Consomation Oxygene

n d'ordre: 892
Transfert doxygne
en condition de culture microbienne intensive
Mathias FYFERLING
Ingnieur Gnie des Procds-ENSIACET, Toulouse
Master of Science Bioreactor Systems-UMIST, Manchester, RU
Thse prsente le Jeudi 25 Octobre 2007 devant la commission d'examen pour

lobtention du grade de Docteur de lUniversit de Toulouse, dlivr par l'Institut
National des Sciences Appliques de Toulouse.
Spcialit : Sciences Ecologiques Vtrinaires Agronomiques Bioingenieries
Filire : Microbiologie et Biocatalyse Industrielles
Jury:
Claude-Gilles Dussap
Jack Legrand
Jean-Philippe Steyer
Michel Roustan
Carole Jouve-Molina
Grard Goma
Professeur, Universit B.P. de Clermont Ferrand II

Professeur, Universit de Nantes
Directeur de Recherche, INRA, Universit de Narbonne
Professeur, INSA-Toulouse
Matre de Confrences, INSA-Toulouse
Professeur, INSA-Toulouse
Rapporteur
Rapporteur
Rapporteur
Examinateur
Examinateur
Directeur de thse
Thse prpare au Laboratoire d'Ingnierie des Sytmes Biologiques et des Procds, INSA, UMR CNRS 5504,
UMR INRA 792, dans le cadre de lEcole Doctorale des Sciences Ecologiques Vtrinaires Agronomiques
Bioingnieries.
Titre. Transfert doxygne en conditions de culture microbienne intensive.

Rsum. Lobjectif des travaux est la quantification et la modlisation du transfert doxygne
en condition de production microbienne afin de contribuer lintensification des
performances des bioprocds. Les travaux exprimentaux sont raliss en bioracteur, en
milieux minraux exempt de raction biologique, puis lors de cultures fed-batch
dEscherichia coli, Saccharomyces cerevisiae et Aspergillus niger. Le domaine
dinvestigation est original de par les fortes consommations volumiques doxygne
(0,6 g.L-1.h-1) et puissances dissipes (35 kW.m-3) utilises. Le coefficient de transfert
doxygne est dtermin laide de diffrents modles non structurs (pour la prise en compte
du mode dcoulement des phases, de lentranement de surface et de la rtention gazeuse) sur
des rgimes transitoires ou permanents. Il est notamment observ que, en prsence de raction
biologique, (i) les valeurs du coefficient de transfert KT sont 5 10 fois suprieures celles
mentionnes dans la littrature relative au transfert doxygne, (ii) par comparaison aux
milieux de culture avant ensemencement, KT et KL (la conductance de transfert) sont diviss
dun facteur 4 6. Les effets de lactivit cellulaire sur le transfert doxygne sont caractriss
par la quantification des facteurs dacclration relatifs aux modifications chimiques du
milieu, la consommation doxygne, et la prsence physique de cellules. Les limites des
modles du transfert doxygne en culture microbienne intensive sont discutes, et des
nouvelles voies dinvestigation sont proposes.
Mots cls : transfert doxygne ; culture microbienne ; aration ; bioracteur ; kla ; coefficient
de transfert doxygne ; acclration du transfert ; aration de surface
Title. Oxygen transfer in intensive microbial cultures
Abstract. This work aims to quantify and model oxygen transfer in microbial cultures with an
objective of intensification of bioprocess performances. Labworks in bioreactors are achieved
in mineral media, free from biological reaction, then in fed-batch cultures of Escherichia coli,
Saccharomyces cerevisiae and Aspergillus niger. The fieldwork is original because of the
high oxygen consumptions rates (0,6 g.L-1.h-1) and the high dissipated power (35 kW.m-3)
used. The oxygen transfer coefficient is determined from continuous and dynamic methods,
using several unstructured models, to take into account the profile of the dispersed gaseous
flow, the gas entrained from the surface, and hold-up. Among the observations, in biological
media, (i) values of the oxygen transfer coefficient KT are 5 to 10 times higher than values
from the literature on oxygen transfer, (ii) compared with the initial medium prior to
inoculation, KT and KL (the oxygen transfer conductance) are 4 to 6 times smaller. Effects of
microbial activity on oxygen transfer are characterised and quantified according to
enhancements factors related to chemical modifications of the medium, oxygen consumption,
and physical presence of cells. Limits of mass transfer models in intensive microbial cultures
are discussed and new areas of investigation are proposed.
Key words: oxygen transfer; microbial culture; aeration; bioreactor; kla; oxygen transfer
coefficient; oxygen transfer enhancement; surface aeration.
Merci,
Merci tout particulirement Grard Goma pour mavoir fait partager sa perception des
biotechnologies, son sens de lintuition catalyseur d'ides, et aussi pour lnergie quil a
su me transmettre, louverture desprit quil ma apporte et la confiance quil ma
accorde,
Merci Hans Hollander (DSM-Delft) davoir encourag financirement cette tude, de
mavoir fait partager son expertise scientifique et de mavoir accueilli dans son quipe,
merci Joost Beekman (DSM-Delft) pour son soutien et ses commentaires constructifs
sur mon travail, merci Bruno Cabane (DSM-Sclin) davoir initi cet tude,
Merci Carole Jouve pour la rigueure scientifique et le formalisme quelle ma apports au
travers des relectures de mon tapuscrit,
Merci Claude Maranges pour son soutien, merci Christian Fonade pour ses expertises en
mcanique de transfert,
Merci Gilles Roux, Carine Bideaux et Fadhel Ben Chaabane pour laide prcieuse quils
mont apporte en modlisation,
Merci Christophe Ellero, Michel Bruche, Franois Rizzeto et Henry Feau pour leur soutien
technique efficace,
Merci Sbastien Leduc et Vincent Colombier pour leur assistance en fermentation,
Merci Hlne, Pierre-Alain, et Anne-Sophie pour leurs commentaires constructifs,
Merci au personnel de la mdiathque de lENSIACET pour la gestion exemplaire de ce lieu
de documentation impressionnant.
TABLE DES MATIERES
INTRODUCTION ............................................................................10
I.
ETUDE BIBLIOGRAPHIQUE..............................................14
I.1. Absorption physique .................................................................................................. 16

I.1.1.
Schma thorique du transfert doxygne du gaz au microorganisme............. 16
I.1.2.
Solubilit des gaz en phase liquide .................................................................. 18
I.1.3.
Flux de matire................................................................................................. 19
I.1.4.
La conductance de transfert.............................................................................. 19
I.1.5.
Modles locaux de transfert ............................................................................. 20
I.1.6.
Le coefficient volumique de transfert .............................................................. 22
I.1.6.1.
Thorie...................................................................................................................22
I.1.6.2.
KLa et dimensionnement ........................................................................................23
I.1.6.3.
Relation entre KLa et concentration en CO2 ..........................................................24
I.2. Influences physiques, chimiques, et mcaniques sur KLa....................................... 27

I.2.1.
Effet de la puissance dissipe sur KLa.............................................................. 27
I.2.1.1.
Corrlations empiriques ........................................................................................27
I.2.1.2.
Influence de la puissance dissipe sur kL , approches thoriques..........................29
I.2.1.3.
Influence de la puissance dissipe sur laire interfaciale......................................31
I.2.2.
Effet du dbit daration sur KLa...................................................................... 35
I.2.2.1.
Aration par le diffuseur........................................................................................35
I.2.2.2.
Aration de surface................................................................................................35
I.2.3.
Effet des soluts sur KLa (force ionique) ......................................................... 38
I.2.4.
Effet des agents de surface sur KLa (tension de surface) ................................. 41
I.2.5.
Effet de la viscosit sur KLa ............................................................................. 43
I.2.5.1.
Modles de viscosit ..............................................................................................43
I.2.5.2.
Modlisation de KLa en systme visqueux .............................................................44
I.2.6.
Effet de la temprature sur KLa ........................................................................ 46
I.2.7.
Effet de la prsence de particules solides sur KLa............................................ 47
I.2.7.1.
Effet de blocage de linterface sur kL .....................................................................47
I.2.7.2.
Effet hydrodynamique (boule de neige) sur kL .......................................................48
Table des matires
I.3. Absorption avec consommation simultane de loxygne ...................................... 48

I.3.1.
Absorption en prsence de raction chimique.................................................. 48
I.3.2.
Absorption en prsence de consommation par la biomasse ............................. 51
I.3.2.1.
Thse de Tsao : rpartition htrogne linterface (double zone)......................56
I.3.2.2.
Effet daffinit, effet de navette ..............................................................................58
I.3.2.3.
Transfert direct du gaz dans la cellule ..................................................................59
I.3.2.4.
Lapport des modles de connaissance .................................................................60
I.3.3.
Gnralisation du facteur dacclration.......................................................... 62
I.3.3.1.
Modification du milieu...........................................................................................63
I.3.3.2.
Production de gaz dans la couche limite ...............................................................63
I.4. Dtermination de KLa ................................................................................................ 64

I.4.1.
Mthodes "dynamiques"................................................................................... 65
I.4.1.1.
Mise en uvre de la roxygnation .......................................................................65
I.4.1.2.
Mesure de la rtention gazeuse .............................................................................66
I.4.1.3.
Sur la diffrence de potentiel (x*-x) ......................................................................67
I.4.1.4.
Prise en compte de la biomasse active ..................................................................69
I.4.1.5.
Conclusions sur les mthodes dynamiques ............................................................69
I.4.2.
Mthodes "statiques"........................................................................................ 70
I.4.2.1.
Mthodes au sulfite ................................................................................................70
I.4.2.2.
Hypothse du profil axial de concentration du gaz ...............................................71
I.4.2.3.
Comparaison entre les mthodes statiques et dynamiques....................................71
I.4.3.
Mthodes de dtermination des facteurs dacclration .................................. 72
I.4.4.
Synthse des grandeurs caractristiques .......................................................... 73
I.4.4.1.
KLa et facteur dacclration.................................................................................73
I.4.4.2.
Autres paramtres du transfert ..............................................................................74
I.4.4.3.
Cas des racteurs multi-turbines ...........................................................................75
I.5. Conclusions et perspectives ....................................................................................... 76
II.
MATERIEL ET METHODES ...............................................80
II.1. Souches et milieux de cultures................................................................................... 81

II.2. Conditions de culture ................................................................................................. 83
II.2.1.
Conditions de culture dE. coli......................................................................... 83
II.2.2.
Conditions de culture de S. cerevisiae ............................................................. 85
II.2.3.
Conditions de culture dAspergillus niger ....................................................... 85
II.3. Dtermination de KLa ................................................................................................ 85
Table des matires
II.3.1.
Choix des mthodes exprimentales ................................................................ 85
II.3.2.
Mthodes du bilan gazeux: BG et BG+OS ...................................................... 86
II.3.3.
Mthode de roxygnation ............................................................................... 87
II.3.3.1. La sonde oxygne rponse rapide....................................................................87

II.3.3.2. Mise en uvre exprimentale de la roxygnation et analyse du signal ...............91
II.3.3.3. Identification paramtrique de KLa .......................................................................93
II.3.3.4. Dtermination de KLa en prsence de cellules ltat stationnaire et en
milieu de culture pur en microorganisme ..........................................................94
II.3.3.5. Dtermination de KLa en conditions de production de microbulles .....................94
II.4. Dtermination de paramtres mcaniques et physico-chimiques.......................... 95

II.5. Statistiques et calcul derreurs.................................................................................. 97
III. MODELISATIONS ET ETUDES EXPERIMENTALES ...98

III.1. Modlisation du transfert doxygne pour la dtermination de KLa .................. 100
III.1.1.
Modle homogne pour la phase gazeuse (MH) ............................................ 101
III.1.2. Modle piston pour la phase gazeuse (MP) ................................................... 103

III.1.3.
Comparaison des modles homogne et piston en rgime transitoire ........... 104
III.1.4.
Modles MH et MP utiliss en rgime quasi-stationnaire ............................. 107
III.1.5.
Modles considrant lentranement de surface ............................................. 109
III.1.5.1. Dveloppement des modles ................................................................................109

III.1.5.2. Etude thorique des modles ME1 et ME5 ..........................................................115
III.1.6.
Synthse ......................................................................................................... 116
III.2. Quantification du transfert en racteur en milieux minraux de rfrence ....... 118

III.2.1.
Rsultats prliminaires ................................................................................... 118
III.2.1.1. Dtermination de la puissance dissipe...............................................................118

III.2.1.2. Vitesse critique dentranement de surface..........................................................122
III.2.1.3. Rtention gazeuse des milieux minraux .............................................................123
III.2.2.
Quantification de KLa par la mthode du bilan gazeux coupl

loxydation par le sulfite (BG+OS)................................................................ 125
III.2.3.
Quantification de KLa par roxygnation et modles simples (MH et MP)... 129
III.2.3.1. Rsultats prliminaires ........................................................................................129

III.2.3.2. Valeurs de KLa et comparaison avec la littrature..............................................134
III.2.4.
Quantification de KLa par roxygnation et modles considrant

lentranement de surface ............................................................................... 137
III.2.4.1. Pertinence des modles considrant lentranement de surface..........................137
Table des matires
III.2.4.2. Valeurs de KLa et comparaison avec la littrature..............................................141
III.2.5.
Synthse et conclusions.................................................................................. 150
III.3. Quantification du transfert en racteur en condition de culture microbienne .. 153

III.3.1. Cultures de microorganismes en condition de forte productivit .................. 153
III.3.1.1. Cintiques microbiennes......................................................................................153
III.3.1.2. Comportement rhologique des milieux microbiens............................................159
III.3.2.
Coefficient de transfert doxygne et dynamique microbienne ..................... 161
III.3.2.1. Rsultats...............................................................................................................161
III.3.2.2. Confrontation avec les modles existants ............................................................164
III.3.3.
Analyse et modlisation des effets biologiques ............................................. 165
III.3.3.1. Rtention gazeuse et aire interfaciale..................................................................165

III.3.3.2. Coefficient de transfert doxygne.......................................................................167
III.3.3.3. Conductance de transfert doxygne ...................................................................169
III.3.3.4. Influence de l'volution de sur la modlisation K L a = .e . U S ...............173
III.3.3.5. Etude hors ligne sur milieux rels .......................................................................174
III.3.3.6. Acclration due aux modifications chimiques du milieu (Echem) ........................174
III.3.3.7. Acclration due la prsence physique de particules (Epp) ..............................177
III.3.3.8. Acclration due la consommation doxygne (EqO2) .......................................178
III.3.3.9. Contrle du transfert par lantimousse ...............................................................182
III.3.3.10. Contrle visqueux du transfert : modle dtude Aspergillus niger ....................183
III.3.4.
Analyse de la dtermination de KT................................................................. 186
III.3.4.1. Modification de lcoulement gazeux par entranement de surface ....................186

III.3.4.2. Modification de lcoulement gazeux par la ventilation du CO2 .........................189
III.3.4.3. Influence des dynamiques physico-biologiques ...................................................192
III.3.5.
Conclusions .................................................................................................... 195
IV. CONCLUSIONS ET PERSPECTIVES ..............................198

V.
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES ............................206
VI. ANNEXES..............................................................................220
VI.1. Calcul de la solubilit de loxygne......................................................................... 221
VI.1.1. Dans leau pure............................................................................................... 221
VI.1.2. Calcul de la solubilit de loxygne en milieu salin....................................... 222
VI.2. Mthodes de dtermination de KLa ........................................................................ 223
VI.3. Techniques analytiques............................................................................................ 226
8
Table des matires
VI.3.1. Biomasse ........................................................................................................ 226

VI.3.2. Glucose........................................................................................................... 226
VI.3.3. Ammonium..................................................................................................... 227
VI.3.4. Phosphate ....................................................................................................... 227
VI.3.5. Acides organiques volatils ............................................................................. 227
VI.3.6. Acides organiques non-volatils ...................................................................... 228
VI.4. Lissage et rconciliation des donnes exprimentales........................................... 229
VI.5. Calcul de la moyenne logarithmique ...................................................................... 230
VI.6. Programmation MATLAB ...................................................................................... 231
VI.6.1. Programme pour la dtermination de KLa par le modle MH........................ 231
VI.6.2. Programme pour la dtermination de KLa par le modle MP ........................ 232
VI.6.2.1. Ecriture du systme sous forme matricielle .........................................................232
VI.6.2.2. Programme MATLAB ..........................................................................................233
VI.7. Conditions de culture ............................................................................................... 235

VI.7.1. Culture E. coli C............................................................................................. 235
VI.7.2. Culture E. coli E............................................................................................. 236
VI.8. Matriel et mthodes complmentaires.................................................................. 237
VI.8.1. Microscopie in-situ......................................................................................... 237
VI.8.2. Mthode au gaz traceur (R134a) .................................................................... 239
VI.9. Liste des symboles .................................................................................................... 240
Table des matires
10
INTRODUCTION
11
Introduction
Pour associer des capacits de production importantes et la rduction des cots de

production, lenjeu des bioindustries consiste aujourdhui en lintensification des
performances des bioprocds en termes de productivit, titres et rendements. Il est par
ailleurs parfaitement tabli que lobtention de hautes performances rsulte des interactions
entre les processus biologiques et les transferts multiphasiques (matire et chaleur) au sein du
bioracteur. Chacun de ces phnomnes, caractris par une constante de temps propre,
contribue la dynamique du systme bioracteur. Les interactions doivent tre identifies et
quantifies afin de matriser les facteurs limitants et rduire leurs impacts sur les
performances des bioprocds.
Le transfert doxygne, facteur limitant primordial sur le mtabolisme microbien, fait
lobjet des travaux de nombreuses quipes de recherche. Cependant, les donnes de la
littrature sur le transfert de gaz en culture microbienne sont obtenues des concentrations
cellulaires infrieures 10 g.L-1 (masse sche), et dans des situations qui ne visent pas un
objectif doptimisation de la productivit. La microbiologie moderne, au contraire, recherche
les hautes performances avec des concentrations cellulaires suprieures 50 g.L-1 (masse
sche), des taux de croissance levs, des cintiques matrises et des modes de conduite
optimiss. Cest dans ce cadre, commun aux industriels, et quelque peu tranger la
littrature acadmique, que sinscrit ce travail. Dans cette confrontation, les problmes
fondamentaux auxquels nos travaux ont lambition de contribuer sont les suivants :
- Dans un bioracteur, comment modliser le transfert doxygne en conditions de
fortes productivits ?
- Quelles sont les influences de lactivit cellulaire sur le transfert, dans des conditions
de production compatibles avec une transposition industrielle?
Ces deux questions structurent ce document et cette activit de recherche. Notre travail
a donc pour objectif de contribuer la matrise et lintensification des performances de
procds biotechnologiques par la connaissance des relations entre les dynamiques relatives
aux microorganismes et le transfert doxygne, au sein dun bioracteur. Peut-tre pourrons
nous aussi apporter des lments de rponse Tsao et Lee qui concluaient en 1975 mme
aujourdhui il nexiste pas de schma clair et fondamental du mcanisme de transfert de gaz
en fermentation .
Ceci passe par lacquisition de donnes exprimentales fiables, reproductibles, et
d'outils dinvestigation adapts pour une caractrisation qualitative et quantitative des
12
Introduction
processus biologiques et physiques en condition de production intensive. Devant la

complexit des phnomnes, la dmarche exprimentale vise ltude du transfert doxygne
en bioracteur :
- en prsence de diffrents milieux minraux, par rfrence aux travaux antrieurs
mentionns dans la littrature.
- lors de cultures en mode fed-batch dEscherichia coli, de Saccharomyces cerevisiae
et dAspergillus niger en cuve agite. Ces microorganismes sont des modles
dtude privilgis par le monde industriel et acadmique pour leurs nombreux
domaines dutilisation et lensemble des connaissances biologiques disponibles
ce jour. Ltude in-situ, en condition de culture et production intense, est
privilgie afin de rendre compatibles ces travaux avec une mise en uvre
industrielle.
Lensemble de la dmarche associe exprimentation et modlisation.
Ces travaux sinscrivent dans une collaboration entre le laboratoire DSM Food
Specialties de DSM-Delft et le Laboratoire d'Ingnierie des Systmes Biologiques et des
Procds de lINSA-Toulouse (LISBP). Par rapport la culture scientifique du LISBP, ces
travaux bnficient des tudes de Rols (1990) et Rainer (1992), et poursuivent l'objectif
commun de matriser les processus biologiques et physiques pour lobtention de hautes
performances en culture cellulaire.
Ce document est organis en quatre chapitres.
Ltude bibliographique rassemble ltat des connaissances sur le transfert gaz-liquide
en culture cellulaire, en insistant sur la modlisation et linterprtation des phnomnes : les
modles dcrivant les influences de lenvironnement sur le coefficient de transfert doxygne,
KLa, sont analyss ; les effets dacclration que peut avoir la raction biologique sur le
transfert doxygne sont prsents ; les mthodes permettant la dtermination de KLa sont
dtailles.
Lensemble du matriel et des mthodes est prcis dans le chapitre ponyme.
Les rsultats souvrent sur le dveloppement des modles du transfert doxygne en
bioracteur fortement agit (chapitre III.1) : nous considrons le type dcoulement du gaz, les
effets de lentranement de surface, et la prsence de la rtention gazeuse. Ces modles sont
utiliss sur des rgimes transitoires ou permanents pour dfinir des corrlations de rfrence,
propres au racteur, caractrisant le transfert doxygne sur des milieux minraux de rfrence
13
Introduction
(chapitre III.2). Puis, le transfert doxygne est quantifi lors de cultures cellulaires en
condition de production intensive (chapitre III.3) : les paramtres du transfert doxygne en
milieu biologiques sont compars aux corrlations de rfrence, ce qui permet de faire
apparatre les effets de la dynamique cellulaire sur le transfert doxygne ; des modles sont
dvelopps pour permettre la discussion des rsultats et linterprtation des phnomnes en
argumentant des dynamiques quantifies des phnomnes biologiques, physico-chimiques et
mcaniques.
Les conclusions et perspectives rassemblent les rsultats originaux obtenus dans ce
travail et de nouvelles voies dinvestigations sont proposes.
14
I.
ETUDE BIBLIOGRAPHIQUE
15
Etude Bibliographique
Lintensification des productions microbiennes ncessite la gestion optimale des flux

de matire et des coulements afin dviter les limitations et maintenir le microorganisme
son potentiel optimal. Le transfert de matire le plus complexe caractriser et matriser est
le transfert des gaz. Loxygne consomm et le dioxyde de carbone produit sont les gaz
majoritairement prsents dans les milieux de cultures cellulaires arobies.
Loxygne est un gaz peu soluble. En ce sens, le transfert doxygne apparat
frquemment comme un facteur limitant les performances des bioprocds et lutilisation des
hautes densits cellulaires. Au sein du bioracteur, la concentration en oxygne dissous
rsulte de la combinaison des dynamiques des phnomnes de transfert (matire, quantit de
mouvement) et des phnomnes biologiques (consommation doxygne par la raction
microbienne). En condition de forte consommation doxygne, lapport doxygne doit tre
parfaitement matris.
Le dioxyde de carbone joue souvent un double rle en culture cellulaire : faible
concentration, le CO2 est essentiel la cellule, notamment dans les voies anaplrotiques ;
plus forte concentration, le CO2 dissous et les ions HCO3- perturbent lactivit des
microorganismes en rduisant la croissance et en limitant lactivit mtabolique centrale
(Jones et Greenfield, 1982 ; McIntyre et McNeil, 1998). La ventilation ( stripping ) permet
de limiter sa concentration : le flux dair inject dans le bioracteur apporte loxygne
ncessaire la croissance et assure la ventilation (Royce et Thornhill, 1991).
Les similitudes entre labsorption de loxygne et la dsorption non-nucle du CO2
permettent de transposer les connaissances tablies pour loxygne au transfert du CO2
(Roizard et coll., 1997). En ce sens, il a t choisi de focaliser ces travaux sur le transfert
doxygne.
Afin de rendre compte de ltat de lart du domaine, quatre volets sont proposs en
insistant sur la description et la modlisation des phnomnes :
- Dans un premier temps labsorption purement physique est prsente pour permettre
lintroduction des thories et des lois fondamentales.
- Dans un deuxime temps les influences physiques, chimiques et mcaniques portant
sur le coefficient de transfert doxygne, KLa, sont dveloppes.
16
- Puis les effets de la prsence et de lactivit microbienne sur labsorption sont

introduits.
- Le dernier volet, plus technologique, prsente les mthodes permettant la
dtermination de KLa.
I.1.
Absorption physique
Ltude est ralise dans le cas de liquides mcaniquement agits, c'est--dire mettant
en jeu, lchelle macroscopique, des mouvements convectifs, et lchelle microscopique,

la diffusion molculaire.
I.1.1.
Schma thorique du transfert doxygne du gaz au microorganisme

En culture submerge, selon la thorie la plus rpandue (Arnold et Steel, 1958), le
transfert doxygne depuis la phase gazeuse jusquau microorganisme peut tre dcompos en
une srie dtapes, comme lillustre la Figure 1, pour un profil de concentration doxygne
correspondant des conditions standard de culture cellulaire. A chaque tape correspond une
rsistance au transfert (Tableau 1) qui induit un gradient de concentration. Ces tapes sont
supposes survenir en srie, c'est--dire que loxygne ne transfert pas via des mcanismes
parallles. On peut alors calculer une rsistance globale Z, somme des rsistances en srie. Si
une des rsistances est largement plus petite que les autres alors ltape correspondante nest
pas limitante. Pour le transfert doxygne on considre que la rsistance dans le film liquide,
Z4, est limitante :
Z = i Z4
(1)
17
7,9 -
Coeur
du gaz
Film gazeux
Film liquide
Coeur du liquide
Cellule(s)
0,2 interface gaz-liquide
xO2, yO2, mol.m-3
8-
0,1 -
4
7
5
6
0-
Axe de diffusion
10 m
Figure 1. Schma thorique du transfert doxygne en culture cellulaire en rgime stationnaire

(daprs Arnold et Steel, 1958). Les rsistances successives au transfert (1 8) sont dcrites dans le
Tableau 1. x02, y02 : concentrations en oxygne en phases liquide et gazeuse, respectivement.
Tableau 1. Description des rsistances au transfert doxygne en culture microbienne. Les numros
des rsistances correspondent aux numros sur la Figure 1.
Rsistance
Z1
Localisation
Au sein de la bulle de gaz
Remarques
Z4 ; le cur de la bulle est homogne cause des
recirculations internes dues aux mouvements dans le
liquide et au mouvement brownien
Z2
Dans le film gazeux
Z4 si le gaz est peu soluble (Bartholomew, 1950), sauf

pour des bulles dun diamtre infrieur lpaisseur
thorique du film de diffusion
Z3
Au passage de linterface
=0 implique que la relation de Henry est applicable

0 en prsence dagents de surface
Z4 en gnral, si le gaz est peu soluble dans le liquide
Z4
Dans le film liquide
Rsistance principale au transfert
Z5
En phase liquide
=0 si le racteur est parfaitement agit

0 si des gradients de concentration sont prsents, par
exemple dans un racteur ar par la surface, ou en
prsence de milieu liquide fortement visqueux
Z6
Dans le film liquide autour des

cellules
Z4 car les cellules se trouvent lintrieur du champ

turbulent
Z7
Dans lenceinte cellulaire
Loxygne est la disposition de la cellule mais doit

encore diffuser jusquau site de consommation. Il
existe une rsistance supplmentaire pour atteindre une
cellule au centre dune micelle, dun floque, ou dun
agrgat.
18
I.1.2.
Solubilit des gaz en phase liquide
A linterface gaz-liquide, la concentration de lespce soluble en phase liquide est

gnralement dcrite par une relation dquilibre. Dans le cas de gaz peu solubles, comme
loxygne, la relation dquilibre est dcrite par la loi de Henry (Annexe VI.1) :
x A = H.p A
*
(2)
o x *A est la concentration du gaz A dissous, en quilibre avec sa pression partielle pA dans le

gaz en contact de l'lment de fluide. La constante de Henry, H, dcrot en fonction de la
temprature, et est une fonction de la composition du milieu (Annexe 1). x *A dpend donc de
la temprature et de la pression partielle en gaz, mais aussi de la composition du milieu.
L'effet des lectrolytes est le plus souvent de rduire la solubilit du gaz ( salting out
effect ). La relation de Sechenov (1892) permet de calculer x *A partir de la solubilit dans
l'eau pure, x *A ,0 , et de la concentration xi de lion i :
x*A , 0
log * = Se Ai x i
xA
(3)
o la constante de Sechenov SeAi dpend la fois de la nature du gaz A et de lion i. Les

premiers travaux de Schumpe gnralisant les formules de Sechenov (1892) pour la prise en
compte de plusieurs lectrolytes sont bases sur la force ionique des sels (Quicker et coll.,
1981 ; Schumpe et coll., 1978). La formulation la plus rcente (Weisenberger et Schumpe,
1996) (Eq. 4), plus facile d'utilisation, est base sur la concentration en sel :
*
log x A*,0 = (h i + h A ) x i
xA
(4)
o hi est le paramtre spcifique lion i, et hA le paramtre spcifique au gaz. Le domaine

dapplication de Eq. 4 est trs tendu (22 gaz, 24 cations, 26 anions), et prend en compte les
variations de temprature.
La prsence de sucres diminue galement la solubilit des gaz (Sablayrolles et Barre,
1986) selon la relation de Sechenov (1892) (Eq. 4) mais leffet est moins prononc que celui
des lectrolytes. Dune manire gnrale, linfluence des substances organiques (alcools,
sucres) sur la solubilit peut tre modlise en additionnant les effets de chaque substance
par rapport leau pure (Quicker et coll., 1981) :
*
log x A*,0 = (h i + h A ) x i + Se Aj x j
organique j
x A sel i
(5)
Lquation de Popovic (1979) ne fait pas de distinction entre les sucres et donne une
approximation de la solubilit en solution sucre, convenable lorsque la concentration est
19
infrieure 30 g.L-1 : x*A = x*A , 0 (1 0,0012 x sucre ) . Il est not que pendant des cultures de
Penicillium chrysogenum, la solubilit de loxygne chute de 4 17% par rapport leau
pure : cette variation est due la consommation du sucre et la rgulation du pH par KOH
(Quicker et coll., 1981) (mode batch, sucre (lactose, sucrose) 50 g.L-1, concentration en
biomasse < 25 gMS.L-1, 200 h de fermentation).
I.1.3.
Flux de matire
Si la concentration en gaz dissous dans le cur du liquide est diffrente de celle de

linterface, le rarrangement chaotique des molcules tend rduire la diffrence de
concentration dune manire dcrite par les lois de diffusion. On dit abusivement que le
potentiel de transfert est moteur de la diffusion. La premire loi de Fick (1855) indique que la
densit de flux de diffusion, R, est proportionnelle au gradient de concentration :
r
R = D A grad x A
(6)
o DA est le coefficient de diffusion de lespce A dans la phase dintrt.

A partir de la premire loi de Fick et de lquation de continuit relative au constituant
A tablie sur un volume V, on obtient :
r
x
divN A q A = A
t
(7)
r
o qA est le terme de raction, et N A la densit de flux de transfert (diffusion + transport), il
est possible de dterminer le profil de concentration en fonction du temps, soit en supposant
DA constant sur lespace et en ngligeant le terme de transport :
D A x A q A = xA
t
(8)
Cette quation est frquemment utilise en rgime instationnaire et en prsence de raction

chimique ou biologique. En labsence de raction, cest la seconde loi de Fick.
I.1.4.
La conductance de transfert
La conductance de transfert est introduite de manire pragmatique pour exprimer que

le flux de matire est gal au produit dun coefficient de proportionnalit par une diffrence
de potentiel dchange. On peut exprimer la densit de flux molaire linterface, N0
(mol.m-2.s-1), pour le transfert en phase liquide :
N A0 = k L ( x A0 x A )
(9)
o kL est la conductance de transfert du compos A en phase liquide (m.s-1), xA0 est la
20
concentration linterface et xA la concentration au cur de la phase liquide. Et pour le

transfert en phase gazeuse :
NA0 = k G (pA pA0)
(10)
o kG est la conductance de transfert en phase gazeuse (mol.bar-1.m-2.s-1), pA est la pression

partielle au sein de la phase gazeuse et pA0 la pression partielle linterface.
Notons que les conductances de transfert dpendent aussi dune contribution lie au
mouvement densemble des molcules, qui a lieu indpendamment du gradient de
concentration, et qui est en partie gnre par la diffusion elle mme. Cette contribution est
nglige pour les faibles intensits de transfert, comme par exemple pour la diffusion de
loxygne dans leau.
Les conductances individuelles relatives chaque phase ainsi que les concentrations
interfaciales sont difficiles mesurer. Une conductance globale de transfert est donc dfinie
par rapport la phase dintrt : la phase liquide :
N A0 = K L ( x A x A )
*
(11)
o KL est la conductance globale de transfert du compos A dfinie par rapport la phase

liquide, x*A est la concentration du constituant A dans la phase liquide, linterface gazliquide, et donc suppose en quilibre avec sa pression partielle pA dans la phase gazeuse
(Eq. 2). A partir de cette dfinition il est possible dcrire Eq. 1 en termes de conductance,
inverse de la rsistance :
1
KL
H
kG
1
1
+
k i kL
(12)
o sont considres respectivement les rsistances du film gazeux, de linterface, et du film

liquide.
I.1.5.
Modles locaux de transfert
Lobjectif des modles locaux de transfert est de relier kL aux grandeurs

caractristiques du systme. Les trois modles principaux (Whitman, Higbie, Danckwerts)
reposent sur les trois hypothses communes suivantes :
1/ A linterface lquilibre de concentration est atteint.
2/ La rsistance interfaciale au transfert est nulle.
3/ Il ny a pas de raction entre le liquide et le gaz.
et des hypothses complmentaires, spcifiques chaque modle.
21
Le modle du double film (Whitman, 1923) est schmatis sur la Figure 1 (en
omettant la rsistance interfaciale) ; il est bas sur les hypothses suivantes :
-Il existe un double film stagnant de part et dautre de l'interface gaz-liquide.
-La rsistance au transfert est localise dans les deux films.
Le gaz franchit donc le double film par diffusion molculaire uniquement. En utilisant
la forme unidimensionnelle de Eq. 6, selon un axe z perpendiculaire linterface, on peut
crire :
R=
DA *
(x A x A)
(13)
o est lpaisseur du film liquide, x *A est la concentration de lespce A linterface et xA la

concentration dans le liquide homogne. Par identification avec Eq. 9 :
kL =
DA
(14)
reflte l'hydrodynamique du systme ainsi que certaines de ses proprits physiques.

Le modle du film est par hypothse applicable uniquement en rgime stationnaire, o
lorsque le temps de contact entre le gaz et le liquide est suprieur au temps de pntration,
c'est--dire au temps ncessaire ltablissement du profil stationnaire de concentration dans
le film.
Limprobabilit de lexistence dune telle discontinuit hydrodynamique entre un film
stagnant et un milieu agit, et la volont de prendre en compte leffet de la turbulence sur
linterface gaz-liquide a pouss au dveloppement dautres modles, dits de renouvellement
de surface : les lments de volume de l'interface demeurent l'interface pendant un certain
temps avant d'tre remplacs par de nouveaux lments de volume en provenance du cur du
liquide. Les interfaces gaz-liquide sont donc composes d'lments d'ges diffrents. La
diffrence entre les modles de renouvellement de surface rside dans la rpartition des temps
de sjours de ces lments autour du temps de sjour moyen.
Le modle de pntration de Higbie (1935) est bas sur lhypothse suivante :
-Chaque lment de liquide est expos l'interface pendant la mme dure de temps te avant
d'tre remplac par un lment ayant la composition du cur du liquide.
Le gaz diffuse dans les lments de liquide selon la loi de Fick. Dans ces conditions
lintgration de lquation de continuit donne, par identification avec Eq. 9:
22
kL = 2
DA
. t e
(15)
Cette quation est valable pour te>0,2 s. La dure d'exposition, te, reflte les conditions
hydrodynamiques du milieu. Il a t montr exprimentalement (Higbie, 1935) que pour des
temps dexposition trs courts kL ne crot pas indfiniment mais tend vers une valeur limite.
Le modle de renouvellement de surface de Danckwerts (1951) est bas sur une
hypothse qui contredit lhypothse de Higbie (1935) :
-Une mme fraction de l'interface renouvele par unit de temps, s, indpendamment de l'ge
des lments la constituant.
Par identification avec Eq. 9 :
k L = D A .s
(16)
Le paramtre s qui dsigne la fraction renouvele par unit de temps (exprime en s-1) est une
fonction des conditions hydrodynamiques du systme. Tsao et Lee (1975) ont vrifi
exprimentalement laide dune micro-sonde oxygne (diamtre 1 m, longueur 2 m)
que kL est proportionnel s. Cependant, les auteurs, sans prsenter de mthode de calcul,
mesurent un nombre de renouvellements de llment de liquide par unit de temps qui
correspondrait plus au paramtre te de Higbie qu la fraction de linterface renouvele par
unit de temps.
Dans chacun des trois modles un seul paramtre, , te ou s, prend en compte
l'hydrodynamique du systme. Il existe d'autres modles d'absorption mais leur utilisation est
soit plus complexe que les modles prsents ici, soit mal approprie pour l'tude de racteurs
agits (Danckwerts, 1970). Les prdictions de vitesses d'absorption auxquelles conduisent les
modles sont souvent voisines, notamment en condition de consommation simultane du gaz
absorb (Danckwerts, 1970). Cest pourquoi le modle du film, plus simple, reste le plus
utilis.
I.1.6.
Le coefficient volumique de transfert
I.1.6.1. Thorie
En pratique laire interfaciale des contacteurs gaz-liquide est souvent inconnue ; la

conductance globale de transfert est donc dfinie sous la forme dune grandeur volumique,
(KLa)loc, directement mesurable par une exprience dabsorption :
23
dW A = K L,loc a loc .( x A x A ).dV

*
(17)
o dWA est le flux transfr (mol.s-1) dans llment de volume dV et aloc est laire interfaciale
incluse dans llment de volume dV. KL,loc et aloc sont fonctions de la puissance dissipe
localement, et donc de la position dans le racteur (Lopes de Figueiredo et Calderbank, 1979 ;
Royce et Thornhill, 1991). Le problme de leur dtermination est simplifi en intgrant sur
lensemble du racteur et en proposant un coefficient volumique de transfert global, valeur
moyenne dfinie sur lensemble du racteur :
W A = K L a.( x A x A ).VL
*
(18)
WA est le flux transfr par lensemble du racteur (mol.s-1), VL le volume de liquide dans le
racteur, et KLa (s-1) est le coefficient volumique de transfert global dfini par rapport la
phase liquide. Cette quation est valable en labsence de raction chimique et pour une
temprature et un coefficient de diffusion l'interface proche de celui du coeur du liquide.
Son utilisation implique que le racteur soit considr comme un racteur homogne en terme
de puissance dissipe.
Loxygne tant un gaz peu soluble, le terme de rsistance en phase gaz H/kG (Eq. 12),
peut presque toujours tre nglige (vant Riet et Tramper, 1991 ; Royce et Thornhill, 1991).
En effet, Bartholomew et coll. (1950) ont dmontr (VL=3,2 L, aration=1,8 vvm, N=375
rpm, 27<T<32C) que lnergie dactivation de KLa vaut E=17600 J.mol-1 ce qui correspond
un phnomne de diffusion en phase liquide, et ce qui prouve que ltape limitante du
transfert doxygne et bien localise dans la phase liquide, car en phase gazeuse E serait 10
fois plus petit.
I.1.6.2. KLa et dimensionnement
Les mthodes classiques de dimensionnement lchelle suprieure ( scale-up )

reposent sur la conservation dun paramtre essentiel la culture cellulaire ; lorsquil sagit de
loxygne dissous ce paramtre est souvent la puissance dissipe par unit de volume ou KLa
(Aiba et coll., 1973 ; Junker, 2004). Or, on remarque souvent une inadquation entre la
production en racteur de laboratoire et la production industrielle car ces mthodes de scaleup considrent le racteur comme un systme homogne et ne tiennent pas compte des
htrognits propres aux racteurs industriels (Bylund et coll., 1998).
Le dimensionnement assist par mthode numrique comme le pratique Reuss
(Schmalzriedt et coll., 2002) est une approche intgre, qui permet dassocier lidalit des
racteurs de laboratoire la complexit des grands racteurs, en combinant lhydrodynamique
24
et la rponse microbienne au stress. Lapproche numrique intgre permet un calcul plus fin
du scale-up partir de ltude de la rponse microbienne au stress, obtenue en laboratoire par
une approche oppose au scale-up, le scale-down. Lobjectif du scale-down est de dtecter les
conditions dhtrognits auxquelles les microorganismes sont soumis lchelle
industrielle et de les reproduire lchelle du laboratoire (Naubauer et coll., 1995). Pour cela
le racteur de scale-down est compos de racteurs idaux en srie (Bylund et coll., 1999).
I.1.6.3. Relation entre KLa et concentration en CO2
La cintique de dsorption du CO2 est trs lente, contrle par la raction

k1
dhydratation ( CO 2 aq + H 2 O H 2 CO3 ; k1=2,6.10-3; Sander, 1999). L'quilibre entre les

espces dissoutes et le gaz nest donc pas instantan, et puisque le CO2 est produit en phase
liquide, il est souvent en sursaturation dans le milieu. Des drivs du CO2 prsents en phase
liquide, seul le CO2 dissous participe au transfert linterface gaz-liquide. Comme pour le
transfert doxygne, le transfert de CO2 obit lquation suivante en rgime permanent :
WCO 2
= K L a CO 2 .( x CO 2 x *CO 2)
VL
(19)
o KLaCO2 est le coefficient de transfert global du CO2, rapport la phase liquide, xCO 2 et
*
x CO 2 sont les concentrations de CO2 dissous et en quilibre avec la phase gaz, respectivement.
*
xCO 2 est suprieur x CO 2 du fait de la production de CO2 en phase liquide. Si on suppose
pour les deux gaz que laire dchange est identique (soit que la dsorption de CO2 ne
seffectue quau travers de linterface gaz-liquide, c'est--dire sans nuclation de bulle de
CO2), KLaCO2 peut tre exprim en fonction de KLaO2 (calcul pour loxygne). On peut en
effet approximer le coefficient de transfert dun gaz i, kLi, partir du coefficient de transfert
dun gaz de rfrence, kLref, en utilisant une relation de transfert local (Eq. 14, Eq. 15, Eq. 16)
(Linek et coll., 1987) car le rapport des coefficients de diffusion, mme temprature et
composition du milieu, est constant (in Royce et Thornhill, 1991). Par exemple partir du
modle de Higbie (Eq. 15) :
k Li = k Lref
Di
Dref
(20)
A partir de la dynamique de transfert du CO2 (suppose voluer similairement celle de

loxygne), Royce et Thornhill (1991) calculent lexcs de CO2 , , qui reprsente le rapport
entre le CO2 dissous et la valeur de lquilibre (Figure 2). diminue lorsque la valeur du KLa
25
de loxygne augmente ( plus forte agitation le transfert est meilleur : la concentration dans
le liquide tend s'quilibrer avec celle du gaz); diminue aussi lorsque laration diminue
(une plus faible quantit dair est sature plus rapidement en CO2). Dautre part, pour un
couple de valeurs du coefficient respiratoire et du KLa de loxygne, il est possible de calculer
lexcs de CO2 maximum, obtenu en minimisant la valeur de loxygne dissous : lexcs
diminue avec laugmentation de la fraction de CO2 en sortie de fermenteur (Royce et
Thornhill, 1991). En conclusion du travail de Royce et Thornhill (1991), lorsque la valeur du
KLa de loxygne est leve (>0,1 s-1) et que la concentration en CO2 en sortie de fermenteur
est leve (>5% pour QR=1), la valeur du CO2 dissous peut tre approxime avec un
minimum derreur par la concentration en quilibre avec le gaz de sortie. Le CO2 tant trs
soluble dans leau, le potentiel de transfert en entre de fermenteur est trs grand. Ainsi, dans
les fermenteurs industriels lquilibre est atteint rapidement dans le bas du fermenteur ; la
concentration de CO2 dissous peut donc tre considre comme tant lquilibre avec la
fraction de CO2 dans le gaz de sortie (Yagi et Yoshida, 1977 ; Royce et Thornhill, 1991).
Figure 2. Effet des paramtres de transfert sur la sursaturation en CO2 (daprs

Royce et Thornhill, 1991). La sursaturation =[CO2]/[CO2]eq est donne en
fonction du flux daration Q, et du coefficient de transfert de loxygne KLa,
30C et pression atmosphrique dans leau.
26
Les rsultats exprimentaux de Dahod (1993) confortent les tendances prvues par
lanalyse thorique de Royce et Thornhill (1991) : la sursaturation en CO2 dissous en culture
de Streptomyces (600 L, 3 Rushton, 0,2<vvm<1, 170<N<290 rpm) diminue lorsque
lagitation augmente et le flux daration diminue. Dahod (1993) ralise deux cultures, la
premire faiblement visqueuse (< 100 cp), la seconde plus visqueuse (2000-3000 cp) ; les
conditions opratoires tant fixes, la sursaturation dans la culture la plus visqueuse est
toujours plus leve et peut atteindre 1,9 contre 1,3 dans la culture moins visqueuse : la
sursaturation augmente avec la viscosit de la culture. Cette tendance est aussi prvue par
Royce et Thornhill (1991) car laugmentation de la viscosit entrane la diminution de KLa
(Figure 2). Par contre Dahod (1993) conteste lhypothse dun rapport KLaO2/KLaCO2 constant,
quil estime exprimentalement 0,33 faible viscosit, et 0,6 forte viscosit, mais sans
dtailler sa mthode de calcul de KLa.
Dans la couche limite autour dune bulle, la concentration de CO2 passe de la valeur
moyenne prsente au cur du fluide, la valeur en quilibre avec la phase gazeuse. Prs de
linterface gaz-liquide, lquilibre de la raction dhydratation-dshydratation peut donc se
dplacer vers la production de CO2 (dshydratation). Une possible acclration de la
dsorption de CO2 peut alors avoir lieu dans le cas ou le flux de la raction de dshydratation
vers la production de CO2 est significatif compar au flux dsorb. Ce cas, rare en cultures
microbiennes, napparat que si le systme contient un catalyseur tel que lanhydrase
carbonique. Lacclration de la dsorption est alors dautant plus forte que le pH est lev
(Yagi et Yoshida, 1977). Autrement il est dmontr que lacclration de la dsorption est
ngligeable (Yagi et Yoshida, 1977 ; Royce et Thornhill, 1991). La dsorption est donc place
sous lunique contrle diffusionnel et ne dpend pas du pH.
Dans la plupart des milieux de fermentation la dsorption du CO2 s'effectue facilement
lorsque la concentration en CO2 dpasse la concentration de saturation, mais elle peut devenir
limitante en milieu complexe. Le CO2 peut alors tre vacu par nuclation. La nuclation du
CO2 est favorise par la prsence de bulles, de surfaces irrgulires, mais aussi de particules
solides comme les cellules elles mmes, et par laugmentation de lagitation (Jones et
Greenfield, 1982).
27
I.2.
Influences physiques, chimiques, et mcaniques sur KLa

La valeur de KLa nest pas une donne intrinsque des changeurs gaz-liquide car en
plus de dpendre de la configuration et des paramtres opratoires de lchangeur, elle dpend

des proprits des fluides en contact. Pour identifier et quantifier les paramtres ayant une
influence sur KLa, il est ncessaire de dissocier le produit KLa en ses facteurs : KL la
conductance globale dfinie par rapport la phase liquide, et a laire interfaciale. KL et a
varient de manire diffrente en fonction de lhydrodynamique (type de racteur, gomtrie,
conditions opratoires), des proprits physiques et chimiques du liquide (prsence dagents
de surface, viscosit, ) et de la temprature.
I.2.1.
Effet de la puissance dissipe sur KLa
Le racteur agit ( stirred tank reactor , STR) est, avec la colonne bulles, le
racteur le plus utilis en culture microbienne. En racteur agit la puissance est fournie au
liquide par lintermdiaire des turbines dagitation. Le racteur agit est fondamentalement
diffrent de la colonne bulles car cest au niveau de lagitateur que la dispersion gazeuse se
forme, et non au niveau du distributeur dair. La puissance dissipe assure donc la dispersion
gazeuse et la mise en contact du gaz avec le liquide. Par contre le systme dapport de gaz
(canne ou diffuseur) na pas dimportance sur le transfert gazeux en racteur agit, pourvu que
le gaz arrive sous lagitateur et que celui-ci ait une vitesse assez importante pour disperser
tout le gaz. Le racteur agit est prfr la colonne bulles pour privilgier lhomognit
du mlange et le transfert de matire, en particulier le transfert gazeux, avec lobtention de
surfaces dchange trs importantes entre le gaz et le liquide.
I.2.1.1. Corrlations empiriques
KLa est le plus souvent modlis de manire empirique partir de la puissance

dissipe par unit de volume, e, et de la vitesse superficielle du gaz, Us (vant Riet, 1979 ; Ho
et coll., 1987 ; Linek et coll., 1987 ; Montes et coll. 1999 ; Gogate et Pandit, 1999 ; GarciaOchoa et Gomez, 2004) :
K L a = .e . US
(21)
o e=PG/VL, avec PG la puissance dissipe dans le racteur en condition daration, et VL le

volume liquide.
Compte tenu du grand nombre de modles permettant le calcul de KLa, les valeurs des
coefficients et sont trs disperses (0,4<<1,3 ; 0<<0,7). est en gnral dpendant de
28
: une faible valeur de correspond une forte valeur de (Robinson et Wilke, 1973 ;
Linek et coll., 1988b). Il est une convention tablie de distinguer les milieux non ioniques (ou
coalescents) des milieux ioniques (ou non coalescents), ainsi que les milieux non-visqueux
des milieux visqueux (coalescents ou non). Conformment aux travaux dune dizaine
dauteurs, vant Riet (1979) propose pour un systme agit (sans engorgement et sans aration
de surface), les relations suivantes, valides avec 20 40% derreur :
- en solution non ionique, pour 500<e<10000 W.m-3 et 0,002<VL<2,6 m-3 :
2 0 , 4
0,5
K L a = 2,6 10 .e . US
(22)
- en solution ionique, pour 500<e<10000 W.m-3 ; 0,002<VL<4,4 m-3 :

3 0 , 7
0, 2
K L a = 2,0 10 .e . US
(23)
Pour saffranchir de la mesure de la puissance dissipe, Yawalkar et coll. (2002) proposent de

corrler KLa la dispersion relative, N/NDC, o NDC est la vitesse dagitation minimum
permettant la dispersion complte de la phase gaz dans tout le volume du racteur. Ainsi ils
obtiennent :
1, 464
K L a = 3,35
N DC
US
(24)
KLa dpend de la puissance dissipe par unit de volume, indpendamment du type et du

nombre dagitateurs pour un systme non visqueux (vant Riet, 1979). Cependant, pour une
mme vitesse dagitation, la puissance dissipe dpend du type dagitateur. En rgime
turbulent cest la turbine Rushton disque qui, mme vitesse dagitation, fournit le plus de
puissance au liquide ; cest une des raisons pour laquelle elle est trs utilise en fermentation.
On peut lui trouver le dsavantage de gnrer une dispersion radiale, crant ainsi, le long du
fermenteur, des zones de mlange htrognes entre elles, lorsque plusieurs turbines Rushton
sont utilises dans un mme racteur. Dans certains cas on observe mme laugmentation du
temps de mlange avec laugmentation du nombre de turbines (Vasconcelos et coll., 1995). Il
est possible de remdier au problme en intercalant une turbine dispersion radiale
(Schmalzriedt et coll., 2003). La place des agitateurs est importante : un agitateur plac une
distance du fond infrieure celle de son diamtre peut diminuer la puissance dissipe, et
donc le transfert, de mme pour un agitateur plac trop prs de la surface libre (Nienow et
coll., 1977).
29
I.2.1.2. Influence de la puissance dissipe sur kL , approches thoriques
Cette partie thorique prsente des modles de la conductance en phase liquide, kL (et
non de la conductance globale KL). Les thories diffrent sur la manire dont sopre le
transfert interfacial. Cest une des controverses les plus disputes en matire daration. On
distingue deux groupes de modles :
- Les modles deddy, indpendants du diamtre de bulle.
- Les modles de vitesse de glissement, dpendants du diamtre de bulle.
a) Dans les modles deddy, il est suppos que le renouvellement de linterface est d
aux tourbillons de petite chelle du champ turbulent (Lamont et Scott, 1970). Ces tourbillons
existent des chelles infrieures celle des bulles : dans ce cas le diamtre de bulle nest pas
un paramtre dterminant du calcul de kL :
1
k L = c1
e 4
D L
(25)
o c1 est une constante estime diffremment selon les auteurs (2/, Garcia-Ochoa et
Gomez, 2004 ; 0,523, Linek et coll., 2004 ; 0,448, Linek et coll., 2005), et DL le coefficient de
diffusion du gaz dans le liquide. Eq. 25 est tablie partir du model de Higbie (1935), mais
tous les modles locaux de transfert prdisent laugmentation de KL avec e, soit par la
rduction de la couche limite (Eq. 14), soit par la rduction du temps dexposition de
llment de volume (Eq. 15), ou par laugmentation de la fraction renouvele par unit de
temps (Eq. 16). Linek et coll. (2005) valident la proportionnalit entre kL et e1/4 pour toutes
sortes de milieux non-coalescents, except pour lajout de longues fibres de carboxymethyl
cellulose de sodium CMC TS.20 et pour locenol (agent antimousse), avec lequel les
exposants sont infrieurs (0,09 et 0,188, respectivement).
Garcia-Ochoa et Gomez (2004) proposent une valeur de KLa base sur des approches
thoriques, utilisant dune part Eq. 25 pour le calcul de kL, et dautre part lvaluation de
laire interfaciale a partir de la rtention gazeuse et dune taille de bulle moyenne. Le
dveloppement de Garcia-Ochoa et Gomez (2004) est valid pour diffrents fluides visqueux
et converge trs bien vers la corrlation empirique dcrite par Eq. 21. Cependant le domaine
de validation reste restreint (e<2 kW.m-3 ; 10-3<US<5.10-3 m.s-1 ; 3,6 h-1<KLa<100 h-1) et les
valeurs de la littrature servant de validation sont discutables : le travail de Linek et coll.
(1987) est cit pour valider une corrlation en milieu newtonien, mais la mme publication est
carte lorsquelle propose, en milieu non-newtonien, un coefficient pour la viscosit
30
apparente au moins trois fois infrieur celui de Garcia-Ochoa et Gomez. Un dveloppement

similaire est propos par Kawase et Moo-Young (1990, 1991) pour le calcul de KLa en
colonne bulles dans le cas de fluides prsentant une contrainte seuil (yield stress).
b) Pour les modles de vitesse de glissement, le transfert interfacial dpend de la
nature de linterface, selon quelle est mobile ou rigide. Pour ces modles kL diminue avec le
diamtre de bulle selon une relation du type (Midoux et coll., 1980) :
k L = k L 0
(26)
o 0 est un diamtre relatif et k L la valeur de kL pour 0=1 ; vaut en gnral -0,5.
Alves et coll. (2004) proposent, pour linterface mobile, le modle de Higbie (Eq. 15),
avec te=db/vg o db est le diamtre de bulle et vg la vitesse de glissement (vitesse relative du
liquide par rapport la bulle) :
mobile
kL
vg DL
db
(27)
et pour linterface rigide, une quation tablie par Frssling (1938) :

rigide
kL
=c
vg 2 / 3 1 / 6
. DL .
db
(28)
o est la viscosit cinmatique et c une constante value entre 0,42 et 0,95. Eq. 27 prvoit
des valeurs de kL entre 4 et plus de 8 fois suprieures celles issues de Eq. 28.
Alves et coll. (2004) prsentent un modle de transfert bas sur une cintique de
contamination de linterface par des surfactants. Les bulles arrivent dans le liquide avec une
interface libre qui est peu peu contamine par les surfactants, depuis la zone de trane
jusqu une certaine hauteur de transition sur la hauteur de la bulle. Lorsque cette hauteur est
atteinte, linterface devient subitement rigide. Le temps de contamination pour les petites
bulles est trs court, ce qui explique lide rpandue que les petites bulles (db<1 mm) ont une
interface rigide, tandis que les grosses bulles (db>2,5 mm) ont une interface mobile
(Calderbank et Moo-Young, 1961). Dans les modles antrieurs celui dAlves et coll.
(2004) la transition entre les deux types dinterface nest ni explique, ni modlise. Alves et
coll. (2004) relient la rigidit de linterface la taille de la bulle et son temps de sjour dans
le racteur, et calculent kL comme une moyenne pondre entre les quations Eq. 27 et Eq.
28 : le profil de kL est donc dcrit de manire continue entre la premire et la seconde
quation, taille de bulle dcroissante, ou temps de sjour de bulle croissant. Similairement,
Benedek et Heideger (1971) tablissent que KLa dpend du diamtre de bulle (KLa=f(db-0,5)),
31
lui-mme dpendant de lagitation (db=f(N-0,24)). Par contre Benedek et Heideger (1971)

concluent que kL est contrl par le renouvellement de surface qui diminue avec la diminution
du diamtre de bulle. Ils proposent donc une relation continue dpendante des proprits du
milieu entre kL et le diamtre de bulle. Contrairement aux modles deddy, la taille de bulle
est un paramtre trs important des modles de glissement.
Ho et coll. (1987) dmontrent exprimentalement la proportionnalit entre k L et D2L/ 3
en cuve agit dans des solutions dlectrolytes (VL=14 L, 2 turbines, N=400-800 rpm).
c) Conclusions.
Les deux modles thoriques sont contradictoires : agitation croissante, le modle
deddy prvoit une augmentation de kL, alors que le modle des vitesses de glissement,
puisque la taille de bulle diminue, prvoit le passage de kmobile vers krigide, c'est--dire une
diminution de kL.
Linek et coll. (2004 et 2005) estiment que seul le modle deddy est valable, mme en
prsence de surfactant et dagent viscosant. Ils soutiennent ardemment depuis plusieurs
annes que les publications qui tablissent le contraire en cuves agites sont bases sur une
mauvaise valuation de KLa (puisque KL est souvent mesur par le rapport KLa/a), (Linek et
coll., 1987, 1988b, 2004, 2005).
La prsence de ces deux conceptions, eddy et vitesse de glissement, ouvre un dbat
plus large. En effet le modle deddy semble sappliquer aux dispersions avec agitation
mcanique, tandis que le modle de vitesse de glissement sapplique aux dispersions nonagites (parmi les 11 auteurs que citent Ho et coll. (1987) pour avoir trouv une
proportionnalit entre kL et D2L/ 3 , un seul a travaill en cuve agite). Le mcanisme de
transfert serait donc diffrent selon quil y ait agitation ou pas (Bouaifi et coll., 2001 ; Linek
et coll., 2005).
I.2.1.3. Influence de la puissance dissipe sur laire interfaciale
Dans le prolongement directe de l'influence de la puissance dissipe sur l'aire

interfaciale, l'aire interfaciale tant dpendante du diamtre de bulle, les corrlations
permettant d'valuer le diamtre thorique des bulles seront exposes, suivies des mesures
exprimentales ralises en cuve agite, et de l'influence des microbulles sur la dtermination
de KLa.
32
a) Corrlations
Le modle utilis pour dcrire KLa (Eq. 21) est aussi utilis pour dcrire laire
interfaciale a (Ho et coll., 1987 ; Takahashi et coll., 1992) : a = 1 .e 1 . US1
Laire interfaciale sexprime gomtriquement en fonction de la rtention gazeuse
( hold-up ), et du diamtre moyen de bulle db :
a=
6
db
(29)
avec =VG/VL, VG tant le volume de gaz dispers.

