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HEMOGLOBINE

REACTIFS BIOLABO
www.biolabo.fr

Mthode colorimtrique (Cyanmthmoglobine)

FABRICANT :
BIOLABO SA,

Ractif concentr ( diluer 1/50) pour le dosage quantitatif de lhmoglobine (Hb)


dans le sang total

02160, Maizy, France


REF 82250

R1 1 x 50 mL

CODE CNQ : E2

SUPPORT TECHNIQUE ET COMMANDES


Tel : (33) 03 23 25 15 50

IVD USAGE IN VITRO

Fax : (33) 03 23 256 256

INTERET CLINIQUE (1)

PREPARATION DES REACTIFS

Une concentration suffisante en hmoglobine dans le sang est


ncessaire pour un transport adquat de lO2 ou le CO2 entre les
poumons et les autres tissus. Une diminution du taux dhmoglobine
dans le sang peut tre due une hmorragie ou une hmolyse, ou tre
le rsultat dune perturbation de la formation des cellules sanguines
dans la molle osseuse hmatopotique. Inversement, une
augmentation de lhmoglobine dans le sang peut avoir pour origine une
anomalie des changes gazeux au niveau des poumons, ou dautres
maladies. La mesure de la concentration en hmoglobine dans le sang
est importante en tant qutape initiale dans la dtection des anmies
(diminution de lhmoglobine) ou drythrocytoses (augmentation des
rythrocytes et de lhmoglobine).

Diluer le contenu du flacon R1 (1 + 49) avec de leau dminralise.


Mlanger doucement pour obtenir une solution homogne.
Voir le PRECAUTIONS.

PRINCIPE (4) (5)


Mthode colorimtrique reconnue comme mthode de rfrence par le
comit international pour la standardisation en hmatologie.
Fe2+ de lhmoglobine est oxyd en Fe3+ de la mthmoglobine par le
ferricyanide, et la mthmoglobine ragit alors avec le cyanure de
potassium (KCN) pour former la cyanmthmoglobine, un compos trs
stable.
Labsorbance de la cyanmthmoglobine, directement proportionnelle
la concentration en hmoglobine, est mesure 546 nm (520-560).

REACTIFS
flacon R1

REACTIF (concentr 50 fois)

Ractif de travail

Xn : nocif
R : 22-31 S : 36-37-46

Tampon Phosphate
Cyanure de Potassium
Ferricyanure de Potassium
Dtergent
Conservateur

STABILITE ET CONSERVATION
Stocker labri de la lumire, dans le flacon dorigine bien bouch
18-25C.
En labsence de contamination, le ractif est stable jusqu' la date de
premption indique sur ltiquette du coffret, sil est utilis et conserv
dans les conditions prconises.
En labsence de contamination, le ractif dilu est stable jusqu la
date de premption indique sur ltiquette
Ne pas utiliser le ractif dilu sil est trouble ou si labsorbance du
ractif dilu est > 0.010 abs 546 nm.
Ne pas utiliser le ractif dilu aprs la date de premption indique
sur ltiquette du coffret.

PRELEVEMENT ET PREPARATION DU SPECIMEN (2)


Sang total (EDTA).
Sang ftal : collecter par prlvement ombilical percutan.
Homogniser doucement avant dosage.
Lhmoglobine est stable dans le spcimen :
48 h 2-8 C.
24 h temprature ambiante (< 25 C).

INTERFERENCES (2) (3)


10
7,5
6
1
<1

mmol/L
mmol/L
mmol/L
g/L
%

1
0,75
0,6
0,1
< 0,1

mmol/L
mmol/L
mmol/L
g/L
%

La lipmie ou une concentration leucocytaire > 25.109/L entranent des


rsultats survalus. Des rsultats survalus peuvent aussi tre
observs en prsence dHbC ou dHbS, datteinte hpatique grave ou
par suite de prcipitation des globulines (ex : mylome multiple ou
macroglobulinmie de Waldenstrm).
Young D.S. a publi une liste des substances interfrant avec le dosage.

