Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
VOLUME NICO
RIO DE JANEIRO
2009
VOLUME NICO
Tese
apresentada
ao Programa
de
Ps-
Rio de janeiro
Novembro de 2009
ii
iii
iv
AGRADECIMENTOS
Sobretudo a Deus que me deu essa grande oportunidade, nimo e esperana durante os
momentos mais ridos.
Ao professor Lus Carlos Trugo, que em sua extrema serenidade sempre se empenhava em
ajudar seus discpulos da forma mais doce;
minha filha Ana Lusa e ao meu marido Antnio Carlos que sempre me motivaram a
prosseguir na conquista de meus ideais;
minha orientadora professora Cludia Moraes Rezende, por sua generosidade e amizade e
ensinamentos;
minha orientadora Sonia Couri, na verdade uma amiga e incentivadora eterna daqueles que
a cerca;
todos os amigos dos Laboratrios de Aromas e de Produtos Naturais (Pilab), pela presteza
em ajudar e pelo convvio agradvel;
vi
RESUMO
vii
ABSTRACT
The maturity stage and the processing method change the composition of the
coffee endosperm significantly, and reflect on the quality of the roasted coffee beans. In this
study, the effect of harvesting period and type of post-harvest treatment of coffee (Coffea
arabica L., Catuai amarelo) produced on a farm in So Jos do Vale do Rio Preto, state of
Rio de Janeiro, Brazil, were evaluated, regarding the sugars, amino acids, proteins,
chlorogenic acids, total phenolics and trigonelline chemical composition. In addition, the
antioxidant capacity of raw and roasted coffees was evaluated by the DPPH radical
scavenging method. The volatile fraction of the roasted beans was characterized using the
technique HS-SPME-GC-FID/MS, the samples were discriminated using PCA and
correlated with the chemical composition of precursors through the reaction mechanisms
involved. The classification of coffees by the "cup proof" was performed to check the
effects of management types on the sensory evaluation of the drink. Coffees at green stage
(unripe) showed higher chlorogenic acids and total phenolics contents and higher
antioxidant capacity, whereas coffees at cherry (ripe) and bia (overripe) stages showed
higher sugars, proteins and trigonelline content. Among the post-harvest treatments
evaluated, the natural process favored the degradation of mucilage and the incorporation of
low molecular weight compounds in the coffee endosperm, such as amino acids and
reducing sugars. The desmucilage process favored metabolic changes, with loss of low
molecular weight compounds and formation of storage substances, such as non-reducing
sugars, proteins, phenolic compounds and trigonelline. Strong correlations between the
headspace composition and the precursors of phenolic compounds, Maillard and Strecker
reaction products and sugar degradation products, were observed. The "cup proof" classified
the depulped and desmucilated cherry and natural bia coffees as gourmet, the natural
cherry coffee as hard drink and the natural green coffee as soft drink. The presented data
suggest that harvesting the fruit at the ripe stage, associated with pre-drying desmucilage are
important procedures to enrich the chemical composition of raw coffee cherry and the
volatile fraction complexity of the roasted coffee beans, quality requirements for the
improvement of coffee flavor.
Keywords: Coffea arabica, chemical composition, antioxidants, SPME, volatile precursors,
principal component analysis.
viii
LISTA DE FIGURAS
Pgina
3
Figura 1
Figura 2
18
Figura 3
20
Figura 4
23
Figura 5
Teor dos ismeros CQA nas amostras de cafs crus colhidos nos
estdios verde, cereja e bia
36
Figura 6
Teor dos ismeros CQA nas amostras de cafs cereja prprocessadas diferentemente
40
Figura 7
42
Figura 8
46
Figura 9
74
Figura 10
76
Figura 11
80
Figura 12
83
Figura 13
98
Figura 14
99
Figura 15
100
Figura 16
102
ix
compostos identificados
Figura 17
105
Figura 18
108
Figura 19
110
Figura 20
112
Figura 21
116
Figura 22
117
Figura 23
118
Figura 24
120
Figura 25
125
Figura 26
129
LISTA DE TABELAS
Tabela 1
35
Tabela 2
45
Tabela 3
60
Tabela 4
71
Tabela 5
72
Tabela 6
115
Tabela 7
121
Tabela 8
126
Tabela 9
129
xi
AAO
Atividade antioxidante
ATP
Adenosina trifosfato
CG
Cromatografia gasosa
CGA
cidos clorognicos
CLAE
CQA
cido cafeoil-qunico
DAF
DIC
DPPH*
Radical 1,1-difenil-2-picril-hidrazila
EAG
EM
Espectrometria de massas
Flavor
FQA
cido ferruoil-qunico
FRAP
GABA
cido-gama-amino-butrico
HS
IBC
IC50
IRL
Loadings
NAD
OIC
PFO
Polifenoloxidade
pH
Produto hidrognio-inico
PLS-DA
SAFE
Scores
SDE
SPME
TEAC
UVA e UVB
xiii
SUMRIO
Introduo
Reviso bibliogrfica
2.1
O fruto do caf
2.2
2.3
A colheita do fruto
2.4
O pr-processamento do caf
2.5
11
2.6
Classificao do caf
11
2.7
13
Objetivos
15
3.1
Objetivos gerais
15
3.2
Objetivos especficos
15
16
1.1
Reviso da literatura
16
1.2
Materiais e mtodos
28
1.2.1
28
1.2.2
29
1.2.3
30
1.2.4
30
1.3
Resultados e discusso
31
1.3.1
31
1.3.1.1
31
estdios de maturao
1.3.1.2
Teores dos ismeros CQA em cafs crus cereja pr-processados por trs
36
mtodos
1.3.1.3
41
1.3.2
43
1.3.2.1
43
xiv
46
mtodos diferentes
1.3.2.3
47
1.3.2.4
49
52
Reviso da literatura
52
2.2
Materiais e mtodos
55
2.2.1
55
2.3
Resultados e discusso
56
2.3.1
Acares redutores
56
2.3.3
Acares no redutores
59
61
Reviso da literatura
61
3.1.1
61
3.1.2
Trigonelina
64
3.2
Materiais e mtodos
65
3.2.1
65
3.2.2
65
3.2.2
66
3.3
Resultados e discusso
67
3.3.1
67
3.3.2
73
74
77
Reviso da literatura
77
4.1.1
77
4.1.2
Caracterizao
de
constituintes
de
flavor:
extrao,
isolamento,
85
identificao e quantificao
4.1.3
89
4.1.4
93
Materiais e mtodos
96
4.2.1
96
97
4.2.3
97
4.3
Resultados e Discusso
98
4.3.1
98
4.3.2
4.3.3
4.3.3.1
103
4.3.3.2
105
4.3.3.2.1
4.3.3.2.2
4.3.3.3
xvi
torrado
4.3.3.3.1
Discriminao entre cafs por anlise dos componentes principais das reas 119
cromatogrficas dos compostos volteis ps-torra, assistida por HS-SPMECG-DIC/EM
4.3.4.1
119
4.3.4.2
122
4.3.4.3
127
Concluses
135
Referncias bibliogrficas
137
157
xvii
xviii
1. Introduo
1. Reviso bibliogrfica
observao importante para o manejo de qualidade do gro, j que se gasta muita energia para
secar parte do fruto que no ser utilizada.
Figura 1. Corte transversal histolgico de frutos de um caf arbica, colhidos em diferentes dias aps a
florada (DAF), mostrando as importantes fases da maturao: A: ovrio aps a ntese (0-60 DAF)
(x60), mostrando o perisperma (pe) em crescimento, o tegumento (in), o saco embrionrio (se) e as
camadas celulares do futuro pericarpo (p); B: seo transversal do fruto imaturo 90 DAF, mostrando
o endosperma lquido (en), tambm denominado semente verdadeira (se), que cresce ao redor,
absorvendo o perisperma interno (ipe); C: seo transversal do fruto imaturo 120-150 DAF, mostrando
o perisperma externo remanescente (ope), enclausurando o endosperma mais endurecido; D: seo
longitudinal do fruto cereja, 230-240 DAF, mostrando as duas sementes maduras, enclausurando um
embrio cotiledneo maduro (em), dentro do endosperma slido ou isolado; as partes interna (in) e
externa (ex) do mesocarpo esto indicadas. (imagem reimpressa a partir do trabalho de Estanislau,
2002).
Depois de colhido e lavado, o caf pode ser preparado de trs formas: por via seca,
semi-mida ou mida. O preparo de cafs despolpado e desmucilado utiliza, via de regra,
apenas os frutos cereja, colhidos seletivamente ou separados mecanicamente dos frutos
verdes, bia e danificados.
Na forma de preparo por via seca, o fruto seco na sua forma integral (com casca,
polpa, mucilagem, pergaminho e gro), dando origem aos cafs denominados coco, de terreiro
(quando so secos a cu aberto) ou natural. Desta forma, estes cafs requerem um maior
tempo para serem secos quando comparados aos cafs processados por via mida (VILLELA,
2002). Esse tipo de preparo tem sido valorizado na comercializao por originar cafs com
bebidas mais encorpadas (mais slidos solveis totais), doces e com acidez moderada. Essas
caractersticas so atribudas possvel translocao de componentes qumicos da polpa para
os gros de caf, o que ainda foi pouco estudado (PEREIRA et al., 2002, VILLELA, 2002).
Na forma de preparo por via semi-mida, depois de lavados, os cafs so levados aos
despolpadores, mquinas que tm por finalidade principal retirar a casca e o mesocarpo
externo das cerejas (SOBRINHO, 1944, LEITE et al., 1998), e encaminhados secagem com
a mucilagem aderida ao pergaminho, dando origem aos cafs despolpados. Nesta operao
pode ocorrer um afrouxamento progressivo da mucilagem em direo ao exocarpo a partir do
pergaminho, onde, normalmente, est fortemente aderida. As camadas mais externas de
mucilagem muito frouxa podem ser arrastadas mecanicamente. Esse afrouxamento
progressivo da mucilagem do caf parece acompanhar o amadurecimento do fruto.
Aparentemente o desenvolvimento de enzimas pectolticas e da mucilagem, a partir
dos constituintes celulares, se processa gradativamente, enquanto o fruto amadurece. O
despolpador permite a eliminao da parte externa do fruto, que representa 20% do fruto
cereja e contm cerca de 60% da gua que no interessa ao cafeicultor. Portanto, o
despolpamento permite ao cafeicultor secar mais que o dobro do volume de caf, quando
(1963), a protopectina pode passar por uma hidrlise cida, formando cidos pectnicos que,
por sua vez, sofrem a eliminao dos grupos metlicos pela ao da pectinesterase, formando
metanol e pectinas com poucos grupos metlicos, as quais so degradadas pelas
despolimerases, dando cido pctico (poligalacturnico) que, ao serem degradados pela
poligalacturonase, liberam cido D-galacturnico e elementos minerais no-essenciais.
Segundo Amorim e Mello (1991), a mucilagem apresenta algumas enzimas hidrolticas e
oxidativas como pectinesterases, poligalacturonases, agalacturonases, peroxidases e
polifenoloxidases.
Com
isto,
acrescenta-se
credibilidade
hiptese
de
que
os
6 horas. A reduo do perodo de degomagem tambm uma garantia contra a perda de peso
do gro. Perrier (1932) observou que quando a fermentao ultrapassava 12 horas, acarretava
perda de peso de at 8%, devido utilizao de compostos de baixa massa molecular como
substratos de fermentao.
As caractersticas da bebida de caf so influenciadas por modificaes no
endosperma, atribudas a distrbios fisiolgicos e fermentaes, que degradam os acares da
mucilagem dos frutos, formando lcoois ou cidos carboxlicos (KRUG, 1940a, 1940b). O
processo fermentativo pela ao de microrganismos, como bactrias, bolores e leveduras,
deteriora as membranas dos gros (AMORIM, 1977). A continuidade do processo implica em
quebra das paredes e membranas celulares, degradao de camadas celulares e alterao de
compostos qumicos dos gros, resultando em bebidas com sabor e odor desagradveis
(DENTAN, 1988, 1989a, 1989b, 1992; VANOS, 1988).
Entretanto, se o fenmeno
10
11
cascas, paus e pedras) (IBC,1981). A classificao por tipo admite sete tipos de valores de
dois a oito, resultantes da apreciao de uma amostra de 300g de caf beneficiado, segundo as
normas contidas na Tabela Oficial Brasileira de Classificao. A cada tipo corresponde um
maior ou menor nmero de defeitos (BARTHOLO e GUIMARES, 1997; IBC, 1981). A
classificao quanto peneira corresponde ao formato e dimenses dos gros, submetidos
passagem pelos crivos das peneiras oficiais, designadas por nmeros (17-8) os quais,
divididos por 64, fornecem a indicao do tamanho dos furos, expresso em fraes de
polegadas. H peneiras de crivos redondos para a medio de gros chatos e as de crivos
alongados para gros mocas (IBC, 1981). Da passagem de uma amostra de 500g de caf
beneficiado no jogo de peneiras, realiza-se o clculo da distribuio percentual por peneira em
um determinado lote (IBC, 1981). Os lotes com maior granulometria so mais valorizados
pelos compradores. Apesar disso, no necessariamente, influenciam a qualidade sensorial da
bebida. A classificao quanto bebida avalia o gosto e o odor que o caf apresenta durante a
prova de xcara. A classificao oficial sugere as seguintes denominaes para as bebidas
do caf: estritamente mole, que caracteriza cafs com sabores muito suaves e adocicados;
mole, bebida de sabor suave, acentuado e adocicado; apenas mole, sabor suave, porm
com leve adstringncia; dura, bebida com sensao adstringente e spera na boca; riado,
com leve sabor iodofrmio ou cido fnico; rio, com sabor forte e desagradvel, lembrando
iodofrmio ou cido fnico; rio zona, bebida de sabor e odor intolerveis ao paladar e ao
olfato (IBC, 1981). A bebida do caf influenciada pela presena de gros verdes, verdespretos, pretos ou ardidos, ou ainda, pela ocorrncia de fermentaes nos gros, durante a fase
de colheita e pre-processamento.
