare
aprofundat pentru o posibil recomandare n evaluarea i refacerea locurilor
contaminate sub controlul Programului naional de refacere a locurilor contaminate.
n articolele lor, aprute n Canada, KEDDY i colaboratorii au recunoscut
potenialul testului cu rotifere, i testul de supravieuire de 24 ore cu Brachionus
calyciflorus a fost recomandat pentru dezvoltarea testelor de evaluare a apei dulci.
ntre timp, cele 2 teste cu B.calyciflorus i B. plicatilis au fost aprobate de societatea
American pentru testare i materiale, cu un nou ghid de toxicitate. n Europa, 2
studii i-au focalizat atenia pe TOXKIT-uri. Analize aprofundate au fost realizate
de ,, Institutul naional olandez de sntate public i protecie a mediului; 26 de
microbioteste au fost revzute i comparate pe baza urmtoarelor caracteristici:

convenabilitate,

documentaie

complet,

cost

reproductibilitate,

nivel

de

standardizare, influena condiiilor experimentale, sensibilitatea la probele de mediu

i sensibilitatea la compui simpli. A fost selectat o baterie de 3 microbioteste, care
trebuie s fie capabil s detecteze cele mai multe clase toxice n concentraii sczute
cu o precizie nalt. Bateria propus a fost compus dintr-un test bacterian, un test
algal i THAMNOTOXKIT.
ntruct microbiotestele bazate pe chiti au o existen relativ scurt, nici unul
din aceste teste nu a fost deocamdat aprobat formal n vreo ar pentru testarea de
rutin a toxicitaii. Totui, numrul utilizatorilor de TOXKIT-uri sporete ferm i din
ce n ce mai multe teste bazate pe chiti sunt realizate n scopuri de cercetare sau
monitorizare.
ntre anii 1990-1996 s-au realizat mai mult de 25.000 de teste de toxicitate cu
microbioteste pe nevertebrate fr cultur.
Calitile variate ale tehnologiei TOXKIT bazat pe chiti i entuziasmul cu
care au fost primite testele la microscar de ctre ecotoxicologiti, nu trebuie s
ascund limitrile lor i nici oviala n anumite domenii n aplicarea acestor teste.
Amndou microbiotestele cu rotifere i crustacee, sufer de acelai handicap
major i anume c aceste teste nu sunt impuse de nici o organizaie naional sau
internaional de evaluare a riscului contaminrii cu substane chimice sau reziduri.
Aceasta, datorit faptului c aceste TOXKIT-uri nu folosesc nici una din speciile de
testare impuse sau recomandate n testarea de rutin. n mod curent, evalurile
ecotoxicologice se bazeaz n principal pe urmatoarele 3 teste:
1. testul de inhibiie al creterii algale;
2. testul de imobilizare cu Daphnia magna ;
3. testul de mortalitate cu peti.
Desi, dup cum s-a artat mai sus, testul TOXKIT pe crustacee este la fel de
sensibil ca i testul standard cu Daphnia magna, este clar c ultimul biotest pentru
care exist o larg baz de date, va continua s fie ,, calul de btaie n testarea
toxicitii cu nevertebrate.

Contieni de acest fapt, cercettorii de la L.A.B.R.A.P. s-au ntrebat dac este

posibil s dezvolte un microbiotest cu Daphnia magna i cu microalge care ar
beneficia de aceleai avantaje cu celelalte TOXKIT-uri i totui, s rmn fidel
metodelor standard acceptate internaional pentru testarea toxicitii.
De fapt cercetarea a fost iniiat cu mai mult de o decad n

urm n

L.A.B.R.A.P. asupra acestui subiect, dar au fost necesari 10 ani de investigaii pentru
ca toate obstacolele n realizarea noilor teste TOXKIT s fie nlturate. S-a ajuns la
folosirea unei baterii de testare compus din 2 DAPHTOXKIT-uri (bazate pe
D.magna i D. pulex ) i un AlGALTOXKIT (bazat pe Selenastrum capricornutum)
n 1996.
Ca i alte TOXKIT-uri cu nevertebrate, Daphtoxkit-ul magna i Daphtoxkit-ul
pulex sunt bazate pe acelai stadii latente i anume ou crxptobiotice de D.magna
Straus i D.pulex Leydig. Oulele latente sunt protejate de o capsul chitinoas
(efipiu) i pot fi stocate lungi perioade de timp, far a-i pierde viabilitatea. Cnd
epifiul este plasat n condiii de mediu specifice de eclozare, oule se dezvolt n 3-4
zile trecnd n nou-nscui care pot fi folosii imediat, n testele de toxicitate.
DAPHTOXKIT-urile au dou avantaje suplimentare:
1,

Speciile de testare sunt dafniile care sunt folosite pentru testarea toxicitii n

lumea ntreaga i impuse sau recomandate de organizaii naionale i internaionale

pentru testarea de rutin a toxicitii.
2.

Amndou testele DAPHTOXKIT pot fi realizate n acord cu condiiile de

testare prescrise de ghidul 202 O.E.C.D. i pot fi uor adaptate s rmn fidele altor
metode standard naionale i internaionale precum: I.S.O., E.E.C., U.S.E.P.A.,
D.I.N., A.F.N.O.R., A.S.T.M..
Speciile de D.magna i D. pulex care au fost folosite n obinerea efipiilor, au
fost selectate n L.A.B.R.A.P.de la un numr mare de specii provenite din locuri
variate.
D.magna U.Z.94 i D.pulex L.P.94 au fost n cele din urm alese pe baza unui
numr de caracteristici importante:

- creterea i reproducerea;
- producia, incubarea i starea de laten a efipiilor;
- sensibilitatea noilor nscui la toxice.
Principiul metodei de testare DAPHTOXKIT este acelai cu al tuturor
microbiotestelor bazate pe chiti, exemplu: realizarea testelor rapide de 24h sau 48h,
cu nou nscui de o vrst sub 24h, rezultai din efipii de D.magna sau D.pulex,
folosind microtviele ca vase de testare. n analogie cu testele convenionale cu
Daphnia magna, criteriul de apreciere al rezultatului este imobilitatea n loc de
mortalitate.
Fiecare DAPHTOXKIT conine toate materialele necesare pentru realizarea a 6
teste complete de toxicitate.
Singurul echipament necesar este un incubator sau o camer cu temperatura
controlat la 200C, o mic mas luminat cu o platform transparent i sticlrie de
laborator convenional.
Dup perfecionarea metodologiei de testare a noilor microbioteste cu Daphnia
magna i dup selectarea materialelor care trebuie incluse n aceste TOXKIT-uri,
studii intense de validare s-au fcut n L.A.B.R.A.P.
Primul obiectiv a fost determinarea preciziei noilor teste i a sensibilitii lor n
comparaie cu testul standard cu D.magna, care folosete nou-nscui luai din culturi
stoc.
Deoarece fiecare DAPHTOXKIT conine materiale de testare standard, ap de
diluie standard i efipii produse n condiii controlate strict, repetabilitatea acestor
teste la microscar este la fel de bun ca i a TOXKIT-urilor anterioare.Coeficienii
de variaie pentru teste repetate au fost de sub 30, procent care poate fi considerat
bun n comparaie cu variabilitile de laborator raportate n literatur. Comparaia
sensibilitii ntre DAPHTOXKIT-uri i testul convenional cu D.magna a fost
realizat deocamdat cu ajutorul a 19 substane chimice organice i anorganice i a 9
eflueni

industriali textili. Pentru majoritatea substanelor chimice, testele

DAPHTOXKIT dau indicii EC50 mai mici dect testul convenional. Pentru unii
compui, totui, sensibilitatea ambelor teste a fost aproximativ aceeai i au existat
cteva substane chimice pentru care nou-nascuii DAPHTOXKIT au fost mai puin
sensibili dact nou-nascuii din culturile stoc. Sensibilitatea mai mare a nounscuilor din efipii pentru anumii compui nu este legat de organismele de testare,
ci se datoreaz cel mai probabil diferenei de duritate a apei din mediul folosit n
testul convenional cu D.Magna comparativ cu cel al microbiotestelor. ntr-adevr
apa dulce selectat pentru DAPHTOXKIT-uri, pentru incubare i pentru diluii
toxice, este ,, apa moderat dur E.P.A. care este deasemenea folosit n alte
TOXKIT-uri cu nevertebrate. Testele standard cu D. magna au fost realizate cu ap
dulce reconstituit, preparat cu formula I.S.O., care este mult mai bogat n calciu
dect mediul E.P.A.
PERSOONE i colaboratorii citeaz surse din literatur care indic o
sensibilitate mai mare a dafniilor la substanele chimice, n particular la metale, n ape
dedurizate fa de ape dure.
Studii preliminare de validare efectuat n L.A.B.R.A.P.asupra
sensibilitii relative, comparnd DAPHTOXKIT-urile cu testul convenional pe
D.magna, pot fi considerate ca o extensie a recentelor investigatii ale lui
TOUSSAINT i colaboratorii. Aceti cercettori au comparat 5 teste acvatice, rapide
i ieftine cu 5 teste acvatice rapide standard pe 11 substane chimice i au ajuns la
concluzia c testele cu alge i rotifere au o sensibilitate similar cu testele standard.
Informaiile furnizate de DAPHTOXKIT-uri relev c aceste noi
microbioteste nu sunt numai la fel de sensibile ca i testul standard cu D.magna dar
au i cteva avantaje suplimentare printre care, nu n ultimul rnd, cel de ordin
financiar.
Bibliografie
1. Janssen C., 1998 - Alternative assays for routine toxicity assessments : a review, chapter 26,
In: Ecotoxicology, G. Schuurmann and B. Markert ( Eds), Jhon wiley and Sons, p. 813-839.

2.

3.

4.

5.

6.

Persoone G., Van de Vel, M. Van Steertegem and B.de Nayer, 1998- Predictive value of
laboratory tests with aquatic invertebrates : influence of experimental conditions, Aquatic
Toxicology, 14, p.149-166.
Persoone G., C. Blaise, T. Snell, C. Janssen and M.Van Steertegem, 1992?1993- Cyst-based
toxicity Tests: II.- report on an international intercalibration exercise with three costeffective toxkits, Zeitschr. Fur Angew, Zool. 79, ( 1), p. 17-36.
Persoone G. and C.R. Janssen, 1994- Field validation of predictions based on laboratory
toxicity tests, Chapter 25, p. 379-397, In : Freshwater field Tests for hazard assessment of
chemicals, I.R. Hill, F. Heimbach, P.Leeuwangh and P. Matthiesen ( Eds), Lewis Pub.,
561p.
Persoone G., 1998- Development and first validation of a stock culture free algal
microbiotest: the Algaltoxkit, In : Microscale testing In Aquatic Toxicology, Advances,
Techniques and Practice, P.G. Wells, K. Lee and C. Blaise ( Eds), CRC Lewis Pub.,
Chapter 20, p. 311-320.
Persoone G., 1998- Development and validation of Toxkit microbiotests with invertebrates,
in particular crustaceans, In : Microscale testing In Aquatic Toxicology, Advances,
Techniques and Practice, P.G. Wells, K. Lee and C. Blaise ( Eds), CRC Lewis Pub.,
Chapter 30, p. 437-449.

