PROYECTO DE DOCENCIA

La microbiologa basada en evidencias: un enfoque desde el

aprendizaje basado en problema
M en C. Beatriz A. Rodas Junco y M. en M. Mnica M. Galicia Jimnez

MEDIDA DE CRECIMIENTO DE UNA POBLACIN MICROBIANA

Introduccin
El crecimiento bacteriano se define como un aumento en el nmero de
clulas, en otras palabras, se refiere al crecimiento en poblacin y no al
crecimiento en tamao. Existen diferentes mtodos para medir el crecimiento
bacteriano, en esta practica solo nos enfocaremos a dos tcnicas Recuento
directo del nmero de clulas al microscopio y Medida de la turbidez del cultivo.
Objetivo
1. Compara las ventajas y desventajas de las tcnicas de cuantificacin
directa e indirecta de microorganismos.
2. Realizar una curva de crecimiento de cada tcnica y extrapolar el nmero
de clulas con los valores de D.O.
3. Calcular el tiempo de generacin del organismo bacteriano.
Para ello recordemos que el tiempo de generacin (g) es: el tiempo requerido para
que una clula se divida dando lugar a dos clulas. Si consideramos que entre el
tiempo inicial (t0) y otro final (tf), han transcurrido n generaciones, entonces:
g = tf-to/n
donde n es el nmero de generaciones, y viene dado por los ciclos de divisin
ocurridos en la poblacin en un tiempo dado.
inculo

1 clula

20

primera divisin
Segunda divisin
Tercera divisin
n divisiones

2 clulas
4 clulas
8 clulas
n clulas

21
22
23
2n

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Por tanto el nmero de clulas final (Nf) ser

Nf= nmero de clulas x 2n
A partir de esta frmula obtendremos n y podremos sustituirla en g = tf-to/n
n= log Nf N0 / log 2
Material de laboratorio
Espectrofotmetro
4 Celdas para espectrofotmetro
Parrilla de agitacin
4 Matraces de 2500 ml con 100 ml LB
4 Agitadores magntico estril
10 tubos con 8 ml de agua destilada + 1 ml de
glicerol y una gota de azul de metileno
1 Microscopio compuesto.
1 Cmara de Neubauer
1 Mechero
1 Campana de extraccin.
Preinculo del microorganismo
Pinzas de diseccin
1 vaso precipitado de 250 ml
Alcohol
Azul de metileno
Glicerol
Vortex
Actividad Practica
En el matraz de 250 ml colocaremos el preinoculo. Mediremos por ambos
mtodos para observar el nmero inicial de clulas. Y seguiremos las mediciones
cada hora durante 11 hrs. y en alguno de estos puntos haremos diluciones para
realizar las mediciones.
Tcnica del turbidimtrica
1. Homogenizar

la

muestra

cuidadosamente

agitando

el

matraz

inmediatamente tomar una muestra de 1 ml con una pipeta estril y vaciarla

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a una celda de espectrofotmetro a una absorbancia de 600 nm. Esta

muestra corresponder al tiempo cero (t=0). No olvidar utilizar siempre una
celda control (mismo cultivo estril sin inocular)
2. Se proceder a colocar el matraz en agitacin (parrilla de agitacin con un
agitador magntico estril)
3. De la misma manera se repetir el paso 1 y 2 cada hora, y al siguiente da
tomar dos medidas ms.
Tcnica de cuenta directa en cmara de Neubauer.
1. Lavar cuidadosamente la cmara de Neubauer sin frotar la zona brillante
del centro. Secar con papel suave. Homogenizar la muestra perfectamente
en un vortex, tomar inmediatamente una muestra con una pipeta Pasteur
de punto fino y depositar una gota entre la cmara y el cubreobjeto por el
borde de la cmara. Dejar que la muestra se distribuya por capilaridad.
Colocar el cubreobjeto sobre la zona central limitada por dos excavaciones
laterales, donde se aprecian una zona cuadriculada a simple vista.
2. Dejar reposar durante 5 min. Colocar la cmara en la platina del
microscopio y localizar la zona cuadriculada con el objetivo 10X.
3. Localizar el cuadro central grande (C1) que miden 1.0 mm por lado, que se
encuentra dividido en 25 cuadros pequeos (C2) limitados por triple lnea
que miden 0.2 mm por lado. Estos cuadros pequeos a su vez se
encuentran divididos en 16 cuadros ms pequeos (C3) de 0.05 mm de
lado.
1.0mm la cuantificacin de clulas con el objetivo 40X contando el nmero
4. Hacer

