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protena RecA promove reparao do material gentico de duas formas: por recombinao, com
troca das fitas, e por induo dos genes SOS.
REPARO SUJEITO A ERRO
Existem ocasies em que o dano no DNA to extremo que no h como os mecanismos
celulares de reparo corrigirem de forma precisa a molcula. Nesses casos, a clula utiliza como
ltimo recurso o sistema de reparo sujeito a erro, no qual qualquer uma das quatro bases
inserida no local lesado, a fim de garantir a continuidade do processo de replicao. Devido ao fato
de no haver a informao precisa (molde), o prprio mecanismo de reparo acaba sendo o
causador de uma mutao, pois a chance de introduzir uma base incorreta na cadeia grande. De
qualquer forma, para a clula prefervel incorporar uma base incorreta e permitir que a replicao
continue, do que no replicar mais. Na E. coli, esse sistema de reparao envolve dois genes
principais: umuC e umuD. Esses genes so tambm genes SOS e, portanto, seus produtos esto
em abundncia somente aps a clula ter o sistema SOS ativado. Devido a isso, a protena RecA
tambm necessria no sistema de reparo sujeito a erro, a fim de comandar a induo dos genes
umuC e umuD.
REPARO POR UNIO DE EXTREMIDADES NO-HOMLOGAS
Quebras nas duas fitas de uma mesma molcula de DNA ocorrem nas clulas em diversas
circunstncias e constituem uma das principais ameaas integridade do genoma. Se no forem
reparadas, podem causar a morte celular e, em organismos multicelulares, podem causar o cncer.
Uma grande variedade de agentes exgenos, incluindo a radiao ionizante e um nmero
considervel de quimioterpicos (como a bleomicina), causam essas quebras, bem como agentes
endgenos, a exemplo dos radicais livres. O principal mecanismo de reparao dessas quebras
duplas, que ocorre comumente em mamferos, chamado de unio de extremidades nohomlogas. Neste mecanismo, as extremidades de uma molcula de DNA, apesar de terem
perdido alguns nucleotdeos por degradao espontnea, so justapostas para recombinar. O
mesmo complexo enzimtico realiza o processo de ligao entre as duas extremidades. Desta
forma, a seqncia original de DNA acaba sendo alterada.
REPARO POR UNIO DE EXTREMIDADES HOMLOGAS
O segundo mecanismo reparador de quebras na dupla-fita a unio de extremidades
homlogas. O processo bem mais comum em bactrias e leveduras, e tambm mais preciso.
Por este mecanismo, o cromossomo homlogo quele lesado faz uma cpia da seqncia de
nucleotdeos perdida com quebra da dupla-fita e transfere esta seqncia para o stio de quebra no
cromossomo lesado; este cromossomo lesado, ento, tem sua seqncia original restaurada.
MUTAO E REPARO
Entre os seres humanos aproximadamente 99,9% da seqncia do DNA nuclear igual.
Assim, este 0,01% que difere no DNA nuclear o responsvel pela variabilidade gentica. Esta
variabilidade tanto pode ser normal, quanto pode provocar srios problemas ao seu portador. Neste
ltimo caso, temos as mutaes.
Define-se por mutao qualquer alterao herdvel e permanente na seqncia do
DNA genmico, que no pode ser explicada por processos de recombinao e que pode resultar
em perda ou ganho de funes pela clula. As mutaes podem ser classificadas em trs
categorias, conforme a sua origem: genmicas, cromossmicas e gnicas.
MUTAES GENMICAS: Causadas pela m segregao de um par cromossmico durante a
meiose, resultando em uma alterao no nmero de cromossomos na clula. So as mais
freqentes em seres humanos. Como exemplo temos as aneuploidias.
MUTAES CROMOSSMICAS: Ocorrem com bem menos freqncia do que as genmicas.
Comumente so vistas nas clulas tumorais. Alteram a estrutura de cromossomos individuais.
