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Anlisis Instrumental I
TEMA 1:
METODOLOGA ANALTICA
1.1. INTRODUCCIN
Qumica analtica: estudia el conjunto de principios, leyes y trminos cuya finalidad
es la determinacin de la composicin qumica de una muestra natural o artificial. Este
conjunto de leyes y trminos utilizados para dicho fin, constituyen el anlisis qumico.
La qumica analtica se divide en dos ramas principales:
-
Cualitativa Qu hay ?
Cuantitativa En qu cantidad ?
Anlisis Instrumental I
Ejemplo:
Dos clientes, quieren determinar el porcentaje de Hg en la muestra de cada
uno:
A Quiere conocer con gran exactitud el contenido en Hg en un cargamento de
mineral donde Hg es compuesto mayoritario, por lo que, podr proveer al laboratorio muestra
en cualquier proporcin.
B Contenido en Hg en una moneda antigua con Hg a un nivel de ppm, exigiendo
que no sea daada la moneda.
An cuando el problema es el mismo, el mtodo analtico tendr grandes diferencias:
-2-
Anlisis Instrumental I
Muestreo: proceso por el cual se obtiene una fraccin representativa siendo a menudo
esta etapa la ms difcil de todo el procedimiento analtico, y la que limita la exactitud de todo
el procedimiento.
Conceptos:
-3-
Anlisis Instrumental I
Lote: material completo del que se toman las muestras. Ej.: todo el agua de
un lago.
A menudo, los lotes estn formados por unidades mustrales. Ej.: Cajas
individuales de un camin.
Anlisis Instrumental I
1. Muestreo de Slidos:
2. Muestreo de Lquidos:
Muestreo de gases:
Gas libre en gran cantidad: llenar un tubo con el gas con desplazamiento del
aire que en principio contienen estos recipientes, que despus se cierran por
medio de llaves o sellando sus extremos.
-5-
Anlisis Instrumental I
4. Errores de muestreo
Los grandes errores son debidos con ms frecuencia a un muestreo incorrecto que a
una aplicacin del mtodo no adecuado.
Entre los qumicos analticos, existe un dicho popular: A menos que se conozca con
certeza la historia completa de una muestra cualquiera, el analista har bien en no perder su
tiempo analizndola .
La libreta del analista debe contener informacin de cmo se colecta y almacena la
muestra, antes de describir como se realiza el anlisis.
Las causas ms frecuentes de error son:
-
Anlisis Instrumental I
Ejemplo:
Sm = 10%
-
S Sa = 5% :
So = ( 012 + 0052 )05 = 011 = 11%
S Sa = 1%
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Anlisis Instrumental I
-8-
Anlisis Instrumental I
interferencias.
-9-
Anlisis Instrumental I
Anlisis Instrumental I
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Anlisis Instrumental I
Separaciones cromatogrficas
Aqu los componentes se reparten o distribuyen entre dos fases, una de las
cuales es mvil (puede ser un lquido, un gas, o un fluido supercrtico, que
fluye a travs de este lecho estacionario.
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Anlisis Instrumental I
pues solo constituira una mera recoleccin de datos y una prdida de tiempo valioso.
1.2.8. Acciones
Se incluye en esta etapa, ya que las conclusiones del proceso analtico completo deben
conducir a una meta. Estos resultados pueden llevar a una mejora en los niveles de
contaminacin ambiental o en la calidad de una manufactura, condena de un criminal, entre
otros ejemplos.
TEMA 2:
Anlisis Instrumental I
Una alicuota
x (Media de n resultados)
(Media de resultados)
Contaminacin de la muestra
Todos estos errores que ocurren, incluso en los laboratorios mejor controlados, se
reconocen con mucha facilidad en consecuencias en el anlisis. Solo tenemos que distinguir
con detenimiento entre los errores sistemticos y aleatorios.
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Anlisis Instrumental I
- 15 -
Anlisis Instrumental I
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Anlisis Instrumental I
Xv = verdadero valor
Ea = X Xv
siendo X
N
B.) Error Relativo: error absoluto o medio expresado como % del valor verdadero:
Xi Xv
ER
100
Xv
X Xv
ER
100
Xv
252 262
100 38 %
262
(x
x)2
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05
Anlisis Instrumental I
N1
x2
05
100
x
Sus unidades son %, y es un ejemplo de error relativo, es decir, es una estimacin del
error dividida por una estimacin del valor absoluto de la cantidad medida.
Los errores relativos se utilizan con frecuencia en la comparacin de las precisiones de
los resultados obtenidos y son importantes en el clculo de la propagacin de errores.
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Anlisis Instrumental I
Exp.
x 2 22
2
Un anlisis un poco ms detallado demuestra que cualquiera que sean los valores de
y , aproximadamente un 60 % de los valores de la poblacin caen dentro de de la media,
cerca de un 95 % se ubican dentro de 2 de la media, y cerca de un 997 % se encuentran
dentro de 3.
La distribucin normal no solo se obtiene cuando se realizan mediciones repetidas de
una misma muestra, tambin los resultados obtenidos a menudo se adaptan a la distribucin
normal cuando se mide la misma magnitud para diferentes muestras de la misma poblacin.
2.4. DISTRIBUCIN MUESTRAL DE LA MEDIA O ERROR ESTNDAR DE LA
........MEDIA
Hemos estudiado que la distribucin estndar se encuentra relacionada con el error
probable de cada observacin individual. Si de una poblacin infinita se toman diversas
muestras aleatorias, todas de n observaciones, los valores medios de los diversos grupos de n
observaciones, presentarn una cierta dispersin tanto menor cuanto mayor sea n.
En el limite cuando n tiende a infinito, la media de cada muestra tiende a la media de
la poblacin (, entonces su dispersin tiende a cero.
La desviacin estndar de la media o error estndar de la media, es inversamente
proporcional a la raz cuadrada del nmero de observaciones:
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Anlisis Instrumental I
m e.e.m.
t
n
Intervalo, limite de confianza
x 196
x 196
Tambin se utiliza con diferencia el intervalo de confianza al 99 % que viene dado por:
x
< x
00165
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Anlisis Instrumental I
0500 196
50
50
0500 00046 gr / m
A medida que el tamao de la muestra disminuye la incertidumbre al utilizar S para
aproximar aumenta, y a fin de permitir usar S, la ecuacin usada para calcular los limites
de confianza se puede modificar como:
S
x t
EJERCICIOS:
Se determin el contenido de ClNa de una muestra de orina, utilizando un electrodo
selectivo de iones, obtenindose los siguientes valores:
102 mM, 97 mM, 99 mM, 98 mM, 101 mM, 106 mM
x 1005 mM;
S = 327 mM;
n 1 = S; Nivel de confianza = 95 %; t = 257
1005 257
327
(1005 34) mM
(1005 54) mM
Los limites de confianza se pueden utilizar como una prueba para detectar errores
sistemticos como se muestra en el siguiente ejemplo:
Se comprueba la escala de absorbancia de un espectrofotmetro a una concreta,
usando un patrn que da una absorbancia de 047. Los valores determinados fueron 10, de los
que se obtuvieron unos valores de: x = 0461 y S = 003. Calcular el intervalo de
confianza del 95 % de la absorbancia media y decir se existe un error sistemtico.
0003
0461 226
10
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Anlisis Instrumental I
0463
0461 0002
Esta fuera del rango 047, por lo que podemos decir que existe un error sistemtico en
estas afirmaciones.
La relacin Q
para un nivel de confianza determinado. Si la relacin calculada resulta mayor o igual que el
valor tabulado, se puede rechazar la observacin sospechosa.
Determinar la concentracin de nitrato (NO2-) en una muestra de agua, teniendo en
cuenta los siguientes resultados:
Anlisis
[NO-2] gr/L
1
0403
2
0410
3
0401
4
0320
0410 0320
070
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Anlisis Instrumental I
0380 0400
0606
0413 0380
Para n = 7 y 95 % de confianza, obtenemos una Q terica de 0568 < Q calculada
s tendramos que rechazar 0380
Es importante tener en cuenta, que para un nivel de confianza del 95 %, existe un
50 % de riesgo de rechazar incorrectamente un valor sospechoso.
Cuando las medidas se repitan unas cuantas veces, lo que es normal en el anlisis
qumico, el rechazo de un valor origina una gran variacin sobre la media y la desviacin
estndar. Adems, debe evitarse el hecho de tomar tres medidas y rechazar la que ms difiere
de las otras dos. En general, se puede demostrar que se obtiene una estimacin ms confiable
de la media utilizando el valor que esta en medio de los otros tres, en lugar de utilizar la
media de los dos que no fueron rechazados. Pueden presentarse tambin valores sospechosos
que pueden ser los dos prximos, o uno a cada extremo del intervalo de valores.
Esto origina una reduccin en el valor calculado de Q, ya que en el primer caso se
produce una reduccin del numerador, y en segundo un aumento del denominador. En este
caso es necesario emplear una prueba para un par de valores anmalos.
B.) Otro criterio de rechazo (Test Tn)
xq x
Tn
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Anlisis Instrumental I
S
Rechazo sii Tn calculada > Tn terico
Ejemplo:
El anlisis de una muestra de calcita dio unos porcentajes de CaO de:
[CaO]
5595
5600
5604
5623
054
028
Como Q < Q terica no se rechaza
Aplicar Test Tn a estos datos:
x 5606
S 0107 para n 6
5623 5606
Tn
0107
159
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Anlisis Instrumental I
14270102
5 cifras significativas
6302106
92500 Este es un caso ambiguo, porque segn como se exprese tendr diferentes
cifras significativas:
92500
925104
3 cifras significativas
9250104
4 cifras significativas
92500104
5 cifras significativas
2 cifras
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Anlisis Instrumental I
Se puede calcular el error que afectar al resultado final, a partir de los errores que
afectan a cada uno de los datos experimentales de partida.
La naturaleza de los clculos para tener en cuenta los errores aleatorios y sistemticos
es diferente, ya que no se propagan de igual manera. Esto se debe a que algunos errores
aleatorios se compensan entre s, mientras que cada error sistemtico ocurre en un sentido
definido y conocido.
Ejemplo:
Si el resultado final de un experimento Y viene dado por la suma A y B. Si A y B
tienen un error sistemtico de +1, es evidente que el error sistemtico ser +2. Sin embargo, si
A y B tienen un error aleatorio de 1, el error aleatorio de Y no es 2. Esto se debe a que en
ocasiones el error aleatorio de A ser positivo, y el de B negativo o viceversa, siendo de
esperar que ambos errores se neutralicen en cierta extensin.
05
Ejemplo:
En una valoracin la lectura final de la bureta es 3,51 ml y la inicial es 15,67 ml.