12
13
14
2. Objetivos do estudo
torra;
diversos gros.
15
anti-aterognicas,
anti-microbianas,
anti-oxidantes,
anti-trombticas,
16
apresentadas na figura 2.
17
Alm da variao no teor de cidos clorognicos totais nos gros de caf maduros,
como dependncia da espcie, a proporo relativa entre as classes tambm varia. Ky et al.
(2001) relataram que
caractersticas teraputicas dos CGA esto cada vez mais extensivamente estudadas e
esclarecidas, alguns pesquisadores recomendam a produo de extratos concentrados de gros
crus de caf principal fonte desta classe de compostos na alimentao humana, que
confeririam propriedades nutracuticas especiais (MADHAVA et al., 2007). Stalmach et al.
(2006) investigaram a atividade oxidante de extratos de caf e observaram que os cidos
clorognicos respondem por 68% e 41%, relativamente aos gros verdes e torrados, da
atividade anti-oxidante total.
Nas ltimas dcadas, tem havido um crescente interesse em esclarecer as rotas
metablicas de sntese e condies de degradao/mobilizao dos CGA, as enzimas e os
cdigos genticos envolvidos A figura 3 sumariza a viso corrente da proposta para a rota
metablica primria fenil-propanide, que leva sntese dos CGA (HOFFMAN et al., 2004).
Contudo, muito h de se avanar na investigao da variao de seu contedo total e das
variaes relativas dos ismeros ao longo do processo evolutivo da planta e da
maturao/desidratao do fruto (LEPELLEY et al., 2007). H consenso quanto diminuio
nos nveis dos CGA com o desenvolvimento do endosperma (MARRACCINIET et al., 2001).
19
20
21
22
Figura 4. Possveis rotas de degradao trmica dos cidos qunico e cafeico (DE MARIA et
al.,1996).
23
24
grande nmero de fenis mais simples ou fenilindanos, pela via do intermedirio vinil-catecol
(STADLER et al., 1996).
A pluralidade de possibilidades de reaes trmicas permite que seja mantida a
atividade antioxidante nos cafs torrados, mas existem controvrsias nos resultados
divulgados quanto ao aumento ou diminuio desta propriedade, que dependente qualiquantitativamente das estruturas formadas. H, ainda, vrios relatos que associam a atividade
antioxidante (AAO) aos compostos heterocclicos de baixa massa molecular da reao de
Maillard, como furanos, piranos e pirris (NICOLI et al., 1997a; FUSTER et al.,2000;
YANAGIMOTO et al., 2002, 2004) aos taninos condensados as melanoidinas (DE
COLMENARES et al., 2006). Em particular, s melanoidinas tem-se atribudo efeitos
fisiolgicos positivos especficos, devido aos seus resduos estruturais como redutonas,
enaminas e pirrolequinas, que podem conferir molcula forte poder seqestrante de espcies
ativas de oxignio, como os radicais hidroxila, peroxila e os superxidos (HAYASE, 1996).
Duarte et al. (2005) compararam os teores dos CQA (principal frao entre os
fenlicos) originais do gro de caf, pr-processado por despolpamento, com os
remanescentes aps a torra e observaram aumentos de 3-CQA (11,8%) e 4-CQA (12,0%) e
diminuio do 5-CQA (-68,1%) em torra leve; diminuio de 3-CQA (-15,1%), de 4-CQA (31,3%) e de 5-CQA (-80,3%), em torra mdia; diminuio de 3-CQA (-58,4%), de 4-CQA (66,7%) e de 5-CQA (-92,1%), em torra severa. No mesmo estudo, os autores constataram
degradao progressiva dos fenlicos totais, conforme o grau de torra evoluiu (em torra mdia
o caf apresentou teor 6,73% menor que a torra leve), mas os gros crus no foram analisados.
A ampla investigao do efeito da torra do caf sobre a AAO e a compreenso da forma
com que os fenlicos se comportam neste mecanismo tm originado interpretaes
controversas como: (i) aumento da AAO para extratos de cafs obtidos por torra mdia e
diminuio para aqueles relativos aos cafs obtidos por torra escura (NICOLI et al., 1997a;
25
NICOLI et al., 1997b; STEINHART et al., 2002; DEL CASTILLO et al., 2002; DUARTE et
al., 2005; CMMERER e KROH, 2006); (ii) diminuio da AAO com a torra leve e aumento
com a torra escura (DAGLIA et al., 2000; ANESE e NICOLI, 2003; WEN et al., 2005); (iii)
aumento progressivo da AAO com o avano da torra (ANESE et al., 2000; GONZALES et
al., 2005); (iv) diminuio progressiva da AAO com o avano da torra (BORRELLI et al.,
2002). Richelle et al. (2001) obtiveram perdas de 22,4%, 43,7% e 54,1% da AAO, em relao
s torras clara, mdia e escura, respectivamente. A discrepncia entre os dados da literatura
pode, em parte, ser devida ao uso de mtodos diferentes na determinao da AAO
(CMMERER e KROH, 2006); e falta de uma definio padro sobre o controle do grau de
torra, que pode ser descrito por mudanas na cor, diminuio da densidade ou perda de massa
(ILLY e VIANI, 1995; EGGERS e PIETSCH, 2001), parmetros passveis de divergncias
em estudos realizados com equipamentos e ambientes diferentes. Entretanto, o principal fator
que dificulta a anlise comparativa dos dados a diversidade de matria de partida (o gro
cru), pois a natureza e concentrao das molculas reagentes variam de acordo com o tipo de
caf e com o conjunto de tcnicas ps-colheita aplicadas (EGGERS e PIETSCH, 2001;
DAGLIA et al., 2004; DEL CASTILLO et al., 2005; LPEZ-GALILEA et al., 2006). Todas
estas dificuldades de padronizao conferem importncia a cada estudo, isoladamente, e
refora a necessidade de homogeneizao de condies de processo e matrias primas.
A busca de correlao entre a AAO, no gro verde e no gro torrado, e os teores de
fenlicos deve resguardar, tambm, a funcionalidade devida aos no fenlicos. Saccketti et al.
(2009) determinaram os teores de compostos fenlicos em gros crus e torrados (em trs
estgios) de cafs arbica e separou as fraes polifenlica (PF) e no polifenlica (NPF) , por
extrao em fase slida apolar (SPE, com C-18), nas quais foram medidas as AAOs. Os
autores verificaram que a AAO relativa aos PF decresceu de 85,7 a 76,4%, no sentido do gro
verde at estgios de torra mais severos, sendo compensada pela AAO relativa aos NPF
26
27
feita para o gro torrado). Foi avaliada, como informao complementar, a atividade
antioxidante (AAO) e as correlaes com os teores de CQA e fenlicos totais. A partir dos
dados foi investigada a efetividade de discriminar as amostras, por estdio de maturao ou
por tipo de pr-processamento, atravs de cada ismero CQA, do total CQA, do teor de
fenlicos totais e da AAO. Alm de avaliar o potencial discriminante destes parmetros, o
estudo se props a agregar informaes literatura numa rea de conhecimento da cincia do
caf, que ainda demanda extensas pesquisas para elucidao dos mecanismos metablicos da
planta ao longo da maturao e as alteraes durante as operaes ps-colheita.
28
aos tratamentos: (ii) remoo mecnica da casca e polpa antes da secagem, gerando o caf
despolpado - processo semi-mido e (iii) retirada da casca e mucilagem, por fermentao
natural pela microbiota endgena, em tanques com excesso de gua por 16 h, e lavagem final
ao final do perodo para retirada do material de fermentao, gerando o caf desmucilado processo via mida. Aps os tratamentos (ii) e (iii) os cafs foram conduzidos aos terreiros
suspensos, envolvidos no pergaminho, e secos por 5 dias. A secagem final ocorreu em forno
lenha at umidade prxima a 12%m/m. Os gros de cafs foram ento descascados (retirada
do pergaminho) e parte de cada batelada foi submetida a torra mdia (155oC/15 min). Os
cafs crus e torrados foram preservados -20oC, em freezer, e modos a cada oportunidade de
anlise.
29
compostos foram quantificados atravs das reas comparativas do padro de 5-CQA (Aldrich
Chem., EUA), por curva de calibrao, e para os outros ismeros foram levados em conta a
rea do padro do 5-CQA e os coeficientes de extino molar de cada um (RUBACK, 1969).
30
caf cru ou torrado modo, em concentrao de 1,0 mg/mL, foram adicionadas a 1,0 mL de
uma soluo metanlica de DPPH 8,6 . 10-5 mol/L. Aps 30 min de reao no escuro foram
medidas as absorbncias e construda curva para interpolao. Os resultados obtidos para 3
replicatas foram expressos como capacidade antioxidante atravs do valor AT50, definido
como a massa de caf verde ou torrado necessria para decrescer a concentrao inicial de
DPPH em 50%.
1.3.1.1. Teores dos ismeros CQA em cafs crus colhidos em diferentes estdios de
maturao e pr-processados por via seca
A anlise das amostras de cafs colhidos em diferentes estdios de maturao (verde,
cereja e bia) mostraram diferenas significativas para os teores de 3-CQA e 5-CQA e para o
somatrio dos teores dos trs ismeros (total CQA), mas no significativa para 4-CQA
(valores na tabela 1 e grficos na figura 5). O caf verde apresentou teor de 5-CQA (ismero
que respondeu, em mdia, por 75,9% do total dos cidos clorognicos estudados) 15,0%
maior que o caf cereja e 10,3% maior que o bia. H indicativos, portanto, de que houve
queda na produo ou mobilizao do 5-CQA para o endosperma no perodo que
correspondeu passagem do estdio verde ao cereja.
A condio de mxima maturao recomendada para a colheita por produzir
bebidas de qualidade superior e mais balanceadas, e a queda dos nveis de cidos clorognicos
pode contribuir para a melhor avaliao, j que este grupo est relacionado ao amargor,
atributo depreciativo quando exacerbado. Pimenta e Vilela (2003), conduzindo estudos com
31
32
colhidos em pano, podendo haver divergncia de resultados se a colheita for realizada por
varrio, permitindo a agregao de material fermentado e fisicamente injuriado.
Quanto ao 4-CQA, o caf verde apresentou teor 25,8% maior que o cereja e no se
diferenciou significativamente do bia, tendo sido observada ainda diferena de 32,3% em
favor bia pela comparao com o cereja. Esse comportamento foi semelhante ao observado
com o 5-CQA, porm mais acentuado com relao elevao no perodo ps-maturao. Este
ismero representou apenas 16,8% do total de CQA, e devido sua baixa expresso
quantitativa, no existem trabalhos de monitoramento, com perfil semelhante ao proposto
neste estudo, que embasem uma justificativa funcional para a variao de seu teor.
O teor dos ismeros CQA dos gros crus dos cafs naturais, objeto deste estudo,
apresentaram alteraes de amplitude suficiente para discrimin-las quanto aos estdios de
maturao, comprovando que a importncia da funo desta classe de compostos varia de
acordo com o estado nutricional do fruto, e como conseqncia, com os requerimentos quanto
aos mecanismos de proteo. O teor total de CQA (somatrio dos ismeros) tambm
diferenciou este grupo de amostras do caf, com decrscimo de 8,45% do estdio verde ao
cereja e posterior aumento de 10,7% at o estdio bia. importante, portanto, que os estudos
desta natureza monitorem, alm do 5-CQA, os ismeros menos representativos em termos
quantitativos, para que seja criado um volume de informaes mais amplo, como base para
discusso.
A presena de gros em estado imaturo ou ps-maduros fator de classificao
inferior ou defeito do caf, pois tendem a acentuar atributos como acidez e adstringncia ou
off-flavor (MAZZAFERA, 1999). Os produtores de cafs especiais esto atentos para o fato
de que a segregao desses tipos de gros importante para agregar valor bebida final.
Contudo, a colheita seletiva do arbica cereja dispendiosa e tecnicamente pouco vivel,
devido disperso, ao longo do tempo do processo de amadurecimento e ao ambiente
33
de amadurecimento.
(STILES,
2001; DE CASTRO e
MARRACCINI, 2006). Como as amostras de caf arbica verde e bia apresentaram maiores
teores de cidos clorognicos, possvel sugerir a destinao destes tipos de frutos prprocessados para a elaborao de bebidas ou extratos funcionais. Cabe ressaltar que somente
foram avaliados frutos sadios, podendo ocorrer resultados diferentes se forem colhidos, em
associao, gros sob injria biolgica ou mecnica. Mazzafera (1999) avaliou o teor do 5CQA em endosperma de frutos verdes, cereja e verde-preto, este ltimo colhido precoce mas
severamente danificado, tendo encontrado o maior teor no gro verde sadio - 17,9% e 61,3
superior em relao ao cereja a o verde-preto, respectivamente. O autor atribuiu o teor
reduzido de 5-CQA no gro danificado necessidade de acesso s mecanismos de proteo,
mediado pelo PFO.
34
4 CQA
5 CQA
Total CQAA
52,1 1,56(a)
3,7 0,61(a)
7,8 0,73(a,c)
40,6 0,234(a)
7,0% (a)
15,3(a)
78,1%(a)
4,2 0,33(a)
6,2 0,84(b)
35,3 0,304(b)
9,2%(b)
13,5%(b)
77,3%(a)
4,1 0,060(a)
7,1 0,44(a,b)
36,1 1,66(b,c)
8,6%(b)
15,1(a)
76,3%(b)
4,9 0,31(b)
8,0 0,45(a,c)
39,4 1,57(a)
9,3%(b)
15,0%(a)
75,3%(b)
bia natural
5,6 0,10(b)
8,2 0,091(c)
36,8 0,622(c)
11%(c)
16,2%(c)
72,7%(c)
verde natural
cereja natural
cereja despolpado
cereja desmucilado
45,7 1,47(b)
47,3 2,16(b)
52,3 2,33(a)
50,6 0,810(a)
Total CQA o somatrio dos 3 ismeros analisados). B Correlao entre teor do CQA e a AAO, como capacidade de seqestro do radical DPPH*
(AT50). Valores expressos como mdia desvio padro de 3 repeties. Valores com pelo menos uma letra minscula diferente, na mesma coluna, para
o mesmo tipo de avaliao, so significativamente diferentes pelo teste de Tukey (p<0,05). Os percentuais (em destaque) abaixo dos valores de teor so
relativos ao total CQA.