de clulas que hay en el ultimo cuadro (C3). Se cuentan solo las clulas
que toquen la parte superior y el lado derecho del cuadro, para evitar
C1
contar doblemente una clula. Ver ejemplo.
Nmero de clulas
C2

0.2 mm

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C3

C3

87

48

54

Cuantas clulas hay en el C3?

87+48+54=189 /3 (# de cuadros contados) = 63
(63)(16 cuadros de C3)(25 cuadros de C2)(0.1 mm de la profundidad x 10 4) = # de
clulas/ml
En caso de dilucin
(63)(16 cuadros de C3)(25 cuadros de C2)(0.1 mm de la profundidad x 10 4)(10n el
factor de dilucin) = # de clulas/ml
Resultados.

Reportar los resultados de la cuantificacin de los cultivos, aplicando las

tcnicas descritas.

Indicar los clculos hechos para cada metodologa.

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Graficar la curva de crecimiento de ambas tcnicas. Y extrapolar valores.

Calcular el tiempo de generacin.

Tiempo

Turbidez (D.O)

Cmara de Neubauer

de

(# clulas totales/ml)

muestreo
Matraz A

Matraz B

Matraz C

Matraz A

Matraz B

Matraz C

8:00 am
9:00 am
10:00 am
11:00 am
12:00 am
13:00am
14:00 am
15:00 am
16:00 am
17:00 am
18:00 am

Suposiciones. De lo que hiciste con tu experimento, realiza una lista de suposiciones

el porque te dio ese resultado.
Conclusiones. Realiza una lista de conclusiones y analiza cuales de las suposiciones
que escribiste en el prrafo anterior estn de acuerdo con la lista de conclusiones.

ANEXO I
Rbrica: Reporte de resultados
CATEGORIA

10-9

8-7

6-4

3-0

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Componentes del
reporte

aprendizaje
basado
en problema
Todos
los elementos
requeridos
Un elemento requerido est
Varios elementos requeridos
estn
presentes.
omitido,
pero
elementos
han sido omitidos.
M en C. Beatriz A. Rodas Junco y M. en M. Mnica M. Galicia Jimnez
adicionales que aaden al reporte
(por ejemplo, comentarios
Todos los elementos requeridos estn
atentos, grficas) han sido
presentes y elementos adicionales que
incluidos.
aaden al reporte (por ejemplo,
comentarios atentos y grficas) han
sido incluidos.

Dibujos / diagramas

Se incluye diagramas claros y

Se incluye diagramas que estn
Se incluye diagramas y stos
precisos que facilitan la comprensin etiquetados de una manera ordenada estn etiquetados.
del experimento. Los diagramas estn y precisa.
etiquetados de una manera ordenada y
precisa.

Faltan diagramas importantes o

faltan etiquetas importantes.

Conceptos cientficos

El reporte representa un preciso y

minucioso entendimiento de los
conceptos cientficos esenciales en el
laboratorio.

El reporte representa un preciso

entendimiento de la mayora de los
conceptos cientficos esenciales en
el laboratorio.

El reporte ilustra un
entendimiento limitado de los
conceptos cientficos esenciales
en el laboratorio.

El reporte representa un
entendimiento incorrecto de los
conceptos cientficos esenciales
en el laboratorio.

Fuentes de antecedentes Varias fuentes de antecedentes de

renombre son usados y citados
correctamente. El material es
traducido en las propias palabras de
los estudiantes.

