REV.ARG.PROD.ANIM.

VOL 23 N 3-4 (2003)

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TRABAJO ORIGINAL
BIOQUMICA CLNICA EN MEDICINA VETERINARIA: CRITERIOS
A TENER EN CUENTA EN EL LABORATORIO
Clinical Biochemestry in Veterinary Medicine: Criteria to be taken
into account in the laboratory
CSEH1, S.B.

Estacin Experimental Agropecuaria Balcarce

Instituto Nacional de Tecnologa Agropecuaria (INTA)

RESUMEN
La Bioqumica Clnica representa una herramienta importante en las investigaciones que
conducen al diagnstico de las enfermedades de los animales domsticos. Puede ser definida
como un conjunto de determinaciones que se emplean para efectuar un diagnstico, un
pronstico y una evaluacin de una enfermedad. El presente trabajo tiene como objetivo sealar
algunos criterios generales a tener en cuenta por el mdico veterinario cuando utiliza los anlisis
clnicos en su laboratorio como instrumento de diagnstico. As se debern considerar los
criterios de calidad segn el usuario y el laboratorio. Para el laboratorio se debern tener en
cuenta: sensibilidad, exactitud, precisin, confiabilidad, especificidad, rapidez, simplicidad,
practicidad y costos. Tambin se considerarn distintos niveles de control de calidad. Todas estas
acciones estarn dirigidas a efectuar anlisis clnicos de calidad y confiables apuntando a lograr
la excelencia en el diagnstico.
Palabras clave: Bioqumica Clnica, Medicina Veterinaria, diagnstico, control de calidad.

SUMMARY
Clinical biochemistry is an important tool in investigations leading to the diagnosis of diseases in
domestic animals. It can be defined as a set of determinations used to further a diagnosis, a
prognosis and an evaluation of a disease. The aim of the present work is to point out some
general criteria veterinarians should keep in mind when using clinical analysis as an instrument
for diagnosis. Thus, quality criteria according to user and laboratory should be considered.
Sensitivity, accuracy, precision, reliability, specificity, rapidity, simplicity, practicality and costs
should be considered as laboratory quality criteria. The different levels of quality control should
also be taken into account. All these actions should be directed towards a clinical analysis of
good quality, that is reliable and that could produce a diagnosis of optimum quality.
Key words: Clinical Biochemistry, Veterinary Medicine, diagnostic, quality control.

Recibido: 13 de marzo de 2003

Aceptado: 18 de diciembre de 2003
1. Lic. Bioq. D.E.A. en Fisiologa Animal. Area de Investigacin en Produccin Animal, Estacin Experimental Agropecuaria
Balcarce, INTA. C.C. 276 (7620) Balcarce, Provincia de Buenos Aires, Repblica Argentina.

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Cseh, S.B.

INTRODUCCIN
El proceso de diagnstico ha sido descripto como un proyecto de investigacin cientfico puesto que involucra la obtencin de datos,
su anlisis, la postulacin de hiptesis y su
comprobacin (Schwabe, 1982).
Es as que la Bioqumica Clnica se ha
constitudo en una herramienta importante en
las investigaciones que conducen al diagnstico
de las enfermedades de los animales domsticos (Philipov, 1996; Pechov, Illek y Halouzka,
1997; Asmare, Kovac, Reichel y Scurokova,
1999; Schultze, Rohrbach, Fribuorg, Waller y
Oliver, 1999). En la actualidad, el empleo de
los anlisis de laboratorio se ha transformado
en un recurso de uso corriente para el mdico
veterinario, en particular en el dominio de la
Bioqumica (Geishauser, Leslie, Duffield y Edge,
1997; Braun, Barros, Lefevre, Ouedraogo,
Kessabi, Hamliri y Bezille, 1998). Este hecho
ha sido posible gracias a la factibilidad de los
laboratorios de acceder a materiales como
reactivos, equipamiento y accesorios de buena
calidad y con costos relativamente aceptables.
(Sutherland, 1985; Cebra, Garry y Adams,
1996 ).
Este desarrollo en la Bioqumica Clnica,
traduce por una parte la preocupacin del
mdico veterinario para llegar a un correcto
diagnstico de las enfermedades de los animales domsticos y por otro lado la necesidad de
aumentar los niveles de produccin en los
establecimientos pecuarios.
DEFINICIN DE LA BIOQUMICA CLNICA CLASIFICACIN
La Bioqumica Clnica comprende un
conjunto de determinaciones qumicas que se
emplean para realizar un diagnstico, un
pronstico y una evaluacin (Levinson y
McFate, 1972).
Diagnstico es la parte de la Medicina
Veterinaria que tiene por objeto la identificacin y caracterizacin de una enfermedad o
un sndrome. Se incluye tambin al trmino