35
Figura 5. Teores dos ismeros CQA nas amostras de cafs crus colhidos nos estdios
verde, cereja e bia e pr-processados pelo mtodo natural. Resultados expressos como
mdia desvio padro de 3 repeties. Valores acompanhados de letras diferentes para
a mesma avaliao so significativamente diferentes pelo teste de Tukey (p<0,05).
1.3.1.2. Teores dos ismeros CQA em cafs crus cereja pr-processados por trs mtodos
37
38
abaixo da metade relatados na literatura mais ampla (CARELLI et al., 1974; CLIFFORD,
1985, MONTAVON e BORTLIK, 2004) e aqueles relativos aos gros torrados esto
significativamente superiores frente aos gros crus, o que inconsistente j que cerca de 3252% dos cidos clorognicos so degradados durante a torra (CLIFFORD, 1999).
Atualmente no existe uma metodologia cientfica baseada em variveis mensurveis
para o pr-processamento de cafs despolpados e desmucilados que garantam a obteno de
cafs de qualidade padronizada. Um estudo detalhado do processo de degomagem permitiria o
desenvolvimento de prticas efetivamente cientficas, adequadas a produo de cafs com
caractersticas sensoriais adequadas s necessidades do mercado internacional (LIMA, 2006).
Outro aspecto importante na comparao de resultados entre estudos que proponham
discriminar gros oriundos de tratamentos diferenciados o prprio objeto de estudo - vrios
parmetros influenciam o percentual de perda de massa ou modificaes fsico-qumicas com
a introduo das etapas de despolpamento e desmucilagem. Entre as variveis devero ser
consideradas: a natureza intrnseca semente, as condies de plantio, a idade exata do fruto
no momento da colheita, as condies de despolpa (equipamento, quantidade de gua
utilizada), a temperatura e as condies de secagem.
39
Figura 6. Teor dos ismeros CQA nas amostras de cafs cereja pr-processadas
diferentemente. Resultados expressos como mdia desvio padro de 3 repeties.
Valores acompanhados de letras diferentes para a mesma avaliao so
significativamente diferentes pelo teste de Tukey (p<0,05).
O cruzamento das informaes deste estudo mostrou que, em termos de CQA total, os
maiores teores esto associados aos cafs verde e bia naturais e cereja desmucilado.
possvel sugerir a desmucilagem de cafs colhidos precoce ou tardiamente para aumentar o
teor desta classe de compostos. importante ressaltar que os danos fsicos ativam a PFO, que
atua no sentido de oxidar os CQA; assim devem-se esperar menores teores de CQA se no
forem preservadas as estruturas dos frutos, nas fases pr e ps-colheita.
40
Os gros de cafs crus objeto do atual estudo foram avaliados quanto ao potencial
antioxidante, que foi expresso com massa necessria para provocar 50% de reduo do
reagente DPPH (AT50), em soluo padro. Foram observadas fortes correlaes entre os
teores de 5-CQA e atividade antioxidante (R= 0,9466) e entre CQA total e atividade
antioxidante (R= 0,9743) resultados plenamente esperados j que esta classe de compostos
o fator indutor predominante da atividade antioxidante no caf pr-processado, especialmente
influenciada pelo 5-CQA. A figura 7 ilustra, em biplot, os teores de 5-CQA ou de CQA total e
a AAO. Perrone et al. (2008) constataram forte correlao (R>0,98) entre AAO (medidas
pelos mtodos FRAP, TEAC e TRAP) e contedo de 5-CQA, monitorando o processo de
torra.
Foi observada fraca correlao entre teores de 4-CQA nos cafs crus e AAO (R=0,7973); 3-CQA no se correlacionou com a AAO (R=-0,1246). 3-CQA e 4-CQA so
estruturas minoritrias na composio total dos cidos clorognicos do caf e no so
substratos preferenciais da PFO, portanto no representaram boas opes para diferenciao
entre as amostras do atual estudo. Stalmach et al. (2006) avaliaram, em caf cereja prprocessado por via mida, o potencial antioxidante de cada ismero CQA e obtiveram valores
equivalentes expressivamente superiores para o 5-CQA em relao ao 3-CQA e ao 4-CQA,
ferruoil- e di-ferruoil-qunicos.
41
42
43
est relacionado maior mobilizao dos polifenis para o fruto. O aumento da CAT e/ou da
PFO esto associadas necessidade de elevao dos teores dos polifenis em condies de
estresse (MONTAVON e BORTILIK, 2004). Os estudos bioqumicos do suporte aos
resultados do atual estudo, pois foi observado menor teor de fenlicos no caf cereja, fase em
que o fruto apresenta a maior estabilidade redox, e maior teor nos estdios verde e bia, fases
que exigem mobilizao destes compostos para dar suporte redox contra ameaas extrnsecas.
44
Tabela 2. Teor de compostos fenlicos totais e atividade antioxidante em cafs crus e torrados
Teor de fenlicos
Atividade anti-oxidante
(mg/g caf-EAG)
Tipo de gro
caf cru
caf torrado
a torra (%)A
AAO torrado/
caf cru
caf torrado
AAO cruB
Verde natural
36,40,772 (a,A)
0,2370,0130 (a,A)
Cereja natural
0,4270,0186 (b,A)
Cereja despolpado
36,40,603 (a,A)
27,50,733(a,B) 24,5(a)
0,4220,00958 (b,A)
0,2400,0113 (b,B)
28,90,682(b,B) 24,1(a)
0,2480,00610 (a,A)
0,2150,00642(c,B) 1,15(d)
Bia natural
35,90,390 (a,A)
27,10,967(a,B) 24,5(a)
0,3210,00774 (c,A)
Correlao (R)
0,9818C
1,76(b)
0,2839D
Reduo percentual do teor de fenlicos com a torra: percentual de queda ao confrontar os teores de fenlicos nos cafs torrados crus.
AAO torrado/AAO cru representa a razo entre a AAO dos cafs torrados e crus. Valores expressos como mdia desvio padro de
5 repeties. Valores seguidos de letras minsculas diferentes, na mesma coluna so significativamente diferentes e valores seguidos de letras
maisculas , na mesma linha, so significativamente diferentes pelo teste de Tukey (p<0,05). C Fator de correlao entre os teores de
fenlicos dos cafs crus e torrados. D Fator de correlao entre AAO dos cafs crus e torrados.
B
45
Figura 8. Biplot teor de compostos fenlicos e atividade antioxidante (AOO) dos gros de cafs
crus e torrado. Verde, cereja e bia so os estdios de maturao e natural, despolpado e
desmucilado os tratamentos ps-colheita Valores expressos como mdiadesvio padro de 5
repeties. Rcc e Rct representam as correlaes entre teor de fenlicos e AAO para os cafs cru
torrado, respectivamente.
1.3.2.2. Teor de fenlicos totais em cafs cereja crus pr-processados por trs
mtodos diferentes
Entre os tratamentos propostos para o caf arbica deste estudo, o caf cereja
desmucilado apresentou o mais alto teor de polifenis (38,10,807mg/g), 9,17% e
4,67% acima dos teores encontrados para os cafs natural e despolpado,
respectivamente (resultados na tabela 2 e figura 8). A perda de substncias
hidrossolveis e de substratos de fermentao nos tanques de desmucilagem acarretou a
concentrao de compostos mais intimamente ligados aos compartimentos celulares
(compostos de metabolismo secundrio). tambm possvel admitir que tenha havido
46
47
variao nos teores de bioativos com o grau de torra, h escassez de dados que
correlacionem os efeitos das diferentes formas de manejo de campo sobre os teores dos
compostos fenlicos do caf torrado. Um estudo criterioso da cintica de converso de
fenlicos, que dependente da temperatura, para cafs oriundos de manejos
diferenciados, certamente levar a resultados muito importantes, devido s mudanas
relativas na funcionalidade e no perfil de volteis e substncias que conferem sabor.
Duarte et al. (2005) compararam os teores dos CQA (principal frao entre os
fenlicos) originais do gro de caf, pr-processado por despolpamento, com os
remanescentes aps a torra e observaram aumentos de 3-CQA (11,8%) e 4-CQA
(12,0%) e diminuio do 5-CQA (-68,1%) em torra leve; diminuio de 3-CQA (15,1%), de 4-CQA (-31,3%) e de 5-CQA (-80,3%), em torra mdia; diminuio de 3CQA (-58,4%), de 4-CQA (-66,7%) e de 5-CQA (-92,1%), em torra severa. Em torra
leve, o aumento de 3-CQA e 4-CQA atribudo isomerizao do 5-CQA, que
decresce muito acentuadamente e, tambm decomposio parcial dos cidos dicafeoilqunicos e ferruoil-qunicos (TRUGO e MACRAe; 1984). No estudo de Duarte
et al. (2005) ainda ficou constatado o decrscimo progressivo no teor de fenlicos
totais, conforme o grau de torra evoluiu (em torra mdia o caf apresentou teor 6,73%
menor que a torra leve), mas os gros crus no foram analisados.
Stalmach et al. (2006) estudaram a evoluo dos cidos clorognicos (CQA,
FQA e di-CQA) do gro verde ao gro submetido torra mdia, constatando declnio de
32,9% do 5-CQA, que por isomerizao parcial fez elevar em 43,5 e 74,6% os teores de
3-CQA e 4-CQA, respectivamente.
48
Os dados da literatura
49
50
51
52
53
maiores teores de acares redutores foram encontrados no caf natural em relao aos
descascado e desmucilado.
No processo de desmucilagem ocorre a lixiviao passiva de pequenas molculas e
ons no sentido endosperma-ambiente externo, como proposto por Wootton (1974).
Outro aspecto importante, bem demonstrado em trabalhos mais recentes (BYTOF et al.,
2005, SELMAR et al., 2005, KNOPP et al., 2006), a capacidade de resposta
metablica das sementes de caf na fase ps-colheita, com consumo, principalmente, de
glicose e frutose. Pela fermentao, a concentrao de oxignio cai drasticamente,
devido ao microbiana, e em condies anxicas os tecidos vegetais so capazes de
alternar entre fermentaes alcolica e ltica. Em contraste ao processamento por via
mida, o caf apenas despolpado permanece num ambiente bem aerado, mantendo a
respirao aerbia at que a reduo do teor de gua leve inviabilidade de
metabolismo. Comparando-se com a respirao, a fermentao consome mais hexoses
para gerao do mesmo nmero de mols de molculas de ATP. O caf processado por
via seca mantm-se protegido pelo exocarpo, que alm de representar uma barreira
fsica entrada de oxignio ou microorganismos do ambiente, contm substncias,
como os compostos fenlicos (principalmente os cidos clorognicos) que fixam
oxignio, impedindo sua entrada no endosperma (CCERO, 1986). Esses efeitos
combinados podem explicar a expressiva diferena entre os teores de acares redutores
entre as amostras diferentemente pr-processadas. A determinao desse parmetro,
num conjunto de avaliaes mais elucidativas, pode ser bom indicador da histria pscolheita do caf.
As substncias de reservas (carboidratos, lipdeos e protenas) armazenadas nas
sementes so mobilizadas na fase de germinao, quando ocorre o desenvolvimento das
plntulas, e seus produtos de degradao so usados para diferentes propsitos, como a
54
55
56
57
58
59
acares
no
Tipo de caf
redutores
redutores(A)
acares totais
verde natural
0,3280,0115a
5,49
6,110,190a
cereja natural
0,9430,0287b
6,69
7,980,235b
cereja despolpado
0,5220,0189c
6,67
7,540,188c
cereja desmucilado
0,1350,00654d
8,40
8,980,323d
bia natural
0,4510,0096e
7,29
8,120,265 b
60
61
(KNOPP et al., 2006) e aminocidos livres (BYTOF et al., 2005) diferente em cafs
diferentemente processados. razovel prever que nesta fase podem ser criadas ou
inibidas condies para transformaes metablicas, em funo do mtodo aplicado.
Neste contexto surgiu, nas ltimas dcadas, um novo ramo de pesquisas em qumica de
caf, que estuda a germinao no curso do tratamento ps-colheita. Para quantificar
esses fenmenos tem sido necessrio aplicar tcnicas sofisticadas de DNA, como a
reao em cadeia da polimerase em tempo real (RT-PCR) e a citologia em fluxo.
As sementes de caf tm comportamento intermedirio, entre ortodoxo e
recalcitrante (ELLIS et al., 1990), caracterizando a necessidade de teores mdios de
gua para se tornarem viveis e os processos metablicos de evoluo ocorram. Apesar
do contedo de gua dentro do fruto fresco maduro ser alto (em torno de 52%), a
germinao ocorre somente aps a retirada do fruto maduro da planta, em presena de
gua exgena. A germinao precoce inibida pelo potencial osmtico da polpa e pela
presena do cido abicnico (BEWLEY e BLACK, 1994). No curso do processo via
mida, com a retirada da casca, polpa e mucilagem, ocorre o incio da germinao. A
confirmao das transformaes bioqumicas, durante o preparo do caf, tem tido como
base o estudo de expresso da enzima especfica de germinao isocitrato liase (Lys) e o
aumento na abundncia de -tubulina, marcador de diviso celular ou alongamento. O
fenmeno observado no processo via seca, mas em menor extenso (SELMAR et al.,
2006). Bythof et al., (2007) observaram que o pico de germinao ocorre no segundo
dia de terreiro para o caf desmucilado e apenas no stimo dia para o caf seco em coco.