Ambas con una desviacin estndar de 002 ml.
su desviacin estndar?
Vol. (utilizado) = 1567 351 = 1216 ml
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Anlisis Instrumental I
es una constante, existiendo una relacin entre los cuadrados de las desviaciones estndar
relativas:
05
Sy
Sa
Sb
Sc
Sd
If
k c l Io
donde los parmetros se definen como una estimacin de las desviaciones estndar relativas.
d.e.r = (22 + 022 + 022 + 052 + 12)05 = 23 %
Puede observarse que la d.e.r. del resultado final no es mucho mayor que la mayor de
todas las d.e.r., usadas para calcularla. Esto es fundamentalmente una consecuencia de elevar
al cuadrado las d.e.r., y explica una cuestin general, cualquier esfuerzo por mejorar la
precisin de un experimento, debe dirigirse a mejorar la precisin de los valores menos
precisos.
- 27 -
Anlisis Instrumental I
Cuando una cantidad se eleva a una potencia (b3), el error no se calcula como para una
multiplicacin (bbb), debido a que las cantidades implicadas no son independientes.
Entonces, si Y = bA :
Sy
Sb
b
Sy
Sx
dy
dx
Ejemplo:
La absorvancia de una
muestra
dT
log e
T
0434
T
log e
0434
0866
0501
0001
0434
00008
0501
Es importante observar que para este mtodo experimental se pueden encontrar las
condiciones para que sea mnima la d.e.r.
100 A
d.e.r. de A
A
100 T log e
T log T
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Anlisis Instrumental I
Ejemplo:
La ecuacin de Nerst aplicada a un anlisis potenciomtrico es la siguiente:
RT
E E +
ln c
nF
dE
c 40 n E exponencial {40 n (E E)} 40 n c E
c
La d.e.r. de c ser = 100
c
40 n E (%)
100
c
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Anlisis Instrumental I
y ka a kb b kc c ...
El error sistemtico total puede ser a veces cero (s se usa una balanza con un error de
001 gr para pesadas utilizadas en la preparacin de una disolucin estndar). Puesto que el
peso del soluto se calcula por diferencia entre dos pesadas, se eliminan los errores
sistemticos.
B.2.) Expresiones multiplicatvas
ab
Si Y se calcula de la forma y = k
cd
y
b
n
TEMA 3:
ANLISIS INSTRUMENTAL: CALIBRACIN
1. INTRODUCCIN
- 30 -
Anlisis Instrumental I
Anlisis Instrumental I
Teniendo en cuenta que cada uno de los puntos de la grfica est sujeto a
errores, cul es la mejor recta que pasa por esos puntos?
Anlisis Instrumental I
Generalmente hay una relacin lineal entre la seal analtica Y, y la [ ] X. Por ello,
los datos se ajustan a una recta por el mtodo de mnimos cuadrados, es decir,
minimizando la suma de los cuadrados de los residuos Y.
Una vez establecida la grfica de calibracin se puede obtener la [ ] de analito en
cualquier muestra problema por interpolacin del valor en dicha recta.
2.1.1. Coeficiente de Correlacin momento-producto
Aqu se analiza el primer problema planteado en la pregunta anterior a*.
Supongamos que la representacin de una lnea recta toma la expresin y = b x +
a, los puntos individuales sobre la recta los denotaremos como (x 1, y1), (x2, y2), etc., siendo
l primer punto el blanco.
blanco
xi x yi y
1 < r < +1
xi x yi y
2
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Anlisis Instrumental I
r n 2 05
(1 r2)05
Este valor est tabulado y se compara usando una prueba t de dos colas y n 2
grados de libertad.
Si
(Y/X)
(Transparencia)
Aceptando que las desviaciones solo se producen en las ies, la recta buscada ser
aquella que minimice las desviaciones o residuos (diferencia entre el valor real y el
calculado) de la variable Y, entre los puntos experimentales y la lnea calculada.
Como los residuos de Y algunas veces sern negativos y otros positivos, se intenta
minimizar la suma de los cuadrados de los residuos. Esto explica el uso del trmino de
mnimos cuadrados para este procedimiento.
La recta buscada pasa por el centro de gravedad, y su pendiente y ordenada en el
origen sern:
xi x yi y
xi
a y b x
Anlisis Instrumental I
xi x yi y
xi x 2
x
y 3
6
b
93
a y b x
y 193 x 152
Sb
{ (xi x)2 }05
Sa SY/X
05
xi
n (xi x)2
yi y )2
SY/X
n2
05
- 35 -
Anlisis Instrumental I
deseado
y n 2 grados de libertad.
De manera similar, los limites de confianza para la ordenada en el origen son:
a t Sa
Ejemplo:
Calcular los limites de confianza y la desviacin estndar para la pendiente y
ordenada en el origen. (Datos en la transparencia )
Sy/x
05
09368
5
04329
xi x 2
Sb
Sy/x
xi x
05
n 2 5
t = 257
07329
112
00409
b 93 257 00409
95 %
b 93 011
x2 364
Sa Sy/x
x2
05
02950
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Anlisis Instrumental I
n xi x 2
a 152 257 02950 a 152 076
Clculo de la Concentracin
Una vez determinadas la pendiente y la ordenada en el origen en la recta de
regresin, el fcil calcular el valor de x correspondiente al valor de y medido. Sin
embargo, cuando necesitamos estimar el error en una concentracin calculada utilizando
una recta de regresin, el problema se complica, ya que tanto la pendiente como la
ordenada en el origen estn sujetas a error.
La determinacin del error en la concentracin es bastante compleja, y en muchos
casos se utiliza la siguiente frmula aproximada:
SY/X
Sxo
B
yo
1
m
05
(yo y)2
1
n
b2 (xi x)2
S m = 1:
05
(yo y)2
SY/X
1
Sxo
b
n
b2 (xi x)2
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Anlisis Instrumental I
Ejercicio:
Calcular los valores de xo y los limites de confianza a partir de los siguientes datos:
- 38 -
Anlisis Instrumental I
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Anlisis Instrumental I
SY/X
1
SxE
b
n
y2
b2 (xi x)2
disoluciones de calibracin debe ser lo ms amplio posible. Los limites de confianza para la [
] vendrn dados por:
xE t SxE
Ejemplo:
La [ ] de Ag en una muestra de derechos fotogrficos se determin por absorcin
atmica por el mtodo de desviaciones estndar, obtenindose:
[Ag adicionada] mg / ml
Abs.
0
032
5
071
10
052
15
060
20
070
xi x) (yi y)]
(xi x)
0186
a = y b x 03218
a
b
Limites de Confianza:
SY/X
(yi y )2
05
n2
y = 06014
(xi x)2 = 700
001094
(06014)2
- 40 -
173 mg / ml
25
077
30
089
SxE
00186
Anlisis Instrumental I
(00186)2 700
SxE = 0749
xE = 173 257 0749
n2 = 5
t = 257
xE = (17,3 19) mg / ml
95 %
Aunque este mtodo es una forma de evitar los efectos de interferencia causados por
la matriz, tiene dos desventajas:
1.) Es un mtodo de extrapolacin, y por tanto, menos preciso que las tcnicas de
interpolacin.
2.) Es difcil de automatizar, y requiere de mayores cantidades de muestra.
2.3. Mtodo de Estndar Interno
Una cantidad fija de una sustancia pura (estndar interno), se aade tanto a las
soluciones muestra como a las soluciones estndar. El estndar interno debe ser una
sustancia similar al analito con una seal fcilmente medible y que no interfiere con la
respuesta del analito.
Despus se determinan las respuestas del analito y del estndar interno, y se calcula
el cociente de las dos respuestas. De esta manera, si s varia algn parmetro que afecte a
las respuestas medidas, dichas respuestas del analito y del estndar interno, deben ser
afectadas por igual. Por tanto, el cociente de respuestas depende solamente de la
concentracin de analito.
Una representacin de la relacin o cociente de respuestas analito a estndar
interno como funcin de la [ ] del analito, da una grfica de calibracin cuyo ajuste se
hace por mnimos cuadrados:
Respuesta analito
Respuesta e. interno
[analito]
[estndar interno]
- 41 -
3.
Anlisis Instrumental I
PARMETROS CARACTERSTICOS
3.1. Limites de deteccin y cuantificacin
a + 3 Sy/x = b x + a
yLD = a + 3 Sy/x
(a + 3 Sy/x a)
x
b
y = bx + a
- 42 -
3 Sy/x
b
Anlisis Instrumental I
b = pendiente
donde
- 43 -
Anlisis Instrumental I
Ss
Ss
seales
3.4. Selectividad
ningn
mtodo
analtico
est
totalmente
libre
de
mB
mA
El coeficiente de selectividad nos da la respuesta relativa del mtodo para la especie
B cuando se compara con A.
Anlogamente, el coeficiente de selectividad de C con respecto de A, ser:
KC,A
mC
mA
- 44 -
Anlisis Instrumental I
y
1162
112
00296
N de replicas
10
10
24
Calcular:
a) Sensibilidad de la calibracin.
b) Sensibilidad analtica a 1 y 10 ppm de Pb.
c) Limite de deteccin.
a)
b)
75
+ discriminacin
+ sensibilidad
+ precisin
+ selectividad
c)
45
y = yB + 3 SB
y = 00296 + 3 00082 = 0054
y = bx + a
ya
x
b
0054 00296
x
112
S
015
0025
00082
Anlisis Instrumental I
1
x
D.E.R
Sd
desviacin estndar
Como norma general, la deteccin cierta de una seal mediante un sistema visual
resulta imposible cuando la relacin seal ruido es < 2 3. S / N < 2 3
Ej. Fig. 4. 2
S / N = 4,3
S / N = 43 Mejor.
- 46 -
Anlisis Instrumental I
instrumental son:
-
Anlisis Instrumental I
Espectroscpicas
Electroqumicas
Cromatogrficas
Acopladas o conjuntadas
Diversas
4.2. MTODOS PTICOS: DEFINICIN Y CLASIFICACIN
Los mtodos pticos se definen como aquellos que miden la radiacin
electromagntica que emana de la materia o interacciona con ella.
Los mtodos pticos se dividen en:
- 48 -
Anlisis Instrumental I
mnimos consecutivos.
-
Frecuencia ( ): nmero de ciclos que pasan por segundo por un punto fijo.
- 49 -
Anlisis Instrumental I
Anlisis Instrumental I
Longitud de onda de la
hc
E
radiacin.
Frecuencia de la radiacin.
h Cte. de Planck = 662410-27Hz /
s
La ecuacin de Planck unifica las dos teoras ya que relaciona la energa de un cuanto
de radiacin (concepto corpuscular), con la frecuencia de la radiacin (concepto ondulatorio).