pronstico puesto que la Bioqumica Clnica

permite la deteccin precoz de una enfermedad, antes de su aparicin o el agravamiento de
los sntomas clnicos y, finalmente, se habla de
evaluacin puesto que tambin permite
establecer la evolucin de un caso y apreciar el
resultado de un tratamiento o una medida
profilctica implementada (Brugre-Picoux y
Brugre, 1987).
El objetivo de la Bioqumica Clnica es
detectar normalidad o anormalidad en los
constituyentes del organismo.
La finalidad es permitir la interpretacin
de las modificaciones bioqumicas observadas
durante las distintas patologas para realizar un
diagnstico acertado.
Los anlisis clnicos se pueden clasificar
de acuerdo a sus niveles de complejidad en :
Anlisis de rutina, son los que se solicitan
habitualmente, son los ms comunes y se
realizan a modo orientativo y exploratorio.
Ejemplo: hematocrito, protenas sricas totales,
albmina.
Anlisis especiales, son aquellos que
se realizan cuando se presume una patologa
determinada. Ejemplo: minerales en sangre,
enzimas hepticas.
Anlisis especializados, son los que
requieren tcnicas, metodologa e instrumental
complejo. Ejemplo: dosaje de hormonas, vitaminas.
CONCEPTO DE CALIDAD
Las determinaciones qumicas que se
realizan en el laboratorio, siempre, deben ser
de calidad y por lo tanto deben estar sujetas a
sistemas de control de calidad, (Norma
Argentina, IRAM 301, ISO/IEC 17025). Si bien
el trmino calidad puede ser considerado como
subjetivo y no cuantificable, esto no es as. El
concepto de calidad de un resultado puede ser
definido desde dos posiciones diferentes. Por
un lado la del cliente o destinatario del anlisis
y por otro lado la del laboratorio que realiza el
anlisis (Hanlon, 1996).

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La buena calidad para el cliente es un

juicio que se emite cuando el resultado del
producto (en este caso, un anlisis realizado)
supera las exigencias. El juicio del cliente se
basa en su percepcin del Servicio ofrecido y
un laboratorio tendr buena reputacin cuando
la calidad de los resultados sea ptima y cumpla con las expectativas del cliente (Stewart,
1989; Gammtico, 2001).
Para el laboratorio, el concepto de calidad es diferente y mucho ms riguroso e involucra determinados requisitos que deben cumplir
los anlisis qumicos que efecta. Esos requerimientos; objetivos y cuantificables; son expresados en trminos de: sensibilidad, exactitud,
precisin, confiabilidad, especificidad,
rapidez, simplicidad, practicidad y costos
aceptables en la ejecucin de los anlisis
(Kaneko, 1989; Corneluis, 1992; Fallavier,
Llimous, Breysse y Cazavieille, 1996; Lequin,
2000).
Se define como sensibilidad a la capacidad de detectar la mnima concentracin de
una sustancia presente en una muestra. As,
una metodologa ser ms sensible, cuanto
ms pequea sea la cantidad de una sustancia
que logre detectar. A menor cantidad de una
sustancia detectada, mayor sensibilidad tendr
la metodologa empleada.
Exactitud es el grado de concordancia
entre el valor obtenido por procedimiento analtico y el valor verdadero. Es, por lo tanto, la
capacidad de un mtodo para obtener el valor
verdadero o real. Pero como en la prctica
se desconoce el valor verdadero se recurre al
concepto de precisin. La misma es una
medida del grado de variabilidad asociado con
un resultado analtico obtenido. Se la determina
por repeticin de una medicin a partir de una
misma muestra, siguiendo todos los pasos
desde la preparacin de la muestra hasta el
resultado final. Cuantas ms veces se repita un
resultado y ms cercanos entre s sean los
valores obtenidos, ms precisa ser la metodologa empleada y ms se acercar el resultado
final al valor real o verdadero. La precisin
es la cualidad ms importante en la Bioqumica