Prezentarea unor microbioteste Toxkit si rezultatele aplicarii lor in lucrari

de licenta

3.2.1. Microbiotestul THAMNOTOXKIT F.

Biotestul Thamnotoxkit F pentru determinarea LC50, cu timpul de expunere de
24 ore este realizat ntr-o tvi test multicameral folosind stadiile larvare II-III ale
crustaceului Thamnocephalus platyurus, care sunt eclozate din chiti. Fiecare
Thamnotoxkit F conine toate materialele (disponibile) pentru a realiza 6 teste de
toxicitate complete sau 5 bioteste i un test de control al calitii cu un toxic de
referin. Folosind larvele crustaceului Thamnocephalus platyurus

eclozate din

chiti, un test de toxicitate acut este realizat n 24 ore. Singurul echipament necesar
este un incubator (25C), un microscop de disecie ( cu o mrire de 10-12x) i
sticlria convenional de laborator.

Modul de lucru standard

1) Prepararea mediului de cultur ( Figura 3.4).

Flacoanele cu soluii concentrate n sruri cu care este prevzut kit-ul sunt folosite
pentru a prepara un litru de mediu de cultur artificial. Soluia standard de ap dulce
este folosit ca mediu de eclozare pentru chiti i ca mediu de diluie pentru seriile de
diluie toxice.

Mod de lucru:
1. Se umple un balon cotat de un litru cu aproximativ 800 ml ap distilat.
2. Se desface flaconul nr.1 (NaHCO3) cu soluie concentrat n sare i se toarn
coninutul n balonul cotat de 1 litru.

3. Se repet pasul al 2-lea pentru celelalte flacoane cu soluii concentrate n sruri i

anume: dou flacoane cu nr.2 (CaSO4), un flacon cu nr.3 (MgSO4) i un flacon nr.4
(KCl), respectnd aceast ordine.
4. Se adaug ap distilat pn la semnul de 1000 ml i se agit pentru a omogeniza
mediul.

2) Depozitarea mediului
Soluia de un litru de mediu de cultur este suficient pentru 6 bioteste ale
fiecrui Toxkit. Dac toate 6 testele nu sunt demarate n cteva zile de la prepararea
mediului, depozitai mediul de cultur ntr-un frigider la ntuneric. ntr-un ultim caz,
ar trebui, de preferat, s fie distribuit n cteva baloane cotate, pentru folosirea
separat. Se are n vedere s se aduc treptat temperatura mediului la temperatura
camerei nainte de a fi folosit.

3A) Activarea chitilor

Activarea chitilor ar trebui s fie iniiat cu 24 ore nainte de nceperea testului
de toxicitate.

Mod de lucru:
Eclozarea se realizeaz n mediu de cultur diluat (diluie de 1:8 cu ap
distilat). Diluarea mediului de cultur scade presiunea osmotic, care se reflect ntrun procent mai mare de activare a chitilor de Thamnocephalus platyurus.

Prehidratarea chitilor :
1. Se prepar 20 ml de mediu de cultur diluat adugnd 17,5 ml de ap distilat la
2,5 ml de mediu de cultur.
2. Se deschide o fiol cu chiti i se umple cu mediul de eclozare diluat (aproximativ
1 ml).

3. Se nchide fiola cu dopul i se agit la intervale regulate de timp pe o perioad de

30 minute.

Transferul chitilor prehidratai n cutiile Petri de eclozare

1. Se golete coninutul flaconului cu chiti prehidratai ntr-una dintre cele dou mici
cutii Petri, asigurai-ne c toi chitii au fost transferai cltind fiola cu mediu de
cultur diluat.
2. Se adaug 10 ml de mediu de cultur diluat n cutia Petri i se amestec cu grij
pentru a distribui uniform chitii.
3. Se acoper la 25C timp de 20-22 ore, sub o iluminare continu (sursa de lumin
de 3000-4000 luci).
ZIUA 1
3B) Transferul larvelor (Figura 3.4.):
La 20-22 ore dup nceputul incubrii, larvele eclozate (stadiul I) treuie s fie
transferate n mediu proaspt. nainte de acest transfer, se verific starea larvelor la
un microscop de disecie (cu o mrire de 10-12X). Testele de toxicitate trebuie s se
realizeze numai cu organisme test vii. Dac condiiile prescrise sunt urmate n mod
corect, nu ar trebui s intervin nici o problem. n cele patru ore dup transfer, toate
larvele trebuie s se metamorfozeze n stadiile II-III.
Mod de lucru:
1. Se adaug 12 ml mediu de cultur n a 2-a cutie Petri.
2. Se transfer larvele cu ajutorul micropipetei din cutia Petri de eclozare n a doua
cutie Petri. Pentru a facilita colectarea larvelor, se poate direciona o raz de
lumin pe o parte a cutiei Petri de eclozare. Din moment ce larvele sunt fototactic
pozitive, organismele se vor aduna pe partea iluminat i pot fi absorbite mult mai
uor cu micropipeta.
3. Se acoper cutia Petri de transfer i se incubeaz la o temperatur de 25C, timp
de 4 ore pentru a le permite larvelor s se metamofozeze n stadiile II sau III.

Testul cu eflueni
O serie de diluie: 100% - 50% - 12,5% i 6,25 a probei de efluent este preparat prin
procedeul de diluie n serie, fiecare diluie este fcut prin diluarea concentraiei
precedente la jumtate.

Mod de lucru:
1. Se adaug 5 ml ap de diluie la tuburile test 2, 3, 4 i 5.
2. Se adaug 10 ml din proba de efluent la tubul test 1 i se cltete pipeta
3. Folosind aceeai pipet, se transfer 5 ml din tubul test 1 n tubul test 2 i se
cltete pipeta; se astup i se agit tubul test 2.
4. Se repet acest procedeu (pasul 3) pentru urmtoarele diluii (tabelul 3.1.):
- 5 ml din tubul test 2 n tubul test 3;
- 5 ml din tubul test 3 n tubul test 4;
- 5 ml din tubul test 4 n tubul test 5.
5. Se trece la umplerea tviei test ( Figura 3.4.).
Tabelul 3.1. Seriile de diluie ale efluentului
Tubul test

Testul de referin

Concentraia efluentului

100

50

25

12,5

6,25

Pentru a verifica executarea corect a procedurii testului i condiia fiziologic

bun a animalelor test, este recomandabil s se realizeze un test de referin din timp
n timp.
Fiecare THAMNOTOXKIT conine un flacon cu 1 gram de toxic reprezentativ
(K2Cr2O7 dicromat de potasiu), pentru a realiza un test de control al calitii.
Mod de lucru:
1. Se toarn coninutul flaconului cu compusul chimic de referin ntr-un balon cotat
cu volumul de 1 litru.
2. Se adaug ap distilat pn la semn, se astup balonul i se agit pentru a
dizolva i omogeniza soluia stoc de 1 g/l dicromat de potasiu.
3. Se prepar o serie de diluie a toxicului de referin (n tuburi de plastic de 10
ml), conform procedurii indicate.
Seriile de diluie pentru testul de referin sunt cuprinse ntre 0,032 mg/l i 0,32
mg/l. Mai nti, o diluie de 1 mg/l a soluiei stoc este preparat, din care sunt fcute
subdiluiile C1 C3 (C3 trebuie s fie fcut n duplicat n cazul n care sunt folosite
tuburi test de 10 ml).
Diluiile C4 i C5 sunt ulterior preparate din C3. Lista de mai jos arat cele 5 diluii
care trebuie s fie folosite pentru testul de referin:
C1 (un tub test): 0,32 mg/l;
C2 (un tub test): 0,18 mg/l;
C3 (dou tuburi test): 0,10 mg/l;
C4 (un tub test): 0,056 mg/l;
C5 (un tub test): 0,032 mg/l.
4. Se trece la umplerea tviei test.

3.2.2. Microbiotestul DAPHTOXKIT F MAGNA

n cazul biotestului DAPHTOXKIT F MAGNA am urmat urmtoarele

etape:

1. Prepararea mediului de cultur ( Figura 3.5):

Daphtoxkit F Magna conine flacoane cu soluii concentrate n sruri pentru a
prepara 4 litri de ap dulce artificial, conform formulei recomandate de Organizaia
Internaional pentru Standardizare (I.S.O.) pentru testul de toxicitate acut cu
Daphnia magna Straus.
Fiecare set de cte 4 flacoane servete pentru a prepara 2 litri de mediu de cultur
folosit ca mediu de eclozare pentru efipii i ca mediu de diluie pentru prepararea
seriilor toxice de diluie.
Procedeul de preparare a 2 litri de mediu de cultur:
1. Se umple un balon cotat de 2000 ml cu aproximativ un litru de ap distilat.
2. Se deschide flaconul cu nr.1 (NaHCO3) i se toarn coninutul n balon.
3. Se repet aceast operaiune i pentru celelalte 3 flacoane: flaconul cu nr. 2
(CaCl2);
flaconul cu nr. 3 (MgSO4) i flaconul cu nr. 4 (KCl), respectnd aceast ordine.
4. Se adaug ap distilat pn la semnul de 2000 ml; se astup flaconul i se agit
pentru a
omogeniza mediul.
Doi litri de mediu de cultur ajung pentru realizarea a 3 bioteste cu Daphnia
magna complete. Depozitarea mediului de eclozare se va face ntocmai ca i n cazul
biotestului cu Thamnocephalus platyurus.

2) Activarea efipiilor ( Figura 3.5):

Activarea efipiilor trebuie iniiat cu 3-4 zile nainte de startul testului de
toxicitate.
Mod de lucru:

1. Se toarn coninutul unui flacon cu efipii ntr-o microsit; asigurndu-ne c toate

efipiile au
fost transferate.
2. Se cltesc efipiile bine cu ap distilat pentru a elimina toate urmele de mediu de
stocare.
3. Se transfer efipiile ntr-o cutie Petri de eclozare, n 15 ml mediu de cultur.
4. Se acoper cutia Petri de eclozare i se incubeaz timp de 3-4 zile, la 20C, sub o
iluminare continu de 10000 luci (intensitatea luminoas deasupra cutiei Petri).

Consideraii importante cu privire la activarea efipiilor

Dezvoltarea embrionar a oulor de Daphnia magna dureaz cel puin 3 zile, i
eclozarea din ou nu este sincron. Sub condiiile de iluminare i de temperatur
indicate (10000 luci i 20C), procentajul cel mai mare de eclozare va avea loc dup
3-4 zile de incubare.
Trebuie avute n vedere urmtoarele:
a) Un minim de 120 nou nscui este necesar pentru a realiza un test complet;
b) Nou nscuii s nu depeasc vrsta de 24 de ore ( stadiul larvar 3-4) la startul
testului de toxicitate; organismele ar trebui colectate la cel mult 96 de ore dup
nceputul incubrii.

Testul cu eflueni
O serie de diluie 100% - 50% - 25% - 12,5% i 6,25% a probei de efluent este
preparat printr-o diluie n serie de 1:1, prin diluii succesive ale efluentului original
la jumtate.

Tabelul 3.2. Seriile de diluie ale efluentului

Tubul test

Concentraia efluentului

100

50

25

12,5

6,25

Se iau cinci baloane cotate de 100 ml i se numeroteaz de la C1 la C5.