Os autores constataram variaes na composio protica, com converso de protenas
de reserva (citoplasmticas) e mobilizao de aminocidos livres em protenas nucleares
e interpretaram que a secagem, aps fermentao natural na presena de gua, mimetiza
a fase de maturao da semente. No processo de secagem do fruto ntegro, apesar de
62
63
3.1.2. Trigonelina
64
65
66
67
68
2002). Dentre os cafs cereja estudados, o natural apresentou maior teor de aminocidos
livres, resultado previsto devido tendncia degradao de protenas do mesocarpo e
conseqente transferncia osmtica para o endosperma, fenmeno similar ao observado
com os acares. O caf desmucilado apresentou o menor teor de aminocidos livres,
devido perdas pela fermentao, arraste para a soluo de degomagem e mobilizao
para formao de protenas de reserva, pela germinao precoce associada a este tipo
de preparo. O caf apenas despolpado, que foi ao terreiro com a mucilagem aderida,
apresentou teor de aminocidos livres intermedirio entre os dois outros processos, que
pode ser explicado pela incorporao parcial destas pequenas molculas e por no ter
sido criado um ambiente favorvel fermentao ou germinao, pela ausncia de gua
externa.
Dias (2008) estudou os processos via seca e via mida e encontrou maiores teores
de quase todos os aminocidos livres em caf pr-processado por via seca (24%, em
mdia, maiores em comparao com a via mida). Em nosso estudo a diferena foi
expressivamente maior: 70,6% e 51,9% maiores no caf natural, ao compararem-se com
o desmucilado e o despolpado, respectivamente.
Arnold e Ludwig (1996) encontraram aumento de 500 mg/kg no teor de glutamina
livre, aminocido majoritrio, durante a secagem do caf natural e nenhuma variao
significativa no caf desmucilado. Coincidentemente, em nosso estudo a diferena no
teor deste aminocido entre os dois tratamentos foi de 510 mg/kg..
Nossa comparao entre os tratamentos ps-colheita do caf cereja demonstrou
que o processo de desmucilagem fez aumentar o teor de protenas totais no endosperma,
o caf despolpado apresentou comportamento intermedirio e o caf natural o menor
valor. O caf desmucilado apresentou teor 17,9% superior ao natural. No houve,
portanto, indcios de perda das molculas maiores para a soluo de degomagem, e a
69
70
verde
cereja
cereja
cereja
bia
de caf
natural
natural
despolpado
desmucilado
natural
aminocido
ASP
0,322
0,145
0,136
0,138
0,204
0,235
0,221
0,184
0,210
0,0470
0,0690
0,0450
0,0400
0,0430
0,0140
0,0190
0,0130
0,0110
0,0120
0,0140
0,0210
0,0140
0,00900
0,0130
0,0550
0,0950
0,0630
0,0560
0,0600
0,0200
0,0290
0,0190
0,0130
0,0180
0,0720
0,1060
0,0700
0,0620
0,0670
0,0260
0,0380
0,0250
0,0220
0,0240
0,0190
0,0280
0,0180
0,0160
0,0170
0,0130
0,0190
0,0120
0,0180
0,0120
0,0310
0,0510
0,0270
0,0380
0,0260
ILE
0,0160
0,0160
0,0100
0,00900
0,0100
LEU
0,00800
0,0170
0,0110
0,0110
0,0110
LYS
0,0670
0,0980
0,0650
0,0470
0,0620
Total
0,755
1,150
0,757
0,674
0,722
GLU
SER
HIS
GLY
THR
ARG
ALA
TYR
PRO
VAL
PHE
Resultados em base seca das amostras desengorduradas. Resultados expressos como mdia de 2
repeties da anlise de aminocidos livres por derivao ps-coluna.
71
verde
cereja
cereja
cereja
bia
de caf
natural
natural
despolpado
desmucilado
natural
aminocido
ASP
0,140
0,322
0,145
0,136
0,138
GLU
2,50
2,70
2,90
2,90
2,70
SER
0,510
0,540
0,600
0,640
0,620
HIS
0,120
0,110
0,140
0,170
0,160
GLY
0,740
0,820
0,890
0,910
0,880
THR
0,290
0,310
0,340
0,400
0,380
ARG
0,610
0,620
0,700
0,790
0,750
ALA
0,480
0,490
0,530
0,560
0,560
TYR
0,180
0,140
0,200
0,270
0,260
PRO
0,690
0,690
0,540
0,650
0,910
VAL
0,570
0,580
0,660
0,70
0,680
PHE
0,470
0,440
0,540
0,60
0,600
ILE
0,370
0,350
0,420
0,470
0,40
LEU
1,00
1,00
1,20
1,20
1,20
LYS
0,620
0,650
0,720
0,780
0,740
Total
10,3
10,6
11,7
12,5
12,3
Resultados em base seca das amostras desengorduradas. Resultados expressos como mdia de 2
repeties.
72
A anlise por componentes principais (ACP) dos aminocidos totais discriminou, com
87% da varincia total nos 2 primeiros CPs, os cafs cereja desmucilado, cereja despolpado e
verde natural, mantendo agrupados os cafs cereja natural e bia natural (resultados na figura
9). Pela avaliao do primeiro CP, com 51% da varincia explicada, pode ser observada a
criao de dois grupos: (1) cerejas natural e desmucilado e bia e (2) cereja despolpado e
verde. O agrupamento das amostras coincidiu com resposta cromatogrfica total para os
volteis ps-torra (figura 4), ou seja, as amostras que apresentaram maiores teores de volteis
ficaram agrupadas, indicando que h degradao extensiva dos aminocidos livres e ligados
na gerao de compostos durante a torra. Os aminocidos mais lbeis, arginina, lisina, serina e
treonina correlacionaram-se positivamente com o caf cereja desmucilado (amostra com
maior teor de volteis) e negativamente com o caf verde natural (menor concentrao de
volteis). O somatrio dos teores destes quatro aminocidos foi 23,1% maior no caf
desmucilado em relao ao caf natural, indicando sua importncia na gerao de resduos
para as reaes de Maillard, como bem descrito em sistemas-modelo (DE MARIA et al.,
1996).
73
O teor de trigonelina nas amostras de caf arbica de nosso estudo foi 22% maior no
caf cereja em relao ao verde e no houve diferena significativa entre os cafs cereja e
bia (resultados na figura 10). Zheng et al. (2004) mostraram que a trigonelina sintetizada
no pericarpo de frutos imaturos e declina nestes tecidos com o amadurecimento, perodo em
que a maior atividade de sntese foi detectada no endosperma. Nos frutos plenamente maduros
a biossntese cessa, mas a acumulao mxima, sugerindo transporte adicional da substncia
do pericarpo para o endocarpo. Estes fenmenos podem explicar nossos resultados: mais altos
teores no endocarpo do caf cereja, em comparao ao caf verde e nenhuma variao at o
estdio bia. Koshiiro et al. (2006) monitoraram a acumulao da trigonelina em cultivares de
74
cafs arabica e robusta, em sete estdios de maturao e obtiveram teor 33% maior no caf
cereja em comparao com o verde, e conseqente estabilizao a partir do cereja.
O teor de trigonelina no caf cereja desmucilado foi 17,1% maior que no caf natural e
21,2% maior que no caf despolpado. Os resultados demonstraram que no houve perda do
alcalide pelo excesso de gua e que a insero da etapa fermentativa promoveu seu aumento
relativo no gro, devido perda de solveis ou metabolizveis. Este efeito no foi observado
no caf despolpado, que no se distinguiu do natural.
Alm da estabilidade durante o pr-processamento, outro aspecto importante que pode
justificar o maior teor de trigonelina do caf submetido desmucilagem, seria a sua expresso
(a partir do cido nicotnico) neste perodo, devido sua funo como fator de germinao,
metabolismo acelerado nestas condies (LINN et al., 1978).
Apesar da trigonelina ser importante fisiologicamente e precursora de volteis ps-torra,
compondo o grupo de substratos nitrogenados sensveis degradao trmica, no existem
estudos que a relacione com os procedimentos de manejo no campo ou de sua possvel
interao no metabolismo ps-colheita, dificultando a interpretao de resultados recentes. Os
estudos referentes aos teores de trigonelina em caf baseiam-se no monitoramento entre
espcies, no efeito da torra e avaliao sensorial e fisiolgico da bebida. Tagushi et al.
(1985) aqueceram, em experimentos isolados, trigonelina padro e caf cru modo, em
condies de torra, com a finalidade de controlar a formao do cido nicotnico (fator
nutricional). Os autores observaram que, apesar da degradao da trigonelina ter chegado a
85%, a converso cido nicotnico (mecanismo de cintica bem definida), foi relativamente
pouco expressiva, o que levou-os a concluir que a formao de outros compostos
nitrogenados predominante.
75
Os dados atuais referentes trigonelina foram inclusos nos estudos de correlao entre
nitrogenados e volteis do caf torrado, pois sua degradao leva piridinas e pirris,
importantes na composio do flavor do caf torrado (VIANA e HORMAN, 1974, RIZZI e
SANDERS, 1996).
Figura 10. Teor de trigonelina em gros de cafs crus. Valores expressos como mdia desvio
padro de 6 repeties. Valores seguidos de letras diferentes so significativamente diferentes
pelo teste de Tukey..
76
77
78
B. Rearranjo de Amadori: ao invs de ciclizar, o on imnio sob catlise alcalina, poder sofrer o
rearranjo de Amadori, formando o produto de Amadori. Enolizao e clivagem oxidativa da
aminocetose (ou produto de Amadori) forma vrios produtos de massas moleculares inferiores.
79
80
para produzir pirazinas (outros aminocidos formariam pirazinas apenas via degradao de
Strecker); (iv) serina e treonina seriam precursores de oxazolas (Vitzthum e Werkhoff, 1974).
Usando informaes do sistema modelo, os autores investigaram a composio do aroma de
um caf arbica brasileiro, aps a torra, para confirmar a correspondncia de substncias, por
cromatografia gasosa acoplada espectrometria de massas (CG-EM), detector especfico para
nitrognio-fsforo (DNP) e ndice de Kovats (C6C26). Pelo experimento modelo foram
identificadas cerca de 350 componentes, destacandose os furanos e suas estruturas mistas;
pirris; piridinas; pirazinas; oxazolas e compostos carboxlicos. Foi observada, tambm, a
presena de compostos de pirlise dos aminocidos, reao paralela aos mecanismos de
Maillard ou Strecker. Na ausncia de sacarose, serina e treonina produziram cerca de 160
compostos, em sua maioria alquilpirazinas. Pela torra do caf arbica foram identificados
cerca de 220 compostos em comum ao sistema modelo, dos quais 53 compostos de aroma, at
ento no relatados para caf. Alm dos furanos, provavelmente formados a partir de
carboidratos, a maioria dos compostos eram pirazinas e piridinas. De fato, as reaes de
Maillard so a principal via de formao de compostos de aroma durante a torra do caf, mas
na realidade parte integrante de uma cascata de complexas reaes, dependente de outros
importantes precursores, como os cidos clorognicos, trigonelina e, minoritariamente
lipdeos e carotenides. A figura 12 apresenta um esquema simplificado desta rede de
possveis reaes.
82
84
85
no causavam impacto sobre o flavor, contribuindo muito pouco para o para a qualidade
sensorial. Rhoades (1958) props a amostragem do headspace do caf torrado e modo
aquecido, por uma corrente de hlio umidificado para posterior anlise por cromatografia
gasosa.
Roboz (1974) combinou a alta eficincia das colunas capilares para cromatografia
gasosa (CGAR) com a sensibilidade dos detectores por espectrometria de massas. Outras
tcnicas rpidas e de baixo impacto matriz e aos compostos de aroma foram
progressivamente sendo introduzidas, como a extrao com fluido supercrtico, a combinao
da cromatografia gasosa com a tcnica de infravermelho com transformada de Fourier
(CG/IVTF) ou enriquecimento do headspace (cromatografia multidimensional), multi
deteco e a ressonncia magntica nuclear (RMN).
Apesar dos grandes avanos das tcnicas de separao, identificao e elucidao de
estruturas qumicas, o isolamento com rendimento aprecivel de componentestrao at
hoje um problema a ser superado. Em 1964, Nickerson e Likens (1966) desenvolveram uma
unidade de destilao verstil para extrao por solvente no miscvel, dos volteis arrastados
pela corrente de vapor dgua, em contato com a matriz a extrao e destilao simultneas
(SDE, sigla em ingls). A tcnica est, hoje, entre as mais utilizadas no isolamento de
compostos de flavor de alimentos. Entretanto, apesar da eficincia de extrao do mtodo, as
temperaturas elevadas aplicadas podem levar a formao de artefatos. Em particular, quando
esto presentes acares e aminocidos, as reaes de Maillard ou Strecker podem levar ao
aparecimento ou incremento de compostos caractersticos, falseando os resultados quali
quantitativamente (SCHIEBERLE, 1995). Weurman et al. (1970) mostraram a formao de
sters e acetais com a SDE. Pickenhagen et al. (1981) descreveram a discriminao de
importantes compostos de aroma, com carter muito polar, como 4hidroxi2,5dimetil
3(2H)furanona, por SDE. Silwar (1982) foi o primeiro a isolar e enriquecer volteis de
86
aroma do caf. A anlise por CG-EM quantificou cerca de 160 compostos na faixa de mg/L e
60 na faixa de g/L.
O mtodo de caracterizao do flavor de alimentos utilizando o trapeamento por
adsorventes, seguida de dessoro trmica e CG-EM foi desenvolvido aps a introduo do
polmero Tenax, como fase estacionria para a CG (ZLATKIS et al., 1973) e baseia-se no
enriquecimento do headspace proveniente de uma matriz slida ou lquida, pela percolao de
um gs ou pelo simples aquecimento, criando um sistema dinmico, em estados sucessivos de
equilbrio (headspace dinmico). O conjunto de informaes trazidas pela combinao destas
tcnicas e suas variaes foi de importncia definitiva para a qumica do aroma do caf.
Mathieu et al. (1998) avaliaram, pela tcnica de hedspace dinmico-CG-EM, a
liberao de compostos volteis pelos frutos de cafs arabica e robusta em trs diferentes
estdios de maturao. O estudo indicou que o processo de maturao do fruto (de verde a
cereja) aumentou a quantidade de compostos volteis, especialmente os mono e
sesquiterpenos (-pineno, -pineno, limoneno, linalol, entre outros). De cereja a bia foi
observado aumento de compostos oxigenados (2- e 3-pentanona; hexanal; 2-pentil-acetato;
hexanol; metil-salicilato, entre outros).