Laugmentation de la puissance dissipe permet dune part de rduire le diamtre
moyen des bulles et dautre part daugmenter la rtention gazeuse en maintenant plus de
bulles dans le liquide. Il existe aussi une vitesse dagitation limite qui permet une rpartition
optimum de gaz dans lensemble du racteur (Nienow et coll., 1977), estime en terme de
vitesse de cisaillement (vitesse du bout de pale) entre 2 et 2,5 m.s-1 (vant Riet, 1979). Enfin,
que ce soit en systme coalescent ou non, puissance dissipe quivalente, aucune influence
vidente du type de turbine sur la taille des bulles nest remarque (Alves et coll., 2002) (sont
compares Rushton, Prochem Maxflo et lame plate ( flat blade )).
b) Diamtre thorique de bulle
La relation entre la taille de bulle et la puissance dissipe est dabord dveloppe par
Hinze (1955) pour les gouttes, pour ensuite tre vrifie par Calderbank (1958) pour les
bulles.
Hinze (1955) suppose que la taille des gouttes dans le flux turbulent est contrle dun
ct par les phnomnes de rupture gnrs par la turbulence, et de lautre par les forces de
cohsion de tension de surface qui sopposent la rupture. A partir du nombre de Weber il
dfinit un nombre de Weber critique :
(N We )crit
2 d MAX
(30)
o 2 est la moyenne, sur le volume considr, du carr des gradients de vitesse sur une
distance gale dMAX, le diamtre stable maximum, et la tension de surface. Laddition de
sels augmente la tension de surface (jusqu quelques pourcents seulement) alors que
laddition de substances organiques la diminue dans la majorit des cas (jusqu' plusieurs
dizaines de pourcents) (Marrucci et Nicodemo, 1967). La goutte est stable si son nombre de
Weber est infrieur son nombre de Weber critique, et se dsintgre dans le cas contraire.
33
Dans le cas dune turbulence homogne isotrope, Hinze (1955) propose un diamtre stable
maximum, appliqu aux mulsions de liquides :
d MAX = C
3/5
2 / 5
ed
(31)
o ed est le taux de dissipation de lnergie turbulente par unit de masse.

Par similitude, partir de la distribution de taille des bulles, il est possible de calculer
un diamtre moyen de Sauter, dS :
n i d 3i
dS =
n i d i2
(32)
Il est couramment suppos que le diamtre de Sauter est proportionnel dMAX :

dS = Cd MAX
(33)
ep est souvent estim comme tant la puissance dissipe par unit de masse, PG/VL=e/.
Alves et coll. (2002) vrifient la relation en reliant la taille de bulle la puissance dissipe par
unit de volume :
dS = Ce
(34)
avec, pour un systme non-coalescent = -0,52 en dcharge de turbine (c'est--dire en bout de

pale, l o les bulles sont formes, et avant quelles ne coalescent), et -0,37 dans le cur du
fluide ; et pour un systme coalescent = -0,24 en dcharge de turbine, et -0,14 dans le cur
du fluide. Les exposants sont diffrents de la valeur thorique = -0,4 lie lanalyse de
Hinze (1955). Il semble donc que le diamtre thorique des bulles dpende largement des
phnomnes de coalescence, non considrs par Hinze.
Enfin, dS augmente lgrement avec la masse molculaire du gaz Mg : dS est une
fonction linaire de g0,11 (Takahashi et coll., 1992) :.
c) Mesure de la taille des bulles en cuve agite
Les mthodes de mesure de la taille des bulles sont directes (visuelles) ou indirectes.
Les mthodes directes par film vido ou photographies sont les plus sensibles et dtectent des
diamtres de bulle minimum dbm de 40 m (Alves et coll., 2002). Elles peuvent prsenter
lavantage dtre non-intrusives mais alors elles ne permettent que deffectuer une mesure en
bordure de paroi cause de la gne optique (Takahashi et coll., 1992). Les mthodes
indirectes sont trs nombreuses (Alves et coll., 2002). On peut citer, par sensibilit
dcroissante, les mthodes par sonde conductimtrique (dbm=0,98 mm) et par sonde
34
photolectrique capillaire succion (dbm=550 m par Moro et coll., 1999 ; 300 m par Alves
et coll., 2002).
Alves et coll. (2002 et 2004) ont mesur la distribution de taille des bulles dans un
racteur bitag de 40 L en ralisant des prlvements dans 31 zones reprsentatives de
lhydrodynamique du racteur. On remarque que quelle que soit la zone, la rpartition de
taille nest pas symtrique et les plus petites bulles sont majoritaires. Dautre part la taille
moyenne de bulle crot trs rapidement dans le flux de dcharge de la turbine : dans le plan de
lagitateur, dS mesur en limite de pale est de 2 6 fois plus petit que mesur en bordure de
paroi, selon les conditions exprimentales (galement vrifi par Takahashi et coll., 1992).
Enfin, les bulles produites par la turbine du bas sont plus grosses que celles produites par la
turbine du haut : la turbine du bas tant plus engorge de gaz, elle dissipe une puissance
infrieure celle du haut (en accord avec Linek et coll., 2004). A partir de lensemble des
diamtres de Sauter locaux, il est possible de dfinir un diamtre moyen sur le racteur ; le
diamtre moyen mesur en paroi est une bonne approximation du diamtre moyen global,
bien que lgrement infrieur (Alves et coll., 2002).
d) Impact des microbulles sur la dtermination de KLa
Les microbulles sont des bulles de diamtre largement infrieur au millimtre,
stabilises mcaniquement par une couche de surfactants, laquelle forme une double couche
lectrique qui rduit la coalescence (Worden and Bredwell, 1998a). Laugmentation de
lpaisseur de la couche de surfactants autour des plus petites microbulles leur confrerait une
plus grande stabilit (Worden and Bredwell, 1998b). Ainsi, linterface des microbulles est
immobile et leur coefficient de transfert, KL, diminue avec la taille de la microbulle (Eq. 28).
La stabilisation des microbulles leur confre des proprits de collodes (elles sont parfois
nommes colloidal gas aphrons ).
En systme ar visqueux des microbulles constituent une rtention gazeuse rsiduelle
(Heijnen et coll., 1980 ; Vasconcelos et Alves, 1991). Ces microbulles schappent trs
lentement du liquide lorsque lapport de gaz est arrt (de lordre de lheure) ; elles sont donc
considres en quilibre avec le liquide (obissant la loi de Henry : xO2(t)=RTHyO2(t)). A
cause de la rtention rsiduelle, la capacit dabsorption gazeuse dun lment de liquide
homogne peut tre fausse car le gaz a tendance saccumuler dans la phase gazeuse des
microbulles. Cest par exemple le cas de loxygne qui est 32 fois plus concentr (en mol.L-1,
25C) dans le gaz que dans la phase liquide en rapport dquilibre. Cet effet est responsable
de rduire jusqu quatre fois les valeurs apparentes de la vitesse de respiration, qO2app, et de
35
KLa, KLaapp, calcules par la mthode dynamique de roxygnation, par rapport aux mmes
valeurs calcules par la mthode continue des bilans gazeux, pendant une fermentation de
Streptomyces aureofaciens (300 L, 0,8 vvm, 280 rpm) (Vasconcelos et Alves, 1991). Dans la
mthode dynamique les microbulles ont un rle tampon en alimentant le milieu en oxygne
pendant larrt de laration et en se rgnrant en oxygne en mme temps que la phase
liquide ds le retour de laration. Il est montr que les rapports qO2/qO2app et KLa/KLaapp sont
proportionnels p/(1- p) o p est la rtention gazeuse permanente (Vasconcelos and Alves,
1991).
I.2.2.
Effet du dbit daration sur KLa
On distingue laration par le diffuseur, classiquement employe, de laration de

surface, gnralement ignore.
I.2.2.1. Aration par le diffuseur
Laugmentation du dbit daration inject par le diffuseur peut permettre daugmenter

laire interfaciale et donc KLa (Eq. 21) (Ho et coll., 1987). Pour cela le choix du dbit
daration doit tre envisag de manire coordonne avec la puissance dissipe par lagitation.
Si le gaz impose lcoulement dans le racteur il y a engorgement ( flooding ) (Nienow et
coll., 1977) et laire interfaciale est considrablement rduite, alors quau dessus dune vitesse
dagitation critique laire interfaciale est indpendante du flux de gaz dispers (Ncrit=600 rpm,
pour dT=19 cm, dD=7,5 cm, en solution de sulfite) (Linek et coll., 2005).
I.2.2.2. Aration de surface
Laration de surface seffectue avec ou sans entranement de bulles. En cuve agite

laration de surface sans entranement de bulle, cest--dire par diffusion depuis le ciel
travers la surface libre du liquide, peut souvent tre nglige devant KLa (Veljkovi et coll.,
1991). Par contre laration de surface avec entranement de bulles peut gnrer une large aire
interfaciale et devenir significative pour le transfert gazeux.
a) Description du phnomne dentranement de bulles
En cuve agite sans dispositif daration submerg et pour un agitateur plac prs de la
surface statique du fluide, Wu (1995) dcrit une vitesse dagitation critique au dessous de
laquelle la dispersion gazeuse ne sopre quautour de lagitateur, et au dessus de laquelle
laction de pompage de lagitateur permet laspiration du ciel et la dispersion de bulles dans
36
tout le liquide. Dans une cuve are par le bas lentranement de surface est plus difficilement
dtectable mais existe galement : Calderbank (1959) remarque que le flux en provenance du
ciel peut tre jusqu dix fois suprieur celui apport par larateur. Dans cette mme
situation, il existe une vitesse daration critique relativement leve (Us=6,5 mm.s-1) en
dessous de laquelle, pour une mme valeur de KLa, il est moins coteux (en terme de
puissance dagitation) dutiliser laration de surface uniquement plutt que laration par le
diffuseur (Wu, 1995).
Le flux entran augmente avec le rapport dT/dD et est optimum pour un agitateur
submerg de la moiti de son diamtre (Oldshue, 1980) ; il augmente avec la vitesse
dagitation car les vortex et les circulations internes du liquide sont plus intenses ; par contre
il dcrot rapidement avec Us (Chapman et coll., 1980 ; Veljkovi et coll., 1991) parce que la
surface libre devient plus calme (vant Riet, 1979). La prsence de biomasse (P. shermanii, S.
cerevisiae, P. chrysogenum sous forme de pellets de 1,6-1,75 mm et aussi de myclium libres)
bloque linterface et peut rduire la valeur de laration de surface jusqu 20 fois compar
un milieu synthtique de mme viscosit apparente (calcule en terme de KLa, sans
entranement de surface ; VL=4 L ; N<700 rpm) (Galaction et coll., 2004). La rduction de
laration de surface est aussi observe en solution lectrolytique (Matsumura, 1977).
Le flux entran est en gnral suprieur en racteur multi-turbines quen racteur
mono-turbine ; il dpend en particulier de la position de la turbine suprieure par rapport
linterface (Veljkovi et Skala, 1989). Loptimisation du transfert gazeux dans un racteur
multi-turbines peut tre ralise en arant dune part au fond du racteur sous un agitateur
radial dans une rgion munie de contre-pales, et dutiliser dautre part lagitateur du haut,
dans une rgion sans contre-pale, pour favoriser le transfert axial en faisant recirculer depuis
le ciel le gaz nayant pas ragit (Oldshue, 1980).
Lentranement de surface, perturbe le schma gazeux comme illustr sur la Figure 3 :
en labsence dentranement de surface le profil piston du gaz, assur par le flux en
provenance du diffuseur Qd, est reprsent en trait plein. En prsence dentranement de
surface le flux entran Qe sadditionne Qd, et appauvri le profil gazeux, reprsent en trait
pointill. Dans cet exemple la concentration dans le ciel est infrieure la concentration yoff
dvacuation du gaz de la phase liquide en labsence dentranement de surface, et le gaz en
provenance du diffuseur coalesce avec le gaz entran, mais plusieurs configurations sont
envisageables. Dans la littrature KLa est mesur en labsence dentranement de surface,
c'est--dire par rapport au flux de gaz en provenance du diffuseur. Lorsque KLa est trac en
fonction de la puissance dissipe on observe une rupture de la courbe au moment o
37
lentranement de surface apparat : la valeur apparente de KLa, mesure sans tenir compte de
lentranement de surface, peut se trouver au dessus ou en dessous de la tendance dgage en
labsence dentranement de surface ( faible puissance dissipe), selon que le potentiel de
transfert entre le ciel et le liquide homogne est respectivement positif (KLa mesur en
condition de culture) ou ngatif (cas de la roxygnation N2Air).
ciel
phase
disperse
Qe
Qd
yout
yoff
yin
Figure 3. Perturbation du potentiel de transfert en prsence dentranement de surface. Le gaz entre

dans le racteur la concentration en oxygne yin, ressort de la phase disperse la concentration
yoff, et du racteur la concentration yout.
profil gazeux de concentration en labsence
dentranement de surface (aration par le flux Qd uniquement).
profil gazeux de concentration
en prsence dentranement de surface (aration par le flux Qd et Qe).
En culture cellulaire, lentranement de surface peut tre avantageux car il permet le

ravalement des mousses, et lorsque laration est assure par un diffuseur, laration par la
surface peut tre vue comme un recyclage du gaz qui a dj travers le liquide sans
sabsorber, et augmenter ainsi lefficacit du transfert gazeux.
b) Quantification et modlisation
Pour les racteurs ars uniquement par la surface avec entranement de bulles, un KLa
global (diffusion+entranement) est utilis ; la mthode dynamique de roxygnation permet
le calcul de cette valeur de KLa de la mme manire que pour une aration par un diffuseur
(Kamen et coll., 1995). Lorsque laration de surface a lieu en complment de laration par
38
un diffuseur, des modles sont dvelopps en rgime permanent et dans lhypothse

dhomognit totale entre toutes les bulles (Chapman et coll., 1980 ;). Ils font apparatre
deux KLa : le premier tient compte des changes entre les bulles homognes (formes de gaz
du diffuseur et de gaz entran) et le liquide, le second tient compte des changes par diffusion
entre le ciel et le liquide, mais les valeurs de ces KLa ne sont pas mesures. Par contre les
tudes se concentrent sur la mesure de trois flux de matire : par le diffuseur, par aspiration
la surface, et par diffusion la surface. Des fonctions de la puissance dissipe et du flux
daration sont frquemment utilises pour dcrire le rapport SA entre le flux rincorpor et
le flux dispers par larateur, par exemple Veljkovi et Skala (1989) proposent pour un
racteur deux turbines (VT=14 L ; dT=0,22 m ; dD/dT=2,75) :
SA =
Qe
2,2
= 6,2 10 14 P1,5
G QS
Qd
(35)
o Qe est le flux entran et Qd le flux dbit par le diffuseur.

Dans une colonne bulles agite, Chisti et Jauregui-Haza (2002), estiment laration
de surface en e1,2N mais la contribution de laration de surface ne compte que pour 12% du
transfert doxygne total.
Sauf exceptions (par exemple pour Robinson et Wilke, 1973) lexistence de laration
de surface nest pas considre dans le calcul de KLa : souvent parce que la gomtrie du
fermenteur et les vitesses dagitation utilises cartent expressment toute situation
dentranement de surface.
I.2.3.
Effet des soluts sur KLa (force ionique)
Cette partie permet didentifier :

- La rduction de la coalescence due leffet des soluts, et en particulier des sels.
- Une analyse quantitative. Une modification du modle Eq. 21 est propos.
a) Rduction de la coalescence.
Il existe une diffrence fondamentale entre les liquides purs qui permettent une
coalescence facile, et les solutions aqueuses qui inhibent la coalescence, sans doute par la
rpulsion de forces lectriques localises sur les interfaces (Marrucci et Nicodemo, 1967). La
coalescence est dautant plus rprime que la diffrence dhydrophilie entre la partie
hydrophile et la partie hydrophobe de la molcule de solut est forte. Par exemple la
coalescence commence tre rprime partir de 1M de saccharose, 10-2M de sel, et 10-3M
39
dthanol (Keitel et Onken, 1982). Ceci laisse penser que la rpression de la coalescence
serait lie une stabilisation des interfaces par adsorption des soluts (Linek et coll., 1988b).
Si le systme est non-coalescent la distribution des diamtres de bulles est rduite car
le diamtre gnr par le systme de production de bulles (distributeur dans le cas de colonne
bulles, pales dans le cas de racteur agit) est conserv. Si le systme est coalescent la
distribution est plus large car des bulles de plus gros diamtres sont produites ; la coalescence
a souvent lieu trs prs du systme de production de bulles et les diamtres sont ensuite
conservs dans le reste du racteur (Marrucci et Nicodemo, 1967, colonne bulles ; Alves et
coll., 2002, racteur agit). Pour lensemble des soluts tudis (sels, alcools, saccharose,
carboxymthyl-cellulose, Tween 20, etc) la coalescence diminue avec laugmentation de la
concentration en solut, et il existe une concentration minimale en solut partir de laquelle
cette dcroissance samorce, et une concentration limite au dessus de laquelle la coalescence
reste pratiquement indpendante de la concentration (Keitel et Onken, 1982, colonne bulles,
diamtre 20 cm, hauteur 2 m ; Marrucci et Nicodemo, 1967, colonne bulles, diamtre 8 cm,
hauteur 1 m). Dans le cas particulier des sels, lajout de sels provoque laugmentation de la
force ionique I de la solution :
1
I = x i zi2
i 2
(36)
o l'ion i de charge zi est prsent la concentration xi (mol.L-1). Laugmentation de la force

ionique induit la rpression de la coalescence, ceci jusqu' une force ionique seuil, situe entre
0,25 et 0,4 mol.L-1, selon les auteurs et le systme considr (Figure 4A). Il sensuit une
diminution de la taille moyenne des bulles (Figure 4B) (Lessard et Zieminski, 1971 ; Keitel et
Onken, 1982 ; Ho et coll., 1987), d'o l'augmentation de l'aire interfaciale (Eq. 29). Bien que
les tailles de bulles entre colonnes bulles et racteurs agits ne puissent pas tre compares,
il semblerait que les concentrations minimales et limite en solut soient identiques dans ces
deux systmes (Keitel et Onken, 1982).
40
% coalescence
I, mol/L
I, mol/L
Figure 4. Effet des sels sur la coalescence. A: % coalescence en fonction de la force ionique I, d'aprs
Lessard et Zieminski (1971). Exprience ralise en mettant en contact deux bulles formes au bout
de deux aiguilles. B: diamtre moyen des bulles en fonction de la force ionique I, d'aprs Keitel et
Onken (1982). Exprience ralise en colonne bulle (dT=20 cm), mesure de taille par succion.
b) Analyse quantitative.
Leffet des sels (plus gnralement des soluts) sur KLa porterait essentiellement sur
laugmentation de laire interfaciale. Linfluence sur kL, lie la rduction de la taille
moyenne des bulles, est pour le moment incertaine et trs discute (I.2.1.1). On peut lire en
effet de nombreux articles aux thories contradictoires, mais on peut toutefois diffrencier les
travaux effectus en colonne bulle de ceux effectus en cuve agite. En colonne bulles
leffet des sels serait ou bien marginal sur kL (Keitel et Onken, 1982), ou bien pourrait
augmenter kL jusqu' 25% par rapport leau pure (Lessard et Zieminski, 1971). En cuve
agite par contre, avec des diamtres de bulle plus petits, les sels provoqueraient une
diminution de kL (Benedek et Heideger, 1971 ; VL=29 L, 255<N<455 rpm, 0,4 vvm).
Lajout de sel augmente la valeur du coefficient dans Eq. 21 (Robinson et Wilke,
1973). La force ionique de la solution, I (Eq. 36), a souvent t propose comme paramtre de
coalescence ; ainsi Robinson et Wilke (1973) (VL=2,5 L, 400<N<2200 rpm) proposent de
corrler I : crot uniformment puis atteint une saturation 0,90 pour I suprieur 0,4
mol.L-1 :
41
0,862I
, 0I0,4 mol.L-1
0,274 + I
o 0,4 est une valeur de couramment propose pour leau pure (vant Riet, 1979).
= 0,40 +
(37)
Pour Linek et coll. (1987) lquation Eq. 21 est trs gnrale (voire universelle), et
leurs tudes en milieux plus ou moins visqueux et coalescents les confortent penser que la
valeur de lexposant ne dpend que de la capacit du systme coalescer. La caractristique
des lectrolytes et autres soluts tant principalement de rduire la coalescence par rapport au
liquide pur, Linek et coll. (1988b) proposent dintgrer dans la modlisation de KLa un
paramtre de coalescence plus gnral que I, en supposant comme Marrucci et Nicodemo
(1967) que linhibition de la coalescence serait proportionnelle la diffrence de potentiel
lectrique cr linterface, modlise par la relation thermodynamique de Gibbs. Cependant
la mise en uvre de lanalyse de Linek est trs complexe et na t valide que pour les
solutions contenant un seul sel. Le paramtre de coalescence de Linek semble nanmoins plus
fiable que la force ionique pour corrler la composition en sels.
Robinson et Wilke (1973) proposent une relation similaire Eq. 37 pour le coefficient
en signalant des carts pour certains sels ; pour Linek et coll. (1988b), est indpendant des
proprits physiques du milieu.
I.2.4.
Effet des agents de surface sur KLa (tension de surface)
De nombreuses substances organiques ont des effets dagent de surface, comme les
protines et leurs drivs (Tsao, 1968), c'est--dire quelles tendent sadsorber aux interfaces
liquide-solide, ou gaz-liquide. Ces molcules de surfactants (contraction de surface active
agent ) ont une partie polaire et une partie apolaire. La partie polaire, hydrophile, reste en
phase liquide tandis que la partie apolaire, hydrophobe, migre vers linterface.
La prsence dagents de surface sils ne participent pas labsorption du gaz (en le
consommant, en tant un solvant) rduit kL (Tsao, 1968 ; Lee et Tsao, 1972 ; Linek et
coll., 2005). A ce jour deux propositions permettraient de lexpliquer, leffet barrire et leffet
hydrodynamique, mais elles ne sont pas satisfaisantes. Leffet barrire suppose que les
surfactants forment une monocouche linterface, ce qui offre une rsistance supplmentaire
au transfert des molcules de gaz. Cette rsistance dpend de nombreux paramtres lis aux
interactions gaz-surfactant-liquide, dont la polarit du groupe hydrophile, sa masse molaire, sa
longueur, son organisation linterface Leffet hydrodynamique suppose que les
surfactants (et mme les lectrolytes) tendent organiser linterface. Cette organisation cre
une barrire nergtique qui va limiter la rgnration de linterface, rendant le transfert plus
42
difficile et donc rduisant la valeur de kL. Plusieurs quantifications de lnergie

supplmentaire fournir pour rgnrer linterface ont t proposes, bases sur la pression
de surface (diffrence entre la tension de surface sans et avec surfactants), la force ionique, le
potentiel lectrique dinterface ou la tension de surface. Linek et coll. (2005) ont dmontr
que ni la pression de surface seule, ni la tension de surface seule, ne permettait de corrler
leffet des surfactants sur kL.
A loppos, en rduisant la tension de surface , les agents de surface ont tendance
rduire le diamtre des bulles et donc augmenter laire interfaciale. Ceci apparat clairement
dans Eq. 33 (Calderbank, 1958) ainsi que dans la loi de Laplace :
d=
2
P
(38)
o P reprsente la diffrence de pression entre lintrieur de la bulle et la phase liquide.

Leffet sur KLa est donc complexe, par exemple laddition de 100 ppm (en masse) de
PEG permet de doubler laire interfaciale mais rduit kL dun facteur 4 (Linek et coll., 2005).
Cas des agents antimousse
Les agents antimousse sont ncessaires dans beaucoup de fermentations pour viter un
dbordement par les mousses. Ce sont des agents de surface qui ont la double proprit de
favoriser la coalescence et de baisser la tension interfaciale. Ces deux effets sopposent : dun
ct laction coalescente qui permet de briser la mousse rduit laire interfaciale au sein du
liquide, mais de lautre ct la baisse de la tension interfaciale provoque la diminution de la
taille des bulles, et tend donc augmenter laire interfaciale. Leffet sur KLa est donc
dterminer au cas par cas.
A concentration faible (< 50 ppm) laddition de polypropylne glycol (PPG), de
silicone ou dhuile de soja ralentit le transfert de matire. Cette diminution est attribue, pour
le PPG la diminution de kL, mais pour le silicone et lhuile de soja l'amplification de la
coalescence (Moro et coll., 1999). De mme, la prsence de 3 ppm docenol diminue KLa en
dessous de la valeur mesure en eau pure, cest--dire dj en systme coalescent (Linek et
coll., 2005). En condition de fermentation (culture batch, Candida tropicalis, VL=5 L,
200<rpm<600), Yagi et Yoshida (1977) observent la diminution de la valeur de KLa de 1/3
aprs chaque ajout de quelques gouttes dantimousse (KM 70).
A des concentrations leves (>50-200 ppm, gnralement jamais atteintes en
fermentation o les concentrations utilises sont proches du ppm) les agents antimousse
peuvent augmenter le transfert (Moro et coll., 1999). Le phnomne est attribu soit la
43
surproduction de petites bulles, soit un phnomne de navette, loxygne tant plus soluble
dans le surfactant que dans leau (Rols et coll., 1990). Lagitation (400 2000 rpm) semble
avoir peu deffet sur le rapport des KLa calculs avec et sans antimousse (KLa/KLa0) (Moro et
coll., 1999), ce qui tend discrditer la thse de cintique de contamination de linterface
(effet barrire et effet hydrodynamique), puisqu forte agitation les interfaces de bulles tant
renouveles vite, les surfactants nauraient pas le temps de les contaminer, conduisant un
rapport KLa/KLa0 tendant vers 1 avec lagitation.
I.2.5.
Effet de la viscosit sur KLa
La viscosit est souvent propose comme la cause principale des limitations de

transfert. Mais les effets de la viscosit sont complexes, par exemple mme viscosit
apparente il peut y avoir ou non une diminution de KLa : dans un milieu non-coalescent
(Na2SO4 0,8 mol.L-1), laddition de CMC TS.20 (0,6% en masse) provoque une diminution de
KLa (divis par 4), alors que pour une mme viscosit apparente, laddition de Sokrat 44 (3%
en volume) na pas deffet sur KLa (Linek et coll., 2005).
Il faut distinguer la viscosit dorigine molculaire qui affecte premirement les
chelles microscopiques, de la viscosit apparente qui affecte premirement lchelle
macroscopique et pas forcment lchelle microscopique. La viscosit dorigine molculaire
limite la diffusion dans la couche limite et fortiori aussi, lchelle macroscopique. Tandis
que la viscosit apparente bloque le mlange convectif. La viscosit molculaire peut tre
cause par lexcrtion dun agent viscosant comme le xanthane, la viscosit apparente par la
prsence de pellets de tailles suprieures au millimtre. Dans les deux cas laugmentation de
la viscosit rduit le niveau de turbulence du systme (Rei=dp2N/) et donc lintensit du
transport de matire convectif (macromlange). Dans le premier cas le transport diffusif peut
galement devenir limitant. Par rapport la Figure 1, la rsistance Z5 devient significative.
Avec la diminution de la turbulence, le diamtre de bulle moyen augmente, et comme la
viscosit tendance augmenter la coalescence (Pedersen et coll., 1994), laire interfaciale
tend diminuer. En gnral laugmentation de la viscosit apparente rduit le transfert
doxygne.
I.2.5.1. Modles de viscosit
Les fluides newtoniens vrifient la loi de Newton (vant Riet et Tramper, 1991) qui
tablit la proportionnalit entre la contrainte tangentielle induisant un coulement la
44
vitesse v (shear stress) et le gradient de vitesse dv/dz (shear rate), normal la direction
de lcoulement :
=
dv
= &
dz
(39)
o est la viscosit dynamique. Pour les fluides newtoniens uniquement, est indpendant
de & . Les principaux modles utiliss en culture cellulaire sont la loi puissance, le modle de
Casson, et pour les fortes concentrations cellulaires, le modle dEinstein.
La loi puissance (ou modle dOstwald-de-Waele) est trs gnrale :
= K C & n
(40)
o KC est lindexe de consistance, et n lindexe de puissance qui dcrit un fluide dilatant pour
n>1, un fluide newtonien pour n=0, et un fluide pseudoplastique pour n<1. Une viscosit
apparente peut tre calcule partir de Eq. 39 et Eq. 40 :
app = K C & n 1
(41)
Le modle de Casson est souvent utilis en milieu micellaire concentr :

= 0 + K &
(42)
o 0 est la contrainte seuil.

Enfin la loi dEinstein (Einstein, 1906) dcrit la viscosit en prsence de particules
sphriques solides et convient donc pour les organismes unicellulaires. Originellement la loi
snonce en fonction de la fraction volumique de la phase disperse, mais on peut lcrire en
fonction de la concentration en particules :
= 0 + kX
(43)
En cuve agite on peut estimer le gradient de vitesse partir de la relation de Metzner

(Popovic et coll., 1983 ; Desplanches et Chevalier, 2006) :
& = k M N
(44)
o kM est la constante de Metzner dpendante du systme dagitation, et calculer une viscosit

apparente qui est dfinie comme la valeur que lon aurait si le milieu tait newtonien :
app =
&
(44b)
I.2.5.2. Modlisation de KLa en systme visqueux
La modlisation de KLa en eUS (Eq. 21), est aussi utilise pour les systmes
visqueux (Poizat et coll., 1992), parfois en y intgrant la viscosit apparente. Ainsi Linek et
45
coll. (1987) valident la relation sur le CMC et le glycrol, jusqu' 5 kW.m-3, en intgrant,
daprs Calderbank (1958), les proprits physiques du milieu dans la constante :
=
0 , 268
1/ 6
1/ 2
3/5
Une approche thorique de la prdiction de KLa en milieu visqueux est propose par
Garcia-Ochoa et Gomez (2004) : elle vrifie galement le modle empirique (Eq. 21) qui est
complt de la viscosit apparente avec un exposant ngatif, compris entre -0,5 et -0,9 pour
un fluide de type Casson :
K L a = .e . US . app
(45)
Cependant pour les milieux non-newtoniens il est trs dlicat de proposer une corrlation
intgrant la viscosit apparente (Pedersen et coll., 1996). Pedersen et coll. (1996) utilisent
simplement la modlisation KLa=eUS (Eq. 21) pour dcrire KLa concentration croissante
de xanthane (0,05% ; 0,1% ; 0,2%). Ils remarquent que laration a une influence
prdominante sur KLa : le coefficient reste pratiquement inchang (2,84 ; 2,65 ; 2,71,
respectivement), alors que augmente (0,47 ; 0,56 ; 0,66, respectivement).
Il existe des milieux visqueux dans lesquels de forts KLa sont atteignables, par
exemple en solution contenant du CMC et des lectrolytes (Linek et coll., 1987), puisque le
coefficient de diffusion du milieu change peu. Par contre dans beaucoup de milieux visqueux
les valeurs de KLa obtenues sont faibles, en solution de glycrol par exemple (Linek et coll.,
1987).
Enfin, linfluence de la viscosit du milieu sur le transfert est plus prononce dans une
colonne bulle que dans un racteur agit (Figure 5) (vant Riet et Tramper, 1991) ; ce qui
peut justifier la prfrence donne au racteur agit pour les cultures moyennement
visqueuses.
46
Figure 5. Influence de la viscosit sur KLa en fonction du

type de contacteur, daprs vant Riet et Tramper, 1991.
I.2.6.
Effet de la temprature sur KLa
KLa est directement dpendant du coefficient de diffusion (Eq. 14, Eq. 15, Eq. 16) et
de la viscosit. Or ces deux paramtres sont fortement lis la temprature. Le coefficient de
diffusion suit la loi dArrhnius :

D = D0 . exp E
RT
(46)
En utilisant les valeurs donnes par Perry et Green (1984) on calcule E=26500 J.mol-1 pour
loxygne. OConnor (Aiba et coll., 1965) propose une quation semi empirique qui tient
compte de la temprature et de la viscosit :
=
K L a (T1 )
=
K L a (T2 )
T1 2
T2 1
(47)
o 1 est la viscosit la temprature absolue T1 (K). Enfin Stenstorm et Gilbert (1981)

proposent :
K L ,T = K L , 293 .
T 293
(ou similairement (K L a )T = (K L a ) 293 T 293 )
(48)
avec =1,024 (une approximation plus prcise donne =1,02 pour une aration diffuse et
=1,028 pour une aration de surface).
Enfin il est noter que laugmentation de la temprature en conditions de culture
microbienne provoque une faible diminution de la rtention gazeuse (-10 -15% pour T
passant de 22 77C) (Schaper et coll., 2002).
47
I.2.7.
Effet de la prsence de particules solides sur KLa
La prsence de particules solides peut modifier laire interfaciale ainsi que kL. Le sens
de la modification dpend des proprits des particules (taille, adhsion ou non sur la bulle),
des proprits du milieu, et aussi du type de contacteur gaz-liquide.
Par exemple, laire interfaciale en prsence de particules de deux millimtres de
diamtre, augmente en milieu visqueux par un effet de cassage des plus grosses bulles, mais
diminue dans leau (Kawase et coll., 1997, tude en racteur agit). Certaines particules
comme la poudre de dioxyde de manganse (diamtre= 20 m), utilise dans certaines
mthodes au sulfite comme catalyseur, peuvent favoriser la coalescence en milieu noncoalescent, cest--dire rduire laire interfaciale ; mais ces mmes particules nont pas deffet
en eau pure (Linek et coll., 2005).
Leffet des particules sur kL est plus complexe et deux mcanismes sont proposs :
leffet de blocage rduit sa valeur, mais leffet hydrodynamique laugmente. Lorsque les
particules sont actives chimiquement, des cellules par exemple, les effets peuvent tre
bouleverss et sont dcrits dans un chapitre ultrieur (I.3.2) (Beenackers et Swaaij, 1993).
I.2.7.1. Effet de blocage de linterface sur kL
Il est provoqu par le simple fait que la diffusion travers les particules, une cellule
par exemple, est infrieure la diffusion dans le liquide. Daprs Ho et Ju (1988) le
coefficient de diffusion de loxygne travers une suspension cellulaire dcrot linairement
avec la concentration cellulaire, et dpend non pas de la gne strique, mais bien du rapport
du coefficient de diffusion de loxygne dans leau sur le coefficient de diffusion de
loxygne dans le microorganisme, estim 0,31 pour S. cerevisiae et 0,30 pour E. coli.
Galaction et coll. (2004) tudient linfluence de microorganismes (Propionibacterium
shermanii, S. cerevisiae, Penicilium chrysogenum sous forme de pellets de 1,6 1,75 mm de
diamtre et aussi de myclia libres) sur KLa. Ils travaillent en bioracteur de 5 L agit par 2
turbines (N<700 rpm, soit e<2000 W.m-3). La prsence de cellules diminue la valeur de KLa,
par rapport sa valeur mesure mme viscosit apparente mais sans cellules. Leffet dpend
des cellules utilises et saccentue avec la concentration cellulaire. Cette diminution est
attribue (hypothtiquement) au blocage des interfaces gaz-liquide par adsorption de cellules
sur les bulles. Dans ces conditions KLa diminue avec lagitation (rsultats similaires obtenus
par Ju et Sundararajan, 1995), contrairement lvolution normale de KLa avec e (Eq. 21).
Ceci est galement attribu ladhsion cellulaire, favorise lorsque la dispersion gazeuse
devient plus fine forte agitation. Par contre laration a tendance rduire le blocage des
48
interfaces gaz-liquide et a un effet favorable sur KLa. En comparant ces valeurs lanalyse de
Linek et coll. (1987) on peut cependant penser que certains phnomnes dcrits par Ju et
Sundararajan (1995) pourraient sexpliquer par lutilisation dune mauvaise mthode de calcul
de KLa, dailleurs trs mal dtaille. Similairement, Yagi et Yoshida (1974) notent que KLa
dcrot avec lajout de 0 4 gMS.L-1de cellules sans activit biologique de Candida
tropicaliss, mais que par contre 4 gMS.L-1 KLa atteint un seuil (KLa/KLa0=0,85) conserv
jusque 12 gMS.L-1.
A loppos des ces effets dadhsion supposs, partir de considrations
hydrodynamiques Andrews et coll. (1984) concluent quil est impossible que des cellules
saccumulent linterface dune bulle en mouvement, except du ct de la trane (Vinke et
coll., 1993) o le volume relatif des cellules peut avoisiner 50%. Or seulement 20% du gaz est
transfr travers cette zone de la bulle, la majorit du transfert se faisant dans la rgion
frontale de la bulle. Le blocage rsultant est donc limit et une rduction de la valeur de kL de
10% peut tre attendue.
I.2.7.2. Effet hydrodynamique (boule de neige) sur kL
Il sagit de laugmentation de KLa en prsence de particules inertes ou de cellules sans

activit biologique. A partir de lois mcanistiques Andrews et coll. (1984) dcrivent
lcoulement du fluide autour dune bulle et la possibilit pour des particules attires
linterface gaz-liquide de faire bouger linterface lencontre des agents de surface qui
tendent la maintenir immobile et qui bloquent ainsi le transfert doxygne. Cette mise en
mouvement provoque son tour lattraction de nouvelles particules ; cet effet boule de neige
( snowball effect ) assure la mobilit de linterface et donc laugmentation de kL. A forte
concentration en surfactants Andrews et coll. (1984) pointent galement lexistence dune
concentration critique en cellule pour laquelle linterface bloque devient subitement mobile,
avec laugmentation de kL par trois. Contrairement leffet de blocage, ici la prsence de
cellules considres en tant que particules solides contribue laugmentation de KLa.
I.3.
I.3.1.
Absorption avec consommation simultane de loxygne

Absorption en prsence de raction chimique
Labsorption doxygne en culture microbienne peut tre compare labsorption en

prsence de raction chimique car loxygne est consomm simultanment sa diffusion
49
travers linterface gaz-liquide. Labsorption avec consommation simultane du solut par

raction chimique (Danckwerts, 1970) ne concerne pas directement notre propos. Cependant
elle a t thorise avant labsorption avec raction biologique, qui en dcoule donc. La
raction biologique se diffrencie de la raction chimique par deux points essentiels : la
biomasse qui ragit avec le gaz diffusant ne disparat pas aprs absorption du gaz mais peut
tre un produit de la raction, et la raction biologique de consommation doxygne est
irrversible (Tableau 2).
Tableau 2. Comparaison des facteurs cintiques de labsorption avec consommation dans le cas
dune raction chimique et dune raction biologique.
Ractifs
Raction
Loi de vitesse
d( x A )
q A =
dt
Raction chimique
A gazeux dissous
B solut
k mn
A + zB
produits
Raction biologique
A gazeux dissous (O2)
B biomasse
k1
A + zB
wB + produits
q A = k mn .( x A ) m .( x B ) n
q A = k 1 .x B , xA>xcrit
q A = k 1 .x A , xAxcrit
(Yagi et Yoshida, 1975)
Si le gaz absorb ragit avec le liquide ou avec une espce en solution, Eq. 8 prsent
sous sa forme unidirectionnelle selon un axe z perpendiculaire linterface scrit :
DA
d2xA
2
dz
d
= xA + q A
dt
(49)
Si par exemple la raction de dgradation est du premier ordre par rapport A, qA=k1.xA :
DA
d2xA
dz
d
= xA + k1 xA
dt
(50)
La rsolution de cette quation permet de calculer le profil de concentration de A. Si il est

tabli dans lhypothse du film (cest--dire en posant =DA/kL), en rgime permanent, et
avec les conditions aux limites :
x A =x A , z = 0
x A =x L , z =
il permet de calculer le flux transfr (Eq. 13) suivant :
R = kL
Ha *
x0
xA
cosh Ha
tanh Ha
(51)
o Ha 2 = DA2k1 est un groupe adimensionnel dintgration de lquation de continuit, appel

kL
50
nombre de Hatta. Contrairement au cas de labsorption physique, ce flux nest pas

proportionnel (x*A x L ) , xL tant la concentration au cur du liquide.
Le nombre de Hatta au carr correspond physiquement au rapport de la conversion
maximale possible dans le film par la quantit traversant le film par diffusion :
DA k1
k1 x A (en posant k =D /)
2
L
A
Ha = 2 =
*
xA 0
kL
DA
Le nombre de Hatta renseigne sur le lieu de la raction. On peut distinguer trois

rgimes de raction (Roizard et coll., 1997) : lorsque Ha1 (ou Ha<0,3) la raction est lente,
la raction dans le film est ngligeable et a principalement lieu dans le cur du liquide, la
raction est contrle par la vitesse de consommation de A ; lorsque Ha1 (ou Ha>3) la
raction est rapide et a lieu entirement dans le film, la raction est contrle par les
paramtres de transfert (aire interfaciale et KL) ; autrement le rgime est intermdiaire.
Le nombre de Hatta dpend de lordre de la raction. Il a t calcul de manire
gnrale pour une raction dordre m, n par Hikita et Asai (1964) (voir Tableau 2 pour les
symboles) :
2DA k mn (x A ) x B
Ha =
(m + 1) k 2L
* m 1
(52)
Il est possible de calculer lacclration du flux de transfert due la consommation chimique

par rapport au flux purement physique (Eq. 51), appele E (pour enhancement factor ) :
E=
(53)
k L .(x A x L )
*
soit en remplaant R par son expression (Eq. 51) :

Ha *
x0
xA
cosh Ha
tanh Ha
E=
( x*A x 0)
(54)
Le mme calcul de E peut tre entrepris dans lhypothse de renouvellement de Danckwerts

(Eq. 16). Dans ce cas Eq. 50 est intgre galement par rapport au temps pour faire intervenir
le temps dexposition ; le rgime permanent est obtenu par un temps dexposition moyen. On
utilise alors les conditions initiales suivantes :
(Eq. 55)
xA=0,
xA=x*,
xA=0,
z>0,
z=0,
z=,
t=0
t>0
t>0
pour obtenir finalement :
51
E=
1 + Ha 2
(56)
avec la mme dfinition du nombre de Hatta que prcdemment. On remarque que le calcul
de lacclration dpend du modle de transfert utilis. Cependant les deux modles
convergent vers E=Ha pour Ha1.
I.3.2.
Absorption en prsence de consommation par la biomasse
Il a souvent t obtenu des valeurs de KLa plus leves en condition de culture que
dans le mme milieu en labsence de cellule. Ni et coll. (1995) notent laugmentation de KLa
de manire inexplique de 65 h-1 87 h-1 au cours des quatre premires heures dune culture
de S. cerevisiae alors que les paramtres opratoires sont inchangs (cuve agite 2 L, batch,
N=700 rpm, X=1,2 4,1 gMS.L-1).
Le calcul de E dans la littrature dpend de lordre 0 ou 1 de la raction de
consommation de loxygne par rapport la concentration de loxygne (Tableau 2). Pour xO2
suprieur une concentration critique, xcrit., ce qui est normalement le cas en culture arobie,
le flux de consommation est dordre 1 par rapport la biomasse et dordre 0 par rapport
loxygne. qO2 est alors suppos uniforme dans toute la phase liquide et indpendant de la
concentration en oxygne. (En cultures de Penicillium chrysogenum Larsson et Enfors (1988)
observent deux concentrations critiques, sans doute dues aux htrognits de la biomasse
divise en myclium libres et pellets). La concentration critique dpend du microorganisme
considr, elle est parfois value en fonction de la constante de Monod, et peut tre estime
10-5 mol.L-1 (soit 5% de la concentration de saturation pression atmosphrique ;
Bartholomew, 1950 ; Yagi et Yoshida, 1975). Lorsque xO2 est trs infrieur xcrit on peut
estimer que la consommation doxygne est dordre 1 par rapport loxygne (Yagi et
Yoshida, 1975).
Parmi les auteurs qui supposent un ordre 0 par rapport loxygne (Tableau 3), les
dveloppements de Merchuck (1977) et de Yagi et Yoshida (1975 et 1977) sont quivalents.
Le dveloppement de Tsao (1970) est soumis des dhypothses qui semblent plus loignes
des cultures intensives (faible rtention gazeuse, faible volume interfacial).
52
Tableau 3. Relev de calculs classiques (bas sur un bilan matire) de lacclration du transfert
doxygne par consommation biologique : hypothses du modle et calcul. xO2 oxygne dissous ; E
facteur dacclration ; Ha nombre de Hatta (Eq. 52).
Rfrence
Conditions du modle
Merchuck (1977) -ordre 0 par rapport xO2 et 1 par
rapport la biomasse
-rpartition homogne, linaire ou
exponentielle des microorganismes
-modle du film
Yagi et Yoshida -ordre 0 par rapport xO2
(1975)
-rpartition linaire ou non des
microorganismes (Candida
tropicalis)
-modle de renouvellement de surface
Yoshida et Yagi -ordre 0 par rapport xO2 et 1 par
(1977)
rapport la biomasse
Tsao (1970)
Calcul de E
A . r O 2 .X
E = 1+ D
2
2 k L (x*O 2 x O 2 )
dpend de la rpartition de X, =1
pour une rpartition homogne
rsolution numrique partir de la
dfinition de E (Eq. 53).
Ha calcul daprs Eq. 52, puis

E=1+Ha2/4 (ce qui revient au calcul
de Merchuck (1977) avec =1)
1
E=
2
1 K L a. t *
3
t*, temps de renouvellement
-ordre 0 par rapport xO2

-la fraction des cellules contenues
dans la zone interfaciale est
ngligeable
-bilan sur le cur du liquide, hors
zone interfaciale
-modle de renouvellement (Higbie)
-ordre 1 par rapport xO2 (catalyseur
D
E= 1+ k2 1 prdit par Danckwerts
de platine, glucose oxidase,
kL
Acetobacter rancens et A.
sous estime E ; Tsao propose alors
suboxydans)
E=f(KL,k,KM,D,x*,S0,xh), avec KM
-xO2 proche de 0
constante de Monod, S0
-modle 2 zones
concentration particulaire dans la
zone de surface dpaisseur h, xh
concentration en O2 en h.
Tsao et coll.
(1972)
Nous dveloppons maintenant le calcul de E. En condition normale de croissance le

milieu nest jamais limit par loxygne et la raction est dordre 1 par rapport la biomasse.
Par soucis de simplification nous gardons les mmes conditions initiales que Danckwerts
(Eq. 55) mais avec lquation de transfert suivante :
DA
d 2 x O2
dz
d
= xO2 + X. rO2
dt
o X.rO2=qO2, est la consommation en oxygne par unit de volume et par unit de temps, que
lon peut supposer constante sur une priode de lordre du renouvellement dun lment de
surface. En passant comme Danckwerts par la transforme de Laplace :
DA
d 2 x O2
dz 2
= xO2 .s + X. rO2
53
que lon rsout en
s X. r O 2
X. r O 2
*
. exp z
xO2 = xO2 +
D
s
s
puis en tenant compte du modle de transfert (Eq. 16), soit s = k 2L / D

D.X. r O 2
*
k D.X. r O 2
. exp z L
xO 2 = xO 2 +
2
2
D
kL
kL
La transforme de Laplace du flux transfr moyen est donc

D.X.rO 2
R = D x O 2 = k L x*O 2 +
2
dz z =0
kL
et ayant calcul (Danckwerts 1970, p102) le flux transfr moyen en condition dabsorption
purement physique ( R PHY = D.s ( x*O 2 x O 2) = k L ( x*O 2 x O 2) ) on peut calculer lacclration
par le rapport R / R PHY avec la condition xO2=0 :
.X.
E = 1 + DA2 *r O 2
kL . xO2
(57)
Le deuxime terme correspondrait au nombre de Hatta au carr, c'est--dire E=1+Ha2. En

utilisant les bonnes hypothses le facteur dacclration pour une raction biologique non
limite en substrat est donc suprieur au facteur dacclration calcul dans le cas dune
limitation en substrat, c'est--dire en supposant lordre 1 par rapport au substrat (Eq. 56). Ce
calcul contredit certains auteurs comme Andrews et coll. (1984) qui crivent en phase de
culture quand la valeur de kL na pas trop dimportance ( faible concentration cellulaire)
lacclration chimique peut ne pas tre possible, par contre dans la phase limite en oxygne
ou mme de petites variations de kL peuvent apporter beaucoup de bnfices ( forte
concentration cellulaire), une telle acclration est possible ( cause de lordre de la raction
qui nest plus nul par rapport loxygne) .
Le calcul tel que le pose Merchuck (1977) est effectu dans le cadre de lhypothse du
modle du film. En supposant une rpartition homogne des cellules dans la couche limite (xB
constante par rapport z), il conduit au profil doxygne dissous suivant dans le film
interfacial :
k 1 .x X 2 (xL x*O2 ) k1.x X .