4.4. ESPECTRO ELECTROMAGNTICO
Abarca un intervalo enorme de longitudes de onda y frecuencias. Sin embargo las
zonas de separacin entre las regiones no estn establecidas de un modo rgido.
El espectro de la figura 5.1. est casi completo, ya que le faltan algunas regiones
que estn en los extremos. En el extremo de alta energa se han omitido los rayos csmicos
que son ms energticos que los rayos . En el extremo de baja frecuencia se ha omitido la
longitud de onda perteneciente a los generadores de corriente.
Las divisiones son funcin de los mtodos que se precisan para generar y detectar
los distintos tipos de radiacin, siendo la regin visible del espectro (percibida por el ojo
humano) muy pequea en comparacin con otras regiones espectrales.
- 51 -
Anlisis Instrumental I
Anlisis Instrumental I
mayor cuanto mayor sea el ndice de refraccin del medio dos, aunque
tambin interviene el medio uno:
(n2 n1)2
Ir
l
I0
(n1 + n2)2
Ir = intensidad reflejada
I0 = intensidad incidente
n1, n2
=
ndice de
refraccin del
medio 1 y 2.
Cuanto mayor sea la diferencia entre (n2 n1) mayor ser la reflectancia.
Si n1 = n2, no se producir reflexin y si una superficie de un objeto no
refleja luz esta es invisible, por tanto, los objetos invisibles lo son cuando
estn rodeados por un medio de ndice de refraccin idntico al suyo
propio.
4.5.3. Dispersin
La turbidemetra y nefelometra se basan en la dispersin.
Cuando la radiacin electromagntica interacciona con partculas de pequeo
tamao induce oscilaciones en las capas elctricas de la materia y los dipolos as inducidos
emiten ondas secundarias en todas las direcciones. En este proceso parte de la energa se
emite sin cambiar su longitud de onda.
Se produce dispersin cuando las partculas tienen dimensiones del mismo o menor
orden de magnitud que la longitud de onda incidente y adems se encuentran en un medio
con ndice de refraccin diferente al suyo propio si el tamao de las partculas es 2
inicialmente se produce reflexin y refraccin.
Dispersin de la luz por los gases se observa en el aire, y es la responsable del color
azul del cielo y del color rojo del sol en el ocaso.
TABLA: Partculas que producen dispersin en diversas regiones del espectro.
Dos tipos de dispersin:
-
Anlisis Instrumental I
y = A sen ( t + )
produce cuando la
Anlisis Instrumental I
2t
1
sen t
1
sen 10 t
sen nt
n
4.5.5. Difraccin
Es un proceso por el cual un haz paralelo de radiacin electromagntica se curva
cuando pasa por un obstculo puntiagudo o a travs de una abertura estrecha. Este fenmeno
es de gran importancia para la comprensin de las rendijas y redes de difraccin usadas en los
instrumentos pticos. La difraccin se demuestra con facilidad en el laboratorio cuando se
generan mecnicamente en un depsito de agua, ondas de frecuencia constante. Observando
las ondas antes y despus de pasar a travs de una abertura o rendija. Cuando la rendija es
ancha en comparacin con la longitud de onda del cuanto, la difraccin es insignificante y
difcil de detectar. Sin embargo, cuando la longitud de onda y la abertura de la rendija son del
mismo orden de magnitud, la difraccin llega a ser intensa. En este caso la rendija se
comporta como un nuevo origen a partir del cual las ondas se irradian en una serie de arcos de
cerca de 180 , de manera que la direccin del frente de onda parece como si se curvara al
pasar entre los bordes de la rendija.
- 55 -
Anlisis Instrumental I
= 0, mientras que la
Sen
- 56 -
Anlisis Instrumental I
2 d
= longitud de onda
d = distancia entre la rendija y el prisma
w = anchura del prisma que debe
w
iluminarse
4.5.6. Dispersin Refractiva
2 1
d
- 57 -
d
d
Anlisis Instrumental I
dn
dn
4.5.7. Polarizacin
La mayor parte de las fuentes de radiacin producen perturbaciones
electromagnticas en las cuales las vibraciones de los vectores elctrico y magntico tienen
lugar en todas las direcciones perpendiculares a la direccin de propagacin de la
radiacin, es decir, las direcciones de estos vectores se distribuyen igual en una serie de
planos centrados a lo largo de la trayectoria del haz, tal como se muestra en la figura: 1
25 (dispersin de la luz).
Esta radiacin no polarizada puede representarse convirtiendo hipotticamente y
mediante una suma de vectores, los infinitos planos direccionales en dos planos principales
perpendiculares. La eliminacin de uno de los dos planos de vibracin resultantes, da lugar
a la luz polarizada en un plano.
La polarizacin es la base de la polirametra y de la dispersin ptica rotatoria.
Se puede obtener radiacin polarizada en un plano mediante reflexin, dicroismo,
doble difraccin y dispersin.
4.6. TIPOS DE ESPECTROS Y MECANISMOS DE INTERACCIN
Todos los aspectos pueden dividirse en tres tipos fundamentales: de absorcin, de
emisin y rama:
4.6.1. Espectros de Absorcin
La absorcin es el fundamento de mtodos espectroscpicos en todo el espectro
electromagntico.
El proceso de absorcin puede representarse de modo sencillo:
x + h x*
x* x + Q
Anlisis Instrumental I
diferencia de energas entre el estado fundamental y uno de los estados excitados de la especie
absorbente.
Si no se cumple la condicin 2, la energa ser trasmitida sin absorcin.
Por otro lado la energa o frecuencia del fotn incidente para que pueda ser absorbido,
viene dado por la ecuacin de Bohr:
Ei = energa de la especie absorbente en el estado fundamental
h = Ef Ei
Ef = estado permitido de energa superior
- 59 -
Anlisis Instrumental I
Este hecho puede explicarse mediante los diagramas de niveles de energa. (Figura
16).
Los niveles de energa principales n son los niveles de energa electrnicos, los
cuales solo se indica en la figura y se designan por el nmero electrnico n, siendo n = 1,
2, 3, ....
Asociados a cada uno de los niveles energticos electrnicos se encuentran
los diferentes subniveles vibracionales que se designa por el nmero
cuntico = 0, 1, 2, 3,.... y cada uno de los niveles vibracionales se
encuentra subdividido en diferentes niveles rotacionales que se designan
por el nmero cuntico rotacional = 0, 1, 2,...
Esta representacin de la figura esta simplificada ya que en realidad la difraccin
de energa entre los niveles energticos electrnicos es muy grande, los niveles
vibracionales tienden a converger a energas elevadas y por otro lado, los niveles
rotacionales tienden a divergir a energas elevadas.
Las reglas de seleccin permiten generalizar qu transiciones estn permitidas y
cuales no. Algunas de estas reglas para molculas simples lineales tienen lugar en:
1.) Las transiciones rotacionales puras solo pueden tener lugar entre niveles
rotacionales adyacentes:
2.)
rotacionales simultaneas:
- 60 -
Anlisis Instrumental I
Anlisis Instrumental I
x*
x + h
- 62 -
Anlisis Instrumental I
Este autor lleg a la conclusin intuitiva y razonada de que cada unidad de longitud
del material a travs del cual pasa la radiacin absorbe la misma fraccin de radiacin.
Si dado un haz monocromtico y paralelo de intensidad Io que pasa a travs de un
espesor db del material absorbente, la perpendicular de la intensidad puede establecerse
mediante la expresin:
dI k I db
variacin de intensidad
constante de `proporcionalidad
k db
I
lo cual establece que la fraccin de radiacin absorbida es proporcional al espesor atravesado.
Si Io es la intensidad incidente, si integramos obtenemos:
I
dI
db
teniendo
en
cuenta
los
lmites
de
integracin
I
I
Log
I0
k b
I
lg
I0
k
b
2303
Esta ecuacin constituye la forma definitiva de la Ley de Lambert que es una ley
exacta y aplicable a cualquier medio homogneo y no dispensivo (gas, lquido, slido o en
disolucin), y por otro lado la constante de proporcionalidad k depende para una sustancia
absorbente dada de la longitud de onda y de la temperatura. Adems para una disolucin, la
concentracin a de permanecer constante.
Esta ley aunque es exacta no es de gran aplicacin en qumica.
- 63 -
Anlisis Instrumental I
Log
b
2303
Segn Beer:
concentracin
ac
2303
abc
La Ley de Beer es fundamental en los mtodos pticos de anlisis, ya que nos permite
calcular la concentracin de una sustancia a partir de la medida de la radiacin absorbida por
una disolucin de la misma.
La relacin I / Io se conoce como trasmitancia, y no tiene unidades.
b es el espesor de la cubeta en centmetros, siendo constante en la mayora de los
casos.
a es una constante caracterstica de la sustancia absorbente y de la longitud de onda de
la
radiacin utilizada.
Si c se expresa en moles por litro, la constante a se transforma en , que se llama
absortividad molar o coeficiente de extincin molar.
Frecuentemente se usa en el trabajo experimental:
I
% T
100
T = Transmitancia
Io
A log
Io
I
- 64 -
Anlisis Instrumental I
Ejemplo:
La intensidad de un haz de luz disminuye en un 20 % al atravesar 1 cm de un
medio absorbente. Cul ser la disminucin despus de atravesar 5 cm del mismo medio?
% T = 100 % 20 % = 80 %
log
Io
log T a b c
(1)
I
b = 1 cm
b = 5 cm
log T a b c 0096 5
048
(1) T = 0331 % T = 331
% de disminucin = 100 331 = 67 %
Ejemplo:
La absortividad molar de un soluto es igual a 110104. Hallar la absorbancia y
el tanto por ciento de transmitancia a travs de una disolucin de concentracin igual a 3 10 -5
M, en una cubeta de 05 cm:
A = b c = (110104) (05) (310-5) = 0165 = log T
T = 0685
% T = 6856
Anlisis Instrumental I
- 66 -
Anlisis Instrumental I
Sin embargo h se emite en todas las direcciones, por lo que la absorbancia aparente
es menor que la absorbancia real, en una cantidad que es igual a la emisin por resonancia que
emite en la direccin de la radiacin incidente.
La emisin por resonancia se produce casi exclusivamente en sistemas que contienen
tomos aislados.
