UNIVERSIDAD TCNICA PARTICULAR DE LOJA

LABORATORIO DE BIOTECNOLOGA MICROBIANA

Prctica # 3
1. Tema: Preparacin de medio de cultivo slido para microorganismos degradadores de
cianuro libre (CN-)
2. Fundamento terico:
Un medio de cultivo es un material nutritivo preparado para el crecimiento de
microorganismos en un laboratorio. Para favorecer el crecimiento microbiano un medio
debe proporcionar fuente de energa, de carbono, de nitrgeno, de fosforo y cualquier
otro factor de crecimiento que el microorganismo no pueda sintetizar (Tortora, Funke,
& Case, 2007).
Los medios de cultivo se emplean con diferentes propsitos: la enumeracin, el
aislamiento, y el mantenimiento de algn tipo de bacteria en particular. Se pueden
clasificar segn su origen (naturales, sintticos, semi-sintticos), segn su consistencia
(lquidos, slidos y semislidos) y segn su composicin (comunes, enriquecidos y
selectivos) (Alarcn, 2001; Comte, 2006; Tortora, Funke, & Case, 2007).
3. Objetivos
3.1. Preparar un medio de cultivo para el aislamiento de microorganismos degradadores de
cianuro libre (CN-).
3.2. Identificar el crecimiento de los microorganismos en un medio slido.
3.3. Diferenciar el crecimiento de los microorganismos a diferentes concentraciones de
cianuro libre (CN-).
4. Metodologa
Preparacin del medio slido
a. Pesar de forma precisa cada compuesto descrito en la Tabla 1.

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b. Disolver cada compuesto en un baln de aforo de 1000 mL.

c. Ajustar el pH entre 10 a 11 con NaOH (0,1 N).
d. Una vez regulado el pH, pesar cianuro de sodio (NaCN) y adicionar al medio para
alcanzar concentraciones de 50, 100 y 200 ppm de cianuro libre (CN-).
e. Medir la concentracin de CN- con el electrodo de ion selectivo de cianuro, la
lectura del electrodo ser en mV. (Usted debe determinar la concentracin de CNen ppm utilizando la curva de calibrado Fig. 1)
f. Calentar el medio hasta ebullicin en un matraz de 1000 mL.
g. Enfriar el medio hasta una temperatura moderada y colocar en cajas Petri.
h. Enfriar por completo el medio hasta que se solidifique.
i. Inocular cada caja con un aza, realizando estras sobre la superficie del medio.
Tomar como inculo cultivos de microorganismos degradadores de cianuro aislados
previamente.
j. Preparar soluciones de 50, 100 y 200 ppm de NaCN y aforar con NaOH (0,1 N).
k. Recortar pequeos pedazos de papel y sumergirlos en las soluciones de NaCN de
50, 100 y 200.
l. Colocar cuidadosamente con una pinza los pedazos de papel sobre medio slido en
la caja Petri inoculada, esto se lo realiza con el fin de que sobre los papeles crezcan
los microorganismos que toleren mayores concentraciones de CN-. (Este paso se lo
debe realizar de 3 a 4 das)
m. Incubar las cajas de Petri inoculadas a 30 C.

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n. Una vez que los microorganismos se han desarrollado, guardar las cajas Petri en
refrigeracin para posteriormente utilizarlas en ensayos de biodegradacin en
matraces.
Tabla 1. Composicin del medio de cultivo
Concentracin (g L-1)
0,274
0,105
0,210
0,086
0,021
0,0005250
0,0001875
0,1875
7,597
12,1376
3,5698
2,1419

Compuesto
KH2PO4
MgSO4*7H2O
K2HPO4
CaCl2*2H2O
FeSO4*7H2O
Na2MoO4*2H2O
MnCl2*4H2O
ZnSO4*7H2O
Acetato de sodio
Agar-Agar
Peptona
Extracto de levadura
5. Resultados y discusin

6. Preguntas
6.1. Qu es el agar? De dnde se lo extrae? Para qu se lo emplea en los medios de
cultivo?
6.2. Cul es la funcin de cada uno de los compuestos de la Tabla 1, en el desarrollo
de los microorganismos?
6.3. Para qu nos sirve un medio slido?
6.4. Cmo clasificara usted el medio para microorganismos degradadores de cianuro?
Por qu?
6.5. Por qu es necesario regular el pH antes de colocar el NaCN en el medio de
cultivo?

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6.6. Por qu cree usted que no es necesario autoclavar el medio de cultivo para los
microorganismos degradadores de cianuro?
6.7. Investigue sobre los tipos de microorganismos capaces de degradar CN-.
6.8. Por qu el cianuro es perjudicial para los organismos vivos?
6.9. Qu industrias generan como desecho cianuro?
6.10. Segn normas nacionales e internacionales cul es la concentracin de cianuro
permisible de un desecho industrial.
Referencias
1. Alarcn, L. (2001). Manual de practicas de Microbiologa bsica y Microbiologa de
alimentos. Programa de Nutricin. (Reimpresa ed.). Jurez, Mxico: Universidad
Autnoma de Ciudad Jurez.
2. Comte, A. (2006). Introduccin a la microbiologa (Vol. 2). San Jos, Costa Rica:
EUNED.
3. Lpez, L., & Torres, C. (2006). Medios de cultivo. Universidad Nacional del Nordeste,
Corrientes.
4. Tortora, G., Funke, B., & Case, C. (2007). Introduccin a la Microbiologa. Buenos
Aires: Ed. Mdica Panamericana.
Anexos

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350
300

y = 26.043ln(x) + 227.78
R = 0.9999

CN- (mV)

250
200

Series1

150
100

Log. (Series1)

50
0
0

10

20
CN-

30

(ppm)

Figura 1. Curva de calibracin de cianuro libre.