C1 este efluentul nediluat iar C5 are cea mai mare diluie (tabelul nr. 3.2.).
1. Se umple balonul C1, pn la semnul de 100 ml, cu efluent.
2. Se pun 50 ml mediu de cultur n baloanele C2, C3, C4 i C5.
3. Se transfer 50 ml din balonul C1 n balonul C2. Se astup i se agit energic
balonul C2.
4. Se repet aceast etap (pasul 3) pentru urmtoarele diluii, i anume:
- 50 ml din C2 n C3;
- 50 ml din C3 n C4
- 50 ml din C4 n C5.
5. Se trece la umplerea tviei test ( Figura 3.6.).

Pre-hrnirea organismelor test:

Datorit activitii metabolice crescute a lor, dafniile nou nscute consum

rapid rezervele lor interne. Din moment ce organismele test nu trebuie hrnite n
timpul perioadei de expunere la substane toxice, cei mai slabi indivizi ai populaiei
test pur i simplu mor de foame cnd expunerea este extins de la 24 la 48 de ore.
Drept rezultat, procentajul mortalitii la martor (mai ales) poate depi pragul de
10%, fcnd invalid biotestul de 48 de ore. Moartea prin nfometare a unor organisme

n timpul expunerii de 48 ore, poate fi evitat printr-o pre-hrnire de dou ore a

organismelor test cu alge uscate (Spirulina), nainte de nceperea testului.

Mod de lucru:
1. Se ia o fiol cu Spirulina i se umple cu ap dulce standard.
2. Se agit fiola pn la omogenizarea coninutului.
3. Cu dou ore naintea colectrii noilor nscui pentru testare, se toarn coninutul
tubului n cutia
Petri de eclozare.
4. Se agit uor cutia Petri pentru o distribuie uniform a hranei algale.

Testul de referin
Se realizeaz o serie de diluii ale bicromatului de potasiu, ntre 3,2 mg/l i 0,32
mg/l.
1. Se ia un flacon de 1000 ml i 6 flacoane de 100 ml. Flaconul de 1000 ml se
eticheteaz STOC 1, primul flacon de 100 ml se eticheteaz cu STOC 2, iar
celelalte flacoane se noteaz cu C1, C2, C3, C4, C5.
2. Se cntrete o cantitate de 100 mg bicromat de potasiu pe o balan analitic, care
se transfer apoi n flaconul de 1000 ml (STOC 1) i se umple pn la semn cu ap
deionizat.
3. Se transfer 10 ml din soluia STOC 1 n flaconul STOC 2 i se umple pn
la semn cu ap deionizat pentru a realiza o concentraie toxic de 10 mg/l.
4. Se transfer urmtoarele volume de soluie toxic din flaconul STOC 2 n
celelalte flacoane de 100 ml:
- 32 ml n flaconul C1 (3,2 mg/l);
- 18 ml n flaconul C2 (1,8 mg/l);
- 10 ml n flaconul C3 (1 mg/l);
- 5,6 ml n flaconul C4 (0,56 mg/l);

- 3,2 ml n flaconul C2 (0,32 mg/l).

5. Se adaug ap dulce standard pn la semn n cele 5 flacoane i se agit pentru
omogenizare.
6. Se umplu tviele multicompartimentate cu soluiile toxice.

3.2.3. Microbiotestul ALGALTOXKIT F

n cazul biotestului ALGALTOXKIT F am procedat dup cum urmeaz :

I.

Prepararea mediului de cultur pentru alge :

1. Se transfer 800 ml ap distilat ntr-un flacon de 1000 ml.

2. Se deschide una din cele dou sticlue etichetate Nutrient Stoc A i se transfer
10 ml n
flacon.
3. Se deschid sticluele etichetate Nutrient Stoc B, C i D i se transfer cte 1 ml
din soluiile respective n flacon. Se nchid sticluele i se depoziteaz din nou la
frigider la ntuneric, la 4C.
4. Se umple flaconul pn la semnul de 1 litru cu ap deionizat, se nchide i se
agit energic pentru a se omogeniza mediul de cultur pentru alge.
5. Se ajusteaz pH-ul, dac este necesar la 8 0,2, cu ajutorul HCl 1M sau al NaOH.

II. De imobilizarea algelor ( Figura 3.7):

1. Se ia una din cele dou fiole care conin granule de alge i se vars lichidul din
aceasta; trebuie avut grij s nu se elimine vreo granul algal n decursul
procesului.
2. Se deschide sticlua etichetat Mediu de dizolvare a matricei i se transfer 5 ml
n fiol.
3. Se nchide fiola i se agit energic. Se repet agitarea manual la fiecare dou
minute pn ce matricea care imobilizeaz algele este total dizolvat. Algele ar
trebui s fie n totalitate eliberate n circa 20 30 minute.
Pentru a grbi procesul poate fi utilizat o centrifug.
4. Se centrifugheaz fiola timp de 10 minute

la 3000 rotaii pe minut ntr-o

centrifug convenional de laborator.

5. Se vars supernatantul i se nlocuiete cu 10 ml ap deionizat.
6. Se nchide fiola i se agit puternic pentru a resuspenda algele omogen.
7. Se centrifugheaz fiola din nou la 3000 rotaii pe minut timp de 10 minute i se
decanteaz supernatantul.
8. Se resuspend algele n 10 ml mediu de cultur algal.

III. Prepararea inoculului algal concentrat ( Figura 3.7):

Mod de lucru:

1. Se toarn suspensia algal din fiola centrifugii ntr-un flacon de 25 ml i se

adaug mediu de cultur algal pn la semnul de 25 ml. Se nchide i se agit
pentru a se omogeniza suspensia algal.
2. Se iau cele dou celule lungi etichetate Celul lung pentru calibrare, Celul
pentru Stoc Algal.
3. Se umple celula pentru calibrare cu 25 ml mediu de cultur algal i se nchide
celula cu ajutorul capacului.
4. Se introduce aceast celul n colorimetru i se calibreaz la zero aparatul.
5. Se transfer suspensia algal n celula pentru Stoc Algal i se nchide etan celula
cu

capacul.
6. Se agit aceast celul, energic, pentru a distribui uniform suspensia algal.
7. Se introduce celula pentru Stoc Algal n colorimetru i se citete densitatea
optic (D.O.1) dup 10 secunde.
8. Se ia tabelul cu raportul dintre densitatea optic i numrul algelor (D.O. / N) i se
caut numrul de alge (N1) corespunztor densitii optice (D.O.1).
9. Cu N2 egal cu 1 . 106 alge / ml, se calculeaz din raportul N1/N2, factorul de diluie
necesar pentru a atinge o densitate optic egal cu D.O.2, corespunztor unei
densiti algale de 1 . 106 celule / ml.
10. Se transfer suspensia algal din celula pentru Stoc Algal ntr-un flacon de 100 ml
i se adaug volumul de mediu de cultur algal necesar pentru a realiza o
suspensie cu 1 . 106 celule / m. Se nchide i se agit flaconul cu putere pentru a
distribui uniform algele.
11. Se cltete celula pentru Stoc Algal, se transfer 25 ml din suspensia cu 1 . 106
alge / ml n aceast celul, se pune capacul celulei, se agit uor i se citete
densitatea optic (D.O.) dup 10 secunde.
12. Se verific pe graficul D.O./N dac densitatea optic (D.O.) corespunde cu
valoarea dorit a D.O.2 (1 . 106 celule algale / ml).

Testul cu eflueni
O serie de diluii 1:1, 100%, 50%, 25%, 12,5% i 6,25% a probei de efluent
este preparat prin diluii n serie, succesive, ale efluentului original, la jumtate.

I. Pregtirea probelor
Pentru a elimina turbiditatea, probele trebuie filtrate printr-un filtru din sticl cu
porozitatea de 0,45 m, nainte de testare:

II. Prepararea seriei de diluie 1:1 a efluentului

Mod de lucru:
1. Se iau ase flacoane de cte 200 ml i se numeroteaz de la C0 la C5. Flaconul C0
este martorul, C1 este efluentul nediluat i C5 este diluia cea mai mare (vezi tabelul
3.3.).
Tabel 3.3. Seriile de diluie ale efluentului
Flaconul

Concentraia efluentului

C0

C1

100

C2

50

C3

25

C4

12,5

C5

6,25

2. Se umple flaconul C1 pn la semn cu efluentul filtrat i se adaug 2 ml de soluie

de nutrient stoc A i 0,2 ml de soluii B, C i D. Se nchide flaconul i se agit energic
pentru a amesteca coninutul.
3. Se pun 100 ml mediu de cultur algal n flacoanele C0, C1, C2, C3, C4 i C5.
4. Se transfer jumtate din coninutul flaconului C1 (100 ml) n flaconul C2 (pn la
semnul lui C2) pentru a realiza prima diluie: 1:1 (50% efluent); se nchide flaconul C2
i se agit energic pentru a amesteca coninutul.
5. Se repet operaiunea indicat n cadrul etapei a 4-a, pentru flacoanele C3, C4 i
C5:
- 100 ml din C2 n C3 ( = 25% efluent);
- 100 ml din C3 n C4 ( = 12,5% efluent);
- 100 ml din C4 n C5 ( = 6,25% efluent).
6. Se ndeprteaz 100 ml soluie din flaconul C5.

7. Se adaug cte 1 ml din suspensia algal de 1 . 104 celule algale / ml n fiecare

flacon cu efluent. Se nchid flacoanele i se agit energic pentru a distribui uniform
algele.
8. Se trece la etapa urmtoare, i anume, transferul diluiilor toxice cu alge n cele 18
celule lungi de testare.
Se incubeaz, pe parcursul celor 3 zile n care se desfoar testul, n condiiile unei
iluminri constante, uniforme de 8000 luci i la o temperatur cuprins ntre 21C 25C.

Testul de referin

Acest test de control al calitii poate fi realizat, ca i n cazul testelor descrise

anterior, cu ajutorul bicromatului de potasiu (K2Cr2O7).

Mod de lucru:
O serie de diluii variind de la 1 mg/l la 0,1 mg/l trebuie preparat:
1. Se iau 9 flacoane de 100 ml i se noteaz primele dou cu STOC1 i STOC2,
urmtoarele dou cu C1 i celelalte de la C2 la C5.
2. Se cntresc 100 ml bicromat de potasiu pe o balan analitic i se transfer n
flaconul STOC1. Se adaug mediul de cultur algal pn la semn i se agit
pentru a dizolva substana chimic i a se obine o concentraie de 1 g/l (STOC1).
3. Se transfer 1 ml din flaconul STOC1 n flaconul STOC2 i se umple pn la
semn cu mediu de cultur algal. Se agit pentru a omogeniza coninutul i se obine
o concentraie a toxicului de 10 mg/l ( STOC2 ).

4. Se transfer 10 ml din flaconul STOC2 n cele dou flacoane C1 i se umple pn

la semn cu mediu de cultur algal. Se agit pentru a omogeniza coninutul i se obin
dou flacoane cu 1 mg/l toxic.
5. Se transfer urmtoarele volume de soluie toxic din C1 n celelalte flacoane:
- 56 ml n flaconul C2;
- 32 ml n flaconul C3;
- 18 ml n flaconul C4;
- 10 ml n flaconul C5.
Acest transfer va goli unul din cele dou flacoane C1 i va lsa numai 84 ml n cel deal doilea flacon.
6. Se adaug mediu de cultur algal pn la semnul de 100 ml n flacoanele C0, C2, C3,
C4 i C5.
7. Se adaug (pe ct de precis posibil) 0,84 ml din stocul algal de 1 . 106 celule algale
/ ml n flaconul C1 i, cte 1 ml suspensie algal n flacoanele C0, C2, C3, C4 i C5 n
ordine, pentru a obine o densitate algal de 1 . 104 celule / ml n fiecare flacon. Se
nchide i se agit energic flacoanele pentru a se distribui uniform suspensia algal.
8. Se trece mai departe la transferul diluiilor toxice cu alge n celulele lungi de
testare, aa dup cum s-a artat anterior( Figura 3.8.).