-
Fluorescencia o Fosforescencia:
x + h x*
x* x + h + Q
Dispersin:
x + h x*
x* x + h
Anlisis Instrumental I
Errores qumicos
Errores instrumentales
Errores personales
4.8.1. Errores Qumicos
2HclO4
2H + 2CrO4 2
Anlisis Instrumental I
Se conoce como radiacin parsita a toda radiacin extraa que llega al detector, pero
que no proviene de la muestra. Puede producirse por la presencia de polvo, defectos en el
sistema ptico (rayaduras, etc.). Aunque esta radiacin parsita existe siempre sus efectos son
ms importantes a valores elevados de absorvancia tal como se puede demostrar en la
ecuacin:
I0
Is
Is
Intensidad de la radiacin parsita que
llega
al detector
I + Is
Iabsorbida
I0 + I s
I0 + I s
A log
I + Is
- 69 -
Anlisis Instrumental I
TEMA 5:
200
400
vaco
lejano
750
(nm)
vaco
prximo
Visible
UV
- 70 -
Anlisis Instrumental I
TEORA DE LA ABSORCIN
La energa y la variacin de energa de una molcula es:
Elctrico Vibracional Rotacional Translacional
2.2.
Todos los compuestos orgnicos son capaces de absorber radiacin, ya que contienen electrones de
valencia que pueden ser excitados a niveles superiores de energa.
Las energas necesarias para excitar los electrones que forman los enlaces ms sencillos son elevadas, y
caen dentro de la regin del UV de vaco (810 185) nm.
- 71 -
Anlisis Instrumental I
electrones .
El doble enlace en una molcula orgnica contiene dos tipos de orbitales
moleculares:
1) Un orbital correspondiente a un par de electrones enlazante .
2.) Un orbital enlazante correspondiente a dos electrones .
Adems de los electrones y , muchos compuestos orgnicos poseen tambin electrones n que son
no enlazantes, es decir, que no participan en el enlace.
Ej.: Formaldehido.
.
H.
x x
C . .C O
.
H .
n
El doble enlace tiene un par de e y un par de e .
Para comprender e interpretar los espectros electrnicos es preciso tener en cuenta los
tipos de transiciones que pueden ocurrir cuando una molcula absorbe radiacin. En esta
regin pueden darse cinco tipos de transiciones electrnicas:
-
Bandas de absorcin y n
Bandas de Absorcin
Bandas de absorcin n
- 72 -
Anlisis Instrumental I
Los distintos tipos de transiciones se pueden distinguir en funcin de la zona del espectro donde
aparecen por sus intensidades relativas, y en algunos casos por los desplazamientos observados al vaciar el
disolvente.
Las intensidades de absorcin suelen expresarse en trminos de la absortividad molar:
A
A b c
bc
Dependiendo del valor de , del tamao de la especie absorbente y de la probabilidad de la transicin.
Para que haya una interaccin, la radiacin debe de chocar con la molcula dentro de un espacio de
dimensiones aproximadas al tamao de la molcula y la probabilidad de la transicin es proporcional al nmero
de impactos que producen absorcin.
P : probabilidad de la transicin (varia entre 0 y 1)
087 10
20
PA
Para una transicin cuya probabilidad sea la unidad, tendremos una 105. En general, valores de
entre 105 y 104, se consideran procesos de absorcin de intensidad muy fuerte y son debidas a transiciones con
probabilidad de transicin (P) muy elevada (01 1).
Los procesos con del orden de 104 103, son procesos de intensidad fuerte y P varia entre 001 y
01.
Los procesos con inferior a 103, son procesos de baja intensidad y una P < 001.
A veces, a estos procesos se les llama procesos de transiciones prohibidas.
2.2.1.
Bandas de absorcin y n
..
> C: .O:
..
> C: :O:
.
> C: : O:
Los mximos de absorcin corresponden a transiciones *, son independientes de la naturaleza
de los tomos que intervienen en el enlace mltiple, mientras que en el caso de las transiciones n *, si tiene
mucha influencia la naturaleza de los tomos. Esto se debe a que los electrones estn deslocalizados y por
tanto son relativamente independientes de los tomos que forman el enlace, mientras que los electrones n estn
asociados cada uno a su tomo respectivo y un aumento en la electronegatividad del tomo implica que estos
electrones sean ms atrados por el tomo, lo que supone un desplazamiento hacia longitudes de onda ms
- 73 -
Anlisis Instrumental I
cortas, es decir, se necesita ms energa para excitar a los electrones que se encuentran atrados a tomos mas
electronegativos.
En las bandas de absorcin tienen influencia los sustituyentes que puedan acompaar a la molcula.
Por otra parte los sistemas con electrones * son ms fcilmente accesibles y dan transiciones
* en el ultravioleta prximo.
Estas adsorciones constituyen la base ms importante de las aplicaciones en espectrofotometra UV /
Visible.
CC=CC=C
OC=CC=O
Estos sistemas presentan una mayor intensidad de absorcin y adems la conjugacin produce el
desplazamiento de los mximos de absorcin hacia longitudes de onda mayores. (Transparencia: Tablas 2-2, 23).
Auxocromo: Son grupos saturados que cuando se unen a los cromforos desplazan un mximo de
1450 nm
menores.
- Efecto hipercrmico: Es un aumento en la intensidad de absorcin.
- Efecto hipocrmico: Supone una disminucin en la intensidad de absorcin.
Anlisis Instrumental I
transiciones , el estado excitado es ms polar que el estado fundamental, y por tanto, las interacciones
dipolo dipolo disminuyen la energa del estado excitado.
Por otra parte, los enlaces por puentes de hidrgeno o las interacciones electrostticas con disolventes
polares estabilizan los electrones n del estado fundamental ms que a los electrones del estado excitado.
Bandas de Absorcin
2.2.2.
Los electrones , son los electrones enlazantes de los enlaces sencillos y las transiciones se
producen a causa de la absorcin en el UV Visible lejano. Para trabajar en el UV Visible lejano, hay
dificultades instrumentales porque es necesario eliminar el O 2 de las disoluciones, porque absorbe. Se ha
trabajado poco en esta regin y no tiene mucha aplicacin.
Se da en los enlaces sencillos C H
Bandas de absorcin n
2.2.3.
absorben a 200 nm
absorben a 200 nm
Cuanto mayor es la electronegatividad del sustituyente, se requiere mayor energa para excitar al
electrn, debido a la mayor energa de unin entre el electrn no enlazante del tomo.
El hecho de que la mayora de los compuestos que tienen O 2 absorba a 200 nm, permite el uso de
disolventes tales como H2O, alcoholes y teres en la zona del UV prximo.
Si el compuesto posee dos sustituyentes y existe solapamiento entre los orbitales con pares de electrones
libres, el mximo de absorcin se desplaza a mayores.
mxima
_
CH3
(nm)
259
CH2 2
292
CH 3
349
- 75 -
Anlisis Instrumental I
M- L-
Se ha producido la transferencia del electrn del metal al ligando, pero puede ocurrir al revs.
En estos procesos hay dos componentes, un aceptor y un dador de electrn, y la absorcin de la
radiacin implica la transferencia de un electrn desde el dador hasta el aceptor. En consecuencia, el estado
excitado es el producto de un proceso redox o un proceso redox interno.
En la mayora de los complejos de transferencia de carga que implica un ion metlico, ste acta como
o fenantrolina con Fe 2+ y Cu2+
hV
o fenantrolina).
Fe2+ - SCN
Cl (H2O)n
hV
Fe2+ (H2O)n
Fe3+ - OH
Fe3+ (H2O)n
hV
Fe2+OH
h
NR2
= NR2
C0
=CO
2.2.5.
Los iones y compuestos de los metales de transicin, presentan dos tipos de espectros. Junto a las
bandas de absorcin de transferencia de carga, con valores de absortividad molar 103 104 presentan tambin
bandas de absorcin de campo de ligando con valores de 10-1 - 102.
- 76 -
Anlisis Instrumental I
Mientras que las bandas de absorcin de transferencia de carga aparecen fundamentalmente en el CV, y
alguna vez en el V, las bandas de campo de ligando aparecen en el V, aunque rara vez llegan hasta el UV
prximo e infrarrojo prximo.
Generalmente, estas bandas de absorcin de campo de ligando, son bandas anchas debido a que la
excitacin electrnica lleva asociada mltiples excitaciones vibracionales.
La coloracin caracterstica de iones y compuestos de transicin generalmente pueden atribuirse a
absorciones de campo de ligando. El nombre de campo de ligando proviene del hecho de que un tomo o metal
de transicin posee orbitales degenerados con igual energa y la presencia de un ligando crea un campo
electrosttico que desdobla estos niveles en diferentes niveles de energa o subniveles.
Si los subniveles d o f no estn completos, pueden producirse transiciones electrnicas entre estos
niveles de energa mediante la absorcin de radiacin de adecuada.
Ejemplo: Complejo octadrico del titanio.
Ti (H2O)6 3+
El titanio posee un orbital d con un solo electrn: Ti 3d1 (Transparencia:
Fig. 2 5).
Al unirse las seis molculas de agua al titanio se produce una repulsin de la parte negativa del agua (de
un H) con el electrn del orbital d del titanio. Se produce una degeneracin de estos niveles resultando que los
orbitales dz2 y dx2y2 tienen mayor probabilidad que los otros tres.
Este incremento representa la amplitud del desdoblamiento de estos orbitales y es una medida de la
fuerza del campo de ligando, es decir, una medida de la extensin con que un grupo complejante desdoblar los
niveles de energa, en este caso, los niveles de energa d.
El valor de este incremento es 20400 cm 1. Esto corresponde a una longitud de onda de 490 nm.,
como observamos en el espectro de absorcin de la figura 2 1 (Transparencia).
La magnitud de este incremento depende de varios factores:
1. ) La carga del ion metlico; aumentando este valor a la vez que aumenta la carga del ion metlico.
azul plido
Cu (NH3)42+
azul intenso
debido al efecto del aumento del campo de ligando cuando sustituimos el agua por el amoniaco.
Los lantnidos y los actnidos, poseen subniveles 4f y 5f incompletos, y por tanto, presentan bandas de
absorcin de campo de ligando.
- 77 -
3.
Anlisis Instrumental I
INSTRUMENTACIN
Existen dos tipos de instrumentacin para medidas de absorcin UV:
Filtros
- Fotmetros
Fototubos
Monocromadores
- Espectrofotmetros
Fototubos o tubos multiplicadores
Componentes
bsicos
de
los
fotmetros
espectrofotmetros
Los componentes bsicos son:
1.
2.
3.
4.
Detector
5.
Procesador de seales
- 78 -
Anlisis Instrumental I
Lmpara de H
Lmpara de H (Deuterio)
Lmpara de descarga de Xe
Lmpara de arco de Hg
En todos los casos, se hace pasar una corriente de electrones a travs de un
gas y las colisiones entre ellos provocan la excitacin electrnica, vibracional y
rotacional.
El espectro emitido por gases a bajas presiones es de lneas o rayas,
mientras que los de gases a altas presiones, son de bandas o continuos.