PRECAUTIONS
Les ractifs BIOLABO sont destins du personnel qualifi, pour un
usage in vitro.
Vrifier lintgrit des ractifs avant leur utilisation.
Utiliser des quipements de protection (blouse, gants, lunettes).
Ne pas pipetter avec la bouche.
Aprs dilution, le contenu du flacon R1 nest plus class comme
prparation dangereuse selon les critres dfinis dans la directive
1999/45/CEE et ses mises jour.
En cas de contact avec la peau ou les yeux, rincer abondamment
leau et consulter un mdecin.
La fiche de donnes de scurit peut tre obtenue sur simple
demande.
Elimination des dchets : respecter la lgislation en vigueur.
Par mesure de scurit, traiter tout spcimen comme potentiellement
infectieux. Respecter la lgislation en vigueur.

REACTIFS ET MATERIEL COMPLEMENTAIRES


1. Equipement de base du laboratoire danalyses mdicales.
2. Sangs de contrle normaux et pathologiques.

CALIBRATION (6)
Utiliser le facteur de calibration indiqu au CALCUL ou un calibrant
(cyanmethmoglobine) titr avec cette mthode.
La frquence de calibration dpend des performances de lanalyseur et
des conditions de conservation du ractif.
Il est recommand de calibrer nouveau dans les cas suivants :
1. Changement du lot de ractif.
2. Aprs oprations de maintenance sur lanalyseur.
3. Les valeurs de contrle obtenues sortent des limites de confiance,
mme aprs utilisation dun nouveau flacon de sang de contrle.
Version : FT 82250 12 09 2008

CONTRLE DE QUALITE

CODE CNQ : E2

Sur tout sang de contrle titr pour cette mthode.

Programme externe de contrle de la qualit.


Il est recommand de contrler dans les cas suivants :

Au moins un contrle par srie.

Au moins un contrle par 24 heures.

Changement de flacon de ractif.

Aprs oprations de maintenance sur lanalyseur.


Lorsquune valeur de contrle se trouve en dehors des limites de
confiance, appliquer les actions suivantes :
1. Rpter lopration en utilisant le mme contrle.
2. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, rpter le test sur
un autre flacon de sang de contrle.
3. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, vrifier les
paramtres
de
lanalyse :
longueur
donde,
volume
spcimen/volume ractif et facteur de calibration.
4. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, utiliser un autre
flacon de ractif et rpter le test.
5. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, contacter le
service technique BIOLABO ou le revendeur local.

INTERVALLES DE REFERENCE (2)


g/dL

g/L

mmol/L

11,5 + 0,78
12,3+ 0,89
12,4 + 0,77
13,4 + 1,17

115 + 7,8
123+ 8,9
124 + 7,7
134 + 12

7,13 + 0,48
7,63 + 0,55
7,69 + 0,48
8,31 + 0,75

13,5-20,5

135-205

8,37-12,7

Dans le sang ftal


18-20 semaines
21-22 semaines
23-25 semaines
26-30 semaines
Dans le sang du cordon
Dans le sang total
0-5 mois
1 mois
2 mois
4 mois
6 mois
9 mois
12 mois
1-2 ans
2-5 ans
5-9 ans
9-12 ans
12-14 ans H
F
15-17 ans H
F
18-44 ans H
F
45-64 ans H
F
65-74 ans H
F

13,4-19,8
10,7-17,1
9,4-13,0
10,3-14,1
11,1-14,1
11,4-14,0
11,3-14,1
11,0-14,0
11,0-14,0
11,5-14,5
12,0-15-0
12,0-16,0
11,5-15,0
11,7-16,6
11,7-15,3
13,2-17,3
11,7-15,5
13,1-17,2
11,7-16,0
12,6-17,4
11,7-16,1

