AO DE LA

CONSOLIDACION
ECONOMICA Y SOCIAL EN
EL
PERU
UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

Facultad Ingeniera
Industrial Escuela de Ing.
Agroindustrial
Laboratorio N 4
TEMA

Efectos del pH sobre la glucosa

Oxidasa

CURSO

Bioqumica

PROFESOR

Jorge Bermejo

INTEGRANTES

Ipanaque Flores Christian Ren

Jacinto Arvalo Frany Daro
Dvila Crdova Carlos

PIURA, JULIO DE 2010

PRACTICA N 04
EFECTOS DEL pH SOBRE LA GLUCOSA OXIDASA
I.
OBJETIVOS:
El objetivo de la presente prctica es demostrar el efecto del pH sobre la
glucosa oxidasa.
II.

FUNDAMENTO TEORICO:

Para cada enzima existe un ptimo de pH en el que se crean las condiciones

ms favorables para el mantenimiento de la conformacin funcionalmente
activa de la molcula. Los grupos amino y carboxilo de los restos de
aminocidos ionizados a una magnitud de pH determinada, participan en el
mantenimiento de la conformacin de la molcula proteinica necesaria para la
confrontacin de los centros catalticos de la enzima y favorecen tambin a su
legacin con el sustrato. A magnitud de pH distinta se altera la ionizacion de
los grupos correspondientes, y como resultados se rompen los enlaces que
aseguran la formacin de los centros catalticos, y la enzima se inactiva. A los
valores del pH muy altos o muy bajos las enzimas se desnaturalizan.
La intensidad mxima de la actividad de la enzima, ocurre en el pH ptimo, con
rpida disminucin de la actividad a cada lado de este valor de pH. La actividad
ptima generalmente se observa entre los valores de 5 y 9.
El pH ptimo de una enzima puede guardar relacin con cierta carga elctrica
de la superficie, o con condiciones optimas para la fijacin de la enzima a su
sustrato. Cuando hay un exceso de iones hidrogeno, las enzimas los unen a
sus molculas y ante un dficit los ceden.
Este cambio tiene una doble consecuencia sobre la molcula. Como todas las
protenas, las enzimas desempean su funcin por los residuos de
aminocidos; algunos confieren a su superficie una distribucin de cargas
elctricas.
Cuando la concentracin de iones hidrogeno es muy baja en comparacin con
la concentracin optima, la molcula los cede desapareciendo cargas positivas
o apareciendo cargas negativas en su superficie. Ante una concentracin
elevada de iones hidrogeno, algunos se fijan a la molcula desapareciendo
cargas (-) o poniendo cargas (+) que no existan.
As mismo al cambiar las cargas elctricas en los residuos de aminocidos se
alteran los lazos de unin dentro de la molcula variando su acomodo
tridimensional con recuperacin de la actividad de la enzima.
Qu es la absorbancia en bioqumica y para que se utiliza?

Las sustancias disueltas en agua la vuelven "turbia", si no es a longitudes de

onda visibles, s a otras propias de las sustancias biolgicas, como protenas,
DNA, etctera.
A concentraciones micromolares o milimolares, tpicas de las protenas, hay
una relacin directa entre lo concentrada que est la sustancia y la luz que deja
pasar a travs de la disolucin.
Por tanto, un mtodo indirecto de calcular la concentracin de dicha sustancia
en disolucin es medir su absorbancia mediante un espectrofotmetro.
De la radiacin incidente, una parte queda absorbida y el resto se "transmite"
(pasa sin alteracin a travs de la muestra de disolucin).
La absorbancia es simplemente el cociente entre radiacin absorbida y
radiacin incidente.
Con una calibracin correcta, por ejemplo, concentraciones conocidas de una
protena, se puede obtener medidas de absorbancia a determinada longitud de
onda (aproximadamente 250 nm). As se consigue un patrn, y cuando se
presenta una protena problema o "incgnita", puede deducirse en qu
concentracin se halla en la muestra a partir de la medicin de la absorbancia
en el espectrofotmetro.
Un espectrofotmetro es un instrumento usado en la fsica ptica que sirve
para medir, en funcin de la longitud de onda, la relacin entre valores de una
misma magnitud fotomtrica relativos a dos haces de radiaciones. Tambin es
utilizado en los laboratorios de qumica para la cuantificacin de sustancias y
microorganismos.
Hay varios tipos de espectrofotmetros, puede ser de absorcin atmica o
espectrofotmetro de masa.
Este instrumento tiene la capacidad de proyectar un haz de luz monocromtica
a travs de una muestra y medir la cantidad de luz que es absorbida por dicha
muestra. Esto le permite al operador realizar dos funciones:
1. Dar informacin sobre la naturaleza de la sustancia en la muestra
2. Indicar indirectamente que cantidad de la sustancia que nos interesa est
presente en la muestra.
III.