La lmpara de H, es la fuente ms sencilla utilizada en el UV;
generalmente, se usa a bajo voltaje (aproximadamente a 40 V), aunque existen
lmparas de alto voltaje. En estas lmparas de H, trabajan a una presin de 0,2 y 5
milmetros de Hg. (Transparencia. Figura 2.9)
Esta lmpara es muy adecuada para trabajar con ella en el UV prximo.
La lmpara de 2H, abarca una zona de similar a la de H, pero su
intensidad es de 3 a 5 veces superior.
- 79 -
Anlisis Instrumental I
T (%) A (%)
80
20
35
65
Filtros de absorcin
- 80 -
Anlisis Instrumental I
Filtros de interferencia
paralelas y rectangulares, y se
fabrican en diversos materiales, de manera que, permitan el paso de luz pero no absorban
radiacin. Por ello, en el UV y V utilizamos cubetas de cuarzo y en el V tambin de plstico o
vidrios de silicato para V e IR.
- 81 -
Anlisis Instrumental I
Clulas fotovoltaicas
Tubos fotomultiplicadores
La caracterstica comn a todos estos detectores es que tienen una superficie activa
capaz de absorber radiacin, de manera que, la energa absorbida causa la emisin de
electrones y el desarrollo de una fotocorriente.
-
- 82 -
Anlisis Instrumental I
devuelve al ctodo. Esta corriente fotovoltaica producida, causa una cada de potencial a lo largo de
la resistencia que es proporcional a la intensidad de corriente.
La resistencia es normalmente, la resistencia de entrada en un circuito amplificador, y por ello, la
cada de potencial puede amplificarse.
La seal del fototubo es aproximadamente unas diez veces menor a la de las clulas fotovoltaicas,
pero debido a la posibilidad de amplificar la seal de estos, stos resultan ms sensibles que las
primeras.
La sensibilidad del fototubo depende de la naturaleza de la sustancia que recubre el ctodo y puede
variarse utilizando diferentes metales alcalinos o variando el mtodo de recubrimiento.
-
Tubos fotomultiplicadores, son una combinacin de un ctodo fotoemisivo y una cadena interna de
dnodos fotomultiplicadores de electrones. Cuando la radiacin llega al ctodo de composicin
similar a la de los fototubos, provoca la emisin de electrones (electrones primarios), de manera
anloga a la de un fototubo, pero en este caso, los electrones son acelerados, por la aplicacin de un
potencial positivo hacia una segunda superficie sensible, de forma que al incidir cada electrn
primario es capaz de producir la emisin de 4 5 electrones secundarios. Estos electrones son
acelerados de nuevo hacia otra superficie sensible que se encuentra a un potencial posiblemente
superior, de forma que el nmero de electrones emitidos vuelve a multiplicarse por 4 5.
Este proceso se puede repetir tantas veces como queramos, pero en general los aparatos no llevan
ms de 10 12 dnodos. La seal de salida puede a su vez amplificarse. Por tanto, es el detector
ms sensible en el UV V.
5. Procesador de seales.
Fotmetros
Espectrofotmetros
Haz simple
Doble haz
- 83 -
Anlisis Instrumental I
Compensacin
Lectura directa
- Doble haz
Compensacin
- 84 -
Anlisis Instrumental I
APLICACIONES
4.1.
En este campo, las aplicaciones son muy limitadas; algunos efectos son los siguientes:
-
Disolventes pobres (agua, alcoholes, cetonas y teres) tienden a eliminar la estructura fina vibracional
del espectro. Sin embargo, los disolventes apolares (hidrocarburos) tienden a mantenerla. Adems, las posiciones
de los mximos de absorcin dependen de la naturaleza del disolvente. Por ello, para comparar e identificar
espectros, es necesario conocer el disolvente en el que estn registrados. (Transparencia. Figura 8.8 / Tabla 8.6)
Esto da la a partir de la cual el propio disolvente dara la seal.
-
- 85 -
Anlisis Instrumental I
4.2.
Esta tcnica es una de las ms utilizadas para el anlisis cuantitativo; las caractersticas ms importantes
de estos mtodos espectrofotomtricos son:
-
Las aplicaciones de las medidas de absorcin al anlisis cuantitativo, son muy numerosas.
4.2.1.
Los componentes que contienen grupos cromforos, son susceptibles de esta determinacin (alquenos,
alquilos, cetonas).
As mismo, se pueden determinar tambin componentes inorgnicos como nitratos, nitrito, ozono, iones
de los metales de transicin, yodo, etc.
4.2.2.
- 86 -
Anlisis Instrumental I
0 fenantrolina
Fe3+
Dimetilglioxima
Ni2+
Dimetilditiocarbonato Cu2+
Para la determinacin de estas especies en anlisis cuantitativo, el procedimiento operatorio que
llevamos a cabo es:
- Seleccin de la longitud de onda donde vamos a realizar medidas de absorvancia. Las longitudes de
onda sern las correspondientes a mximos de absorcin del compuesto, ya que aqu se alcanza una mayor
sensibilidad:
Conocer las variables que afectan a la absorvancia natural del disolvente, pH de la disolucin,
Determina la relacin entre absorbancia y concentracin. Una vez seleccionadas las condiciones
ptimas pasamos a construir la curva de calibrado usando patrones de [ ] conocidas, y que abarquen el intervalo
de [ ] esperado en las muestras problema:
A
Y = mx + a
m=
[ ]
El valor de la pendiente m es igual a la absortividad molar:
- 87 -
Anlisis Instrumental I
A=bc + a
y=mx + b
Cuando hay interferencias en la matriz de la muestra es necesario aplicar el mtodo de adicin de patrn
( adicin estndar) lo cual por extrapolacin:
A
*
C
4.2.3.
Compuesto N
A = M b cM + N b cN
compuesto M
y a
A = M b cM + N b cN
Es posible llevar a cabo la determinacin simultanea sin conocemos laos valores de la absortividad
molar a estas dos longitudes de onda. Esto se determina utilizando rectas de calibrado construidas a partir de
estndares individuales de cada una de ellas.
Conocidos los valores de la absortividad molar, medimos las absorvancias A y A, por lo que solo
tenemos que despejar la [ ] de cada uno de ellos.
Para la eleccin de estas longitudes de onda, lo ideal es usar aquellas longitudes de onda donde aquellos
de los compuestos presenten una seal mxima y la otra mnima o despreciable. Esto se puede aplicar siempre
que no haya interacciones entre los compuestos.
Tericamente, se puede aplicar a sistemas con ms de dos componentes, sin embargo, las
indeterminaciones en los datos se hacen mayores a medida que el nmero de medidas aumenta.
- 88 -
Anlisis Instrumental I
4.2.4.
] conocida del
d
M b CM
m b CM
d
m b CM
m b CN
m b CM
d
M b CM
CN
CM
Anlisis Instrumental I
8.ll)
una absortividad
Interferencia
Curvas de valoracin
- 90 -
Anlisis Instrumental I
4.3.2.
Estas valoraciones presentan resultados ms satisfactorios que los obtenidos mediante anlisis
fotomtrico directo, ya que se utilizan los datos de varias medidas para determinar el punto final y adems, la
presencia de otras especies absorbentes pueden no interferir.
Algunos ejemplos concretos son valoraciones son EDTA y otros agentes complejantes, muchos de los
reactivos usados en reacciones redox que presentan espectros de absorcin caractersticos o valoraciones de
mezclas de cationes con un mismo reactivo mediante la formacin de complejos por diferente absortividad
molar.
A (340nm)
Cu2+
P.F.
Bi3+
P.F.
V (EDTA)
- 91 -
Anlisis Instrumental I
TEMA 6:
ESPECTROSCOPIA DE FLUORESCENCIA Y FOSFORESCENCIA MOLECULAR
1. INTRODUCCIN
y vibracional
fundamental hasta un estado electrnico y vibracional excitado para que se produzca luminiscencia, es necesario
que la sustancia absorba previamente radiacin de longitud de onda adecuada.
Cuando esto ocurre la radiacin es absorbida a unos 1015 segundos. Una molcula en estado excitado
tiene una vida de (107 10 8) segundos y durante ese tiempo pierde toda parte de su exceso de energa
mediante tres procesos:
1.)
2.)
Perdiendo su energa vibracional emitiendo un fotn de radiacin infrarroja y que pase al nivel
vibracional mas bajo del estado electrnico excitado.
- 92 -
Anlisis Instrumental I
Perdiendo su energa vibracional y que pase al estado vibracional mas bajo del estado electrnico
excitado sin emitir radiacin por colisiones.
Las dos primeras alternativas son poco probables y solo ocurren en gases a presiones muy bajas.
Cuando la molcula se encuentra en el nivel vibracional ms bajo del estado electrnico excitado, puede perder
el exceso de energa para volver al estado fundamental de tres maneras:
1.)
Sin omitir radiacin perdiendo la energa electrnica mediante choques o interacciones, es decir,
en forma de calor.
2.)
3.)
- 93 -
Anlisis Instrumental I
Anlisis Instrumental I
tener menor energa, y por tanto, mayor longitud de onda que los fotones absorbidos para producir el estado
excitado.
6.) Fosforescencia
Cuando la transicin desde un estado excitado triplete al estado fundamental es acompaada por la
emisin de un fotn, como es un proceso de espn prohibido, una transicin triplete singlete es mucho menos
probable que una transicin singlete singlete.
La vida media del estado triplete excitado respecto a la desactivacin por emisin, es siempre menor
que la de un singlete.
7.) Conversin Externa
3.
3.1.
Factores estructurales
- 95 -
Anlisis Instrumental I
En cuanto a los sistemas heterociclos ms simples como furano, piridina...... no presentan fluorescencia,
pero la fusin de stos con un anillo bencnico hace que aumente la absortividad molar y la probabilidad de
absorber fluorescencia.
b) Efecto de los sustituyentes
Las sustancias en el anillo bencnico originan cambios en la longitud de onda del mximo de absorcin,
el de la emisin y tambin el la eficacia cuntica. Las sustancias aceptoras de electrones como el grupo
carboxilo, nitro y los haluros, disminuyen la fluorescencia, mientras que los dadores como amino e hidroxilo la
intensifican.
c)
3.3.
a)
Efectos ambientales
Efecto de la temperatura:
La eficacia cuntica decrece con el aumento de la temperatura, ya que esta contribuye al aumento de las
colisiones entre molculas, y por tanto a la desactivacin mediante colisin.
b) Efecto del disolvente:
La eficacia cuntica de la fluorescencia aumenta con la viscosidad del disolvente debido a que
disminuye las colisiones.