Com o advento de amostradores automticos de headspace houve avanos
importantes na elucidao da composio do flavor do caf e na comparao de amostras de
origens diferenciadas. Shimoda e Shibamoto (1990) recorreram tcnica de reter a amostra
criogenicamente na cabea da coluna cromatogrfica com nitrognio lquido, contornando o
inconveniente do alargamento dos picos e, com isso, melhorando a capacidade de
identificao de compostostrao. Esta variante foi denominada purga e trapeamento (quase
sempre utilizando o termo em ingls, purge and trap).
A extrao por solventes pode minimizar a formao de artefatos trmicos,
principalmente se forem aplicadas presses reduzidas. Engel et al. (1999) desenvolveram uma
87
88
89
por definio, competitiva, e a molcula com maior afinidade pode substituir outra de menor
afinidade. A quantidade de analitos extrada mais severamente afetada pela composio da
matriz quando predominam os fenmenos de adsoro em relao aos fenmenos de absoro
(PAWLISZYN et al., 1999).
A escolha do recobrimento mais adequado depende da complexidade da mistura e da
seletividade que se pretende estabelecer, o que normalmente feita experimentalmente. O
prximo passo a maximizao da extrao, pela otimizao dos parmetros cinticos.
No caso da SPME diretamente do headspace (HSSPME), o equilbrio ocorre entre o
polmero lquido ou o slido sobre a fibra, por mecanismos de partio e/ou adsoro e a fase
vapor acima da amostra lquida ou slida. A difuso dos analitos para a fibra, a partir da fase
vapor, cerca de quatro ordens de grandeza que a difuso na soluo, tornando o equilbrio
mais rpido (ZHANG e PAWLINZING, 1993).
De fato, HSSPME pode reduzir o tempo de extrao at 1 minuto, sem perder a
sensibilidade, mesmo para compostos com altos pontos de ebulio. Este modo de extrao
tem suporte na Lei de Henry, e permite anlises com excelentes precises para compostos
com constante de Henry acima de 90 atm.cm3. mol1. Quando a matriz um slido, a etapa
limitante do processo a difuso dos analitos na fase slida, cerca de trs ordens de grandeza
menor que na fase lquida, exigindo tempos de formao do headspace maiores (KOLB e
ETTRE, 1997). Entretanto, o aumento na temperatura e a reduo de massa de amostra
geralmente melhoram o desempenho do sistema.
Como a SPME um mtodo livre de solventes, o porte de injeo dessorve
termicamente os analitos da fibra. Em geral aplicada a injeo sem diviso de fluxo, e
tornase necessrio o uso de um liner de pequeno volume interno (tipicamente, 0,75mm de
dimetro interno), para aumentar a velocidade linear de introduo na coluna, gerando uma
banda de amostragem estreita.
90
91
92
93
94
volteis, foi avaliada por ACP. Foi constatado que os furanos (furfuril-formato, 2-acetilfurano, furfural, furfuril-acetato, furfuril-lcool) eram mais abundantes nos cafs arbica, em
decorrncia dos maiores teores de acares no gro cru. Os cafs robusta apresentaram
quantidade superiores de pirazinas (2,5-dimetil-pirazina; 2,6-dimetil-pirazina; 2-etil-6-metilpirazina), e de guaiacol (2-metoxi-fenol; responsvel pelo aroma fenlico desta variedade).
Gonzalez-Riosa et al. (2007a, 2007b) avaliaram por HS-SPME (CAR/PDMS)CG-EM o efeito de quatro diferentes tcnicas pr-processamento de caf pela via mida
(verdes e torrados). Foram identificados 62 compostos para o caf verde e 102 para o caf
torrado. As amostras foram discriminadas, nos dois estudos, utilizando ACP, por grupos de
notas aromticas.
Risticevic et al. (2008) utilizaram a HSSPMECGTempo de vo (TOF, tempo em
ingls) EM e ACP para discriminar amostras de cafs oriundas da Amrica do Sul (Brasil e
Colmbia), Amrica Central, frica e sia. Aps testes de performance foi selecionado o
recobrimento misto DVB/CAR/PDMS, que extraiu mais eficientemente, dentre 102
identificadas, um grupo de substncias com caractersticas fsico-qumicas bastante
diferenciadas, demonstrando maior versatilidade. A ACP separou, com sucesso, as amostras
por continente e dentro da Amrica do Sul. Um aspecto de refinamento do estudo foi a
discriminao (81,2% da varincia total nos 2 primeiros CPs) entre amostras autnticas
(produzidas segundo protocolos do comrcio internacional e certificadas) e no autnticas de
cafs do Brasil e da Colmbia.
95
politetrafluoretileno (PTFE) de 5mL; a fibra ficou exposta ao headspace por 15min e a dessoro
dos compostos ocorreu no injetor (modo: sem diviso de fluxo) do cromatgrafo, 250oC um
por perodo de 5min. A opo pela tcnica se baseia no maior poder extrativo, ou seja, aquela
que produziu maior rea cromatogrfica total. A anlise cromatogrfica foi realizada no
cromatgrafo Agilent 6890. Foi utilizada coluna de polietilenoglicol - polar (DBWax, J&W
Corp.; 25m; 0,2mm de dimetro interno; 0,25mm de espessura de filme); programa do forno:
40oC (5min)//4oC/min//230oC (20min); presso constante do gs de arraste a 10psi; temperatura
do injetor: 250oC. A deteco e posterior obteno das reas relativas aos picos cromatogrficos,
para efeito de tratamento estatstico, foi realizada por DIC, a 260oC. A identificao dos
compostos foi realizada atravs dos sinais obtidos por detector espectromtrico de massas
(Agilent 5973), modo impacto de eltrons (70eV). Foi empregada a base de dados NIST 1998.
Foram considerados para a anlise quimiomtrica (multivariada) apenas os compostos
identificados com certeza 90%. A comparao entre os tempos de reteno obtidos pelo DIC e
pelo espectrmetro de massas foi feita pelo ndice de reteno linear (IRL), utilizando padres de
hidrocarbonetos (n-C7-C28), considerando variao mxima de 2% dos tempos de reteno.
96
97
98
85% da rea total. A informao excedente foi considerada rudo analtico, associados
tcnica ou a compostos presentes em baixas concentraes, cuja incluso dificultaria o
alinhamento das variveis, acarretando erros de interpretao. A figura 14 apresenta a rea
cromatogrfica total/tipo de amostra dos compostos identificados e utilizados em todos os
testes estatsticos. Foi possvel observar que o caf desmucilado gerou o headspace mais rico
(maior rea cromatogrfica total), o caf verde o mais pobre, e os demais no se distinguiram
por este aspecto.
A figura 15 apresenta a distribuio das funes relativas aos compostos extrados e
identificados do caf torrado, por tipo de amostra, como funo das reas cromatogrficas. A
HS-SPME com fibra mista, associada anlise por CG-DIC, mostrou versatilidade por ter
extrado compostos de inmeras funes qumicas. Predominaram os furanos (22,4%),
pirazinas (10,9%), fenis (8,73%) e pirris (7,94%), que so efetivamente as funes
majoritrias relacionadas frao voltil do caf torrado.
Figura 14: rea cromatogrfica total obtida por HS-SPME-CG-DIC para as diferentes amostras de
caf torrado. Resultados expressos como mdia desvio padro de 3 repeties. Valores seguidos de
letras diferentes so significativamente diferentes (pelo teste de Tukey, p<0,05).
99
Figura 15. rea cromatogrfica total, obtida por HS-SPME-CG-DIC por funo qumica e tipo de amostra de caf torrado. Os valores utilizados para o plot
foram a mdia de 3 repeties. A contribuio para o headspace de cada funo ou classe foi calculada pela razo entre a mdia das reas totais obtidas para
os compostos identificados para a funo e a mdia das reas totais cromatogrficas.
100
4.3.2. Anlise por componentes principais das reas cromatogrficas dos compostos
identificados por HS-SPME-CG-DIC/EM no caf torrado
101
Figura 16. ACP: grficos de scores: (A) bidimensional e (B) tridimensional das reas
cromatogrficas, por HS-SPME-CG-DIC/EM dos 117 compostos identificados (tabela no anexo
A), representando (A) 74% e (B) 89% da varincia total. Para o tratamento os valores foram
normalizados pela mdia e auto-escalados pelo desvio padro, para minimizar as discrepncias
quanto ordem de grandeza. As amostras de mesmo tratamento foram analisadas em bateladas
independentes e representadas pelas mdias das reas cromatogrficas.
102
4.3.3. Correlao entre precursores de compostos volteis ps-torra no caf cru e rea
cromatogrfica pela HS-SPME-CG-DIC/EM
J foram relatados cerca de 80 compostos fenlicos para o caf torrado, aos quais so
atribudas importantes caractersticas sensoriais. Embora, isoladamente, estejam associados a
sensaes negativas de alcatro, fumaa, couro, pimenta ou medicinal, em pequenas
concentraes so descritos por atributos agradveis como doce, floral, quente, balsmico,
baunilha, cravo ou anis (FLAMENT e BESSIRE-THOMAS, 2001).
Os compostos fenlicos representaram, em nosso estudo, a terceira classe de compostos
do headspace do caf torrado identificados (12,7%%, em mdia, da rea total
cromatogrfica). Destacaram-se, em termos de concentrao, 2-metoxi-4-vinil-fenol e 2metoxi-4- etil-fenol (vinil e etil-guaiacol), respondendo por e 3,74% e 1,27% do total do
103
104
Figura 17. Biplot teor de fenlicos totais em caf cru, expresso como equivalentes de cido
glico e rea total cromatogrfica relativa aos volteis fenlicos do caf torrado, analisados por
HS-SPME-CG-DIC. Valores expressos como mdia desvio padro de 3 repeties. Valores,
de mesma avaliao, acompanhados por letras diferentes so significativamente diferentes (pelo
teste de Tukey, p<0,05).
105
Nos cafs arbica deste estudo foram encontrados teores mdios de 0,476% e 7,75%
para acares redutores e totais, respectivamente. Os acares redutores so reconhecidos
como precursores de compostos nitrogenados e carbonlicos, atravs da reao com resduos
de aminocidos, pela rotas denominadas reao de Maillard e degradao de Strecker.
Durante a torra, a sacarose degradada expressivamente (at 80%, dependendo da
temperatura e do tempo), gerando entre outros resduos, os acares redutores que enriquecem
o ambiente reacional; portanto, importante considerar a frao livre total de oligossacardeos
do gro de caf na avaliao da capacidade de formao de volteis e no somente os
acares redutores (BALTES e BOCHMANN, 1987).
Pelo modelo estabelecido neste estudo, o grupo de compostos relacionados a estas
rotas especficas representaram 36,6% do headspace extrado e identificado. O grupo
pirazinas se destacou, com 16,4%; resultado prximo mdia de 14%, descrita em inmeros
estudos sobre flavor de caf (FLAMENT, 2001). Foram identificadas 21 alquil-pirazinas
(todas j descritas como caractersticas de caf torrado), sendo que a metil-pirazina apresentou
o maior teor (1,65% do headspace identificado). Metil-pirazina, de fato a principal pirazina
do caf torrado e sua formao aumenta com o progresso da torra (SILWAR e
LLLMANN,1993; HASHIM e CHAVERON,1996).
Alm da importncia quantitativa, a presena de alquil-pirazinas tem despertado
interesse nos estudiosos de flavor devido sua associao com atributos como torrado, nozes e
caf, especificamente. Hashim e Chaveron (1996) acompanharam a formao a formao de
metil pirazinas durante a torra, variando tempo-temperatura e sugeriram o controle do
processo pelas razes te teores entre metil/2,5-dimetil-pirazina e metil/2,6-dimetl-pirazina.
106
do
headspace),
tambm
caracterizado
em
sistemas-modelo
envolvendo
serina/treonina e sacarose (Baltes e Bochmann, 1987). Aos trs pirris atribudo odor de
pipoca.
A figura 18 apresenta em biplot o perfil de variao dos teores de acares totais
solveis do caf cru e do somatrio das reas cromatogrficas relativas aos compostos
caractersticos dos mecanismos de Maillard e Strecker (piridinas, pirazinas, pirris, indis,
tiazolas e aldedos) no headspace do caf torrado. Foi obtida excelente correlao entre os
parmetros, acares totais e volteis dessa natureza (R=0,9243, pelo teste de Pierson),
ressaltando que fatores que contribuem para o aumento no teor de acares tendem a
aumentar linearmente a produo deste importante grupo de compostos, que responderam por
54,6% do headspace do caf torrado (expressos como rea cromatogrfica relativa).
107
Figura 18. Biplot teor de acares totais em caf cru, expressos em %m/m, e rea total cromatogrfica
relativa aos volteis de Maillard e Strecker (piridinas, pirazinas, pirris, indis, tiazolas e aldedos) do
caf torrado, analisados por HS-SPME-CG-DIC. Valores expressos como mdia desvio padro de 3
repeties. Valores, de mesma avaliao, acompanhados por letras diferentes so significativamente
diferentes (pelo teste de Tukey, p<0,05).
4.3.3.2.2. Correlao entre teores de acares no caf cru e compostos volteis oriundos
da rota degradao trmica de acares
furanos formaram o grupo voltil mais importante no caf torrado deste estudo, respondendo
por 22,4% dos compostos do headspace extrados e identificados (expressos como rea
cromatogrfica relativa). Os cafs naturais cereja e bia e o desmucilado apresentaram os
maiores teores de furanos, 46,1%, em mdia, acima dos cafs verde e despolpado.