MATERIALES:

Materiales que debe traer el alumno:

Agua destilada
Reactivos y material biolgico:
-

Agua destilada
Glucosa oxidasa

Glucosa 100 mg/ dl

HCl 0.01M

NaOH 0.01M

IV.

PROCEDIMIENTO:

Reactivo de trabajo (RT).

1
1 ml.

2
1 ml

3
1 ml

Agregar HCl 0.01 M

0.1 ml.

----

---

Agregar NaOH 0.01 M

----

0.1ml.

---

Homogenizar

Agregar glucosa (ul)

10

10

10

Incubar a 37 C / 10 minutos

LECTURA: utilizar longitud de onda de 505 nm.

V.

RESULTADOS:

Concentracin de glucosa = F x Absorbancia del tubo problema

(Glucosa) = F x Absorbancia del tubo problema
F = [Glucosa]/ absorbancia estndar
Absorbancia estndar = 0.175
F = 100 mg/dl / 0.175 = 571.428 mg/dl

Primera prueba

Reactivo de trabajo (RT).

1
1 ml.

Agregar HCl 0.01 M

0.1 ml.

Agregar NaOH 0.01 M

----

Homogenizar

Agregar glucosa (ul)

10

Incubar a 37 C / 10 minutos

Resultados segn los datos encontrados por cada grupo encargado de

realizar la prueba.
Grupo 06:

absorbancia = 0.175

(Glucosa) = 571.428 mg/dl * 0.175 = 99.9999 mg/dl

Grupo 09:

absorbancia = 0.175

(Glucosa) = 571.428 mg/dl * 0.175 = 99.9999 mg/dl

Segunda prueba

Reactivo de trabajo (RT).

2
1 ml

Agregar HCl 0.01 M

----

Agregar NaOH 0.01 M

0.1ml.

Homogenizar

Agregar glucosa (ul)

10

Incubar a 37 C / 10 minutos

Resultados segn los datos encontrados por cada grupo encargado de

realizar la prueba.
Grupo 07:

absorbancia = 0.13

(Glucosa) = 571.428 mg/dl * 0.13 = 74.285 mg/dl

Grupo 10:

absorbancia = 0.13

(Glucosa) = 571.428 mg/dl * 0.13 = 74.285 mg/dl

Tercera prueba

Reactivo de trabajo (RT).

3
1 ml

Agregar HCl 0.01 M

---

Agregar NaOH 0.01 M

---

Homogenizar

Agregar glucosa (ul)

10

Incubar a 37 C / 10 minutos

Resultados segn los datos encontrados por cada grupo encargado de

realizar la prueba.
Grupo 08:

absorbancia = 0.145

(Glucosa) = 571.428 mg/dl * 0.145 = 82.857 mg/dl

Grupo 08:

VI.

absorbancia estndar= 0.175

CONCLUSIONES

Al finalizar la prctica llegue a la conclusin que el factor humano influye

mucho en los resultados de las pruebas de laboratorio (distraccin, falta
de seriedad, etc.). Sabemos que en todo anlisis cientfico hay un cierto
margen de error, que ninguna medida es exacta sin embargo tenemos
que minimizar estos errores al mximo. Por ejemplo si tres grupos
analizan una misma muestra deben llegar a resultados similares aunque
no iguales sin embargo esto no se dio en el laboratorio.

La intensidad mxima de la actividad de la enzima, ocurre en el pH

ptimo, con rpida disminucin de la actividad a cada lado de este valor

de pH. La actividad ptima generalmente se observa entre los valores de

5 y 9.

En la tercera prueba la enzima (glucosa oxidasa) trabaja a un pH optimo

es por tal razn que la concentracin de glucosa es mayor.

BIBLIOGRAFIA

Bioqumica ilustrada de HARPER edicin 17ava

http://es.wikipedia.org/wiki/Espectrofot%C3%B3metro
http://es.answers.yahoo.com/question/index?
qid=20071109144555AAN6WPr
http://html.rincondelvago.com/efecto-del-ph-y-de-la-temperatura-sobrela-actividad-de-la-transaminasa.html