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CONSERVACION DE HONGOS FILAMENTOSOS

DIEGO ALEJANDRO AVILA RINCN-117003105


SANDRA MILENA HERNANDEZ TRUJILLO-117003116
OLGA DANIELA ROMERO ROBAYO-117003134
UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS
FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS Y RECURSOS NATURALES
INGENIERIA AGROINDUSTRIAL
RESUMEN: En esta prctica se
determin la pureza del hongo con
ayuda del azul de lactofenol para
verificar que se estaba trabajando
con
trichoderma
harzianum,
seguidamente se tom el hongo y
se le
realiz la conservacin
mediante el mtodo a mediano
plazo utilizando el aceite mineral,
despus se llev a cabo la
obtencin de conidios por medio de
perlas de vidrio causando el
desprendimiento
de
estos,
posteriormente se hizo el recuento
en la cmara Neubawer a partir de
las diluciones hechas en la prctica.
MATERIALES Y METODOS
Pruebas de pureza: Se realiz la
preparacin de azul de lactofenol
para verificar la pureza del
microorganismo.
Conservacin en aceite mineral:
Para esta parte a cada lado de la
mesa se entreg una caja con un
cultivo de Trichoderma harzianum, a
partir de esta caja se obtuvo una
muestra utilizando la pipeta pasteur
invertida, de tal manera que se
obtuviera un disco de 5mm de
dimetro que contiene un fragmento
de agar y el microorganismo. Bajo
condiciones de esterilidad, se
destapo el tubo eppendorf y se
deposit dentro el disco de agar, se
tap el tubo y posteriormente se
guard en refrigeracin. Se repiti

el mismo procedimiento para el tubo


eppendorf vacio.
Al trmino de 5 das conservacin,
se coloc los discos que se
depositaron dentro de los tubos
eppendorf en agar saboureaud.
Finalmente se midi desde el da 1
con una regla el dimetro del
crecimiento del micelio y se realiz
una curva de crecimiento.
Desprendimiento de conidios con
perlas de vidrio: Se tom el cultivo
de Trichoderma y bajo condiciones
aspticas se destapo la caja
seguidamente se adiciono los 5 ml
de solucin salina al 0.85% p/v con
Tween al 0.1% v/v, posteriormente
se coloc las tres perlas de vidrio y
se empez
a moverlas con
movimientos de rotacin para
favorecer el desprendimiento de
conidios. Con la pipeta pasteur se
tom la totalidad de muestra y se
transfiri al tubo de 12x 754 mm
solo.
A partir de este tubo se prepar
diluciones decimales 101 y 102,
posteriormente
se
realiz el
recuento en cmara utilizando las
dos diluciones. Finalmente se
conserv
esta
suspensin
a
temperatura de refrigeracin.

RESULTADOS Y DISCUSIONES
Tabla #1: caractersticas
trichoderma harzianum
Microorga
nismo
evaluado

Trichoder
ma
harzianum

del

Caracter
sticas
macrosc
picas

Caracter
sticas
microsc
picas

De color
blanco
verdoso
que s e
torna
a
verde
oliva con
el tiempo,
formando
anillos
concntric
os.

Micelio
hialino y
regularme
nte
septado,
micelio
delgado,
conidios
redondos
agrupado
s
en
cabezas
mucilagin
osas,
conidios
originados
de
una
clula
conidiog
nica
especifica
(filide),
conidi
forohialino
y
ramificado
.

Tabla #2: recuento de conidios/ml.


Microorganismos
10-2

Conidios/ml

Tabla
#3:
Mediciones
crecimiento micelial.
Da

del

Crecimiento
micelial (mm)

1
2
3

Los mtodos de conservacin a


corto y mediano plazo de hongos
filamentosos
utilizados
en
la
prctica,
permitieron
una
recuperacin
satisfactoria
de
Trichoderma harzianum al mantener
una viabilidad del 100% despus de
su conservacin en agua destilada y
aceite mineral.
La conservacin en agua destilada
se realiz a partir de una
suspensin de esporas, estas se
cuantificaron por medio de la
tcnica de cmara de Neubawer
(tabla 2), donde se evidencio la
seleccin de un cultivo bien
desarrollado y el inoculo suficiente
para asegurar la viabilidad del
cultivo
El aceite mineral es un buen
conservante
debido
a
que
disminuye las concentraciones de
oxgeno,
que
genera
una
disminucin o detenimiento en el
metabolismo de la bacteria, adems
no solo permiti una adecuada
recuperacin
de
la
bacteria
filamentosa sino que evito una
posterior contaminacin. En el
mtodo de conservacin con aceite
mineral destacndose el desarrollo
de micelio y la fase reproductiva, sin
presentar algn tipo de variacin en
sus caractersticas morfolgicas.

Para el recuento de conidios en la


cmara de Neubawer se identific
que el hongo tena una buena
esporulacin por tal motivo se tom
la dilucin 10-2 y no fue necesario
hacer un mayor nmero de
diluciones para poder obtener un
posible informe sobre la poblacin
inicial del microorganismo , para
que un banco de cepas se
mantenga satisfactoriamente deben
sobrevivir entre un 70% y 80%, el
rango encontrado en la realizacin
de este laboratorio fue de un 100%,
indicando que el banco de cepas a
base
de
conservacin
en
suspensin de conidios en agua y
discos de agar en aceite mineral
son mtodos de conservacin
eficientes
para
Trichoderma
harzianum.

BIBLIOGRAFA
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Aguirre A. Manual de introduccin a
la biotecnologa. Facultad de
Ciencias.
Editorial
Pontificia
Universidad
Javeriana.
Bogot
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Panizo M. Reviakina V. Montes W.,
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Icochea A. Manual de laboratorio


para el manejo de hongos
Entomopatgenos.
Centro
internacional de papa (CIP). Per.
Lima. 2004.

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