Universidad de Concepcin

Facultad de Ciencias Biolgicas

Departamento Microbiologa

Laboratorio N 1

Nombre: Alexis Antonio Vidaurre Mora.

Carrera: Ing. Ambiental.
Ayudante: Julieta Geisse.
Fecha: 09-09-2014

INTRODUCCIN
El primer laboratorio de microbiologa es introductorio y esencial para tener un buen
desempeo dentro del laboratorio. En este, se conocern las partes constitutivas del
microscopio, poniendo principal atencin en el modo de utilizacin de este cuando se
trabaja en fresco o por inmersin. Tambin se darn a conocer normas bsicas de asepsia
dentro del laboratorio, lo que requiere de especial atencin. Otra de las finalidades del
laboratorio es que aprendamos a usar los instrumentos debidos que se encuentran en el
laboratorio.
OBJETIVO DEL PRCTICO
-

Uso del microscopio y mtodos que se usan en bacteriologa.

Reconocimiento de materiales e instrumentos y sus respectivas tcnicas de uso.
Cuidado de la asepsia dentro del laboratorio.
Observacin bacteriana.
Preparacin de frotis y tinciones simples.

PRINCIPIOS METODOLOGICOS
1.- Observacin a fresco: Se utiliza cuando se quiere conocer la movilidad de las clulas
bacterianas, las cuales ejecutan una traslacin rpida y zigzagueante de un lado a otro
cruzndose entre ellas.
2.- observacin microscpica de bacterias: Por medio de una muestra que se nos fue
entregada en una placa de petri (S. Epidermis ) la cual contena una gran colonia de
bacterias, se preparo un frotis para la observacin de las bacterias por medio de los
siguientes pasos:
-colocar una gota de cultivo liquido en un portaobjetos limpio o una gota de emulsin si se
tiene un cultivo en medio solido.
-Extender el material en una capa delgada.
-Dejar secar a temperatura ambiente.
-Fijar la preparacin pasando suavemente la muestra por el mechero (por el lado
contrario en que estn las bacterias) poniendo cuidado de no calcinarlas.
Para observarlas es necesario aplicar tinciones que se explican a continuacin.
3.- Tinciones simples: Solo se aplica un tipo de colorante sobre la clula bacteriana, lo que
conlleva a que todas las clulas tengan la misma coloracin. Esta tcnica es fundamental
para quien quiere conocer formas de bacterias o la forma en cmo se agrupan, puesto
que sin tincin las bacterias son imposibles de ver en el microscopio.
4.-Tinciones diferenciales: Este tipo de tinciones permite agrupar distintos tipos de
bacterias que tienen afinidad con algn tipo de colorante, lo que dejara en evidencia los
distintos grupos bacterianos que se pueden encontrar en un mismo medio. El que una
bacteria se tia de un color y no de otro, hace que se conozca la susceptibilidad o
resistencia a determinados agentes antimicrobacterianos, los cuales se basan en la
estructura de la pared celular.

a) Tincin de Gram: Esta tincin se utiliza para diferenciar dos tipos de clulas
bacterianas, las gram positivas y las negativas, que se diferencias en la conformacin de la
pared celular de la que estn constituidas.
Esta tincin utiliza dos colorantes, violeta de genciana y safranina. La primera etapa de
esta tincin es la preparacin de un frotis con la muestra de bacterias la cual se teir con
la batera de tincin. Primero agregaremos el violeta de genciana durante 60 seg. Luego
lavamos rpidamente y aplicamos lugol durante 60 seg, y lavamos nuevamente.
Decoloramos con alcohol etlico al 95% durante 30 seg, el cual permitir arrastrar el
colorante principal de las bacterias que no lo retienen las cuales son las Gram negativas.
Finalmente aplicamos la coloracin de constaste con safranina durante 20 seg. Por ltimo
las Gram negativas se observaran de color rojo ya que captan el color de contraste, la
safranina.
La diferencia de coloracin de las bacterias reside en la diferencia constitutivas de su
pared celular, ya que la pared celular de las gram positivas posee una gruesa capa de
peptidoglicano, adems de dos clases de cidos teicoicos(anclado en la cara interna de la
pared celular) y unido a la membrana plasmtica, se encuentra el acido lipoteitoico y ms
en la superficie el acido teitoico que esta fijado solamente en el peptidoglicano.
Por otro lado la capa de pptidoglicano en las gram negativas es delgada y se encuentra
unida a una segunda membrana plasmtica exterior (composicin distinta a la interna) por
medio de lipoprotenas. La membrana exterior est hecha de protena, fosfolpido y
lipopolisacrido.
4.- Tinciones especiales: Esta tcnica de tincin es un poco ms complejas que las otras y
tiene por objetivo destacar otras partes constitutivas de las clulas, como el ncleo,
flagelos, capsulas, esporas, etc. Estas no son de un uso comn y son utilizadas cuando se
estudian las clulas profundamente. En el laboratorio observamos muestras de capsulas,
esporas y flagelos en unos frotis ya teidos.
RESULTADOS Y ANALISIS
Tinciones simples: estas tinciones se basan en la accin de un solo colorante sobre la
clula bacteriana, en tal forma que todas ellas presentara el mismo color. Esta tincin se
ocupa principalmente para ver agrupacin de bacterias y formas.
Bacilo Subtilis con Violeta de genciana:

Bacilo Subtilis.
A=100x

-Tincin de Gram: Al aplicar violeta de genciana y safranina en nuestro frotis, nuestras

muestras tomaran un color azul violeta si se trata de una bacteria Gram positivas o un
color rosado/rojo si se trata de una gran positivas (esto porque la bacteria se tie con el
segundo colorante) como muestra las imgenes.
Gram Positivas:

Bacilo Subtilis

A=100x
Gram Negativa:

E. Coli

A=100x

-Tinciones especiales: En el laboratorio observamos unas muestras ya preparadas con su

respectiva tincin pata evidenciar flagelos, esporas y cpsulas.
Capsula: Es una estructura que rodea la membra y la protege de la fagocitosis por parte de
los macrfagos .

Capsula

A=100x

Endoesporas: son aquellas estructuras que se forman al interior de la clula bacteriana

cuando las condiciones ambientales no son las ms favorables

Endoesporas

A=100x

Flagelos: Es un apndice movible con forma de ltigo presente en las clulas bacterianas
que le aportan la movilidad a esta. Existen clulas monoflageladas, biflageladas y
poliflageladas. En la imagen se observa una bacteria poliflagelada.

Flagelos

A=100X

DISCUSION
Con respecto a las bacterias y su tincin gram se observa la resistencia a la decoloracin,
se debe a que la membrana externa de las Gram negativas es soluble en solventes
orgnicos. La capa de peptidoglicano que posee es demasiado delgada como para poder
retener el complejo de cristal violeta/yodo que se form previamente, y por lo tanto este
complejo se escapa, perdindose la coloracin azul-violcea. Pero por el contrario, las
Gram positivas, al poseer una pared celular ms resistente y con mayor proporcin de
peptidoglicano, no son susceptibles a la accin del solvente orgnico, sino que este acta
deshidratando los poros cerrndolos, lo que impide que pueda escaparse el complejo
cristal violeta/yodo, y manteniendo la coloracin azul-violcea.
En cuanto a las tinciones especiales para detectar flagelos, esporas y capsula, no podemos
decir mucho puesto que no las analizamos en profundidad ya que en general este tipo de
tincin no es de uso rutinario y su aplicacin va a estar ms ligada en trabajos de
investigacin bacteriolgica.

CONCLUSION
Por conclusin, podemos decir que a travs de las actividades hechas, se pudo clasificar
las clulas mediante su movilidad, morfologa, agrupacin, comportamiento frente a las
tinciones, etc. Para poder realizarlo, fue necesario tener algunos conocimientos bsicos
sobre asepsia e higiene al momento de trabajar con las muestras. Por ejemplo que se
debe trabajar bajo el radio de calor que emite el mechero, lavarse las manos antes y
despus del prctico, etc.
Existe un gran mundo bacteriolgico por descubrir, diferentes formas para manejar
clulas bacterianas, para aislarlas, para determinar su poblacin e investigar su gentica,
lo que nos lleva a otras ramas de la microbiologa como lo son la mutacin, conjugacin
etc. Y con estas se nos puede aclarar el por qu existen bacterias gram + y gram - .

BIBLIOGRAFIA
Guia de laboratorio, Laboratorio N1

http://aulavirtual.usal.es/aulavirtual/demos/microbiologia/unidades/documen/uni
_02/56/cap304.htm

http://www.monografias.com/trabajos16/microbiologia/microbiologia.shtml