*
xO 2 =
z +
z + xO 2
2.D O2
2.D O2
(58)
avec pour conditions aux limites :
54
x O2 = xO2 , z = 0
x O2 = xL , z =
La loi de Fick faible flux donne donc le flux absorb
(* )
.X.
d
R = DO 2 x O 2 = x O 2 x L D O 2 + k1
2
dz z =0
Tout comme dans labsorption avec consommation par raction chimique, le flux absorb
nest pas proportionnel (x*O 2 x L ) . Ceci apparat clairement sur la Figure 6 qui compare
labsorption physique au profil dcrit par Eq. 58. La forme concave des profils de
concentration est due la consommation dans le film. Graphiquement, lacclration
d
correspond au rapport des drives x O 2 en z=0. Avec les valeurs choisies pour tracer les
dz
profils de la Figure 6 (valeurs pour l'eau pure), on peut calculer EqO2=1,08 pour qO2=600
mmol.L-1.h-1 et EqO2=1,84 pour qO2=6000 mmol.L-1.h-1.
200
Film liquide Coeur du liquide
xA, mmol.m-3
150
Transfert physique
Transfert en prsence
de consommation par la
biomasse
100
qO2=600
mmol.L-1.h-1
50
qO2=6000
mmol.L-1. h-1
0
0
10
20
30
40
z, m
Figure 6. Modification du profil de concentration dans la couche limite par la
consommation simultane de lespce absorbe. Calcul ralis en rgime permanent
dans le cas dune diffusion doxygne. Eq. 8 modlise le transfert physique, et Eq. 58 le
transfert en prsence de consommation doxygne, en posant qO2=k1.X, la
consommation volumtrique de loxygne. DO2=2,110-9 m2.s-1, =20 m, xO2*=200
mmol.m-3 (quilibre avec loxygne de lair T=37C et pression atmosphrique), xL=20
mmol.m-3.
55
Lacclration peut tre value dans le modle du film (kL=DO2/) :

E = 1+
DO 2 .X. r O 2
2 k 2L . ( x*O 2 x L )
(59)
Pour cette raction dordre 1 par rapport la biomasse et 0 par rapport loxygne la
constante
=
DO 2 .X. r O 2
2 k 2L (x*O 2 x L )
(60)
correspond au nombre de Hatta au carr dvelopp par Merchuck (1977), qui a galement
calcul E pour une distribution linaire de la biomasse dans la couche limite comme le
suppose Tsao (1969), et pour une distribution exponentielle comme le propose Yagi et
Yoshida (1975) ; ces calculs sont prsents sur la Figure 7.
Figure 7. Facteur dacclration pour labsorption doxygne en culture microbienne, daprs Merchuk
(1977). est dfini par Eq. 60. Le facteur dacclration, Enhancement, est donn en fonction du
rapport entre la concentration en biomasse linterface, b0, et au cur du liquide, bL. Le modle a
correspond une rpartition uniforme de la biomasse, le modle b une rpartition linaire, et le
modle c une rpartition exponentielle.
Lvaluation de , et donc de E, est extrmement sensible la valeur de kL. Sur la

Figure 7 lindication sparged fermentors correspond kL=3,510-4 m2.s-1 qui dfinit une
rgion o lacclration du transfert par la consommation simultane de loxygne est
impossible, alors que lindication surface aerated stirred fermentors correspond
kL=3,510-5 m2.s-1 qui dfinit une rgion de faible kL dans laquelle lacclration du transfert
par la consommation simultane de loxygne est possible.
En culture arobie la quantit doxygne dissous, cest dire directement disponible
pour le microorganisme, est rgi par lquilibre entre deux flux : le flux de transfert de la
56
phase gaz vers la phase liquide et le flux de consommation, qO2. Le facteur reflte le rapport
entre ces deux flux mais est difficilement utilisable en fermentation car contrairement KLa,
kL est difficile dterminer.
I.3.2.1. Thse de Tsao : rpartition htrogne linterface (double zone)
A partir de ltude de labsorption chimique de CO2 dans une solution danhydrase

carbonique Tsao et coll. (1972) modlisent la couche interfaciale par deux zones. La zone
proche de linterface est stagnante, compose de cellules ou de molcules adsorbes, et
travers laquelle les changes gazeux nont lieu que par diffusion molculaire. Les eddies de la
turbulence peuvent atteindre cette zone mais sans la pntrer. La zone stagnante est
immdiatement suivie dune zone rgnre par renouvellement de surface comme dcrite par
Danckwerts (1951). Le modle de la double zone permet Tsao dexpliquer lacclration du
transfert en milieu biologique, sous-estim par le modle de Danckwerts (1970), lequel a t
dvelopp en prsence de raction chimique qui suppose donc une rpartition homogne des
ractifs. En effet, des tudes menes en cellule dabsorption agite (dT=8,5 cm ; hauteur 18
cm, barreau aimant 300 rpm, excs de glucose) ont montr que labsorption doxygne est
acclre en prsence de glucose oxydase, de catalyseur de platine sur support carbone (Lee et
Tsao, 1972), et aussi en prsence dAcetobacter rancens et Acetobacter suboxydans (Tsao et
coll., 1972) jusqu 1,5_2,5_5 et 12 fois, respectivement, alors que dans tous ces cas
lacclration prdite pour une raction chimique de pseudo premier ordre est proche de 1. Le
bilan matire dcrivant le profil de concentration dans la zone stagnante ncessite la
connaissance de la rpartition des agents de surface (cellules) par rapport linterface,
ds
dz
(Tsao et coll., 1969) :
d 2 CA
d CA 1 ds a p sR
d CA
= DA
+
D
A
dz (1 s) dz (1 s)
dt
dz 2
(61)
o s est la fraction de linterface occupe par lagent de surface, R la vitesse de consommation

de loxygne par unit de surface de particule, ap la surface de particule par unit de volume
de particule. Trois profils de concentration dagent de surface sont proposs (Tsao et coll.,
1968) : constant, linaire, exponentiel, mais sans vrification, ni visuelle, ni par la
comparaison entre la mesure de lacclration et le calcul correspondant. Tsao et Lee (1975)
simplifient le modle en supposant deux zones concentrations constantes, la zone la plus
57
proche de linterface (zone stagnante) tant plus concentre en agents de surface, mais
toujours sans essayer de retrouver par le calcul la valeur de lacclration exprimentale.
Il se peut que les tudes de Tsao ne soient pas reprsentatives des cultures arobies car
elles ont t ralises en ordre 1 par rapport loxygne, ce qui est normal pour une raction
enzymatique, mais rare en fermentation o lordre par rapport loxygne est normalement 0,
et 1 si la concentration en oxygne est largement infrieure la concentration critique.
Exprimentalement Tsao propose plusieurs preuves de lexistence dune rpartition
htrogne de certaines particules (comme les cellules) en faveur de linterface gaz liquide.
Une microsonde oxygne (diamtre 1 m, longueur 2 m) permet Tsao et Lee (1975) de
prouver lexistence et de mesurer lpaisseur de la couche stagnante (240 m) et de la couche
renouvele (360 m) en cellule dabsorption agite (N=200 rpm) contenant 150 ppm de
glucose oxydase non purifi. En effet, dans la traverse de la zone stagnante la concentration
en oxygne ne fluctue pas, puis elle chute subitement, signe que la couche stagnante est
franchie, puis dcrot de manire chaotique jusqu' atteindre un minimum stable interprt
comme la concentration homogne du cur du liquide agit. Pendant la dcroissance
chaotique lamplitude des fluctuations a tendance diminuer mais frquence constante qui
est interprte comme la consquence du renouvellement dun lment de liquide (par l,
Tsao dit donner une preuve directe de la validit de la thorie du renouvellement de
Danckwerts). En eau pure, la zone stagnante nexiste pas et seule la dcroissance chaotique de
la concentration en oxygne est observe ; cette zone est de mme paisseur quen prsence
de glucose oxydase. Une autre exprience (Tsao et coll., 1972) compare lacclration de
labsorption du CO2 en cellule dabsorption agite contenant de lanhydrase carbonique selon
la position de lagitateur (turbine 4 pales). Toutes conditions gales par ailleurs, lacclration
lorsque lagitateur est compltement submerg est suprieure celle obtenue lorsquil frle
linterface. Laugmentation de lacclration est interprte par laugmentation de la
concentration de catalyseur adsorb linterface : le phnomne dadsorption demande un
certain temps et est donc favoris lorsque la rgnration de linterface est lente. Enfin, bien
que Tsao ne considre pas cette possibilit, le fait que lacclration atteigne une saturation
partir dune certaine concentration en catalyseur (0,4 g.L-1 pour le platine sur carbone ; 1,6
g.L-1 pour glucose oxydase ; Lee et Tsao, 1972) peut laisser penser que linterface est alors
sature (Beenackers et Van Swaaij, 1993).
Les attaques portes contre Tsao sont multiples. Beaucoup viennent du fait que Tsao
travaille toujours en cellule dadsorption qui semble loin des bioracteurs de laboratoire et de
58
lindustrie, cause de leur turbulence rduite et de leur transfert rduit. Un des avantages de
la cellule dadsorption est laire interfaciale constante quelques soient les conditions
opratoires, ce qui permet dtudier les effets de lacclration sur kL uniquement. Tsao et
coll. (1978) reconnaissent que, puisque le facteur dacclration est la somme des
contributions de labsorption physique et chimique par rapport labsorption physique, alors
si labsorption physique est dj trs importante le facteur dacclration sera proche de
lunit. Par l Tsao rejoint le calcul de Merchuck (1977) (Figure 7), et les expriences de Yagi
et Yoshida (1975) qui nobservent pas dacclration du transfert doxygne due sa
consommation par Candida tropicalis en racteur agit (VL=2,6 L, N=400 rpm). Tsao et coll.
(1978) dfendent que la surface dune cellule dadsorption peut tre reprsentative de bulles
en condition industrielle ; ainsi des concentrations cellulaires de lordre de 200 gMS.L-1 (masse
sche), comme celles permises la surface dune cellule dadsorption, ne sont pas aberrantes
comme le suggrent Yoshida et Yagi (1977), mais envisageables autour dune bulle ayant eu
le temps dtre contamine, c'est--dire ayant sjourn longtemps dans un grand racteur.
I.3.2.2. Effet daffinit, effet de navette
Une situation parallle la consommation par la biomasse est dcrite par la prsence
dune troisime phase liquide ou solide finement disperse (en plus de la phase continue
liquide, et de la phase disperse gazeuse) et ayant une affinit forte pour loxygne. Dans ce
cas, tout comme dans le cas de consommation par la biomasse, la disparition de loxygne
mme la couche limite entretient un fort gradient de concentration ce qui acclre le transfert.
Une situation extrme est propose par Vinke et coll. (1993) : dans le cas dune monocouche
de particules de diamtre dp infrieur lpaisseur de la couche limite, , ayant une trs forte
affinit pour le gaz dissous et adhrant linterface, la rsistance au transfert est alors rduite
une couche dpaisseur dp/4 : derrire la couche de particules la concentration en gaz
dissous est pratiquement gale la concentration du cur du liquide ; la thorie du film donne
la valeur du coefficient de transfert : kL=DO2/(dp/4), qui est suprieure la valeur initiale sans
particule, DO2/.
Lagitation provoque un mouvement de va et vient des particules de la troisime phase
entre linterface et le cur du liquide. Lacclration est cre par ce mcanisme de navette
des particules ( shuttle mechanism ) : lorsque les particules se trouvent dans le film de
diffusion linterface gaz-liquide elles se chargent en gaz dissous, puis elles sont rgnres
par dsorption lorsquelles retournent au sein du liquide cause de la diffrence de
concentration (Rols et coll., 1990). La concentration en gaz dissous dans la couche de
59
diffusion est alors rduite, ce qui acclre le transfert. Le mcanisme fonctionne deux
conditions : que le gaz diffusant soit ou consomm dans la troisime phase ou soit plus
soluble dans celle-ci que dans le liquide, et que le diamtre des particules de la troisime
phase soit infrieur lpaisseur du film de diffusion.
I.3.2.3. Transfert direct du gaz dans la cellule
Ladhsion entre bulles et microorganismes est utilise en bioprocds : cest la base

des procds de flotation pour la sparation des microorganismes du milieu liquide.
Bartholomew et coll. (1950), partir de lobservation microscopique statique du filamenteux
Streptomyces griseus, supposent lexistence dune deuxime voie de consommation de
loxygne par contact du microorganisme avec la couche limite de la bulle. Ainsi les films
correspondants aux rsistances Z4 et Z6 (Tableau 1) se recouvrent et les rsistances se
fondent. Le mcanisme propos par Bartholomew a souvent t mal compris, ou rinterprt,
en supposant un contact direct entre le microorganisme et linterface gaz-liquide (Andrews et
coll., 1984). Cette dernire hypothse (attribue Bennett et Kempe, par Tsao et coll., 1968)
est beaucoup plus intressante par rapport au transfert car alors les rsistances Z4 et Z6
disparaissent compltement et les seules rsistances se situent en phase gaz et linterface
gaz-solide. Ce mcanisme sopre en parallle avec la voie classique dans laquelle loxygne
diffuse dabord travers le film liquide avant dtre consomm au cur du liquide. Tsao et
coll. (1968) proposent un modle deux KLa, KLaI pour le transfert classique, KLaII pour les
transferts (direct ou non) mme linterface, et un paramtre S reprsentant la fraction de
linterface bloque par les particules sur linterface :
dx
= K L a I.(1 S).( x *i x i ) + K L a II.S.f( x *i )
dt
(62)
o f( x *i ) est une fonction de la concentration linterface. Le modle implique que linterface

colonise est bloque par rapport au transfert, en effet, en labsence de consommation
doxygne, le transfert physique scrit :
dx
= K L a I.(1 S).( x *i x i )
dt
(63)
Tsao propose galement une simplification de Eq. 62 en :

dx
= K L a e.( x *i x i )
dt
(64)
o KLae est la valeur effective de KLa lorsque les deux mcanismes sont oprationnels. Cest
cette criture que nous choisissons pour prendre en compte le facteur dacclration.
60
Des conclusions contradictoires sont proposes par Andrews et coll. (1984). Ltude
du transfert direct gaz-cellule conduit une quation bilan du mme type que celle obtenue
dans le cas de consommation dans la couche limite. Pour cette raison il est difficile
exprimentalement de faire la diffrence entre les deux phnomnes. Daprs Andrews le
transfert direct conduit une acclration infrieure (cinq fois) celle obtenue par
consommation dans la couche limite.
I.3.2.4. Lapport des modles de connaissance
Les modles dcrivant le phnomne dacclration sont dune part homognes la

troisime phase est considre homogne et continue lintrieur de la phase continue ou
htrognes ce qui dcrit mieux la ralit exprimentale et a permis de dmontrer que la
gomtrie locale a beaucoup dinfluence sur lacclration du transfert et tend montrer que
le modle homogne est inappropri et dautre part stationnaires, ou instationnaires, pour
prendre en compte leffet de saturation de la troisime phase au cours du temps dexposition
linterface gaz-liquide.
Brilman et coll. (2000) ont construit un modle htrogne instationnaire deux et
trois dimensions bas sur les bilans matires entre les phases et le modle de pntration de
Higbie (1935). Le modle de Brilman permet de comprendre plusieurs points cls de
lacclration par effet de navette (Brilman et coll., 1998). On note en particulier que plus les
particules sont proches de linterface, plus le flux de transfert augmente ; que le flux de
transfert augmente avec le temps dexposition de la particule dans le film jusqu' un certain
moment o la particule est sature, alors la vitesse de transfert est contrle par la vitesse de
diffusion dans la phase homogne ; que lacclration augmente avec la solubilit relative du
gaz dans la particule ; enfin, que lacclration a lieu sur une surface de linterface gaz-liquide
suprieure au diamtre de la particule et qui augmente avec le diamtre de la particule mais ne
dpend pas de la distance de la particule linterface. Ce dernier point est dterminant pour le
calcul des interactions entre particules, galement pris en compte par le modle de Brilman et
coll. (2000) : lacclration est domine par la couche de particules la plus proche de
linterface qui joue leffet dun bouclier par rapport aux particules situes plus loin ; les
particules situes une distance de linterface suprieure au tiers de la couche de pntration
sont sans influence sur lacclration, par contre la disposition des particules autour de
linterface compte peu ; lacclration moyenne peut tre calcule partir des acclrations
individuelles et dun paramtre, la distance interparticulaire (plus les particules sont proches
moins lacclration rsultante est importante, compar la somme des acclrations
61
individuelles dans des configurations monoparticules) ; lacclration en fonction de la

rtention gazeuse a une allure logarithmique, ce qui est montr exprimentalement.
La possibilit que les particules puissent consommer du gaz dissous na t considre
par Brilman et coll. (1998) que dans le cas dune raction irrversible de premier ordre par
rapport au gaz et pour des particules prsentant une forte solubilit pour le gaz. Dans ce cas
lacclration augmente avec la constante de raction, mais de faon trs modre (dun
facteur infrieur 2 pour k1,0 passant de 0 100 s-1) compar avec, par exemple, leffet de la
solubilit relative du gaz dans la particule (facteur 10 pour la solubilit relative passant de 4
64). Le travail de Brilman met en vidence la ncessit de ltude des phnomnes
interfaciaux pour lapprhension des tudes de transfert gaz-liquide. Cependant, pour que
cette dtude ait une signification directe en culture cellulaire il faut que la solubilit relative
du gaz dans la particule soit proche de 1 et que la vitesse de consommation ne dpende que du
nombre de cellules dans la couche de diffusion.
Plus proche de la ralit biologique, Andrews et coll. (1984) partir dun bilan matire
trs simple avec lequel il est considr que la diffusion opre en parallle avec le phnomne
de consommation dans le film, montrent que lacclration par consommation na lieu qu
forte surconcentration cellulaire linterface : si les cellules linterface sont 25 et 50 fois
plus concentres que dans le cur du liquide, lacclration rsultante est 1,2 et 1,35,
respectivement. Lacclration dautre part est favorise lorsque loxygne devient limitant et
que lordre de la raction de consommation par rapport loxygne nest plus zro, mais tend
vers un. Dans un exemple Andrews pose le rapport de concentration entre l'interface et le
cur du liquide 600 ; lanalyse conduit une acclration uniquement dans le cas de cellule
dabsorption car une telle surconcentration est difficilement envisageable si le liquide est
fortement agit.
Loccurrence des mcanismes de transfert direct et de consommation dans le film
dpendrait des probabilits de contact entre bulles et microorganismes et serait donc favorise
forte aire interfaciale et forte agitation (Bartholomew et coll., 1950). La possibilit pour la
particule ainsi adsorbe de rester sur linterface suppose quil existe une affinit (peut tre
hydrophobe ou lectrostatique) entre la bulle de gaz et la particule. Par exemple, dans des
mmes conditions exprimentales Vinke et coll. (1993) note une acclration du transfert si le
catalyseur est support par une particule de carbone qui adhre linterface gaz-liquide, mais
pas dacclration si le catalyseur est support par une particule daluminium qui nadhre pas
linterface (linactivit est peut tre due ici la trop grosse taille des particules daluminium,
20 m, contre 6 m pour celles de carbone). La taille des particules est aussi importante. Des
62
observations microscopiques en statique ont montr que S. griseus, P. chrysogenum, et la

levure ont tendance adhrer aux bulles tandis que des agrgats des mmes microorganismes
adhrent galement mais se dtachent de linterface cause des forces de frottement
appliques sur lagrgat (Bartholomew et coll., 1950).
Une analyse microscopique ralise dans des conditions dagitation relativement
douces a montr que les particules sont mobiles sur linterface et quelles ont tendance se
regrouper du ct de la trane (Vinke et coll., 1993). Dans des conditions trs douces
galement (flotation) Vinke et coll. (1993) a dcrit la relation entre la fraction de bulle
recouverte de particules, , et la concentration de particules dans le systme, X, comme
suivant une isotherme dabsorption de Langmuir :
max
i L .X
1 + i L .X
(65)
Dautre part la fraction maximum pouvant tre recouverte par des particules diminue avec la
vitesse dagitation.
I.3.3.
Gnralisation du facteur dacclration
Plus gnralement que dans le contexte de transfert avec consommation simultane, le

facteur dacclration peut tre dfini comme le rapport entre deux flux dabsorption dfinis
dans deux situations diffrentes, par exemple en prsence ou non de cellules vivantes, en
prsence ou non de particules, en prsence ou non dagents de surface
En gnral lacclration du flux de transfert est attribue laugmentation de la
valeur effective de KLa (Eq. 64) par rapport une valeur de KLa de rfrence (KLa)ref, ce qui
revient dfinir lacclration comme un rapport de KLa (Sundararajan et Ju, 1993) :
E=
KL a
(K L a ) ref
(66)
Certains auteurs pour qui lacclration dcrit strictement leffet sur kL (Tsao, 1977 ; Yagi et
Yoshida, 1975), refusent cette dfinition.
Dans le cas de systmes complexes (culture cellulaire) il est judicieux dcrire
lacclration globale comme le produit de plusieurs types dacclrations, par exemple en
distinguant les phnomnes physiques et biologiques : par rapport une valeur de KLa de
rfrence dans le milieu de culture initial on peut considrer sparment lacclration
provoque par les modifications chimiques du milieu, Echem , lacclration due la prsence
physique des particules (cellules), Epp , lacclration provoque par la respiration des
cellules, EqO2 (Andrews et coll., 1984 ; Sundararajan et Ju, 1993) :
63
KLa=(KLa)ref Echem Epp EqO2
(67)
Laugmentation de KLa peut bien sre tre due laugmentation du coefficient de transfert kL,
ou de laire interfaciale a (Vinke et coll., 1992), et les diffrents types dacclration ont
souvent des effets opposs sur lacclration globale (Ju et Sundararajan, 1995).
Les mcanismes, autres que la consommation de loxygne dans le film, et pouvant
tre responsables de lacclration du transfert doxygne sont maintenant prsents. Les
modifications du transfert par la prsence physique de particules ont dj t traites dans la
section I.2.7, ces rsultats sont transposables aux cultures cellulaires, bien que les particules
dont il est question soient des cellules, dont la concentration peut crotre avec lavancement de
la culture.
I.3.3.1. Modification du milieu
Les modifications du milieu dorigine biologique sont dues lexcrtion de

mtabolites. Ces mtabolites peuvent tre des surfactants (I.2.4). Ainsi, Bandyopadhyay et
coll. (1967) attribuent la dcroissance de KLa aux modifications physicochimiques du milieu
(batch de levure ; agitation et ventilation constantes ; KLa passe de 0,066 s-1 0,05 s-1 lorsque
X crot de 6 gMS.L-1 21,5 gMS.L-1). Lexcrtion dagents viscosants, comme lors de la
production de xanthan (Garcia-Ochoa et Gomez, 2005), peut galement modifier le milieu.
Les modifications rhologiques induites par la biomasse elle-mme peuvent galement tre
prises en compte dans les modifications du milieu.
Par contre il faut faire attention ne pas confondre les facteurs modifiant la solubilit
de loxygne (I.1.1), c'est--dire le potentiel de transfert, avec les facteurs ayant un rle sur
KLa. Car le flux transfr est le produit de deux facteurs indpendants : le coefficient de
transfert et le potentiel de transfert (Eq. 18) : W O2 = K L a.( x *O2 x O2) . Dautre part il faut faire
VL
attention ne pas attribuer la biomasse des modifications quelle na pas gnre, comme
lors de lutilisation de cellules empaquetes (Ju et Sundararajan, 1995).
I.3.3.2. Production de gaz dans la couche limite
Lorsquun gaz est produit en phase liquide, par exemple CO2 dans la raction
HClg + C O32 + H + CO 2d + Cl + H 2O , le liquide peut devenir sursatur. Le gaz sursatur
peut sortir du liquide soit par diffusion dans la phase gazeuse (CO2d peut diffuser dans HCl
dans lexemple prcdent), soit par nuclation spontane pour ventuellement coalescer avec
64
la phase gazeuse. Il est suppos par deux auteurs (Shah et coll., 1974 ; Linek et coll., 1996)
que le phnomne de nuclation et de croissance des microbulles a la possibilit dacclrer le
transfert des changes gazeux (HCl et CO2d dans lexemple prcdent) en augmentant la
turbulence de la phase liquide au niveau de linterface. Cest partir de ce phnomne que
Shah et coll. (1974) expliquent lacclration du transfert (kL) par 2,5 lors de labsorption de
HCl dans une solution de C O32 en jet laminaire de 0,97 mm de diamtre.
I.4.
Dtermination de KLa
Pour obtenir la valeur de KLa on peut soit mesurer KLa directement, soit mesurer KL et
a, mais il est difficile de mesurer indpendamment KL et a. En gnral kL est dduit de la

mesure de KLa et de a (vant Riet, 1979), mesur par une mthode chimique ou optique
(I.2.1.3). Cependant la mesure de a est source derreurs et il est prfrable de mesurer
directement KLa (Linek et coll., 1988a).
Le nombre des mthodes disponibles pour le calcul de KLa ainsi que les variantes de
leur mise en oeuvre est souvent la cause des incohrences entre les donnes de la littrature.
Nous nous limitons ici aux mthodes applicables en cuve agite.
On distingue les mthodes dynamiques des mthodes statiques . Les mthodes
dynamiques consistent tudier lvolution de la concentration en oxygne (habituellement
en phase liquide) en rponse un chelon de concentration dans le gaz entrant. Les mthodes
statiques ncessitent la disparition simultane de loxygne absorb, soit par un systme flux
continu, soit par une raction chimique ou enzymatique de consommation, et reposent sur un
bilan matire de loxygne.
On distingue galement, par rapport aux bioprocds on distingue (Rainer, 1990) les
mthodes indirectes (sans systme biologique) des mthodes directes (avec systme
biologique consommant de loxygne). On distingue aussi les mthodes physiques (bases sur
labsorption ou la dsorption dun gaz) des mthodes chimiques (bases sur la consommation
dun gaz et censes, dans certaines conditions, acclrer le transfert doxygne cause de la
raction dans le film et de la modification des proprits dinterface), et enfin les mthodes
locales (photographies pour mesurer une taille de bulle) des mthodes globales (Poughon et
coll., 2003).
65
I.4.1.
Mthodes "dynamiques"
Les principales mthodes dynamiques utilises pour la dtermination de KLa sont

rappeles dans le Tableau 18 (Annexe VI.2). La mthode la plus employe est celle nomme
roxygnation dans laquelle le racteur est soumis un chelon gazeux entre lazote et
lair (not N2Air), ou avec de loxygne pur, pour un racteur ayant t pralablement
dgaz (chelon not 0O2), mais une dsoxygnation (chelon AirN2) peut tre employe
galement.
Le calcul permettant daccder la valeur de KLa repose sur la rsolution de bilans
matire en rgime transitoire pour les phases gaz et liquide, ainsi que de la description de la
dynamique de llectrode (Dang et coll., 1977 ; Ruchti et coll., 1981 ; Linek et coll., 1982).
I.4.1.1. Mise en uvre de la roxygnation
Lchelon de concentration peut tre effectu de deux manires : en modifiant la

concentration en oxygne du gaz dentre vitesse dagitation et dbit de gaz constants
(procdure A) ; alternativement, en dmarrant laration alors que le systme ne contient pas
de bulle (lagitation doit alors parfois tre dmarre au mme moment), sous rserve que la
concentration en oxygne au dpart soit diffrente de celle de lquilibre impos par le gaz
dentre (procdure B). Si la procdure A est utilise laire interfaciale et KLa sont supposs
rester constants ; le bilan dynamique sur le gaz dispers devient alors trs important puisquil
dcrit le passage des bulles dazote aux bulles dair. KLa mesur dans leau peut varier de
30% selon la dure de la priode de transition pendant laquelle lazote est coup et lair nest
pas encore inject dans le systme (Ruchti et coll., 1981). Il est donc recommand de fixer ce
lapse de temps. Dautre part cette influence est amplifie si le calcul ne prend pas en compte
la dynamique du gaz (Linek et coll., 1982). Si la procdure B est utilise la rtention gazeuse
(ou de laire interfaciale) prend du temps se construire et KLa nest pas constant mais tend
vers une valeur stabilise. Un modle linaire ( start-up ) a t propos par Linek et coll.
(1981, 1987) :
K L a( t ) = K L a
(Eq. 68)
K L a( t ) = K L a
pour t[0 ;G]

pour t>G
o KLa' est la valeur instantan de KLa pendant la priode transitoire, et G le temps de sjour
des bulles (G=VG/Qd).
66
Depuis les annes 1980 Linek tudie et propose des amliorations aux mthodes de
calcul de KLa par roxygnation. Linek et coll. (1981) dmontrent que les valeurs de KLa
calcules par les procdures A et B sont quivalentes condition de considrer dans le modle
start-up les transports simultans de loxygne et de lazote dans le cas de lchelon
N2Air (Linek et coll., 1982) ainsi que la construction de la rtention gazeuse, bien que
linfluence de cette construction ne semble pas jouer sur le rsultat (cuve agite 1 turbine,
VL=18 L, jusqu' 600 rpm, Qd=500 et 1000 L.h-1 : peut-tre la rtention gazeuse est-elle trs
faible ?). Par contre il nest pas ncessaire de considrer le transfert dazote si la procdure A
est utilise (Linek et coll., 1981 ; Linek et coll., 1982). Les valeurs de KLa obtenues par la
procdure B ralise avec lchelon 0O2 (0,005 s-1<KLa<0,2 s-1) sont comparables avec
ceux obtenus par la mthode statique au sulfite (Linel et coll., 1982), pour cette raison Linek
considre cette variante de la procdure B comme fiable. Par contre, partir de KLa=0,05 s-1
(soit partir dune puissance volumique dissipe denviron 400 W.m-3), lesvaleurs de KLa
calcules par toute autre mthode dynamique deviennent infrieures celles calcules par la
variante fiable (Linek et coll., 1987). Ceci est dautant plus vrai que le systme est noncoalescent, que la puissance dissipe est forte, que la procdure A est utilise, et que le
racteur est grand (Linek et coll., 1987). A partir de cette observation, Linek et coll. (1987)
rfutent nombre darticles qui nutilisent pas la variante correcte de la mthode
dynamique. Cependant la mthode start-up de Linek nest pas valable si la priode de mise en
rgime est de lordre de grandeur du temps ncessaire la saturation du racteur (Gogate et
Pandit, 1999).
I.4.1.2. Mesure de la rtention gazeuse
Le volume de gaz dispers, et fortiori la rtention gazeuse (=VG/VL), sont

difficilement mesurables (Poizat et coll., 1992). Le volume de gaz dispers permet le calcul
du temps de rsidence moyen du gaz en phase liquide, G, dont limpact sur le profil de
roxygnation est important (Chandrasekharan et Calderbank, 1980). Ruchti et coll. (1981)
mesurent la rtention gazeuse par flotteur avec une prcision de 5% 10%, ce qui
reprsente lerreur exprimentale la plus importante. Linek et coll. (1982) mesurent par une
mthode cinq sondes conductrices avec une prcision de 1%.
67
I.4.1.3. Sur la diffrence de potentiel (x*-x)
Lvaluation de la diffrence de potentiel (x*-x) est la plus grosse source derreur dans
le calcul de KLa, en particulier cause de lvaluation de x*.
Pour loxygne dissous, x, on suppose en gnral que la phase liquide est parfaitement
mlange grce au rtromlange, et bien que la phase gaz puisse tre considre htrogne,
la phase liquide est suppose homogne et variant dans le temps (Chapman et coll., 1982).
Ceci nest plus vrai dans les grands fermenteurs (Reuss, 1995). La mesure de x peut dpendre
cependant du placement et de la rponse de llectrode.
Pour la concentration x* lquilibre avec la concentration y de lintrieur de la bulle
(Eq. 2), elle peut tre diffrente en chaque point du fermenteur selon le profil de concentration
de la phase gaz. Quatre manires de prendre en compte cette volution spatiale ont t
proposes : en ngligeant le transfert (yin=yout, vrifi faible KLa et forte ventilation), en
supposant la phase gaz parfaitement mlange (y=yout, vrifi dans leau pure et agitation
suffisante), en supposant lpuisement piston du gaz ( plug flow ), ou en appliquant sur
lensemble des bulles un modle de distribution des temps de sjours.
On distingue les systmes coalescents pour lesquels une composition homogne des
bulles peut tre atteinte, mme pour de larges carts de concentration entre les gaz dentre et
de sortie, des systmes non-coalescents pour lesquels ceci nest vrai que lorsque la
composition du gaz reste trs similaire entre lentre et la sortie et que la distribution des
temps de sjour des bulles est trs troite (Linek et coll., 1982). Pour les systmes visqueux le
gaz ne peut pas tre suppos homogne non plus. Cependant un mlange homogne semble
pouvoir tre ralis forte concentration ionique condition que lagitation soit suffisante ; le
phnomne est sans doute d la coalescence force qui a lieu dans les cavits gazeuses
formes derrire les pales (vant Riet, 1979). Dautre part il semble mauvais de considrer la
phase gazeuse homogne si la hauteur de liquide dpasse le diamtre du tank et dans ce cas le
modle piston permet une meilleure approximation du profil de la dispersion (vant Riet,
1979). Une alternative au modle piston est de considrer le racteur comme une srie de N
racteurs parfaitement agits (Chandrasekharan et Calderbank, 1980).
Le modle de dispersion nest jamais idal. Pour des milieux newtoniens en cuve
agite (75 L, 1 turbine), Popovic et coll. (1982) dcrivent la dispersion gazeuse avec deux
paramtres m et p : m est la fraction volumique du racteur o le gaz est considr comme
parfaitement mlang, et p la fraction o le gaz scoule de manire piston. Ainsi la fonction
F dcrivant la rponse du gaz traceur un chelon scrit :
68
F( t ) = 1 exp ( t p)
m
(69)
Par exemple, pour une culture de levures (10 gMS.L-1, N=360 rpm ; Qd=20 L.min-1), m=0,75 et
p=0,25. Yagi et Yoshida (1977) viennent qualitativement la mme conclusion dune
dispersion gazeuse mi-chemin entre lcoulement piston et le mlange parfait, avec une
tendance tendre vers le mlange parfait forte agitation (5 L, 250<N<500 rpm). Pour les
systmes visqueux le modle de Popovic et coll. (1982) prend en compte des zones de
stagnation du gaz.
Dans un cas seulement la composition des bulles est uniforme : si ce sont des bulles de
gaz pur et que le liquide ait t au pralable compltement dgaz (not 0O2) ou que
loxygne ait t consomm par le sulfite (not SO32-O2) (Linek et coll., 1982, 1987). En
pratique cette mthode est dlicate mettre en place (Nocentini, 1990).
Midoux et coll. (1980) proposent un modle de distribution des temps de sjour des
bulles bas sur deux quations : une quation de distribution de tailles de bulles et une
quation de distribution des temps de sjour en fonction de la taille de bulle. Si kL est aussi
dcrit en fonction de la taille de bulle, Midoux donne les limites de lutilisation des modles
parfaitement mlangs et piston. Par exemple, pour la dtermination de KLa par la mthode au
sulfite avec loxygne de lair, linfluence du modle de dispersion gazeuse gnre moins de
10% derreur si moins de 30% de loxygne prsent est transfr pendant son passage dans le
racteur. Une condition analogue porte sur un temps maximum de sjour des bulles dans la
cuve.
Chapman et coll. (1982) dtournent le problme de la distribution des temps de sjour
en proposant une mthode qui saffranchit du profil de distribution gazeuse. Linconvnient
principal de cette mthode est le suivi dynamique des deux phases, la phase liquide, et la
rponse dynamique de la phase gazeuse collecte juste en dessous de la surface du liquide.
Chapman proposent galement une simplification de cette mthode (dveloppe par Gibilaro
et coll., 1985) qui permet de ne suivre que lvolution dans le liquide, mais elle semble
dlicate dutilisation car elle repose sur la valeur de la drive seconde de loxygne dissous
en t=0 : les points doivent donc tre trs rapprochs, peu disperss, et le moment t=0 doit
pouvoir tre dtermin avec certitude. En conclusion les valeurs calcules par lhypothse de
Chapman sont proches de celles calcules par lhypothse de distribution piston.
69
Pour un mme flux transfr, les valeurs de KLa les plus grandes sont obtenues par le
modle des phases parfaitement mlanges, suivi du modle piston, et du modle sans
consommation doxygne (Gogate et Pandit, 1999).
I.4.1.4. Prise en compte de la biomasse active
La mthode la plus simple pour prendre en compte la prsence de biomasse

consommant de loxygne seffectue en deux tapes : laration est coupe ce qui permet
dvaluer qO2, puis laration est rtablie et KLa est valu partir de la courbe de
roxygnation par un calcul qui tient compte de qO2. Bandyopadhyay et coll. (1967) signalent
que la capacit respiratoire diminue avec la dure de privation en oxygne ; ainsi qO2 mesur
dans la premire phase peut tre suprieur la valeur utilise dans la seconde phase. Il est
donc conseill de ne pas descendre au dessous de la concentration critique ; pour cette raison
galement, cette mthode ne peut pas tre utilise fort qO2. Pour une mesure fiable de qO2
Bandyopadhyay et coll. (1967) conseillent de rduire lagitation et de laver le ciel lazote
pendant la mesure afin de supprimer laration par la surface.
I.4.1.5. Conclusions sur les mthodes dynamiques
Pour la plupart des mthodes dynamiques, la valeur de KLa dpend des hypothses
utilises pour dcrire le profil gazeux. Ces hypothses sont difficilement vrifiables et psent
largement sur la valeur de KLa : elles constituent donc une source principale derreur.
Pour cette raison les mthodes dynamiques sont plus prcises faible valeur de KLa
car lhomognit du gaz est plus grande. Leffet de la distribution des temps de sjour des
bulles peut tre limin en travaillant dans des conditions telles que la composition du gaz
varie peu entre lentre et la sortie du racteur (Chandrasekharan et Calderbank, 1980), mais
ceci est impossible en culture cellulaire ou pour la mesure de KLa levs.
La mthode DPM est alors souvent conseille surtout en racteur multi-turbine (Linek
et coll., 1996 ; Gogate et Pandit, 1999) car elle limine linfluence du profil gazeux. Elle
donne des estimations lgrement plus leves mais comparables ( 15% prs) aux mthodes
de roxygnation et de rponse initiale, sur lintervalle de puissance dissipe [500 ; 5000
kW.m-3] et pour des vitesses superficielles du gaz suprieures 0,008 m.s-1 (Gogate et Pandit,
1999).
Une autre limitation des mthodes dynamiques apparat pour celles utilisant la
procdure A car il est difficile de supposer KLa et la rtention gazeuse constants pendant la
dure de la saturation cause du passage dun gaz lautre (Gogate et Pandit, 1999).
70
Il semblerait galement que les diffrentes dynamiques du systme qui se produisent

sur des chelles de temps comparables, empchent daccder prcisment aux valeurs leves
de KLa, car la moindre erreur destimation de lune de ces cintiques provoque une erreur
importante sur lestimation de KLa.
Pour certains auteurs (Chandrasekharan et Calderbank, 1980 ; Linek et coll., 1987) les
valeurs leves de KLa ne peuvent pas tre estimes de manire fiable par une mthode
dynamique car ce moment l les phases gaz et liquide tendent vers lquilibre et leurs profils
de concentration sont pratiquement indpendants de KLa.
I.4.2.
Mthodes "statiques"
Les principales mthodes statiques utilises pour lvaluation de KLa sont rappeles
dans le Tableau 19 (Annexe VI.2). Par rapport aux mthodes dynamiques elles ncessitent la
consommation ou la disparition en continu de loxygne qui a transfr en phase liquide.
I.4.2.1. Mthodes au sulfite
Dans la mthode statique au sulfite, Linek et coll. (1989) prnent lutilisation de

loxygne pur, comme pour les mthodes dynamiques, seule variante prcise selon eux, les
autres variantes donnant des valeurs de KLa sous-estimes jusqu' 50%. De plus, le sulfite
peut tre aliment en continu pour diminuer la vitesse dabsorption de loxygne et ainsi
viter le rtrcissement des bulles et limiter une variation incontrle de laire interfaciale
(Linek et coll., 1989 ; Linek et coll., 1996). Cette mthode est juge abusivement imprcise
par Gogate et Pandit (1999) : si les KLa obtenus par cette mthode sont jusqu' 150% plus
grands que ceux obtenus par les autres mthodes, cest surtout que les autres mthodes
retenues par les auteurs correspondent des KLa calculs dans leau pure, et non en solution
saline ! Cette mthode prsente les dsavantages de ne pouvoir tre utilise ni en fermentation
cause des fortes concentrations en oxygne dfavorables aux cellules, ni en conditions
industrielles cause de son cot lev (Gogate et Pandit, 1999).
La mthode au sulfite couple au bilan gazeux (BG+OS) donne des rsultats similaires
la mthode statique au sulfite, pour des valeurs de KLa infrieures 0,019 s-1 (Poughon et
coll., 2003) (VL=5 L). A forte agitation (500 rpm), les valeurs de KLa ainsi obtenues sont
environ trois fois plus grandes que celles obtenues par la mthode denrichissement en
continu ralise avec de leau pure ; la diffrence est bien sre attribue leffet des sels sur
la coalescence. Poughon suggre alors de rduire la concentration en sels de 50 10 g.L-1
pour obtenir des rsultats semblables (confirmation ralise en colonne lit fixe). Cette
71
dernire suggestion est contradictoire avec leffet des sels en racteur agit (Linek et coll.,
1987). En effet, au del dune concentration en sel suprieure 0,1 g.L-1, KLa dpend de la
concentration en sel qui tend diminuer la taille des bulles et donc laire interfaciale (Gogate
et Pandit, 1999).
I.4.2.2. Hypothse du profil axial de concentration du gaz
Cest surtout pour la dtermination de KLa par les mthodes statiques que lhypothse
dcoulement piston du gaz est utilise. Dans ce cas on utilise une moyenne logarithmique
entre lentre et la sortie du racteur (Poughon et coll., 2003).
Comme pour les mthodes dynamiques, lutilisation dair au lieu doxygne pur tend
sous-valuer KLa forte agitation surtout en milieu non-coalescent (Linek et coll., 1990 ;
Linek et coll., 2005). Ceci est d en particulier la prsence de microbulles, comptant pour
une grosse partie de laire interfaciale, mais sans cesse recycles et donc en quilibre avec le
milieu. Or laire interfaciale prise en compte dans le modle de dispersion gazeuse ne tient
pas compte de laire interfaciale constitue des microbulles, ineffective pour le transfert
global.
I.4.2.3. Comparaison entre les mthodes statiques et dynamiques
Les mthodes statiques sont dites plus fiables que les mthodes dynamiques (Rainer
1990 ; Linek et coll., 1982). En effet, lobtention dun systme qui varie peu, voir stationnaire,
permet de saffranchir des imprcisions difficilement quantifiables que gnrent les mthodes
dynamiques (recherche de linstant initial, hypothses de rtention gazeuse constante,
prsence dune population de bulle htrogne (N2 et air), prsence dune rtention gazeuse
permanente). De plus, dans les mthodes statiques, la dynamique de la sonde peut tre
ignore.
En milieu non-coalescent la mthode dynamique utilisant lchelon (0O2) est la
seule qui donne des rsultats comparables avec les mthodes statiques au sulfite et au glucose
oxydase ce qui tendrait prouver son entire fiabilit (Linek et coll., 1982 ; Linek et coll.,
1987). Par rapport ces trois mthodes, les autres mthodes dynamiques (procdures A et B
confondues) sous-estiment KLa, jusqu' 1,5 et 2 fois pour des valeurs de KLa de 0,1 s-1 et
0,2 s-1, respectivement.
Il apparat en dfinitive que la mthode doit tre choisie par rapport sa fiabilit et sa
facilit de mise en uvre en fonction des conditions opratoires imposes par le systme.
72
I.4.3.
Mthodes de dtermination des facteurs dacclration
Laugmentation du flux de transfert peut tre attribue laugmentation de KLa, cest

lacclration,
mais
aussi
la
diminution
de
loxygne
dissous
(Eq.
18 :
W O2 =
*
K L a.( x O2 x O2) ). Il est donc important de bien diffrencier les deux paramtres.
VL
Certains auteurs comme Tsao appellent acclration les variations sur KL et effectuent donc
leurs mesures aire interfaciale constante, en cellule dabsorption.
La mise en uvre exprimentale de lvaluation de E dpend du facteur dacclration
qui dsire tre valu (Eq. 67). Lacclration due la respiration des cellules est calcule par
le rapport :
K La
K L a pp
E qO 2 =
(70)
o KLa est mesur en conditions normales de culture cellulaire, avec respiration des
microorganismes, et KLapp est mesur dans les mmes conditions mais avec la respiration
inhibe. Pour bloquer la respiration HgCl2 a t test sur des boues biologiques (Boumansour
et Vasel, 1996). Lazide de sodium (5 mM) est plus frquemment utilis, par exemple sur S.
cerevisiae (Sundararajan et Ju, 1995). Linconvnient principal de cette mthode est larrt
dfinitif de la culture. La mthode au gaz traceur (Boumansour et coll., 1996 et 1998) permet
galement de calculer KLapp indpendamment de lacclration due la consommation
doxygne car le gaz traceur nest pas consomm. Cette mthode permet de conserver
lintgralit des conditions exprimentales dfinies en prsence de consommation doxygne.
Par contre KLa doit alors tre calcul par une autre mthode.
Lacclration due la prsence physique des cellules est obtenue par :
E pp =
K L a pp
K L a chem
(71)
o KLachem est calcul dans le mme milieu que KLapp mais aprs centrifugation.
Lacclration due aux modifications du milieu est obtenue par :
E chem =
K L a chem
(K L a ) ref
(72)
o (KLa)ref est le milieu de rfrence.

La difficult principale de la mesure de E est de trouver une mthode qui soit
applicable dans les deux situations comparer ; ceci est surtout vrai pour EqO2 car un systme
physique est comparer avec un systme biologique. Doit-on conclure avec Linek et Bene
(1977) quaucune mthode exprimentale sre pour mesurer un facteur dacclration en
73
fermentation na pas t trouve, ceci parce quil est trs difficile de mesurer une valeur de KL
en milieu physique dans les mmes conditions quune valeur en condition de raction
biochimique ?
I.4.4.
Synthse des grandeurs caractristiques
I.4.4.1. KLa et facteur dacclration
Des valeurs de KLa et de facteurs dacclration releves dans la littrature sont listes
dans le Tableau 4. Notons que Ju et Sundararajan (1995) ont quantifi trois types
d'acclration dont les valeurs dpendent de la vitesse d'agitation : 1,64Echem2,31
(probablement d l'enrobage des cellules); 0,81Epp0,93; 1,01EqO21,41. Boumansour et
Vasel (1998) tablissent, en bioracteur disques rotatifs: E=1+12,6 qO2.
74
Tableau 4. Transfert doxygne dans la littrature. Les conditions exprimentales rapportes sont
celles permettant daccder aux valeurs de KLa les plus importantes. Les valeurs de KLa rapportes
sont les plus hautes valeurs atteintes, ou la gamme de valeurs mesures dans le cas dacclration.
Les valeurs de qO2 rapportes sont les plus hautes valeurs atteintes. Pour le facteur dacclration E,
la gamme de valeurs atteintes est rapporte. Abrviations : SRT racteur agit, tRu turbine Rushton,
vvm renvoie un volume dair par volume de liquide par minute, sauf pour Castan et coll. ou il sagit
dun volume dair enrichi en oxygne, Xmax concentration maximale en cellule sche, Echem, Epp, EqO2
sont les diffrentes formes dacclration (Eq. 67).
Auteurs
Conditions opratoires
Microorganisme, Xmax ;
Type de culture;
Milieu
KLa (s-1),
Mthode de calcul
Linek et coll. (1989)
STR, tRu, VL=18 L, 0,9

vvm, 1050 rpm
0,5 M Na2SO4
1
Pression dynamique
Robinson et Wilke
(1973)
STR, tRu, VL=2,5 L,

400<rpm<2200
30<e<18000 W.m-3
0,5<vvm<2
eau pure
0,008-0,08
Roxygnation
sels
0,036-0,42
Continue au sulfite
et roxygnation
Bandyopadhyay et coll. STR, tRu, VL=2, L,

1 vvm, 600 rpm
(1967)
0,1<I<1,5 mol.L-1
qO2
(mol.L-1.h-1)
S. cerevisiae, 21.5 g DW.L-1;

Culture continue;
Milieu minral + glucose
0,086
Roxygnation
0,0174
Castan et coll. (2002)
STR, VL=4 L, 1 vvm,

air enrichi en oxygne,
1000 rpm
E. coli, 80 g DW.L-1;
Culture fed-batch ;
0,28
(estime par les auteurs)
n. c.
Jin et Cen, 2004
STR, VL=60 m3,

e=2780 W.m-3
vvm=0,6
culture de Streptomyces;
milieu complexe
3,89
(record absolu !!! peut-tre
surestim...)
relation empirique
n. c.
Ni et coll. (1995)
STR, 2 tRu, VL=2 L,

0, vvm, 900 rpm
S. cerevisiae< 5 gDW.L-1;
Culture batch;
Milieu complexe + glucose
0,0180,024
roxygnation
n. c.
11,3
Ju et Sundararajan
(1995)
STR, agitateur
magntique, VL=0,7 L,
vvm<1, 650 rpm
S. cerevisiae<6 g DW.L-1;
Cellules rhydrates;
0,00360,0097
roxygnation
0,00135
1,62,7
Yagi et Yoshida (1975) STR, tRu, VL=2,6 L,

1<vvm<2, 400 rpm
Candida tropicalis, 10 g DW.L-1;

Culture batch ;
+ 148 ppm antifoam
0,028
roxygnation
n. c.
1,07
Boumansour et Vasel
(1998)
Disques rotatifs
Boues actives (biofilm);

Eaux grasses reconstitues
0.00060.0042
Traceur gazeux
0,01
15
Garcia-Ochoa et
Gomez (2005)
STR, 2 tRu, VL=1,5 L,

1 vvm, 600 rpm
Candida bombicola< 7 g DW.L-1;

Culture batch ;
Milieu complexe + glucose
0,0120,015
roxygnation
0,054
11,15
Tsao et coll. (1972)
Cellule dabsorption,
agitateur magntique,
aration de surface
Acetobacter rancens<6 gDW.L-1;

Lyophilis resuspendu;
Solution de glucose, limitation en O2
0,00060,0042
roxygnation
n. a.
1,58
I.4.4.2. Autres paramtres du transfert
Une fourchette des valeurs de kL, kG, l'paisseur du film , a et KLa releves dans la
littrature est rappele dans le Tableau 5. Dans leau distille kL est mesur entre
1 et 610-4 m.s-1 et la valeur de 410-4 m.s-1 est souvent considre comme une bonne
estimation ; en milieu salin des valeurs plus petites sont mesures, entre 1 et 410-4 m.s-1
(vant Riet, 1979).
75
Tableau 5. Caractristiques des contacteurs gaz liquide.
Colonne bulles*
Cuve agite
kG,
mol.m-2.Pa-1.s-1
0,510-5 - 210-5
kL, m.s-1
Contacteur
10-4 - 4.10-4
-4
-4
0,310 - 610
, m
a, m-1 *
KLa, s-1
100
50 600
0,005 - 0,12
10-20
100 - 2000
0,003 - 1
* daprs Roizard et coll..
I.4.4.3. Cas des racteurs multi-turbines
Pour lestimation de KLa en racteur multi-turbine, une mthode start up avec un

modle piston pour le gaz a t valide pour un rgime dagitation infrieur celui
provoquant la dispersion totale des bulles (Gogate et Pandit, 1999). Mais la mthode de la
pression dynamique est recommande (Gogate et Pandit, 1999) car laugmentation de
pression provoque une variation de concentration dans toutes les bulles la fois,
indpendamment du profil des concentrations, car celui-ci est encore plus difficile dfinir
quen racteur agit par une seule turbine, et est diffrent du cas classique o les phases
gazeuse et liquide peuvent tre supposes homognes.
Dans les racteurs multi-turbine il est possible de mesurer KLa dans chaque tage, un
tage tant dfini comme la portion de racteur autour dune turbine. Les auteurs se
contredisent sur lhomognit des tages par rapport au transfert. Dans un racteur bitag
(dT=29 cm, 2 Rushton espaces de dT, hauteur H du liquide=2dT), Alves et coll. (2004)
calculent par la mthode statique leau oxygne une valeur de KLa dans ltage infrieur
entre 1,5 et 2 fois suprieure celle de ltage suprieur, malgr une aire interfaciale
suprieure dans le haut du fermenteur. A loppos, dans les mmes conditions exprimentales,
Linek et coll. (2004) calculent simultanment par la mthode de la pression dynamique, une
valeur de KLa identique dans chaque tage. Les travaux du mme auteur, entrepris avec une
autre mthode, viennent proposer une troisime alternative : dans un racteur quip de quatre
turbines Rushton (dT=19 cm, turbines espaces de dT, H=4dT), Linek et coll. (1996) mesurent
dans leau et en solution de sulfite, dans les trois tages du haut compar ltage du bas, une
rtention gazeuse suprieure de 15% et une valeur de KLa suprieure jusqu 45% et
samenuisant avec la puissance dissipe.
76
I.5.
Conclusions et perspectives
Ltude bibliographique focalise sur lanalyse des travaux relatifs au transfert
doxygne dans les conditions (milieux, technologie, ) compatibles avec leurs exploitations
en cultures microbiennes. Le nombre important de travaux exprimentaux et thoriques dans
le domaine tmoigne de lintrt majeur du transfert doxygne dans les bioprocds.
La thorie la plus rpandue du transfert doxygne en culture cellulaire (Arnold et
Steel, 1958) (Figure 1) suppose que les microorganismes se trouvent au cur du liquide, et
que le flux doxygne transfr dpend de rsistances en srie dans les phases en contact, la
principale rsistance tant localise dans le volume interfacial liquide. Le coefficient
volumique de transfert doxygne global est ainsi dfini par rapport la phase liquide sous la
forme du produit KLa (s-1) o KL dsigne la conductance globale dfinie par rapport la phase
liquide, et a laire interfaciale.
La comparaison des mthodes de dtermination de KLa, en distinguant les mthodes
dynamiques (Tableau 18) des mthodes statiques (Tableau 19), a permis de dgager les
limites et les contraintes de chaque mthode.
En labsence de raction microbienne, les paramtres influant le transfert doxygne
dans les bioracteurs ont t recenss. Il apparat qu'il est relativement ais daugmenter le
flux de transfert d'oxygne par augmentation de la solubilit de loxygne dans le liquide, en
augmentant la pression, en enrichissant le flux dalimentation de gaz, ou artificiellement en
introduisant des vecteurs doxygne (Rols et coll., 1990 ; Ju et coll., 1991). Il est galement
ais daugmenter KLa en augmentant la puissance dissipe ou le flux daration (vant Riet,
1979). Il reste cependant difficile de prdire prcisment lvolution de KLa, comme
rsultante du produit KL et a, compte tenu du nombre important des paramtres mis en jeu et
de leurs effets croiss. Lanalyse des travaux mentionns dans la littrature permet la synthse
prsente dans le Tableau 6, o linfluence des 8 principaux paramtres physico-chimiques et
mcaniques est reporte.
77
Tableau 6. Influence sur KLa dune augmentation de la valeur des paramtres physiques,
chimiques et mcaniques. + augmentation de la valeur de KLa; - diminution de la valeur de
KLa ; 0 sans effet.
Paramtre
Puissance dissipe e
Dbit d'aration
Viscosit
Temprature
Concentration en sels
Agents de surface
Agents antimousse
Particules solides
Influence sur KL
+ ou
0
0 ou
+
+ ou
+ ou
Influence sur a
+
+
0
+
+
(ou +)
+ ou
Tendance globale
+
+
0 ou
+
+
+ ou
(ou +)
+ ou
Les investigations du transfert doxygne en bioracteur en labsence de raction

biologique sont principalement ralises dans leau et des solutions aqueuses dun sel, avec
des niveaux de puissance dissipe infrieurs 5000 W.m-3 (Gogate et Pandit, 1999). Les
auteurs dont les travaux ont t raliss au-del de 5000 W.m-3 sont en nombre restreint :
Linek et coll. (2005) estiment KLa jusqu e=7000 W.m-3, Robinson et Wilke (1973) et
Hassan (1976) mesurent KLa jusqu e=20000 W.m-3 , Veljkovi et coll. (1991) et Wu (1995)
tudient lentranement de surface jusqu e=20000 W.m-3. Une attention particulire est
accorde aux travaux relatifs au phnomne daration de surface, et plus spcifiquement
dentranement de surface ; les modles proposs dans la littrature sont explicits et
discuts : cest un phnomne qui perturbe lcoulement gazeux et qui peut devenir la source
principale daration, en particulier avec lutilisation de vitesses dagitations leves, et en
racteurs multi-turbines.
Les valeurs de KLa alors obtenues sont trs disperses, variant dun facteur 1 3 selon
la mthode utilise pour une mme configuration de racteur. Cette incertitude augmente avec
KLa, car plus la valeur de KLa est leve, plus elle est difficile dterminer, en particulier
cause de la difficult modliser correctement la phase gazeuse (Linek et coll., 1987). La
principale difficult consiste concilier une mise en uvre exprimentale fiable et
reproductible avec la complexit des modles adquats et des mthodes de rsolution. Il
semble que la compatibilit des mesures avec Eq. 21: K L a = .e . US , comme le suggrent
Linek et coll. (2005), puisse servir de test efficace la validation des rsultats.
En prsence de raction microbienne, le coefficient global de transfert doxygne
KT est dfini dans la phase liquide conformment aux travaux de Sundararajan et Ju (1993)
(Eq. 67) :
KT=(KLa)ref Echem Epp EqO2
78
o (KLa)ref est dtermin dans un milieu exempt d'influence biologique, et o Echem, Epp et
EqO2 dsignent respectivement les facteurs dacclration relatifs aux modifications du milieu
par lactivit microbienne, la prsence physique des cellules et leur respiration. Le
domaine dinvestigation exprimentale est limit des concentrations cellulaires infrieures
10 gMS.L-1 et des consommations volumiques d'oxygne infrieures 0,1 mol.L-1.h-1 (Tableau
4).
Il apparat donc que le transfert doxygne dans les bioracteurs mobilise de
nombreuses quipes de recherche mais que le champ dinvestigation nest pas compatible
avec les conditions de production intensive. De nombreuses questions scientifiques sont en
suspens :
Comment quantifier et modliser le transfert doxygne en condition de
production intensive? Cest--dire lorsque les concentrations cellulaires sont suprieures
50 gMS.L-1, les consommations volumiques doxygne sont suprieures 0,1 mol.L-1.h-1, en

milieux complexes, avec des vitesses dagitation et des puissances dissipes leves, avec une
hydrodynamique complexe de racteur, et en prsence dinteractions entre les dynamiques des
phnomnes physiques et biologiques.
Comment quantifier KLa forte puissance dissipe dans les racteurs quips de
plusieurs turbines? Frquemment utiliss pour les cultures cellulaires intensives, et moins
tudis que les racteurs mono-turbine, ils favorisent lentranement de surface, vit dans la
littrature cause de la complexit des coulements hydrodynamiques induits. Dans ces
conditions daration par le diffuseur en prsence dentranement de surface, aucune
estimation de KLa nest encore propose.
Quelles sont les influences de lactivit cellulaire sur le transfert, dans des
conditions de production compatibles avec une transposition industrielle? Yagi et
Yoshida (1975) crivent dans les cas usuels le facteur dacclration par rapport
labsorption doxygne en milieu de fermentation est trs lgrement suprieur un ou
ngligeable () moins que le taux de respiration et/ou la concentration en biomasse soit trs
levs .
Comment prendre en compte la prsence physique des cellules, lorsque le mot de
fermentation est un systme triphasique liquide-solide-gaz (Monbouquette, 1987) ? Est-il

possible que les phnomnes de transfert linterface soient modifis par laccumulation
79
des microorganismes et par leur activit, par transposition des travaux de Tsao et Lee
(1975) ?
Ces travaux ont lambition de contribuer formuler des lments de rponse ces
questions scientifiques par une dmarche associant exprimentation et modlisation. Devant
la complexit des phnomnes, la dmarche vise ltude du transfert doxygne en bioracteur
- en prsence de diffrents milieux minraux, par rfrence aux travaux antrieurs mentionns
dans la littrature, mais aussi au-del des valeurs de puissance dissipe investigues ce jour ;
- lors de cultures en mode fed-batch dEscherichia coli, de Saccharomyces cerevisiae et
dAspergillus niger en condition de forte concentration cellulaire et forte consommation
volumique d'oxygne.
Loriginalit de ce travail repose sur ltude in-situ en condition de culture et de
production intense, compatible avec une mise en uvre industrielle.
80
II. MATERIEL ET METHODES
81
Matriel et Mthodes
Jai bnfici pour mes travaux des rsultats issus de cultures de Saccharomyces
cerevisiae ralises par Latitia Faure (2005) pendant son travail de doctorat, ainsi que de
cultures dE. coli et de Saccharomyces cerevisiae ralises par le Professeur Jean-Louis