134-198
107-171
94-130
103-141
111-141
114-140
113-141
110-140
110-140
115-145
120-150
120-160
115-150
117-166
117-153
132-173
117-155
131-172
117-160
126-174
117-161

8,31-12,28
6,63-10,6
5,83-8,06
6,39-8,74
6,88-8,74
7,07-8,68
7,01-8,74
6,82-8,68
6,82-8,68
7,13-8,99
7,44-9,3
7,44-9,92
7,13-9,3
7,25-10,29
7,25-9,49
8,18-10,73
7,25-9,61
8,12-10,66
7,25-9,92
7,81-10,79
7,25-9,98

MODE OPERATOIRE (TECHNIQUE MANUELLE)


Introduire dans des tubes essai :

Blanc

Dosage

Ractif de travail R1 dilu

5 mL

5 mL

Eau dminralise

20 RL

Sang homognis

20 RL

Utiliser de prfrence une pipette dplacement positif pour distribuer le sang.


Bien rincer la pipette par aspiration-refoulement dans le ractif. Bien mlanger et
incuber au moins 3 minutes temprature ambiante. Lire labsorbance 546 nm
(520-560) contre le blanc ractif.
A labri de la lumire, la raction est stable au moins 1 heure.

Remarque : des procdures spcifiques sont disponibles pour les


analyseurs automatiques. Contacter le service technique BIOLABO.

CALCUL
= 530 nm

= 546 nm

= 550 nm

Hb (g/L)

Abs x 386,1

Abs x 367,7

Abs x 376,2

Hb (g/dL)

Abs x 38,61

Abs x 36,77

Abs x 37,62

Hb mmol/L (Hb/4)

Abs x 23,96

Abs x 22,82

Abs x 23,34

Ces facteurs sont donns titre indicatif et peuvent varier lgrement. Il


est recommand de les vrifier sur sang de contrle.

REFERENCES
(1)
(2)
(3)
(4)
(5)
(6)

TIETZ N.W. Text book of clinical chemistry, 3rd Ed. C.A. Burtis, E.R. Ashwood,
W.B. Saunders (1999) p. 1657-1688.
Clinical Guide to Laboratory Test, 3rd Ed., N.W. TIETZ (1995) p. 312-314.
YOUNG D.S., Effect of Drugs on Clinical laboratory Tests, 4th Ed. (1995) p. 3325 3-330
DRABKIN, D.L., and AUSTIN, J.H., J Biol, Chem., (1935), 112, p.51
VAN KAMPEN, E.J. and ZIJLSTRA W.G., Determination of hemoglobin and
its derivatives advances in clinical chemistry (1965), 8, 141-187
VAN KAMPEN, E.J. and ZIJLSTRA W.G., International Committee for
standardization in haematology, British journal of haematology (1967), 13
[Suppl] 71

Made in France
Version : FT 82250 12 09 2008

Il est recommand chaque laboratoire de dfinir ses propres valeurs


de rfrence pour la population concerne.

PERFORMANCES
Intra-srie
N = 20

Taux
faible

Taux
lev

Inter-srie
N =20

Taux
faible

Taux
lev

Moyenne g/dL

6,7

18,9

S.D. g/dL

0,05

0,11

Moyenne g/dL

6,3

17 ,1

S.D.g/dL

0,29

C.V. %

0,7

0,6

0,42

C.V. %

4,6

2,5

Limite de dtection : environ 0,3 g/dL


Sensibilit pour 10 g/dL : environ 0,272 Abs. 546 nm.
Comparaison avec ractif du commerce :
y = 0,9999 x + 0,08 r = 0,9962

LIMITE DE LINEARITE
La raction est linaire jusqu 250 g/L, 25 g/dL, 15,5 mmol/L (Hb/4).

Fabricant

Date de premption

IVD

Usage in vitro

Temprature de conservation

REF

Rfrence du produit

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LOT

Numro de lot

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