Prezentarea microbiotestului OSTRACODTOXKIT F

(test de toxicitate cronic contact direct pentru sedimente de ap dulce)

Origine : testul de toxicitate cu ostracode pentru sedimente de ap dulce a fost

dezvoltat de prof. dr. Persoone, n asociaie cu Laboratorul pentru Toxicologie a
Mediului i Toxicologie Acvatic din cadrul Universitii Ghent, din Belgia.
Scop : Toxkit-urile sunt microbioteste ce conin toate materialele necesare,
inclusiv organismele-test, pentru a desfura teste de toxicitate simple, rapide, precise
i reproductibile, la un pre redus. Pentru c microbiotestele Toxkit se potrivesc
pentru testarea toxicitii chimicalelor i apelor uzate deversate n mediile acvatic i
terestru, Ostracodtoxkit F a fost realizat special pentru detectarea i cuantificarea
toxicitii sedimentelor i solurilor contaminate cu poluani organici i/sau
anorganici.

Principiu : se realizeaz un test pe ostracode (crustaceul Heterocypris

incongruens) ce se obin din chiti. Dup 6 zile de contact cu sedimentul, sunt
determinate procentul de mortalitate i de cretere a crustaceilor prin comparaie cu
rezultatele obinute cu ajutorul unui test de referin (martor).
Avantajele testelor Toxkit : avantajul major al testelor Toxkit, n comparaie
cu testele (experimentele) convenionale, este ca organismele-test sunt ncorporate
n kituri n stare de laten sau imobilizate, din care pot fi activate la nevoie nainte
de realizarea testului de toxicitate.
Testul de toxicitate aplicat apelor pe care le studiem (care sunt utilizate la scar
larg pentru stabilirea toxicitii sedimentelor) pune n eviden numai toxicitatea
contaminanilor dizolvai. Acum se admite n general c pentru stabilirea precis a
toxicitii sedimentului este nevoie de teste ale apelor pe care le studiem.
Ostracodtoxkit F primul microbiotest contact direct avnd ca specie-test un
crustaceu, microbiotest necesar pentru stabilirea toxicitii totale a sedimentelor
(efectele poluanilor, att dizolvai, ct i nedizolvai).
Trsturi : fiecare Ostracodtoxkit F conine toate materiale necesare pentru
realizarea mai multor testri (minim 3, maxim 5). Singurul echipament de care avem
nevoie este un incubator (25 C), un microscop i sticlrie de laborator.
Sensibilitate

sensibilitatea

Ostracodtoxkit-ului

cu

Heterocypris

incongruens se compar favorabil cu testul de 10 zile pe amfipodul (crustaceu)

Hyalella azteca i este mult mai sensibil dect testul aplicat minusculei larve de
Chironomus riparius.
Precizie : deoarece Ostracodtoxkit-ul F cronic conine biomaterialele-test i
mediul-test necesare, experimentul poate fi repetat foarte usor.
Viabilitatea chitilor : viabilitatea optim a chitilor este meninut prin
pstrarea acestora n tuburi la frigider, la 5C (=/- 2C) i la ntuneric. Incubarea
reuit a chitilor pstrai n aceste condiii este garantat pentru cteva luni.

Ostracode : crustaceele ostracode reprezint membrii importani ai meiofaunei

din sedimentele apelor dulci. Heterocypris incongruens are o distribuie cosmopolit
i poate fi gsit n diferite habitate bentale de ap dulce, indiferent de continent.

CONINUTUL OSTRACODTOXKIT-ULUI F
Chiti de ostracode
Trei tuburi de 1 ml cu chiti ai speciei Heterocypris incongruens, care ar trebui
pstrai n frigider pn la folosire pentru a menine o incubare maxim. Dac
procedura de incubare este urmrit ndeaproape, numrul de ostracode obinut din
fiecare tub cu chiti va depi cu mult numrul de indivizi de care este nevoie pentru
realizarea testului.
Vase-test
ase vase din polistiren cu 6 caviti ( cu diametrul de 36 mm) ce vor servi
drept recipiente.
Vase test pentru msurarea lungimii
Un vas cu fundul subire cu 48 de caviti, care va fi folosit pentru msurarea
lungimii ostracodelor.
Benzi Parafilm
ase benzi Parafilm necesare pentru sigilarea (etaneizarea) vaselor, pentru a
minimaliza evaporarea pe parcursul perioadei de incubare.
Vase Petri
ase vase Petri din polistiren (cu diametrul de 5 cm) cu capac. Trei vase Petri
vor fi folosite pentru incubarea chitilor de ostracode, iar celelalte trei vor folosi
pentru transferul i msurarea numrului de ostracode vii la finalul testului.
Soluii de sruri concentrate
n 5 sticlue se gsete soluia concentrat a uneia dintre srurile necesare
pentru obinerea a 1 litru de Ap Standard (mediu de ap reconstituit EPA) cu ap
deionizat. Apa Standard este folosit pentru incubarea chitilor i pentru prepararea
suspensiei de hran (suspensie algal).

Hrana algal
Trei tuburi ce conin mici picturi de alge verzi (Scenedesmus sp.) imobilizate
ntr-o matrice inert. Tuburile trebuie pstrate la frigider la 5 C, n condiii de
ntuneric.
Mediu de dizolvare a matricei
Trei fiole ce conin un mediu special pentru dizolvarea matricei n care sunt
imobilizate microalgele. Mediul de dizolvare a matricei trebuie inut la frigider (5C)
nainte de folosire.
Pudra de Spirulina
Trei tuburi de pudr de Spirulina pentru prehrnirea ostracodelor incubate,
nainte de test.
Sedimente de referin
Un recipient de plastic (cu o lopic de 500 l) ce conine un nisip standard,
care va fi folosit ca sediment de control (martor) n teste.
Recipiente pentru sediment
Cinci recipiente de plastic (cu lopic de 500 l) care vor fi umplute cu
sediment.
Spatule
ase spatule de plastic necesare pentru uniformizarea sedimentului din
lopelele de 500 l.
Micropipete
ase micropipete de sticl pentru transferul ostracodelor.
Micropipete cu gur larg
ase micropipete necesare pentru transferul suspensiei de sediment n
microsit la sfritul testului.
Soluie Lugol
O sticl mic cu soluie de fixare Lugol necesar pentru fixarea ostracodelor
pentru o mai uoar msurare a lungimii, la sfritul testului.
Micropipeta Lugol

O micropipet de polietilen ce va fi folosit pentru manipularea soluiei

Lugol.
Lamela micrometric
Trei lamele transparente (22 cm) cu micrometru perpendicular de 1cm
lungime, cu subdiviziuni de 50 m, pentru msurarea lungimii ostracodelor.
Microsit
O sit cu diametrul ochiurilor de 100 m, pentru ndeprtarea particulelor mici
de sediment la finalul testului.
Manual pentru Procedura Operaional Standard
O brour detaliat ce conine toate instruciunile de realizare a testului de toxicitate.
Protocol
O versiune prescurtat a manualului pentru Procedura Operaional Standard.
Fia de rezultate
Fiele de rezultate sunt necesare pentru notarea mortalitii organismelor-test i
lungimea ostracodelor ce supravieuiesc, la finalul testului.
Fia de specificare
O fi cu specificri adecvate pentru fiecare Ostracodtoxkit, precum numrul
seriei de chiti, soluiile de sruri concentrate, hran algal etc.
Toate materialele artificiale din Ostracodtoxkit F sunt produse inerte, fr
toxicitate.
Aceste materiale sunt disponibile, de unic folosin.

I. Prepararea mediului de cultur

Fiolele cu soluii de sare concentrate din Toxkit sunt folosite pentru prepararea
a 1 l de mediu. Apa reconstituit selectat pentru testele Ostracodtoxkit este ap
moderat grea (formula EPA). Mediul

este folosit pentru prepararea suspensiei

algale (hrana).
Procedura (Fig. nr. 13) :
se pun ntr-un recipient 800 ml de ap deionizat;

se scoate apoi dopul fiolei cu soluie concentrat de sare etichetat cu 1

(NaHCO3) i se toarn coninutul n balonul volumetric
se repet pasul al doilea pentru celelalte fiole cu soluie concentrat de sare : 2
fiole etichetate cu 2 (CaSO4), o fiol numrul 3 (MgSO4) si o fiol numrul 4 (KCl),
respectnd aceasta ordine;
adugm apoi apa distilat pn la semnul de 1 l i amestecm pentru
omogenizarea coninutului.

II. Stocarea mediului de cultur

Acel 1 litru de mediu este suficient pentru 3-5 repetri care pot fi realizate cu
un singur Ostracodtoxkit. Dac toate testele nu sunt duse la bun sfrit n cteva zile
de la prepararea mediului, pstrai mediul de cultur la frigider, n condiii de
ntuneric. Trebuie s avem grij s nclzim mediul treptat pn la temperatura
camerei, nainte de folosire.

Fig. nr. 13 Prepararea mediului de cultur

III. Preaerarea mediului de cultur

Se recomand ca mediul s fie neaprat aerat timp de cel puin 15 minute
nainte de folosire pentru incubarea chitilor i pentru prepararea suspensiei algale.
Preaerarea poate fi realizat foarte uor prin pomparea aerului printr-un tub de
plastic conectat la o pompa de acvariu.
IV. Incubarea chitilor de ostracode
Incubarea chitilor de ostracode trebuie iniiat cu 52 de ore nainte de
nceperea testului de toxicitate.
Procedura (Fig. nr.14) :
se pun 8 ml de mediu ntr-una din plcile Petri;
se pune coninutul unei fiole cu chiti n placa Petri i pentru a fi siguri de
transferul complet al chitilor, fiola trebuie cltit de dou ori cu mediu de cultur
(Apa Standard);
se acoper placa de incubare cu capacul i se incubeaz la 25 C timp de 52 de
ore sub continu iluminare (sursa de lumina de 3000-4000 de luci).
V. Pre-hrnirea ostracodelor proaspt incubate
Pentru a aproviziona ostracodele cu hran imediat dup ce au fost incubate, un
scurt pas de pre-hrnire se face la 48 de ore de la incubarea chitilor.
Procedura :
se ia unul din tuburile cu pudr de Spirulina i se umple cu mediul de cultur
preparat;
acoperii tubul i amestecai coninutul temeinic pentru a dispersa particulele
de Spirulina;
se toarn suspensia cu Spirulina n placa Petri de incubare la 48 de ore de la
incubarea chitilor;
se aeaz placa Petri la loc n incubator timp de 4 ore.

VI. Msurarea lungimii ostracodelor proaspt incubate

Ct mai curnd posibil dup incubare (la scurt timp dup cele 52 de ore) trebuie
determinat lungimea ostracodelor. Msuratorile de lungime se pot face foarte uor, cu
ajutorul lamelei micrometrice plasat n centrul sau la baza microscopului de disecie.