Uribelarrea. Les mthodes qui ne sont pas directement relies mes investigations sont
prsentes en annexe.
II.1. Souches et milieux de cultures

Souches
Trois microorganismes sont utiliss :

Escherichia coli K12, souche pour la production de -galactosidase.
Saccharomyces cerevisiae, souche proprit de Lesaffre.
Aspergilus niger, souche proprit de DSM.
Milieux de cultures
Huit milieux sont utiliss, dont 4 milieux de rfrence et 6 milieux de culture :

Milieux de rfrence :
R1) Leau distille est utilise comme milieu coalescent de rfrence.
R2) Une solution de sulfite de sodium (Na2SO3) ou de sulfate de sodium (Na2SO4)
50 g.L-1 est utilise comme milieu ionique non-coalescent de rfrence, selon que la raction
de consommation doxygne est ncessaire ou non. La concentration de 50 g.L-1 permet dans
les deux cas dinhiber compltement la coalescence en racteur agit (Linek et coll., 1987).
Les forces ioniques correspondant ces concentrations (Tableau 7) dpassent largement la
force ionique minimum de 0,4 mol.L-1 permettant linhibition de la coalescence en
expriences statiques (Lessard and Zieminski, 1971) (I.2.3).
R3) Une solution de sulfite de sodium (Na2SO3) ou de sulfate de sodium (Na2SO4)
-1
10 g.L est utilise comme milieu ionique non-coalescent de rfrence, selon que la raction
de consommation doxygne est ncessaire ou non.
R4) Une solution constitue des trois principaux sels du milieu de culture batch pour
E. coli (par litre deau) : K2HPO4 8 g ; Na2HPO4 2 g ; (NH4)2HPO4 8 g.
82
Matriel et Mthodes
Milieux de culture :
1) Milieu LB (par litre deau) : extrait de levure 5 g, peptone 10 g, NaCl 9 g, glucose
10 g. La glose LB est obtenue de la mme faon en ajoutant Agar-agar 15 g (Biokar
Diagnostics).
2) Milieu de culture batch pour E. coli (par litre deau) : acide citrique 6 g ; K2HPO4 8
g ; Na2HPO4 2 g ; (NH4)2SO4 0,75 g ; (NH4)2HPO4 8 g ; NH4Cl 0,13 g ; MgSO4 1 g ;
CaCl22H2O 0,04 g ; FeSO47H2O 0,004 g ; ThiamineHCl 0,01 g ; MnSO4H2O 0,02 g ;
CoCl26H2O 0,008 g ; ZnSO47H2O 0,004 g ; Na2MoO42H2O 0,004 g ; CuCl22H2O 0,002 g ;
H3BO4 0,001 g.
3) Milieu de culture fed-batch pour E. coli (par litre deau) : H3PO4 (85% m/m) 20,5
mL ; KH2PO4 75 g ; Na2HPO412H2O 9 g ; MgSO47H2O 47 g ; CaCl22H2O 3,7 g ;
FeSO47H2O 3.7 g ; MnSO4H2O 0,21 g ; Na2MoO42H2O 0,022 g ; CoCl26H2O 0,04 g ;
CuCl22H2O 0,064 g ; ZnSO47H2O 0,725 g ; H3BO4 0,021 g ; Thiamine 0,8 g.
Les compositions des milieux de pr-culture et de culture pour E. coli ont t calculs
selon lapproche dEgli & Fiechter (1981).
4) Milieu salin de rfrence (par litre d'eau distille) : il s'agit des trois principaux sels
prsents dans le milieu initial d'E. coli : K2HPO4 8 g, (NH4)2HPO4 8 g, Na2HPO4 2 g.
5) Milieux de culture batch et fed-batch pour S. cerevisiae : milieux industriels dfinis
(proprit de Lesaffre).
6) Milieux de culture batch et fed-batch pour A. niger : milieux industriels dfinis
(proprit de DSM).
Les forces ioniques de certains milieux sont reportes dans le Tableau 7.
Tableau 7. Forces ioniques de milieux utiliss.
Milieu
Na2SO3 50 g.L-1
Na2SO4 50 g.L-1
Na2SO3 10 g.L-1
R4
milieu initial pour E. coli
milieu initial pour S. cerevisiae
Force ionique (mol.L-1)

1,19
1,06
0,24
0,3
0,33
0,2
83
Matriel et Mthodes
II.2. Conditions de culture

II.2.1.
Conditions de culture dE. coli

Pr-cultures
La souche conserve 4C sur glose LB est mise en culture dans un tube contenant 5
mL de solution LB, incub pendant 12 h 37C sur table agitante. Le contenu est ensuite
transvas dans une fiole dErlenmeyer contenant 250 mL de milieu de culture batch et 10 g.L1
de glucose, incub pendant 12 h 37C sur table agitante. Cette srie doprations est
ralise en quadruple pour obtenir un volume final dinoculum de 1 L, utilis pour inoculer 9
L de milieu de culture batch dans le bioracteur de 22 L.
Culture en fermenteur de 22 litres
Les cultures sont ralises dans un fermenteur BRAUN (modle Biostat E, BRAUN
DIESSEL BIOTECH, Melsungen, Allemagne), hauteur 63 cm, diamtre intrieur dT=21,3 cm,
volume total une fois quip 22,86 L, fond plat, baffl (4 contre-pales largeur 3,25 cm),
anneau daration plac 2 cm du fond, trois turbines Rushton-6 pales (diamtre dD=8,4 cm,
soit dT/dD=2,54 ; hauteur de pale 1,7 cm) places respectivement 5, 21 et 37 cm du fond
(cest--dire espaces dune distance 2dD). Larbre dagitation est entran par un moteur de
750 W et la puissance consomme par le moteur dagitation peut tre lue sur le panneau de
contrle, exprime en pourcentage de la puissance maximum (2%). La configuration du
racteur nous permet de calculer une vitesse dagitation limite autour de 450-470 rpm
permettant la rpartition optimale du gaz dans lensemble du racteur (vant Riet, 1979) ; cette
vitesse limite est systmatiquement dpasse dans notre tude.
Le bioracteur est quip de modules de mesure et rgulation du pH (sonde
FERMPROBE BROADLEY-JAMES Co., Santa Ana, USA), de la pression, et de loxygne
dissous (sonde INGOLD, Urdorf, Suisse), la sonde est place 8 cm du fond dans un picage
inclin de 30. Le fermenteur est connect un ordinateur. Le module dentre-sortie permet
lacquisition en ligne des donnes des capteurs (vitesse dagitation, temprature, pH, oxygne
dissous, pression), du temps de fonctionnement des pompes de liquides rgulateurs de pH et
dantimousse ainsi que la commande des pompes dalimentation en substrats, la liaison
asynchrone reliant la balance (modle I 12000 S, SARTORIUS, Gttingen, Allemagne)
lordinateur permet lacquisition en ligne de la masse du rservoir contenant la solution de
substrat alimentant le bioracteur. Le volume total de la dispersion est accessible par simple
lecture par la fentre latrale, sil ne dpasse pas 17 L.
84
Matriel et Mthodes
Le logiciel de gestion de lalimentation du racteur en substrat a t dvelopp au

laboratoire par P. Perlot (Bghin Say) et J.-L. Uribelarrea (INSA). Il prsente les fonctions
suivantes : mesure, filtrage et stockage des donnes, calcul des variables indirectes, contrle
et reprsentations graphiques. Il permet en particulier une estimation du taux de croissance
partir de la mesure de la quantit de base ajoute pour rguler le pH et une estimation du taux
de croissance partir de la mesure de dO2, taux de transfert doxygne constant (agitation,
aration et pression constantes).
Le milieu contenant les sels est strilis dans le fermenteur 120C pendant 20
minutes. La solution de calcium et de magnsium est strilise sparment en autoclave
120C pendant 20 minutes, puis est transvase dans le fermenteur par piquage strile. Les
solutions de fer et doligo-lments sont ajoutes strilement la seringue. Le glucose est
prpar sparment en solution concentre 700 g.L-1 et autoclav 120C pendant 20
minutes. Lalimentation en substrat carbon est assure par une pompe pristaltique
commande par le logiciel prcit.
Le pH est rgul 6,8 par addition dune solution dammoniaque 28%, et la
temprature est rgule 37C.
Rcupration du mot
Le milieu contenant les cellules ltat stationnaire est obtenu en fin de culture aprs
avoir prolong la culture sans alimentation en substrat (afin que dventuelles traces dalcool
et daldhyde soient reconsommes pour ne pas fausser la mesure de KLa), puis arrt
lagitation et le flux daration (pour permettre lvacuation des microbulles et la mesure du
volume liquide rel).
Le milieu de culture pur en microorganismes est obtenu par centrifugation de la
culture ltat stationnaire. Les cellules sont conserves ltat stationnaire dans le racteur
avant dtre centrifuges par lots en pots de 0,5 L pendant 10 min 5C 7000 g (Avanti J25, Beckman Coulter, Palo Alto, USA).
Les surnageants associs aux mots sont obtenus aprs centrifugation des mots
(Avanti J-25, Beckman Coulter, Palo Alto, USA ; 10 min, 5C, 7000 g).
Analyse des gaz de fermentation
Les gaz de fermentation en entre et sortie du fermenteur sont analyss par un

spectromtre de masse (PRIMA 600S, VG gas, Manchester, Royaume-Uni). Les fractions
molaires de CO2, O2, N2 et Ar sont dtermines avec une prcision relative de 0,1%. La
85
Matriel et Mthodes
mesure de la composition des gaz de sortie est effectue toutes les minutes ; la composition de
lair en entre du fermenteur est analyse toutes les heures.
Les techniques analytiques classiquement utilises en gnie microbien sont
prsentes Annexe VI.3, et la mthode de lissage et de rconciliation des donnes

exprimentales annexe VI.4.
II.2.2.
Conditions de culture de S. cerevisiae
Les trois turbines Rushton sont places 5, 17 et 29 cm du fond.

Le pH est rgul 4,6 par addition dune solution concentre de potasse (5N) ou
dacide phosphorique (5N) et la temprature est rgule 30C.
II.2.3.
Conditions de culture dAspergillus niger
Les cultures dAspergillus niger ont t ralises DSM-Delft et sont soumises la

confidentialit industrielle. Le racteur cylindrique de 25 L en verre, dun diamtre dT=23 cm
quip de deux turbines Rushton (R6, dD=95 cm, hauteur de pale 5 cm) places 4,8 cm et
14,3 cm du fond, dun disque rotatif pour casser la mousse, et de lquipement standard de
contrle. Les cultures sont ralises 34C sans surpression. Les gaz sont analyss par
spectromtre de masse. Lacquisition des mesures est ralise toutes les 3 minutes. Les
mesures de viscosit sont ralises laide dun viscosimtre coaxial TVe-05 (Lamy sas,
France).
II.3. Dtermination de KLa

II.3.1.
Choix des mthodes exprimentales
La mthode idale permettant la dtermination de KLa devrait pouvoir sappliquer

aussi bien sur les milieux biologiques consommant de loxygne, que sur les milieux
minraux -en particulier leau pure et les solutions ioniques- afin de permettre une
comparaison directe des rsultats. Cependant, aucune des mthodes dynamiques ni des
mthodes statiques ne peut sappliquer la fois dans les deux conditions. Les mthodes
dynamiques (Tableau 18) ne sont plus valables aux fortes valeurs de qO2 et de KLa rencontres
en milieu biologique. Quand aux mthodes statiques, elles ne permettent pas la caractrisation
de KLa en eau pure cause de lajout obligatoire dlments dans le milieu (Tableau 19).
86
Matriel et Mthodes
Plusieurs mthodes doivent donc tre combines, en fonction des conditions

exprimentales.
Pour lestimation de KLa en milieu biologique la seule mthode applicable est la
mthode des bilans gazeux, galement utilisable pour les solutions de sulfite avec
consommation doxygne.
Pour le calcul de KLa en eau pure et en milieux minraux diffrents des solutions de
sulfite, la mthode DPM est attirante mais elle est carte cause de difficults de mise en
oeuvre. La mthode par roxygnation est la plus fiable, selon Linek et coll. (1982, 1987), si
elle est pratique en utilisant de loxygne pur, ce qui ncessite un appareillage spcifique (en
particulier vierge de toute trace de matire organique), et cest pourquoi elle est carte au
profit de lchelon N2Air.
II.3.2.
Mthodes du bilan gazeux: BG et BG+OS
Le matriel et mthode ncessaire la dtermination de KLa par la mthode du bilan

gazeux est celui dcrit dans les conditions de culture de E. coli (II.2.1). Les valeurs de KLa
sont calcules en ligne toutes les minutes.
L'erreur de mesure la plus significative de cette mthode porte sur l'valuation de x *O 2
2%. Afin de minimiser le report de cette erreur sur gradient ( x *O 2 x O 2 ) , la condition
10% dO2 80% est recherche. Ainsi KLa est dtermin 10%.
La mthode du bilan gazeux coupl l'oxydation par le sulfite (BG+OS) pour la
dtermination de KLa dcoule de la mthode BG. Le racteur Braun (20 L) est quip comme
pour la culture cellulaire. Les expriences sont ralises une pression relative de 0,3 bar et
une temprature de 37C. La sonde oxygne nest pas utilise pour ne pas tre dtriore par
le sulfite ; elle est dbranche et la valeur correspondante de loxygne dissous vaut
0,250,01% (il est vrifi avec la sonde Electrosense que la concentration en oxygne dissous
dans le racteur est toujours nulle en cours d'exprience). La composition du gaz (N2, O2) en
sortie de racteur est analyse par dtection infra rouge (URAS-8 de B. Braun, quip du
module de dtection EGAS 10E de Hartmann et Braun).
La mthode est base sur la consommation du sulfite dans la raction:
1
2
Co 2 +
SO 24
O 2 + SO 3
2
(73)
Les expriences sont ralises avec des concentrations en sulfite de sodium (Na2SO3) de 10,
25 et 50 g.L-1 (pour VL=10 L). Le Cobalt est utilis comme catalyseur : une solution mre de
87
Matriel et Mthodes
CoCl2,6H2O 510-4 M est prpare: lajout de 10 mL de cette solution dans le racteur permet
une concentration finale de 510-7 M. Il est vrifi que le catalyseur nacclre pas la raction,
ce qui augmenterait artificiellement la valeur de KLa (Reuss, 1993). Pour cela, plusieurs
concentrations en catalyseur sont testes conditions opratoires fixes (Tableau 8): KLa
naugmente pas avec la concentration en catalyseur mais reste constant 3% prs.
Tableau 8. Vrification du rgime diffusionnel pour le calcul de KLa par la mthode du
bilan gazeux coupl loxydation par le sulfite.
Conditions opratoires
KLa (s-1), selon [Co2+]
-1
-6
Us, cm.s
N, rpm
10 M
5.10-7 M
2.10-7 M
erreur, %
0,28
600
0,31
0,32
1,64
0,28
1000
0,581
0,578
0,37
0,56
1000
0,84
0,81
2,89
Le sulfite de sodium est ajout dans leau agitation et aration rduites pour limiter la
raction avec loxygne. Une fois lagitation et laration fixes, le cobalt est ajout. Les
valeurs de KLa sont calcules en ligne. On observe une volution des valeurs calcules : la
valeur de KLa est dabord surestime (due la mise en rgime du racteur), puis se stabilise,
puis chute doucement ( cause de l'puisement du ractif), puis chute trs rapidement (lorsque
tout le sulfite est consomm). La valeur de KLa retenue correspond celle mesure en rgime
permanent (moyenne des points pour lesquels la drive dKLa/dt est constante et le plus
proche de 0). En pratique le volume de gaz ventil avant datteindre le rgime permanent
correspond environ quatre fois le volume du ciel. Dans ces conditions il n'est pas possible
Lorsque la vitesse d'agitation 1500 rpm est teste avec 10 g.L-1 Na2SO3 il n'est pas possible
datteindre le rgime permanent ; 25 g.L-1 Na2SO3 sont donc utiliss au lieu de 10g.L-1 dans ce
cas.
II.3.3.
Mthode de roxygnation
La dtermination de KLa par la mthode de roxygnation ncessite dabord la

modlisation de la rponse de la sonde, puis la mise en uvre exprimentale de la
roxygnation, et enfin lidentification de KLa par une mthode numrique de calcul.
II.3.3.1. La sonde oxygne rponse rapide
a) Choix
Les qualits dune sonde pour mettre en uvre la mthode dynamique sont dabord sa
constante de temps qui doit tre rduite, et aussi sa stabilit et sa linarit par rapport la
88
Matriel et Mthodes
concentration en oxygne (assures par un faible flux doxygne vers la cathode). Ces qualits
dpendent essentiellement du matriau de la membrane et de son paisseur. Les membranes
en Tflon, trs permables loxygne, ne fournissent pas toujours un signal linaire (Linek
et coll., 1987). Avec une membrane en polypropylne de 10 m (mme coefficient de
diffusion que le Tflon, mais moins permable), Linek et coll. (2005) obtiennent un temps de
rponse infrieur 1,25 s. Pour que la sonde soit utilisable dans une mthode dynamique il
faut imprativement que sa constante de temps S additionne la constante de temps du film
liquide adjacent la membrane de la sonde, F, soit infrieure au temps caractristique du
transfert (Ruchti et coll., 1981), autrement la moindre erreur dapprciation dun des
paramtres cintiques (G, F, S) entrane de trs larges erreurs sur la valeur de KLa :
S + F <
1
KL a
(74)
Une sonde ELECTROSENSE (19 Keswick drive, Frodsham WA6 7LT, R.U.) est utilise :
cathode en or, anode en argent, solution lectrolytique 15 g NaCl complte 100 mL deau
distille, membrane en Tflon (12,7 m), temps de polarisation 8 heures. Alimentation en 0,6
V par le botier, sortie entre 0 et 10 mV (certaines interfrences peuvent tre vites en
rduisant au maximum la longueur des connections entre le botier et la nappe relie
lordinateur ; 5 cm fonctionne bien), acquisition toutes les 0,1 s. Lanode oxyde est rgnre
par immersion dans un bain dammoniaque (14%) pendant une dizaine de secondes.
b) Fiabilit de la sonde Electrosense
La sonde Electrosense a t slectionne pour sa rapidit, elle prsente par contre de
nombreux dsavantages.
La sonde Electrosense nest pas linaire avec la concentration en sels, ni avec la
temprature, et elle dvie dans le temps. Elle est donc difficilement calibrable, cest pourquoi
le signal doit tre normalis pour lexploitation de chaque roxygnation.
La valeur indique par la sonde Electrosense est influence par lagitation, dune part
parce que la sonde consomme normment doxygne compar une sonde ordinaire, dautre
part parce que la valeur affiche semble fortement influence par la pression au niveau de la
membrane : lensemble des expriences a t ralis en fixant de manire identique la sonde
par rapport aux turbines.
89
Matriel et Mthodes
c) Modlisation de la rponse de la sonde

Ltude de la dynamique de la sonde seffectue en soumettant la sonde un chelon de
concentration (Linek et coll., 1987) : un liquide appauvri en oxygne (fiole Erlenmeyer avec
barbotage de N2 ; le rtrcissement du col permet dempcher lentre dair) et un liquide
satur par loxygne de lair (bcher avec barbotage dair). La permutation (dune dure de
lordre de la seconde) a lieu aprs que la valeur mesure ait atteint une valeur constante.
La caractrisation de la dynamique de la sonde sopre dans des conditions opratoires
diffrentes des conditions exprimentales de culture, or les conditions opratoires (agitation,
viscosit, temprature), et en particulier limportance du film liquide adjacent la membrane,
influencent la rponse de la sonde (Dang et coll., 1977). Ainsi, la caractrisation du racteur
ayant lieu en conditions turbulentes, un rgime turbulent est garanti dans la fiole Erlenmeyer
et dans le bcher par des barreaux magntiques tournant 750 rpm ; le flux liquide arrive
tangentiellement la membrane ce qui permet la rgnration de la couche limite adjacente
la membrane (comme dans le racteur agit) et le balayage dventuelles bulles dair. Dautre
part un support permet de maintenir la sonde telle que, dans les deux rcipients, la membrane
soit gale distance du barreau dagitation (2 cm). Lexprience est ralise 1 atm et 37C
(temprature de culture).
La modlisation la plus rpandue (Dang et coll., 1977), est constitue de deux
premiers ordres en srie, modlisant la diffusion dans le film liquide :
d x F xO 2 x F
=
dt
F
(75)
suivie de la diffusion dans la membrane :

d xS x F xS
=
dt
S
(76)
o xO2 est la concentration en oxygne au cur du liquide, xF la concentration en oxygne

dans le film liquide, xS la concentration en oxygne mesure par la sonde, F la constante de
temps relative au film liquide, et S la constante de temps de la sonde. Il existe des modles
plus complexes de diffusion travers la membrane, bass sur la seconde loi de Fick (Rainer,
1990 ; Ruchti et coll., 1981).
Daprs Linek et coll. (1987), pour des vitesses de rotations suprieures 1000 rpm
(2 m.s-1 en bout de pale) linfluence de la diffusion dans le film liquide devient nulle (ou
ngligeable devant S) et la rponse de la sonde peut tre modlise par un premier ordre (en
remplaant xF par xO2 dans Eq. 76), alors que pour des vitesses de rotation infrieures 1000
90
Matriel et Mthodes
rpm ou pour des systmes visqueux, F nest plus ngligeable (F=1,9 s 500 rpm dans leau ;
Linek et coll. (1987)). Dang et coll. (1977) conseillent de dterminer F exprimentalement
pour chaque condition utilise dans la dtermination de KLa ; ce qui est pratiquement
impossible dans nos conditions car il faudrait pouvoir plonger instantanment la sonde dans le
racteur. Dans nos conditions (milieu non visqueux, turbulent), la rponse de la sonde
Electrosense un chelon de concentration doxygne est approxime par un retard suivi dun
premier ordre (Nocentini, 1990).
Le retard d la rsistance de la membrane est mesur en utilisant un chelon gazeux
(Linek et coll., 1987), la rsistance du film tant alors ngligeable, et lchelon de
concentration quasi-instantan. La sonde est fixe, lalimentation en gaz (alternativement N2 et
Air) est positionne en face de la membrane ( environ 1 cm). Lacquisition est dclenche
linstant t00 correspondant au changement de la nature du gaz ; le retard pur de la sonde, R1,
correspond au premier instant pour lequel la drive de la mesure de la sonde est diffrente de
0 : mesur 25C, R1 vaut 0,340,11 s (moyenne sur 23 valeurs).
Cette rponse un chelon N2Air en phase aqueuse 37C est prsente sur la
Figure 8. A linstant t00 la sonde est dplace de la concentration 0 la concentration 1 (la
concentration en oxygne dissous, x O 2 , est normalise entre 0 pour un systme ne contenant
pas doxygne, et 1 pour un systme satur par loxygne de lair la temprature et la
pression exprimentale). A linstant t01 la sonde ragit. A linstant t02 la rponse est modlise
par un premier ordre, de constante de temps S. Linstant t85 correspond la valeur de xS qui
vaut 85% de la valeur de lchelon. Le retard se compose donc du retard pur R1 (mesur
prcdemment) augment dun retard R2 rsultant de la non idalit entre lexprience et le
premier ordre. Linstant t01 est flottant et correspond mathmatiquement linstant tel que la
drive x t01+t x t01 scarte de la valeur nulle. Linstant t02 correspondrait au premier instant
t
tel que x t02+tx t02 0 dans lhypothse o la sonde suivrait un premier ordre parfait. On dfinit
t
ainsi le retard R2=t02-t01.

Le modle reprsentant la dynamique de la sonde est dfini par les deux paramtres S
et t02, calculs par identification paramtrique en minimisant la fonction
t 85
( x S x SM )
t 02 + R 2
dfinie pour t [ t 02 + R 2 , t 85 ] afin de reprsenter au mieux les expriences ; xS est la valeur

mesure par la sonde et xSM la valeur modle calcule par la fonction :
91
Matriel et Mthodes
dx SM ( t ) x O 2 x SM ( t )
=
, t [ t 02 , t 85 ] .
dt
S
(77)
Les valeurs de R2 et de S dpendent du sens dans lequel est effectu lchelon : le retard R2
est plus grand dans le sens N2air (R2N2air/R2airN2=1,5), alors que la constante de temps de
la sonde est plus petite dans le sens N2air (SN2air/SairN2=0,5). Puisque KLa est mesur
dans le sens N2air, seule cette dynamique est considre, soit 37C, R2=0,320,13 s et
S=0,800,16 s (moyenne sur 5 valeurs). La rponse de la sonde dpend de la temprature :
25C, R2=0,2 s et S=1,150,10 s.
Enfin, les mesures de R2 et S donnes prcdemment ont t effectues aprs avoir
rgnr la sonde dans une solution dammoniaque 14% (utilisation normale). La mme
mesure effectue avec une sonde polarise depuis 10 jours donne R2 4,5 fois plus grand et S
1,4 fois plus grand, 25C.
concentration relative
1
0,8
0,6
0,4
xS
xSM
xO2
0,2
t02+R2
0
0
t00
R1
t01
R2
t02
t85 2
Temps, s
Figure 8. Caractrisation de la rponse de la sonde Electrosense. Rponse un chelon dans le sens

N2Air en phase aqueuse 37C. xO2 chelon de concentration (signal dentre), xS rponse de la
sonde, xSM modle propos (Eq. 77).
II.3.3.2. Mise en uvre exprimentale de la roxygnation et analyse du signal
KLa est calcul partir de la modlisation dune exprience de roxygnation, ralise

en suivant la mesure dynamique de loxygne dissous au cours dun chelon de concentration
du gaz dalimentation o lair est inject la suite de lazote. On appelle courbe de
92
Matriel et Mthodes
roxygnation la courbe x = f ( t ) . Les expriences sont ralises dans des conditions

dagitation et daration rencontres en culture cellulaire, et (sauf spcification particulire)
T=37C et P=0,3 bar. Le fermenteur est dabord dgaz lazote jusqu' un niveau doxygne
dissous infrieur 0,5 % (mesur par la sonde Ingold). Ce dgazage a lieu une pression
dalimentation et un dbit en azote identiques la pression dalimentation et au dbit dair
utiliss ultrieurement pour roxygner le liquide. (Cette recommandation permet dune part
de travailler avec une aire interfaciale constante tout au long de lexprience, et dautre part
de saffranchir de la mise en rgime oscillatoire et relativement longue (10 s) du dbitmtre
massique lorsquil est soumis une variation de pression dalimentation.) Puis, le flux dazote
est remplac instantanment par le flux dair.
La sonde oxygne est place mi-hauteur de la phase disperse pour obtenir une
valeur moyenne de dO2 (Nocentini 90). Le positionnement de la sonde dans le racteur peut
devenir important si les bulles sont de lordre de grandeur de la cathode, ou si elles ont
tendance adhrer la membrane. Selon Linek et coll. (1987), le flux dispers doit arriver
tangentiellement la cathode (notre sonde est place dans le plan de la turbine mdiane) et la
sonde doit tre dirige vers le ciel (ce placement est communment employ chez DSM, mais
na pu tre pratiqu avec notre matriel).
La dynamique de la sonde par rapport la concentration rellement prsente dans le
liquide est modlise par une rponse du premier ordre (0) qui tient compte du retard global
R=R1+R2 :
dx S ( t ) x O 2 ( t t 02 ) x S ( t )
=
dt
S
(78)
avec pour condition t=t02 dans le cas dun chelon N2Air : xO2(0)=xS(t02)=0. Cependant il
est plus facile dexploiter les mesures en prenant un instant t0 flottant qui correspond
mathmatiquement linstant t tel que la drive
x S ( t + t ) x S ( t )
scarte de la valeur de
t
base (gnralement 0 pour un chelon N2Air normalis). On rsout alors Eq. 78 en

effectuant le changement de variable x O 2 ( t t 02 ) = x O 2 ( t ) pour obtenir :
dx S ( t ) x O 2 ( t ) x S ( t )
=
dt
S
(79)
avec pour condition initiale t=0 dans le cas dun chelon N2Air : xO2(0)=xS(0)=0. Pour
tracer la rponse relle de la sonde par rapport xO2 il suffit aprs calcul de dcaler la courbe
xS de +t02.
93
Matriel et Mthodes
La Figure 9 prsente la mesure brute dune roxygnation, c'est--dire la mesure

dynamique de la sonde, xS. Contrairement aux expriences permettant la mesure de la
constante de temps de la sonde, le signal dentre nest plus ici un chelon de concentration,
mais la fonction reprsente par la courbe xO2 dcrivant lenrichissement de la phase liquide
en oxygne (Eq. 8). t95 correspondant linstant pour lequel xS atteint 95% de la saturation,
xSsat qui est une moyenne sur les valeurs de lintervalle t [200 ;300s], qui permet, avec la
valeur minimum xS0, la normalisation du signal.
100
x Ssat
80
xS
60
40
20
0
0
t0 50
t95 100
150
200
250
300
350
Temps, s
Figure 9. Roxygnation. Mesure de la sonde xS, valeur de saturation xSsat, localisation des instants
initial t0 et final t95. Eau pure, VL=10 L, e=2350 W.m-3 (600 rpm), Us=0,42 cm.s-1.
II.3.3.3. Identification paramtrique de KLa
Le calcul de la valeur de KLa est obtenu par identification paramtrique. Le principe

consiste dterminer KLa par minimisation de lcart entre la courbe thorique calcule
partir du modle et la courbe exprimentale. La courbe thorique, qui reprsente lvolution
du modle, est dcrite partir de variables (la concentration dans le liquide, dans le gaz, la
valeur mesure par la sonde), de constantes (le volume liquide, le flux daration, la
solubilit de loxygne) et des paramtres (KLa). Afin de quantifier lcart entre la
courbe exprimentale et le modle, on dfinit des erreurs relatives o N reprsente le nombre
de points exprimentaux, ceci afin de pouvoir comparer les expriences entre elles car toutes
les roxygnations ne contiennent pas le mme nombre de points :
94
Matriel et Mthodes
Erabs =
abs( x S x mod )
n
1 ( x S x mod ) 2
Er =
N n
xS
(80)
(81)
avec en chaque point n[1 ; N], xS la mesure de la sonde, et xmod la valeur issue du modle.
Erabs donne autant de poids chaque point. Er permet de donner plus dimportance la
rponse initiale qui caractrise elle seule la vitesse de transfert (Gibilaro et coll., 1985). Sauf
spcification particulire, lerreur Er est utilise. La roxygnation est normalise et le modle
est ajust entre linstant initial t=0, et linstant t95, ceci afin deffectuer loptimisation sur la
roxygnation elle mme et non sur la dispersion des points autour de la valeur de saturation.
Nous noterons Erm lerreur caractrisant lcart entre la courbe thorique issue du modle m
et la courbe exprimentale, par exemple ErMP pour le modle MP.
II.3.3.4. Dtermination de KLa en prsence de cellules ltat stationnaire et en milieu de

culture pur en microorganisme
La mesure de KLa en milieu de culture pur en microorganisme est ralise

conscutivement la mesure de KLa en prsence de cellules ltat stationnaire. La prsence
de quelques cellules dans le surnageant peut ncessiter la prise en compte dune faible
respiration.
Afin de travailler avec le mme volume total dans les deux situations, un soutirage du
mot est effectu avant la caractrisation de ltat stationnaire, et conserv pour centrifugation
pour la caractrisation du surnageant (le volume cellulaire humide 80 gMS/L reprsente 1/5
du volume total du mot).
II.3.3.5. Dtermination de KLa en conditions de production de microbulles
Les microbulles sont produites par lutilisation dtourne du Flotateste de Reali.

Cet appareil permet de saturer un volume deau par du gaz une pression pouvant atteindre 6
bars. La libration du liquide satur pression atmosphrique permet la nuclation spontane
de microbulles. Pour la production de microbulles dazote, 4 L deau sont introduits dans la
bombonne de saturation puis dgazs lazote pendant 5 min. La bombonne est ferme et le
bullage dazote prolong pendant 20 min sous 6 bars ; lalimentation en azote pendant toute
lexprience garantit une pression constante du liquide satur. La bombonne est directement
relie la purge du fermenteur par un tuyau hydrophile (pour viter la coalescence sur les
95
Matriel et Mthodes
parois du tuyau) ; les microbulles arrivent donc sous la turbine infrieure. Deux fermenteurs
ont t utiliss : un fermenteur CHEMAP (Mnnedorf, Suisse ; VL=25 L, dT=26 cm) et un
fermenteur SETRIC (Toulouse, France ; VL=2 L, dT=12 cm). La production de microbulles de
CO2 seffectue de manire identique en remplaant lazote par du CO2.
La mesure de KLa par la mthode dynamique se droule comme suit. Une pompe
permet de maintenir constant le niveau de la phase disperse du racteur pendant
lintroduction des microbulles et des 4 L de liquide porteur. En fin de cycle de dgazage du
racteur lazote, les microbulles sont admises un dbit rgul par louverture de la vanne
de purge ; la pompe de rgulation de niveau est mise en marche simultanment. La
permutation entre le flux dazote et le flux dair dans le diffuseur est initie lorsque les
microbulles semblent tre rparties de manire homogne dans le racteur (les microbulles
donnent un aspect laiteux au liquide), c'est--dire entre 5 s et 20 s aprs ladmission des
premires microbulles. Lexprience prend fin lorsque les 4 L de liquide satur ont t
injects dans le racteur.
Lexprience de roxygnation en prsence de microbulles est compare une
exprience tmoin ralise dans les mmes conditions, mais avec une pression de 2 bar dans
la bombonne, ce qui permet dalimenter le racteur par un flux QL de liquide porteur, sans
production de microbulle.
II.4.
Dtermination de paramtres mcaniques et physico-chimiques
Sont prsentes les dfinitions et les mthodes de dtermination des paramtres

suivants, dintrt pour ltude du transfert doxygne: la rtention gazeuse, la vitesse critique
dentranement de surface, les mesures de rhologie et de tension de surface.
a) Rtention gazeuse
La rtention gazeuse ( hold-up ) est calcule par

V
= VT VL = G
VL
VL
(82)
o VT est le volume total de la dispersion (Cette mesure est prcise 0,1 L pour
0<VG0,5 L, et 0,2 L pour VG>0,5 L), VL le volume de liquide, et VG le volume de gaz
dispers.
96
Matriel et Mthodes
b) Vitesse critique dentranement de surface
NE est la vitesse dagitation partir de laquelle a lieu lentranement de surface. Elle

est dfinie comme la vitesse dagitation partir de laquelle on observe une baisse relative de
la puissance consomme relative, Pcr, par rapport la puissance consomme relative de
rfrence, Pcrref, cest dire mesure en labsence de tout entranement de surface (Veljkovi
et coll., 1991). Pcr est la puissance lectrique consomme par le moteur dagitation, exprime
en pourcentage de la puissance maximale (746 W).
On observe une autre vitesse dagitation critique, voisine de 400 rpm pour VL=10 L,
partir de laquelle la premire bulle est entrane dans le liquide par la surface (Veljkovi et
coll., 1991), mais la dfinition macroscopique de NE base sur la chute de puissance est plus
approprie pour notre tude.
Pcrref est obtenue en remplissant le racteur avec 18 L de milieu : pour les vitesses
dagitation considres (0<N<1500 rpm), en condition non-are, il est vrifi quaucune
bulle nest entrane travers la surface.
La vitesse critique dentranement est mesure pour 10 L de milieu. Lexprience est
ralise pression atmosphrique, 37C, en milieu coalescent (eau du robinet) et non
coalescent (Na2SO3, 10 g.L-1). Seules les deux turbines places 5 et 21 cm du fond sont
utilises. En condition daration 600 NL.h-1 sont dbits par le diffuseur. A vitesse
dagitation et aration fixes la puissance consomme par le moteur ainsi que le volume total
sont relevs une fois le systme stabilis.
c) Rhologie
Les mesures sont ralises laide dun rhomtre coaxial (Haake vt550, Thermo
Fisher Scientific, Waltham, USA), thermostat 37C. La mesure est ralise avec une rampe
de gradient de vitesse croissant puis dcroissant entre 500 et 1000 s-1 ; tant maintenu
une valeur fixe pendant 30 s avant deffectuer la mesure.
Les mesures de viscosit apparente et de thermodpendance sont ralises par un
rhomtre coaxial Rheomat 15T, mieux adapt que le Haake vt550 aux faibles valeurs de
viscosit mesurer. Ltalonnage du rhomtre est ralis leau distille : la courbe mesure
est compare celle de la littrature : eau=0,00121e16354/RT (www.NIST) et la diffrence
mesure (0,09 cpT) sert corriger les valeurs obtenues sur les suspensions de levures.
97
Matriel et Mthodes
d) Tension de surface
La tension de surface entre le mot et lair, ou entre le surnageant et lair, est mesur
par un tensiomtre automatique (Prolabo) par la mthode statique lame de platine.
II.5. Statistiques et calcul derreurs

Les moyennes sur une srie de valeurs sont des moyennes arithmtiques ; les carts
correspondants sont des carts types ; les erreurs correspondantes (%) sont le rapport de
lcart type sur la moyenne.
Les courbes de tendance de type puissance sont calcules en minimisant par la
mthode des moindres carrs la fonction suivante :
R2 = 1
a
b
a = ( y i y i ) 2
o
b = yi2
( y i )2
n
et y = cx d est la courbe modle, c et d tant des constantes.
98
III. MODELISATIONS
ET ETUDES EXPERIMENTALES
99
Modlisations et Etudes Exprimentales
Lutilisation de temps caractristiques (Tableau 9) permet de comparer sur une chelle

de temps les phnomnes physiques et biologiques qui interagissent avec le transfert
d'oxygne. Pour ce faire, les temps caractristiques des diffrents phnomnes sont donns de
manire relative par rapport au temps de diffusion d , lequel dpend du paramtre central du
transfert doxygne : KLa (Figure 10).
Tableau 9. Temps caractristiques en culture cellulaire.
Temps caractristique
d temps de diffusion
Dfinition
D
k
2
L
ou
Rfrence
Tsao (1970)
1
KL a
m temps de mlange de la
phase liquide
G temps de sjour du gaz en
phase liquide
Temps ncessaire pour atteindre 95%

dhomognit en rponse un chelon
S constante de temps de la
sonde
r temps de raction
Temps ncessaire pour atteindre 63% du

signal en rponse un chelon
B temps biologique
Fraction du temps de doublement,

choisissons 1/10e
G =
r =
B =
vant Riet (1979)
VG
QG
Tsao (1970)
x O2
q O2
Tsao (1970)
1 ln 2
10
Le temps de diffusion d = D / k 2L correspond linverse du paramtre s du modle de Danckwerts

(1951) (Eq. 16) et reflte le temps que passe un lment liquide linterface gaz-liquide. Mais en
culture cellulaire la dtermination des paramtres D et kL tant dlicate, il est plus facile dutiliser la
dfinition d =1/KLa. La dfinition du temps de raction r (Tsao et coll., 1970) correspond au temps
que mettent les microorganismes consommer tout loxygne dissous disponible.
phase liquide homogne
d/10
distribution ressre
des temps de sjour de bulles
sonde apte la mthode dynamique
10d
phase liquide htrogne
distribution tendue
sonde inapte la mthode dynamique
absorption acclre par qO2
absorption physique
modifications molculaires
modifications macroscopiques
m
G
S
r
B
Figure 10. Temps caractristiques par rapport au temps de diffusion. Les temps caractristiques
dfinis dans le Tableau 9 sont compars sur une chelle logarithmique commune, exprime en
fonction du temps de diffusion d.
100
Aux vues des ces considrations, trois axes de recherche sont proposs :
- la modlisation du transfert doxygne pour la dtermination de KLa. Les modles
dvelopps seront adapts aux diffrentes dynamiques mises en jeu, et aux contraintes
exprimentales choisies.
- la quantification du transfert en milieux minraux de rfrence, afin de pouvoir comparer la
capacit de transfert du racteur la littrature et de crer un cadre de rfrence pour la suite
de ltude.
- la quantification du transfert en condition de culture microbienne; elle permettra dintgrer
lensemble des rsultats prliminaires pour tudier les interactions entre les phnomnes
physiques et biologiques.
III.1. Modlisation du transfert doxygne pour la dtermination de KLa

L'analyse des temps caractristiques du bioracteur (Figure 10) soutient llaboration
des modles et le travail exprimental prsent dans ce chapitre en signalant les points forts
suivants :
- Selon la valeur du temps de mlange m par rapport au temps de diffusion d, la phase
liquide peut tre homogne (md/10) ou htrogne (m10d) (la zone intermdiaire sur la
Figure 10 correspondant en thorie une situation intermdiaire).
Conformment la littrature (Chapman et coll., 1982), il est adopt dans les modles
que la phase liquide est homogne.
- Pour la phase gazeuse, plus G est lev, plus il est ncessaire de considrer la dynamique du
gaz dans les thories de transfert pour pouvoir dterminer KLa avec prcision (Dang et coll.,
1977).
Il est propos dans les modles de dcrire lpuisement des bulles pendant leur
passage dans le racteur en considrant la phase gazeuse homogne (correspondant aux
faibles valeurs de G), ou htrogne en proposant un coulement piston (correspondant aux
fortes valeurs de G).
- Lorsque S<10d, la dynamique de la sonde peut tre ignore dans le modle de transfert
(Poughon et coll., 2003). Mais les valeurs de S et D pouvant tre proches, la dynamique de
la sonde est prise en compte dans les modles.
101
- Par rapport une ventuelle acclration du transfert doxygne par la consommation

doxygne, si r d , alors labsorption est purement physique, par contre si r est proche de
d alors labsorption peut tre influence par la consommation de loxygne (Tsao, 1970).
Bien que jamais observ en racteur agit, lventualit dune telle acclration sera
considre dans ltude.
- Les temps biologiques macroscopiques (modification du milieu, croissance cellulaire)
peuvent interagir avec la dtermination de KLa et seront pris en compte dans l'analyse.
Les modles sont bass sur le bilan matire sur loxygne en phases liquide et
gazeuses sur des systmes du racteur. Les hypothses suivantes sont utilises pour tous les
modles :
H 1:
La phase liquide est homogne en composition.
H2:
La concentration en oxygne dans la phase liquide est en quilibre avec la concentration en
oxygne dans la phase gazeuse en contact selon la loi de Henry :
x O 2 = RTH yO 2
*
(83)
o x O 2 et yO2 sont les concentrations molaires en oxygne en phase liquide et gazeuse,

respectivement, et la constante de Henry H dpend de la temprature (Kavanaugh and
Trussell, 1980) et de la composition du liquide (Weisenberger and Schumpe, 1996). Le calcul
des solubilits de loxygne dans les milieux utiliss est donn annexe VI.1.2.
Les modles mathmatiques reprsentent le transfert doxygne dans le racteur en
rgime transitoire et en rgime permanent, mais pour tre utiliss en accord avec des
mthodes exprimentales spcifiques, des hypothses et des conditions aux limites spcifiques
aux mthodes exprimentales sont ncessaires. Nous distinguons la mthode de roxygnation
(dynamique), et la mthode du bilan gazeux (quasi-statique).
III.1.1. Modle homogne pour la phase gazeuse (MH)
Dans ce modle lcoulement de la phase gazeuse est dfini par lhypothse suivante :
H3:
La composition de la phase gazeuse disperse est homogne.
Pour lutilisation du modle MH avec la mthode de roxygnation utilisant lchelon

gazeux N2Air, il est suppos :
H4
La valeur de KLa est constante durant lexprience.
102

H5
Le transfert interfacial dazote peut tre nglig (Linek et coll., 1981) et le flux gazeux dispers
par le diffuseur lentre du racteur gale celui de la sortie (Qd=Qoff ).
A partir de ces hypothses, le bilan matire sur

off
Q , y2
VL, VG
x, y
Phase
disperse
Qd, y1
loxygne de la phase gazeuse contenue dans la phase

disperse scrit (en mol.s-1) :
dn
= (n& 1 n& 2 ) K L aVL ( x * x )
dt
avec n& 1 le flux molaire en entre de racteur, n& 2 le flux
molaire en sortie de phase disperse, soit, en utilisant
lhypothse que le gaz circulant dans le fermenteur est parfait :

V
x
dy Q d
=
( y1 y) K L a L RTH y
HP
VG
dt VG
o Qd est le flux dispers par le diffuseur, VG le volume de gaz dispers, P la pression totale
dans le racteur. Soit, en utilisant des variables adimensionnelles de concentration :
V
dy Q d
=
(1 y) K L a L RTH (y x )
VG
dt VG
avec x =
x
x
Air
(84)
y
x
, y = , et y1 la concentration en oxygne dans lair (T et P
HPy1
y1
exprimentales) ; ainsi lquilibre en condition anarobie x = y = 0 , et en prsence dair
x = y = 1.
Le bilan matire sur loxygne dissous dans la phase liquide (en mol.L-1.s-1) scrit :
dx
= K La ( x * x )
dt
soit sous forme adimensionnelle :
dx
= K La ( y x )
dt
(85)
Avec les mmes notations, lquation de la rponse dynamique de la sonde (Eq. 79) devient :
dx S x x S
=
dt
S
(86)
La rsolution du systme dquations diffrentielles {Eq. 84, Eq. 85, Eq. 86} est effectue par
une mthode de Runge-Kutta explicite (Programmation sur MATLAB en Annexe VI.6.1).
103
III.1.2. Modle piston pour la phase gazeuse (MP)
Dans ce modle lcoulement de la phase gazeuse est dfini par lhypothse suivante :
H6:
Lcoulement de la phase gazeuse disperse est de type piston.
Le modle dcoulement piston a t prsent dans la littrature (Shioya et Dunn,

1979 ; Chandrasekharan et Calderbank, 1980). Il est justifi pour notre configuration du fait
de la prsence de trois turbines, du ratio important entre la hauteur de liquide dispers et le
diamtre du racteur (Z/dT est compris entre 1,3 et 2,4 en culture cellulaire, et pour VL=13 L,
Z/dT=2) (vant Riet, 1979), et du fait de lappauvrissement prononc du gaz lors de son
passage dans le racteur (Poughon et coll., 2003).
Pour lutilisation du modle MP avec la mthode de roxygnation utilisant lchelon
gazeux N2Air, les hypothses H 4 et H 5 sont conserves, et il est suppos :
H7:
Les variables locales dVL et dVG reprsentant respectivement le volume de liquide et le
volume de gaz sur une hauteur dz de phase disperse, sont constantes sur la hauteur de la
dispersion gazeuse, et dVL/dVG=VL/VG.
A partir de ces hypothses, le bilan sur la phase gazeuse sur une portion de hauteur de
racteur dpaisseur dz, scrit, en utilisant les variables adimensionnelles :
Q
y
V L
= d y (K L a )z
RTH (y x )
t
VG
VG
Soit la coordonne adimensionnelle le long de laxe du racteur : z = z / Z , avec Z la
hauteur totale de la dispersion (la hauteur relative 0 correspond au fond du racteur, et la
hauteur relative 1 la hauteur totale de la dispersion), on obtient :
Q y
y
V
K L a L RTH (y x )
= d
VG z
t
VG
(87)
Le liquide tant suppos homogne, similairement Eq. 85, le bilan sur la phase liquide
scrit :
1
dx
= K L a ( y x )dz
dt
0
(88)
Lquation de la rponse dynamique de la sonde reste inchange (Eq. 86). Le modle

dcoulement piston du gaz (modle MP) est donc dfini par le systme suivant :
104
Q y
y
V
= d
K L a L RTH (y x )
t
VG z
VG
1
dx
= K L a ( y x )dz
dt
0
dx S x x S
=
dt
S
(Eq. 89)
Conditions initiales :
x (0) = y(0, z ) = x S (0) = 0 , car le systme est pralablement ventil
par un flux dazote de telle sorte que la concentration initiale en
oxygne est nulle.
Conditions aux limites :
y( t ,0) = 1 , car le systme est aliment en air par le bas.
Il nexiste pas pour ce systme de rsolution littrale. Une approximation est propose
par Chandrasekharan et Calderbank (1980), mais savre inutilisable dans nos travaux. Une
rsolution numrique du systme est alors propose par une mthode utilisant une
discrtisation de loprateur diffrentiel par une approximation dEuler (programme
MATLAB en AnnexeVI.6.2).
III.1.3. Comparaison des modles homogne et piston en rgime transitoire
Lidentification paramtrique ralise avec les modles MP et MH considre comme

variables du problme la concentration en oxygne dans le liquide x , la concentration en
oxygne dans le gaz y , et la mesure de la sonde x S . Les constantes sont VL, VG, Qd, RTH et
S. Le seul paramtre est KLa.
Les modles de courbes de roxygnation montrent que pour le modle MH (Figure
11A) le temps permettant datteindre la saturation (ou de passer de x = 0 x = 0,95 ) est une
fonction dcroissante de KLa. Pour le modle MP (Figure 11B), KLa plus lev la saturation
peut tre atteinte plus tardivement. Le phnomne est surtout visible partir de KLa=1 s-1.
105
Figure 11. Influence de la valeur de KLa sur la roxygnation modlise par le modle MH (A) et par
le modle MP (B). KLa varie de 0,05 s-1 10 s-1. Eau pure, VL=10 L, VG=1 L, Us=0,422 cm.s-1.
La Figure 12 prsente le profil des concentrations relatives en oxygne le long de laxe

vertical du racteur en phases gaz ( y) et liquide ( x ). Le potentiel de transfert correspondant
est gale y x . Il existe en dbut de roxygnation une hauteur relative critique zcrit,
fonction croissante du temps et telle que zcrit=0 t=0, laquelle les bulles atteignent
lquilibre avec le liquide ( y x = 0 ). Dans la zone situe entre zcrit et le haut de la dispersion,
le liquide est plus concentr que le gaz ( y x < 0 ), donnant lieu un transfert inverse
doxygne du liquide vers le gaz. Le phnomne est d aux hypothses dcoulement du
modle MP, c'est--dire lpuisement des bulles dans un liquide toujours homogne en
composition et tel que y(0, z ) = 0 . Ainsi les bulles qui atteignent lquilibre avec le liquide
la hauteur z = zcrit , continuent leur ascension et atteignent la hauteur z=zcrit+dz ; entre temps
les bulles frachement entres dans le racteur ont enrichi la phase liquide, homogne. Les
bulles situes la hauteur z = zcrit + dz ne sont donc plus en quilibre avec le liquide, mais
sont moins concentres. Le flux de transfert inverse est dautant plus important que KLa est
grand (le potentiel de transfert ngatif est plus important sur la Figure 12C que sur la Figure
12A), et le phnomne est dautant plus prolong dans le temps que KLa est grand ( t=12 s le
transfert inverse na plus lieu pour KLa=0,1 s-1 (Figure 12B) alors quil est effectif pour
KLa=1 s-1 (Figure 12D)). A faible valeur de KLa le transfert inverse est donc ngligeable
(jusqu' KLa=0,4 s-1). A fort KLa le transfert impose lpuisement du gaz trs tt dans le bas
du racteur et la majorit du racteur fonctionne donc en transfert inverse, do une
106
roxygnation ralentie et le croisement des courbes de roxygnation valeurs croissantes de

KLa (Figure 11B). Ce point na pas t soulev par les auteurs proposant le modle piston
dcoulement du gaz, sans doute parce que la gamme des fortes valeurs de KLa na pas t
tudie.
Ce transfert inverse est rapprocher de la dilution des bulles dair par lazote dans le
modle MH en dbut de roxygnation car les deux phnomnes limitent la vitesse de
transfert de loxygne. Dans le modle MH lintensit de cette limitation dpend de la
rtention gazeuse et du flux daration ; dans le modle MP elle dpend en plus de la valeur
de KLa.
Figure 12. Dtection de potentiel de transfert ngatif dans le modle MP. Profils instantans de
concentration le long de la hauteur relative de la dispersion aux instants t=2 s (figures A et C) et t=12 s
(figures C et D) aprs le dbut de la roxygnation. x , y : concentrations normalises dans le liquide
et dans le gaz, respectivement. VL=10 L (eau pure), VG=1 L, Us=0,422 cm.s-1, KLa=0,1 s-1 (figures A et
B), et KLa=1 s-1 (figures C et D).
107
La ralit de lcoulement gazeux dans le racteur est sans doute plus complexe : on
peut supposer lhtrognit de la phase liquide et lexistence dune zone liquide moins
concentre en oxygne en haut du racteur ce qui permettrait de conserver un potentiel de
transfert positif. Dans le cadre de ce travail, limitons la modlisation des phnomnes
physiques au sein du bioracteur aux modles homogne et piston, les plus rpandus dans la
littrature.
III.1.4. Modles MH et MP utiliss en rgime quasi-stationnaire
Ces modles sont utiliss en conditions de culture avec la mthode du bilan gazeux
(BG), et en prsence de consommation doxygne par le sulfite avec la mthode BG+OS.
Lhypothse suivante est ajoute :
H 8.
Le systme dfini par le ciel gazeux est homogne en composition.
En condition de culture cellulaire, les hypothses suivantes sont ajoutes :

H 9.
Les variations de la composition du milieu en cours de culture ninfluencent pas la valeur de la
constante de Henry.
H 10 : Le volume liquide vers lequel le gaz transfert est VL-c=VL-Vc : la phase biotique (volume Vc des
cellules humides) est distingue de la phase abiotique qui lentoure (volume VL-c du milieu liquide)
(Monbouquette, 1987).
La fraction deau des cellules est suppose constante et gale 62% pour E. coli
mesure dtermine par thermogravimtrie daprs Uribelarrea et coll. (1985) et 60% pour
S. cerevisiae (Aldiguier, 2006). Le volume des cellules est calcul ainsi :
Vc =
XVL
(1 0,62) c
(90)
avec pour densit des cellules humides c=1030 g.L-1 (Aiba et coll., 1979). Lhypothse H 10
ne modifie pas la dfinition de la concentration cellulaire, donne par litre de volume liquide
total VL (en gMS.L-1).
En sappuyant sur ces hypothses, KT est calcul partir dun bilan matire sur
loxygne gazeux dans le systme dfini par le racteur :
KT =
VL c x *O 2 x O 2
d(Vgaz yout
O 2)
Q d y inO 2 Qout y out
O2
dt
(91)
o Vgaz est le volume total de gaz dans le racteur, Qout le flux gazeux sortant du racteur,
calcul partir du flux gazeux entrant par le diffuseur Qd par un bilan matire sur lazote :
108
out
d(Vgaz . yout
in
N 2) 1
.
= Q d yN 2
yout
dt
N2
(92)
o yinN 2 est la concentration en azote (mol.m-3) dans le flux entrant.

xO2 et yout
O 2 sont directement lis aux mesures effectues en ligne de loxygne dissous (dO2),
et du pourcentage doxygne mesur dans le gaz en sortie du racteur (O2out) :
x O 2 = x*O 2 . dO 2 / 100
(93)
P.O2out / 100
RT
(94)
y out
O2 =
o P est la pression absolue dans le racteur.

