UNIVERSIDAD NACIONAL

JOSE FAUSTINO SANCHEZ CARRION

FACULTAD DE ING. AGRARIAS, INDUSTRIAS ALIMENTARIAS Y

AMBIENTAL

E. A. P.

INGENIERIA AMBIENTAL

TEMA

CURSO

: Anlisis instrumental

DOCENTE

: Salcedo Meza Maximo

CICLO

: V

Cromatografa

Integrantes:
Alexis Avendao Daz
Cadillo Limas Eduardo
Julca Quispe Diana
Justo Naupay Alfredo
Regalado Bazalar Mirtha
Gerrero Buitron Miguel
Leon Chaugua Alison
Macarlupu Chavez Erick

HUACHO 2014

CROMATOGRAFIA
LA CROMATOGRAFIA
La cromatografa es un mtodo fsico de separacin para la caracterizacin de
mezclas complejas, la cual tiene aplicacin en todas las ramas de la ciencia. Es un
conjunto de tcnicas basadas en el principio de retencin selectiva, cuyo objetivo
es separar los distintos componentes de una mezcla, permitiendo identificar y
determinar las cantidades de dichos componentes. Diferencias sutiles en el
coeficiente de particin de los compuestos da como resultado una retencin
diferencial sobre la fase estacionaria y por tanto una separacin efectiva en
funcin de los tiempos de retencin de cada componente de la mezcla.
La cromatografa puede cumplir dos funciones bsicas que no se excluyen
mutuamente:
Separar los componentes de la mezcla, para obtenerlos ms puros y que puedan
ser usados posteriormente (etapa final de muchas sntesis).
Medir la proporcin de los componentes de la mezcla (finalidad analtica). En este
caso, las cantidades de material empleadas son pequeas.
Historia:
El botnico ruso Mijal Tsweet1 (Mikhail Semenovich Tsweet, 1872-1919) emple
por primera vez en 1906 el trmino "cromatografa" (que proviene del griego
y que significan respectivamente chroma "color" y graphos "escribir").
A comienzos del ao 1903, Mijail Tsweet us columnas de adsorcin de lquidos
para separar pigmentos vegetales (por ejemplo, clorofilas). Las disoluciones se
hacan pasar a travs de una columna de vidrio rellena de carbonato de calcio,
que finamente dividido de un material poroso que interacciona de forma diferente
con los componentes de la mezcla, de forma que stos se separaban en distintas
bandas coloreadas a lo largo de la columna.
Los primeros equipos de cromatografa de gases aparecieron en el mercado a
mediados del siglo XX. A su vez, la cromatografa lquida de alta resolucin
(HPLC) comenz a desarrollarse en los aos 1960, aumentando su importancia en
las dcadas siguientes, hasta convertirse en la tcnica cromatogrfica ms
empleada. Sin embargo esto se ir modificando con el paso de los aos.
Clasificacin de los mtodos de separacin en cromatografa:
Las distintas tcnicas cromatogrficas2 se pueden dividir segn cmo est
dispuesta la fase estacionaria:

CROMATOGRAFIA
Cromatografa plana. La fase estacionaria se sita sobre una placa plana o sobre
un papel. Las principales tcnicas son:

Cromatografa en papel
Cromatografa en capa fina

Cromatografa en columna. La fase estacionaria se sita dentro de una columna.

Segn el fluido empleado como fase mvil se distinguen:

Cromatografa de lquidos
Cromatografa de gases
Cromatografa de fluidos supercrticos

La cromatografa de gases incluye a numerosos compuestos orgnicos. En el

caso de compuestos no voltiles se recurre a procesos denominados de
"derivacin", a fin de convertirlos en otros compuestos que se volatilicen en las
condiciones de anlisis.
Dentro de la cromatografa lquida destaca la cromatografa lquida de alta
resolucin (HPLC, del ingls High Performance Liquid Chromatography), que es la
tcnica cromatogrfica ms empleada en la actualidad, normalmente en su
modalidad de fase reversa, en la que la fase estacionaria tiene carcter no polar, y
la fase mvil posee carcter polar (generalmente agua o mezclas con elevada
proporcin de la misma, o de otros disolvente polares, como por ejemplo metanol).
El nombre de "reversa" viene dado porque tradicionalmente la fase estacionaria
estaba compuesta de slice o almina, de carcter polar, y por tanto la fase mvil
era un disolvente orgnico poco polar. Una serie eluotrpica es un rango de
sustancias de diferentes polaridades que actan como fase mvil y que permiten
observar un mejor desplazamiento sobre una fase estacionaria.
Trminos empleados en cromatografa:

Analito es la substancia que se va a separar durante la mensografa.

Cromatografa analtica se emplea para determinar la existencia y
posiblemente tambin la concentracin de un analito en una muestra.
Fase enlazada es una fase estacionaria que se une de forma covalente a
las partculas de soporte o a las paredes internas de la columa.
Cromatograma es el resultado grfico de la cromatografa. En el caso de
separacin ptima, los diferentes picos o manchas del cromatograma se
corresponden a los componentes de la mezcla separada.