Entre os furanos identificados neste estudo destacaram-se: (i) o furano-metanol, que
apresentou a maior concentrao entre os compostos extrados (7,24% do total de volteis e
32,2% dos furanos identificados), composto que confere sensaes de queimado e amargo,
bem relatado como predominante no headspace do caf torrado (PROCIDA et al, 1997), cuja
formao atribuda degradao de monossacardeos ou sacarose na presena ou no de
aminocidos (LEDL e SEVERIN, 1973; BALTEs e BOCHMANN, 1987), que formado
progressivamente durante a torra (MONDELLO et al., 2005); (ii) 5-metil-furanocarboxaldedo (3,21% do total de volteis),
109
durante o processamento trmico de alimentos com alto teor de carboidratos (como o caf,
que possui alto teor de sacarose; Vitzthum e Werkhoff, 1976) ou em sistemas-modelo de
aquecimento ou caramelizao de mono ou polissacardeos (Mottram, 1991).
Figura 19. Biplot teor de acares totais em caf cru, expressos em %m/m e rea total cromatogrfica
relativa aos furanos do caf torrado, analisados por HS-SPME-CG-DIC. Valores expressos como
mdia desvio padro de 3 repeties. Valores, de mesma avaliao, acompanhados por letras
diferentes so significativamente diferentes (pelo teste de Tukey, p<0,05).
22,4% do total de piranos e 0,327% dos volteis totais (em maior proporo no caf
despolpado: 0,506%). O maltol formado a partir da degradao trmica de dissacardeos
110
111
Figura 20. Biplot teor de acares totais em caf cru, expressos em %m/m e rea total cromatogrfica
relativa aos volteis de degradao de acares (furanos, piranos e cetonas) do caf torrado, analisados
por HS-SPME-CG-DIC. Valores expressos como mdia desvio padro de 3 repeties. Valores, de
mesma avaliao, acompanhados por letras diferentes so significativamente diferentes (pelo teste de
Tukey, p<0,05).
O caf desmucilado foi o mais rico em volteis oriundos da degradao trmica dos
acares, o que confirma, quimicamente, a importncia do controle das condies de colheita
e tratamento e inferindo valor tcnica de desmucilagem que, consensualmente, produz cafs
de qualidade superior, provavelmente pela maior complexidade em termos da natureza e da
quantidade de volteis no produto ps-torra. A introduo desta etapa pode melhorar as
propriedades de cafs com gentica menos favorecida, como os cafs robusta, que possuem
menor contedo de acares (KY et al., 2001).
A prova de xcara discriminou, mais acentuadamente, o caf verde, classificando-o
negativamente segundo os parmetros aroma, carter adocicado, corpo, amargor, aspereza e
adstringncia (anexo B). A avaliao negativa pode ter tido a influncia dos mais baixos
112
teores de acares neste caf, j que aps a torra ainda permanecem acares na forma livre,
que conferem caractersticas desejveis bebida.
113
participao na formao dos volteis durante a torra. Ainda foi possvel aumentar a
correlao pela incluso dos teores de trigonelina (R= 0,9119) (resultados na figura 21),
resultado importante, demonstrando que a extenso de degradao desta substncia est
estequiometricamente associada aos volteis nitrogenados do caf torrado. A tabela 6 rene
dados de teores de: (1) aminocidos livres totais; (2) somatrio aminocidos lbeis ligados s
protenas e (3) trigonelina. Ressalta-se que no foram includas nesta avaliao as tiazolas por
no terem sido analisados os aminocidos sulfurados.
114
Total
livres A,1
aminocidosA, 3
TrigonelinaB,4
nitrogenados
lbeis A,2
Total
Tipo de amostra
Verde natural
0,785
2,03
2,82
0,9580,0408a
3,77
Cereja natural
1,15
2,12
3,27
1,170,0402b
4,44
Cereja despolpado
0,757
2,36
3,12
1,130,0501b
4,25
2,61
3,28
1,370,0767c
4,65
Bia natural
0,722
2,49
3,21
1,190,0699b
4,40
RC
0,04067
0,8333
0,9119
(A)
Resultados expressos como mdia de 2 repeties; (B) resultados expressos como mdia desvio padro de 5
repeties; valores seguidos de letras diferentes so diferentes significativamente; teor de aminocidos lbeis referese ao somatrio de serina, treonina, arginina e lisina obtidos aps hidrlise das protenas; total aminocidos refere-se
ao somatrio das colunas A1 e A2; total nitrogenados refere-se ao somatrio das colunas A3 e A4; (c)R: Fator de
correlao com reas cromatogrficas totais dos compostos de Maillard e Strecker.
115
Figura 21. Biplot teor de compostos nitrogenados (aminocidos livres+ aminocidos lbeis
ligados - arginina, treonina, lisina e serina + trigonelina) em caf cru, expressos em %m/m e rea
total cromatogrfica relativa aos volteis de Maillard e Strecker (piridinas, pirazinas, pirris e
aldedos) do caf torrado, analisados por HS-SPME-CG-DIC). Valores expressos como mdia
desvio padro de 3 repeties. Valores, de mesma avaliao, acompanhados por letras diferentes
so significativamente diferentes (pelo teste de Tukey, p<0,05).
116
Figura 22. Biplot teor de trigonelina em caf cru, expressos em %m/m e rea total cromatogrfica
relativa aos volteis da degradao de acares do caf torrado, analisadas por HS-SPME-CG-DIC.
Valores expressos como mdia desvio padro de 3 repeties. Valores, de mesma avaliao,
acompanhados por letras diferentes so significativamente diferentes (pelo teste de Tukey, p<0,05).
grfico biplot). Destacou-se neste estudo o composto furfural, que representou 2,34% do
headspace. Furfural foi citado por Guyot et al. (1988) como indicativo, no produto ps-torra,
do grau de maturidade do gro de caf (de verde a cereja) e, de fato, observou-se no atual
estudo que o caf cereja apresentou rea cromatogrfica relativa ao furfural 54,4% maior para
o caf cereja em comparao com o caf verde.
Figura 23. Biplot teor de aminocidos (aminocidos livres totais + aminocidos lbeis ligados arginina, treonina, lisina e serina) em caf cru, expressos em %m/m e rea total cromatogrfica
relativa aos volteis da degradao de acares do caf torrado, analisadas por HS-SPME-CG-DIC.
Valores expressos como mdia desvio padro de 3 repeties. Valores, de mesma avaliao,
acompanhados por letras diferentes so significativamente diferentes (pelo teste de Tukey, p<0,05).
deste estudo, permitindo concluir sobre a existncia de uma correlao entre precursores do
caf cru e volteis do caf torrado, reafirmando a importncia do controle da operao de
torra.
4.3.4. Discriminao entre cafs por anlise dos componentes principais das reas
cromatogrficas dos compostos volteis ps-torra, assistida por HS-SPME-CG-DIC/EM
A informao necessria discriminao das amostras deste estudo, atravs dos volteis
fenlicos ps-torra, foi obtida pela ACP das reas cromatogrficas de 8 compostos (relatados
na tabela 1, segundo correlaes positiva ou negativa com as amostras). O CP1 (65% da
varincia total explicada) separou os cafs por tratamentos: (i) cafs desmucilado e
despolpado e (ii) cafs naturais. O CP2 (16% da varincia total) discriminou os cafs cereja
natural e desmucilado e bia dos demais: verde e despolpado. A combinao dos CP1 e CP2
discriminou os cafs naturais cereja e bia em relao aos demais (grficos de scores e
loadings na figura 24).
A maioria dos volteis que foram importantes para o modelo de discriminao so bem
relatados na literatura cientfica de caf, por agregarem flavor ao caf. Os fenlicos em
concentraes elevadas no conferem sensaes agradveis ao odor (tabela 7) ou sabor
(amargor excessivo). Porm, neste estudo os compostos diferenciadores representaram, em
mdia, apenas 8,1% dos volteis (calculados como rea cromatogrfica relativa), nveis que
provavelmente equilibraram-se bem ao flavor global, j que a prova de xcara no identificou,
a exceo para o caf verde, predominncia de caractersticas dessa funo. O caf verde
119
apresentou teor de volteis fenlicos 30% acima da mdia dos outros cafs, devido ao alto
teor de precursores (cidos clorognicos). Esta diferena, provavelmente, foi suficiente para
interferir na avaliao sensorial, que verificou forte amargor, aspereza e adstringncia,
caractersticas de fenlicos.
Entre os tratamentos ps-colheita testados para o caf cereja, a desmucilagem criou
condies para aumentar o teor de fenlicos no fruto e, por conseqncia, o caf torrado
desmucilado apresentou o mais alto teor de volteis fenlicos. Vanilina e eugenol
apresentaram maior correlao positiva com o caf desmucilado, compostos que conferem
atributos sensoriais positivos, o primeiro intensamente doce-baunilha e o segundo
apimentado-agradvel. A vanilina formada a partir do da oxidao do 4-vinil-guaiacol,
composto que representou, em mdia, 47,9% dos fenlicos do headspace.
Figura 24. Biplot (scores e loadings) da ACP, relativa s mdias das reas cromatogrficas (HSSPME-GC-FID) dos fenlicos volteis dos cafs torrados (os compostos identificados por nmeros
esto na tabela 7), responsveis por 81% da varincia total entre amostras. Para o tratamento os
valores foram normalizados pela mdia e auto-escalados pelo desvio padro, para minimizar as
discrepncias quanto ordem de grandeza. (n=3, com desvio padro < 5,0%).
120
Tabela 7. Correlaes dos principais compostos fenlicos na discriminao das amostras de caf torrado por HS-SPME-CG-DID
verde natural
CP1
CP2
cereja
natural
CP1
CP2
+
+
+
-
+
+
+
+
+
+
+
-
Tipo de caf
No.A
1
2
3
4
5
6
7
8
A
Composto
fenol
4-amino- fenol
2-metoxi-fenol
eugenol
vanilina
4-metil-fenol
2-metoxi-4-vinil-fenol
2-metoxi-4-etil-fenol
+
+
+
+
-
cereja
despolpado
CP1
CP2
Correlaes
+
+
+
+
+
+
+
+
+
cereja
desmucilado
CP1
CP2
bia
natural
CP1
PC2
+
+
+
+
+
+
+
+
-
+
+
+
+
-
+
+
+
+
-
descritor de odorC
medicinal-fumaa
no relatado
medicinal-fumaa
pimenta
doce-baunilha
medicinal
apimentado-terra
torrado-fumaa
Os nmeros correspondem identificao de loadings que consta no grfico da figura 24. CP1 e CP2 so os primeiros componentes principais, associados
s correlaes positiva (+) e negativa (-) dos compostos, por tipo de amostra de caf torrado. C Segundo Flament (2001).
121
122
123
124
Figura 25. Grficos da ACP (A) bidimensional biplot de scores e loadings e (B)
tridimensional de scores da ACP, relativa s mdias das reas cromatogrficas (HS-SPMECG-DIC) dos 29 principais compostos de Maillad e Strecker (os compostos identificados
por nmeros esto na tabela 8), responsveis por (A) 70% e (B) 90% da varincia total
entre as amostras. Para o tratamento os valores foram normalizados pela mdia e autoescalados pelo desvio padro, para minimizar as discrepncias quanto ordem de grandeza.
(n=3, com desvio padro < 5,0%).
125
Tabela 8. Correlaes dos principais compostos volteis de Maillard e Strecker na discriminao das amostras de caf torrado
verde
cereja
cereja
cereja
bia
natural
natural
despolpado
desmucilado
natural
CP1 CP2
CP1 CP2 CP1
CP2
CP1
CP2
CP1
CP2
No.A Composto
Correlaes
descritor de odorC
1
3-piridinol
torrado
+
+
+
+
2
1-butil-(1H)-pirrol
verde-terra
+
+
+
+
3
1-pentil-(1H)-pirrol
verde-temperado
+
+
+
+
4
1-metil-(1H)-pirrol
fumaa-metlico
+
+
+
+
5
3-metil-(1H)-pirrol
fumaa-metlico
+
+
+
+
6
2,3-dimetil-4-etil-pirrol
medicinal
+
+
+
+
7
2-carboxaldedo-1H-pirrol
milho-pungente
+
+
+
+
8
5-metil-2-carboxaldedo-1H-pirrol
pungent-off -flavor
+
+
+
+
9
2-metil-piridina
nozes-pipoca
+
+
+
+
+
10
2,3-dimetil-pirazina
nozes-chocolate
+
+
+
+
+
11
2-etil-pirazina
nozes-doce
+
+
+
+
+
12
benzaldedo
cereja
+
+
+
+
+
13
2-etenil-6-metil-pirazina
nozes
+
+
+
+
+
14
trimetil-pirazina
nozes-torrado
+
+
+
+
+
+
15
2-etil-5-metil-pirazina
caf
+
+
+
+
+
+
16
2,5-dimetil-pirazina
nozes- chocolate
+
+
+
+
+
+
17
2-propil-pirazina
verde
+
+
+
+
+
+
18
2-metil-5-propil-pirazina
cereal
+
+
+
+
+
+
19
2,3-dimetil-5-isopropil-pirazina
terra
+
+
+
+
+
+
20
pirazinamida
no relatado
+
+
+
+
+
+
21
7-quinolinamine
no relatado
+
+
+
+
+
+
22
2-isoamil-pirazina
cereal-torrado
+
+
+
+
+
+
23
isopropenil-pirazina
torrado
+
+
+
+
+
+
24
2-metil-6-(1-propenil)-pirazina
terra
+
+
+
+
+
+
25
4(H)-acetil-piridina
tabaco
+
+
+
+
+
26
2,6-dimetil-pirazina
nozes-torrado
+
+
+
+
+
27
2,4-heptadienal
madeira-herbal
+
+
+
+
+
28
2,6-dietil-pirazina
nozes
+
+
+
+
+
29
3- (metil-1H-pirrol)-piridina
no relatado
+
+
+
+
+
A
Os nmeros correspondem identificao de loadings que consta no grfico da figura 21. CP1 e CP2 so os primeiros componentes principais, associados
s correlaes positiva (+) e negativa (-) dos compostos, por tipo de amostra de caf torrado. C Segundo Flament, 2001.