Clnica (Galyean, 1994).

Otra de las caractersticas que deben
tener los anlisis es la confiabilidad. Los
resultados que se obtienen de una misma
muestra para ser confiables, deben tener repetitividad y reproducibilidad a lo largo del tiempo.
Cuando una misma muestra es repetida en el
tiempo y los resultados que se obtienen son los
mismos, los anlisis sern confiables.
La especificidad se refiere a la capacidad de dosar el metabolito que se desea con
exclusin de otros elementos. Uno de los mejores ejemplos de especificidad es la determinacin de una actividad enzimtica, tcnica que
se considera altamente especfica.
Rapidez, simplicidad y practicidad son
caractersticas a considerar puesto que frecuentemente se trabaja con materiales fcilmente
alterables y la variabilidad del resultado de los
anlisis que se realiza, muchas veces depende
de la rapidez con que la muestra es procesada.
Por otra parte, la eficiencia en el diagnstico
ser mayor cuanto ms simple y prctica sea la
metodologa a emplear, ya que a menor grado
de manipulacin qumica y cantidad de material
y reactivos a emplear habr menor probabilidad
de cometer errores.
Finalmente, los anlisis debern tener
costos aceptables de manera que resulten
accesibles para el profesional que los realiza y
para el cliente que los demanda.
NIVELES DE CONTROL DE CALIDAD
En la prctica, a pesar de tomarse todos
los recaudos necesarios, se pueden cometer
numerosos errores involuntarios en el curso de
los dosajes bioqumicos. Estos errores pueden
pasar inadvertidos, si no se establecen sistemas de control de calidad internos, los
cuales tienen por objetivo detectar errores y
hacer ms confiables los resultados del laboratorio. En la medida en que el analista sea
conciente de que puede cometer errores y
establezca sistemas de autocontrol, sus resultados sern cada vez de mayor calidad y ms
confiables.

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Para asegurar la calidad de los resultados que se emiten en un laboratorio de Bioqumica Clnica deben considerarse tres niveles
de control de calidad (Lucero, 1996; Houba,
Novazamsky y Van Der Lee, 1996, Oficina
Internacional de Epizotias, 1999; Zambrano
Achiria, 2000).
El primer nivel de control de calidad
se dirige al control de los errores que pueden
estar ligados a: a) las muestras, b) el material, c) los reactivos, d) los equipos de medicin y e) al operador (Paik y Levine, 1997).
a) Error ligado a la muestra
La muestra es la parte ms importante
de la cadena analtica.
En los anlisis de sangre, pueden presentarse errores cuando se procesan muestras
de:
pSuero y/o plasma lechosos, debido al exceso
de lpidos. Este tipo de muestra no puede utilizarse en espectrofotometra. Por
lo tanto no es conveniente tomar muestras de un animal que ha comido recientemente (Alleman, 1990; Jacobs Humsden y Grift, 1992; GT Lab. Avance,
1996).
pMuestras hemolizadas. La hemoglobina puede
interferir porque modifica la concentracin plasmtica de ciertas sustancias que
estn presentes en cantidades mayores
en el eritrocito que en el plasma (potasio,
zinc, fsforo, aspartato amino transferasa). Las causas ms comunes de hemlisis son: exceso de anticoagulantes,
puncin mltiple de la vena, presencia de
agua en el material de recoleccin, excesiva agitacin del tubo de extraccin,
centrifugacin a velocidades muy elevadas, separacin tarda del plasma/suero
del culot de glbulos rojos. (Alleman,
1990; Jacobs, y otros, 1992; GT Lab.
Avance, 1996).