As translocaes e as inverses so exemplos deste tipo de mutao. Tanto as mutaes
genmicas como as cromossmicas raramente so perpetuadas de uma gerao para a
seguinte, pois, em geral, so incompatveis com a sobrevida ou com a reproduo normal.
MUTAES GNICAS: Podem se originar por um de dois mecanismos bsicos: erros
introduzidos durante o processo normal de replicao do DNA ou mutaes que surgiram
por falha no reparo de danos ao DNA. Resultam em alteraes em genes individuais. Variam
de apenas um nico nucleotdeo a mudanas que podem afetar milhares de pares de bases.
Mutaes podem ocorrer em quaisquer clulas do corpo. Quando ocorrem em clulas
germinativas, podero ser transmitidas para os descendentes. Quando acontecem em
clulas somticas, no podero ser transmitidas para as geraes futuras e podem gerar
alguma forma de mosaicismo somtico, visto em vrios tipos de cncer.
MUTAES GNICAS
As mutaes gnicas podem se originar de dois mecanismos: erros durante o processo de
replicao do DNA ou por falhas durante o reparo de danos no DNA. Podem ainda ser
espontneas ou induzidas por mutgenos (agentes fsicos ou qumicos).
Existem trs tipos clssicos de mutaes gnicas. So eles:
Mutao de ponto: uma nica mudana de par de bases de nucleotdeos no DNA.
Deleo de bases: deleo de um ou vrios pares de bases do DNA.
Insero de bases: adio de um ou vrios pares de bases do DNA.
1) MUTAO DE PONTO
Uma nica mudana de par de bases de nucleotdeos no DNA, sem alterar o nmero de pares
de bases. Podem ocorrer em qualquer parte do genoma, mas conforme a regio produz um efeito
especfico:
Regies codificadoras: Aqui as trocas de bases podem ou no trocar o aminocido, ou
ainda, criar um cdon de parada.
Silenciosas/sinnimas: Trocam a base, mas no o AA. Em geral, na terceira base do
cdon.
Silenciosas/neutras: Trocam a base e o AA, mas esse no afeta a funo. Exemplo:
isoenzimas.
Com sentido trocado: Troca a base e o AA. Em geral, na primeira e na segunda base do
cdon.
Sem sentido: A troca da base gera um cdon de parada (UAA, UAG, UGA).
EM STIOS DE SPLICING: Aqui, pode gerar um mRNA com a falta parcial ou total de um xon
em particular, e assim codificar uma protena mutante.
EM SEQNCIAS REGULATRIAS (PROMOTORES, ENHANCERS) OU GENES DE
FATORES DE TRANSCRIO.
Aqui podem aumentar ou reduzir a expresso gnica.
2 e 3) DELEES E INSERES: Quando de bases individuais, provocam o deslocamento do
mdulo de leitura (frameshift mutation). Se a insero/deleo for de 3 bases ou de mltiplos de 3,
ser menos perigosa do que a de bases individuais. Isso porque ser a insero/deleo de um ou
mais cdons, e poder no alterar o mdulo de leitura antigo. Dessa forma teremos um AA a mais
ou um AA a menos. Assim como as mutaes de ponto, delees e inseres em stio de splicing e
em regies regulatrias podem alterar completamente estes processos. As mutaes causadas por
expanses repetidas de trinucleotdeos (CAG, CTG, CGG ou GAA) encontradas ao longo do
genoma humano so responsveis por vrias doenas genticas humanas. Como exemplo temos a
Sndrome do X Frgil. Certas seqncias de nucleotdeos so especialmente susceptveis a
mutaes. Essas so denominadas de Pontos Quentes de mutao (hot spots). O exemplo
mais bem conhecido a seqncia de duas bases (dinucleotdeo) CG. Ao lado de guanina em
repeties CG, a citosina facilmente metilada, sofrendo desaminao espontnea
freqentemente, a qual converte a citosina em uracila. Mais de 30% das substituies de um s
nucleotdeo so deste tipo, e sua taxa de ocorrncia 25 vezes maior do que qualquer outra
mutao de um nico nucleotdeo. Com que freqncia ocorrem mutaes espontneas? Ao nvel
do nucleotdeo, a taxa de mutao normalmente estimada em cerca de 10-9 por par de bases por
diviso celular, considerando que 3 bilhes de pares de base devem ser replicados em cada diviso
celular. Essa estimativa representa as mutaes que escaparam ao processo de reparo. Ao nvel
de gene, a taxa de mutao muito varivel, oscilando de 10-4 a 10-7 por locus por diviso celular.