Tipo de caf
126
A informao necessria discriminao das amostras deste estudo, atravs das reaes
de degradao de acares, foi obtida pela ACP das reas cromatogrficas de 15 compostos
volteis (relatados na tabela 9, segundo suas correlaes com as amostras), selecionados por
PLS-DA. O CP1 (52% da varincia total explicada) separou os grupos de cafs: (i) cerejas
natural e desmucilado e bia natural e (ii) cereja despolpado e verde natural. CP2 discriminou
(33% da varincia total) os cafs despolpado e desmucilado dos cafs naturais (grficos de
scores e loadings na figura 26). A combinao dos 2 primeiros CPs discriminou os cafs
naturais cereja e bia em relao aos demais.
Apesar dos dados cromatogrficos referentes a este grupo de funes ter originado
excelente discriminao estatstica entre as amostras estudadas, pela observao dos atributos
de odor dos compostos mais importantes (tabela 9), no h indicativo de que tenha sido
parmetro de diferenciao na prova de xcara. Mesmo o caf verde natural, com atributos
sensoriais negativos, no apresentou associao importante a compostos de off-flavor.
127
Figura 26: Biplot de scores e loadings da ACP, relativa s mdias das reas cromatogrficas (HSSPME-CG-DIC) dos 15 principais compostos oriundos da degradao de acares (os compostos
identificados por nmeros esto na tabela 9), responsveis por 85% da varincia total entre
amostras. Para o tratamento os valores foram normalizados pela mdia e auto-escalados pelo desvio
padro, para minimizar as discrepncias quanto ordem de grandeza. (n=3, com desvio padro <
5,0%).
128
Tabela 9. Correlaes dos principais compostos tpicos da degradao de acares na discriminao das amostras de caf
Tipo de caf
No.A
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
A
Composto
acetato de furfurila
4,4-dimetil-2-Ciclohexen-1-one
2(5H)-furanona
2-metil- dihydro-3(2H)-furanona
2-furfuril-5-metil-furano
2-(methoxi-metil)-furano
2-acetil-5-metil-furano
propanoato de furfurila
2-acetil-furano
2-furfuril-furano
2-[(metil-tio)-metil]-furano
maltol
4-(2-furanil)-3-buten-2-one
5-metil-furfural
5-(hidroxi-metil)-furfural
metil-2-furoato
verde
natural
CP1 CP2
cereja
natural
CP1 CP2
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
-
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
cereja
cereja
despolpado desmucilado
CP1 CP2 CP1 CP2
Correlaes
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
-
bia natural
CP1
CP2
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
-
+
+
+
+
+
+
+
+
descritor de odorC
etreo-floral
caramelo
nozes-caramelo
torrado-doce
terroso
nozes-caf
nozes-queimado
verde-frutal
caramelo
caramelo
caf-queimado
frutal-caramelo
etreo-verde
doce-apimentado
herbal-tabaco
baunilha-queimado
Os nmeros correspondem identificao de loadings que consta no grfico da figura 26. CP1 e CP2 so os primeiros componentes principais, associados s
correlaes positiva (+) e negativa (-) dos compostos, por tipo de amostra de caf torrado. C Segundo Flament, 2001.
129
130
131
preciso dos resultados foi adequada para o acompanhamento das transformaes qumicas ao
longo da maturao e do processamento do caf, fato comprovado pelas excelentes
correlaes encontradas entre precursores e as reas cromatogrficas relativas aos compostos
volteis. O modelo analtico proposto neste estudo, que utilizou a analise estatstica
multivariada, pode ser ferramenta importante na discriminao de amostras de alimentos
processados termicamente. A complexa matriz de reaes, tendo como temas centrais os
mecanismos de Maillard e Strecker e a degradao de compostos fenlicos pareceu no ser
casual e sim estar envolvida num determinismo termodinmico, dependente das
concentraes das espcies reagentes e do rgido controle das condies de torra.
Pela tcnica hifenada proposta no possvel quantificar a composio voltil da
matriz avaliada, devido aos equilbrios mltiplos que se estabelecem, de difcil controle e
simulao para o modelo. Entretanto, pode ser recomendada para discriminar amostras de
alimentos de origens ou submetidas a tratamentos de campo ou de processo diferentes. Como
a maioria dos compostos importantes na diferenciao entre os grupos apresentaram
percentuais inferiores a 1% do total, fundamental que as condies analticas estejam
rigorosamente controladas e os mtodos de anlise bem referenciados.
Os resultados do atual estudo criam excelentes perspectivas para novas pesquisas no
sentido do esclarecimento de fatores metablicos e ambientais que influenciam a qualidade
sensorial e a funcionalidade do caf cru e, principalmente, do caf torrado. A qualidade
superior do gro submetido ao processo de desmucilagem inquestionvel, mas ainda existem
dvidas se o valor est associado esta operao ou ao fato de serem utilizados somente cafs
exclusivamente cereja. Sob este aspecto os dados atuais permitiram avaliar a interface dos
dois importantes parmetros de campo e demonstraram que h efetivamente diferenas de
padro condicionada ao preparo.
132
133
colheita numa nica operao, por derria, sem a presena de frutos imaturos. Para tal o
controle quanto a infestaes por pragas ou injrias deve ser rigoroso.
O planejamento amostral do atual estudo representou um modelo de observao, que
garantiu afirmar que as diferenas entre tratamentos e estdios de maturao no momento da
colheita so condicionantes da composio qumica do gro do caf, que proporcionalmente
alteraro a atividade antioxidante e a frao voltil ps-torra. Entretanto, inmeros estudos
concluram acerca de variaes fsico-qumicas significativas entre cafs de mesma ou de
espcies diferentes em relao regio de plantio. As condies ambientais, climticas ou
composio do solo, assim como a fertilizao artificial tendem a condicionar a planta a
diferentes situaes de estresse, que certamente interferiro nos equilbrios bioqumicos, e
como decorrncia na sntese e mobilizao de fatores de defesa ou reserva de nutrientes.
134
4. Concluses
135
136
5.
REFERNCIAS BIBLIOGRFICA
AKIYAMA, M.; MURAKAMI, K.; HIRANO, Y.; IKEDA, M.; IWATSUKI, K.;
WADA, A.; TOKUNO, K.; ONISHI, M.; IWABUCHI, H. Characterization of
headspace aroma compounds of freshly brewed arabica coffees and studies on a
characteristic aroma compound of Ethiopian coffee. Journal of Food Science, v.73, n.
5, p. 335-346, 2008.
AMORIM, H.V.; MELLO, M. (1991) Significance of enzymes in non alcoholic coffee
beverage. Food Enzymology. Amsterdan: Elsevier, v.2, p. 189-209.
AMORIM, H.V. Aspectos bioqumicos e histoqumicos do gro de caf verde
relacionados com a deteriorao de qualidade. Tese (Doutorado em Bioqumica),
85f. Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz-ESALQ, Piracicaba,ESALQ,
1978.
ANESE, M., De PILLI, T.; MASSINI, R.; LERICI, C.R. Oxidative stability of the lipid
fraction in roasted coffee. Italian Journal of Food Science, v. 12, p. 457462, 2000.
ANESE, M., NICOLI, M.C., 2003. Antioxidant properties of ready-to-drink coffee
brews.
Journal of Agricultural and Food Chemistry, n. 51, 942946.
ARAKI, N.; SHIBAYAMA, R.; EJIMA, Y.; NAGAI, R.; ARAKI, T.; SAYA, H.;
HORIUSHI, S. A reao de Maillard nos Alimentos e Medicamentos. International
Congress Series v. 1223, p. 4958, 2001.
ARNOLD, U.; LUDWIG, E. Analysis of free amino acids in green coffee beans II.
Changes of the amino acid content in arabica coffees in connection with post-harvest
model treatment. Zeitschrift fr Lebensmitteluntersuchung und-Forschung A, v.
203, p.379-384, 1996.
ASHIHARA, H. Metabolism of alkaloids in coffee plants: minireview. Brazilian
Journal of Plant Physiology, v. 18, n. 1, p. 1-8, 2006.
AVALLONE S.; GUYOT, B.; BRILLOUET, J.M..; OLQUIM, E.; GUIRAUD, J.P.
Microbiological and Biochemical Study of Coffee Fermentation. Current
Microbiology, v. 42, p. 252-256, 2001.
AVALLONE S.; GUYOT, B.; MICHAUX-FERRIRE, N.; GUIRAUD, J.P.;
OLQUIM, E.; PALACIO, E.J.; BRILLOUET, J.M. Cell wall polysaccharides of
coffee bean mucilage. Histological characterization during fermentation. In:
Proceedings of 18th ASIC,
Helsinki, Finland, p. 463470, 1999.
AVALLONE S., BRILLOUET, J.M.; GUYOT, B., OLQUIM, E.; GUIRAUD, J.P.
Involvement of pectolytic micro-organisms in coffee fermentation. Journal of Food
Science and Technology. v. 37, p. 191-198, 2002.
137
138
139
CAMPA, C.; BLLESTER, J.F.; DOULBEAU, S.; DUSSERT, S.; HAMON, S.;
NOIROT, M. Trigonelline and sucrose diversity in wild Coffea species. Food
Chemistry, v. 88, p. 39-43, 2004.
CARBONELL, R.J., VILLANOVA, T.N. Benefcio rpido y eficeiente del caf
mediante el uso de soda custica. El Caf de El Salvador, 22(248): p. 411-55, 1952.
CARELLI, M. L. C.; LOPES, C. R.; MONACO, L. C. Chlorogenic acid content in
species of Coffea and selections of Coffea Arabica. Turrialba, San Jos, v. 24, n. 4, p.
398-401, 1974.
CARLO G. ZAMBONINA, C.G.; BALESTA, L.; BENEDETTOB, G.E.;
PALMISANOA, F. Solid-phase microextractiongas chromatography mass
spectrometry and multivariate analysis for the characterization of roasted coffees.
TALANTA, v. 66, p. 261265, 2005.
CARVALHO, V.D., CHAGAS, S.J.R., SOUZA, S.M.C. Fatores que Afetam a
Qualidade do Caf. Informe Agropecurio, Belo Horizonte, v. 18, n. 187, p. 5-20,
1997.
CECH, C.O. Zur kenntniss des kaffeels. Journal fr Praktische Chemie, v. 22, n.1,
p. 395-398,1880.
CHOUSSY, F. Estudos tecnicos de la fermentacion del caf. 74p.
Associacin Cafeteira., 1940.
El Salvador,
140
141
142
GARCA, J.R.C.; KRAUSE, A. Michel Boudet, A.M. Evolution and current status of
research in phenolic compounds. Phytochemistry, v. 68, p. 27222735, 2007.
Gniechwitz, D.; Reichardt, N.; Ralph, J.; Blaut, M.; Steinhart, Hans; Bunzel, Mirko.
Isolation and characterisation of a coffee melanoidin fraction. Journal of the Science
of Food and Agriculture, v. 88, n. 12, p. 2153-2160, 2008.
GONZALES, S.I.; JIMENEZ-ESCRIG, A., SAURA-CALIXTO, F. In vitro antioxidant
activity of coffee brewed using different procedures (Italian, espresso and filter). Food
Chemistry, v. 90, p. 133139, 2005.
GONZALEZ-RIOS, O.; SUAREZ-QUIROZ, M.L.; BOULANGER, R.; BAREL, M.;
GUYOT, B.; GUIRAUD, J.P.; SCHORR-GALINDO, S. Impact of ecological postharvest processing on the volatile fraction of coffee beans: I. Green coffee. Journal of
Food Composition and Analysis, v., 20, n. 3, 289-296, 2007a.
GONZALEZ-RIOS, O.; SUAREZ-QUIROZ, M.L.; BOULANGER, R.; BAREL, M.;
GUYOT, B.; GUIRAUD, J.P.; SCHORR-GALINDO, S. Impact of ecological postharvest processing on the volatile fraction of coffee beans: II. Roasted coffee. Journal
of Food Composition and Analysis, 20, n. 3, 297-307, 2007b.
GOULAR, TP.F.P., ALAVES, J.D., MALTA, M.R., MAGALHES, M.M.,
PEREIRA, R.G.F.A., MAYER, L.E. Anlise comparativa entre lixiviao de potssio,
condutividade eltrica, teor de cido clorognico e mtodos de quantificao da
atividade da polifenol oxidase em extratos semipurificados de amostras de caf de
diferentes padres de qualidade. Revista Brasileira de Armazenamento, Viosa,
Especial Caf, n. 7, p. 7885, 2003.
GRAFE, V. Untersuchungen ber die herkunft des kaffeols. Monatshefte fr Chemie,
v. 33, n. 10, p. 1389-1406, 1912.
GRAHAM, L. A comprehensive survey of the acid-stable fluorescent cross-links
formed by ribose with basic amino acids, and partial characterization of a novel
Maillard cross-link. Biochimica et Biophysica Acta, v. 1297, p. 916, 1996.
GROOT, S.P.C., AND C.M. KARSSEN. 1987. Gibberellins regulate seed germination
in tomato by endosperm weakening: a study with gibberellin-deficient mutants. Planta,
v. 171, p. 525531, 1987.
GUERRERO, G.; M. SUREZ. Journal of Agricultural and Food Chemistry, V.
49, n. 5, p. 24542458, 2001
GUIMARES, A.C. (1995) Secagem de caf (Coffea arabica L.) combinando sistemas
em altas e baixas temperaturas. Dissertao (Mestrado em Engenharia Agrcola)
Universidade Federal de Viosa - UFV, 64p.
HASHIM, L.; CHAVERON, H. Evaluation of sensory attributes of coffee brews from
robusta coffee roasted under different conditions. European Food Research and
Technology, v.224, n.2, p.159-165, 2006.
143
144
145
146
Macrae, R. Eds., Applied Science Publishers Ltd, London, England, p. 115-152, 1985.
MAGA, J.A. Simple phenol and phenolic compounds in food flavor. CRC Crit.
Reviews in Food Technology, v. 10, p. 323-372, 1978.