Fig. nr. 14 Incubarea chitilor de ostracode

Procedura (Fig. nr. 15) :

-se iau aproximativ 10 ostracode din placa Petri cu o micropipet din plastic i
se pun ntr-una dintre cavitile suportului de msurare a lungimii;
Nota bene! Ostracodele ncearc s reziste curenilor de ap prin agarea de
orice suprafa solid. Aceasta poate da probleme n cazul transferului ostracodelor
deoarece unele dintre ele se aga de pereii interiori ai micropipetelor de plastic. Din
acest motiv au fost introduse n Ostracodtoxkit-uri micropipete din sticl special.
Micropipetele din sticl au perei foarte fini, de care crustaceele nu se pot aga; n
schimb ele sunt foarte fragile i trebuie manevrate cu mult atenie!
-se adaug o pictur de soluie Lugol n recipientul cu ostracode i se ateapt
cteva minute pn cnd organismele devin complet imobile;
-se aeaz una dintre lamelele micrometrice exact n centru suportului din sticl
de la baza microscopului de disecie. Trebuie s avem grij c intersecia celor dou
linii micrometrice perpendiculare s fie exact n centrul cmpului vizual;
-se fixeaz ambele pri ale riglei micrometrice pe suportul de sticl cu banda
transparent;
-se pune suportul pentru msurarea lungimii la nivelul microscopului de
disecie i se poziioneaz recipientul cu ostracode n partea de sus a riglei
micrometrice;
-se rotete suportul pentru a pune ostracodele una dup alta, cu axa lungimii
exact n partea de sus a celor 2 linii micrometrice i se msoar lungimea
organismelor;
Nota bene! Cele mai mici diviziuni ale liniilor micrometrice sunt de 50 m.
Ostracodele proaspt incubate au o lungime de aproximativ 200 m.
-se noteaz apoi rezultatele msurtorilor n fia de rezultate (n coloana ZIUA
0).

Msurarea lungimii ostracodelor (1,2,3,)

Msurarea lungimii ostracodelor (4,5,6)

VII. Prepararea suspensiei algale (hrana)

Dei multe sedimente conin un anumit procent de materie organic, nici
compoziia n materie organic, nici cantitatea nu pot fi adecvate sau suficiente
pentru hrnirea ostracodelor timp de 6 zile de expunere.
Procedura (Fig. nr.16):
-se ia un tub cu picturi cu alge, se toarn n mediul de pstrare i se adaug 7
ml de mediu de dizolvare a matricei;

-se acoper tubul i se agit coninutul intermitent (agitarea cu un mixer Vortex

este propus), pn cnd matricea ce nconjoar algele este complet dizolvat i
microalgele sunt complet eliberate. Acest lucru dureaz aproximativ 10-15 minute;
-se centrifugheaz tubul la 3000 rpm, timp de 10 minute;
-se toarn supernatantul, se adaug 10 ml de ap distilat i se agit din nou;
-se centrifugheaz din nou la 3000 rpm, timp de 10 minute;
-se elimin resturile;
-se transfer ghemotocul de alge ntr-un balon volumetric i se adaug mediu
de cultura pn la semnul de 25 ml;
-se acoper balonul i se agit temeinic pentru a rspndi algele, n scopul
obinerii unei suspensii de alge omogen.
Nota bene! Concentraia algal din balon va fi n jur de 1,5 107 celule/ml.
VIII. Adugarea de sediment, hran i ostracode pe suportul de testare
Procedura (Fig. nr. 17) :
-se pun 2 ml de mediu (Ap Standard) n fiecare din cavitile suportului de
testare;
-se adaug 2 spatule (500 l fiecare) de sediment n fiecare cavitate; se agit
uor suportul pentru ca sedimentul s acopere toat suprafaa de pe fundul cavitilor;
-se ateapt 5 minute pentru ca sedimentul s se depun;
-se agit balonul cu suspensia algal temeinic i se transfer foarte atent 2 ml
de suspensie n fiecare cavitate;

Prepararea suspensiei de hran algal (1-4)

Prepararea suspensiei de hran algal (4-7)

-se transfer cu ajutorul unei micropipete o parte a ostracodelor din placa de

incubare n capacul plcii, dar se umple mai nti cu 10 ml de mediu (acest pas va
facilita transferul ostracodelor n cavitile suportului de testare).
Aceast operaie trebuie dus la capat sub microscopul de disecie la o mrire
de 10-12 ori.
-se transfer 10 ostracode din capac n fiecare cavitate. Aceast operaiune
trebuie realizat sub microscop. Cnd cavitile sunt umplute, se acoper suportul de
testare cu o bucata de Parafilm i se pune capacul deasupra.
-se aeaz suportul de testare la incubator la 25 C, n condiii de ntuneric,
timp de 6 zile.
IX. Transferul ostracodelor ntr-o plac Petri
Stratul de sediment de pe fundul cavitilor nltur orice observaie vizual a
ostracodelor. Din acest motiv, dup 6 zile de expunere, ntreg coninutul cavitilortest trebuie s fie mai nti transferate ntr-o microsit i se cltesc pentru a elimina
cele mai fine particule de sediment. Ceea ce rmne (inclusiv ostracodele) vor fi
transferate ulterior ntr-o plac Petri pentru observarea vizual sub microscopul de
disecie.
Procedura (Fig. nr. 18) :
-se ia o micropipet cu gura larg pentru a agita foarte uor sedimentul din
prima cavitate-test cu strat de ap;
-aspirai partea cu suspensie de sediment i trecei-l prin microsit;
-se cltete uor coninutul micrositei sub robinet, pn cnd particulele fine
sunt splate;
-se continu pas cu pas cu transferurile dup cum s-a indicat mai sus;
-se adaug civa ml de mediu n cavitate, se amestec cu sedimentul rmas i
apoi se transfer n microsit pentru cltire. Se repet aceast operaie - de cteva ori
dac este necesar pentru a ne asigura c toate sedimentele i ostracodele au fost
transferate;

-ntoarcei microsita cu susul n jos deasupra unei mici plci Petri i cltii
coninutul micrositei cu mediu, apoi punei-l napoi n placa Petri. Trebuie s ne
asigurm c ntregul coninut al micrositei a fost transferat!
Aceast operaie de transfer trebuie realizat pentru fiecare test n parte.
Urmtorul pas (notarea rezultatelor) trebuie s fie completat nainte de a ncepe
transferul sedimentelor din urmtoarea cavitate (din aceeai plac Petri).

Fig. nr. 18 Pregtirea ostracodelor pentru msurtori

X. Notarea rezultatelor

A. Mortalitatea-procedura (Fig. nr. 19)

-se aeaz placa Petri sub microscopul de disecie i se observ coninutul cu
un grosisment de 10-12 ori;
-se iau ostracodele vii cu o micropipet din sticl i se pun n cavitile din
suportul pentru msurarea lungimii;
-se noteaz numarul de ostracode vii n fia de rezultate;
-se cltete placa Petri i se continu cu transferul sedimentului din celelalte
caviti-test n microsit i n placa Petri, urmnd mai departe paii indicai mai jos.

B. Msurarea lungimii
Remarc : Inhibarea creterii este un al doilea efect criteriu ce arat
toxicitatea sedimentelor care nu induc o mortalitate substanial altor organisme.
n consecin, msurtorile lungimii ar trebui s fie fcute numai pentru
sedimente n care mortalitatea este mai mic de 30%.
Procedura (Fig. nr. 19) :
-dup ce au fost transferate ostracodele din toate cavitile test n cavitile
suportului pentru msurarea lungimii, se adaug o pictur de soluie Lugol n
fiecare din acestea;
-se ateapt pn ostracodele devin imobile i ulterior se msoar lungimea lor;
-se noteaz rezultatele msurtorilor n fia de rezultate.

Fig. nr. 19 Modul de realizare a msurtorilor

XI. Prelucrarea datelor

Procedura :
-se calculeaz numrul de ostracode moarte din fiecare din cele 6 caviti prin
comparaie ntre sedimentul de referin (martorul) i cele 6 sedimente-test. Acest
numr se determin prin scderea numrului de ostracode vii gsite n fiecare cavitate
din numrul de organisme-test inoculate la nceputul experimentului;
Nota bene! n caz c unele ostracode s-au pierdut n timpul experimentului sau
au scpat din atenie n timpul observaiei la microscop, calcularea mortalitii reale
va fi prtinitor... De aici este foarte important s se realizeze toate operaiile cu foarte
mare atenie!
-se calculeaz mortalitatea medie pentru cele 6 duplicate cu sedimentul de
referin i cea pentru cele 6 duplicate ale sedimentului-test;
-se calculeaz procentajul mediu al mortalitii pentru sedimentul de referin
i pentru sedimentul-test, cu ajutorul deviaiei standard i coeficientului de variaie;
-se calculeaz lungimea medie a ostracodelor vii gsite n fiecare cavitate-test
fa de sedimentul de referin (= Lfinal pentru sedimentul de referin);
-se calculeaz lungimea medie pentru toate cavitile cu sediment-test (=Lfinal
pentru sedimentul-test);
-se calculeaz sporul de cretere lungimii medii a ostracodelor n sedimentul de
referin i n sedimentul-test cu ajutorul formulei :
Lspor = Lfinal - Lstart
-se calculeaz procentul de inhibare a creterii ostracodelor n sedimentul-test
cu ajutorul formulei :
% Inhibarea creterii = 100 (Lreducerea
martor)

sedimentului-test

Lreducerea

sedimentului-

100

Toate aceste rezultate sunt obinute cu ajutorul unui program pe calculator.

XII. Validitatea testului

Pentru ca toxicitatea testului s fie acceptat, trebuie realizate urmtoarele

criterii:
-procentul mortalitii medii a ostracodelor n testul martor cu sedimentul de
referin nu trebuie s depeasc 20%;
-sporul lungimii medii a ostracodelor n cavitile-martor cu sediment de
referin trebuie s fie de cel puin 400 l.

Teste de determinare a contaminarii bacteriene

Sursa de energie a tuturor organismelor vii,incluznd bacteriile,este ATP-ul i
testul de determinare a gradului de contaminare bacterian,msoara cantitatea total
de ATP din proba de ap,ca o un criteriu al prezenei bacteriilor sau a rezidurilor
biologice.
Coninutul de ATP total dintr-o prob de ap cuprinde ATP-ul intracelular al
ntregii biote vii,reziduri biologice prezente n prob precum i ATP-ul extracelular
dizolvat,provenit de la organismele moarte.
ATP-ul din ap poate fi msurat de luminescea chimic printr-o reacie luciferinluciferaz,cu ajutorul unui reactiv chimic specific.Cantitatea de lumin produs este
proporional cu coninutul total de ATP n proba de ap i este msurat de
luminometru i exprimat in RLU(unitai relative de lumin).
Microbiotestul pentru determinarea contaminrii bacteriene este potrivit pentru
numeroase analize cum ar fi:contaminare microbian a apelor de suprafa i a celor
subterane,monitorizarea microbian de rutin a apelor potabile,bazinelor de
acvacultura i piscinelor

V.2.1.1.1.Principiu

Kit-ul pentru determinarea gradului de contaminare bacterian conine tuburi

cu reactiv ATP,care,n combinaie cu echipamentul i

materialele coninute de

Cutia pentru msurare a luminescenei permite efectuarea a doua tipuri distincte

de analize:
-un test direct care msoar cantitatea total de ATP din proba de ap analizat
-un test cu membrane care msoar doar ATP-ul din bacteriile vii prezente n proba
de ap,dup eliminarea ATP-ului intra si extracelular din biota sau reziduri bilogice.