Unas pocas fuentes de antecedentes

de renombre son usadas y citadas
correctamente. El material es
traducido por los estudiantes en sus
propias palabras.

Unas pocas fuentes de

antecedentes son usadas y citadas
correctamente, pero algunas
fuentes no son de renombre. El
material es traducido por los
estudiantes en sus propias
palabras.

El material es directamente
copiado en lugar de ponerlo en
palabras propias y/o las fuentes
de antecedentes estn citadas
incorrectamente.

Datos

Una representacin profesional y

precisa de los datos en tablas y/o
grficas. Las grficas y las tablas
estn etiquetadas y tituladas.

Una representacin precisa de los

Una representacin precisa de los Los datos no son demostrados
datos en tablas y/o grficas. Las
datos en forma escrita.
o no son precisos.
grficas y tablas estn etiquetadas y
tituladas.

Apariencia/organizacin

El reporte de laboratorio est

mecanografiado y usa ttulos y
subttulos para organizar visualmente
el material.

El reporte de laboratorio est escrito

a mano con esmero y usa ttulos
para organizar visualmente el
material.

Ortografa, puntuacin Uno o pocos errores de ortografa,

Dos tres errores de ortografa,
y gramtica
puntuacin y gramtica en el reporte. puntuacin y gramtica en el
reporte.

El reporte de laboratorio est

escrito o mecanografiado con
esmero, pero el formato no ayuda
a organizar visualmente el
material.

El reporte de laboratorio est

escrito a mano y se ve
descuidado y con tachones,
mltiples borrones y/o
desgarres y pliegues.

Cuatro errores de ortografa,

puntuacin y gramtica en el
reporte.

Ms de 4 errores de ortografa,
puntuacin y gramtica en el
reporte.

RUBRICA: PROCEDIMIENTO EN EL LABORATORIO

CATEGORIA

10-9

La adquisicin de la El alumno conoce la informacin del

informacin sobre el procedimiento en forma suficiente y
procedimiento.
relevante le permite saber qu y
cundo hacer uso de l, as como
saber en que condiciones usarlo y qu

8-7

6-4

3-0

El alumno conoce la informacin

del procedimiento en forma
suficiente el cul le permite saber
qu y cundo hacer uso de l, pero
le cuesta trabajo saber en que

El alumno conoce la informacin

del procedimiento en forma
insuficiente que le permita saber
qu y cundo hacer uso de l, no
le permite saber en que

El alumno no conoce la
informacin del procedimiento
en forma suficiente. Espera a
que sus compaeros realicen la
actividad por el.

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La microbiologa basada en evidencias: un enfoque desde el
aprendizaje
en problema
condiciones
usarlobasado
y qu decisiones
condiciones usarlo
tomar.
tomar.
M en C. Beatriz A. Rodas Junco y M. en M. Mnicadecisiones
M. Galiciadebe
Jimnez

qu

decisiones tomar.

El sentido otorgado al El alumnos es capaz de valorar su El alumnos es capaz de valorar su El alumnos no es capaz de valorar El alumnos no es capaz de
procedimiento.
actuacin al ejecutarlo, dndole un actuacin al ejecutarlo, pero no le su actuacin al ejecutarlo, pero se valorar su actuacin al
sentido.
da un sentido.
las ingenia para darle un sentido. ejecutarlo, dndole un sentido.

El uso o conocimiento El alumno sabe cmo ejecutar y logra

y
el
grado
de un dominio apropiado de las acciones
comprensin de los que lo componen.
pasos involucrados en
el procedimiento.

El alumno sabe cmo ejecutar, pero

le falta practica para lograr un
dominio apropiado de las acciones
que lo componen.

El alumno no sabe cmo ejecutar

y pero se fija en sus compaeros
y logra un dominio apropiado de
las acciones que lo componen.

El alumno no sabe cmo

ejecutar y no logra un dominio
apropiado de las acciones que
lo componen.