MAHER, E.A.; N.J. BATE,W. NI, Y. ELKIND, R.A. DIXON, C.J. LAMB, Increased
disease susceptibility of transgenic tobacco plants with suppressed levels of preformed
phenylpropanoid products, Proceedings of the National Academy of Sciences. v. 91,
p. 78027806, 1994.
MANACH, C., MAZUR, A., SCALBERT, A. Polyphenols and prevention of
cardiovascular diseases. Current Opinions in Lipidology, n. 16, p. 7784, 2005.
MARRACCINI, P.; W.J. ROGERS, C. ALLARD, M.-L. ANDR, V. CAILLET, N.
LACOSTE, F. LAUSANNE, S. MICHAUX, V. Molecular and biochemical
characterization of endo-b-mannananes from germinating coffee (Coffea arabica)
grains. Planta, n. 213 296308, 2001.
MASON, H.S. Reactions between quinones and proteins. Nature, v. 175, p. 771772,1955.
MATHIEU, F.; MALOSSE, C.; FRROT, B. Identification of the volatile components
released by fresh coffee berries at different stages of ripeness. Journal of Agricultural
and Food Chemistry, v. 46, p. 1106-1110, 1998.
MATSUDA, F.; MORINO, K.; MIYASHITA, M.; MIYAGAWA, H. Metabolic flux
analysis of the phenylpropanoid pathway in wound-healing potato tuber tissue using
stable isotope-labeled tracer and LCMS spectroscopy, Plant Cell Physiology, v. 44,
p. 510517, 2003.
MATSUDA, F.; MORINO, K.; MIYASHITA, M.; MIYAGAWA, H. Metabolic flux
analysis of the phenylpropanoid pathway in wound-healing potato tuber tissue using
stable isotope-labeled tracer and LCMS spectroscopy. Plant Cell Physiology, v. 44,
p. 510517, 2003.
MAYER, F.; CZERNY, M.; GROSCH, W. Sensory study of the character impact
aroma compounds of a coffee beverages. European Food research technology, v.
211, p. 272-276, 2000.
MAZZAFERA, P.; MAGALHES, A.C.N. Cafena em folhas de Coffea e Paracoffea.
Revista Brasileira de Botnica, v. 14, n. 2, p. 157-160, 1991.
MAZZAFERA, P.; ROBINSON, S.P. Characterization of polyphenol oxidase in
coffee. Phytochemistry, v. 55, p.285-296, 2000.
MAZZAFERA, P. Chemical composition of defective coffee beans. Food Chemistry,
v. 64, p. 547-554, 1999
MELO, G.A. Purificaoda enzima polifenoloxidase do cafeeiro,sua relao com
resistncia a pragas e o controleda sntese deseu principal substrato,o
cidoclorognico. Tese (doutorado: Institulo de Biologia), 491f. Universidade Estadual
147
148
149
150
151
SAMMAN, S., Lyons, W.P.M.; COOK, N.C. Flavonoids and coronary heart disease:
dietary perspectives. In: Flavonoids in health and disease C. A. R. Evans & L. Packer
(Eds.), Marcel Dekker, New York, p. 469-482, 1998.
SANTOS, M.H.; BATISTA, B.L.; DUARTE, S.M.S.; ABREU, C.M.P.; GOUVA,
C.M.C.P. Influncia do processamento e da torrefao sobre a atividade antioxidante
do caf (Coffea arabica). Qumica Nova, v. 30 n. 3, p. , 2007.
SANZ, C.; CZERNY, M.; CID, C.; SCHIEBERLE, P. Comparison of potent odorants
in a filtered coffee brew and in an instant coffee beverage by aroma extract dilution
analysis (AEDA). European Food Research and Technology, v. 214, p. 299-302,
2002.
SCHIEBERLE, P. Quantitation of Important Roast-Smelling Odorants in Popcorn by
Stable Isotope Dilution Assays and Model Studies on Flavor Formation during
Popping. Journal of Agricultural and Food Chemistry, v. 43, n. 7, p. 24422448,
1995.
SCHOLZ, B.M.; MAIER, H.G. Isomers of quinic acids and quinide in roasted coffee.
Zeitschrift fr Lebensmitteluntersuchung und -Forschung A, v. 190, p. 132-134,
1990.
SCHNBERG, A.; MOUBACHER, R.; MOSTAFA,A. Degradation of -amino acids
to aldehydes and ketones by interaction with carbonyl compounds. Journal of
Chemical Society, v. p. 176-182, 1948.
SCHRADER, K.; LIEHNE, A.; Engelhardt, U.H.; Maier, H.G. Determination of
chlorogenic acid with lactones in roasted coffee. Journal of Science and Food
Agriculture, v. 71, p. 392-398, 1996.
SELMAR, D.; BYTOF, G. Green Coffee is ALIVE ! A review on the metabolic
processes taking place in coffee beans during processing and their implication for
modern coffee research. In: 19th International Coloquium on the Chemistry of Coffee,
Paris, 2001. In: Proceedings ASIC, 2002.
SELMAR, D.; BYTOF, G.; KNOPP, S. E.; BRADBURY, A.; WILKENS, J.;
BECKER, R. Biochemical insights into coffee processing: quality and nature of green
coffee are interconnected with an active seed metabolism. 20th International Coloquium
on the Chemistry of Coffee, 2004, Bangalore. In: Proccedings ASIC, 2004. CD-ROM.
SELMAR, D.; BYTOF, G.; KNOPP S-E. New aspects of coffee processing: the
relation between seed germination and coffee quality. 19th International Coloquium on
the Chemistry of Coffee, 2001. In: Proceedings ASIC, Paris, 2002.
SELMAR, D.; BYTOF, G.; KNOPP, S-E. 2002. New aspects of coffee processing the
relation between seed germination and coffee quality. In: 19th International Coloquium
on the Chemistry of Coffee, Paris, 2001. In: Proceedings ASIC, 2002.
152
153
154
155
156
No.
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
TrA
6,11
7,85
8,30
10,09
10,35
11,08
11,47
12,17
13,01
13,12
13,15
13,49
13,73
13,80
14,48
15,27
15,51
15,66
15,86
16,11
16,74
17,03
17,35
17,56
17,75
17,93
18,23
18,27
18,67
18,87
18,97
19,27
19,50
19,72
20,32
20,54
20,67
20,84
20,87
21,04
Composto
butanoato de etila
3-metil-1-butanol- acetate
1-methyl-1H-pirrol piridina
D-limoneno
pirazina
metil-piridina, 2-(metoxi-metil)-furano
2-metil-3(2H)-dihidro-furanone
3-piridinamina
metil-pirazina
cido actico, ster hexlico
4-metil-tiiazola
2-metil-2-cido-propenico-(dimetilamino)-ster etlico
3-metil-piridina
2,5-dimetil-pirazina
2,6-dimetil-pirazina
etil-pirazina
4-hidroxi-3-hexanona
2,3-dimetil-pirazina
2-metil-2-ciclopenten-1-ona
1-hidroxi-2-butanona
1-pentil-1H-pirrol
2-etil-6-metil-pirazina
2-etil-5-metil-pirazina
tetradecano
2-etil-3-metil-pirazina
trimetil-pirazina
2-(n-propil)-pirazina
3-etil-5-metil-piridina
5-metil-2-(3H)-furanona
2,6-dietil-pirazina
cido actico
3-etil-2,5-dimetil-pirazina
furfural
cis-Linalol oxide
2-metil-5-propil-pirazina
alpha-cubebeno
2-[(metil-tio)metil]-furano
2-etenil-6-metil-pirazina
IRLB
1050
1104
1115
1159
1165
1183
1193
1211
1233
1236
1237
1246
1253
1254
1273
1294
1300
1305
1310
1317
1335
1343
1352
1358
1364
1369
1377
1378
1390
1395
1398
1406
1413
1420
1438
1445
1449
1454
1455
1460
157
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
67
68
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
79
80
81
82
83
84
85
86
21,26
21,36
21,51
21,94
22,34
22,50
22,58
22,72
23,19
23,75
23,81
24,37
24,47
24,62
24,90
25,05
25,29
26,3
26,73
26,94
27,05
27,16
27,41
27,52
28,19
28,17
28,39
28,74
29,07
29,65
29,79
29,79
29,91
30,33
30,49
30,75
31,06
31,28
31,42
31,66
32,19
32,54
33,22
33,39
33,64
34,02
3,5-dietil-2-metil-pirazina
furfuril, formato
1-(2-furanil)-etanona
benzaldedo
2,5-dimetil-3-isobutil-pirazina
3-hexanona
2,3-dimetil-2-ciclopenten-1-ona
2-furano-metanol, acetate
alfa-cedreno
5-metil-2-furano-carboxaldedo
furfuril, propanoato
2,2'-bifurano
etenil-pirazina
2-furano-metanol, propanoate
2,2'-metileno-bis-furano
2-acetil-5-metil-furano
5H-5-metil-6,7-dihidro-ciclopentanona
2-metil-5-(2-propenil)-pirazina
2-furano-metanol
trietil fosfato
2-(2-furanil-metil)-5-metil-furano
1-(5-metil-2-pirazinil)-1-etanona
1-(6-metil-2-pirazinil)-1-etanona
metil-2-furano, cido butanico
2-metil-5-propenil-pirazina
pirazinamida
4,4-dimetil-2-ciclohexen-1-ona
5,6,7,8-tetrahidroquinoxalina
2(5H)-furanona
salicilamida
etil 3-furoato
cido furano-carboxlico, ster metlico
trigonelina
N-acetil-4(H)-piridina
2,4-dimetil-1,3-ciclopentanodiona
3-acetil-2,5-dimetil-tiofeno
2-buten-1-one, 1-(2,6,6-trimeth...
1-(2-furanil-metil)-1H-pirrol
2-hidroxi-2-ciclopenten-1-ona
3-metil-3-hexen-2-ona
2-metoxi-fenol (guaiacol)
lcool benzlico
2-hidoxi-3-etil-2-ciclopenten-1-ona
4-(2-furanil)-3-buten-2-ona
lcool fenetlico
2-fenil-2-butenal
1466
1469
1474
1487
1499
1504
1506
1511
1525
1542
1544
1562
1565
1569
1578
1583
1590
1623
1637
1644
1648
1651
1660
1663
1685
1685
1692
1704
1715
1736
1741
1741
1745
1760
1765
1774
1785
1793
1798
1807
1826
1838
1863
1869
1878
1892
158
87
88
89
90
91
92
93
94
95
96
97
98
99
100
101
102
103
104
105
106
107
108
109
110
111
112
113
114
115
116
117
A
34,16
34,49
34,61
34,97
35,20
35,51
35,66
35,66
36,06
36,17
36,18
36,52
36,67
36,84
38,20
38,52
40,27
40,72
41,91
42,62
43,33
43,64
43,80
45,23
45,54
45,95
46,25
47,25
47,65
48,95
64,36
2-amino-2,4,6-cicloheptatrien-1-ona
2-tiopheno-metanol
benzotiazola
7-quinolinamina
1-(1H-pirrol-2-il)-etanona
2,2'-[oxi-bis-(metileno)]-furano
4-1H-quinazolinona
6-quinazolinol
fenol
8-metil-cumarina
maltol
1H-pirrol-2-carboxaldedo
4-etil-2-metoxi-fenol (etil-guaiacol)
2-metoxi-4-(2-propenil)-fenol (eugenol)
3-metil-fenol
1-metil-1H-pirrol-2-carboxaldedo
3-etil-fenol
2-metoxi-4-vinil-fenol-(vinil-guaiacol)
-furfurilideno--furil-metilamina
2-isoamil-pirazina
4-amino-fenol
2-metil-5-propil-pirazina
1-metil-2-(3-piridinil)-pirrol
cido orto-fenol-propenico
6-metil-3-piridinona
3-piridinol
indol
4-metil-1H-indol
5-(hidroxi-metil)-2-furano-carboxaldedo
vanilina
cafena
1897
1910
1914
1928
1937
1948
1954
1954
1969
1974
1974
1987
1993
1999
2052
2064
2135
2153
2203
2234
2265
2278
2285
2350
2364
2383
2397
2443
2461
2521
ND
Tr: tempo de reteno em coluna DB-Wax. B. IRL: ndice de reteno linear, utilizando
padres de Hidrocarbonetos.
159
Caf
verde
cereja
cereja
cereja
natural
natural
despolpado
desmucilado
limpo
peliculado
limpo
limpo
limpo
abaixo de 8
546
12
15
12
verde
verde
verde
verde
verde claro
regular
regular
bom
bom
bom
Seca
boa
boa
boa
boa
boa
Fava
bica corrida
chato
chato
chato
chato
Parmetro
Estado do gro
Tipo
Defeitos
Cor
Aspecto
bia natural
11,6
11,4
11,5
11,7
11,7
Verdes (%)
51,56
0,65
Quebrados (%)
5,68
2,44
2,68
0,79
2,59
Peneira 18 (%)
11,79
22,58
23,80
21,28
42,24
Peneira 17 (%)
23,56
45,90
43,75
45,79
36,49
Peneira 16 (%)
26,99
30,78
31,79
32,72
20,89
Peneira 15 (%)
17,37
0,74
0,71
0,21
0,38
Peneira 14 (%)
11,98
Peneira 13 (%)
5,90
Fundo
2,41
Impurezas
160
2. Prova de Xcara
Parmetro
caf verde
caf cereja
caf cereja
caf cereja
caf bia
natural
natural
despolpado
desmucilado
natural
Aroma*
regular
muito bom
muito bom
muito bom
muito bom
Bebida
mole
dura
mole
mole
mole
Suavidade
sim
no
sim
sim
sim
Carter adocicado
no
no
leve
leve
leve
mdia
intensa
intensa
intensa
mdia
Acidez
leve
mdia
leve
leve
mdia
Amargo
forte
mdio
leve
leve
leve
Aspereza
presente
presente
ausente
ausente
ausente
Adstringncia
presente
presente
ausente
ausente
ausente
Corpo (intensidade)
*Segundo os avaliadores a percepo do parmetro aroma feita pelo trato olfativo, melhor definido como odor, para efeito da interpretao dos resultados do
trabalho atual.
161
3. Parecer tcnico
162