V.2.1.1.2..Coninutul cutiei pentru msurarea a luminescenei

Fiecare test pentru determinarea contaminrii bacteriene conine 10

cutii,fiecare cutie avnd cte 2 tuburi cu reactiv ATP.Fiecare tub permite analiza unei
probe de ap.
Tuburile cu reactivi ATP sunt compuse din 2 compartimente diferite,separate
de o partiie:
-camera superioar ce conine un extractant ATP lichid
-camera inferioar ce conine un reactiv ATP solid
Cutia pentru msurarea luminescenei conine luminometrul portabil i 2
suporturi pentru tuburile cu reactivi ATP,dar si mai multe obiecte pentru realizarea
testului cu membrane.
Coninutul kit-ului pentru determinarea contaminrii bacteriene
1.Cutiile cu tuburi ce con in reactivul ATP
10 cutii cu cte 2 tuburi ce conin reactivii ATP i 2 vrfuri de pipet(200l).
2.Fie pentru notarea rezultatelor
20 de fie pentru notarea scorurilor de luminescen,a datei i a evalurii
gradului de contaminare bacterian a probei de ap analizat.
3.Manualul operaional standard
O brour detaliat ce cuprinde toate instruciunile i ilustraiile pentru
efectuarea testului direct sau a celui cu membrane.

4.Protocolul de lucru
Este o varianta abreviat a Manualului operational standard

Coninutul cutiei pentru msurarea luminescenei

Cutia pentru msurarea luminescenei conine un luminometru portabil i
materiale specifice pentru efectuarea celor doua tipuri de teste.
1.Luminometru portabil
Este un aparat pentru determinarea luminescenei bazat pe citirea lungimei de
und.Are un display digital pentru citirea direct a scorurilor luminescenei n
RLU,produs de compania Kikkoman.Acesta poate fi conectat printr-un conector AC
la un printer sau la un computer.
2.Guri pentru tuburile cu reactivi ATP
Gurile din buretele ce cptuete cutia pentru msurarea luminescenei menin
tuburile cu reactivi ATP ntr-o poziie vertical.
3.Siring
O siring de 10 ml folosit pentru a filtra volumele de ap prin prefiltru i prin
membranele aflate n suporturile de membran la testul cu membrane filtratoare.
4.Cutie cu filtrele membran
O cutie mic ce conine 25 membrane filtru de diametru 13 mm si porozitate
0.2m,pentru reinerea bacteriilor n timpul testului cu membrane filtratoare.
5.Cutie cu pre-filtre
O cutie mic ce conine 25 de prefiltre de nylon de diametru 13 mm i
porozitate 10 m,menite s rein tot materialul biologic i toate rezidurile biologice
care nu sunt de origine microbian,n timpul testului cu membrane filtratoare.
6.Mini suporturi pentru membrane
Doua suporturi de membrane de diametru 13 mm.
7.Penset
O penset de plastic pentru manipularea prefiltrelor i a filtrelor membran.
8.B pentru curare

Un b lung de metal care are ntr-un capt o bucat de burete pentru curarea
compartimentului luminometrului n care se introduc tuburile cu reactivi ATP,n
cazul n care s-a vrsat vreun reactiv.
9.Suporturi pentru tuburile cu reactivi
Dou suporturi de plastic transparent n care se introduc tuburile cu reactivi
ATP nainte de introducerea lor n compartimentul de msurare al luminometrului.
10.Pipet de 1000l
O pipet de 1 ml creia i se va pune un capt de pipet de 1 ml.
11.Pipet de 200l
O pipet de 0.2 ml creia i se va pune un capt de pipet de 200l.
12.Cronometru
Un cronometru mic cu display digital.

V.2.1.1.3. Sensibilitate si specificitate

Msurarea luminescenei ATP-ului este foarte sensibil-fiecare molecul de

ATP produce un foton de lumina i luminometrul portabil semnaleaz prezenei unui
numr foarte sczut de bacterii.(mai puin de 100 bacterii/ml).Aceasta norm de 100
bacterii/ml este folosit n multe ari pentru numru maxim al microbilor nepatogeni
permii n apa potabil.
Msuratorile ATP-ului nu sunt specifice pentru vreun tip particular de bacterie
i, n consecin,nu d nici o indicaie asupra prezenei sau absenei bacteriilor
patogene(coliformi,salmonela).
n schimb,intensitatea luminescenei msurate,d un semnal ultra-rapid pentru
gradul de contaminare al apei cu microbi sau reziduri bilogice,ceea ce permite
imediata luare a deciziilor n ceea ce priveste tratarea apelor luate n discuie.

V.2.1.1.4. Procedura testelor

Analiza n teren nu necesit dect transportul cutiei pentru msurarea

luminescenei i a cutiei cu reactivi pentru determinarea contaminrii bacteriene.
Transferul materialelor din cutia cu reactivi n cutia pentru msurarea
luminescenei se face n teren.Tuburile cu reactivi ATP i capetele de pipet sunt
introduse n gurile din buretele ce captueste cutia pentru msurarea luminescenei.

V.2.1.1.5. Test direct

1.Cu ajutorul pensetei de plastic se rupe i se ndeprteaz n ntregime folia cu care

este acoperit tubul cu reactiv ATP.
2.Se pune unul din cele dou capete de pipet de 200 l i se iau 200l din proba de
ap i se transfer n camera superioar a tubului ce conine un extract ATP lichid.
3.Se amestec proba de ap cu extractul ATP lichid prin absorbia i eliberarea
lichidului cu pipeta de cteva ori.
4.Dup un minut,se absorb 200 l de amestec i se impinge vrful pipetei n
interiorul tubului strpungand partiia ce separa cele dou compartimente.
5.Se golete coninutul pipetei n camera inferioar a tubului n care se afl ATP-ul
solid.Cu acelai capt de pipet se transfer tot coninutul camerei superioare n
camera inferioara a tubului.
6.Tubul cu reactiv se introduce n unul din suporturile transparente de plastic i se
agit uor pentru a se amesteca apa i extractul lichid ATP cu reactivul ATP solid
pn cnd acesta s-a dizolvat complet.
7.Se ia luminometrul si se pornete apsnd butonul Power.
8.Se ateapt pn cand instrumentul se calibreaz singur printr-o numrtoare
invers de 10 minute vizibil pe display,urmat de un semnal sonor.
9.Se deschide capacul luminometrului i se introduce suportul transparent cu tubul cu
reactiv.

10.Se nchide capacul i se ateapt 2 minute,apoi se apasa butonul Enter.

11.Se ateapt din nou pentru o numrtoare inversa de 10 secunde pn cnd este
afiat scorul luminescenei pe ecran.
12.Se ndeprteaz suportul din luminometru i se nchide aparatul apsnd butonul
Power.
A doua prob de ap poate fi analizat n acelai mod utiliznd cel de-al doilea
tub cu reactiv ATP i al doilea capt de pipet.
Dei volumul de ap analizat prin metoda direct este mic(200l),scorul n
RLU nregistrat poate fi ridicat n cazul unei contaminri substaniale cu microbi sau
reziduri biologice.
O estimare a gradului de contaminare bacterian poate fi fcut astfel:

Grad de contaminare bacterian

Interpretare scor RLU

(RLU)
<50 RLU

contaminare foarte slab

<200 RLU

contaminare slab

200-1000 RLU

contaminare semnificativ

>1000 RLU

contaminare puternic

V.2.1.1.6.Testul cu membrane filtratoare

Acest test poate fi aplicat pentru analiza ATP-ului din bacteriile prezente n
ap,dup eliminarea oricrui alt ATP sau a chimicalelor dizolvate care pot interfera
cu reacia de luminescen.Prin testul cu membrane filtratoare sunt reinute bacteriile
pe o mambran filtru de 0.20 m,inaintea extractiei ATP-ului intracelular.

1.Se deurubeaz cele doua pri ale unuia din cele dou suporturi pentru filtre
i se aaz n cele dou guri din buretele ce cptuete cutia pentru msurarea
luminescenei.
2.Cu ajutorul pensetei de plastic se ia un prefiltru din cutiua cu prefiltre de
nylon i se aaz n compartimentul gol al suportului pentru prefiltru,dup care se
nurubeaz strns cele dou pari componente ale suportului.
3.Se procedeaz n acelai mod pentru punerea membranei filtru de 0.2 m n
cel de-al doilea suport pentru filtru.
4.Se conecteaz suportul pentru prefiltru cu cel pentru membrana filtru .
5.Se umple siringa de 10 ml cu volumul prestabilit de ap din prob.
Cantitatea de ap folosit este dependent de doi factori:
a)cantitatea de substane solide din ap,care pot ncrca prefiltul(chiar i dup
filtrarea unui numr mic de ml de ap)
b)gradul de contaminare bacterian a apei.n cazul unor nivele sczute a
bacteriilor din ap,atunci se va trece un volum mai mare de 10 ml ap prin membrana
filtru,pentru a obine un scor n RLU de luat n considerare.
6.Se cupleaz siringa cu suporturile pentru filtre deja conectate,prin
introducerea vrfului siringii n gaura suportului pentru membran.
7.Se descarc coninutul siringii prin cele dou suporturi conectate.
8.Se repet pasul 5 cu volume adiionale de ap dupa caz.
9.Se ndeprteaz siringa de la suporturile conectate i se umple cu aer.
10.Se conecteaz siringa din nou la suporturi i se elibereaza aerul care va trece
prin membrane,eliminnd astfel excesul de ap rmas.
Trecerea apei prin suporturile de membrane are 3 efecte diferite:
a)eliminarea ATP-ului extracelular dizolvat i a chimicalelor dizolvate n proba
de ap care pot interfera cu analiza.
b)reinerea tuturor rezidurilor solide i a biotei nonbacteriene pe prefiltrul de 10
m.

c)reinerea n totalitate a bacteriilor(care trec foarte uor prin prefiltru) pe filtrul

membran de 0.2 m.
11.Cu ajutorul pensetei se desprinde folia ce acoper tubul cu reactiv ATP i se
ndeprteaz n totalitate.
12.Se deconecteaz cele dou suporturi de filtru,se ia filtrul membran din
primul suport cu ajutorul pensetei i se introduce n primul compartiment al tubului
cu reactiv ATP.ntreaga suprafa a membranei trebuie sa fie imersat n reactivul
lichid,pentru a asigura un maxim de contact ntre reactivul ATP i bacteriile reinute
pe membrana filtru.
13.Dup 1 minut,se ndeprteaz membrana filtru din tubul cu reactiv,cu
ajutorul pensetei.
14.Se ataaz capatul de pipet de 200 la pipeta de 200 l i se introduce
captul n camera superioar a tubului cu reactiv.
15.Se amestec extractul ATP lichid pentru omogenizare prin absorbia i
eliberarea lichidului cu pipeta de cteva ori.
16.Dup un minut,se absorb 200 l de amestec i se mpinge vrful pipetei n
interiorul tubului strpungand partiia ce separ cele dou compartimente.
17.Se golete coninutul pipetei n camera inferioar a tubului n care se afl
ATP-ul solid.Cu acelai capt de pipet se transfer tot coninutul camerei superioare
n camera inferioara a tubului.
18.Tubul cu reactiv se introduce n unul din suporturile transparente de plastic
i se agit uor pentru a se amesteca apa i extractul lichid ATP cu reactivul ATP
solid pn cnd acesta s-a dizolvat complet.
19.Se ia luminometrul i se pornete apsnd butonul Power.
20.Se ateapt pn cand instrumentul se calibreaz singur printr-o
numrtoare invers de 10 minute vizibil pe display,urmat de un semnal sonor.
21.Se deschide capacul luminometrului i se introduce suportul transparent cu
tubul cu reactiv.
22.Se nchide capacul i se ateapt 2 minute,apoi se apasa butonul Enter.