Sin embargo, la prdida del disolvente y la capacidad para la formacin de enlaces por puentes de
hidrgeno son crticos, ya que afecta a la naturaleza del estado excitado.
c)
El pH ejerce un marcado efecto sobre la fluorescencia de los compuestos aromticos con sustancias
cidas o bsicas en el anillo, afectndose normalmente tanto la longitud de onda como la intensidad de emisin.
Esto es debido a que el pH afecta principalmente a la carga y formas resonantes del fluorforo. Ej.: la anilina
presenta fluorescencia en la regin visible en medio neutro o alcalino, pero no en medio cido.
Algunas sustancias presentan una fluorescencia tan sensible a los cambios del pH que pueden usarse
como indicador cido base.
d) Efecto del oxgeno disuelto y de los iones paramagnticos:
La presencia de oxgeno disuelto a menudo reduce la intensidad de emisin de una solucin
fluorescente.
- 96 -
Anlisis Instrumental I
A veces este efecto es debido a la oxidacin de la sustancia fluorescente, pero la mayor frecuencia se
debe al carcter paramagntico del oxgeno molecular que puede esperarse que favorezca el autocruzamiento
entre sustancias y la conversin de las molculas excitadas al estado triplete.
e)
Cuando la concentracin de una muestra es muy alta o es muy absorbente, tienen lugar
unos procesos de autoabsorcin de la radiacin de excitacin y de la emisin
fluorescente, a lo largo de su recorrido a travs de la cubeta, como consecuencia de
ella, las rectas de calibrado:
Sf = f (c)
Esta relacin que se ve modificada produce una inversin de la seal de fluorescencia. A este fenmeno
se le conoce como Inversin de la Fluorescencia por concentracin, y es debido a lo que se conoce como
efecto de filtro interno. La concentracin de inversin depende de las caractersticas de absorcin de la
disolucin y de la geometra del sistema, siendo independiente de y0.
4.
INSTRUMENTACIN
Fig. (8 7)
Los fluormetros (anlogos a los fotmetros de absorcin en los que se usan filtros para seleccionar la
longitud de onda de los haces de excitacin y emisin) y los espectrofluormetros (que utilizan
monocromadores).
1.) Fuente:
Normalmente en los fluormetros se emplea una lampara de arco de Hg y en los espectrofluormetros se
usa una lampara de arco de Xe, siendo el espectro de esta lampara continuo desde 300 a 1300 nm.
2.) Filtros:
Los monocromadores utilizan filtros de interferencia y absorcin en fluormetro y cromatografa en
espectrofluorimetros.
En cuanto a los monocromadores, actualmente se usan los de tipo red, ya que proporcionan rejas de
separacin de longitud de onda como en los prismas, y dispersan linealmente la radiacin.
3.) Celdas portamuestras:
Se utilizan tanto cubetas cilndricas como rectangulares de 1 cm de lado, puede ser de cuarzo o slice
fundida. Para el ultravioleta ya que el cuarzo presenta una fluorescencia nativa por enzima de 320 nm, mejor
usar vidrio Pyrex.
4.) Detectores:
- 97 -
Anlisis Instrumental I
Para amplificar la seal se usan tubos fotomultiplicadores, en espectofluorimetros tambin se han usado
detectores con diodos (componente electrnico que permite el paso de la corriente en un solo sentido) alineados.
5.) Dispositivo de salida de detectores o registradores:
El instrumento de lectura ms simple es un medidor que se emplea en fluormetros.
Equipos superiores suelen estar equipados con registradores.
Los espectrofluormetros incluyen microprocesadores para la adquisicin de datos.
Se han desarrollado comercialmente una gran variedad de aparatos cuya complejidad y costes difieren
mucho.
Los fluormetros son una herramienta simple y de menor coste, los espectrofluormetros van equipados
con dos monocromadores y usa como detector los tubos fotomultiplicadores con los que se consiguen grandes
factores de amplificacin de la seal, adems los espectros fluormetros suministran tanto los espectros de
excitacin como la emisin. El espectro de excitacin se obtiene registrando la variacin de la intensidad de
fluorescencia manteniendo el monocromador de emisin a longitud de onda fija, generalmente suele ser la del
mximo de emisin del compuesto y se varia la longitud de onda de excitacin.
El espectro de emisin se obtiene registrando la variacin de la intensidad de fluorescencia,
manteniendo el monocromador de excitacin a una longitud de onda fija generable del mximo de absorcin del
compuesto y se varia la longitud de onda de emisin.
El espectro de excitacin de una molcula debe ser idntico al de absorcin. Los espectros de emisin
obtenidos con diferentes instrumentos no son comparables, ya que la intensidad de fluorescencia depende en
gran medida de las caractersticas de la lampara, detector y monocromador. Se han desarrollado mtodos para
obtener el espectro corregido, que es el espectro verdadero libre de efectos instrumentales aunque los
instrumentos modernos lo corrigen automticamente, en cuanto a la fosforescencia. Modificacin en la
intensidad para medir fosforescencia.
Al relacionar la intensidad de fosforescencia con la concentracin, es preciso hacer las mismas
consideraciones que en el caso de fluorescencia.
Ip = K p I0 (23 bc)
APLICACIONES
Anlisis Instrumental I
Anlisis cuantitativo
- 99 -
Anlisis Instrumental I
- 100 -
Anlisis Instrumental I
5.3.
preparado de derivados
Tambin se puede usar para seguir reacciones catalizadas por enzimas y determinar la actividad
de la enzima. Ej. Tomamos una sustancia no fluorescente sobre la cual acta la enzima para
producir fluorescencia o concentracin de la misma.
TEMA 7:
- 101 -
Anlisis Instrumental I
elementales. Existen dos regiones del espectro que dan informacin atmica: ultravioleta visible y rayos x,
siendo la primera, la que se estudia aqu.
Los espectros atmicos ultravioleta visible, se obtienen mediante un adecuado tratamiento trmico
que convierte los componentes de una muestra en tomos o iones gaseosos.
El proceso por el cual la muestra se convierte en un vapor atmico se denomina ATOMIZACION.
Depende la precisin y exactitud de estos mtodos, en gran medida de esta etapa. (Tabla 10 1)
Entre estos mtodos se han aplicado con xito a la determinacin de ms de setenta elementos con
sensibilidades de entre ppm ppb.
2.
ATOMIZACIN DE LA MUESTRA
Los atomizadores son de dos tipos:
- Continuos.
- Discretos.
2.1. Atomizadores continuos
La muestra se introduce en el atomizador a una velocidad constante y la seal espectral es, por tanto,
constante en el tiempo. Los tres primeros mtodos de atomizacin (Tabla 10 1, son de este tipo).
En cada uno de ellos, la disolucin de la muestra se transforma en una niebla de pequeas gotas firmemente
divididas mediante un flujo de gas comprimido. Este proceso se denomina NEBULIZACION.
A esta nebulizacin le sigue la etapa de disolvatacin en la que el disolvente se evapora para producir un
aerosol molecular slido, firmemente dividido. La disociacin de las molculas conduce luego a la formacin de
un gas atmico, y a su vez, los tomos pueden disociarse en iones y electrones y se producen as, espectros de
emisin molecular, y dos tipos de espectros de emisin atmicos (Todo esto, en diagrama bloque resumen)
2.2. Atomizadores discretos
En estos, una cantidad medida de la muestra, se introduce en el dispositivo como un bolo de lquido o
slido. La disolvatacin tiene lugar al subir la temperatura hasta el valor en que tiene lugar la evaporacin rpida
del disolvente. A continuacin, la temperatura se eleva de forma drstica, de tal manera que las otras etapas de la
atomizacin se producen en un breve periodo de tiempo. En estas circunstancias, la seal espectral adquiere la
forma de un pico bien definido. Los atomizadores electrotrmicos son de este tipo, as como la atomizacin con
chispa elctrica. Mientras que, en un arco elctrico se emplean tanto el modo continuo como el discreto,
dependiendo del tipo de muestra que se analiza.
3.
ESPECTROS ATMICOS
Cuando una muestra se atomiza por cualquiera de los procedimientos anteriores, una importante fraccin de
los constituyentes metlicos se transforman en tomos gaseosos y adems, segn la temperatura del atomizador,
una cierta fraccin de estos tomos se ioniza originndose as una mezcla gaseosa de tomos e iones elementales.
3.1. Diagramas de niveles de energa
- 102 -
Anlisis Instrumental I
gaseosas, estn
constituidas por lneas estrechas que son bien definidas y que provienen de las transiciones de los electrones ms
externos. En el caso de los metales, las energas de esas transiciones son tales que implican a la radiacin
ultravioleta visible y al infrarrojo cercano.
Los diagramas de energa de los electrones externos proponen un mtodo adecuado para la descripcin de
los procesos en los que se basan los distintos tipos de espectroscopia atmica. As, el diagrama del Na + es un
diagrama caracterstico. (Figura 10 2)
Las energas correspondientes a las distintas orbitales atmicas, se indican mediante lneas horizontales. Las
orbitales p, se desdoblan en ms niveles, que difieren ligeramente en energa, pudiendo justificarse este hecho
mediante las interacciones entre el movimiento orbital del electrn alrededor de su propio eje y el espn. Con las
orbitales d y f, se producen diferencias similares, pero sus magnitudes son normalmente tan pequeas que
resultan indetectables. El desdoblamiento de las orbitales p, d y f de elevada energa en dos estados, es
caracterstico de todas aquellas especies si tienen un nico electrn externo. As, el diagrama de niveles de
energa para Mg+ tiene la misma apariencia que el correspondiente Na +. A medida que sube el nmero de
electrones fuera de las capas ms internas, los diagramas de niveles de energa se hacen cada vez ms complejos,
de manera que para los metales pesados, y particularmente para metales de transicin, existe un gran nmero de
niveles de energa muy poco espaciados, y en consecuencia, el nmero de lneas de absorcin o emisin puede
ser muy alto.
Hay que tener en cuenta, que las transiciones que producen radiacin se observan solamente entre ciertos
estados de energa. Por ejemplo: no se dan las transiciones de los estados 5 s 4s al 3s ni entre los distintos estados
p, o en los de d. Estas transiciones se llaman prohibidas, y existen reglas de seleccin que permiten la
prediccin de cules son las transiciones ms probables y cules no.
3.2. Espectros de emisin atmica
A temperatura ambiente, todos los tomos de una muestra se encuentran esencialmente en el estado
fundamental. En estas circunstancias, por ejemplo, el nico electrn externo del Na metlico ocupa el orbital 3 s.
La excitacin de este electrn a orbitales ms altos, se puede conseguir mediante el calor de una llama, una
chispa o un arco elctrico. El tiempo de vida de un tomo excitado es breve y su vuelta al estado fundamental va
acompaada de la emisin de un fotn de radiacin. Las dos lneas que presenta el Na son 5890 y 5896 , y son
las ms intensas y las responsables del color amarillo que se observa cuando se introducen las sales del Na en
una llama. (Figura 10 5).