Cseh, S.B.

pCuando el anticoagulante no es compatible

con el dosaje a realizar por ejemplo:
empleo de fluoruro de sodio para un
dosaje enzimtico, de oxalatos para
cuantificar calcio y magnesio, heparina
para dosar cidos grasos libres (Roussel
y Whitneey, 1997).
pPresencia de ciertos medicamentos suministrados al animal. Por ejemplo el valor de
la albmina puede alterarse ante la
presencia de salicilatos o ampicilina.
(Gene y Mouthon, 1987; GT Lav. Avance, 1996).
pPresencia en las muestras de sustratos fisiolgicos en cantidades patolgicamente
superiores a los valores usuales, y que
pueden modificar los resultados de las
sustancias a dosar. Este es el caso de
las protenas plasmticas totales cuando
varan ms all del intervalo de (50-100
g/l) ya que alteran el dosaje de glucosa
por mtodo enzimtico (Jacobs, y otros,
1992).
pOtro ejemplo lo constituye la bilirrubina cuando est en exceso, debido a que su
absorcin ptica mxima est en alrededor de 500 nm. Por lo tanto todas aqullas sustancias cuyos dosajes se realicen
en longitudes de onda de este orden,
sufrirn interferencias, como ocurre en el
caso de la glucosa y protenas plasmticas (Gene y Mouthon, 1987; Jacobs y
col., 1992; GT Lab. Avance, 1996).
b) Material
Su rol es primordial, en particular, si el
mtodo empleado necesita de mucho material
de laboratorio.
La limpieza del mismo es de fundamental
importancia en el rea de Bioqumica Clnica.
Material engrasado, mal enjuagado, con restos
de detergente o mojado, conduce a errores.

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Para evitar la contaminacin qumica del

material de vidrio, el mismo debe ser lavado
con detergentes especiales y en el caso de ser
destinado al dosaje de oligo y macroelementos,
deber ser colocado 24 a 48 horas en cido
ntrico al 3% y finalmente enjuagado con abundante agua destilada. Luego se secar bien en
estufa.
El material de vidrio de mayor precisin
y calibrado, como por ejemplo pipetas y matraces aforados se deber secar a temperatura
ambiente para evitar el fenmeno de histresis
que altera la precisin del material.

en la misma. Ejemplo: preparacin de

soluciones con ditiol o con cido ascrbico. En oportunidades, para evitar la
accin de la luz, se proceder a utilizar
frascos de color caramelo para preservar
a los reactivos.

c) Reactivos
pConstituyen una fuente de error cuando
estn contaminados, vencidos o si su
conservacin no se realiza en condiciones satisfactorias (Levinson y McFate,
1972; Gene y Mouthon, 1987; Oficina
Internacional Epizotias, 1999).
pLa temperatura de almacenaje de los reactivos debe ser tenida en cuenta ya que
una buena parte de los mismos deben
ser conservados entre + 4 y + 8 C.
pUn aspecto importante a tener en cuenta es
el etiquetado e identificacin de los
reactivos. Se deber colocar al frasco
que lo contiene una etiqueta con el
nombre del reactivo, su concentracin y
fecha de preparacin.
pOtros deben ser preparados extemporneamente. Ejemplo: soluciones glucosadas,
reactivos enzimticos.
pCuando se introduce una pipeta en un frasco
de reactivos, es necesario asegurarse
que la misma no est contaminada.
Tambin se debe evitar reintroducir en el
frasco una cantidad de reactivo que no
se ha utilizado.
pLa oxidacin de los reactivos puede atentar
contra su conservacin. Por lo tanto es
conveniente cerrar los frascos inmediatamente luego de usados y, si se conservan en heladera colocarlos rpidamente