23.Se ateapt din nou pentru numrtoarea inversa de 10 secunde pn cnd

este afiat scorul luminescenei pe ecran.
24.Se ndeprteaz suportul din luminometru i se nchide aparatul apsnd
butonul Power.

Evaluarea gradului de contaminare a probelor de ap

Datorit faptului c volumele de ap trecute prin filtre vor diferi de la o prob
de ap la alta,scorul n RLU va fi recalculat la 1 ml de ap prin nprirea scorului
RLU la numrul de ml trecui prin suporturile de filtre.
O estimare a cantitii bacteriilor prezente ntr-un ml de ap analizat poate fi
facut in felul urmator:
Scor RLU/ml ap

Interpretare scor RLU/ml ap

Simbol

<200 RLU

doar cteva bacterii

<1000 RLU

un numr relativ sczut de bacterii

>1000 RLU

un numr semnificativ de bacterii

++

>5000 RLU

contaminare bacterian puternic

+++

>10.000 RLU

contaminare

++++

bacterian

foarte

puternic

V.2.1.1.7.Sterilizare
Dup realizarea testului cu membrane filtratoare,siringa i cele doua suporturi
de membran trebuie decontaminate de bacteriile care pot rmne pe pereii interni ai
acesteia.Decontaminarea este fcut dup fiecare test.
Procedur
1.Se pune unul din cele dou ace la siring.

2.Se introduce acul prin supapa sticlei cu alcool i se aspir 5 ml.

3.innd siringa n poziie vertical,se trage i se mpinge pistonul astfel nct
alcoolul s fie aspitat i eliminat de cteva ori n siringa pentru ca soluia
dezinfectant s intre n contact cu pereii acesteia.
4.Dup un contact de cteva minute,se ndeprteaz acul i siringa se
conecteaza la cele dou suporturi.
5.innd siringa n poziie vertical,alcoolul este mpins foarte ncet prin cele
dou suporturi astfel nct soluia dezinfectant s intre n contact cu pereii acestora.
6.Siringa se deconecteaz i se umple cu aer.
7.Se conecteaz din nou siringa la cele dou suporturi i se mpinge aerul
pentru eliminarea excesului de alcool rmas.
8.Aceste operaiuni sunt repetate cu apa distilat din cea de-a doua sticl,pentru
ndeprtarea oricror urme de alcool ce ar fi putut rmne pe pereii siringii sau a
celor dou suporturi pentru filtre.

V.2.1.2 Determinarea toxicittii utiliznd testul ultrarapid pentru

determinarea toxicittii (Vibrio fishery).

V.2.1.2.1.Principiu

Bioluminescenta natural

produs de anumite bacterii,este afectat de

poluani.Inhibiia respiraiei bacteriilor sub un stres toxic duce automat la scderea

bioluminescenei.Scderea bioluminescenetei n ap este msurat dup o scurt
expunere n timp(de 30min)i e comparat cu scderea luminescenei ntr-un mediu
non-toxic (o ap necontaminat)magnitudinea scderii energiei luminoase n ap
analizat contra apei neconaminate este un indicator pentru gradul de toxicitate al
probei.

V.2.1.2.2. Scop

Acest microbiotest este potrivit pentru o varietate de analize ca:analiza

toxicitii n apele de suprafa,ape de adncime i soluii de reziduuri solide;analiza
de rutin a toxicitii apei potabile,urgene de contamineare a apei in situ ,urmate de
eficiena unor variate tratamente de detoxifiere a ecosistemelor acvatice i terestre.

V.2.1.2.3.Avantajele microbiotestelor

1.Aceste teste se fac pe o singur bioprob pe ape care nu sunt diluate (fr diluii
prealabile)
2.Testele convenionale de inhibiie a bioluminescentei bacteriene se execut n
general n laborator i necesit materiale i echipamente scumpe.
3.Acest test poate fi fcut oricnd s orunde pe teren cu ajutorul cutiilor de dimensiuni
mici care conin reactivii,dar i cu ajutorul cutiei pentru msurarea luminescentei.

4.Modul de lucru este foarte simplu i nu dureaz dect o or.

5.Testul poate fi efectuat la temperatura camerei ntre 15C-25C
6.Aceste teste pot fi efectuate att pe ape dulci ct i pe cele marine sau estuarine.

V.2.1.2.4.Caracteristici

Acest tox-kit conine o cutie cu 10 fiole de bacterii luminoase Vibrio fischeri i

10 cutii care conin tuburi cu reactivi ,fiecare permind probe pe 1 sau 2 mostre de
ap.
Cutia de msurare a luminescenteiconine un luminometru portabil i mai multe
obiective pentru prepararea testelor.De asemenea mai conine i materiale pentru
realizarea testelor pentru contaminare bacterian.
Fiolele cu bacterii luminescente trebuie inute la temperaturi de 18C.Ceilali
reactivi pot fi inui la temperatura camerei.Dac bacteriile i reactivii sunt pstrai n
condiii optime,atunci acestea pot rezista ntre 6 luni i 1 an.

V.2.1.2.5.Continutil kit-ului Tox-screening

Coninutul kit-ului pentru determinarea toxicitii:

1.Cutii cu bacterii luminescente

O cutie mic de carton cu 10 fiole cu Vibro fischeri
2.Cutii cu tuburi cu reactivi
10 cutii mici de carton care conin tuburi cu reactivi gata preparai i 3 capete
pentru pipete cu ajutorul crora se transfer reactivii i probele de ap
3.Fie pentru notarea rezultatelor

10 fie pentru nregistrarea datelor legate de bioluminescena ale probelor de

ap
4. Manualul operaional standard
O broura detaliat cu toate instruciunile i ilustraiile pentru realizarea
microbiotestelor
5. Protocolul de lucru
Este o varianta abreviata a Manualului operational standard
6.Fia de specificatie
O fi n care este specificat numrul de loturi cu fiole ce conin bacteriile
bioluminescente,dar i tuburile cu reactivi.

Coninutul cutiei pentru msurarea luminescenei

1.Luminometru portabil
Este un aparat pentru determinarea luminescenei bazat pe citirea lungimei de
und.Are un display digital pentru citirea direct a scorurilor luminescenei n
RLU,produs de compania Kikkoman.Acesta poate fi conectat printr-un conector AC
la un printer sau la un computer.
2.Guri pentru tuburile cu reactivi ATP
Gurile din buretele ce cptuete cutia pentru msurarea luminescenei menin
tuburile cu reactivi ATP ntr-o poziie vertical.
3.Siring
O siring de 10 ml folosit pentru a filtra volumele de ap prin prefiltru i prin
membranele aflate n suporturile de membran la testul cu membrane filtratoare.
4.Cutie cu filtrele membran
O cutie mic ce conine 25 membrane filtru de diametru 13 mm si porozitate
0.2m,pentru reinerea bacteriilor n timpul testului cu membrane filtratoare.
5.Cutie cu pre-filtre

O cutie mic ce conine 25 de prefiltre de nylon de diametru 13 mm i

porozitate 10 m,menite s rein tot materialul biologic i toate rezidurile biologice
care nu sunt de origine microbian,n timpul testului cu membrane filtratoare.
6.Mini suporturi pentru membrane
Doua suporturi de membrane de diametru 13 mm.
7.Penset
O penset de plastic pentru manipularea prefiltrelor i a filtrelor membran.
8.B pentru curare
Un b lung de metal care are ntr-un capt o bucat de burete pentru curarea
compartimentului luminometrului n care se introduc tuburile cu reactivi ATP,n
cazul n care s-a vrsat vreun reactiv.
9.Suporturi pentru tuburile cu reactivi
Dou suporturi de plastic transparent n care se introduc tuburile cu reactivi
ATP nainte de introducerea lor n compartimentul de msurare al luminometrului.
10.Pipet de 1000l
O pipet de 1 ml creia i se va pune un capt de pipet de 1 ml.
11.Pipet de 200l
O pipet de 0.2 ml creia i se va pune un capt de pipet de 200l.
12.Cronometru
Un cronometru mic cu display digital.

V.2.1.2.7.Sensibilitatea i pragul de detecte

Transformarea n bioluminescena n condiii de stres este chimic dependent i

sensibilitatea testului variaz de la un nivel foarte crescut-pentru multe substane
toxice,la foarte scazut-pentru altele.
Sensibilitatea probei este i mai mult dependent de compoziia chimic a
apei(ex:cantitatea de sruri dizolvate).Ca o regul general ,se pare c,cu ct

conductivitatea i duritatea apei este mai mare,cu att este mai sczut sensibilitatea
probei la substanele chimice toxice.
Este recomandat s se efectueze n paralel cu acest test i o msurare a
conductivitii i/su a duritii apei din probele de analizat.Amndou rezultatele
trebuie luate n considerare pentru c datele obinute s aib un sens.

V.2.1.2.8.Specificitate

Ca orice alt bioprob i acest microbiotest nu d nici o informaie asupra

naturii chimice a substanei toxice prezente n ap ce este analizat,dar,acest test este
o unealt simpl i practic pentru a determina rapid prezena componentelor toxice
n probele de ap n condiii de teren,n urma rezultatelor se pot lua imediat decizii
corespunztoare ce privesc apele cu un uz specific i/su nevoie de tratament.

V.2.1.2.9.Procedur

Aceste teste pot fi fcute pe teren la orice perioad de timp selectat.Un set ce
conine o fiol de bacterii ngheate i o cutie cu tuburi i pipete sunt suficiente pentru 2
probe de ap.Analiza trebuie fcut la cteva ore de la rehidratarea bacteriilor.
Transferul materialelor n cutia pentru msurarea luminescenei

Odat ajuni n teren,se deschide o cutie pentru 2 probe i toate pobiectele se

pun n gurile aflate n buretele ce cptuete cutia pentru msurarea luminescenei.
a)Tubul de control 1 i tubul pentru proba 1 se aaz una lng alta n cele 2 guri de sus.
b)Tubul de control 2 i tubul pentru proba 2 se aaz sub gurile anterioare.
c)Tuburile cu mediul pentru ajustare osmotic se aaz n gaura din stanga n al treilea
rnd.
d)Cele 3 capete pentru pipet se aaz n cele 3 guri mici de sub al treilea rnd.
Rehidratarea bacteriilor ngheate
1.Se pune captul de pipet de 1 ml pentru pipet de 1 ml
2.Cu ajutorul pipetei se transfer coninutul tubului cu mediu de ajustare a osmozei ,n
fiola cu bacterii.
3.Se nchide fiola cu bacterii i se agit ncet coninutul ,iar apoi se pune fiola n spaiul
din cutia pentru msurarea luminescenei.
4.Se selecteaz cronometrul la 30 minute
.
Probele

Analizele pot fi fcute fie n 2 probe separate,sau alternativ,prob poate fi fcut n

duplicat pe o singur prob de ap,pentru a msura preciziei primei msurtori.
1.Se pune al doilea capt de 1 ml la pipeta de 1ml
2.Se ia 1ml de proba de ap cu pipeta(din aceeai ap sau din alt ap din cutie,dup ce am
cltit captul pipetei)i se transfer n tubul prob 2.
Tuburile prob conin deja o cantitate foarte mic de volum de lichid pentru a ajusta
presiunea osmotic a probei de ap aproape de valoarea pentru bacteria Vibrio fischeri.