Si lhypothse H 3 est utilise (la phase gazeuse disperse est homogne en
composition), la diffrence de potentiel de transfert (x *O 2 x O 2 ) dans Eq. 91 scrit :
*
( x *O 2 x O 2 ) = ( y off
O 2 y O 2 ) RTH
(95)
o y*O 2 est en quilibre avec xO2 selon Eq. 83, et yoff

O 2 est la concentration en oxygne dans le
gaz en sortie de la phase disperse, calcule partir de yout
O 2 en tenant compte de lhypothse
H 8.
Si la place de lhypothse H 3, lhypothse H 6 est utilise (la phase gazeuse
scoule de manire piston), la diffrence de potentiel de transfert (x *O 2 x O 2 ) dansEq. 91 est
calcule par une moyenne logarithmique (calcul dtaill dans lannexe VI.5) :
y inO 2 y off
O2
( x *O 2 x O 2 ) ln =
y inO 2 y *O 2
ln off
*
y O2 y O2
(96)
RTH
A partir des mmes hypothses, un bilan matire sur loxygne, ralis sur lensemble
du racteur, est utilis pour calculer la consommation volumique doxygne qO2 (par volume
de suspension) :
q O 2 .VL = Q d y
in
O2
Q y
out
out
O2
d (Vgas . yout
)
O2
dt
d (VL . x O 2)
dt
(97)
La consommation volumique de CO2, qCO2, est calcule de la mme manire, mais par un
bilan matire sur le CO2 :
q CO 2 .VL = Q d y
in
CO 2
Q y
out
out
CO 2
d (Vgas . yout
CO 2 )
dt
d (VL . x CO 2)
dt
(98)
Le quotient respiratoire QR vaut QR=qCO2/qO2.

109
Lorsque la mthode BG+OS est utilise, de part l'oxydation du sulfite en sulfate

pendant l'exprience, la solubilit de loxygne considre est la moyenne des valeurs
calcules pour (2Na++SO32-) et pour (2Na++SO42-) par l'analyse de Weisenberger et Schumpe
(1996) (annexeVI.1.2). Les rapports de solubilit avec leau pure mme temprature sont,
pour 10, 25, 50 g.L-1 de Na2SO3 ajouts, respectivement 0,938 0,851 et 0,725.
III.1.5. Modles considrant lentranement de surface
Pour N>NE, le ciel gazeux est entran vers le liquide : le flux gazeux devient
bidirectionnel (flux Qd et Qe sur la Figure 3).
Le phnomne dentranement de surface en condition daration simultane par le
diffuseur a t peu tudi dans la littrature et est modlis de manire incomplte ; il dpend
de nombreux paramtres dont les principaux sont la vitesse dagitation, le flux daration, la
hauteur de liquide entre la surface libre et la turbine, et la composition du milieu. La
caractrisation du flux entran est mesur dans la littrature par des moyens relativement
complexes mettant en uvre deux gaz (le premier pour lalimentation du diffuseur, lautre
pour lalimentation du ciel), la capture et lanalyse de la composition des bulles, ainsi quun
rgime permanent de transfert, mais les valeurs de KLa correspondantes ne sont jamais
calcules.
Lobjectif du travail prsent dans ce chapitre est de dfinir un paramtre KLa en
condition dentranement de surface qui soit comparable au paramtre KLa dfini dans la
littrature en labsence dentranement de surface, et dessayer de calculer ce nouveau
paramtre KLa dfini en condition dentranement de surface par une mthode plus simple que
celles de la littrature. Une mthode dynamique la sonde oxygne est teste, qui pourrait
permettre galement de quantifier laration de surface et daboutir un schma complet du
transfert de gaz forte puissance dissipe.
III.1.5.1. Dveloppement des modles
La littrature sur le transfert doxygne en prsence dentranement de surface

considre toujours lhomognit totale des gaz, et en particulier lhomognit entre le flux
gazeux Qd en provenance du diffuseur et le flux gazeux Qe entran partir du ciel gazeux
(Chapman et coll., 1980 ; Veljkovi et coll., 1991). Dans notre tude ce modle
dentranement (ME) est nomm ME1, mais quatre autres modles dentranement de surface
sont tests (ME2 ME5), correspondants plusieurs hypothses possibles dcoulement des
gaz.
110
Il est observ dans les solutions non-coalescentes salines une rtention gazeuse
constitue de microbulles. Cette rtention gazeuse peut tre considre comme permanente et
sa prise en compte dans les modles tests pourrait permettre daccder la valeur relle de
KLa (Vasconcelos et Alves, 1991). La prsence dune rtention gazeuse permanente est donc
considre en complment du modle MP (modle MP+mb ; labrviation mb tient pour
microbulle), et en complment du modle ME5 (modle ME5+mb).
Les modles ME sont bass sur les modles MH et MP, mais en prenant en compte
plusieurs populations de bulles. Le bilan matire sur l'oxygne est donc effectu sur plusieurs
systmes : le gaz dispers en provenance du diffuseur, le gaz dispers entran depuis le ciel,
le gaz dans le ciel, le gaz des microbulles.
A ce stade, les hypothses suivantes sont ajoutes :
H 11 c : Il y a coalescence entre les bulles du diffuseur et les bulles entranes. Un seul systme est
donc considr pour le gaz dispers.
H 11 nc: Il y a non-coalescence entre les bulles du diffuseur et les bulles entranes. Le bilan matire
est donc effectu sur les deux systmes sparment et deux paramtres KLa sont dfinis :
KLad pour le transfert doxygne entre les bulles issues du diffuseur et la phase liquide, et KLae
pour le transfert doxygne entre les bulles formes par entranement de surface et la phase
liquide. Le systme contenant le gaz entran est homogne de composition.
H 12 : Le transfert par diffusion entre la surface libre du liquide et le liquide est nglig devant le
transfert entre les bulles et le liquide (Chapman et coll., 1980).
H 13 : Le ciel gazeux est homogne en composition.
Enfin, le volume de gaz dispers VG (mesur exprimentalement) est la somme des

volumes de gaz (estims numriquement) en provenance du diffuseur VGd, entran VGe, et
des microbulles VGmb :
VG=VGd+VGe+VGmb
Le volume du ciel gazeux vaut :
VC=VT-VL-VG
o VT est le volume total du racteur, et VL le volume de liquide.
La Figure 13 schmatise les modles dvelopps avec leurs paramtres (Qd et VG sont
des constantes connues). Lintrt des modles ME1 ME4 rside dans la prise en compte du
flux entran Qe, unique paramtre utilis dans la littrature pour caractriser laration de
surface en prsence daration simultane par le diffuseur.
111
ME1
ME2
Qe
Qe
KLa
VGd V
Ge
KLae
VG
ME3
Qe
VGe
KLae
KLad
KLad
VGS
Qd
Qd
Qd
ME4
Qe
KLa
VG
Qd
ME5
ME5+mb
KLae
KLae
KLad
KLamb
Vmb
KLad
VGd
VG
Qd
Qd
Figure 13. Schmatisation des modles dentranement de surface en prsence daration par le
diffuseur.
Les quations propres aux modles ME sont dveloppes ci-dessous.

Modle ME1
Le modle ME1 est bas sur le modle MH et les hypothses H 11 c et H 12, ainsi le
bilan sur loxygne dans le systme dfini par le gaz dispers (homogne) scrit :
V
dy
1
Q d + Q e .y C (Q d + Q e )y K L a L RTH (y x )
=
dt VG
VG
Le bilan sur loxygne dans le systme dfini par le ciel gazeux (homogne) scrit :
dy C
1
(Q d + Q e )(. y y C )
=
dt
VC
o y C est la concentration normalise de loxygne prsent dans le gaz du ciel.

Modle ME2
Le modle ME2 est bas sur le modle MH et les hypothses H 11 nc et H 12.

Le bilan matire sur loxygne contenu dans le systme dfini par le ciel gazeux
scrit :
dy C
1
= (Q d ( y z =1 y C ) Q e (y e y C ))
VC
dt
(99)
o y z =1 = y car le gaz dispers est homogne.

Le bilan matire sur loxygne contenu dans le systme dfini par le gaz dispers issu
de lentranement de surface scrit :
112
dy e
1
= (Q e ( y C y e ) K L a e V L RTH ( y e x ) )
dt
VGe
(100)
o y e est la concentration normalise de loxygne prsent dans le gaz entran.

Le bilan matire sur loxygne contenu dans le systme dfini par le gaz dispers issu
du diffuseur est la mme que pour le modle MH (Eq. 84) mais crit avec le paramtre KLad
au lieu de KLa.
Le bilan matire sur loxygne contenu dans la phase liquide scrit :
dx
= K La d ( yd x ) + K L a e ( ye x ) .
dt
Modle ME3
Le modle ME3 est bas sur le modle MP et les hypothses H 11 nc et H 12, ainsi le
bilan matire sur loxygne dans le systme dfini par le gaz dispers issu du diffuseur
(Eq. 87) devient :
yd
Q y d
=
K L a d V L RTH (yd x )
t
VGd z
V Gd
(101)
Et le bilan sur loxygne contenu dans la phase liquide (Eq. 88) scrit maintenant :
1
dx
= K L a d ( y d x )dz + K L a e ( y e x )
dt
0
Les bilans matire sur loxygne contenu dans le ciel gazeux et dans le gaz entran
sont dcrits par les quations Eq. 99 et Eq. 100, respectivement.
Modle ME4.
Le modle ME4 est bas sur le modle MP et les hypothses H 11 c et H 12.

Dans le modle ME4 le gaz du diffuseur scoule de
Qy+d(Qy)
yCdQC
manire piston et est dilu en chaque point de sa remont par

une fraction du gaz entran, la concentration du ciel. Le gaz
dVG
entran se rparti de manire homogne sur lensemble de la

hauteur du racteur de telle sorte que le flux de gaz scrit :
Qy
Q(z) = Qd + Q e .z
Le bilan matire sur loxygne dans un lment de
volume dVG de gaz scrit :

y
(Qy) y C dQ e
V L
=
+
KL a
RTH (y x )
t
dVG
VG
VG
113
En posant : VG = VG z et Q(z) = Qd + Q e .i.z , on obtient la forme suivante

intgrable numriquement :
n +1
n
(Q d + Q e .i.z )yin +1 (Q d + Q e .(i 1).z )yin+11 Q e
yi yi
V
+
=
y C K L a L RTH yin +1 x n +1
t
VG z
VG
VG
t
qui est ensuite traite comme le systme Eq. 136 avec a 2 (i) =
(Q d + Q e .i.z ) .
VG z
Le bilan sur loxygne contenu dans le systme dfini par le ciel scrit :
dy C
1
= (Q z =1 .y z =1 y C (Q d + Q e ))
dt
VC
Le bilan sur loxygne en phase liquide est le mme que pour le modle piston (Eq.
88).
Modle ME5
Le modle ME5 est bas sur le modle MP et lhypothse H 11 nc, mais contrairement
aux autres modles, le flux entran nest pas spcifi : KLae modlise un transfert entre le
liquide et le gaz du ciel par la surface libre ou par des bulles issues du ciel et de composition
identique au du gaz du ciel. Lhypothse H 12 nest donc pas utilise ici car le modle ME5
englobe la diffusion travers la surface libre.
Le bilan sur loxygne dans le systme dfini par le gaz issu du diffuseur est dcrit par
Eq. 101.
Le bilan sur loxygne dans la phase liquide scrit :
1
dx
= K L a d ( y d x )d z + K L a e ( y C x )
dt
0
Le bilan sur loxygne dans le systme dfini par le ciel gazeux scrit :
dy C
1
= (Q d ( y z =1 y C ) K L a e VL RTH (y C x ))
dt
VC
(102)
Modles MP+mb et ME5+mb
Lchange gazeux entre une microbulle et le liquide est rgit par lquation suivante
du premier ordre :
dy mb
x
= K L a mb RTH
y mb
dt
HP
(103)
o, pour le transfert doxygne, ymb est la concentration en oxygne lintrieur de la

microbulle, x la concentration en oxygne dissous dans la phase liquide en contact avec la
114
microbulle, KL la conductance global de transfert doxygne dfinie par rapport la phase

liquide, amb le rapport de laire sur le volume de la microbulle, soit : a mb =
6
o dmb est le
d mb
diamtre moyen de la microbulle suppose sphrique.

Le temps ncessaire une microbulle gazeuse pour que sa concentration en oxygne
atteigne lquilibre avec la phase liquide est estim en rsolvant Eq. 103. Le temps le plus
long est calcul en supposant ymb=0 t=0 :
y mb =
o mb =
t
x
1 exp
mb
HP
dB
est la constante de temps du phnomne. Elle correspond au temps
6K L RTH
ncessaire une microbulle pour que sa concentration atteigne 63% de la valeur de x/HP, et
peut tre compare aux temps caractristiques du systme. Avec KL=10-4 m.s-1 (valeur
moyenne en cuve agite dans la littrature) et dmb=10 m, mb=0,6 s. mb est infrieur au
temps de diffusion (Figure 58) et dautre part le temps de rsidence de la microbulle dans le
liquide est suprieur mb, ce qui permet de conclure que la microbulle est lquilibre avec
le liquide. Pour une microbulle de 50 m mb=3,2 s, donc pour les valeurs de KLa leves
(suprieures 0,3 s-1) la composition dune telle microbulle nest pas en quilibre avec la
composition du liquide. Dans la modlisation nous utilisons les hypothses suivantes :
H 14 : Les microbulles sont en quilibre avec le liquide. Ainsi une valeur de KLa leve, de 2 s-1, leur
est attribue.
H 15 : Les microbulles ne coalescent pas avec les autres bulles du systme, et occupent un volume
Vmb constant durant chaque exprience.
Les modles MP+mb et ME5+mb sont composs partir des modles MP et ME5 en
ajoutant dune part le terme K L a mb ( y mb x ) dans le bilan sur loxygne dans la phase
liquide, et dautre part le bilan sur loxygne contenu dans le systme dfini par lensemble
des microbulles :
dy mb
V
= K L a mb L RTH (x y mb )
dt
Vmb
o Vmb est le volume des microbulles, calcul par identification paramtrique en mme temps
que KLa.
115
III.1.5.2. Etude thorique des modles ME1 et ME5
Un paramtre daration de surface est dfini : pour le modle ME1 cest le rapport
Qe/Qd (dj utilis par Veljkovi et coll. (1991)), et pour le modle ME5, le rapport
KLae/KLad. Ces paramtres traduisent linfluence relative de laration de surface par rapport
laration par le diffuseur.
La Figure 14 prsente des courbes de roxygnation calcules par les modles ME1
(Figure 14A) et ME5 (Figure 14B). Pour chaque valeur de KLa ou KLad (0,5 et 0,05 s-1), trois
valeurs du paramtre daration de surface sont utilises : 0,001 qui traduit la quasi absence
daration de surface, 0,05 et 0,5 qui traduit une aration de surface trs prsente dans
laration globale du racteur.
A la fin de la roxygnation ( x SM [0,6 ; 1] ) les courbes calcules pour une mme
valeur du paramtre daration de surface convergent, indpendamment de la valeur de KLa
ou KLad.
Au dbut de la roxygnation par contre ( x SM [0 ; 0,3] ), pour une valeur donne de
KLa ou KLad, le faisceau de courbes form en faisant varier la valeur du paramtre daration
de surface est trs resserr, et est donc proche de la courbe que donneraient le modle MH ou
MP, c'est--dire en labsence dentranement de surface, soit pour un paramtre daration de
surface rduit 0,001.
Deux conclusions simposent cette observation. Premirement, pour un modle
deux valeurs de KLa comme le modle ME5, il semble possible de pouvoir comparer
directement KLad avec les valeurs de KLa de la littrature mesures en labsence
dentranement de surface. Cette comparaison na jamais t entreprise dans la littrature o le
transfert par lentranement de surface nest pas caractris en terme de KLa. Deuximement,
la valeur de KLa en prsence daration de surface peut tre approche en modlisant la
rponse exprimentale sur lintervalle x SM [0 ; 0,3] par un simple modle MH ou MP: les
modles MH30% et MP30% sont ainsi respectivement dfinis. Notons que lorsque le
paramtre daration de surface est trs important (Qe/Qd>0,5 ou KLae/KLad>0,5), il influence
aussi la rponse initiale de la roxygnation.
116
KLae/KLad=0,5
x SM
x SM
Qe/Qd=0,5
KLa=0,5 s-1
KLad=0,5 s-1
KLa=0,05 s-1
KLad=0,05 s-1
Figure 14. Influence de la valeur du KLa du diffuseur et du paramtre dentranement de surface dans
le modle ME1 (A) et ME5 (B). Courbes thoriques calcules pour : VL=10 L, Qd=0,146 L.s-1 (Us=0,42
cm.s-1), VG=1 L.
III.1.6. Synthse
Dans ce chapitre, des modles du transfert doxygne dans le racteur sont dvelopps
partir de modles de la littrature (Shioya et Dunn, 1979 ; Veljkovi et coll., 1991) pour
permettre la dtermination du coefficient de transfert doxygne. Ces modles, non-structurs,
sont bass sur les bilans matire sur loxygne en phases liquide et gazeuse. La concentration
en oxygne de la phase liquide est considre homogne. Les modles se distinguent de par la
modlisation de la phase gazeuse : systmes considrs (gaz dispers issu du diffuseur, gaz
dispers issu de lentranement de surface, gaz du ciel, gaz des microbulles permanentes), et
distribution des concentrations d'oxygne (systme homogne ou piston).
Les modles MH et MP sont issus de la littrature (Shioya et Dunn, 1979) :
- le modle MH, dcrit une phase gazeuse disperse homogne de composition.

- le modle MP, dcrit une phase gazeuse scoulant de manire piston dans le liquide.
Ces points sont rsums dans le Tableau 10.
117

Tableau 10. Modles dvelopps pour le calcul de KLa. Les systmes en phase gazeuse
sur lesquelles sont effectus les bilans matire sur loxygne sont indiqus, en prcisant :
H concentration homogne dans le systme, P coulement piston dans le systme.
Modle
MH
MP
MP+mb
ME1
ME2
ME3
ME4
ME5
ME5+mb
S y s t m e
Gaz dispers issu
Gaz
de lentranement
du ciel
de surface
Gaz dispers
issu du diffuseur
H
P
P
Gaz des
microbulles
permanentes
H
H
H
P
H
H
H
H
H
H
P
P
P
H
H
Les modles MH et MP sont tudis numriquement : il est remarqu en particulier que
dans une mme configuration, pour le modle MP, contrairement au modle MH, le temps
permettant datteindre la saturation en oxygne lors dune roxygnation (chelon gazeux
N2Air) nest pas une fonction croissante de KLa.
Les modles MH et MP sont dvelopps pour leur application exprimentale en rgime
transitoire (mthode de roxygnation), et pour leur application en rgime permanent

(mthode du bilan gazeux).
Les modles MH et MP sont complts, de manire originale par rapport la littrature,
pour sappliquer aux conditions intensives de culture :

- les modles dentranement ME1, ME2, ME3, ME4, ME5 sont dvelopps afin de
dterminer la valeur du coefficient de transfert doxygne en condition
dentranement de surface avec aration simultane par le diffuseur : en plus de la
phase gazeuse disperse par le diffuseur, une seconde phase gazeuse disperse est
considre, ayant pour origine lentranement de surface ; le systme constitue par
le ciel gazeux doit donc tre considr aussi. Les systmes considrs dans chaque
modle dentranement sont rsums dans le Tableau 10 : lorsquil est considr que
les gaz de deux systmes coalescent, le symbole H (systme homogne) ou P
(coulement piston dans le systme) est plac entre les deux colonnes dintrt ; le
bilan matire correspondant est alors effectu sur un seul systme commun.
- les modles MP+mb et ME5+mb, dvelopps respectivement partir des modles
MP et ME5, tiennent compte de la prsence dune phase gazeuse permanente
(Vasconcelos et Alves, 1991) constitue de microbulles (Tableau 10).
118
III.2. Quantification du transfert en racteur en milieux minraux de

rfrence
La capacit du racteur transfrer loxygne est caractrise dans des milieux
minraux, en labsence de raction biologique. Ses milieux, utiliss dans la littrature, servent
ltablissement de point de comparaison avec la littrature, et de cadre de rfrence pour la
suite de l'tude.
Les valeurs de KLa obtenues par la mthode du bilan gazeux avec oxydation par le
sulfite, BG+OS, sont prsentes en premier. Puis une mthode dynamique base sur la
roxygnation du racteur est propose ; plusieurs modlisations de la roxygnation N2Air
sont testes afin d'apprhender au mieux les dynamiques d'coulement dans le racteur, et
dobtenir en fin de compte les valeurs les plus justes de KLa.
III.2.1. Rsultats prliminaires
Les rsultats prliminaires visent :

- La dtermination de la puissance dissipe.
Elle est ncessaire pour la modlisation en fonction de e des variables caractristiques du
transfert (KLa, , KL). Elle est calcule partir de la vitesse dagitation.
- La dtermination de la vitesse critique dentranement de surface.
Elle est ralises en milieux coalescent et non coalescent, ar et non ar.
- La mesure de la rtention gazeuse.
Elle est ralise pour les milieux minraux de rfrence et linfluence du nombre de turbines
immerges est tudie.
III.2.1.1. Dtermination de la puissance dissipe
a) Rappels bibliographiques
La puissance dissipe en condition are, PG, est la somme de la puissance dissipe par
lagitateur et de la puissance dissipe par le gaz (pG=gUs, en W.m-3). Cette dernire est
nglige pour une puissance dissipe par lagitation suprieure 1 kW.m-3 (vant Riet, 1979).
Les valeurs de KLa sont habituellement prsentes (tant graphiquement que dans les
corrlations) en fonction de la puissance dissipe par unit de volume liquide ar, e,
e=PG/VL.
Lutilisation dun torque mtre savre impossible sur le racteur Braun car laxe de
larbre dagitation nest pas accessible. Lnergie lectrique consomme est donne,
119
cependant le rendement du systme dagitation (ratio de la puissance disperse dans le liquide

par la puissance consomme) est inconnu. Il dpend des pertes du moteur et de la
transmission par courroie sous forme de chaleur, de la charge du fermenteur, de la dispersion
gazeuse et de la vitesse dagitation (vant Riet et Tramper, 1991). Certains auteurs calculent la
puissance dissipe en soustrayant la puissance lectrique consomme vide de la puissance
lectrique consomme dans les conditions exprimentales (Veljkovi et Skala, 1989 ; Wu,
1995), ce qui suppose, en premire approximation, que les pertes nergtiques ne dpendent
que de la vitesse dagitation. Cette solution ne nous convient pas ; nous choisissons
dapproximer e partir de la vitesse dagitation N par une corrlation de la littrature.
Dans la littrature deux corrlations font autorit pour le calcul de PG en fonction des
conditions opratoires : la corrlation de Michel et Miller (1962) :
P02 N d3D
PG = c 0,56
Qd
0 , 45
(104)
o c est une constante, N est la vitesse dagitation, dD le diamtre de turbine, Qd le flux

daration par le diffuseur ;
et la corrlation de Hughmark (1980) :
Qd
PG = 0,1 P0
N VL
1 / 4
N 2 d 4D
2/3
g h P VL
1 / 5
(105)
3
o le premier groupe adimensionnel est un nombre daration modifi (Na= Q d / Nd D dfinit

le nombre daration mais la corrlation est meilleure avec le volume liquide VL au lieu de
3
d D ), et le deuxime groupe adimensionnel est un nombre de Froude, hP est la hauteur de pale.

P0 peut tre estim en fonction du nombre de puissance Np :
P 0 = Np N d D
3
(106)
Np est donn dans des abaques par le constructeur en fonction du nombre de Reynolds. Pour
une turbine Rushton (disque 6 pales) en rgime turbulent (Rei= d 2D N/>104), Np prend une
valeur comprise entre 4,5 et 6, selon la configuration du racteur (vant Riet et Tramper,
1991 ; Roustan et coll., 1997). Une hlice marine, avec un nombre de puissance Np=0,4,
fournit moins de puissance au liquide.
La puissance dissipe en condition are, PG, est systmatiquement infrieure la
puissance dissipe en condition non-are, P0 : la rsistance hydrodynamique la rotation de
la pale est rduite en prsence de bulles (vant Riet et Tramper, 1991).
120
En racteur multi-turbines, lestimation de la puissance dissipe par n turbines en

systme non-ar, (P0)n, est obtenue en multipliant le nombre de puissance Np relatif une
turbine par n (Eq. 106), condition que les turbines soient au moins espaces dun diamtre
de turbine (Nienow et Lilly, 1979). En systme ar par contre, la dcroissance du rapport
PG/P0 en fonction du nombre daration Na atteint 0,5 Na=0,05 en systme mono-turbine
pour seulement 0,8 en systme bi-turbine (Hudcova et coll., 1989 ; Nienow et Lilly, 1979). Il
a t vrifi pour deux turbines la relation (Nienow et Lilly, 1979) :
PG
(P / P ) + (n 1).(1 )
= G 0 1
n
P0 n
(107)
o n=1 renvoie la turbine du bas lorsquelle est utilise seule, et n=2 deux turbines actives.
Loriginalit de cette relation est sa prise en compte de la rtention gazeuse, , qui peut
devenir importante en racteur multi-turbine. La rtention gazeuse ntant pas mesurable en
condition de culture, cette relation ne peut pas tre utilise.
La corrlation de de Michel et Miller est une fonction de N2,85Qd-0,25dD5,85, et la
corrlation de Hughmark une fonction de N3,15Qd-0,25dD4,2 ; les deux relations sont donc
proches. Kamen et coll. (1995) proposent simplement pour des fermenteurs de 3,5 L et 16 L
une fonction de N3dD2. Nous choisirons la corrlation de Hughmark, car elle semble la mieux
adapte aux cultures fed-batch en tenant compte de la variation de volume.
b) Mthode
Exprimentalement le rgime dcoulement est toujours turbulent (Re>104). En fixant
le nombre de puissance 5, la puissance dissipe en systme non ar, e0, calcule pour deux
turbines actives, vaut : e0 = P0 / VL = 2 Np.. N3 d5D / VL . Le calcule ralis pour 10 L deau est
prsent sur la Figure 15. Il est vrifi qu la vitesse dagitation maximum, 1500 rpm, la
valeur de e0 (653 W), est infrieure la puissance du moteur (746 W). En conditions ares,
la puissance dissipe eH est calcule par la formule de Hughmark (1980), pour prendre en
compte lvolution de VL. La Figure 15 montre que le rapport eH/e0 vaut en moyenne 0,5
pour un nombre daration (Qd/NdD3) toujours compris entre 1,5 et 3 en condition de culture.
Cette valeur du rapport eH/e0, un tiers plus faible que celle rapporte dans les travaux de
Nienow (Hudcova et coll., 1989 ; Lilly et Nienow, 1979), peut tre justifie du fait que
Nienow travaille 200 rpm maximum alors que nous travaillons entre 400 et 1500 rpm :
forte agitation, la rtention gazeuse importante peut expliquer la moindre dissipation
dnergie. On peut proposer une deuxime justification du modle choisi en calculant le
121
rendement R du systme dagitation partir de valeurs de puissance lectrique consomme,

Pe, releves en milieu non coalescent (VL=10 L, Na2SO4 10 g.L-1, Qd=0,16 L.s-1) :
R=
PG
Pe
(108)
o PG est calcul par la relation de Hughmark. Les valeurs de rendement sont portes sur la
Figure 15 : elles sont compatibles avec un rendement classique de moteur lectrique.
70
1
e0
eH
Rendement
60
0.9
0.8
0.7
0.6
40
0.5
30
0.4
Rendement
e, kW.m - 3
50
0.3
20
0.2
10
0.1
0
0
300
600
900
1200
0
1500
Agitation, rpm
Figure 15. Evaluation de la puissance dissipe en fonction de lagitation. Puissance volumique
dissipe en labsence daration, e0 ; puissance volumique dissipe en condition de fonctionnement
(VL=10 L, Qd=0,16 L.s-1), calcule par la relation de Hughmark (1980), eH. Le rendement du systme
dagitation est calcul par Eq. 108.
Le passage de deux trois turbines actives seffectue en conditions de culture avec un

accroissement de la puissance lectrique consomme ngligeable : P e,3 t / P e , 2 t = 1,07 0,05 (o
Pe,3t et Pe,2t sont les puissances lectriques mesures avec 3 et 2 turbines actives,
respectivement). Cette faible diffrence sexplique par une importante croissance de la
rtention gazeuse pendant la transition ( augmente 1,5 fois). En effet, notre surcot
nergtique est largement infrieur la prdiction de 1,58 de Linek (1996), qui ne tient pas
compte de la rtention gazeuse. Il semblerait par contre concider avec la formule rapporte
par Nienow et Lilly (1979) (Eq. 107), laquelle tient compte de la rtention gazeuse. La
122
rtention gazeuse ntant pas mesurable en condition de culture, il nest donc pas tenu compte
de la transition de deux trois turbines dans le calcul de la puissance dissipe, et il est
suppos que le nombre de puissance pour trois turbines actives est quivalent celui calcul
pour deux turbines actives : Np3=Np2=25.
Ladoption de ce calcul de la puissance dissipe ne change en rien les valeurs de KLa
obtenues mais permet simplement la prsentation des rsultats et la comparaison avec la
littrature.
III.2.1.2. Vitesse critique dentranement de surface
La vitesse critique dentranement de surface, NE, est dtermine ici pour 10 L de

milieu, en utilisant que les deux turbines du bas. La puissance consomme de rfrence, Pcrref,
dtermine en labsence de tout entranement de surface, est mesure avec 18 L de liquide
(Figure 16).
La dtermination de NE dpend donc des hypothses suivantes :
- la rduction de la puissance consomme par rapport Pcrref est due laugmentation de la
rtention gazeuse , attribue lincorporation de bulles par la surface libre.
- la rduction de la puissance consomme par rapport Pcrref est importante compare
lexcs de puissance dissipe dans le systme due laugmentation du volume de 10 18 L.
Il apparat que la fonction Pcrref(N) dtermine dans leau se superpose parfaitement
celle dtermine dans la solution Na2SO4 10 g.L-1, ceci en condition non-are (aucune bulle
nest prsente dans le liquide) (Figure 16A) et en condition are (prsence de bulles du
diffuseur, mais pas de bulle entrane) (Figure 16B). Lvolution des fonctions Pcrref(N) sur la
Figure 16 ne dpend donc pas des proprits de coalescence du milieu.
En prsence daration par le diffuseur (Figure 16B) ou non (Figure 16A), en milieu
coalescent et non-coalescent, les fonctions Pcr(N) se dmarquent des fonctions Pcrref(N) pour
les valeurs de N suprieures ou gales 700 rpm. Dans tous ces cas, NE vaut donc 700 rpm,
pour 10 L de milieu.
123
70
Pcr milieu coalescent
A non ar
Pcr milieu non-coalescent
60
, %
Pcr, %
milieu coalescent
milieu non-coalescent
Pcrref
50
40
40
B ar
30
30
20
20
10
10
Pcrref
0
0
200
400
600 800 1000 1200

NE
N, rpm
200
400
600
800 1000 1200

NE
N, rpm
Figure 16. Dtermination de la vitesse critique dentranement de surface NE. A condition non-are ;
B condition are. VL=10 L ; milieu coalescent : eau du robinet ; milieu non-coalescent : Na2SO3
10 g.L-1. : rtention gazeuse.
En culture microbienne, lorsque la concentration cellulaire dpasse 20 gMS.L-1, les

vitesses dagitation utilises sont comprises entre 1000 et 1500 rpm, pour un volume liquide
compris entre 9 et 12 L. Il est alors probable que lentranement de surface intervienne dans le
transfert doxygne, dautant que les trois turbines sont utilises, ce qui favorise le
phnomne.
III.2.1.3. Rtention gazeuse des milieux minraux
La Figure 17 reprsente une fonction de la rtention gazeuse, /Us0,4, en fonction de la

puissance dissipe, pour leau et pour les trois autres milieux de rfrence (II.1).
Il apparat, conformment la littrature, que la rtention gazeuse augmente avec la
force ionique du milieu (Tableau 7), c'est--dire en fonction de la capacit du milieu inhiber
la coalescence. La solution Na2SO4 50 g.L-1 (I=1,06 mol.L-1) inhibe compltement la
coalescence (Linek et coll., 1987) et permet une rtention gazeuse en moyenne deux fois
suprieure celle obtenue pour la solution Na2SO4 10 g.L-1 (I=0,24 mol.L-1). Les valeurs
maximales de atteignent 15% dans leau (pour e=1000 W.m-3) et 40 50% dans la solution
Na2SO4 50 g.L-1 (pour e=1500 W.m-3). A partir de la Figure 17, la rtention gazeuse peut tre
exprime en fonction de e pour les systmes coalescent et non-coalescent ionique,
respectivement :
124
c=0,062e0,32Us0,4
(109)
nci=0,031e0,47Us0,4
(110)
La dispersion des points autour de chaque modle est rduite (R=0,98). Lexposant 0,4 est
utilis pour lever Us car il corrle le mieux nos rsultats.
Lorsque trois turbines sont utilises on remarque pour la solution Na2SO4 50 g.L-1 une
augmentation de la rtention gazeuse partir de e=10000 W.m-3 (pour cette configuration les
points relis par les pointills remplacent donc les points relis par Eq. 110 sur la Figure 17).
Il faut en effet un milieu fortement non-coalescent et une puissance dissipe assez forte pour
que le volume total de la suspension atteigne la troisime turbine ; la rtention gazeuse
augmente alors subitement. Avec la solution Na2SO4 10 g.L-1 la formation dune rtention
gazeuse suffisante pour lutilisation de la troisime turbine a lieu vers e=20000 W.m-3. Avec
leau pure, la troisime turbine nest jamais atteinte.
En milieu non-coalescent, la dcroissance de forte puissance dissipe est attribue
un effet de saturation qui fait apparatre lexistence dun volume dispers maximum pouvant
tre retenu au dessus de la turbine suprieure.
10
-1
-1
Na2SO4 10 g.L
1
0,4
/Us , m
-0,4
.s
0,4
Na2SO4 50 g.L
Eq. 110
R4
Eau
Eq. 109
0,1
100
1000
10000
e, W.m
100000
-3
Figure 17. Rtention gazeuse en milieux minraux. VL=10 L, Us=0,14, 0,42 et 0,70 cm.s-1,
2 turbines sont actives, sauf pour les points relis par
o 3 turbines sont actives.
125
III.2.2. Quantification de KLa par la mthode du bilan gazeux coupl loxydation par
le sulfite (BG+OS)
a) Prambule.
Les valeurs de KLa dtermines par la mthode statique BG+OS sont prsentes
Figure 18 sous la forme de Eq. 21 ( K L a / US en fonction de e). La valeur =0,4 est utilise car
elle corrle convenablement nos rsultats en milieux coalescent et non-coalescent. De plus, la
fonction
ayant dj t tudie en fonction de e (Figure 17), lexposant =0,4 permet

Us 0, 4
dcrire
K La
6
= KL
, o les facteurs KL et 1/d sont aussi tudis en fonction de e
0, 4
Us
d b Us 0, 4
dans la littrature (Linek et coll., 2005 ; Alves et coll., 2002). Enfin lexposant 0,4 est
conforme la littrature, en particulier aux travaux de Linek et coll. (1987) (dT=29 cm, 1tRu,
dD/dT=1/3). Ces travaux sont bass sur une analyse bibliographique complte du domaine et
sont donc choisis comme rfrence ; ils proposent, pour leau :
KLa=0,00495e0,593Us0,4
(111)
-1
-1
et pour une solution non-coalescente ionique (28 g.L <[Na2SO4]< 71 g.L ) :

KLa=0,00135e0,946Us0,4
(112)
Les corrlations de Linek et coll. (1987) ayant t valides pour 100<e<3000 W.m-3, leurs
courbes reprsentatives sont extrapoles jusqu e=35000 W.m-3 ; elles sont reprsentes en
trait pointill sur le domaine dextrapolation dans les figures concernes.
Lutilisation des corrlations de Linek et coll. (1987) comme rfrence suppose que :
1. lvolution de KLa avec e est indpendante de l'coulement de la phase gazeuse
disperse (piston, homogne). Ceci est vrifi car KLa ne dpend pas de la
concentration en oxygne dans le gaz.
2. lvolution de KLa avec e est indpendante du nombre de turbines. Ceci est vrifi par
Linek et coll. (1990 ; 2004) (dT=29 cm, dD/dT=1/3) en solution non-coalescente ionique,
avec KLa mesur par la mthode de pression dynamique. Lorsque le racteur est quip
dune seule turbine Rushton, Linek et coll. (1990) proposent :
KLa=0,000311e1,24Us0,4
(113)
et lorsque le racteur est quip de deux turbines Rushton et rempli dun volume deux
fois plus important, Linek et coll. (2004) proposent :
KLa=0,00978e1,233Us0,55
(114)
Les corrlations conduisent la mme valeur de KLa 20% prs, et lvolution de KLa en
fonction de e est la mme.
126
Remarque. Le coefficient est 30% plus lev que celui calcul par Linek et coll. (1987)
pour la mme configuration de racteur. Ceci montre linfluence de la mthode de mesure sur
la valeur de KLa. 87 : Ces corrlations sont obtenues en valuant KLa par roxygnation en
dgazant le liquide sous vide, puis en injectant un flux doxygne pur (0O2) ; la phase
gazeuse est donc homogne dans le racteur.
b) Comparaison des modles MH et MP
Sur la Figure 18, les valeurs de KLa calcules en supposant l'coulement du gaz de
type homogne (courbe BG+OS_MH) ou piston (courbe BG+OS_MP) sont portes en
fonction de e. La diffrence entre les deux modles rside dans le calcul du potentiel de
transfert dfini pour le profil homogne par : ( x *O 2 x O 2 ) MH = HPy off
O2
in
off
et pour le profil piston par : ( x *O 2 x O 2 ) MP = HP ( y inO 2 y off
O 2 ) / ln( y O 2 / y O 2 )
Lhypothse du profil homogne conduit des valeurs de KLa suprieures celles obtenues
avec lhypothse du profil piston, puisque ( x *O 2 x O 2 ) MH < ( x *O 2 x O 2 ) MP . Lcart est une
fonction croissante de e, et atteint un facteur deux pour e=30 kW.m-3.
KLa/Us0.4, m-0.4.s-0.6
100
10
Eq. 116
Eq. 115
BG+OS_MH, Na2SO3 50 g.L
-1
-1
BG+OS_MP, Na2SO3 50 g.L

-1
BG+OS_MP, Na2SO3 10 g.L
1
Eq. 112
Eq. 111
0.1
100
1000
10000
e, W.m
100000
-3
Figure 18. Comparaison des valeurs de KLa/Us0,4 calcules par la mthode BG+OS avec les
corrlations de Linek et coll. (1987). VL=10 L, 400<N<1500 rpm, 0,14<Us<0,7 cm.s-1.
127
c) Rsultats pour e<4000 W.m-3

Sur la gamme de puissance dissipe investigue par Linek et coll. (1987), c'est--dire
pour e<3000 W.m-3, KLa calcul par le modle MP (courbe BG+OS_MP) suit lvolution
mentionne par Linek et coll. (1987) en fonction de e (Eq. 112) et peut tre dcrit par :
KLa=0,0022e0,92Us0,4
(115)
Cependant la valeur du facteur est 1,5 fois plus leve que dans Eq. 112, mais dpend en
particulier de la gomtrie du fermenteur : Linek et coll. (1987) utilisent un fermenteur
monoturbine de 29 cm de diamtre, le notre est multi-turbine de 21 cm de diamtre. Dautre
part les tempratures de travail sont diffrentes (I.2.6).
Sur la mme gamme de puissance dissipe, la courbe BG+OS_MH obtenue par le
modle MH a une pente suprieure celle obtenue par de Linek et coll. (1987) (Eq. 112) :
KLa=0,0007e1,12Us0,4
(116)
d) Rsultats pour e>4000 W.m-3

A forte puissance dissipe (e>4000 W.m-3), les drives des courbes BG+OS_MH et
BG+OS_MP diminuent avec e. Pour Linek et coll. (1982, 1987) cette volution est
artificielle : elle traduit lcart entre les rsultats exprimentaux et le modle de calcul, en
particulier par rapport la description de la phase gazeuse (homogne ou piston). Cet cart est
dautant plus important que la puissance dissipe est leve (Figure 18), alors que Linek
considre que les valeurs relles de KLa devraient toujours se situer sur une courbe qui
pourrait tre extrapole partir de la tendance mesure faible puissance dissipe.
La mthode de calcul de e (III.2.1.1) peut tre mise en cause pour expliquer la
diminution des valeurs de KLa forte puissance dissipe, mais il semble improbable que e soit
surestim du facteur trois ncessaire pour que les points situs vers 30000 W.m-3 soient
recals sur la droite thorique 8000 W.m-3. Il est plus raisonnable de considrer, comme le
suggrent Linek et coll. (1987), que les profils gazeux utiliss dans la mthode BG+OS
peuvent effectivement tre altrs avec laugmentation de la puissance dissipe qui provoque
llargissement de la distribution des temps de sjour des bulles et compartimente le racteur.
Le phnomne dentranement de surface ne peut pas tre lunique cause du
flchissement des valeurs de KLa. En effet, lincorporation dans la phase disperse de gaz en
provenance du ciel agit ici en faveur de lenrichissement de la phase liquide car le potentiel de
transfert entre le ciel et le liquide est positif ; le potentiel de transfert apparent, tel quil est
considr dans le prsent calcul de KLa qui omet lentranement de surface, est plus petit que
128
si lentranement tait considr (Figure 3). La valeur apparente de KLa est donc plus grande
que sa valeur relle calcule en tenant compte de lentranement de surface.
e) Comparaison des valeurs obtenues avec Na2SO3 10 et 50 g.L-1
Les valeurs de KLa obtenues pour Na2SO3 10 g.L-1 et 50 g.L-1 sont compares sur la
Figure 18 pour le modle MP (courbe BG+OS_MP) : elles sont identiques 10% prs ; ce
mme rsultat est obtenu pour le modle MH, de part lcriture du modle. Similairement,
Linek et coll. (2004) (dT=29 cm, 2tRu, dD/dT=1/3) obtiennent les mmes valeurs de KLa pour
Na2SO4 30 g.L-1 et 70 g.L-1 dans un racteur de configuration similaire la notre. En colonne
lit fixe par contre, Poughon et coll. (2003) proposent de rduire la concentration en Na2SO3 ,
de 50 g.L-1 10 g.L-1, pour retrouver une valeur de KLa proche de celle mesure dans leau.
"Lastuce" ne vaut donc pas en racteur agit. La mthode du bilan gazeux coupl
loxydation par le sulfite permet donc uniquement de caractriser le transfert doxygne dans
le fermenteur en milieu non-coalescent.
Remarque. En vertu de linfluence directe de sur laire interfaciale (Eq. 29), il est surprenant
que le passage de deux trois turbines actives, correspondant une rtention gazeuse 2 2,5
fois suprieure pour la solution Na2SO3 50 g.L-1 compar la solution Na2SO3 10 g.L-1
(Figure 17), ne se traduise pas galement par une diffrence importante de KLa pour e=10000
W.m-3. Les bulles de la solution 50 g.L-1 sont-elles plus petites et plus rsistantes au
transfert ? Lcart lidalit du profil gazeux limite-t-il la capacit globale de transfert ?
Nous ne sommes pas en mesure de rpondre ces questions pour le moment. Une mesure insitu de la taille des bulles permettrait dobtenir de premiers lments de rponse.
Ces rsultats nous permettent d'affirmer que la mthode BG+OS est reproductible avec
moins de 3% derreur (Tableau 8). La principale limitation de cette mthode semble provenir
de la ncessit de connatre l'coulement de la phase gazeuse disperse, en particulier forte
puissance dissipe. Cet coulement, pour e<4000 W.m-3, est convenablement reprsente par
un coulement piston; plus forte puissance dissipe, par contre, l'coulement du gaz en
solution non-coalescente ne semble pas tre modlisable par les modles simples considrs
ici.
129
III.2.3. Quantification de KLa par roxygnation et modles simples (MH et MP)
Les modles simples de la littrature dcrivent lcoulement homogne ou piston de la

phase gaz, avec un flux dair unidirectionnel, cest dire globalement ascendant depuis le
diffuseur vers le ciel gazeux, reprsent par le flux Qd sur la Figure 3.
Les modles MH et MP sont tests ici avec la mthode dynamique de roxygnation,
dune part pour sa simplicit exprimentale, et dautre part parce quelle est applicable aussi
bien en eau pure, quen milieu ionique, et en milieu biologiquement actif.
III.2.3.1. Rsultats prliminaires
a) Reproductibilit de la mesure exprimentale

Ltude de reproductibilit est ralise sur quatre roxygnations, ralises plusieurs
jours dintervalle, dans les conditions suivantes : VL=10 L, eau distille, e=2350 W.m-3 (c.a.d.
N=600 rpm), Us=0,42 cm.s-1 (c.a.d. Qd=0,9 vvm).
La reproductibilit de la mesure de loxygne dissous lors de la roxygnation de leau
est dmontr sur la Figure 19 : lcart type moyen en chaque point vaut 0,010.
x relative
Concentration
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0
10
15
20
25
30
35
40
Temps, s
Figure 19. Reproductibilit de la mesure de loxygne dissous lors de la roxygnation du racteur. Eau
pure, VL=10 L, e=2350 W.m-3 (600 rpm), Us=0,42 cm.s-1. 10 mesures sont releves par seconde.
Remarque. La comparaison des roxygnations exprimentales de la Figure 19 avec les
roxygnations calcules numriquement de la Figure 11 fait apparatre que la prcision des

130
courbes exprimentales permet difficilement la dtermination de valeurs de KLa suprieures

1 s-1 par les mthodes dynamiques MH et MP.
b) Justification de la prise en compte de la rtention gazeuse
Il est montr exprimentalement (Figure 20) que pour des faibles vitesses dagitation,
plus la vitesse dagitation est leve, plus la roxygnation du racteur est plus rapide. La
tendance sinverse vers N=700 rpm pour le milieu coalescent (eau distille) (Figure 20A), et
N=500 rpm pour le milieu non-coalescent (Na2SO4 50 g.L-1) (Figure 20B). Alors que KLa
augmente avec la vitesse dagitation N (I.2.1.1), et que la vitesse de transfert de loxygne
augmente avec KLa, pourquoi le temps ncessaire la roxygnation du racteur nest-il pas
une fonction croissante de N ? Cette observation nous interroge sur leffet de laration de
surface, et du volume de gaz dispers sur la valeur de KLa.
Dans les conditions de ltude, laration de surface ne devrait intervenir qu partir de
N=700 rpm (cf. III.2.1) : en milieu coalescent linversion de la tendance a lieu ce moment
l ; en milieu non-coalescent par contre, linversion de la tendance a lieu N=500 rpm. La
Figure 21 prsente une simulation de la roxygnation du racteur, calcule pour une mme
valeur de KLa et pour plusieurs valeurs de VG. Il apparat que le temps ncessaire la
roxygnation du racteur augmente avec VG.
Ce rsultat pourrait donc aussi expliquer le fait qu forte vitesse dagitation (N>600
rpm) la roxygnation du racteur est plus lente en milieu non-coalescent quen milieu
coalescent (Figure 20), cause de laugmentation de VG avec la non-coalescence du milieu
(Figure 16B).
La prise en compte du bilan matire sur la phase gazeuse augmente la complexit du
modle ainsi que sa rsolution quand certains auteurs se contentent du seul bilan matire en
phase liquide. Cependant cette complexit est ncessaire et apparat comme un facteur majeur
de la modlisation en milieu fortement agit.
131
A
Milieu coalescent
(eau distille)
0,9
0,8
600
1000
0,6
0,7
500
x
400
500
800
1000
0,5
1200
0,4
1500
300
N=1500 rpm
0,3
N= 600 rpm
0,6
0,5
0,4
B
Milieu
non-coalescent
(Na2SO4 50 g.L-1)
0,9
0,8
0,7
1200
700
0,3
300
0,2
0,2
0,1
0,1
0
0
10
15
Temps, s
20
25
30
10
15
20
25
Temps, s
Figure 20. Roxygnations exprimentales en fonction de la vitesse dagitation (rpm) en milieu

coalescent (A) et non-coalescent (B). VL=10 L, Us=0,42 cm.s-1.
VG=
Figure 21. Roxygnations simules par le modle MP en fonction

du volume de gaz dispers VG (L). VL=10 L, Us=0,42 cm.s-1,
KLa=0,07 s-1.
c) Confrontation modle - exprience

A faible flux de transfert, les diagrammes de parit (Figure 22A et B) montrent que les
modles MP et MH sont tous les deux pertinents et quivalents : lcart entre les
concentrations relatives mesures par la sonde, x s , et les concentrations relatives estimes par
le modle, x SM , est infrieur 10%, et les erreurs ErMP et ErMH sont quivalentes. A flux de
transfert moyen (Figure 22C et D), la pertinence des modles est moins bonne, surtout en
solution saline, au dpart de la roxygnation, lorsque les concentrations relatives mesures
132
30
sont infrieures 0,4. A fort flux de transfert on remarque que les modles MP et MH tendent
sous-estimer les concentrations en dbut de roxygnation ; le phnomne samplifie en
solution saline et lorsque les conditions de transfert deviennent plus intenses. Cet cart
souligne que lexprience sloigne des hypothses de mlange du modle. La sonde tant
place au niveau de la turbine centrale, on peut supposer que le liquide commence senrichir
autour de la turbine infrieure puis arrive subitement sur la seconde turbine. Il aurait fallu
x SM
x SM
pour vrifier cela mesurer loxygne dissous simultanment dans les deux tages.
coalescent
non-coalescent
xs
x SM
x SM
xs
coalescent
xs
non-coalescent
xs
Figure 22. Confrontation des modles piston et homogne avec des expriences de roxygnation.
Expriences ralises en milieu coalescent (eau distille) (A et C) et en milieu non-colescent (Na2SO4
50 g.L-1) (B et D), faible flux de transfert (A et B) et flux de transfert moyen (C et D). Les conditions
dagitation sont rappeles sur les figures ; VL=10 L ; Us=0,42 cm.s-1. ErMP et ErMH sont les erreurs
relatives des identifications paramtriques ralises par les modles MP et MH, respectivement.
133
Lcart type sur la valeur de KLa calcule par le modle MP sur quatre expriences
similaires celle de la Figure 22C, vaut 0,0026 s-1, pour une valeur moyenne de KLa de
0,096 s-1, soit une erreur de 2,7% ; la convergence ne dpend pas de linitialisation, effectue
sur lintervalle [0,005 ;1 s-1], car les mmes valeurs de KLa ( 10-4 s-1 prs) sont obtenues.
A ce stade de linvestigation il apparat que les modles MP et MH sont pertinents
faible vitesse dagitation et vitesse dagitation moyenne en milieu coalescent. Les deux
modles prsentent des erreurs similaires ce qui ne permet pas didentifier lcoulement dans
le racteur ; ltude se poursuit donc sur les deux modles.
d) Etude de sensibilit
Ltude de sensibilit est ralise en faisant varier les valeurs du paramtre KLa et des
constantes VG et S. Lexemple prsent est reprsentatif de lensemble des roxygnations
tudies et correspond lemploi du modle MP pour reprsenter lexprience de la Figure
22C.
Les domaines de variation de KLa et des constantes sont prsents sur le Tableau 11.
Les valeurs utilises pour la variation des constantes correspondent des limites
exprimentales relles.
Tableau 11. Variation des paramtres pour ltude de sensibilit du modle MP en milieu coalescent.
VL=10 L, e=2350 W.m-3 (600 rpm), Us=0,42 cm.s-1.
Paramtre
VG, L
S, s
KLa, s-1
Valeur centrale
0,9
0,8
0,0762
Valeur infrieure
0,7 (-25%)
0,6 (-25%)
0,053 (-30%)
Valeur suprieure
1,1 (+25%)
2 (+250%)
0,099 (+30%)
La constante de temps de la sonde, S, varie de 0,8 s (valeur utilises dans les modles)
2 s, soit une augmentation de 250%, cause de plusieurs effets : le vieillissement de la
sonde, le calcul de lapproximation du premier ordre qui pourrait tre calcule partir de
linstant t01 au lieu de linstant t02 (Figure 8), la viscosit dans la couche liquide de diffusion
qui peut augmenter en prsence de cellules.
La mesure de VG est prcise 0,1 L pour VG 0,5 L, et 0,2 L pour VG > 0,5 L. VG
est fix la valeur lue (0,9 L), mais peut donc se situer sur lintervalle [0,7 ;1,1] (en L). Nous
avons essay de calculer les valeurs de VG par identification paramtrique en mme temps que
KLa : il ressort que les valeurs obtenues correspondent toujours une des bornes de
lintervalle de dfinition de VG, et que la valeur de la borne (infrieure ou suprieure) peut
tre diffrente selon le modle utilis. La valeur de VG ainsi obtenue nest donc pas lie une
134
ralit exprimentale ; il nous a donc sembl prfrable de fixer la valeur de VG la valeur

lue.
La Figure 23 prsente ltude de sensibilit sous forme graphique : les courbes
continues sont traces partir des valeurs centrales, et les courbes discontinues partir des
bornes des intervalles de dfinition. Il apparat que KLa est le paramtre le plus sensible, ce
qui nous permet de valider posteriori la modlisation propose. En effet, puisque KLa est le
paramtre cherch, plus sa sensibilit est forte, plus lapproximation converge vers une valeur
prcise.
Figure 23. Etude de sensibilit du modle MP. Les valeurs centrales des paramtres sont modifies
une une. A sensibilit de VG ; B sensibilit de S ; C sensibilit de KLa. Eau distille, VL=10 L,
e=2350 W.m-3 (600 rpm) ; Us=0,42 cm.s-1.
A partir des intervalles de dfinition de S et VG , il est possible de calculer lerreur de

mesure avec laquelle est valu la valeur de KLa. Sur lexprience de la Figure 22C, KLa est
valu avec une erreur de mesure infrieure 3%.
III.2.3.2. Valeurs de KLa et comparaison avec la littrature
En milieu coalescent (Figure 24A), pour e<4000 W.m-1, les volutions de KLa/Us0,4 en
fonction de e dcrites par les modles MH et MP, suivent le modle dcrit par Eq. 21,
conformment Linek et coll. (1987). La courbe dcrite par le modle MP sur la Figure 24A
pour e<4000 W.m-3 a pour quation :
KLa=0,0076e0,56Us0,4
(117)
et pour le modle MH :
KLa=0,0015e0,83Us0,4
(118)
135
100
A
milieu coalescent
Sans entranement Avec entranement
KLa/Us0.4, m-0.4.s-0.6
MH
MP
10
Eq. 118
Eq. 112
1
Eq. 117
0.1
100
Eq. 111
1000
10000
e, W.m
100000
-3
100
B
milieu non-coalescent
KLa/Us0.4, m-0.4.s-0.6
MH
MP
10
Eq. 112
Eq. 111
0.1
100
1000
10000
e, W.m
100000
-3
Figure 24. Comparaison des valeurs de KLa/Us0,4 obtenues par les modles MH et MP, en
milieu coalescent (eau distille) (A) et non-coalescent (Na2SO4 50 g.L-1)(B), avec les
corrlations proposes par Linek et coll. (1987). MP : modle piston ; MH modle homogne.
Tendance pour le modle homogne , et piston .
Pour le modle MP, lexposant =0,56 est proche de la valeur 0,6 obtenue par Linek
et al. (1987). Par contre, le coefficient identifi pour notre racteur est 1,5 fois plus grand
que celui de Linek. Le mme facteur 1,5 a t identifi prcdemment en milieu noncoalescent (III.2.2), argument par linfluence de la configuration du racteur et de sa
gomtrie sur , et de linfluence de la temprature.
136
Pour e>4000 W.m-3, les valeurs de KLa chutent. La puissance dissipe correspondant
la valeur de NE mesure prcdemment (III.2.1) (avec NE=700 rpm et Us=0,42 cm.s-1, soit
e=3600 W.m-3) permet ltablissement de deux zones (spares par le trait pointill) selon
lexistence (pour e>3600 W.m-3) ou non (pour e<3600 W.m-3) dentranement de surface. Il
semble donc que lentranement de surface soit une explication possible la chute des valeurs
de KLa pour e>4000 W.m-3 : de part le dgazage lazote avant la roxygnation, le potentiel
*
de transfert entre le ciel et le liquide est toujours ngatif (y off
O 2 y O 2 0 ) , le gaz entran partir
du ciel senrichit donc au contact du liquide, et rduit alors la vitesse apparente de la

roxygnation. (Pour e>4000 W.m-3
les courbes de roxygnation prsentent les
caractristiques de celle prsente sur la Figure 25.)