pLas soluciones estndares, destinadas a

realizar curvas de calibracin debern
merecer un especial cuidado, puesto que
su calidad condiciona directamente los
resultados obtenidos.
d) Equipos de Medicin
pEspectrofotmetros, centrfugas, balanzas,
peachmetros, estufas, baos de Mara,
deben ser revisados y controlados peridicamente para evitar que el deterioro de
los mismos afecte la calidad de los resultados que emite el laboratorio.
pAs, por ejemplo, las fuentes luminosas y las
clulas fotodetectoras de los espectrofotmetros se agotan con el uso, disminuyendo la sensibilidad del equipo.
pLas estufas y los baos de Mara pueden
descalibrarse, y una variacin de algunos
grados en la temperatura puede tener
graves repercusiones, en particular en
enzimologa.
pLos rotores de centrfugas pueden sufrir desgaste y desequilibrarse, pudiendo esto
conducir a la prdida de las muestras
por ruptura de tubos.
e) Operador
pCuanto mayor sea la experiencia del operador, menor ser la probabilidad de que
cometa errores durante el manipuleo del
material y la ejecucin de las tcnicas
operativas, y ms confiable ser el resultado a obtener.
pLos errores involuntarios ms comunes ocurren en las operaciones de pipeteado,
pesadas, enrasado de pipetas y matra-

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ces, uso de pipetas automticas, control

de tiempos de incubacin y lectura de
reacciones enzimticas, diluciones y
clculos.
La segunda lnea o nivel de control en
el laboratorio se refiere al empleo de:
a) Blancos de reactivos
b) Soluciones estndares/curvas de
calibracin
c) Duplicaciones de las muestras
d) Sueros controles
e) Testigos internos
a) Blanco de reactivos
Un blanco de reactivo es una muestra
que contiene todos los reactivos que intervienen
en una reaccin qumica con excepcin de la
muestra desconocida, la cual es reemplazada
por agua o solucin fisiolgica. Su funcin es
controlar la calidad de los reactivos de trabajo
y detectar en caso que los hubiere, contaminacin y/o alteracin de los mismos (Levinson y
McFate, 1972; Henry, Donald, y Winkelman.,
1974).
b) Soluciones estndares/curvas de calibracin
Son soluciones de concentraciones
conocidas preparadas con sustancias de muy
buena calidad qumica (p.a.) que pueden comprarse en el comercio o prepararse en el laboratorio. Como su concentracin se conoce bien,
son utilizadas como testigo o referencia para
determinar la concentracin del metabolito en
estudio que es, en este caso, desconocido.
Con las soluciones estndares o patrones
correspondientes, se pueden construir curvas
de calibracin para cada analito en particular.
Para ello se aplica la ley de Lambert-Beer la
cual establece que A = k.C; donde A es la
absorbancia que se lee en un espectrofotmetro, k es una constante propia de cada sustancia, y C la concentracin del analito a medir. Se
considera por lo tanto, que la absorbancia de