Transferul bacteriei luminescene n tuburi de prob i n tuburi de control

1.Se pune captul de pipet de 200 l la pipet de 200 l.
2.Dup o rehidratare de 30 minute,se agit fiola cu bacteria i se transfer 200l de
suspensie bacterian n 2 tuburi de prob i n 2 tuburi de control.
Tuburile de control conin deja volumul potrivit de ap non-toxic deja ajustat la
presiunea osmotic pentru bacterie.
3.Se nchid tuburile,se amestec coninutul i se pun tuburile napoi n gurile respective
ale cutiei pentru msurarea luminescenei.
4.Se seteaz cronometrul la 30 minute.

Msurarea la timpul t0

1.Se ia luminometrul i se aprinde prin apsarea butonului power.Se ateapt 10

secunde pn cnd aparatul se calibreaz singur.
2.Se ndeprteaz capacul de la tubul prob 1 i tubul control 1 i se pune fiecare tub
strns n unul dintre cei 2 supori inclui n cutia pentru msurarea luminescenei
3,Se deschide capacul luminometrului i se nsereaz tubul control 1 n lca.
4.Se nchide luminometrul.
5.Se aps butonul enter al luminometrului i se ateapt 10 sec,pentru a vedea scorul
pentru luminescen ce apare pe ecran.
6.Se noteaz scorul pentru luminescen (n RLU) pe foaia de rezultate.
7.Se scoate tubul cu suport din luminometru.
8.Se separ tubul de suport,se pune capacul la loc i se pune tubul la loc n cutia pentru
msurarea luminescenei.
Cnd un tub e inut mai mult de 30 secunde n luminometru,instrumentul va da semnale
sonore(bip) indicnd c tubul trebuie ndeprtat.
9.Se repet operaia anterioar cu tubul proba1 i se scrie rezultatul.
10.Se fac aceleai operaiuni cu tubul control 2 i cu tubul porba 2.

Msurarea la timpul t30

Dup expunerea bacteriei luminescene timp de 30 minute ,la cele 2 ape de control
i la cele 2 probe de ap,repetai toate operaiunile indicate mai sus pentru msurarea la t 0 ,
pentru a dou serie de msurtori la t30.Toate tuburile trebuiesc agitate din nou naintea
msurtorilor.

V.2.1.2.10.Evaluarea datelor

n timpul celor 30 minute de expunere,intensitatea luminescenei bacteriene va

scdea astfel nct scorul pentru luminescen nregistrat la t30 va fi mai sczut dect cel
pentru t0..n cazul unui stres toxic,descreterea luminescenei n tuburile cu probe de ap
va fi mult mai pronunat dect n ap controlat.
Gradul de stres toxic poate fi calculat ca un raport al magnitudinii scderii
luminescenei n prob de ap ,n opoziie cu cea din ap controlat.Procentajul toxicitii
din prob de ap poate fi calculate cu formul:
% toxicitate = (B/A) x 100,
A- descreterea luminescenei pentru control, A = RLU la t0 - RLU la t30
B-descreterea luminescenei pentru prob, B = RLU la t0 - RLU la t30
Aa cum s-a indicat mai sus,c natur chimic a ambelor substane toxice i
intervenia influenei datorat compoziiei chimice a apei analizate n opoziie cu cea
controlat,va determina detecia pragului i magnitudinii semnalului toxic.
Ca o regul general,probele cu o toxicitate de 20%-25%,semnaleaz clar
procentajul componenelor toxice care ar trebui atrage mai mult atenia.

Testul PHYTOTOXKIT
Testul msoar procentul de germinaie a seminelor, creterea rdcinilor i a
tulpinilor dup cteva zile de expunere a seminelor pentru creterea plantelor prin
contaminarea solului cu ap uzat n comparaie cu solul martor .
Principiul metodei
PHYTOTOXKIT-ul este alctuit dintr-o tvi transparent mprit n dou
compartimente ; n compartimentul de jos al tviei se pune solul cu o compoziie
speciala peste care se adaug apa analizat pn la saturarea solului ; se niveleaz
solul iar deasupra lui se aeaza o hrtie de filtru avnd grij s nu rmna bule de
aer ntre sol i hrtie; seminele plantelor selectate pentru testare sunt aezate la o
distana egala una faa de alta, n partea superioar a compartimentului de jos al
tviei ; se acoper tvia cu capacul special prevzut i se incubeaz la 250 C timp de
minim 3 zile, pentru c depinde de timpul de germinare al seminelor i viteza de
cretere a racinilor .
La sfritul perioadei de incubare tviele vor fi fotografiate cu scanner-ul
pentru calcularea lungimii radacinilor, a tulpinilor i a procentului de germinare a
seminelor, printr-un program special .
Avantajele PHYTOTOXKIT-ului
Prezint multe avantaje la sfritul analizelor de fitotoxicitate :
-instalarea este simpl i rapid ;
-tviele sunt mici i necesit un spaiu de incubare mic ;
- tviele transparente permit observarea direct a seminelor germinate ;

-imaginile tvielor cu seminele germinate sunt stocate ntr-un fiier n calculator

permind amnarea msurtorilor ;
-lungimile rdcinilor se determin rapid i automat utiliznd imaginile ;
-pot fi instalate mai multe teste .
Caracteristici
Acest test este foarte flexibil i poate fi fcut cu orice semine de plante i sol test n
comparaie cu un sol martor.
Pentru PHYTOTOXKIT-ul standard au fost alese trei specii de plante cu o germinare
rapid a seminelor i creterea rdcinilor, ce pot fi analizate dup doar 3 zile de
incubare :
-Sorghum saccharatum-sorgul
-Lepidium sativum-salata
-Sinapis alba-mutarul
Microbiotestul PHYTOTOXKIT analizeaz dou tipuri de efecte ale solului test n
comparaie cu un sol martor : ncetinirea germinrii i a creterii rdcinii, respectiv
a tulpinii (n concordan cu standardul ISO 11269-1 ,,Determinarea efectului de
poluare n flora din sol-Partea I, Metoda de msurare a inhibiiei n creterea
rdcinii).
Solul martor este analog cu solul artificial recomandat de OECD pentru testul de
toxicitate cu sol ce conine nevertebrate, nisip, caolin, turb i pH-ul ajustat cu
CaCO3. Singurul echipament necesar pentru performana testelor este un incubator
sau o temperatura a camerei de 250 C i un scanner pentru a nregistra imaginile

plantelor test pentru a le introduce n calculator. Msurarea lungimii rdcinilor i

tulpinilor plantelor germinate se poate face cu orice program de analiza a imaginilor.
Materiale necesare :
-tvie test transparente din PVC, mprite n dou compartimente i care prezint
margini rectangulare ce ajut la acoperirea tviei cu capacul printr-un mecanism
simplu ;
-hrtie de filtru ;
-cutii de carton folosite pentru aezarea n poziie vertical a tvielor atunci cnd
sunt incubate ;
-pungue cu sol de referin (fiecare conine 90 cm3) ;
-3 tuburi cu semine ;
-3 foi de rezultate ;
-pahar din polipropilen, gradat (100 ml) ;
-sering (10 ml) ;
-pistil sferic ;
-pistil lat ;
-spatul ;
-penset de plastic (pentru aezarea seminelor pe hrtia de filtru).
Mod de lucru:
1. se ia o pung cu sol de referin i una cu solul test (90 cm3) i se vars
coninutul n compartimentul de jos al tviei ;

2. cu o sering se iau cte 10 ml de ap distilat pentru solul martor i 10 ml de

ap uzat pentru solul test ;
3. seringa se ine n poziie vertical i se stropete ncet ntreaga suprafa de
sol ;
4. ateptm cteva momente pentru ca solul s fie n totalitate hidratat ;
5. cu ajutorul unei spatule , se ntinde solul umed pe ntreaga suprafa a
compartimentului pn cnd vom obine un strat uniform (fig.1) ;
6. se aeaz o hrtie de filtru deasupra solului hidratat (martor i test) i se las
un moment pn cnd hrtia de filtru este complet umed ;
7. pe hrtia de filtru se aeaz cte 10 semine ale unei plante test, la o distana
egal una fa de alta n partea de sus a compartimentului cu sol (martor i
test) ;
8. se acoper tvia cu capacul special prevzut i se verific dac nchiderea
este etan ;
se eticheteaz tviele specificndu-se pe etichet tipul de sol, tipul de
smn(fig.2) ;
9. tviele se aeaz n poziie vertical ntr-o cutie de carton i se incubeaz la o
temperatura de 250C timp de 3 zile ;
N.B. :se repet toate aceste operaii de trei ori pentru toate speciile de plante
testate ; iluminarea nu joaca un rol important n germinarea seminelor sau pentru
creterea rdcinilor i tulpinilor n timpul scurt de incubare i deci, este indicat s
nu se asigure iluminarea incubatorului n timpul testului.

10.

nregistrarea imaginilor plantelor germinate cu scanner-ul presupune

urmtoarele etape :
1.tviele se aeaz cu faa n jos pe suprafaa scanner-ului ;
2.se nchide clapa scanner-ului i se nregistreaz imaginea tviei cu
programul ,,Image Tools care este obinut o dat cu achiziionarea testului ;
3.se d fiierului un nume (cu extensia JPEG) i se stocheaza n directorul
selectat.
Dup prelucrarea imaginilor

cu ajutorul programului ,,Image Tools se

completeaz foaia de rezultate pentru fiecare specie de plant .

Foaia de rezultate
A.GERMINAREA SEMINELOR

Solul de referin

Nr. de semine germinate

Test 1 :
Test 2 :
Test 3 :
Media (A):

Solul testat

Nr. de semine germinate

Test 1 :
Test 2 :
Test 3 :
Media(B) :

Procentul de inhibare al seminelor n solul testat :

A-B/Ax100= %

B.CRETEREA RDCINII
Solul de referin

Lungimea rdcinii (mm)

Test 1 :
Test 2 :
Test 3 :
Media (A):

Solul testat

Lungimea rdcinii (mm)

Test 1 :
Test 2 :
Test 3 :
Media(B) :

Procentul de inhibiie a creterii rdcinii n solul testat : A-B/Ax100= %

C. CRETEREA TULPINII

Solul de referin

Lungimea tulpinii (mm)

Test 1 :
Test 2 :
Test 3 :
Media (A):

Solul testat

Lungimea tulpinii (mm)

Test 1 :
Test 2 :
Test 3 :
Media(B) :

Procentul de inhibiie a creterii tulpinii n solul testat : A-B/Ax100= %