En milieu non-coalescent, le dcalage entre les pentes mesures par les modles MH et
MP et Eq. 112 a lieu pour e>1000 W.m-3 (Figure 24B). La divergence pour le modle MP est
telle que les KLa estims forte puissance dissipe deviennent infrieurs ceux estims dans
leau, ce qui est aberrant. Laration de surface peut difficilement expliquer lcart la
tendance de rfrence car la divergence est dj trs prononce alors que laration de surface
est ngligeable. Le phnomne observ est peut-tre leffet dune rtention gazeuse rsiduelle,
modlise ultrieurement.
Dans nos conditions opratoires les modles MH et MP permettent de dgager
lvolution de KLa en milieu coalescent pour e<4000 W.m-3. Par contre les modles MH et
MP ne sont pas adapts au calcul de KLa en prsence dentranement de surface, ni au calcul
de KLa en milieu non-coalescent.
Remarques. La condition sur la constante de temps de la sonde S < d (Ruchti et coll.,
1981) ncessaire pour la dtermination de KLa par la mthode dynamique de roxygnation

est respecte (Figure 10), puisque S = 0,8 s et que la valeur minimale de d vaut 1 s (mesure
en milieu non-coalescent pour la valeur maximale de KLa: 1 s-1 pour e=35500 W.m-3). D'autre
part les valeurs de S et D tant proches, la prise en compte de la dynamique de la sonde dans
les modles est justifi. De mme, en solution non-coalescente, l'obtention de valeurs telles
que G > d justifie la considration de la dynamique de la phase gazeuse dans les modles.
137
III.2.4. Quantification de KLa par roxygnation et modles considrant lentranement

de surface
III.2.4.1. Pertinence des modles considrant lentranement de surface
Il apparat que les modles ME2 et ME3 ne sont pas exploitables mathmatiquement
cause du trop grand nombre de paramtres inconnus ; ils sont donc abandonns.
Sur la Figure 25, les courbes MP, MP50% et ME5 reprsentent les fonctions x ( t )
calcules par les modles de mmes noms en minimisant lerreur Er entre la courbe thorique
et la courbe exprimentale. Le modle MP50% est issu du modle MP en minimisant lerreur
ErMP sur lintervalle x S [0;0,5] au lieu de x S [0;0,95] . La courbe ME5ciel qui reprsente
la fonction y C ( t ) , la concentration relative en oxygne dans le ciel gazeux, est calcule par le
modle ME5 partir de Eq. 102. La roxygnation exprimentale dont la courbe
reprsentative est porte sur la Figure 25 est influence de manire caractristique par
laration de surface : pour t [0;20s] la courbe de roxygnation peut tre modlise par un
second ordre, reprsent par la courbe MP50%, puis elle prsente une rupture (ici vers
t=25 s). Par rapport un second ordre (reprsent par les courbes MP50% ou MP), la
saturation est atteinte exprimentalement avec un retard, qui correspond au temps ncessaire
permettant la saturation simultane du liquide et du ciel en interaction avec lui.
Sur la Figure 25 le modle MP ne reprsente pas lexprience et sous-estime la valeur
de KLa (on obtient KLa=0,04 s-1). Il est possible que le mme modle utilis sur la premire
partie de la roxygnation, MP50%, prdise correctement la valeur de KLa (on obtient
KLa=0,32 s-1). Mais un modle prenant en compte laration de surface, comme le modle
ME5, est plus intressant car il renseigne sur les deux types de transfert : dune part entre le
gaz du diffuseur et le liquide, dautre part entre le ciel gazeux et le liquide.
138
Figure 25. Influence de la concentration en oxygne dans le ciel gazeux lors dune roxygnation
avec entranement de surface. Comparaison entre une courbe exprimentale et les modles MP et
ME5. VL=10 L, eau distille, N=1000 rpm, Qd=0,0485 L.s-1, VG=1,4 L, VC=11,4 L.
La Figure 26 compare pour des conditions opratoires fixes (e=10100 W.m-3 ;

Us=0,42 cm.s-1) la pertinence des modles prenant en compte lentranement de surface, sur
milieu coalescent (Figure 26A et B) et sur milieu non-coalescent (Figure 26C et D). Les
modles MP et MH sont reports titre de comparaison. Les graphes A et C prsentent les
modles pour lesquels lcoulement du gaz du diffuseur est de type homogne ; les graphes B
et D les modles pour lesquels lcoulement du gaz du diffuseur est de type piston.
139
x SM
x SM
xs
x SM
x SM
xs
xs
xs
Figure 26. Pertinence des modles dentranement de surface pour la modlisation dune
roxygnation. Milieu coalescent (eau) (A, B) et milieu non-coalescent (Na2SO4 50 g.L-1) (C, D).
Modles de type homognes (A, C) et de type piston (B, D). VL=10 L, e=10100 W.m-3 (soit N=1000
rpm), Us=0,42 cm.s-1.
Il apparat que les modles prenant en compte lentranement de surface sont plus
proches des roxygnations exprimentales que les modles MH et MP. Ceci est confirm par
la lecture des erreurs de minimisation Er (Eq. 81) entre courbe exprimentale et courbe
thorique, reportes sur le Tableau 12 pour le milieu coalescent et le Tableau 13 pour le
milieu non-coalescent. Cependant ces erreurs sont 4 12 fois suprieures en milieu noncoalescent quen milieu coalescent.
En milieu coalescent, les erreurs ErME4 et ErME5 sont 12 et 17 fois plus grandes que
lerreur ErME1 ; elles sont 4 fois plus grandes en milieu non-coalescent : le modle ME1
140
proposant lhomognit du gaz du diffuseur semble donc mieux reprsenter les

roxygnations que les modles ME4 et ME5 de type piston.
Le Tableau 12 et le Tableau 13 rapportent galement les paramtres des
lidentifications paramtriques. Les bornes des intervalles de dfinition de chaque paramtre
sont des valeurs extrmes de la littrature ; elles sont rapportes dans la premire ligne du
tableau (par exemple la valeur de KLa permettant de minimiser lcart entre la courbe
thorique et la courbe exprimentale, c'est--dire de minimiser la valeur de lerreur ErMP, est
recherche sur lintervalle [0,01 s-1 ; 2 s-1]).
Tableau 12. Paramtres et erreurs relatives des modles prsents pour le milieu
coalescent (Figure 26A et B). VL=10 L, e=10100 W.m-3, Us=0,42 cm.s-1, VG=1,25 L,
VC=11,55 L. KLa exprims en s-1. Er erreur relative de la minimisation entre thorie et
exprience (Eq. 81).
Modle
0,01<KLa<2 0,01<KLad<2 0,01<KLae<1 0,01<Qe/Qd<1,5
Er
MP
0,1042
0,0013
MH
0,2313
0,0038
ME1
0,3084
0,13
0,00007
ME4
0,1558
0,38
0,00087
ME5
0,156
0,0262
0,0012
Tableau 13. Paramtres et erreurs relatives des modles prsents pour le milieu noncoalescent (Figure 26C et D). VL=10 L, e=10100 W.m-3, Us=0,42 cm.s-1, VG=2,8 L,
VC=10 L. KLa exprims en s-1. Er erreur relative de la minimisation entre thorie et
exprience (Eq. 81).
Er
Modle
0,01<KLa<2 0,01<KLad<2 0,01<KLae<1 0,01<Qe/Qd<1,5
MP
0,0566
0,013
MH
0,1482
0,0043
ME1
0,2196
0,19
0,00099
ME4
0,103
0,78
0,004
ME5
0,1455
0,0593
0,0042
Le modle ME4 donne des valeurs de KLa trs petites par rapport la littrature
(Eq. 111 ; Eq. 112). Dautre part les valeurs du rapport Qe/Qd entre le flux entran et le flux
diffus semblent trs leves par rapport aux travaux de Veljkovi et Skala (1989). Le modle
ME4 nest donc par retenu.
Les modles ME1 et ME5 semblent donner des valeurs cohrentes avec la littrature,
bien que trs diffrentes et difficilement comparables entre elles. A ce stade de linvestigation,
les modles ME1 et ME5 sont donc retenus pour tre compars entre eux et avec la littrature.
141
III.2.4.2. Valeurs de KLa et comparaison avec la littrature
Nous prsenterons conscutivement

- les rsultats en milieu coalescent
- les rsultats en milieu non-coalescent, dans une configuration de racteur deux ou trois
turbines, et en ajoutant la prise en compte dans le modle de la rtention gazeuse permanente.
a) Milieu coalescent
En milieu coalescent, les expriences de roxygnation ayant servies ltablissement

de la Figure 24A sont ici rexploites par les modles prenant en compte lentranement de
surface ; les valeurs de KLa/US0,4 ainsi obtenues sont prsentes sur la Figure 27 en fonction
de e. Les corrlations obtenues pour e<4000 W.m-3 sur la Figure 24A par le modle MP
(Eq. 117) et par le modle MH (Eq. 118) sont extrapoles pour e>4000 W.m-3 sur la
Figure 27 ; le domaine dextrapolation est reprsent en trait pointill.
142
10
modles homognes
KLa/Us0.4, m-0.4.s-0.6
ME1
MH30%
Eq. 118
0.1
100
1000
10000
e, W.m
100000
-3
10
B
modles pistons
KLa/Us0.4, m-0.4.s-0.6
ME5
MP30%
Eq. 119
Eq. 117
0.1
100
1000
10000
e, W.m
100000
-3
Figure 27. Comparaison des valeurs de KLa obtenues par les modles dentranement de
surface en milieu coalescent avec les valeurs obtenues sans entranement de surface
faible puissance dissipe. A modles de type homogne, B modles de type piston.
Les valeurs de KLa obtenues par les modles prenant en compte lentranement de
surface (ME1 et ME5) et par la modlisation de la rponse initiale (MH30% et MP30%)
suivent les corrlations tablies faible puissance dissipe (Eq. 117 et Eq. 118).
Contrairement aux modlisations qui ne prennent pas en compte lentranement de surface,
prsentes Figure 24A, la dcroissance des valeurs de KLa forte puissance dissipe nest
plus observe.
143
Cependant, lvolution en fonction de e des valeurs de KLa/US0,4 calcules par les

modles de type homogne (Figure 27A) et le modle MP30% (Figure 27B) prsente une
rupture vers e=4000 W.m-3. Par contre, les valeurs de KLad identifies par le modle ME5
voluent uniformment en fonction de e et peuvent tre reprsents par lquation (R2=0,98) :
KLad=0,0059e0,62Us0,4
(119)
La littrature ne fait pas tat dune telle relation pour KLad, mais nous avons la conviction que
cette quation tablie sans entranement de surface et faible puissance dissipe, peut tre
utilise pour le KLa du diffuseur, et continue dtre valable forte puissance dissipe.
Les erreurs ErME1 et ErME5 sont prsentes sur la Figure 28 en comparaison avec les
erreurs des modles ne considrant pas laration de surface. Pour e>4000 W.m-3, c'est--dire
en prsence dentranement de surface, les erreurs obtenues par les modles ME sont au moins
10 fois infrieures celles des modles MH et MP, et infrieures ou similaires celles des
modles bass sur la rponse initiale. Il apparat que les erreurs obtenues par les modles de
types homogne, ErMH30% et ErME1, sont plus petites que celles obtenues par les modles
de type piston, ErMP30% et ErME5.
0.1
0.01
0.01
0.001
0.001
0.0001
Er
Er
0.1
ErMH
0.0001
ErMH30%
0.00001
100
1000
e, W.m
ErMP30%
ErME1
10000
-3
100000
ErMP
0.00001
100
ErME5
1000
10000
e, W.m
-3
100000
Figure 28. Comparaison des carts relatifs entre les courbes de roxygnation exprimentales et les
courbes obtenues par les modles de type homogne (A) et piston (B) en milieu coalescent.
La Figure 29 compare les paramtres daration de surface des modles ME1 (Qe/Qd)
et ME5 (KLae/KLad) aux rsultats de Veljkovi et coll. (1991) (1 tRu ; dT=0,2 m). Les
paramtres daration de surface sont prsents en fonction de e et Us qui sont les paramtres
les plus influents sur laration de surface. Pour les deux modles on note une similitude de
lvolution du paramtre dentranement de surface : il augmente surtout partir de la vitesse
dentranement critique vers e=4000 W.m-3, et diminue avec le flux daration. Cette
volution est en accord avec la littrature (les diffrences peuvent tre imputes aux
144
diffrences de configuration), ce qui valide lestimation du paramtre Qe calcul par le modle

ME1, et qui donne au paramtre KLae, introduit dans le modle ME5, un sens cohrent avec le
phnomne daration de surface.
1
ME1
Us=0,0006 m.s -1
Us=0,0014 m.s -1
Qe/Qd , KL ae/ KL ad
Us=0,0042
Us=0,007
ME5
Us=0,0014
0.1
Us=0,0042
Us=0,007
Us=0,002
Veljkovic
et coll., 1991
Us=0,004
0.01
100
1000
10000
100000
-3
e, W.m
Figure 29. Comparaison des paramtres daration de surface en milieu coalescent

avec les courbes de Veljkovi et coll. (1991), en fonction de la vitesse superficielle
daration Us (m.s-1). VL=10 L.
Il peut tre remarqu que les valeurs de KLa obtenues par le modle MP (Figure 24A)
auraient t mieux corrles par la relation :
KLa=0,0028e0,61Us0,68
(120)
pour laquelle R2=0,99, que par Eq. 117, pour laquelle R2=0,88. Cependant, les valeurs de
KLa/Us0,4 calcules par le modle MP et qui taient situes en dessous de Eq. 117 pour
e<4000 W.m-3 sur la Figure 24A ont t mesures faible flux daration (Us=0,0014 m.s-1),
alors que les valeurs situes au dessus de Eq. 117 ont t mesures fort flux daration
(Us=0,0042 m.s-1). Les valeurs de KLad/Us0,4 calcules pour e<4000 W.m-3 par le modle
ME5 sont maintenant parfaitement corrles par Eq. 119. On remarque alors que les
roxygnations ralises Us=0,0014 m.s-1, la valeur du paramtre daration de surface est
plus leve que pour les roxygnations correspondant Us=0,0042 m.s-1 (Figure 29). Les
modles dentranement de surface signalent donc la prsence daration de surface par
diffusion travers la surface libre du liquide faible puissance dissipe. Ce phnomne est
souvent ignor dans la littrature, en particulier parce que lutilisation dun modle de
145
transfert simple coupl une corrlation trs flexible telle que Eq. 120, masque une nonidalit, prsent Figure 24A, qui signale laration de surface.
Le choix du modle dentranement de surface en condition daration simultane par
le diffuseur repose sur trois points : pour chaque roxygnation lcart entre la courbe
exprimentale et la courbe du modle est minimum ; lensemble des valeurs du KLa du
diffuseur suit la relation Eq. 21 tablie en labsence dentranement de surface ; le paramtre
dentranement de surface correspond aux relations dcrites dans la littrature. Pour toutes ces
raisons, le modles ME5 est choisit dans la suite de ltude en milieu coalescent.
b) Milieu non-coalescent
En milieu non-coalescent, les expriences de roxygnation ayant servies

ltablissement de la Figure 24B sont ici rexploites par les modles prenant en compte
lentranement de surface ; les valeurs de KLa/US0,4 ainsi obtenues sont prsentes sur la
Figure 30 en fonction de e. Les quations obtenues pour 1000<e<4000 W.m-3 sur la Figure 18
par le modle MP (courbe BG+OS_MP, Eq. 115) et par le modle MH (courbe BG+OS_MH,
Eq. 116) sont extrapoles pour e<900 W.m-3 et e>4000 W.m-3 sur la Figure 30 ; le domaine
dextrapolation est reprsent en trait pointill.
Par rapport la Figure 24B, la dviation des valeurs de KLa par rapport Eq. 21
forte puissance dissipe est lgrement corrige pour e<4000 W.m-3, surtout pour le modle
piston, mais cette tendance existe encore largement pour e>4000 W.m-3 : les valeurs de KLa
calcules sont jusqu plus de 10 fois plus petites que lextrapolation forte puissance
dissipe de Eq. 115 et Eq. 116.
146
100
KLa/Us0.4, m-0.4.s-0.6
modles homognes
ME1
MH30%
10
Eq. 116
0.1
100
1000
10000
e, W.m
100000
-3
100
KLa/Us0.4, m-0.4.s-0.6
modles pistons
ME5
MP30%
10
Eq. 115
1
0.1
100
1000
10000
e, W.m
100000
-3
Figure 30. Comparaison des valeurs de KLa obtenues par les modles dentranement de
surface en milieu non-coalescent avec les valeurs obtenues sans entranement de surface
faible puissance dissipe. A modles de type homogne, B modles de type piston.
ErME1 et ErME5 (Figure 31) sont globalement plus leves que les erreurs mesures
en milieu coalescent. Bien que les erreurs des modles de type homogne (Figure 31A) soient
globalement trs faibles, ces modles ne sont pas reprsentatifs du phnomne dentranement
de surface en prsence daration par le diffuseur car lvolution de KLa en fonction de e est
en dsaccord avec la littrature (Eq. 21). Contrairement au milieu coalescent, les paramtres
147
dentranement de surface (Figure 32) ont tendance diminuer partir de e=10000 W.m-3 :
cette diminution est envisageable forte puissance dissipe cause de laugmentation de la
hauteur de phase disperse plus de 15 cm au dessus de la turbine, ce qui limite lentranement
0.1
0.1
0.01
0.01
0.001
0.001
Er
Er
de surface.
ErMH
0.0001
0.00001
100
ErMP30%
ErME1
1000
ErMP
0.0001
ErMH30%
10000
e, W.m
-3
100000
0.00001
100
ErME5
1000
e, W.m
10000
-3
100000
Figure 31. Comparaison des carts relatifs entre les courbes de roxygnation exprimentales et les
courbes obtenues par les modles de type homogne (A) et piston (B) en milieu non-coalescent.
10
ME1
Qe/Qd, KLae/KLad
Us=0,14 m.s -1
Us=0,28
Us=0,42
0,7
ME5
Us=0,14
0.1
Us=0,28
Us=0,42
Us=0,7
0.01
100
1000
10000
e, W.m
100000
-3
Figure 32. Paramtres daration de surface en milieu non-coalescent en fonction de la

vitesse superficielle daration Us (cm.s-1). VL=10 L.
148
c) Modification de lentranement de surface par lajout dune troisime turbine
Sur la Figure 33 les paramtres KLa et Qe/Qd calculs par le modle ME1 sont
compars pour deux et trois turbines Rushton, en milieu non-coalescent (Na2SO4 50 g.L-1,
VL=10 L). Il a t vu que le modle ME1 ne donne pas satisfaction en milieu non-coalescent,
cependant ltude de la Figure 33 permet de pointer une tendance gnrale : lajout dune
troisime turbine favorise toujours laration de surface, mme si la turbine suprieure ne
plonge pas dans le liquide, comme cest le cas pour e10000 W.m-3. Sur la Figure 33 le
rapport Qe/Qd augmente avec le nombre de turbines mme en labsence dentranement de
surface ; les courbes de roxygnation (non-montr) atteignent toujours la saturation plus
rapidement en prsence de deux turbines quen prsence de trois turbines. Dautre part, alors
que le rapport Qe/Qd dcrot avec e en prsence de deux turbines, il crot avec e en prsence
de trois turbines. Il est possible quen prsence de deux turbines lentranement de surface
diminue forte puissance dissipe cause du trs fort volume de gaz dispers : pour la plus
forte valeur de puissance dissipe sur la Figure 33, avec un volume de gaz dispers de 4 L, la
surface libre se trouve 19 cm au dessus de la turbine, leffet de pompage du ciel par la
turbine est donc considrablement rduit. Avec trois turbines, le volume de gaz dispers est
plus lev (6 L), mais la distance entre la turbine et la surface libre est rduite (9 cm), et donc
leffet de pompage du ciel est plus fort.
10
KLa, Qe/Qd, VG
3 turbines
-1
Kla, s
Qe/Qd
VG, L
2 turbines
-1
Kla, s
0.1
Qe/Qd
VG, L
0.01
100
1000
10000
e, W.m
100000
-3
Figure 33. Modification du transfert par lajout dune troisime turbine. Dtermination
par le modle ME1. Na2SO4 50 g.L-1, VL=10 L, Us=0,42 cm.s-1.
149
d) Prise en compte de la rtention gazeuse permanente
Il est suppos ce niveau que le dcalage entre les valeurs de KLa obtenues en milieu
non-coalescent par le modle MP et la courbe dcrite par Eq. 115 est d dune part la
prsence dentranement de surface ce transfert t pris en compte en modifiant le modle
MP pour le modle ME5 et dautre part la prsence dune rtention gazeuse permanente
forme de microbulles.
Les modles MP+mb et ME5+mb dcoulent respectivement des modles MP et ME5,
et prennent en compte la prsence de microbulles pour la dtermination de KLa. A loppos,
les valeurs de KLa obtenues par la mthode BG+OS sont indpendantes de la prsence de
microbulles, car c'est une mthode statique (I.2.1.3). Les valeurs de KLa obtenues par
lensemble des modles sont compares sur la Figure 34. Comme sur la Figure 30, la courbe
dcrite par Eq. 115 est extrapole sur lensemble des valeurs de e.
Le modle MP+mb donne des valeurs de KLa (dtermines par une mthode
dynamique) proches de celles corrles par Eq. 115 (modle MP, mthode BG+OS). Cette
similitude entre les deux situations est attendue : la prise en compte de la rtention gazeuse
permanente corrige la mthode dynamique pour retrouver les rsultats obtenus par la mthode
statique (Vasconcelos et Alves, 1991).
Par contre, le modle dentranement ME5+mb donne les mmes valeurs de KLa que
le modle MP+mb en estimant KLae au minimum de son intervalle de dfinition, ce qui
simplifie le modle ME5+mb en le modle MP+mb. Contrairement aux erreurs obtenues sans
tenir compte des microbulles (Figure 31B), les erreurs ErMP+mb et ErME5+mb sont trs
faibles, toujours infrieures 10-3.
La courbe dcrite par Eq. 115 nest pas atteignable par le modle ME5+mb. Il a t
dmontr par ailleurs que si la mthode BG+OS ne permet pas non plus d'atteindre les valeurs
corrles par Eq. 115 pour e>4000 W.m-3, ce nest pas faute dignorer lentranement de
surface, car dans ce cas lentranement de surface augmente les valeurs dj affiches. Il
semble donc que le profil gazeux en milieu non-coalescent soit trs complexe et quune
modlisation plus fine soit ncessaire. Les mmes conclusions sont obtenues en tudiant les
modles de type homogne (MH+mb, ME1+mb, compars avec la courbe BG+OS_MH).
Par analogie avec le milieu coalescent, Eq. 115 tablie en supposant un coulement
piston du gaz est extrapole sur lensemble des puissances dissipes utilises pour dcrire
lvolution de KLa en milieu non-coalescent.
150
100
KLa/Us0.4, m-0.4.s-0.6
10
MP+mb
ME5+mb
ME5
Eq. 115
0.1
100
1000
10000
e, W.m
100000
-3
Figure 34. Correction du modle MP par la prise en compte des microbulles.

tendance dcrite par le modle BG+OS_MP pour e>4000 W.m-3.
III.2.5. Synthse et conclusions
Les travaux prliminaires, ncessaires ltude du transfert doxygne dans le

racteur, ont permis dtablir :
La puissance dissipe dans le liquide ar, agit par deux ou trois turbines Rushton, peut
tre calcule par la relation de Hughmark (1980) en prenant pour nombre de puissance total
pour les trois turbines Np=10.
Ltude des fortes puissances dissipes rvle lexistence :
- dune vitesse critique dentranement de surface (Veljkovi et coll., 1991) : NE=700

rpm, soit e=3650 W.m-3 (pour VL=10 L).
- une hauteur de liquide au dessus de la turbine la plus haute partir de laquelle
lentranement de surface devient inexistant dans les conditions dagitation
considres : 19 cm pour une solution Na2SO4 50 g.L-1.
Dans les milieux de rfrence, la rtention gazeuse augmente avec la force ionique de la
solution, et sexprime en fonction de la puissance dissipe, par analogie avec la modlisation

de KLa (Linek et coll., 1987), selon une relation du type :
=eUs0,4
o et dpendent de la force ionique du milieu.
151
La quantification du coefficient de transfert KLa en milieux minraux de rfrences a

t entreprise en milieux coalescent et non-coalescent sur la gamme de puissance dissipe
e[300 ; 35000 W.m-3]. Les rsultats sont compars Eq. 21 : KLa=eUs (Linek et coll.,
1987). Au regard des expriences ralises, il apparat que :
La mthode statique BG+OS ne permet la quantification de KLa que sur les milieux non-
coalescents : les valeurs obtenues sont cohrentes avec Eq. 21 pour e<4000 W.m-3, mais pour
e>4000 W.m-3 les valeurs obtenues dcroissent avec e.
La mthode dynamique de roxygnation est teste avec les modles MH et MP : les
valeurs de KLa obtenues sont cohrentes avec Eq. 21 en milieu coalescent uniquement, pour
e<4000 W.m-3 ; pour e>4000 W.m-3 les valeurs obtenues dcroissent avec e.
Parmi les 5 modles prenant en compte lentranement de surface, seul le modle ME5 est
capable destimer correctement KLa sur toute la gamme de puissance dissipe, mais seulement
en milieu coalescent. En milieu non-coalescent lcart entre les valeurs obtenues et Eq. 21
pourrait sexpliquer par la prsence de microbulles qui nest pas prise en compte par le
modle. La prsence des microbulles a t modlise mais lidentification paramtrique
choue cause de la difficult dobtention des donnes exprimentales, comme le volume
total occup par les microbulles.
En conclusion, les mthodes qui estiment des valeurs de KLa en accord avec la
littrature (Eq. 21) sont rappeles dans le Tableau 14, selon la coalescence ou non du milieu,
et le niveau de puissance dissipe.
Dans la littrature le domaine e[4000 ; 35000 W.m-3] tant peu explor, il a t
possible de comparer nos rsultats avec ceux de Linek et coll. (1987) en supposant quils
taient extrapolables sur le domaine e[3000 ; 35000 W.m-3]. Il ressort que les modles
utilisant lcoulement piston du gaz sont plus proches des travaux de Linek et coll. (1987) que
ceux considrant la phase gazeuse homogne. Dans la suite de ltude les modles suivants
seront donc utiliss pour dcrire KLa :
pour le milieu coalescent, Eq. 119 : KLad=0,0059e0,62Us0,4 (rgression des valeurs obtenues
par le modle ME5).
pour le milieu non-coalescent, Eq. 115 : KLa=0,0022e0,92Us0,4 (rgression des valeurs
obtenues par le modle MP avec la mthode BG+OS), extrapole pour e>4000 W.m-3.
152

Tableau 14. Rcapitulatif des modles et mthodes exprimentales qui estiment des valeurs de KLa
en accord avec Eq. 21. + / - : estimation respectivement en accord ou en dsaccord avec Eq. 21. Si
ncessaire une distinction est faite entre les faibles puissances dissipes (e<4000 W.m-3) dans la
partie gauche de la case et les fortes puissances dissipes (e>4000 W.m-3) dans la partie droite de la
case. Les mthodes exprimentales sont (R) la roxygnation et (BG+OS) le bilan gazeux avec
oxydation par le sulfite.
MH
Milieu coalescent (R)
Milieu non-coalescent
(R et BG+OS)
+
+
(BG+OS)
MP
-
+
+
(BG+OS)
ME5
-
+
+
(R)
La difficult estimer correctement KLa souligne que le modle de lcoulement

gazeux en racteur multiturbine est trs complexe, et dautant plus complexe que le milieu est
non-coalescent et que la puissance dissipe est forte. En milieu coalescent le modle ME5 est
adopt car il reprsente suffisamment bien la situation pratique ; un modle plus satisfaisant
mcanistiquement et qui sapprocherait plus de la ralit hydrodynamique, introduirait un
nombre de paramtres levs auxquels il serait difficile dans nos conditions exprimentales
minimales dassigner une valeur.
153
III.3. Quantification du transfert en racteur en condition de culture

microbienne
Dans ce chapitre, le transfert doxygne est tudi en prsence de raction biologique.
Lanalyse sappuie sur la comparaison avec les rsultats obtenus dans le chapitre prcdent
sur milieux minraux afin de dgager limpact des cellules considres en tant que phase
solide ractive sur le transfert. Les proprits physico-chimiques du milieu (viscosit,
composition) et leurs volutions tiennent un rle cl dans cette analyse. De ces proprits
dpendent les phnomnes de coalescence, les diamtres de bulles, et la composition des
interfaces. Paralllement ces phnomnes physiques, lactivit biologique des cellules
(consommation doxygne, excrtion de molcules) interfre aussi avec le transfert
doxygne.
S. cerevisiae et E. coli sont utiliss comme microorganismes modles. Des cultures
dA. niger sont proposes en complment afin dintgrer les modifications rhologiques du
mot sur le transfert doxygne. Notre investigation se base sur 6 cultures dE. coli (ralises
par J.-L. Uribelarrea), 3 cultures de S. cerevisiae (ralises par par L. Faure), et 3 cultures dA.
niger (ralises DSM-Delft).
Les coefficients de transfert doxygne calculs en ligne, KT, sont interprts par
rapport la dynamique microbienne et lvolution des proprits des milieux biologiques en
vue de proposer une modlisation de KT.
III.3.1. Cultures de microorganismes en condition de forte productivit
Pour mettre en avant linfluence de la raction biologique sur le transfert doxygne,

les rsultats de trois cultures en mode fed-batch, reprsentatives de cultures "non visqueuses"
fort flux de transfert doxygne, sont ici dtailles : deux cultures dE. coli, dsignes A et
B, prsentes Figure 35 et Figure 36, respectivement, et une culture de S. cerevisiae, dsigne
S. cerevisiae G, prsente Figure 37.
III.3.1.1. Cintiques microbiennes
Les hautes densits cellulaires sont obtenues dans une stratgie en plusieurs tapes.
Dans la premire tape, nomme phase 1, le taux de croissance est lev, ceci jusqu' ce que
la concentration cellulaire X atteigne 30 ou 40 gMS.L-1. A ce moment, la capacit de transfert
du bioracteur devient limitante car les paramtres de contrle du transfert, la vitesse
dagitation et le flux daration, sont leur niveau maximum alors que loxygne dissous dO2
154
atteint la concentration critique en dessous de laquelle loxygne est limitant pour la

croissance. Dans la seconde tape, nomme phase 2, ou bien une limitation en substrat (E. coli
A, S. cerevisiae E) ou bien une baisse de temprature (E. coli B) est utilise pour ralentir le
mtabolisme et donc rduire la consommation volumique doxygne qO2, ce qui permet de
retrouver une concentration en oxygne suprieure la concentration critique, et finalement
de poursuivre la croissance cellulaire jusquaux hautes concentrations, mais un taux de
croissance rduit par rapport la phase 1.
Les valeurs maximales des concentrations cellulaires X, des consommations
volumiques doxygne qO2, et des coefficients de transfert doxygne KT obtenues dans nos
cultures sont indiques dans le Tableau 15. En comparaison des travaux de la littrature sur le
transfert doxygne en condition de culture cellulaire (Tableau 4), les valeurs obtenues ici
sont 5 10 fois suprieures. Seuls Castan et coll. (2002) considrent le transfert doxygne
dans des conditions proches des ntres mais sans que ce soit lobjet de leur tude c'est-dire pour une concentration maximum en biomasse de 80 gMS.L-1 et une consommation
volumique doxygne maximum de 0,35 mol.L-1.h-1 (estime partir des travaux des auteurs
en prenant pour taux de conversion de loxygne en biomasse 1 g O2/gMS et en ngligeant
lnergie de maintenance). Notre tude de transfert sinscrit donc en conditions de haute
concentration cellulaire et de fort flux de transfert. De plus, les travaux prsents sont mens
dans la dynamique des cultures fed-batch alors que la littrature prfre les systmes continus
et dtachs de toute condition de culture.
Tableau 15. Rsultats exprimentaux : valeurs maximales
de X, qO2 et KT. Cultures ralises en mode fed-batch.
Culture
E. coli A
E. coli B
E. coli C
E. coli D
E. coli E
E. coli F
S. cerevisiae G
S. cerevisiae H
S. cerevisiae I
A. niger J
X,
gMS.L-1
52
64
32
81
78
69
55
75
50
40
qO2,
mol.L-1.h-1
0,38
0,60
0,30
0,5
0,42
0,45
0,35
0,16
0,18
0,06
KT,
s-1
0,70
1,18
0,66
0,85
0,81
0,87
0,75
0,47
0,38
0,22
La phase 1 de la culture E. coli A (Figure 35a) dure 7 heures pendant lesquelles la

biomasse crot avec un taux de croissance compris entre 0,5 et 0,65 h-1 de 0,7 34 gMS.L-1.
La consommation volumique doxygne qO2 atteint alors 0,38 mol.L-1.h-1 et loxygne dissous
155
dO2 est proche de la concentration critique de 5% (Figure 35d). La phase 2 est initie t=7 h
en rduisant lalimentation en substrat. Lalimentation en substrat est ensuite limite et
augmente de faon exponentielle (Figure 35b) ; le taux de croissance vaut alors 0,25 h-1.
Pendant toute la culture le quotient respiratoire QR vaut 1,050,03.
La culture E. coli B (Figure 36) est similaire la culture E. coli A, mais la phase 1
stend sur 8 h au cours desquelles la biomasse crot de 2,4 58 gMS.L-1 et qO2 atteint 0,60
mol.L-1.h-1. La phase 2 est provoque par une baisse de temprature de 37C 27C : le taux
de croissance est alors compris entre 0,15 et 0,25 h-1.
La masse dthanol dans le milieu (Figure 36d) est utilise comme indicateur
biologique de la limitation en oxygne (Vollbrecht, 1982). La concentration en acide actique
a galement t mesure (sa production atteint 15 g en fin dexprience) mais sa
reconsommation privilgie en condition de limitation par le substrat interfre avec son
emploi comme indicateur. Entre t=7,5 et t=8 h, d02 atteint 5%, et paralllement la masse
dthanol dans le racteur passe de la limite de dtectabilit (correspondant 1,5 g) 2,5 g.
La faible quantit de co-mtabolites traduit lorientation majoritaire du flux de carbone vers la
biomasse. Cette production est relativement basse (Neidhardt et coll., 1990) et atteste de la
matrise de laration pour maintenir globalement une production non-limite en oxygne. En
particulier les cultures dE. coli sont conduites des concentrations en oxygne dissous
infrieures 20% sans rduction apparente ni du taux de croissance, ni de la productivit
volumique de biomasse qX, alors que certains auteurs (Konstantinov et coll. (1990), Castan et
coll. (2002)) observent des limitations en oxygne pour des valeurs de dO2 infrieures 20%
( une pression de travail de 1 atm).
Remarque. La sonde oxygne tant situe en bas du racteur, on peut supposer que la
concentration en oxygne dissous dans la phase disperse situe dans le haut du racteur est
infrieure celle mesure par la sonde, le gaz sappauvrissant en oxygne lors de son
dplacement le long de laxe du racteur. Il semble cependant que ce gradient axial soit faible,
car mme lorsque dO2 atteint 5% ( t=5,8 h et t=8h) (Figure 36d) la production dthanol reste
nulle ou faible.
Le taux de croissance de la culture S. cerevisiae G (Figure 37), compris entre 0,2 et
0,25 h-1 durant la phase 1, est infrieur celui des cultures dE. coli. Durant cette phase qui se
termine t=14,5 h, la concentration en biomasse augmente de 2 46 gMS.L-1 et qO2 atteint
0,35 mol.L-1.h-1. La phase 2 est initie par une limitation en substrat. Pendant toute la culture,
QR est gal 1,080,03.
156
0,4
30
0,3
20
0,2
10
0,1
15
0,02
0,6
11
0,4
0,0
10
0,2
40
0,006
30
0,004
20
0,002
10
0,000
dO2 , %
0,5
0,0
0,0
Us, m.s-1
0,00
1,0
QR
40
Substrat, L.h-1
Sels, L.h-1
0,04
0,6
0,5
10
0,06
Phase 2
50
20
0,2
0,0
Phase 1
e, kW.m-3
60
1,5
qO2, mol.L-1.h-1
25
0,7
VL , L
70
80
20
60
15
40
10
20
O2 out, %
0,4
30
X , gDW.L-1
, h
-1
0,6
qX , g.L-1.h-1
0,8
0
0
10
Temps, h
Figure 35 : Culture fed-batch de E. coli (culture A).
a) Croissance cellulaire : taux de croissance ; productivit volumique de biomasse qX ; concentration
en biomasse X (gramme de cellules sches par litre de suspension) ; consommation volumique
doxygne qO2 ; quotient respiratoire QR.
b) Alimentation : dbits en solution de sels et en solution de substrat (glucose) ; volume total de la
suspension VL.
c) Paramtres daration : vitesse superficielle de lair Us ; puissance dissipe e. T=37C ; P=0,5 bar.
d) Transfert doxygne : oxygne dissous (exprim comme pourcentage de la saturation) dO2 ;
pourcentage doxygne dans le flux gazeux en sortie de racteur O2 out. La ligne mixte reprsente la
concentration critique en oxygne (5%).
157
0,5
40
0,4
30
0,3
20
0,2
10
0,1
10
0,2
Substrat , L.h-1
0,06
0,04
0,02
Temp., C
0,00
36
34
32
30
28
0,6
11
0,4
0,0
10
0,2
40
0,006
30
0,004
Phase 2
Phase 1
0,002
20
10
0,000
dO2 ,%
26
0,0
0,0
38
Us, m.s-1
Sels, L.h
-1
0,0
0,5
80
20
60
15
40
10
20
0
0
4
3
2
Ethanol, g
15
1,0
QR
50
20
0,1
0,6
qO2, mol.L-1.h-1
0,3
60
VL , L
0,4
25
1,5
0,7
e, kW.m-3
, h
-1
0,5
70
O2 out, %
0,6
qX, g.L-1.h-1
0,7
30
X, gDW.L-1
0,8
1
0
10
Temps, h
Figure 36 : Culture fed-batch de E. coli (culture B).
suspension VL.
c) Paramtres daration : temprature Temp. ; vitesse superficielle de lair Us ; puissance dissipe e.
P=0,5 bar.
pourcentage doxygne dans le flux gazeux en sortie de racteur O2 out (la ligne mixte reprsente la
concentration critique en oxygne, 5%) ; masse totale dthanol en solution.
158
10
0,06
0,04
0,02
0,4
Phase 1
30
10
Substrat, L.h-1
Sels, L.h-1
0,0
40
20
0,2
0,1
0,5
0,0
0,6
11
0,4
0,0
10
0,2
40
0,006
30
0,004
20
0,002
10
0,000
dO2 , %
0,5
0,2
0,1
0,0
Us, m.s-1
0,00
0,3
1,0
QR
15
50
qO2 , mol.L-1.h-1
20
0,6
VL , L
60
1,5
e, kW.m-3
0,3
25
0,7
80
20
60
15
40
10
20
O2 out, %
0,4
70
Phase 2
0,5
, h
-1
0,6
30
X, gDW.L-1
0,7
qX , g.L-1.h-1
0,8
0
0
10
12
14
16
Temps, h
Figure 37 : Culture fed-batch de S. cerevisiae G.
c) Paramtres daration : vitesse superficielle de lair Us ; puissance dissipe e. T=30C ; P=0,3 bar.
pourcentage doxygne dans le flux gazeux en sortie de racteur O2 out. La ligne mixte reprsente la
concentration critique en oxygne (10%).
159
III.3.1.2. Comportement rhologique des milieux microbiens
Ltude du comportement rhologique des milieux microbiens est ralise pour deux
raisons. Dabord parce que la viscosit du milieu doit tre prise en compte pour la
comprhension des mcanismes de transfert. Aussi parce que les cultures qui sont compares
ici ont chacune t ralises leur temprature optimale de croissance ; les valeurs des
coefficients de transfert doxygne, KT, ont donc t calcules en ligne des tempratures
diffrentes ; afin de pouvoir comparer ces valeurs entre elles, elles sont rapportes la
temprature de rfrence de 37C en utilisant la relation de OConnor (Aiba et coll., 1973)
(Eq. 47), base sur la thermodpendance de la viscosit du mot.
III.3.1.2.1. Influence de la concentration en biomasse
Les comportements rhologiques du mot de culture et du surnageant associ sont

simultanment dtermins afin de dgager linfluence de la prsence physique des cellules sur
le comportement rhologique du mot.
Les rhogrammes dun mot de culture dE. coli 60 gMS.L-1 et du surnageant associ
montrent que la contrainte de cisaillement est proportionnelle au gradient de vitesse et donc
que les comportements des milieux suivent la loi de Newton. Ces rsultats sont similaires
ceux obtenus lors de cultures de S. cerevisiae dans la mme gamme de concentration en
biomasse (Aldiguier, 2006).
La viscosit du mot est note X ; la viscosit du surnageant est note 0. Sur la
Figure 38, les viscosits apparentes des cultures dE. coli (mesures ralises 37C durant la
culture E. Coli F) et de S. cerevisiae (mesures ralises 30C durant la culture S. cerevisiae
H,) sont rapportes en fonction de la concentration cellulaire. Il apparat, conformment
Aldiguier (2006), que les mots suivent la loi dEinstein (Eq. 43) : X=0,014X+0,72 0,15
(avec X en gMS.L-1 et X en cp). Les viscosits des surnageants associs sont constantes et
identiques pour les deux cultures : 0=0,75 0,02 cp, valeur lgrement suprieure la
viscosit de leau 30C. On remarque que la viscosit de la suspension de S. cerevisiae
obtenue partir de cellules lyophilises resuspendues dans leau est lgrement infrieure
celle mesure en condition de culture, mme concentration en biomasse.
160
2
1,8
1,6
0 , X, cp
1,4
1,2
Culture E. coli (37C)
Surnagent E. coli (37C)

eau 30C
eau 37C
0,8
0,6
Culture levure (30C)

levures Lesaffre resuspendues (30C)
Surnagent levure (30C)
0,4
0,2
0
0
20
40
60
XMS, g.L
-1
80
100
Figure 38. Evolution de la viscosit des mots de culture et des surnageants associs en fonction de
la concentration cellulaire.
III.3.1.2.2. Influence de la temprature
La thermodpendance de la viscosit est tudie sur une suspension de levures S.

cerevisiae (levures sches actives, Saf-Levure, Lesaffre, dont la masse sche est value
95% de la masse totale (Loiez, 2003)) resuspendues dans leau. Il aparat que la loi
dArrhenius est applicable dans le domaine dtude (Figure 39) :
X (T , X ) = ( X ) e
E (X )
RT
o est une constante dpendante de X, et les valeurs de lnergie dactivation E sont

indiques sur la Figure 39 pour trois valeurs de la concentration en biomasse, en comparaison
avec leau.
161
1,8
E=-18,9
X=76 g/L
1,6
kJ.mol-1.K-1
57 g/L
E=-21,3
38 g/L
app
x , cp
1,4
kJ.mol-1.K-1
Eau
E=-22,3
kJ.mol-1.K-1
1,2
E=-16,1
kJ.mol-1.K-1
0,8
0,6
0,00315
0,0032
0,00325
0,0033
0,00335
0,0034
0,00345
1/T, C
Figure 39. Viscosit dune suspension de S. cerevisiae en fonction de la
temprature et de la concentration en biomasse.
Les valeurs de KT sont compares la temprature de 37C. Les valeurs de KT

mesures en culture de S. cerevisiae (30C) sont rapportes 37C par la relation de
OConnor (Aiba et coll., 1973) (Eq. 47) en utilisant E =22,3 kJ.mol-1.K-1 sur toute la dure
des cultures. Lerreur commise sur lvaluation du coefficient de OConnor en ngligeant la
croissance de la biomasse (app compris entre la valeur de leau et une concentration de 80
gMS.L-1) est infrieure 2%. Au cours de la culture E. coli B la temprature est rduite de
10C ; la valeur de KT est rapporte 37C en utilisant le mme coefficient que pour la
levure : la rhologie des deux cultures tant voisine, il est suppos que lerreur commise sur
en culture dE. coli est galement infrieure 2%.
III.3.2. Coefficient de transfert doxygne et dynamique microbienne
III.3.2.1. Rsultats
Lvolution des coefficients de transfert doxygne en fonction du temps est prsente

sur la Figure 40 pour les cultures E. coli A, E. coli B et S. cerevisiae A. Des valeurs de KT
leves de 0,7 s-1 pour E. coli A et S. cerevisiae A, et 1,2 s-1 pour E. coli B sont atteintes. Ces
valeurs sont trs leves par rapport celles mentionnes dans la littrature (Tableau 4). Seuls
Linek et coll. (1989, 2004, 2005) mesurent des valeurs de KLa proches de 1 s-1 mais toujours
en milieu salin (Na2SO4) et en labsence de microorganisme ; Castan et coll. (2002)
162
obtiennent des valeurs de KLa de 0,28 s-1 mais sans exploiter leurs rsultats en termes de
transfert doxygne. Les tudes de transfert doxygne en condition de culture cellulaire sont
en gnral caractrises par des valeurs de KLa infrieures 0,1 s-1, avec des microorganismes
resuspendus dans un milieu synthtique.
Ce travail se dmarque donc nettement des tudes antrieures par des valeurs de KT
une dizaine de fois plus leves, et mesures dans la dynamique des cultures microbiennes
fed-batch. Ces rsultats originaux dans des domaines dinvestigation peu exploits justifient
des problmatiques scientifiques dveloppes dans ce travail.
163
0,008
50
0,7
a
E. coli A
0,006
0,5
0,004
0,4
Us, m.s-1
10
0,2
Temps, h
0,1
0,000
0,0
0,008
50
0,7
10
1,2
b
E. coli B
0,006
0,5
0,004
0,4
Us, m.s-1
KT , s-1
0,8
0,6
Temps, h
20
10
0,2
30
0,1
0,000
0,0
0,008
50
0,7
c
S. cerevisiae G
0,006
0,4
0,002
0,2
0,0
0,000
2
10
Temps, h
12
14
30
20
e, kW.m-3
0,5
Us, m.s-1
KT , s-1
0,004
0,6
0,6
40
0,8
0,3
10
1,2
1,0
0,4
0,2
0,002
0,0
0,6
40
e, kW.m-3
1,0
0,3
qO2, mol.L-1.h-1
20
0,4
0,2
0,002
0,0
30
0,4
0,3
qO2, mol.L-1.h-1
KT , s-1
0,8
0,6
0,6
40
e, kW.m-3
1,0
qO2, mol.L-1.h-1
1,2
0,2
10
0,1
0,0
16
Figure 40. Coefficient de transfert doxygne KT (rapport 37C) calcul en ligne sur trois cultures :
a E. coli A, b E. coli B, c S. cerevisiae G.
164
III.3.2.2. Confrontation avec les modles existants
De faon trs surprenante, il apparat que KT varie dans le temps alors que les
paramtres de contrle (e et Us) sont maintenus constants, ce qui va lencontre de Eq. 21
( K L a = .e . US ). Sur la Figure 40a, entre t=5 et 5,5 h, KT augmente de 10%, et entre t=6 et 7
h, KT augmente de 20%. Sur la Figure 40b, KT augmente de 90% entre t=4,5 et 6 h ; le
passage de 2 3 turbines actives explique le palier de KT t=5,5 h mais pas lensemble de
lvolution. Sur la Figure 40c par contre, KT reste stable lorsque Us et e restent inchangs,
sauf sur lintervalle t=10,5 11,5 h o KT augmente.
La priode de la Figure 40a comprise entre t=5 et 5,5 h est prsente sur la Figure 41
en comparaison avec la courbe thorique dcrite par Eq. 21, dont les coefficients ont t
calculs pour minimiser lcart avec les valeurs de KT , soit K L a = 0,001.e 0,81 . US0, 4 .
Coefficient de transfert, s
-1
0.8
0.7
KT
0.6
Eq. 21
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
4
4.5
5.5
6.5
Temps, h
Figure 41. Zoom sur la Figure 40a : cart entre KT mesur en ligne et la courbe
modle dcrite par Eq. 21.
Lcart entre les valeurs issues de Eq. 21 et les valeurs de KT met en vidence la
ncessit d'amliorer Eq. 21 en tenant compte des effets biologiques (Sundararajan et Ju,
1993), c'est l'objet de la partie III.3.3, et/ou d'amliorer la dtermination de KT, c'est lobjet de
la partie III.3.4.
165
III.3.3. Analyse et modlisation des effets biologiques