una sustancia es directamente proporcional a

su concentracin, en el rango lineal de la
curva.( Henry y otros, 1974).
Es normal que an cuando se trabaje en
condiciones controladas y estandarizadas, los
valores de los blancos de reactivos, soluciones
patrones y curvas de calibracin presenten
pequeas variaciones en el tiempo. Esto constituye de hecho un sistema de autocontrol intralaboratorio, puesto que la aparicin de una gran
variacin en los parmetros antes citados,
indicar automticamente presencia de error en
el laboratorio (Levinson y McFate, 1972; Paik y
Levine, 1997).
c) Duplicacin de la muestra
Puesto que como ya se indic anteriormente, el valor verdadero de un analito se
desconoce, la incertidumbre al obtenerse un
solo valor o resultado de un anlisis efectuado
es del 100%. Por ello debe trabajarse con
duplicacin de muestras a fin de poder controlar la precisin y acercarse as lo ms posible al
valor real. En la prctica, se considera que una
diferencia del 10% entre duplicados es aceptable. A veces, cuando la tcnica lo requiere,
debido a su gran variabilidad, es necesario
trabajar con triplicados para obtener resultados
confiables. Otros autores recomiendan trabajar
con coeficientes de variacin (CV=DE/media x
100) menores al 5% (Gene y Mouthon, 1987).
d) Sueros control
Los sueros control permiten verificar la
exactitud y precisin de un resultado en relacin
al valor terico de un analito. Su objetivo es
detectar errores sistemticos y aleatorios que
afectan a todos los dosajes.
Existen en el comercio, disponibles para
la compra, sueros de concentraciones conocidas, en rangos normales y patolgicos los
cuales pueden ser utilizados como sistemas de
control y chequeo.
Estos sueros, son fabricados a partir de
sueros de origen animal (bovino esencialmente), an para uso en bioqumica humana, por
razones econmicas. Se ha demostrado que el

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origen de los sueros, no interfiere en la calidad

de los controles para distintas especies.

Los controles se realizan generalmente en

fechas regularmente establecidas y se los
denomina controles puntuales (Van Dijk y
Houba, 1997). Pueden tomar distintas modalidades, ms o menos complejas. Permiten
controlar esencialmente la precisin y exactitud
de las determinaciones qumicas y les ofrece a
los laboratorios que integran esta red, la posibilidad de saber como estn trabajando (Reinauer, 2000).

e) Sueros residuales
Consiste en dosar regularmente uno o
ms parmetros sobre la misma muestra de
suero; la cual puede ser obtenida como un
pool de sueros. En ese pool de sueros que
pasa a ser un suero control residual, se realiza
varias veces (40 50 por ejemplo) la determinacin qumica a contralor. Luego se hace el
promedio con 1 2 DE segn el grado de
precisin con el cual se desee trabajar y el
resultado obtenido es empleado como control.
El resto de la muestra, se fracciona y se
congela. Peridicamente, a los efectos de
realizar un autocontrol, se descongela una
muestra y se la procesa como un suero ms. Si
el resultado que se obtiene cae dentro del
promedio 1 2 DE los resultados se consideran de buena calidad. Sino fuera as, se
descarta la determinacin y se la realiza nuevamente. Este sistema de control, se puede
utilizar para la mayora de las determinaciones
qumicas. Es por otra parte, el sistema ms
fcil de implementar, el ms econmico y, de
hecho, el ms utilizado.
f) Testigos internos
Consiste en realizar los denominados
ensayos de recuperacin. Este mtodo de
control utiliza el agregado de una cantidad
exactamente conocida de una solucin estndar a una muestra de concentracin tambin
conocida. Una vez obtenidos los resultados,
para que los mismos sean aceptables, se
deber recuperar entre el 85 y 110% de la
cantidad de estndar agregado a la muestra.
(Henry y otros, 1974).
El tercer nivel de control lo constituyen
los controles interlaboratorios. Los mismos
agrupan a laboratorios de manera regional o
nacional alrededor de una Sociedad de Biologa, Organismo Oficial o Laboratorio Privado.

CONCLUSIONES
Es importante tener en cuenta y puntualizar, que el objetivo de los diferentes controles
de calidad no es el de emitir un juicio sobre el
laboratorio, ni establecer una clasificacin en el
caso de controles interlaboratorios. El objetivo
final es el de mejorar la calidad y la confiabilidad de los Anlisis Clnicos en el seno mismo
de los laboratorios, apuntando a lograr la excelencia en el diagnstico.
Por otra parte, con el advenimiento de
las normas ISO-17025 para la acreditacin de
los sistemas de calidad en un futuro no muy
lejano, todo laboratorio que aspire a ofrecer un
servicio con competencia profesional, deber
adecuarse a las nuevas normas vigentes.

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