CROMATOGRAFIA

Cromatograma con picos no resueltos (separados) Cromatograma con dos picos

resueltos
En el eje X se representa el tiempo de retencin, y en el eje Y una seal (obtenida,
por ejemplo, a partir de un espectrofotmetro, un espectrmetro de masas o
cualquier otro de los diversos detectores) correspondiente a la respuesta creada
por los diferentes analitos existentes en la muestra. En el caso de un sistema
ptimo, la seal es proporcional a la concentracin del analito especfico
separado.

Cromatgrafo es el equipo que permite una separacin sofisticada. Por

ejemplo, un cromatgrafo de gases o un cromatgrafo de lquidos.
Cromatografa es el mtodo fsico de separacin en el cual los
componentes que se van a separar se distribuyen entre dos fases, una de
las cuales es estacionaria (fase estacionaria) mientras la otra (la fase mvil)
se mueve en una direccin definida.
Eluyente es la fase mvil que atraviesa la columna.
Serie eluotrpica es una lista de disolventes clasificados segn su poder
de dilucin.
Fase inmovilizada es una fase estacionaria que est inmovilizada sobre
partculas de soporte, o en la pared interior del tubo contenedor o columna.

Cromatograma correspondiente a una cromatografa liquida en fase

reversa para compuestos fenlicos
Fase mvil es la fase que se mueve en una direccin definida. Puede ser
un lquido (cromatografa de lquidos o CEC). un gas (cromatografa de
gases) o un fluido supercrtico (cromatografa de fluidos supercrticos). La
fase mvil consiste en la muestra que est siendo separada/analizada y el
disolvente, que se mueven por el interior de la columna. En el caso de la
cromatografa lquida de alta resolucin, HPLC, la fase mvil es un

CROMATOGRAFIA
disolvente no-polar como el hexano (fase normal) o bien algn disolvente
polar (cromatografa de fase reversa) y la muestra que va a ser separada..
La fase mvil se mueve a travs de la columna de cromatografa (fase
estacionaria) de forma que la muestra interacciona con la fase estacionaria
y se separa.
Cromatografa preparativa se usa para purificar suficiente cantidad de
sustancia para un uso posterior, ms que para anlisis.
Tiempo de retencin es el tiempo caracterstico que tarda un analito
particular en pasar a travs del sistema (desde la columna de entrada hasta
el detector) bajo las condiciones fijadas. Vase tambin: ndice de retencin
de Kovats
Muestra es la materia que va a ser analizada en la cromatografa. Puede
consistir en un simple componente o una mezcla de varios. Cuando la
mezcla es tratada en el curso del anlisis, la fase o fases que contienen los
analitos de inters es llamada igualmente muestra mientras el resto de
sustancias cuya separacin no resulta de inters es llamada residuo.
Soluto es cada uno de los componentes de la muestra que va a ser
separado.
Disolvente es toda sustancia capaz de solubilizar a otra,y especialmente la
fase lquidamvil en cromatografa de lquidos.
Fase estacionaria es la sustancia que est fija en una posicin en el
procedimiento de la cromatografa. Un ejemplo es la capa de silica en la
cromatografa en capa fina.
De acuerdo con el mecanismo que produce la separacin, se puede hablar
de distintos tipos de cromatografa:
- Cromatografa de reparto. La fase estacionaria suele ser mantenida fija mediante
un soporte inerte poroso (papel o celulosa). La fase mvil suele ser una mezcla de
disolventes medianamente miscibles con el agua. Cuanto ms soluble en agua
sea la sustancia a cromatografiar, ms retenida y retrasada quedar en el
desarrollo cromatogrfico.
- Cromatografa de adsorcin. La fase estacionaria retiene con ms o menos
poder a la sustancias a cromatografiar por un fenmeno de adsorcin en
superficie. Para ello se utiliza almina, gel de slice, etc. La cromatografa de
afinidad es un tipo de cromatografa de adsorcin en la que la fase estacionaria
tiene afinidad biolgica por la sustancia que se quiere separar. Se utilizan as
parejas antgeno-anticuerpo, enzima-inhibidor, etc. En la cromatografa de
intercambio inico, la fase estacionaria retiene a las sustancias por su carga
inica. Las sustancias con carga opuesta a la de la resina quedarn retenidas en
la fase estacionaria, mientras que las de la misma carga que la resina sern

CROMATOGRAFIA
arrastradas por la fase mvil. Las sustancias que quedan unidas a la resina
pueden eluirse cambiando las condiciones de la fase mvil (variando el pH, la
fuerza inica, etc.). Este tipo de cromatografa se hace slo en columna y los
soportes utilizados son polmeros tales como celulosa o poliestireno carboxilados
o poliaminados, etc.
De acuerdo con el soporte fsico sobre el que se realiza la separacin, se
puede hablar de dos tipos de cromatografa:
- Cromatografa en capa fina: la fase estacionaria se extiende sobre una placa.
- Cromatografa en columna: la fase estacionaria se empaqueta en una columna.
Anexos :

CROMATOGRAFIA

Cromatografa en papel

CROMATOGRAFIA

Cromatografa de capa fina

CROMATOGRAFIA

Cromatografa de columna