Adems, este pico ms ancho corresponde a las transiciones de 3 p a 3s y el pico que aparece a 5700
corresponde a dos picos no resueltos a las dos transiciones 4d a 3p. El poder de resolucin del monocromador
es insuficiente para poder separar los picos.
3.3. Espectros de absorcin atmica
En un medio gaseoso a elevada temperatura, los tomos de los metales son capaces de absorber radiacin de
(longitud de onda), caracterstico de transiciones del estado fundamental a niveles superiores. De este modo,
un espectro de absorcin atmica est constituida por lneas de resonancia, que son el resultado de transiciones
del estado fundamental a niveles superiores. As, por ejemplo, en el caso de Na, se observan experimentalmente,
picos de absorcin aguda a 5890, 5896 y 3302, 3302 .
- 103 -
Anlisis Instrumental I
Cada par adyacente de estos picos corresponden a transiciones desde el nivel 3s a 3p y desde 3s a 4p.
3.4. Espectros de fluorescencia atmica
En una llama, los tomos pueden presentar fluorescencia cuando se irradian en una fuente intensa que
contiene las longitudes de onda que son absorbidas por el elemento. Los espectros de fluido resultante, se miden
adecuadamente a un ngulo de 90, con respecto a la trayectoria luminosa y la radiacin que se observa. Es por
lo general, el resultado de la fluorescencia de resonancia.
Cuando los tomos de Mg se exponen a fuente ultravioleta, se absorbe la radiacin de 2852 que
corresponde al salto de 3s a 3p, emitindose posteriormente, fluorescencia de resonancia a esa misma longitud de
onda.
Sin embargo, cuando los tomos de Na absorben radiacin de longitud de onda de 3303 , los electrones
pasan al estado 4p, producindose a continuacin, una desactivacin no radiante hacia estados 3 p mucho ms
rpidamente que la fluorescencia de resonancia como consecuencia de la fluorescencia que se observa y se
presenta a 5890 y 5890 .
Y un tercer mecanismo para la fluorescencia atmica, en que los tomos de Talio excitados en una llama,
vuelve al estado fundamental en dos etapas: una de ellas es fluorescente y produce lneas a 5350 , y a
continuacin se produce rpidamente una desactivacin no radiante hasta el estado fundamental. Adems se
puede observar fluorescencia de resonancia a 3776 . (Figura 10 6)
3.5.
En espectroscopia atmica, la anchura de lneas espectrales es de gran importancia, as como las lneas
estrechas son muy convenientes tanto en absorcin como emisin, ya que as se reducen las posibles
interferencias debidas al solapamiento de espectros. Las lneas de absorcin y emisin atmica presentan
generalmente, una distribucin de longitud de onda simtrica alrededor de una longitud de onda media, que
coincide con la longitud de onda del mximo de absorbencia de la radiacin absorbida o la mxima intensidad de
la radiacin emitida.
La observacin de diagramas de energa sugiere que, una transicin entre dos niveles discretos de energa
dara lugar a una lnea, a una longitud de onda nica. Sin embargo, distintos fenmenos como el efecto doppler,
efecto del campo magntico o elctrico, y efectos de presin, debido a colisiones del tomo, dan lugar a que
estos efectos generen el ensanchamiento de las lneas espectrales.
4.
en un aerosol constituido por diminutas gotitas de lquido. A continuacin, tiene lugar una serie de procesos que
dan lugar a una mezcla de tomos de analito, iones de analito, molculas de muestra, molculas de xido de
analito y una variedad de especies moleculares y atmicas que se forman por reacciones entre el combustible, el
oxidante y la muestra, debido a la gran variedad de procesos complejos que se dan en la llama. La atomizacin
es la etapa ms crtica en la espectroscopia de llama, y la que limita la precisin de estos mtodos. Por ello, es
importante conocer las caractersticas de las llamas y las variables que les afectan.
4.1. Tipos de llamas
(Tabla 10 2)
- 104 -
Anlisis Instrumental I
En el caso de usar O2 en el aire, se obtienen temperaturas entre 1700 - 2400C haciendo mezclas con gas
natural, H2 y acetileno. A estas temperaturas, slo los metales ms fcilmente excitables como los alcalinos y
alcalinotrreos, producen efectos de emisin adecuados.
Los metales pesados se excitan con oxido nitroso, ya que estos oxidantes producen temperaturas entre 2500
3100C con los combustibles ms comunes.
Tambin son de considerable importancia, las velocidades de combustin, ya que las llamas slo son estables en
ciertos intervalos de caudal; si el caudal no sobrepasa la velocidad de combustin, la llama se propaga hacia atrs
en el interior del quemador, Cuando el caudal y velocidad de combustin se encuentren ajustados, la llama sube
hasta alcanzar un punto por encima del quemador, donde el caudal y la velocidad de combustible son iguales. En
esta regin es donde la llama es estable; a caudales ms altos, la llama sube y al final alcanza un punto donde se
aparta del quemador. El caudal de la mezcla combustible oxidante, depende mucho del combustible y del
oxidante que se usan y es una importante variable que es preciso controlar rigurosamente.
4.2. Estructura de la llama
La zona de la combustin primaria se conoce por su luminiscencia azul, debido a la presencia de radicales
C2, CH.
En esta zona no se alcanza el equilibrio trmico y rara vez se usa en espectroscopia de llama.
El rea interconal puede alcanzar varios centmetros de altura en llama rica de acetileno O 2 o, acetileno
xido nitroso. Esta zona es rica en tomos libres, y es la que ms se usa en espectroscopia.
El cono externo es zona de reaccin secundaria, dados los picos formados, una regin interna se transforma
en xidos moleculares libres, estables. El perfil de la llama proporciona una informacin til respecto a los
procesos que tienen lugar en las distintas partes de la llama. (Figura 10 11)
Tambin tenemos los perfiles de absorbancia (figura 10 12). El perfil de absorbancia, por ejemplo para
Mg, presenta a la mitad de la llama un mximo, debido en primer lugar, al aumento inicial de la absorbancia al
aumentar la distancia a la base de la llama y que se debe a que se produce un aumento en el nmero de tomos
de Mg, debido al mayor tiempo de exposicin a la llama. Sin embargo, al acercarse a la zona externa, comienza
una apreciada oxidacin del Mg, lo que origina una disminucin en la absorbancia.
El comportamiento de la plata es que no se oxida con facilidad; es distinta, observndose un aumento en la
absorbancia debido a que se produce un aumento continuo de tomos desde la base hasta la periferia de la llama.
Disminuye el Cr, que forma xido fcilmente, y muestra una disminucin continua de la absorbancia desde la
zona cercana al quemador, lo que sugiere la formacin de xidos desde el principio.
Por tanto, por el anlisis de cada uno de estos elementos, se debe usar una zona distinta de la llama. Por otro
lado, el perfil de emisin, que es un perfil tridimensional muestra la intensidad de emisin de una lnea. Por
ejemplo: produccin en una llama.
4.3.
Anlisis Instrumental I
Se aplican para medidas de absorcin, emisin y fluorescencia atmica. Un atomizador de llama consiste
en un nebulizador neumtico que transforma la disolucin de muestra en una niebla o aerosol que se introduce en
un quemador. (Figura 10 14)
En trminos de reproducibilidad, la atomizacin en llama resulta ser superior a todos los dems mtodos
hasta ahora desarrollados para la introduccin de nuestros lquidos con la posible excepcin ICP. (Figura 10
15)
En trminos de sensibilidad, otros mtodos de atomizacin son claramente mejores, pudiendo darse dos
razones:
5.
ATOMIZACIN ELECTROTRMICA
Los atomizadores electrotrmicos proporcionan mayor sensibilidad, debido a que toda la muestra se atomiza
en un periodo muy breve y el tiempo de residencia de los tomos en el camino ptico es de un segundo o ms.
Los atomizadores electrotrmicos se usan para las medidas de absorcin atmica y fluorescencia atmica, pero
no se han aplicado en los mtodos de emisin
Con estos atomizadores, se evaporan primero unos pocos microlitos de muestra a baja temperatura, y luego
se calcina a una temperatura alta, en un tubo o cubeta de grafito calentado elctricamente.
Despus de la calcinacin, la corriente se incrementa a varios cientos de amperios, lo que hace que la
temperatura suba aproximadamente a 2500C, producindose la atomizacin de la muestra en un tiempo que va
de unos pocos milisegundos a un segundo. Es estas condiciones, se mide la absorcin o la fluorescencia de las
partculas atomizadas en la zona situada inmediatamente encima de la superficie calentada. (Figura 10 16)
(Figura 10 17)
Los atomizadores electrotrmicos presentan la ventaja de su elevada sensibilidad. La precisin relativa de
estos mtodos est entre el 5 10% en comparacin del 1% o menos, que se puede obtener en la atomizacin
con llama o plasma. Adems estos mtodos son cortos.
Una desventaja es el intervalo analtico en el que se puede trabajar, pues es pequeo, siendo por lo general,
mayor de dos rdenes de magnitud. En consecuencia, la atomizacin electrotrmica se usa slo cuando la
atomizacin con llama o plasma no proporciona los lmites de deteccin adecuados.
6.
- 106 -
Anlisis Instrumental I
elemento. Sin embargo, esta limitacin en la anchura de las lneas crea un problema, ya que para que se cumpla
la Ley de Beer, es necesario que la anchura del borde de la fuente sea mayor que la del pico de absorcin. El
principal inconveniente para solventar este problema es cambiar la lmpara para cada elemento que se analiza.
1) Lmparas de ctodo hueco.
Es la fuente ms comn para las medidas de absorcin comn, y consiste en un nodo o ctodo cilndrico
cerrados hermticamente en un tubo de vidrio lleno de Ar o Ne.
El ctodo est constituido por un metal cuyo aspecto se desea obtener o bien sirve de soporte para una capa
de dicho metal. Cuando se aplica un potencial suficientemente entre los electrodos, se produce la ionizacin del
gas y los cationes electrones migran hacia los electrodos, de manera que los cationes son capaces de arrancar
algunos de los tomos metlicos de la superficie del electrodo y producir una nube atmica. A este proceso se le
denomina Chisporreteo.
Una parte de los tomos metlicos desprendidos se encuentran excitados y al volver al estado fundamental
emiten su radiacin caracterstica.
Finalmente, los tomos metlicos se vuelven a depositar en la superficie del ctodo o en las paredes del
vidrio del tubo. La eficacia de la lmpara del ctodo hueco depende de su geometra y del potencial aplicado.