Esta variao devida variao no tamanho dos genes (genes grandes geralmente tm
maior probabilidade de sofrer mutaes do que os genes pequenos) e aos pontos quentes
de mutao (especialmente de dinucleotdeos CG metilados). Corrigir os erros no DNA,
causados pelas mutaes, a funo do que chamamos de Reparo. Para que isso acontea,
algumas dezenas de enzimas esto envolvidas no processo. Elas trabalham coletivamente
reconhecendo uma base alterada, removendo-a ao contar o filamento do DNA. Estima-se que
esses mecanismos de reparo corrijam 99,9% dos erros iniciais. O reparo do DNA tambm corrige
quebras bifilamentares no DNA e remove nucleotdeos danificados. Alguns exemplos de reparo:
Erros na replicao so corrigidos pela prpria DNA polimerase.
Desaminao da citosina a uracila corrigida pela uracila-DNA-glicosidase.
Alquilinao da guanina, corrigida pela O6-metilguaniana-metiltransferase.
Depurinao corrigida por AP endonucleases.
Reparo por exciso de bases ou de nucleotdeos.
MUTAO GNICA
Mutao uma alterao sbita e herdvel na estrutura do material gentico. Esta alterao
pode levar a uma mudana correspondente no fentipo do indivduo.
As mutaes so fontes extremamente importantes de variabilidade gentica nas populaes,
pois fornecem novas informaes genticas. A recombinao mistura de genes paternos
durante a meiose por meio de crossing over , que outra fonte de variabilidade, apenas
rearranja informaes genticas j existentes em novas combinaes.
Sem a mutao, todos os genes ocorreriam apenas em uma forma, pois no existiriam alelos.
Portanto, os organismos no seriam capazes de evoluir e adaptar-se s mudanas ambientais.
Tradicionalmente, as mutaes envolvem alteraes na molcula de DNA, podendo ocasionar
mudanas no fentipo. No entanto, as alteraes cromossmicas numricas e estruturais
tambm podem induzir alteraes fenotpicas herdveis.
Simplificadamente, uma mutao gnica ocorre em decorrncia de substituies em pares
de bases. Tais substituies originam mutaes pontuais. Como conseqncia da substituio de
um par de bases, a seqncia de aminocidos de uma protena pode ser alterada. Caso essa
mudana altere a atividade bioqumica da protena, poder interferir no fentipo. Esse o caso da
hemoglobina na anemia falciforme e da insulina na diabete, em que um aminocido da protena foi
trocado devido substituio de um par de bases de um gene. Alm disso, a substituio do par de
bases pode mudar o cdon original para um cdon finalizador, resultando em trmino precoce da
sntese de uma protena.
Sempre que bases forem adicionadas ou deletadas, ocorre uma mudana de matriz de
leitura, alterando a composio dos aminocidos de toda a protena. Por outro lado, devido
redundncia do cdigo gentico, nem todas as alteraes de pares de bases levam a um
aminocido alterado na protena. Logo, quando as mutaes no promovem efeitos no fentipo
so chamadas de mutaes silenciosas. Elas podem ser identificadas atravs da comparao
de seqncias de pares de bases entre genes normais e mutantes.