III.3.3.1. Rtention gazeuse et aire interfaciale
La Figure 42 compare les fonctions de la rtention gazeuse /Us0,4 mesures dans les
milieux de culture de S. cerevisiae et dE. coli (en prsence de cellules actives, dont la
concentration est comprise entre 20 et 80 gMS.L-1) et dans les surnageants associs (donc en
labsence de cellule) avec les rtentions gazeuses mesures en milieux minraux coalescent,
c (Eq. 109), et non-coalescent, nci (Eq. 110) (Figure 17). En terme de pourcentage, la
rtention gazeuse (=VG/VL) dpasse 70% en culture dE. coli ; pour Nienow et Lilly (1979)
la rtention gazeuse est typiquement infrieure 10 % pour tout flux daration raliste .
La rtention gazeuse dans les mots et dans les surnageants associs est du mme
ordre de grandeur : il ne semble pas que la prsence de cellules de S. cerevisiae ou dE. coli
modifie sensiblement la rtention gazeuse. A forte puissance dissipe, les rtentions gazeuses
mesures pour la levure sont lgrement infrieures celles mesures pour E. coli : la position
des trois turbines actives, lgrement plus resserres pour la culture de S. cerevisiae que pour
la culture dE. coli, peut en tre la cause.
La rtention gazeuse dans les mots et les surnageants associs est du mme ordre de
grandeur quen milieu non-coalescent salin : pour E. coli elle est donc 1,5 fois plus grande
que dans le milieu R4 constitu des principaux sels du milieu initial (sur la Figure 42, la droite
milieu R4 est la tendance dgage de la Figure 17). Cette augmentation est au moins aussi
importante pour S. cerevisiae, dont la rtention gazeuse dans le milieu initial devrait tre plus
petite que celle dE. coli, la force ionique de ce milieu de culture de S. cerevisiae tant plus
petite que celle dE. coli (III.2.1.3).
166
ales c e
nt
0,4
/Us , m
-0,4
.s
0,4
milieu
co
Eq. 110
milieu R4
Diamtre de bulle, mm
10
10
Levure_mot
Levure_surnageant
E. coli _mot
E. coli _surnageant
Eq. 109
0,1
100
1000
10000
0,1
100000
e, W.m-3
Figure 42. Comparaison entre la rtention gazeuse mesure sur le mot de culture et celle
mesure sur milieux de rfrence. Diamtres de bulles daprs Alves et coll. (2002).
Le milieu salin est apport en continu, et la concentration de chacun de ses

constituants a t optimise de manire viter leurs accumulations dans le milieu. Il est donc
peu probable que la force ionique du milieu qui vaut 0,3 mol.L-1 puisse atteindre la valeur de
1 mol.L-1 qui permet la rpression totale de la coalescence (Tableau 7). Laugmentation de la
rtention gazeuse par rapport au milieu R4 pourrait tre due la prsence de l'acide citrique
contenu dans le milieu, ou a des modifications du milieu causes par lactivit de la biomasse.
Mentionnons cet effet la prsence dthanol une concentration juste suprieure 10-3M
(Keitel et Onken, 1982) et de CO2 dissous (Takahashi et coll., 1992) qui peuvent rduire la
coalescence, et donc augmenter la rtention gazeuse.
Le paramtre dintrt pour ltude du transfert doxygne est laire interfaciale a. Il
est possible de calculer a partir de par Eq. 29 en estimant le diamtre moyen des bulles
partir de corrlations mentionnes dans la littrature en fonction de e ; les diamtres de bulles
calculs par les corrlations dAlves et coll. (2002) sont prsentes cet effet sur la Figure 42
pour les milieux coalescent et non-coalescent ionique. En supposant que les tailles des bulles
rencontres dans les mots de cultures soient celles des milieux non-coalescents ioniques,
c'est--dire pour des diamtres compris entre 0,3 et 1 mm, les aires interfaciales dans les
167
mots sont donc comprises entre 500 et 12000 m-1 : elles sont 6 fois plus importantes que les
valeurs habituellement rencontres en cuve agite (Tableau 5).
La Figure 43 prsente un calcul thorique du rapport Vfilm/VL, du volume interfacial
sur le volume total de liquide, en fonction de la rtention gazeuse et du diamtre de bulle
(lpaisseur du film liquide est suppose constante, gale 20 m). La partie hachure
reprsente les conditions opratoires de cette tude. Tsao (1969) adopte dans un calcul
lhypothse que le volume interfacial peut tre nglig devant le volume du cur du liquide.
Cependant, sans doute cause des molcules excrtes par les cellules et des fortes puissances
dissipes utilises, il est commun en culture cellulaire intensive que dpasse 40 % avec des
bulles infrieures 500 m. Le volume du film peut donc reprsenter 70 % du volume liquide
total, c'est--dire que 40 % des microorganismes peuvent rsider dans le voisinage direct des
bulles. Sachant que les rsistances au transfert de gaz sont localises au niveau du film
liquide, il semble important daccorder un intrt particulier celui-ci : la visualisation directe
par microscopie in situ sera exprimente.
100
90
80
100 m
Vfilm /VL, %
70
60
50
200 m
40
30
500 m
1000 m
20
10
0
0
10
20
30
40
, %
50
60
70
80
Figure 43. Importance relative du volume du film liquide en condition de culture cellulaire. Calcul en
fonction de la rtention gazeuse , et du diamtre moyen des bulles (indiqu en m).
III.3.3.2. Coefficient de transfert doxygne
Le coefficient global de transfert doxygne dfini dans la phase liquide en milieu

biologique, KT, est compar sur la Figure 44 aux corrlations dcrivant les volutions de KLa
en fonction de e en milieux coalescent (Eq. 119) et non-coalescent (Eq. 115). Les valeurs de
168
KT/Us0,4 suivent en fonction de e une volution similaire celle de Eq. 115, mais avec des
valeurs 4 6 fois plus petites, pour les cultures dE. coli (Figure 44A) comme pour celles de
S. cerevisiae (Figure 44B).
Le mot tant un milieu fortement non-coalescent (Figure 42), il tait attendu des
valeurs de KT proches de Eq. 115. A partir de ces deux premires observations, calculons la
conductance de transfert dans le milieu de culture.
100
10
Eq. 115
0.4
KT/Us , m-0.4.s-0.6
coliA
coliB
Eq. 119
0.1
100
1000
10000
e, W.m
100000
-3
100
KT/Us0.4, m-0.4.s-0.6
Levure G
10
Eq. 115
Eq. 119
0.1
100
1000
10000
e, W.m
100000
-3
Figure 44. Comparaison des valeurs de KLa/Us0,4 obtenues en culture cellulaire avec
les valeurs obtenues en milieux minraux. A culture dE. coli. B culture de levure.
169
III.3.3.3. Conductance de transfert doxygne
Les conductances de transfert doxygne sont calcules par le rapport KLa/a (ou KT/a)
en estimant laire interfaciale par Eq. 29. Les hypothses suivantes sont utilises :
H 16. Linfluence de la composition du milieu sur le coefficient de diffusion de loxygne est nglige,
en labsence de donnes spcifiques aux cultures microbiennes. Le coefficient de diffusion de
loxygne retenu est celui mesur dans leau pure : D=2,110-9 m2.s-1 (Perry et Green, 1884).
H 17. Pour les mots de culture et les surnageants associs, les valeurs de la rtention gazeuse et du
diamtre de bulle sont celles du milieu non-coalescent ionique (Figure 42).
La conductance globale de transfert en milieu biologique KL,b, calcule partir des

cultures E. coli A et B, ainsi que les conductances en milieux coalescent KL,c et noncoalescent ionique KL,nci sont compares sur la Figure 45.
Les valeurs de KL,c et KL,nci correspondent aux valeurs de la littrature mesures en
racteur agit (vant Riet, 1979; Bouaifi et Roustan, 1998; Linek et coll., 2005), bien que
lvolution des valeurs en e0,11 et e0,08, respectivement mesures partir de la Figure 45, ne
corresponde pas lvolution en e1/4 du modle deddy (Linek et coll., 2004). La dcroissance
de KL,nci e=10000 W.m-3 est due laugmentation subite de la rtention gazeuse (pour
VL=10L) cause par lactivation de la turbine suprieure (Figure 42) ; cette situation a t
reporte dans un soucis de restitution de la ralit en culture cellulaire. Les valeurs de KL,b
sont majoritairement infrieures 10-4 m.s-1 ; le rapport KL,b/KL,nci est compris entre 0,12 et
0,25. Pour la culture de S. cerevisiae G, kL est compris entre 10-4 m.s-1 pour e<10000 W.m-3 et
7,810-5 m.s-1 pour e>10000 W.m-3.
170
0.00100
KL,c
KL, m.s-1
KL,nci
0.00010
KL,b
0.00001
100
1000
10000
e, W.m
E. coli A
E. coli B
100000
-3
Figure 45. Conductances globales de transfert doxygne, estimes en milieux de rfrence

coalescent (KL,c), non-coalescent ionique (KL,nci) et en milieu biologique (KL,b). - - - extrapolation pour
e>4000 W.m-3.
En comparant les paramtres significatifs du transfert gaz-liquide mesurs en milieux

minraux ceux mesurs en milieu biologique, il a t constat :
c1-des valeurs de rtention gazeuse mesures dans le mot 1,5 fois suprieures aux valeurs
mesures sur le milieu R4 constitu des principaux sels du milieu salin (Figure 42) ;
c2-des valeurs de KT 4 6 fois plus petites que les valeurs obtenues avant inoculation (Figure
44) ;
c3-des valeurs de KL,b 4 8 fois infrieures celles de KL,nci (Figure 45) ;
c4-il est observ galement sur la Figure 46 que la tension de surface est suprieure 72
dynes.cm-1 dans les milieux de culture avant inoculation, et de lordre de 334 dynes.cm-1
dans les mots de culture de E. coli et S. cerevisiae et les surnageants associs.
171
70
Mot
Surnageant
, dyne.cm
-1
60
?
50
40
30
20
10
0
0
20
40
-1
X, gDW .L
60
80
Figure 46. Evolution de la tension de surface en fonction de lavancement de la culture. Culture E.

coli F. Mesure effectue 37C.
Lensemble de ces rsultats, la vue de la littrature, voque lexcrtion possible par

les microorganismes de molcules qui agissent comme des molcules de surfactant. En effet :
(c1) Les surfactants sont reconnus pour augmenter laire interfaciale, mme des
concentrations de quelques ppm (Alves et coll., 2004; Sardeing et coll., 2006). Dans les
milieux biologiques, il est galement observ la formation de mousse et de microbulles
stables, qui ne sont pas observes dans les milieux ioniques purs. La prsence de tensioactifs
diminue le diamtre des bulles par rapport celui valu en milieu non-coalescent ionique
(Alves et coll., 2002). Daprs Eq. 33, la tension de surface du milieu biologique tant deux
fois plus petite que celle du milieu ionique, le diamtre db des bulles en milieu biologique peut
sexprimer en fonction de celui mesur en milieu non-coalescent ionique, dnci :
db=0,66dnci
(121)
Daprs cette relation, les valeurs de KL,b prsentes sur la Figure 45 seraient donc diminues
dun tiers.
(c2, c3) En prsence de surfactants, la dcroissance du coefficient de transfert est
observe par rapport un milieu de mme force ionique (Linek et coll., 2005 ; Sardeing et
coll., 2006). La valeur du le ratio KL,b/KL,nci est proche du ratio KL,s/KL,nci mesur par Linek et
coll. (2005), o KL,s est mesur dans une solution Na2SO3 100 g.L-1 complte avec 100 ppm
(par masse) de polyethyleneglycol 1000 utilis pour rduire la tension de surface, et KL,nci est
mesur dans une solution Na2SO3 100 g.L-1.
172
(c4) Popovic et coll. (1983) mesurent galement =35 dynes.cm-1 en culture de S.

cerevisiae (10 gMS.L-1) cultive en fed-batch, et en culture dA. niger (10 gMS.L-1). Dautre
part est constant durant les cultures ; la quantit de surfactant introduite dans le bioracteur
lors de linoculation serait donc assez importante pour imposer la non-coalescence du milieu
ds le dbut de la culture.
La prsence de surfactants dans le milieu biologique nous interroge sur la localisation
de la rsistance principale au transfert. Les rsistances au transfert interviennent en srie tel
que :
1
K L ,b
1
ki
1
k L ,s
(122)
o kL,s est la conductance dans la phase liquide contenant des surfactants, et ki la conductance
dans la monocouche de surfactants localise linterface gaz-liquide. En racteur agit, les
surfactants exercent deux effets sur le procd dabsorption gazeux : leffet barrire
caractris par la rsistance 1/ki, et leffet hydrodynamique caractris par la rsistance 1/kL,s
(Llorens et coll., 1988). Pour Llorens et coll. (1988) leffet barrire est ngligeable compar
leffet hydrodynamique.
Dautre part, si des surfactants recouvrent linterface, alors lutilisation de la loi de
Henry pour dcrire lquilibre de concentration gaz-liquide linterface nest plus possible
(Llorens et coll., 1988) car : x*O 2 < RTH yO 2 .
Enfin, en supposant la prsence de surfactants dans le milieu de culture, il est
intressant de comparer nos rsultats avec ceux obtenus en colonne bulle, car ils confortent
le fait que le mcanisme de transfert dans ces deux changeurs ne soit pas mcanistiquement
semblable (problme soulev par Bouaifi et coll. (2001) et Linek et coll. (2005)). Avec des
diamtres de bulles dS<1,5 mm, les valeurs de KL,b prsentes sur la Figure 45 sont 4 6 fois
plus petites que celles de KL,c mesures dans leau pure. Un tel cart existe aussi en colonne
bulles entre le milieu avec et sans surfactant, mais uniquement pour dS>1,5 mm, car pour
dS<1,5 mm, les conductances de transfert sont les mmes pour les milieux contenant des
surfactants et pour leau pure.
Notons quil serait trs intressant dvaluer KLa dans un milieu salin contenant des
surfactants tel que =34 dyne.cm-1 pour vrifier si les valeurs de KLa et de KL ainsi obtenues
taient proches de celles mesures en milieu biologique.
173
III.3.3.4. Influence de l'volution de sur la modlisation K L a = .e . US
Les constantes , et de Eq. 21 dpendent des proprits physiques du milieu ;

en particulier des proprits de coalescence.
Les valeurs de KT calcules durant la culture E. coli A (Figure 40a), peuvent tre
parfaitement modlises par Eq. 21 en gardant le coefficient flottant mais en fixant
0,001 et 0,4. Cette modlisation est prsente sur la Figure 47 par la courbe KLa(), avec
les valeurs de lexposant calcules point par point. Sur la mme figure, la courbe en
pointills, KLa, est calcule en utilisant une valeur constante du coefficient (=0,83,
optimise sur lensemble des points). Ce modle reprsente mal lvolution de KT, en
particulier partir de t=5 h.
0,85
0,7
KLa
0,6
0,5
0,83
0,4
0,82
0,3
KLa, K T, s
0,84
-1
0,8
KLa()
0,2
0,81
0,1
0,8
0
0
10
Temps, h
Figure 47. Evolution de lexposant pour la modlisation de KT selon Eq. 21. KLa()=0,001eUs0,4
avec variable, prsent sur laxe de gauche ; KLa est calcul avec =0,83, constant.
Lexposant du modle KLa() varie de 1 ou 2 pourcents au cours de la culture, ce

qui pourrait tre explicable par les variations des proprits physiques du milieu (les
discontinuits pouvant tre rattrapes par la variation simultane de la constante ).
Cependant la dcroissance puis la croissance de lexposant entre t=7,5 et t=9 h peut
difficilement tre due une variation des proprits physiques du milieu car l'volution de
l'activit mtabolique de S. cerevisiae est continue durant cette priode, parfaitement
contrle par lapport de glucose. Lhypothse de la variation des constantes , et de
Eq. 21 au cours de la culture est donc remise en question.
174
III.3.3.5. Etude hors ligne sur milieux rels
La modlisation des effets biologiques sur KT peut tre considr sous trois angles,
rappels dans Eq. 67 : Echem, Epp, EqO2 (Sundararajan et Ju, 1993) ; il est alors suppos que
(KLa)ref est modlis par Eq. 21, et peut tre dtermin dans le milieu salin initial avant
inoculation. Les valeurs de ces trois facteurs dacclration peuvent tre dtermines
condition de pouvoir valuer simultanment au cours de la culture cellulaire la valeur du
coefficient de transfert doxygne dans trois situations (Ju et Sundararajan, 1995) : avec la
biomasse active (c'est la mesure de KT ralise en ligne), avec la biomasse ltat stationnaire
(c'est--dire pour qO2 rduit ou nul), et dans le surnageant associ.
Lexprience ncessite de conserver les mmes conditions opratoires (racteur,
configuration, VL, puissance dissipe, Us) pour les quatre mesures.
Lexprience ncessite larrt de la culture ; elle est donc ralise la fin de la culture.
Les conditions dagitation tant leves, lentranement de surface est possible.
Pour lvaluation du coefficient de transfert dans le surnageant et en prsence dune
activit biologique rduite, la mthode du bilan gazeux nest pas ralisable ( cause du
gradient Qin y inO 2 Qout y out

O2
trop faible (Eq. 91)) et doit tre substitue par une mthode
dynamique.
Pour toutes ces raisons, il a donc t envisag de modifier le modle ME5 pour tenir
compte de la respiration rsiduelle. Mais la prsence dune rtention gazeuse rsiduelle
leve, dj rencontre en milieu non-coalescent ionique (III.2.4.2), rend insolvable la
convergence vers des valeurs cohrentes de KLad.
Les expriences directes de mesure de lacclration, comme pratiques par Ju et
Sundararajan (1995) partir de cellules lyophilises, sont difficiles en culture cellulaire
intensive. Il est donc propos de vrifier les hypothses dacclration du transfert
indirectement, en tudiant les valeurs de KT mesures en ligne dans la dynamique de la
culture.
III.3.3.6. Acclration due aux modifications chimiques du milieu (Echem)
Au dbut de la culture E. coli A (t=0 3 h), les valeurs de KT sont 4 fois plus petites
que celles obtenues en milieu coalescent (Figure 44). Dautre part, les valeurs de KL,b sont 4
fois plus petites que dans le milieu salin avant ensemencement (Figure 45). Ces observations
peuvent sexpliquer par des modifications chimiques du milieu, ayant pour effet la rduction
du coefficient de transfert doxygne. Les modifications chimiques du milieu en prsence de
175
biomasse sont aussi observes travers les valeurs de , 1,5 fois plus leves en milieu
biologique que dans le milieu salin avant ensemencement (Figure 42). Au dbut de la culture
E. coli A, la trs faible concentration en biomasse de 0,7 gMS.L-1 rend ngligeable leffet de
Epp (Epp=1). Dautre part la faible valeur de qO2, 0,006 mol.L-1.h-1, et la forte supriorit du
temps caractristique de la raction r devant le temps caractristique de la diffusion d (rd)
(Figure 10), dmontrent que EqO2 est galement ngligeable (EqO2=1). En choisissant pour
valeur de (KLa)ref (Eq. 67) la valeur de la rfrence non-coalescente ionique qui dfinit le
milieu initial avant ensemencement, il suit, pour le dbut de la culture E. coli A : Echem=0,25.
De faon similaire, au dbut de la culture E. coli C, laquelle a t suivie depuis une
concentration en biomasse plus faible que les autres cultures (Figure 48), KT crot de 0,01 s-1
0,05 s-1 entre t=0 h et t=13,5 h alors que e et Us restent constants. Pendant cette priode
lacclration par consommation doxygne est peu probable (rd) ; laugmentation de KT
pourrait donc sexpliquer par laugmentation de Echem (dont la valeur resterait nanmoins
infrieures 1). Gao et coll. (1995) observent un phnomne similaire pendant les sept
premires heures aprs ensemencement : X crot de 1 4 gMS.L-1, pendant que KLa crot de
0,018 0,024 s-1 ; laugmentation de KLa est attribue par les auteurs aux modifications du
milieu. (Notons que les modifications de milieu annonce par certains auteurs comme Ju et
Sundararajan (1995) qui utilisent des cellules resuspendues sont considrer avec prcaution
car lessentiel de ces modifications est d aux composants servant empaqueter les cellules
sches et non lexcrtion de mtabolites, comme cest le cas en culture cellulaire).
176
0,2
0,15
0,2
0,10
0,1
0,05
0,1
0,00
0,0
0
10
15
10000
8000
6000
4000
e, W.m-3
0,20
qO2, mol.L-1.h-1
KT, s-1
2000
20
Temps, h
Figure 48. Effet des modifications du milieu sur KT en dbut de culture dE. coli (culture C). Conditions
de culture en annexe.
Quelles sont les molcules excrtes responsables de lacclration chimique ? Il

semblerait que lacclration chimique se caractrise par une double modification :
modification de la permabilit des interfaces par rapport loxygne, et modification de la
taille des bulles. Lanalyse de Hinze (1955) et Calderbank (1958) (Eq. 33) dfinit la tension
de surface et la densit du milieu comme paramtres principaux du contrle de la taille des
bulles. La possibilit que les cellules excrtent des molcules de surfactant a dj t discute
et il a t vu que la tension de surface reste constante en cours de culture (Figure 46). La
densit du mot de culture peut augmenter de 2% par rapport celle de leau cause de la
prsence de microorganismes (calcule en supposant que la densit de la biomasse humide est
1030 g.L-1 (Aiba et coll., 1979)) mais cette augmentation ne permet pas dexpliquer les
acclrations observes sur la Figure 48.
Quand aux autres proprits physico-chimiques qui ont t mesures dans le milieu,
leurs variations ne permettent pas non plus dexpliquer lacclration chimique. La force
ionique du milieu est maintenue un niveau constant de part lalimentation fed-batch et
laccumulation limite des sels. La viscosit du milieu nexcde pas 2 cp (pour
X=80 gMS.L-1). Notons galement que la variation de x *O 2 en cours de culture due aux
177
variations de la composition du milieu ou la dviation de la sonde est ngligeable (2%

dcart), ce qui vrifie lhypothse H 9.
A partir de ces observations et de lanalyse de Hinze (1955) et Calderbank (1958) on
peut supposer qu e et Us constants le diamtre de bulle devrait tre stable, condition que le
niveau de coalescence reste inchang. Cest la mise en dfaut de cette dernire condition qui
pourrait expliquer laugmentation du coefficient de transfert en dbut de culture : il peut tre
envisag quune production de surfactants, non dtecte par une mesure de tension de surface,
soit capable de modifier sensiblement le transfert doxygne (Michel et Miller, 1962).
Cette production dpendrait en particulier du microorganisme utilis : il est observ
une diffrence fondamentale entre les cultures dE. coli qui prsentent ce type dacclration
en dbut de culture, et les cultures de S. cerevisiae qui ne la prsentent pas. Dautre part,
ajoutons que malgr les proprits similaires des deux milieux, les bulles semblent plus
petites dans les cultures dE. coli (plus mousseuses) que dans les cultures de S. cerevisiae (qui
prsentent des bulles de lordre de 5 mm, trs rarement observes en culture dE. coli).
III.3.3.7. Acclration due la prsence physique de particules (Epp)
La Figure 49 prsente en dtail la culture E. coli A au moment du passage de la phase

1 la phase 2. KT crot la fin de la phase 1, puis dcrot en dbut de la phase 2, alors que X
augmente : lvolution de KT nest donc pas une fonction monotone de la concentration en
biomasse. Dautre part, laugmentation de la concentration cellulaire pourrait tre responsable
dune rduction de KT eu cours de culture, induite par les effets visqueux (Badino Jr. et coll.,
2001), car la viscosit du mot suit la loi dEinstein. Il semble cependant que linfluence de la
viscosit soit secondaire dans les cultures de microorganismes unicellulaires prsents.
Laugmentation de la puissance dissipe provoque la rduction de la taille des bulles.
Cette rduction de taille provoque laugmentation de la capacit capturer les cellules, et en
consquence la rduction de la diffusion travers linterface (Galaction et coll., 2004; Ju et
Sundararajan, 1995). Ce phnomne est-il responsable de la baisse de KL,b forte puissance
dissipe, visible sur la Figure 45 pour e>25000 W.m-3 ? Il apparat dautre part que lors dun
incrment de puissance dissipe la valeur de KL,b diminue (par exemple de 3200
7200 W.m-3, ou de 11000 21000 W.m-3), est-ce le mme phnomne de blocage ?
Linfluence de la prsence physique des cellules en tant que particules est mal dfinie
aux concentrations cellulaires observes. Lhypothse favorise par ce travail serait conforme
aux travaux de Galaction et coll. (2004) (I.2.7.1) dcrivant le blocage de linterface par les
cellules.
178
0.75
60
Phase 1
Phase 2
50
0.7
30
0.6
X, g.L
-1
0.65
KT, s
-1
40
20
0.55
10
0.5
0
6
6.5
7.5
8.5
Temps, h
Figure 49. Dcouplage entre croissance cellulaire et KT. Culture E. coli A.
III.3.3.8. Acclration due la consommation doxygne (EqO2)
Le calcul du facteur dacclration propos par Merchuck (1977) dans le cas dune
rpartition homogne de la biomasse (Eq. 59) est modifi pour tenir compte de lhypothse
dcoulement piston du gaz :
E qO 2 = 1 +
Dq O 2
2 k ( x*O 2 x O 2 ) ln
2
L
(123)
o kL est la conductance de transfert doxygne en phase liquide. En systme biologique la

conductance de transfert doxygne en phase liquide est kL,s (Eq. 122), qui peut tre assimile
la conductance globale, KL,b , en ngligeant leffet barrire des surfactants (Llorens et coll.,
1988).
Cependant KL,b et a fortiori EqO2 tant calcul partir de KT, dans quelle mesure
lutilisation de Eq. 123 est-elle valable pour expliquer les variations de KT? Il est donc
propos de calculer EqO2 en cours de culture partir de deux estimations diffrentes de KL,b.
Sur la Figure 50 durant la culture E. coli A, la courbe EqO2(KL,b) est dtermine partir de la
valeur KL,b calcule en ligne (Figure 45) alors que la courbe EqO2(KL,bm) est calcule partir
dune valeur moyenne de KL,b, estime partir des valeurs de la Figure 45 (recalcules en
fonction du nouveau diamtre de bulle, conformment Eq. 121) : KL,bm=710-5 m.s-1 pour
179
e<10000 W.m-3 et KL,bm=310-5 m.s-1 pour e>10000 W.m-3. Les valeurs de KL,bm ainsi
calcule dpendent uniquement de e, conformment la littrature (I.2.1.2).
2,1
EqO2(KL,b)
2
1,9
EqO2(KL,bm)
1,8
db=dnci*0,66
EqO2
1,7
1,6
1,5
1,4
db=dnci
1,3
1,2
1,1
1
0
10
Temps, h
Figure 50. Evolution de EqO2 durant la culture E. coli A. EQO2(KL,b) et EQO2(KL,bm) sont
calculs en utilisant pour valeur de KL la valeur KL,b calcule en ligne, et une valeur
moyenne, respectivement.
Pour mettre en vidence limportance de la taille des bulles dans le calcul de EqO2, la
courbe EqO2(KL,bm) a aussi t calcule pour db=dnci , au lieu de db=0,66dnci pour les autres
courbes, conformment Eq. 121 : avec des bulles un tiers plus petites, lacclration dans le
milieu biologique est largement favorise par rapport au milieu non-coalescent ionique.
La drive de la fonction EqO2(KL,bm) est du signe de la drive de qO2 et de la drive
de KT, Us et e constants, alors que la drive de la fonctions EqO2(KL,b) est du signe oppos.
Il apparat par contre que dans tous les cas une acclration faible (EqO2>1,1) est calcule
partir de t=4 h, c'est--dire pour les valeurs de KL,b mesures puissance dissipe suprieure
10000 W.m-3 (Figure 50). La valeur de EqO2 augmente chaque incrment de puissance
dissipe.
Les valeurs de KL,b calcules ici en milieu biologique (III.3.3.3), permettent dobtenir
EqO2>1. Merchuck (1977) considre quil nest pas possible dobtenir EqO2>1 en racteur agit
(Figure 7). Cependant sa conclusion est obtenue en utilisant des valeurs de kL mesures dans
leau pure. Similairement aux travaux de Merchuck (1977), Tsao et coll. (1978) affirment que
le facteur dacclration est proche de lunit dans les systmes pour lesquels labsorption
physique est dj trs importante ; galement, Yagi et Yoshida (1975) ont mesur une valeur
180
de EqO2 faible en cuve agite (EqO2=1,07 ; Tableau 4), mais l encore, les auteurs utilisent des
cellules laves et resuspendues : les proprits dun tel milieu ne sont pas comparables
celles du milieu de culture en condition dactivit cellulaire. Dans nos conditions relles de
culture, les valeurs de KL,b sont plus petites que celles mesures dans leau avec la mme
configuration de biorateur.
A partir de la valeur de EqO2(KL,bm) il est possible de calculer une valeur de KLa de
rfrence, KLaref, de la forme dcrite par Eq. 21, et telle que lerreur entre la courbe
KLarefEqO2(KL,bm) et la courbe KT soit minimum. Les trois fonctions sont prsentes sur la
Figure 51: la priode de transition entre la phase 1 et la phase 2 comprise entre t=6,7 et t=7,7
h, marque par la division de qO2 par 1,6, est modlise avec moins de 2% derreur. La mme
transition est modlise par Eq. 21 (courbe KLa, Figure 47) avec 10% d'erreur. Il a t vu
d'autre part que la prsence de biomasse avait peu d'effet pendant cette transition (Figure 49).
Linfluence de EqO2 est donc prpondrante par rapport celles de Echem et Epp sur cette
priode de transition.
-1
0,8
0,7
KT
0,6
KLaref
KLaref.EqO2(KL,bm)
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
0
0
10
Temps, h
Figure 51. Comparaison de KT avec la courbe KLarefEQO2(KL,bm) durant la culture E. coli A.
Par contre, lorsque KT varie beaucoup Us et e constants, par exemple entre t=6 et t=7
h, la fonction KLarefEqO2(KL,bm) reprsente mal les variations exprimentales. Pour Andrews
(1984) EqO2 est nulle moins dun trs fort excs de concentration cellulaire linterface par
rapport au cur du liquide (I.3.2.4). Sur la Figure 52 lexcs de concentration interfaciale est
181
prise en compte en utilisant le dveloppement de Merchuck (1977), appliqu la culture E.

coli A entre les instants t=6 et t=7 h pour un excs nul (X0/X=1), de 3 et de 10 (la fonction
KLaref est recalcule pour chaque excs de concentration, mais seule la fonction
KLarefEqO2(KL,bm) est reprsente). Sur lexemple considr, un excs de 10 permettrait
dapprocher la modlisation de KT beaucoup plus finement. Or la concentration cellulaire
moyenne t=6,2 h est de 25 gMS.L-1, ce qui porterait la concentration interfaciale
250 gMS.L-1, ordre de grandeur juge acceptable dans la littrature (Yoshida et Yagi, 1977 ;
-1
Tsao et coll., 1978) (I.3.2.1).
0.62
0.6
0.58
0.56
KT
0.54
KLaref .EQO2 calcul pour:

X0/X=1
0.52
X0/X=3
X0/X=10
0.5
5.6
5.8
6.2
6.4
6.6
6.8
Temps, h
Figure 52. Comparaison de KT avec la courbe KLarefEqO2(KL,bm) calcule pour plusieurs
valeurs de concentration interfaciale en biomasse durant la culture E. coli A. X
concentration moyenne dans le liquide ; X0 concentration linterface gaz-liquide.
Remarque. Comme le laisse supposer l'tude des temps caractristiques (Figure 10), il semble
que lorsque KT est influenc par qO2 e et Us constants, le ratio d/r est suprieur un. La
rciproque ne semble pas tre vrai car on observe des cas tels que d/r>1 sans que KT volue
en fonction de qO2. Tsao et coll. (1970) posent alors une condition de consommation
volumique doxygne suffisante pour permettre lacclration. Enfin, pour d/r<1, aucune
situation de couplage nest observe, ce qui est confirm par Tsao et coll. (1978). Notons que
dans le cas o les dfinitions suivantes des temps caractristiques seraient adoptes : d =
D
2
kL
182
et r =
(x
x O2 )
, alors le ratio d/r vaudrait deux fois le critre dfini par Merchuck
q O2
*
O2
(Eq. 60). Le ratio d/r serait donc proche dun nombre de Hatta dfini pour la raction
biologique, ce qui lui donne une certaine lgitimit dans la prdiction de lacclration par
consommation doxygne.
Des questions restent poses.
Pourquoi EqO2 augmente t-il par palier avec e ? Largument de ladhsion cellulaire
utilis pour justifier de la diminution de Epp dans les mmes conditions peut-il tre utilis ici ?
Certes, laccumulation de cellules linterface peut crer une barrire physique la diffusion
de loxygne, mais ces cellules tant actives, elles acclrent par ailleurs le transfert en
augmentant la consommation doxygne dans la couche interfaciale.
Dans la culture E. coli B, pourquoi EqO2 naugmente t-il plus entre t=6 et t=8h alors
que qO2 continue daugmenter? Un palier est-il atteint suite une saturation des interfaces par
les cellules ?
Le trs fort volume interfacial (Figure 43) o la trs forte population microbienne
consommant de loxygne dans la zone interfaciale permet-il de faciliter lacclration par
consommation doxygne ?
Pour dtailler les influences particulires de Echem, Epp et EqO2 comme pratiqu par Ju
et Sundararajan (1995), des quantifications supplmentaires seraient ncessaires, telles que
des mesures in-situ de tailles de bulles et une tude des interactions entre les cellules et les
interfaces gaz-liquide.
III.3.3.9. Contrle du transfert par lantimousse
Les cultures E. coli C et E. coli E (Figure 53) se distinguent par des ajouts ponctuels
dantimousse en cours de croissance. Sur la Figure 53, la croissance de KT entre t=0,5 et
t=1,25 h semble tre provoque par laugmentation de la consommation doxygne, confirm
par le ratio d/r>1. Entre t=2 et t=3 h, aprs le premier ajout dantimousse, on observe aussi
d/r>1 mais KT nvolue plus avec qO2 ; KT dcrot mme trs lgrement alors que qO2
augmente ; avec des valeurs similaires de X, qO2 et KT, mais sans ajout dantimousse, KT
volue avec qO2 dans la culture E. coli A (Figure 40a).
183
Avec 100 ppm dantimousse, Yoshida et Yagi (1975) nobservent pas non plus
dacclration due la consommation doxygne sur une culture de Candida tropicalis.
(Cependant il semble que les conditions rassembles dans le racteur agit de Yoshida et Yagi
(1975) ne conduisent pas une valeur de EqO2 suprieure 1, mme en labsence
dantimousse: KLa=0,03 s-1, qO2=0,035 mol.L-1.h-1).
Il est conclu, avec Yoshida et Yagi (1977), que le contrle quexerce lantimousse sur
le transfert en culture cellulaire est plus fort que le contrle que peut exercer la biomasse
1,0
10,0
0,7
80
0,6
70
0,8
1,0
0,4
0,4
0,3
0,2
0,2
0,1
0,0
0
60
qO2, mol.L-1.h-1
0,6
KT, s-1
d/ r
0,5
50
40
Antimousse, s
active par lacclration due la consommation doxygne.
30
20
0,1
10
0,0
Temps, h
Figure 53. Effet de lantimousse sur lacclration du transfert doxygne due la respiration. Culture
E. coli E (conditions de culture en annexe VI.7.2). KT coefficient de transfert doxygne ; qO2
consommation volumique doxygne ; lantimousse ajout est donn en fonction du temps de marche
de la pompe.
III.3.3.10. Contrle visqueux du transfert : modle dtude Aspergillus niger
Les rsultats d'une culture fed-batch dA. niger sont prsents Figure 54 afin d'tudier
l'influence de la viscosit cellulaire sur le transfert d'oxygne.
La phase 1 commence par une phase batch de 12 h, puis par une phase taux de
croissance maintenu constant (=0,07 h-1) par ajout contrl de substrat limitant (solution de
glucose) de manire exponentielle. La phase 2 commence t=55 h lorsque le substrat est
184
aliment flux constant 65 g.h-1. Le taux de conversion du substrat en biomasse est constant
durant la culture : YX/S=0,16 gMS/g. Ainsi, la concentration en biomasse peut tre modlise le
long de la culture :
Xm =
X 0 + YX / SS T
VL
(124)
o la concentration en biomasse la fin de la phase batch, X0, peut tre estime 20 gMS.L-1,
et ST est la masse totale de solution de substrat ajoute. La concentration en biomasse atteint
30 gMS.L-1 la fin de la phase 1, ce qui correspond la valeur de la consommation volumique
doxygne la plus leve : qO2=0,06 mol.L-1.h-1. La vitesse superficielle de lair est constante
durant toute la culture, Us=0,35 cm.s-1, et la vitesse dagitation est augmente de 150
700 rpm t=13 h (Figure 54B).
La vitesse dagitation et laration tant maintenus constants, des valeurs o
lentranement de surface est ngligeable (N700 rpm), les variations de KT sont corrler
aux modifications induites par la croissance microbienne. De t=13 h t=35 h les valeurs de
KT sont cependant trs imprcises, compte tenu des valeurs de dO2 proches de la saturation.
Au cours des 13 premires heures de culture, les valeurs de KT passent de 0,004
0,008 s-1. Bien que le ratio d/r soit trs suprieur 1 durant cette priode, la trs faible valeur
de qO2 (<0,006 mol.L-1.h-1) rendrait EqO2 ngligeable. Le doublement des valeurs de KT serait
donc provoqu par des modifications chimiques du milieu.
Au cours de la culture cellulaire, la viscosit apparente du milieu augmente de 1 380
cp (Figure 54C). Les observations microscopiques (microscope optique 100) montrent que la
morphologie des microorganismes ne change pas et est essentiellement compose dhyphes
isols comptant de zro trois branches. A partir des mesures il est possible de proposer la
modlisation suivante de la viscosit du mot Xm (en cp) en fonction de la concentration en
biomasse (X en gMS.L-1) (Figure 54C) :
X = 0,013X 2,77
(125)
De t=45 h jusqu' la fin de la culture, KT dcrot. La dcroissance commence lorsque

X=50 cp (conformment vant Riet et Tramper, 1991 ; (Figure 5) et saccentue avec
laugmentation de la viscosit du mot : KT est alors proportionnel X0,5 , conformment
Garcia-Ochoa et Gomez (2004).
Le transfert doxygne passe sous le contrle de la viscosit du milieu : sur le
schma thorique du transfert doxygne en culture cellulaire (Figure 1) il est possible que la
rsistance principale au transfert se situe majoritairement linterface (4), mais
185
laugmentation de la viscosit apparente donne de limportance au phnomne macroscopique

de mlange et donc la rsistance (5) nest plus ngliger.
0,06
0,05
30
0,04
20
0,03
0,02
10
0,01
3000
80
600
60
400
2500
2000
1500
40
200
1000
20
500
0
0,4
10,00
0,3
1,00
0,2
400
KT , s-1
d/ r
Xm
, mcp
app , cp
300
200
0,10
0,1
0,01
0,0
0
10
20
30
40
50
60
S T, g
B
N, rpm
3500
0,00
Xapp
, cp
, cp
dO2 , %
X , gDW .L-1
X , gDW .L-1
40
qO2 , mol.L-1.h-1
0,07
50
100
0
70
Time, h
Figure 54. Culture fed-batch dAspergillus niger.
A) Croissance cellulaire : concentration en biomasse, mesure exprimentalement, X, et calcule
partir du modle Eq. 124, Xm ; consommation volumique doxygne qO2.
B) Paramtres de contrle : vitesse dagitation N ; oxygne dissous dO2 ; masse de substrat (glucose)
ajoute ST. T=34C, P=1 atm.
C) Transfert doxygne : ratio d/r ; coefficient de transfert doxygne KT ; viscosit mesure X et
modlise partir de Eq. 125, Xm.
186
III.3.4. Analyse de la dtermination de KT
KT est dtermin par la mthode BG partir d'un bilan matire sur l'oxygne gazeux
du racteur. Rcrivons le bilan matire permettant la dtermination de KT (Eq. 91) sous la
forme :
KT =
(126)
o R est un terme de consommation volumique d oxygne (mol.L-1.s-1), et le potentiel de

transfert (mol.L-1). Alors que R est mesur, est estim en fonction des hypothses dcrivant
lhydrodynamique du racteur. Peut-on affiner la dtermination de KT en y intgrant les effets
d'entranement de surface, de ventilation du CO2, et les dynamiques physico-biologiques?
III.3.4.1. Modification de lcoulement gazeux par entranement de surface
Lvolution de lefficacit du transfert doxygne ralis par le racteur (Eq. 127) est
prsente sur la Figure 55 pour la culture E. coli B. Lefficacit du transfert doxygne est
calcule par:
EffO2=(nO2in-nO2out)/nO2in
(127)
o nO2in est le flux molaire doxygne entrant dans le racteur et nO2out le flux sortant.
Il apparat que EffO2 volue entre 2% en dbut de culture et 95 % t=5,8 h, ce qui
signifie que la presque totalit de loxygne inject bnficie aux bactries, tout en maintenant
une concentration en oxygne dissous suprieure la concentration critique. Alors que
Poughon et coll. (2003) signalent, dans une configuration de racteur proche de la notre et en
prsence de consommation doxygne, que le profil gazeux importe peu car dans la majorit
des cas la composition du gaz lentre est proche de sa composition la sortie , le profil
gazeux est extrmement changeant dans nos cultures ce qui a des rpercussions immdiates
sur la valeur et lvolution de KT.
187
100
dO2 , %
EffO2 , %
80
60
40
20
0
0
10
Temps, h
Figure 55. Efficacit du transfert doxygne lors dune culture dE. coli (E.
coli B ; Figure 36d). Efficacit de lutilisation de loxygne EffO2 (Eq. 127),
oxygne dissous dO2.
Laration de surface qui est ignore dans le calcul de KT (Eq. 91) peut-elle expliquer
les variations de KT e et Us constants (Figure 41) ? Posons pour y rpondre les hypothses
suivantes :
1/ Laration de surface peut tre modlise par le modle ME5.
1
off
2/ La valeur de y off
O 2 peut sexprime en fonction de y O 2 en introduisant la fonction r qui
exprime le taux de recyclage de loxygne assur par lentranement de surface :

r=
1
off
y off
O2 y O2
y off
O2
1
o y off
O 2 dsigne la concentration en oxygne dans le gaz en sortie de le systme dfini par la
phase disperse issue du diffuseur, et y off

O 2 la concentration apparente en sortie de la phase
disperse, telle quelle est estime par un bilan gazeux sur loxygne contenu dans le systme
1
off
dfini par le ciel en ngligeant lentranement de surface ( y off
O 2 > y O 2 ).
KT est alors considr alors comme une valeur apparente , et le phnomne rel de
transfert est dcrit par lquation suivante :
K L a d 1 + K L a e 2 = R
(128)
o 1 est une moyenne logarithmique entre le potentiel lentre du racteur et le potentiel

en sortie de la phase disperse issue du diffuseur, c'est--dire en rapport avec la concentration
1
y off
O 2 . Le systme dfinit par Eq. 126 et Eq. 128 permet dcrire :
188
KT
y inO 2 y off
O2
in
y O 2 y OB 2
ln off
B
y O2 y O2
= K La d
y inO 2 y Ooff21
y inO 2 y OB 2
ln off
1
B
y O2 y O2
B
+ K L a e ( y out
O2 y O2 )
Et finalement KT peut tre exprim en fonction de KLad, KLae, et des concentrations gazeuses :
K T = d1.K L a d + d 2.K L a e
(129)
Les fonctions d1 et d2 calcules pendant la culture E. coli A sont prsentes sur la Figure 56.
Trois valeurs de r sont fixes arbitrairement : 5%, 10% et 20%. La fonction r dcrivant le taux
de recyclage, il est possible denvisager que cest une fonction de e et Us. La fonction r est
donc constante e et Us constants, mais en dbut de culture, alors quune faible puissance
dissipe est injecte dans le racteur, r est proche de 5%, pour augmenter en cours de culture,
peut tre jusqu 20% forte puissance dissipe.
Il apparat que la driv des fonctions d1 et d2 est de signe oppos celle de KT, e et
Us constants. Et donc les potentiels de transfert pris en compte par lentranement de surface
ne permettent pas de dfinir des valeurs de KLad et KLae constantes e et Us constants, au
contraire, la variation de ses valeurs e et Us constants serait plus forte que ne l'est
actuellement KT. Conformment la littrature (Galaction et coll., 2004), il peut donc tre
suppose que linfluence de laration de surface est rduite en culture cellulaire et donc que
les valeurs de r et de KLae sont faibles. Il est cependant difficile de prdire avec certitude
linfluence de laration de surface, car elle varie avec les proprits du liquide et la hauteur
de la suspension au dessus de la turbine suprieure, paramtres qui nont pas t tudis.
Notons de plus que la diffrence de potentiel d'change la surface libre du liquide
(entre le liquide et le ciel) est la diffrence de potentiel utilis dans lhypothse de
out
lhomognit de la phase disperse ( yoff
O 2 = yO 2 ). Lvolution de la fonction d2 montre que
cette hypothse conduirait aussi des variations de la valeur de KT , e et Us constants, plus

prononces qu'avec l'utilisation du modle piston.
189
1,5
0,8
1,4
0,7
1,3
0,6
1,1
r=10%
r=5%
1
0,9
0,5
d1
-1
r=20%
0,4
KT, s
d1, d2
1,2
d2
KT
0,3
0,8
0,2
0,7
0,1
0,6
0,5
10
Temps, h
Figure 56. Evolution compare des fonctions d1 et d2 (Eq. 129) et du coefficient de transfert KT durant
la culture E. coli A.
III.3.4.2. Modification de lcoulement gazeux par la ventilation du CO2
Pour les cultures cellulaires en phase de croissance oxydative, en terme de flux

molaire la consommation doxygne quivaut la production de dioxyde de carbone. Quel est
limpact du CO2 produit sur le transfert de loxygne ? La littrature fait tat des effets du
CO2 sur la morphologie, suivi des effets de la morphologie sur KLa (Ju et coll., 1991).
Linfluence directe du CO2 sur le transfert de matire na jamais t tudie en culture
cellulaire.
Il est toutefois suppos que dans certaines ractions chimiques la production de
microbulles dans la couche limite dune bulle peut agiter linterface de la bulle au moment de
la coalescence au point dacclrer le renouvellement de la couche limite et donc le transfert
global (Shah et coll., 1974 ; Linek et coll., 1996).
Un autre lment est contenu dans la rponse la question : quel est le mcanisme de
ventilation du CO2 en culture cellulaire agite et are? En cuve non-agite (conditions de
production de bire), des bulles de CO2 sont produites par nuclation spontane htrogne :
elles quittent leur site de nuclation lorsquelles atteignent 50 m de diamtre, ensuite leur
diamtre crot pour atteindre environ 250 m aprs une course de 30 cm (Delente et coll.,
1969). En cuve agite et are, aprs un temps ncessaire la saturation du milieu par le CO2,
190
les cultures cellulaires peuvent devenir sursatures (Dahod, 1993). En culture agite et are
on peut donc supposer deux mcanismes de ventilation du CO2 fonctionnant en parallle : ou
bien le CO2 dissous passe dans une bulle dair (hypothse de ventilation v1), ou bien des
bulles de CO2 pur nuclent (v2), conduisant une population mixte de bulles dair
macroscopiques et de bulles de CO2 microscopiques. Si il y a nuclation, les bulles de CO2
ainsi formes peuvent soit coalescer avec les bulles dair (v2a), soit rejoindre la surface (v2b).
Ces rflexions suscitent l'tude de l'acclration du transfert par nuclation de CO2, et
l'tude des influences des hypothses de ventilation sur la quantification de KT.
a) Acclration du transfert doxygne par nuclation du CO2
On observe dans le gaz de sortie du racteur un pic de CO2 chaque incrment de

lagitation. Sachant que la concentration du CO2 dans le liquide est suprieure celle de
lquilibre il est possible que le CO2 nucle spontanment, le surplus nergtique apport par
lincrment dagitation provoquant la nuclation. Dans le cas o lhypothse v2a compterait
de manire consquente dans la ventilation du CO2 par rapport aux autres hypothses de
ventilation, quel serait limpact des microbulles de CO2 sur la diffusion de loxygne contenu
dans les bulles dair ?
Une srie dexpriences a t mene de manire mesurer KLa en racteur agit par la
mthode dynamique, tout en introduisant simultanment des microbulles gnres en dehors
du racteur. Il na pas t possible dintroduire des microbulles de CO2, dans le racteur car
celles-ci coalescent dans les cinq premiers centimtres aprs la sortie du saturateur, pour se
stabiliser autour dun diamtre de 3 5 mm. Les expriences ont donc t ralises avec des
microbulles dazote. Le flux de microbulles tant difficilement ajustable, les expriences sont
ralises dans deux racteurs diffrents, de 20 et de 2 L ; le changement dchelle devant
permettre de multiplier par 10 la quantit de microbulles par rapport au volume de liquide.
Le modle utilis pour calculer KLa dans ces conditions est bas sur le modle
MP+mb (III.1.5.1), complt en considrant la phase aqueuse comme systme ouvert
(dilution par le flux QL constitu de la phase aqueuse porteuse des microbulles; soutirage pour
maintenir VL constant) et en utilisant les hypothses suivantes :
H 18 : Le volume relatif des microbulles sur le volume total de gaz dispers, Vmb/VG, est constant
durant la roxygnation.
H 19 : La fraction volumique mbc des microbulles coalesce avec les bulles dair (contrairement
H 15). Cette fraction est estime par le calcul.
191
Aucune acclration du transfert doxygne due la prsence des microbulles dazote

na t observe, ni en racteur de 20L, ni en racteur de 2L. Cependant les rsultats de
l'identification paramtrique permettant d'accder la valeur de KLa et de mbc sont
difficilement apprciables cause des paramtres Vmb/VG et mbc dont les valeurs nont pas t
mesures exprimentalement. Notons galement que notre configuration exprimentale se
diffrencie de la littrature car les microbulles nont pas t produites dans la couche limite,
mais lextrieur de celle-ci. La situation serait-elle diffrente avec une forte concentration de
microorganisme produisant du CO2 dans les couches limites des interfaces gaz-liquide ?
b) Influence des hypothses de ventilation sur le potentiel de transfert
Les hypothses de ventilation v1 et v2a conduisent la dilution des bulles dair par le
CO2 produit ; en rgime permanent la concentration en oxygne des bulles dair qui sortent de
la phase disperse est alors calcule comme suit :
y off
O2 =
p O2 1
P RT
(130)
o pO2 est la pression partielle en oxygne dans le ciel gazeux, et P la pression totale. La
concentration y off
O 2 intervient dans le calcul du potentiel de transfert (Eq. 96). Lhypothse
v2b, dcrit lpuisement de loxygne des bulles dair, sans dilution par le CO2 produit, lequel
rejoint le ciel gazeux sans coalescer. La concentration y Ooff2, v 2 b calcule daprs cette
hypothse est suprieure celle prcdemment calcule :
y Ooff2, v 2 b =
p N2
p O2
1
+ p O 2 + p Ar RT
(131)
off
Si KT est calcul partir de y off
O 2 et KT,v2b partir de y O 2 , v 2 b , le rapport KT/KT,V2b est compris
entre 1,01 et 1,1 pour E. coli A et S. cerevisiae G.

Les travaux de Strub (2005) ont montr que dans nos conditions, la sursaturation du
milieu de culture tait faible, ce qui ne permet pas denvisager une ventilation importante par
le mcanisme de nuclation spontane. Lhypothse de ventilation v1 est donc favorise. Mais
le mcanisme de ventilation rel est certainement une combinaison de toutes les hypothses
de ventilation considres.
192
III.3.4.3. Influence des dynamiques physico-biologiques
La Figure 57 prsente les temps caractristiques d (temps de diffusion), m (temps de

mlange), r (temps de raction) et G (temps de passage du gaz) calculs d'aprs les
dfinitions du Tableau 9 au cours de la culture E. coli A, et ports en fonction de la
consommation volumique d'oxygne qO2 , choisie comme paramtre caractristique de
l'volution des cultures intensives. Les temps de mlange m prsents ont t calculs par le
modle de Vasconcelos et coll. (1995), tabli dans une configuration multi-turbine proche de
la notre. Les valeurs de m ainsi calcules sont en accord avec les mesures de vrification
obtenues dans notre racteur par la mthode de la sonde conductimtrique (Linek et coll.,
1996).
Deux situations extrmes issues de la Figure 57 sont dtailles: la premire situe au
dbut de la phase 1 de la culture (qO2=0,006 mol.L-1.h-1 t=0,2 h) ne correspond pas aux
conditions de culture intensive, alors que la deuxime, situe la fin de la phase 1 (qO2=0,36
mol.L-1.h-1 t=6,8 h), leur correspond. Les temps caractristiques dtermins dans ces deux
situations sont compars aux temps caractristiques de la diffusion sur la Figure 58,
conformment la Figure 10.
193
Temps caractristique, s
1000
d
m
r
G
100
10
0.1
0.001
0.006
0.01
0.1
-1
0.36
-1
qO2, mol.L .h
Figure 57. Temps caractristiques calculs au cours de la culture E. coli A.
phase liquide homogne
d/10
distribution ressre
absorption acclre par qO2
10d
phase liquide htrogne
distribution tendue
x
x
absorption physique
G
r
Figure 58. Comparaison des temps caractristiques entre le dbut (qO2=0,006 mol.L-1.h-1,z) et la fin
(qO2=0,36 mol.L-1.h-1, X) de la phase 1 dans la culture E. coli A, d'aprs la Figure 57.
Aux vues des temps caractristiques du bioracteur, il apparat sur la Figure 58 que le
racteur fonctionne en dbut de culture de manire idale : la phase liquide est homogne, la
distribution des temps de sjour des bulles de gaz est ressrre ce qui permet de considrer la
phase gazeuse homogne, et l'absorption est physique.
Entre le dbut et la fin de la phase 1, les ordres de grandeur des rapports d/ G , d/ r ,
r / G et r / m sont inverss, ce qui traduit un bouleversement de l'ensemble des phnomnes
physiques et biologiques qui interagissent avec le transfert d'oxygne. L'tude de la Figure 57
194
montre que les diffrentes influences auxquelles est soumis le transfert d'oxygne ne cessent
de fluctuer en cours de culture. Ajoutons que les modifications macroscopiques du milieu
dues la prsence de biomasse active, caractrises par le temps B (Figure 10), se
dveloppent galement et influencent aussi le transfert. L'tude des temps caractristiques
montre que l'intensification de la cultures pousse vers la perte de l'homognit du liquide
(accroissement des ratios m /r , d/ r et m/ d) et vers la perte de l'homognit du gaz
(accroissement des ratios G /r , G/ m et G/ d).
Ces considrations incitent l'utilisation de modles structurs pour la phase liquide
(Schmalzriedt et coll., 2002) (I.1.6.2), et de modles faisant intervenir la distribution des
temps de sjour des bulles pour la phase gaz (Midoux et coll., 1980).
Cependant il apparat que le temps caractristique de la diffusion, partir duquel nous
tudions les influences du systme sur KT, est lui-mme dfini en fonction de KT (d=1/KT), or
nous avons vu que KT tait susceptible de varier d'un facteur 1 8 (Echem=0,25 et EqO2=2).
Dans ces conditions, quelle crdibilit accorder l'tude des temps caractristiques?
L'influence des phnomnes physico-biologiques sur le transfert devrait pouvoir tre tudi
partir d'un temps caractristique de la diffusion dfini indpendamment de KT et des
diffrentes dynamiques du systme, soit d=1/(KLa)ref ; mais quelle milieu de rfrence
choisir, et dans quelle configuration effectuer sa dtermination?
Faces ces considrations, l'utilisation du modle que nous utilisons actuellement ne
suffit-il pas, condition d'tre lucide par rapport aux limites q'il peut rencontrer en culture
intensive?
195
III.3.5. Conclusions
Des cultures de S. cerevisiae et de E. coli (ralises par L. Faure et J.-L. Uribelarrea)

ont t utilises comme modle dtude non visqueux, des cultures dA. niger (ralises
DSM) comme modle dtude visqueux. Toutes les cultures ont t cultives en mode fedbatch jusqu des concentrations dpassant les 40 g.L-1, afin dlucider les effets de la
biomasse et de son activit sur le transfert doxygne.
Les valeurs de concentration en biomasse, de consommation volumique doxygne, et de
coefficient de transfert doxygne KT obtenues dans nos cultures (Tableau 15) sont 5 10 fois
plus leves que celles rapportes dans la littrature sur le transfert doxygne (Tableau 4).
Lvolution de KT en cours de culture ne peut pas tre corrle par : K T = .e . US , ce qui
remet en question, en condition de culture microbienne intensive, ou bien cette corrlation, ou

bien la dtermination de KT.
Il est observ que la dynamique microbienne exerce une influence sur le transfert
doxygne : dans les mots de culture les valeurs de KT et de KL en cours de culture sont 4 6
fois plus petites que dans les milieux minraux constitus des principaux sels des milieux de
culture.
Une interprtation des diffrences entre les valeurs dtermines en milieu biologique
(surnageant de culture ou mot de culture) et celles dtermines dans le milieu minral

constitu des principaux sels du milieux de culture est recherche par des facteurs
dacclration, conformment la corrlation de Sundararajan et Ju (1993) :
K T = (K L a ) ref E chem E pp E qO 2
o (KLa)ref ne dpend que de e et de Us conformment la description du coefficient de
transfert en milieu minral report dans le chapitre 0.
Linfluence des modifications chimiques sur le transfert doxygne apparat ds les
premiers instants aprs ensemencement, en rduisant nettement le transfert par rapport au
milieu constitu des principaux sels du milieu de culture (Echem=0,25). Certaines
modifications chimiques du milieu permettant aussi une lgre augmentation du transfert
doxygne durant le cours de la culture. Globalement, le mot de culture se comporte vis-vis du transfert comme une solution non-coalescente ionique additionne de surfactants.
La prsence physique des particules semble avoir peu deffet.
196
Des valeurs de EqO2 aussi leves que 2 sont values. Ce rsultat est tout fait
original par rapport la littrature, qui ne prvoit pas dacclration en racteur agit
(Merchuck, 1977).
Il ressort que les trois types dacclration doivent tre considrs pour comprendre
lvolution de KT , et que linfluence respective des diffrentes acclrations volue en cours
de culture. Une quantification prcise de ces diffrentes influences ncessite des
investigations complmentaires, comme la distribution de taille de bulles.
Les effets sur le transfert doxygne induits par lajout dantimousse, ou par laugmentation
de la viscosit cellulaire chez A. niger, sont prpondrants par rapport aux mcanismes
biologiques dacclration.
Le complment dtude sur la dtermination de KT montre que :
- linfluence de lentranement de surface est rduite en condition de culture cellulaire,

sans doute cause de la prsence de mousses et dune rtention gazeuse importante.
- la ventilation du CO2 ne semble pas acclrer le transfert de loxygne, et il est
suppos que cette ventilation seffectue principalement par diffusion du CO2 dissous
vers les bulles dair.
- les interactions entre phnomnes physiques et biologiques au sein du bioracteur
sont tangibles et la matrise des bioprocds intensifs passe par la matrise de ses
interactions.
197
198
IV. CONCLUSIONS ET PERSPECTIVES
199
Conclusions et Perspectives
CONCLUSIONS
Lensemble de ce travail contribue la comprhension des phnomnes relatifs au

transfert de gaz en condition de culture microbienne intensive.
Ltude bibliographique rvle quen complment du schma du transfert doxygne
en culture microbienne propos par dArnold et Steel (1958) (Figure 1), des thories, parfois
contradictoires, dessinent un schma beaucoup plus complexe de la ralit du transfert gazeux
dans les mots de culture. Il apparat aussi que le transfert gazeux en condition de culture
microbienne est tudi dans des situations dcole (eau pure, racteur idal, faibles
concentrations cellulaires, faibles puissances dissipes) qui ne reprsentent pas les problmes
rencontrs en production intensive, et paralllement, que la transposition des problmatiques
de la littrature vers des situations de forte productivit peut ouvrir des champs
dinvestigation originaux.
Des modles non-structurs du transfert doxygne dans le racteur sont dvelopps.
Ils considrent la phase gazeuse disperse par le diffuseur comme tant homogne de
composition ou s'coulant de manire piston, et prennent en compte lentranement de surface
et lexistence dune rtention gazeuse permanente.
Ces modles, allis des mthodes exprimentales dynamiques (roxygnation) ou
statiques (bilan gazeux coupl l'oxydation par le sulfite), permettent la dtermination de KLa
en milieux minraux de rfrence.
En milieu coalescent :
A faible puissance dissipe, pour e<4000 W.m-3 (correspondant aux vitesses
dagitation ne permettant pas lentranement de surface), les valeurs de KLa obtenues par le
modle dcrivant lcoulement piston du gaz sont plus proches de la littrature que de celles
obtenues par le modle dcrivant lhomognit du gaz.
A forte puissance dissipe, pour 4000<e<35000 W.m-3 (correspondant aux vitesses
dagitation permettant lentranement de surface), les corrlations de la littrature, tablies
pour e3000 W.m-3, sont extrapoles. Sur ce domaine, seuls certains des modles prenant en
compte lentranement de surface gardent une cohrence avec la littrature, en particulier le
modle ME5 qui dcrit lcoulement piston du gaz dispers par le diffuseur et les changes
par diffusion entre le ciel gazeux et le liquide. Par rapport la littrature, le modle ME5 a
l'avantage de permettre la dtermination de KLa en condition dentranement de surface
et daration simultane par le diffuseur, des puissances dissipes jusqu' dix fois
200
suprieures celles communment tudies, tout en permettant de conserver la mme

simplicit exprimentale qu'en l'absence d'entranement de surface.
En milieu non-coalescent :
A faible puissance dissipe, la mthode exprimentale statique donne des valeurs de
KLa cohrentes avec la littrature, plus proches de la littrature avec le modle d'coulement
piston du gaz qu'avec le modle de composition homogne, alors que les valeurs obtenues par
la mthode dynamique scartent de la littrature pour e>1000 W.m-3.
A forte puissance dissipe, aucun des modles tests ne permet d'obtenir des valeurs
de KLa cohrentes avec la littrature ; il est suppos que les modles tests ne reprsentent pas
correctement le schma hydrodynamique du racteur.
A lissue de cette tude le modle dcoulement piston est adopt pour reprsenter
lcoulement du gaz dispers par le diffuseur dans le racteur, et des corrlations dcrivant
l'volution de KLa en fonction de e sont dtermines, spcifiques la configuration du
racteur, en milieux minraux de rfrence (coalescent et non-coalescent), pour
300<e<35000 W.m-3 c'est--dire en dehors du domaine de la littrature.
Les cultures cellulaires utilises comme modle dtude se dmarquent de la
littrature sur le transfert doxygne par des concentrations en biomasses, des
consommations volumiques doxygne et des valeurs du coefficient de transfert de 5 10
fois plus leves. Ces tudes, menes en conditions relles de culture et dans un champ
de contrainte visant les hautes productivits, permettent une transposition industrielle.
Le transfert doxygne sur les mots de culture et sur les surnageants associs est
compar au transfert d'oxygne caractris sur les milieux minraux de rfrence. Par rapport
aux principaux sels du milieu initial avant inoculation, la rtention gazeuse sur les mots de
culture et sur les surnageants associs est 1,5 fois plus leve, et les valeurs du coefficient de
transfert KT et de la conductance de transfert KL,b sont entre 4 et 6 fois plus petites. La
prsence de biomasse influe donc sur les conditions du transfert :
Les modifications chimiques du milieu sont indniables : par rapport au transfert
doxygne, le milieu biologique peut tre reprsent par un milieu non-coalescent
ionique additionn de surfactants, et non par de leau pure comme cela est souvent
pratiqu.
Linfluence de la prsence physique des particules est mal dfinie.