2) Lmparas de descarga sin electrodos.
Son buenas fuentes de espectros atmicos de lneas, y producen intensidades radiantes que son una o dos
rdenes de magnitud superiores a los del ctodo hueco. Una lmpara con estas caractersticas, se construye en un
tubo de cuarzo hermticamente cerrado, que contiene una pequea cantidad del metal cuyo espectro se desea
obtener de su sal y un gas inerte como el Ar. La lmpara no contiene electrodos y para su activacin, se usa un
campo intenso de radiofrecuencias o de microondas produciendo as, la ionizacin del Ar. Existen lmparas
comerciales de descarga sin electrodos para quince o ms elementos, aunque su funcionamiento no parece ser tan
fiable como el de las lmparas del ctodo hueco.
Modulacin de la fuente
Es un instrumento de absorcin atmica para eliminar las interferencias producidas por la emisin de
radiacin de la llama. La mayor parte de la radiacin emitida por la llama se elimina mediante el monocromador,
pero la radiacin emitida correspondiente a la longitud de onda seleccionada por el monocromador, est siempre
presente en la llama, debido a la excitacin y emisin de los tomos del analito.
A fin de eliminar los efectos de la emisin de la llama, es necesario modular la salida de la fuente para que
su intensidad oscile a una frecuencia constante. Una forma, es ir interponer entre la fuente y la llama un
contador. De este modo, el detector recibe dos tipos de seales, una alterna de la fuente y otra continua de la
llama.
6.2.
Instrumentos
absorcin
para
la
espectroscopia
de
atmica
El instrumento ha de proporcionar una anchura de banda lo suficientemente estrecha como para evitar la
medida de la lnea elegida de entre otras que pueden interferir, o que disminuyan la sensibilidad de los anlisis.
- 107 -
Anlisis Instrumental I
Para ello, pueden usarse filtros de interferencias, pero la mayora de los instrumentos usan un
monocromador ultravioleta visible. Los detectores y sistemas de lectura son similares a los descritos para la
espectroscopia de absorcin molecular ultravioleta visible. Se usan detectores fotomultiplicadores, siendo
necesarios sistemas electrnicos que pueden discriminar entre la seal modulada de la fuente y la continuacin
de la llama.
La mayora de los instrumentos van equiparados con ordenador, para el control de los parmetros
instrumentales y para la adquisicin y manipulacin de datos. En cuanto a los espectrofotmetros de un solo haz,
consisten en varias fuentes de ctodo hueco, un contador, o una fuente de alimentacin para impulsar un
atomizador y un espectrofotmetro sencillo de red o difraccin con un fotomultiplicador. En los
espectrofotmetros de doble haz, el haz que proviene de la fuente de ctodo hueco, se divide mediante un
contador reflectante, de manera que la intensidad pasa a travs de la llama y la otra mitad, por fuera de ella.
Posteriormente, los dos haces lo recombinan mediante un espejo semiplateado y llega a un monocromador de red
y al tubo fotomultiplicador.
A continuacin, pasa a un amplificador donde se amplifica la relacin entre las seales de referencia, y la
muestra mayor pasa al sistema de adquisicin.
La reaccin de disociacin y,
Anlisis Instrumental I
atomizacin, originando errores negativos. Este tipo de interferencias pueden eliminarse o atenuarse de tres
formas:
-
a elevada temperatura
empleando agentes protectores que forman con el analito, especies estables voltiles.
En cuanto a los equilibrios de disociacin, son los xidos e hidrxidos de los metales alcalinos, los que se
disocian con mucha mayor facilidad, por lo que las intensidades de las lneas son elevadas, incluso a temperatura
relativamente baja.
La ionizacin en las llamas se da en las que contienen aire, como oxidante, y la ionizacin de tomos y
molculas, aqu es pequea, y por lo general, puede despreciarse. Sin embargo, en las llamas en las que el
oxidante el O2 o No, la ionizacin es ms importante y hay una concentracin notable de electrones libres.
El grado de ionizacin del metal, se encuentra fuertemente influido por la presencia de otros metales
ionizables en la llama. Los efectos de estos desplazamientos se pueden eliminar con la adicin de un supresor de
ionizacin, el cual proporciona una concentracin relativamente alta de electrones en la llama y como
consecuencia, se suprime la ionizacin del analito.
6.4. Procedimiento
analtico
en
espectroscopia
de
absorcin atmica
a)
Preparacin de la muestra.
La muestra ha de introducirse disuelta en agua sin que intervengan muchos de los materiales de inters,
como pueden ser muchos tejidos animales, plantas, derivados de petrleo y minerales no solubles en agua y con
frecuencia se requiere un tratamiento previo laborioso.
Las etapas de descomposicin y disolucin de la muestra, a menudo introducen ms errores que las propias
medidas espectroscpicas. Adems, los reactivos que se usan, introducen los tipos de interferencias qumicas y
espectrales.
Para la descomposicin y disolucin de la muestra, alguno de los precedentes ms habituales es el de los
tratamientos con cidos minerales y oxidacin con reactivos lquidos sulfrico HNC, perclrico
mineralizacin por va hmeda, adems de combustin en banda de O 2. Tambin la mineralizacin a elevada
temperatura mineralizacin por va seca; y finalmente, fusin a elevada temperatura con reactivos con xido
brico y carbonato sdico.
Una de las ventajas de la atomizacin electrotrmica, es que algunos materiales se pueden atomizar
directamente, evitando de este modo, la etapa de disolucin.
b) Patrones de calibracin.
Idealmente, los patrones de calibracin para el anlisis de absorbancia atmica, deberan contener no slo el
analito, sino que tambin debera parecerse lo ms posible a la muestra en cuanto a la matriz.
c)
La altura de los picos de absorcin se elevan en presencia de alcoholes de bajo Pn, y se atribuye el aumento
en la eficacia del nebulizador, ya que la baja tensin superficial origina gotas de pequeo tamao, y as se
produce la evaporacin del disolvente de forma ms rpida.
- 109 -
Anlisis Instrumental I
Curvas de calibracin.
6.5.
7.
en tejidos. Por razones de conveniencia, rapidez y por la relativa falta de interferencias, se ha convertido en el
mtodo ms adecuado para el anlisis de estos elementos que suelen ser difciles de determinar por otras
tcnicas.
7.1. Instrumentacin
- 110 -
Anlisis Instrumental I
Los instrumentos para trabajar con la emisin de llama, son parecidos a los de absorcin, excepto por el
hecho de que en los primeros, la llama acta como fuente de radiacin, y en consecuencia, la lmpara de ctodo
hueco y el contador, son necesarios. Para los anlisis que no son de rutina, resulta ms conveniente usar un
espectrofotmetro ultravioleta visible. Con un registrador de una resolucin aproximada de 0,5 . El
registrador constituye un medio sencillo para realizar correcciones de fondo.
Para el anlisis de rutina para metales alcalinos y alcalinoterreos, es suficiente la utilizacin de fotmetros
simples de filtros; en estos casos se usa una llama a baja temperatura, para evitar la excitacin de los dems
metales, por lo que los espectros obtenidos son simples y pueden usarse filtros de interferencia para aislar la
lnea de emisin que se desee. Algunos fabricantes construyen fotmetros de llama diseados especficamente
para el anlisis de Na, Ka, Li en suero sanguneo y otras muestras biolgicas. En ellos, la radiacin que proviene
de la llama, se divide en tres haces de aproximadamente la misma intensidad, y cada uno de ellos pasa a travs
de la superficie fotomtrica independiente, constituido por un filtro de interferencias, un fototubo y un
amplificador.
7.2. Interferencias
-
Interferencias de banda
En muchas ocasiones, se observa que las lneas de emisin aparecen superpuestas sobre bandas emitidas
por xidos y otras especies moleculares de la muestra, combustible u oxidante, y es posible corregir el fondo
tocando datos, es decir, unos pocos nm (nanmetros) a cada lado del pico del analito. En instrumentos que no
tienen registrador, se realiza una medida a cada lado del pico, aumentando el promedio de las dos medidas, y se
resta de la altura total del pico.
-
Interferencias qumicas
Son esencialmente las mismas que se encuentran en los mtodos de absorcin de llama.
Se evitan mediante la eleccin de la temperatura y el uso de agentes protectores, liberadores y
supresores de ionizacin.
-
Autoabsorcin
El centro de una llama est ms caliente que su parte externa, y por ello los tomos que emiten en la
zona central, estn rodeados por una regin ms fra que contiene una elevada concentracin de tomos no
excitados, de manera que se produce la autoabsorcin de la longitud de onda de resonancia por los tomos de la
capa ms fra.
En una situacin extrema, el centro puede resultar menos intenso que los bordes, o incluso desaparecer,
y el resultado es el desdoblamiento por autoinversin del mximo de emisin en lo que aparentemente son dos
picos. La autoabsorcin resulta molesta cuando el analito est a elevada concentracin. En estas circunstancias,
es preferible emplear para el anlisis, una lnea no resonante, la cual, no puede experimentar autoabsorcin.
La autoabsorcin y la ionizacin, producen a veces, unas curvas de calibracin de emisin con forma de
S en tres segmentos distintos, y as en concentraciones intermedias.
Por ejemplo; de K se observa una relacin lineal entre intensidad y concentracin, pero la baja
concentracin aparece una curvatura que se debe al elevado grado de ionizacin en la llama y a concentracin
elevada, la autoabsorcin provoca desviaciones negativas de la linealidad.
- 111 -
Anlisis Instrumental I
Y DE EMISIN
ATMICA
En cuanto a los instrumentos, la principal ventaja de los procedimientos de emisin, consiste en que la llama
acta como fuente. Los mtodos de absorcin necesitan, por el contrario, una lmpara distinta para cada llama.
Por otra parte, la calidad del monocromador de un instrumento de absorcin, no tiene que ser tan alta para
alcanzar el mismo grado de selectividad debido a la estructura de las lneas emitidas por la lmpara de ctodo
hueco.
En cuanto a la habilidad del operador, los mtodos de emisin requieren un elevado grado de habilidad,
debido a la naturaleza de emisin de ajuste, tales como la
combustible oxidante.
Correccin de fondo En los espectros de banda que provienen de los constituyentes de la muestra, se
realiza con facilidad y por lo general, y con ms exactitud, en los mtodos de emisin.
Precisin y exactitud
La incertidumbre obtenida por los operadores expertos, es ms o menos la misma para ambos procedimientos.
Los mtodos de absorcin atmica presentan menos problemas. Los procedimientos de absorcin atmica, estn
menos sujetos a interferencias de lneas espectrales, aunque los mtodos de emisin de este tipo de interferencias
se reconocen y se pueden evitar fcilmente.
- 112 -