Lacclration due la consommation de loxygne, mentionne ici pour la
premire fois en racteur agit, et ce parce que des conditions relles de culture intensive
201
sont utilises, pourrait augmenter la valeur de KLa par 2 et ne serait donc pas ngliger
dans le dimensionnement des bioracteurs.

L'ensemble de la littrature proposant des tudes du transfert d'oxygne dans les
bioracteurs avec des mesures effectues en milieux minraux doit donc tre considre avec
intelligence si une transposition en conditions relles de culture est prvue.
La dmarche et les outils dinvestigation pour quantifier, modliser et comprendre les
phnomnes du transfert doxygne en culture microbienne relvent de comptences
interdisciplinaires du gnie des procds et du gnie microbiologique. Ce travail prsente des
rsultats originaux dans des domaines dinvestigation peu explors ce jour et dun intrt
majeur pour leur exploitation industrielle, pointe les limites des outils thoriques et
exprimentaux utiliss pour apprhender la complexit des mots de culture milieux
polyphasiques, volutifs, et indfinis et ouvre la voie vers dautres chantiers dinvestigation.
PERSPECTIVES
La difficult estimer correctement KLa apporte une question : pourquoi ne pas

tudier le racteur en terme de flux molaire (mol.m-3.s-1) plutt quen terme de KLa ? Le choix
du flux molaire permettrait de ne travailler quavec des donnes mesures, sans mettre
dhypothse sur lcoulement de la phase gazeuse, source principale derreur dans la
dtermination de KLa. Cette dmarche est peu pratique (Matsumura et coll., 1979), dune
part parce que sa mise en uvre ncessite un transfert en rgime permanent, dautre part parce
quelle ne renseigne pas sur la facilit avec laquelle est effectu le transfert (car cette
information est confondue avec la diffrence de potentiel d'change), et ne permet donc pas le
dimensionnement dappareils. Le premier prolongement de cette tude serait donc de
caractriser plus prcisment lcoulement gazeux dans le racteur. Bien que le modle
dcoulement piston ait t prfr au modle homogne, la question na pas t clairement
tranche. Ltude des distributions de temps de sjour des bulles (Andr et coll., 1981) serait
une vrification possible.
Un autre prolongement direct consisterait lever les relations dinterdpendance des
couples de variables KT et D , KT et KL,b , KT et EqO2, utiliss pour justifier les valeurs des
facteurs dacclration. En effet, les volutions de KT sont expliques partir des variables D,
KL,b et EqO2, or ces variables sont elles-mmes calcules partir de KT. Ces vrifications
ncessitent de nouvelles mesures et de nouvelles expriences, nous proposons en autre :
202
une mesure de EqO2 en chemostat (plutt que par Eq. 123, fonction de KL, donc de
KT) : lexprience consisterait atteindre une concentration en biomasse par une stratgie
efficace (le mode fedbatch pour les hautes concentrations), puis de stabiliser la culture e,
Us et X constants. De l, plusieurs valeurs de qO2 pourraient tre testes en fonction de
lalimentation en substrat : la mesure de KT en ligne rendrait alors la relation entre EqO2
(=KT/KLaref) et qO2 vidente.
la mesure de la distribution des tailles de bulles : elle permettrait dvaluer
prcisment laire interfaciale pour vrifier la relation KT=KLa, en milieux minraux et
biologique, et apporter une validation supplmentaire des valeurs calcules, surtout forte
puissance dissipe. Cette mesure permettrait aussi de connatre la taille relle des bulles en
milieu biologique compar aux milieux contenant des surfactants (Eq. 121) et donc de rduire
lerreur principale pesant sur lvaluation de EqO2 (Figure 50). Enfin, la mesure de la
distribution des tailles de bulles en fonction de la puissance dissipe permettrait de mieux
comprendre leffet de la troisime turbine sur le transfert (III.2.2).
En supplment de ces vrifications directes de notre travail, deux voies dinvestigation
ont t abordes au cours de nos recherches de manire exploratoire et pourraient tre
poursuivies suite aux rsultats prliminaires encourageants : lobservation directe des
interfaces par le microscope in-situ, et la dtermination de lacclration EqO2 par une
mthode au forane.
Microscopie in-situ
Lessentiel des mcanismes de contrle du transfert de gaz en culture microbienne se

localisent dans linterface gaz-liquide. Actuellement lobservation des interfaces gaz-liquide
se limite lobservation de bulles maintenues dans un coulement laminaire (Paaschen et
Lbbert, 1997), o dinterfaces planes non agites (Tsao et Lee, 1975). En racteur agit, ni la
topographie des interfaces, ni la dynamique des lments de fluides et des particules en
interaction avec les interfaces na pu tre observs, en particulier cause du dfit
technologique que cela reprsente.
Les nouvelles technologies de microscopie in-situ (matriel et mthodes : Annexe
VI.8.1) devraient permettre lobservation de bulles en rgime turbulent en condition normales
de cultures microbiennes. Nous avons ralis des premiers tests laide du microscope
dvelopp par Hajo Suhr (Camisard et coll., 2002). Les attentes ont t grandes, les rsultats
dcevants.
203
Les observations ont t ralises sur des levures S. cerevisiae lyophilises

resuspendues (Lesaffre) et sur une culture dE. coli. A cause de problmes dtanchit le
microscope na pas pu tre strilis. Il apparat que des levures adhrent aux interfaces de
bulles (Figure 59A). Lobservation tend se confirmer aussi pour E. coli mais la taille des
microorganismes (12m) ne permet pas une observation prcise (Figure 59B). Aux
concentrations utilises et dans les conditions exprimentales, aucune surabondance des
microorganismes aux interfaces nest observe. Le microscope in-situ a aussi t utilis dans
lespoir dobserver des microbulles de CO2 en condition de fermentation alcoolique chez la
levure. Nos questions taient dvaluer la taille des microbulles, et de savoir si la nuclation
pouvait tre initie sur les levures elles mmes. Aucune microbulle na pu tre observe.
Figure 59. Observation au microscope in-situ dinterfaces de bulles en culture microbienne. A Levures
lyophilises resuspendues, B culture dE. coli.
Le microscope actuel possde un autre inconvnient : la zone dobservation est loin

des conditions de culture. Elle se situ en effet entre deux plans parallles distants de 300 m
(constitus dun ct par la diode, et de lautre la fentre dobservation ; Figure 61), et
constituant donc une zone dcoulement qui ne reprsente pas la turbulence du systme. Une
nouvelle technologie avec clairage non plus en vis--vis mais collatral devrait permettre
dobserver rellement le cur de la culture, et des concentrations suprieures 20 gMS.L-1.
Les observations devraient permettre de complter les connaissances sur les affinits
entre les cellules et les bulles.
Dtermination de KLa par la mthode au forane
La mthode de mesure de KLa au gaz traceur est connue, mais sa mise en uvre telle
quelle est dcrite dans la littrature nest pas applicable aux cultures microbiennes. En effet
Pedersen et coll. (1994) utilisent du Krypton radioactif, et Boumansour et Vassel (1998) du
propane : ces gaz peuvent tre toxiques pour la biomasse. Lintrt de ces mthodes est la
204
dtermination de EqO2 (Eq. 70 o KLapp est la mesure ralise par la mthode au gaz traceur,
en condition de culture normale, le forane ntant pas consomm).
Le forane (R134a, utilis en rfrigration) a t choisi dans notre tude car il est non
consomm et non toxique, dautre part il est suffisamment soluble (0,9 g.L-1) pour permettre
lobtention dun signal consquent avec linjection dune petite quantit de liquide satur (50
mL), enfin le coefficient de diffusion du forane est proche de celui de loxygne ce qui permet
dobtenir des valeurs de KLa du mme ordre de grandeur.
Les rponses aux pulses de forane en phase liquide (matriel et mthodes : annexe
VI.8.2) sont mal diffrenciables les unes des autres (Figure 60). La forme des rponses est
dautre part trs proche de celle obtenue pour un pulse gazeux (courbe note ref ) : les pics
obtenus refltent surtout la dilution dans le ciel et caractrisent mal la vitesse de transfert.
Dans nos conditions, le temps caractristique correspondant au lavage du ciel vaut VC/Qs=87
s, qui est au moins cent fois suprieur au temps caractristique de la diffusion, 1/KLa, or ces
deux phnomnes sont additionns dans le signal : lextraction de la valeur de KLa est alors
impossible. Pour amliorer la prcision de la dtermination de KLa il faudrait rduire le
volume du ciel, ce qui est trs dlicat en culture microbienne cause des mousses. La raison
pour laquelle les pics de forane sont moins importants en milieu salin quen eau pure est
inconnue ; peut tre du forane stagne t-il dans la phase disperse sous forme de rtention
permanente, et un lent relargage le rendrait indtectable.
450
400
ref
400
ref
350
400 rpm
350
400 rpm
300
600 rpm
300
600 rpm
250
1000 rpm
250
1000 rpm
200
150
100
200
150
100
50
50
0
0
Fraction de forane
Fraction de forane
450
100
200
Temps, s
300
100
200
Temps, s
300
Figure 60. Dynamique de la rponse un pulse de forane en fonction de lagitation. A eau pure, B
Na2SO4 50 g.L-1. La rfrence ref est un pulse de 10 mL gazeux introduit dans le ciel gazeux. Pour
N=400, 600, et 1000 rpm, un pulse de forane correspondant 10 mL gazeux (45 mg) est introduit
sous forme soluble. La fraction dtecte est une fraction relative. Qd=0,146 L.s-1, VL=10 L, T=37C,
P=0,3 bar.
205
Bien quinutilisable avec la configuration actuelle du racteur, le forane semble offrir

des potentialits de gaz traceur.
Enfin, de part sa gnricit, cette tude est transposable d'autres applications, comme
ltude de la ventilation du CO2, lautre gaz de grande importance en culture cellulaire. Les
effets du CO2 sur les cultures intensives doivent tre considrs avec srieux : la pression
partielle en CO2 dans le ciel du racteur de la culture E. coli B atteint 0,25 bar t=5,8 h, alors
que les premiers effets sur la croissance de la plupart des microorganismes unicellulaires
dintrt industriel surviennent partir de 0,15-0,2 bar (Jones et Greenfield, 1982). Les
pressions de CO2 sont accrues cause de la pression hydrostatique la base de fermenteurs
industriels de trs grande taille (Chen et Gutmanis, 1976 ; McIntyre et McNeil, 1998), en
particulier en condition daration rduite. Cependant les mthodes permettant la mesure du
CO2 dissous en culture cellulaire sont encore amliorer.
Lensemble du travail effectu invite revoir, en condition de culture cellulaire
intensive, le mcanisme de transfert tel quil apparat frquemment dans le schma simplifi
d'Arnold et Steel (1958) (Figure 1). En particulier, la comprhension des interactions entre
lactivit biologique et le transfert doxygne est fondamentale pour atteindre des hautes
performances et pour permettre linnovation des procds microbiologiques et laccs des
performances optimales.
206
V. REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
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220
VI. ANNEXES
221
Annexes
VI.1. Calcul de la solubilit de loxygne

VI.1.1. Dans leau pure
La constante de Henry dfinissant la solubilit de loxygne dans leau pure (Eq. 2) est
calcule daprs une moyenne des donnes de Sander (1999). H varie en fonction de la
temprature selon :
H 1
1
H = H ref . exp sol

R T 298,15
(132)
o Href est la constante de Henry de rfrence, 25C : Href=0,00126 mol.L-1.atm-1, et sol H

est lenthalpie de la solution et
sol H
= 1650K .
R
Les valeurs de la constante de Henry et de la solubilit de l'oxygne sont donnes sur

la gamme T[20;40C] dans le Tableau 16. RTH est le produit de la constante des gaz
parfaits, 8,3145 J.mol-1.K-1, de la temprature en K et de H en mol.m-3.Pa-1, cest une
constante adimensionnelle utilise dans les quations bilan des modles de transfert.
Tableau 16. Quelques donnes relatives la solubilit de
loxygne dans leau pure en fonction de la temprature.
La solubilit est donne lquilibre avec loxygne de lair
et pression atmosphrique.
T
(C)
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
H
(mol.L-1.atm-1)
1,385E-03
1,358E-03
1,333E-03
1,308E-03
1,284E-03
1,260E-03
1,237E-03
1,214E-03
1,192E-03
1,171E-03
1,150E-03
1,130E-03
1,110E-03
1,090E-03
1,071E-03
1,053E-03
1,035E-03
1,017E-03
9,999E-04
9,831E-04
9,666E-04
Solubilit
(mg.L-1)
9,28
9,10
8,93
8,76
8,60
8,44
8,29
8,14
7,99
7,85
7,71
7,57
7,44
7,31
7,18
7,06
6,93
6,82
6,70
6,59
6,48
RTH
(1)
3,331E-02
3,279E-02
3,228E-02
3,179E-02
3,130E-02
3,083E-02
3,036E-02
2,991E-02
2,947E-02
2,903E-02
2,861E-02
2,819E-02
2,779E-02
2,739E-02
2,700E-02
2,662E-02
2,625E-02
2,589E-02
2,553E-02
2,518E-02
2,484E-02
222
Annexes
VI.1.2. Calcul de la solubilit de loxygne en milieu salin
Nous utilisons le modle de Weisenberger et Schumpe (1996) (Eq. 4).

Exemple de calcul : milieu salin modle compos des trois principaux sels du milieu
de culture dE. coli : K2HPO4 (8 g.L-1), (NH4)2HPO4 (8 g.L-1), Na2HPO4 (2 g.L-1), et une
temprature de travail de 37C.
Paramtre spcifique loxygne :
h O 2 = h O 2, 0 + h T (T 298,15)
= 4.10 3 m3 .kmol1
Rapport des solubilits :
log(H 0 / H) = (h i + h O 2 )ci
= 0,0351
Soit H=0,922 H0, et RTH=0,0239, H0 tant la constante de Henry dans leau pure 37C.
De la mme faon, pour une solution de Na2SO3 , 10 g.L-1, 37C : H=0,939 H0.
Pour une solution de Na2SO3 , 50 g.L-1 37C : H=0,731 H0.
Pour le milieu initial utilis dans la culture de S. cerevisiae : H=0,97 H0, H0 tant dfini ici
dans leau pure 30C.
Tableau 17. Slection de paramtres du modle de
Weisenberger et Schumpe (1996).
Paramtres des ions Paramtres de loxygne
m3.kmol-1
+
hK
0,0922
hO2=0 m3.kmol-1
2hHPO4
0,1499
hT= -3,34.10-4 m3.kmol-1.K-1
+
hNH4
0,0556
hNa+
0,1143
hSO320,1270
223
Annexes
VI.2. Mthodes de dtermination de KLa

Tableau 18. Mthodes dynamiques pour la dtermination de KLa. dO2 oxygne dissous ; 0O2
chelon doxygne pur dans un systme pralablement dgaz.
Mthode
Auteurs
Principe et mise en uvre
Limites dapplication
dynamique
Roxygnation Bandyopadhyay Un chelon de concentration en oxygne est
-difficile en systmes
dynamic
(1967)
appliqu sur le gaz en entre du racteur ; une
visqueux
gassing out
Dang (1977)
sonde suit lvolution de dO2 ; KLa est calcul
-les diffrentes dynamiques
ou
Ruchti (1981)
par identification paramtrique
prennent de limportance
electrode
Linek (1981)
-0O2 permet de saffranchir du transfert multi KLa croissant et doivent
momentum
Linek (1982)
composants
tre values avec
ou
Linek (1987)
-applicable en fermentation
prcision
gassing in
Rainer (1990)
-simple : pas besoin danalyse de gaz
-difficile fort qO2
-x* pas ncessaire en travaillant avec des valeurs
normalises
Echelon de
pression
dynamic
pressure
method ,
DPM
Zubarev (1977)
Linek (1989)
Poizat (1992)
Gogate et
Pandit (1999)
Carbajal (2004)
Un chelon de pression denviron 200 mbar est

appliqu (instantanment) lensemble du
racteur ; une sonde suit lvolution de dO2 ;
KLa est calcul par identification paramtrique
-limine les effets de mlange non idal puisque
la pression est uniforme donc la concentration
en O2 varie simultanment dans toutes les bulles,
donc gaz et liquides peuvent tre considrs
comme parfaitement mlangs (Gogate et Pandit
1999) et labsorption dO2 pur ou dair conduit
des rsultats similaires (Linek 1989, Gogate et
Pandit 1999), le transfert de N2 peut tre nglig
(Gogate et Pandit 1999)
-applicable aux grands racteurs
-applicable aux systmes visqueux
-ne ncessite pas la mesure de la rtention
gazeuse
-la sonde O2 ne doit pas

ragir la pression
-peu fiable si il y a
dgagement de mousse (par
exemple en fermentation)
-peu fiable si qO2 nest pas
stable (sur une plage de 10
min au moins)
-la mthode prsente par
Poizat est mise part car le
bilan est ralis sur un
systme ferm. Elle est trs
contraignante par sa dure
(5 h).
Absorption
gazeuse
vant Riet
(1979)
Andr (1981)
Rainer (1990)
Poizat (1992)
Du CO2 est absorb dans un tampon

carbonate/bicarbonate ; KLa relatif au CO2 est
valu partir de lanalyse du gaz. CO2 tant 40
fois plus soluble que O2, la remonte du signal
stend sur une priode beaucoup plus longue,
ce qui permet une meilleure prcision de
lestimation de KLa (Andr 1981).
-une version existe avec absorption en continu
mais elle semble moins fiable (Rainer 90)
-en tant que mthode chimique, cette raction est
mieux contrlable que la mthode au sulfite
-sur milieu de fermentation acidifier avec H2SO4
plutt que dutiliser un tampon trs concentr
permet de conserver les proprits physiques du
milieu (Andr 1981)
-fiable si KLa<150 h-1

(Rainer 1990) car sinon
linfluence du modle de
dispersion gazeuse devient
trs important (Andr
1981)
-ncessite la mise en place
dun collecteur de gaz prs
de la surface libre
224
Annexes
Rponse
Chapman
initiale et
(1982)
double rponse Gibilaro (1985)
Gogate et
Pandit (1999)
Gaz traceur
Base sur la distribution des temps de sjour des

bulles, la double rponse ncessite le suivit des
phases liquide et gazeuse pendant un chelon de
concentration, la rponse initiale est drive de
la double rponse et saffranchit du suivi de la
phase gaz mais en se focalisant sur lunique
variation de dO2 au dpart de lchelon.
-ne ncessitent pas dhypothse sur ltat de
mlange de la phase gaz
Pedersen (1994) Un gaz traceur est inject dans le racteur ; KLa

Boumansour
relatif sa cintique de transfert permet de
(1996 et 1998) remonter au KLa relatif loxygne en
supposant le rapport des deux KLa constant.
Un gaz traceur doit tre inerte, et ni consomm,
ni produit dans le milieu, tre rare dans lair,
sont utiliss : propane (Boumansour 1996),
thylne, krypton radioactif (Pedersen 1994),
argon, hlium
-peut tre utilis en fermentation si le gaz traceur
nest pas nocif pour les microorganismes
-le ratio KLa /KLapropane est constant 5%
malgr la variation de nombreux paramtres (T,
P, sels) (Boumansour 1996)
-permet laccs une valeur de KLa
indpendante de la consommation en O2
Tableau 19. Mthodes statiques pour la dtermination de KLa.

Mthode
Auteurs
Principe et mise en uvre
statique
Sulfite
Linek (1989)
Bas sur la consommation de loxygne par le
Rainer (1990)
sulfite pour donner le sulfate en prsence dun
Poughon (2003) catalyseur (cobalt ou cuivre) :
1
2
Co 2 +
SO 24
O 2 + SO3
2
Le sulfite peut tre aliment en batch ou en

continu (Linek 89). KLa est calcul par un bilan
matire en fonction de la vitesse de disparition
du sulfite (dos liode) :
r SO 2
K L a ( x* x L )= r O 2 = 3 (en rgime
2
permanent).
-la concentration en catalyseur doit tre
correctement fixe (<10-5 M, gnralement 10-6
M) pour que la concentration en oxygne dans le
liquide soit nulle (xL=0) et que la raction ne soit
pas acclre par la raction chimique mais bien
contrle par le phnomne de transfert (Reuss,
1993)
-cette mthode permet aussi de calculer KL et a
indpendamment
-la rponse initiale

ncessite le calcul de la
drive seconde de xO2 ,
donc de la drive
troisime de la rponse de
la sonde
-ne semble pas fiable en
systme non-coalescent
(Gibilaro 1985)
-ncessite des mesures de
scurit pour lutilisation
de gaz radioactif
-la mthode telle quelle est
pratique par Boumansour
(cintique du propane
dissous) ne convient que
pour des KLa trs faibles
(<30 h-1)
-lanalyse continue du gaz
traceur en sortie de
fermenter permet de
mesurer des KLa jusqu'
1080 h-1 (Pedersen 1994).
Limites dapplication
-impose une forte
concentration en sels (1 2
M) et donc ne permet pas
de caractriser tout type de
milieu
-ncessite le dosage du
sulfite hors ligne
225
Annexes
Glucose
oxydase
Hsieh (1969)
Linek (1980)
Linek (1981)
Rainer (1990)
O2 est consomm dans une raction

enzymatique :
-possibilit daccumulation
de glucono-lactone
1
oxydase
glucono - lactone + H 2 O
O 2 + glucose glucose
2
acide gluconique
glucono - lactone + H 2 O lactonase
KLa est ensuite calcul par titration de lacide.

-pour que la vitesse de consommation de O2 ne
soit pas limitante les concentrations des enzymes
doivent tre assez leves, en particulier
[glucose oxydase]>1,5g.L-1
-le systme ne provoque pas dacclration du
transfert (Rainer 1990)
-est une simulation dun systme biologique
(Rainer 1990)
Eau oxygne
Hickman (1988) La gnration doxygne est ralise au sein du

Gogate et Pandit liquide en dcomposant H2O2 par la catalase. Un
systme continu est mis en place ; KLa est
(1999)
calcul lorsque les concentrations en peroxyde et
en O2 sont stabilises.
Enrichissement Poughon (2003) Cest la version statique de la mthode de

physical
roxygnation. Un flux continu de liquide
gassing-in
dsoxygn alimente le racteur et le quitte
enrichi en oxygne. KLa est calcul par un bilan
matire en rgime permanent ou transitoire.
-le rgime transitoire ncessite lenregistrement
de lvolution de la concentration en oxygne
dissous et la prise en compte de la rponse de la
sonde
Bilans gazeux
vant Riet
(1976)
Rainer (1990)
Pedersen (1996)
Wu et coll.
(2003)
Bilan gazeux + Poughon (2003)

oxydation par
le sulfite
(BG+OS)
(semi continue)
-la catalase peut produire

de la mousse
-inutilisable en milieu
riche cause de la perte
dactivit de la catalase et
de la ractivit de H2O2
-impossible forte valeur
de KLa car il devient
difficile de produire un
dsquilibre entre les
phases
-intervalle de confiance de
15%
Absorption dO2 coupl avec sa consommation

au sein du liquide (par les cellules). KLa calcul
par un bilan gazeux entre lentre et la sortie du
racteur.
-convient particulirement en fermentation
-ncessite un modle
prcis du profil gazeux
-ncessite une analyse
complte du gaz (N2, O2,
CO2, Ar)
Base sur le mme principe que la mthode au

sulfite, qO2 est valu par un bilan gazeux, ce qui
vite le dosage hors ligne.
-mthode rapide et facile
-x* doit tre connu

-intervalle de confiance de
10%
-necessite la description de
la distribution de la phase
gaz
226
Annexes
VI.3. Techniques analytiques

VI.3.1. Biomasse
Aprs filtration dun volume connu dchantillon (4 20 mL) sur membrane de

porosit 0,45 m pralablement sche et pese, la membrane est rince lacide
chlorhydrique 100 mM, sche ltuve sous vide (200 mm Hg, 60C) pendant 24 heures et
enfin pese. La concentration en masse sche est dtermine par diffrence des deux peses et
rajustement par rapport au volume filtr.
VI.3.2. Glucose
YSI
Au cours de la culture, le glucose rsiduel est dos laide dun analyseur automatique
Y.S.I. modle 2000 (YELLOW SPRING INSTRUMENT Inc., Yellow Spring, Ohio, USA).
Le principe de ce dosage est bas sur la libration de peroxyde doxygne (H2O2) lors de
loxydation du glucose par la glucose oxydase immobilise sur une membrane.
Glucose + 2 H2O + O2 acide gluconique + 2 H2O2
Loxydation de H2O2 par une lectrode de platine libre un flux dlectrons. Le
courant ainsi cre est proportionnel la concentration en glucose. Aprs talonnage de
lappareil, le rsultat est directement dlivr en g.L-1.
Les chantillons doser doivent tre exempts de cellules (centrifugation) et dilus de
sorte que la concentration en glucose soit infrieure ou gale 2.5 g.L-1.
DNS
Aprs la culture, les chantillons prlevs sont doss par la mthode de lacide 3,5dinitrosalicylique (DNS) (Miller, 1959).
Prparation du ractif : dissoudre 300 g de tartrate double de sodium et potassium et
16 g de NaOH dans un peu deau distille. Ajouter progressivement 10 g dacide 3,5dinitrosalicylique et complter 1 L avec de leau distille. Il peut tre ncessaire de chauffer
la solution pour dissoudre compltement le DNS.
Mthode de dosage : 200 L de ractif sont ajouts 200 L de surnageant
pralablement dilu. Le mlange est port bullition pendant 5 minutes au bain-marie. Aprs
refroidissement dans la glace, 2 mL deau distille sont ajouts. Un temps de 15 minutes est
ncessaire pour que lchantillon se stabilise temprature ambiante. La lecture
227
Annexes
spectrophotomtrique est ralise 500 nm contre un blanc compos de 200 L de ractif et

200 L deau distille. La gamme talon est comprise entre 0 et 2.5 g.L-1 de glucose.
VI.3.3. Ammonium
Au cours de la culture, la concentration en ions ammonium est dose laide dune

lectrode (ORION RESEARCH, Boston, USA). Le dosage consiste transformer les ions
ammonium en ammoniaque en milieu alcalin. Le gaz ainsi form pntre dans llectrode en
passant travers une membrane en Tflon. Il stablit alors une diffrence de potentiel entre
les ions OH- (librs par la raction de lammoniaque avec llectrolyte) et llectrode. Il
existe une relation linaire entre le logarithme dcimal de la concentration en ammonium et la
diffrence de potentiel mesure.
La sonde est plonge dans 5 mL dchantillon agit mlang 200 L de tampon ISA
(ORION RESEARCH, Boston, USA) de manire ce que le pH du mlange soit compris
entre 11 et 14. La gamme talon est comprise entre 10-1 et 10-4 M dNH4Cl.
VI.3.4. Phosphate
Aprs la culture, les chantillons prlevs sont doss par la mthode utilisant le
molybdate dammonium.
Prparation du ractif
solution A :
6,4 mL dH2SO4 95% dans 50 mL deau distille
solution B :
0,6 g de molybdate dammonium dans 12.5 mL deau distille
solution C :
0,0146 g de tartrate double de potassium et dantimoine dans 5 mL
dH2SO4 5N
Les solutions B et C sont ajoutes la solution A puis le volume est ajust 100 mL
avec de leau distille. 2 g dacide ascorbique sont ajouts et le mlange se colore en jaune. Le
mlange ne se conserve pas plus dun jour.
Mthode de dosage 4 mL dtalon ou dchantillon sont mlangs 0,8 mL de ractif.
Le mlange est agit vigoureusement puis est laiss reposer 15 minutes. La lecture
spectrophotomtrique est ralise 720 nm contre un blanc compos de 4 mL deau distille
et 0,8 mL de ractif. La gamme talon est comprise entre 0 et 5 mg.L-1 de glucose.
VI.3.5. Acides organiques volatils
Les produits volatils de fermentation (acides gras courtes chanes : actate,

propionate, isobutyrate et butyrate) sont doss par chromatographie en phase gazeuse sur un
228
Annexes
chromatographe (HP 5890, Hewlett-Packard Co., Palo Alto, CA, USA) quip dune colonne
remplie (1 m x 0,32 cm) garnie de Propak Q80-100. Lappareil est muni dun dtecteur
ionisation de flamme coupl un intgrateur (HP3396-A) qui calcule lair des pics. Lazote
est utilis comme gaz vecteur une pression de 40 kPa en tte de colonne. Les tempratures
de linjecteur et du dtecteur sont gales 250C. La temprature du four est programme de
la faon suivante :
8C.mn-1
140C
32C.mn-1
166C pendant 7 mn
235C pendant 10 mn
Les chantillons sont doss en prsence dun talon interne (2-mthyl-propan-1-ol, 20

g.L-1 dans H2SO4 0,5N) ajout au surnageant de culture dans la proportion de 1 volume
dtalon interne pour 4 volumes de surnageant. La calibration est effectue laide de
solutions talons de concentrations connues.
Pour certains chantillons, lacidification due lajout dtalon interne entrane la
formation dun dpt blanchtre qui rend le mlange inhomogne et fausse le dosage. Afin de
minimiser la formation de ce dpt, les protines prsentes dans le surnageant sont prcipites
par la mthode suivante : 600 L dchantillon sont mlangs avec 200 L de ZnSO4 0,3M et
200 L de Ba(OH)2 0,2M. Le mlange est agit vigoureusement puis centrifug 20 mn
13000 rpm. Le surnageant est prlev et analys de la manire dcrite ci-dessus. Les
concentrations en acides sont corriges de manire tenir compte du facteur de concentration
du ce traitement.
VI.3.6. Acides organiques non-volatils
Les acides organiques non volatiles forms au cours de la culture (pyruvate et ctoglutarate) sont doss par chromatographie en phase liquide (HPLC) en utilisant un
chromatographe (Alliance, modle Waters 2690) quip dune colonne H+ changeuse dions
(Aminex HPX-87-H, Biorad, USA). Les chantillons sont lus par une solution dH2SO4
5mM dont le dbit est fix 0,5 mL.mn-1 et la temprature 50C. Les acides sont dtects
210 nm (dtecteur PDA Alliance, modle Waters 996) et lintgration des pics est effectue
par le logiciel Millenium.
229
Annexes
VI.4. Lissage et rconciliation des donnes exprimentales

Les courbes lisses sont obtenues par interpolation des points exprimentaux par des
polynmes sur une fentre glissante. Ce lissage permet dobtenir une continuit de la valeur
lisse et de sa drive.
Les courbes lisses sont analyses par une mthode dveloppe au laboratoire (Cailler,
1994) drive des mthodes dcrites par van der Heijden et coll. (Heijden et coll., 1994a ;
Heijden et coll.,1994b) pour la dtection derreur et lajustement de donnes. Cette mthode
permet lajustement des vitesses de raction dans leur globalit. Les calculs se font partir de
la matrice lmentaire construite sur lensemble des variables dtat dfinissant le systme, du
vecteur des vitesses de raction mesures et de la matrice de variance associe ces mesures.
On obtient des valeurs qui permettent dquilibrer les bilans sur les quatre lments pris en
compte : carbone, hydrogne, oxygne et azote. Pour chaque point exprimental, la meilleure
estimation des flux de raction est calcule sur la base dune vrification des bilans
lmentaires sur les vitesses de raction. Cette estimation est effectue par minimisation dun
critre derreur sur lensemble des mesures ou par limination dune mesure si le systme est
surdimensionn. Les variables dtat sont recalcules par intgration des vitesses de raction
estimes, ce traitement permet de ce fait la vrification de la cohrence des donnes
exprimentales.
Bilans carbone et redox
La raction biologique peut tre crite dune faon gnrale de la manire suivante :
S + O2 + NH3 X + CO2 + H2O + P
o S est le substrat, X la biomasse et P les autres produits. Le bilan carbone est dfini par :
= 0 o est le flux en Cmole pour le compos i. On obtient donc :
S + X + CO2 + P = 0
Le bilan redox est dfini par :
. i = 0 o est le degr de rduction du compos i. En
posant :
NH3 = 3 H + N = 0
CO2 = 2 O + C = 0
H2O = 2 H + O = 0
H = 1
230
Annexes
on obtient :
N = -3 ; C = 4 et O = -2
do :
S.S + 4.O2 + X.X + P.P = 0
VI.5. Calcul de la moyenne logarithmique

Elle est utilise pour modliser lcoulement piston des bulles dans le racteur. Elle
sobtient en crivant le bilan matire sur loxygne dun lment de volume gazeux, dbit
constant, en rgime permanent, en supposant que le flux gazeux est conserv (Qin=Qout=Q) :
Q yO 2 Q( yO 2 + d yO 2) k L a.dV.( yO 2 yOB 2) = 0
que lon peut intgrer en dfinissant une coordonne z[0 ; Z] le long de laxe du racteur,
dont la hauteur de liquide ar est Z :
z
in
d yO 2
yO 2 y
B
O2
k L a Sz
dV
Q 0
avec S laire de la section du racteur, et V=ZS le volume de liquide ar, il est possible de
calculer lintgrale :
ln
z
B
yO 2 yO 2 k L a
=
Sz
in
B
Q
yO 2 yO 2
(133)
soit,
k a.S.z
z
B
in
B
yO 2 yO 2 = ( yO 2 yO 2). exp L
Q
(134)
La valeur moyenne du gradient sur le racteur vaut :

B
1 Z z
.0 ( yO 2 yOB 2)dz
Z
in
B

( yO 2 y O 2 )
a.SZ
Q
=
.
.exp k L
1
k L a.S
Q
Z
( y O 2 yO 2 ) =
que lon rcrit en utilisant Eq. 133 et Eq. 134 en z=Z pour obtenir la forme utilise dans
Eq. 96 :
B
( y O 2 y O 2) =
B
( yinO 2 yOB 2 ) ( yout
O 2 yO 2 )
yinO 2 yOB 2
ln out
B
yO 2 yO 2
(135)
231
Annexes
VI.6. Programmation MATLAB

VI.6.1. Programme pour la dtermination de KLa par le modle MH
Ce programme permet d'approximer KLa partir d'une exprience de roxygnation,

dans lhypothse o le gaz est homogne dans le racteur (modle MH).
La fonction 'erreur' permet de calculer lcart entre la concentration mesure
doxygne dissous et la valeur calcule par le modle (Eq. 81). La valeur du modle est
calcule par la fonction 'XSmodele'. (En fait, cette valeur est calcule directement par la
fonction 'odefun' (vecteur y(3)) ; la fonction 'XSmodele' est utilise par volont de
symtrie avec le modle piston (annexe VI.6.2.2) qui utilise obligatoirement cette fonction ;
les deux solutions sont identiques).
function kla_modleMH
%prog principal : permet de calculer kla partir d'une exprience de roxygnation, par
identification paramtrique.
close all;
clear all;
%donnes relatives l'exprience :
a=load('C:\roxygnation.dat');%fichier de donnes 2 colonnes: temps, concentration mesure
par la sonde
QG=0.000146;%flux d'aration, m3/s
VG=0.00125;%volume de la rtention gazeuse, m3
VL=0.01;%volume de liquide m3
TS=0.8;%constante de temps de la sonde, s
RTH=0.0259;%paramtre de solubilit 37C pour leau pure
k=RTH*VL;%variable intermdiaire
%dfinition des donnes exprimentales
tmes=a(:,1);%temps mesur
XSmes=a(:,2);%concentration mesure par la sonde
N=size(tmes,1);%nombre de pas de temps (l'instant t=0 est contenu dans le premier pas)
tmax=tmes(N);%nombre maximum de pas de temps
dt=tmax/(N-1);%de telle sorte que les pas de temps soient cals sur les valeurs exprimentales
%bornes des paramtres approximer
klam=0.01;%kla minimum, s-1
klaM=0.5;%kla maximum, s-1
%initialisation des paramtres approximer
kla=0.1;% s-1
A(1,:)=[1];
b=[klaM];
Aeq=[];%no equality exists
beq=[];%no equality exists
LB=[klam];
UB=[klaM];
x0=[kla];
[x, fval]=fmincon(@erreur,x0,A,b,Aeq,beq,LB,UB,[],optimset,QG,TS,RTH,tmes,XSmes,N,tmax,dt,k)
t=[0:dt:tmax];
kla=x(1)
[XSmod,XL]=XSmodele(QG,TS,N,tmax,dt,k,kla,VG);%concentrations estimes par le modle
%impression de la courbe de parit
figure(1); hold on;
plot(XSmes,XSmod,':');
jj=title('courbe de parit');
%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%
function d=erreur(x,QG,TS,RTH,tmes,XSmes,N,tmax,dt,k)
%calcul de lerreur entre le modle et lexprience
kla=x(1);
[XSmod,XL]=XSmodele(QG,TS,N,tmax,dt,k,kla,VG);
232
Annexes
d=0;
for i=1:N
d=d+(XSmes(i)-XSmod(i))*(XSmes(i)-XSmod(i))/abs(XSmes(i)+0.0001);
end
d=d/N;%normalisation par le nombre de pas de temps
%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%
function [XSmod,XL]=XSmodele(QG,TS,N,tmax,dt,k,kla,VG)
%fonction permettant de calculer l'volution de la mesure de la sonde au cours du temps
XSmod=zeros(N,1);
XL=homo(QG,TS,tmax,dt,k,kla,VG);
for i=2:N
XSmod(i)=(XSmod(i-1)+dt/TS*XL(i,2))/(1+dt/TS);
end
%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%
function XgXlXs=homo(QG,TS,tmax,dt,k,kla,VG)
tspan=[0:dt:tmax];
y0=zeros(3,1);
options=[];
[T,Y] = ode45(@odefun,tspan,y0,options,QG,TS,k,kla,VG);
XgXlXs=Y;
function dy=odefun(t,y,QG,TS,k,kla,VG)
%y(1):concentration dans le gaz
%y(2):concentration dans le liquide
%y(3):mesure de la sonde
dy=zeros(3,1);
dy(1)=(1-y(1))*QG/VG-kla*k/VG*(y(1)-y(2));
dy(2)=kla*(y(1)-y(2));
dy(3)=(y(2)-y(3))/TS;
%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%
VI.6.2. Programme pour la dtermination de KLa par le modle MP

VI.6.2.1. Ecriture du systme sous forme matricielle
Le systme Eq. 89 est rsolu par une mthode utilisant une discrtisation de
loprateur diffrentiel par une approximation dEuler sur MATLAB. Rcrivons les
quations dcrivant les concentrations relles (lquation de la sonde est ajoute dans un
deuxime temps) en faisant apparatre lindice despace, i[1 ;I] et de temps, n[1 ;N], avec
les pas correspondants de longueur z et dure t; les concentrations sont toutes normalises
mais par soucis de clart nous omettrons la barre y(n , i) = yin :
n +1
n
n +1
n +1
yi yi
Q yi yi 1
=
K L a V L RTH yin +1 x n +1 , pour i[2 ;I]
t
z
VG
VG
(Eq. 136)
n +1
n
n +1
y1 y1
Q y1 1
=
K L a V L RTH y1n +1 x n +1 , pour i=1
t
VG z
VG
xn
1
= K La 0 ( yin x n )dz , pour z[1 ;Z]
t
n +1
On peut donc rsoudre lquation du bilan gazeux matriciellement en posant :

A Y n +1 = Y n + a 1 .X n +1 + U
avec les constantes:
233
Annexes
a1 = K L a
VL
RTH.t
VG
Q G t
VG z
a2 =
a 3 = 1 + a1 + a 2
et les vecteurs colonne de taille I : Yn , contenant les points de lespace linstant n, et U,

contenant la condition la limite ; ainsi que la matrice carre A de taille IxI :
y1n
a3
a 2
n
a
0
y2
2

n
Y = M ; U= M ; A= 0

M
M
M
yn
0
0
I
0
a3
L
O
a2 O
O
L
O
O
a2
0
M
M .
0
a 3
Lintgrale du bilan liquide est calcule par la mthode des trapzes :

1
0
n
n
n
I (y x n) + (y
( y1n x n ) + (1 x n )
i 1 x )
z + i
z
i=2
2
2
n
(1 + y1 ) 1 I n
= x n +
+ ( yi x n ) + ( y in1 x n ) z
2
2 i=2
n
( yi x )dz =
et donc
n +1
(1 + y1n ) 1 I
= x n + K L a.t.z. x n +
+ ( yin x n ) + ( yin1 x n )
2
2 i=2
VI.6.2.2. Programme MATLAB
Ce programme permet d'identifier KLa partir d'une exprience de roxygnation,

dans lhypothse o le gaz spuise selon un modle dcoulement piston lors de sa traverse
du racteur.
Le programme principal et la fonction 'erreur' sont identiques ceux utiliss dans le
programme de lannexe VI.6.1 pour le calcul dans lhypothse homogne. Nous reportons
donc ici uniquement la fonction permettant de calculer le modle piston.
%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%
function [XSmod,XL]=XSmodele(QG,TS,N,tmax,dt,k,kla,VG)
%fonction permettant de calculer l'volution de la mesure de la sonde au cours du temps
XSmod=zeros(N,1);
XL=piston(QG,N,dt,k,kla,VG);
for i=2:N
XSmod(i)=(XSmod(i-1)+dt/TS*XL(i))/(1+dt/TS);
end
%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%
234
Annexes
function piston_a_pas=piston(QG,N,dt,k,kla,VG)
%fonction permettant de calculer l'volution de la concentration en oxygne dissous au cours
du temps
%U contient les concentration en oxygne de la phase gaz du bas vers le haut de du fermenteur
l'instant t
%V contient la concentration en oxygne dissous l'instant t ; vecteur de meme taille que U
mais de valeurs toutes identiques, la concentration dans le liquide tant homogne
I=100;%nombre de pas d'espace
dz=1/I;
solnuml=zeros(N,I);%contient la solution
x=[dz:dz:1]';%vecteur colonne des points de l'espace
m=size(x,1);
U=zeros(m,1);%concentation initiale du gaz le long du fermenteur
V=zeros(m,1);%concentation initiale du liquide
un=zeros(m,1);
un(1,1)=1;
for n=2:N%itrations sur le temps, t0=0
a1=kla/VG*k*dt;%constante issue du bilan matire sur le gaz
a2=dt/(VG/QG)/dz;%constante issue du bilan matire sur le gaz
sn=kla*((1+U(1))/2-V(1));%sn donne la valeur de l'intgrale (x*(i)-x)di
for i=2:I%boucle permettant le calcul le long de la hauteur du racteur de l'intgrale
(x*(i)-x)di
sn=sn+(kla*(U(i)-V(i))+kla*(U(i-1)-V(i-1)))/2;
end
V=V+sn*dz*dt;%calcul de XL l'instant t+1
solnuml(n,:)=V';
A=mat1(I,a1,a2);
U=A\(U+a1*V+a2*un);%profil du gaz l'instant t+1
end
piston_a_pas=solnuml(:,2);
%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%
function A=mat1(I,a1,a2)
A=zeros(I,I);
A(1,1)=1+a2+a1;
for i=2:I
A(i,i)=1+a1+a2;
A(i,i-1)=-a2;
end
235
Annexes
VI.7. Conditions de culture

VI.7.1. Culture E. coli C
35
0,35
20
0,2
15
0,15
10
0,1
0,05
0
10
15
20
0,08
-1
Substrat
Sels
0,6
0,06
0,4
0,04
0,2
0,02
0
0
10
15
20
25
100
-1
1600
in
-1
25
-1
0,8
Sels, L.h
N, rpm ; Q , NL.h
-1
0,25
1200
80
N
Qin
dO2
800
60
40
400
dO2, %
X, gDW.L
-1
25
Substrat, L.h
0,3
X
qO2
qO2, mol.L .h
30
20
0
0
10
15
20
25
Temps, h
236
Annexes
VI.7.2. Culture E. coli E

0,5
X
0,4
0,2
0,1
0
0
0,6
0,06
Substrat
Sels
0,04
0,3
0,03
0,2
0,02
0,1
0,01
0
0
6
100
1600
N
Qd
dO2
-1
in
-1
0,4
0,05
Sels, L.h
Substrat, L.h
-1
0,5
N, rpm ; Q , NL.h
-1
0,3
qO2, mol.L .h
-1
qO2
1200
80
60
800
40
400
dO2, %
X, gDW.L
-1
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
20
0
0
3
Temps, h
237
Annexes
VI.8. Matriel et mthodes complmentaires

VI.8.1. Microscopie in-situ
Le microscope in-situ (Hajo Suhr, Fachhochschule Mannheim, Allemagne) se

compose dun porte sonde muni dune fentre dobservation, fix sur le fermenteur et
strilisable avec lui, et dune partie externe compose des optiques et du systme de prise de
vue vido (Figure 61). Le microscope in-situ ncessite un clairage en vis--vis de loptique si
bien quune diode est fixe derrire la fentre dobservation, dans le milieu de fermentation.
Lespace entre la diode et la fentre dobservation, 300 m, dlimite la taille maximale des
particules pouvant tre observes. La quantit de lumire capte par loptique dcroissant
avec lobturation cause par la densit cellulaire du milieu, la concentration cellulaire du
milieu ne peut pas dpasser 20 gMS.L-1. La diode fonctionne de manire pulse et synchrone
avec une ouverture du diaphragme de la camra (choisi par lutilisateur) pour permettre la
nettet des images quelque soit la vitesse de passage des particules. Linformation rcupre
est donc une srie dimages. La mise au point est faite manuellement sur un plan focal situ
entre la diode et la fentre. Le fait que les lments dune image soient nets ou flou dpend de
leur position par rapport la distance focale, sachant que la profondeur de champ est de
lordre dun diamtre de levure (4m).
238
Annexes
Ordinateur,
acquisition
des images
Pulseur
Camra CCD
Vis de mise
au point
Tube intrieur
muni dobjectifs
Porte sonde
Joint
Fentre dobservation
LED
Figure 61. Schma de principe du microscope in-situ. Les traits mixtes reprsentent les flux
dinformation.
Observation dE. coli au microscope in-situ
10 mL dune culture dE. coli servent inoculer 2 L de milieu LB strile (extrait de

levure 5 g.L-1 ; peptone 10 g.L-1 ; NaCl 9 g.L-1 ; glucose 10 g.L-1) en fiole Erlenmeyer de 5 L
agit pendant 7h 30C (la densit optique 600 nm passe de 0,115 2,25). Lensemble est
transvas dans le racteur B. Braun de 5 L, non strile, rgul 37C, agit, ar (Qd=2
L.min-1) et complt avec 300 mL deau de manire ce que la turbine suprieure trempe
dans le liquide.
Recherche de microbulles de CO2 au microscope in-situ
20 g de levures S. cerevisiae en poudre (levures sches actives, Saf-Levure, Lesaffre)

sont rhydrates pendant 1h20 30C dans 2 L de milieu LB modifi et strile (extrait de
239
Annexes
levure 2,5 g.L-1 ; peptone 5 g.L-1 ; NaCl 4,5 g.L-1 ; glucose 50 g.L-1) en fiole Erlenmeyer de 5
L agit. Lensemble est transvas dans le racteur B. Braun de 5 L, non strile, rgul 37C,
agit, non ar.
VI.8.2. Mthode au gaz traceur (R134a)
La dtermination de KLa par la mthode au gaz traceur est effectue en deux temps. La
valeur (KLa)f du coefficient de transfert du forane est calcul par identification paramtrique
en comparant la dynamique de dsorption dun pulse de forane effectu en phase liquide et
mesur en sortie de racteur aprs dsorption, son modle. Puis la valeur du KLa relatif
l'oxygne est calcule thoriquement partir de (KLa)f.
Le bioracteur Braun 20 L est utilis dans sa configuration standard (pales 5, 21, 36
cm du fond, VL=10 L, T=37C, P=0,3 bar). Deux milieux de rfrence sont utiliss : leau du
robinet et 50 g.L-1 Na2SO4. Un seul flux daration est utilis: Qd=0,146 L.s-1. Lanalyse de la
concentration relative en forane (R134a) est ralise au spectrophotomtre de masse. Une
mesure est effectue toutes les 6 secondes.
50 mL dune solution sature en forane sont prpars temprature ambiante (22C)
laide de deux seringues communicantes : lune contient 50 mL deau, lautre 15 mL de
forane. Sous agitation pendant 2 min, le piston de la seringue contenant le forane se rtracte
denviron 10 mL. La solubilit du forane 25C tant de 0,9 g.L-1 25C (ATOFINA), et sa
masse molaire de 102 g.mol-1, 10,8 mL sont donc thoriquement solubles dans 50 mL. La
conductance de transfert du forane est calcule partir de la conductance de transfert de
loxygne (Eq. 20).
Un pulse gazeux est utilis comme rfrence : 10 mL de forane sont injects dans le
ciel par la platine du haut (linjection est instantane). Le pulse liquide est effectu comme
suit : 50 mL dune solution sature en forane sont injects dans le liquide, par un port 10 cm
du fond (dure de linjection=5 secondes).
240
Annexes
VI.9. Liste des symboles

symbole
a
BG+OS
c, C, C
DA
db
dbm
dD
dMAX
dO2
dS
dT
e
E
E
Echem
ed
EffO2
Epp
EqO2
Er
g
H
Ha
hG
hi
I
KC
kG
ki
kL
KL
KLa
(KLa)ref
kn
KT
MH
MP
mS
n
N
Na
nom
aire interfaciale par unit de volume de liquide clair (Eq. 29)
mthode du bilan gazeux coupl loxydation par le sulfite
constantes
coefficient de diffusion de lespce A en phase aqueuse
diamtre de bulle
diamtre de bulle minimum
diamtre de turbine disque
diamtre stable maximum
concentration en oxygne dissous mesure par la sonde
diamtre de Sauter (Eq. 32)
diamtre de racteur (tank)
puissance dissipe par unit de volume de liquide, =PG/VL
facteur dacclration ( Enhancement factor )
nergie dactivation
facteur dacclration provoque par les modifications
chimiques du milieu
taux de dissipation de lnergie turbulente
efficacit du transfert doxygne (Eq. 127)
facteur dacclration provoque par la prsence physique des
particules
facteur dacclration provoque par la respiration des cellules
erreur entre courbe exprimentale et modle
acclration gravitationnelle
constante de Henry
nombre de Hatta
paramtre spcifique au gaz (Eq. 4)
paramtre spcifique lion de concentration xi (Eq. 4)
force ionique (Eq. 36)
indexe de consistance (Eq. 40)
conductance de transfert de matire en phase gazeuse
conductance de transfert de matire au travers de linterface
conductance de transfert de matire en phase liquide
conductance globale de transfert de matire dfinie par rapport
la phase liquide
coefficient volumique de transfert de matire global dfini par
rapport la phase liquide
KLa de rfrence (Eq. 66)
constantes cintiques de raction dordre n
coefficient global de transfert doxygne dfini dans la phase
liquide en systme biologique (Eq. 67)
phase gazeuse modlise de manire homogne
modle dcoulement piston du gaz
coefficient de maintenance
indexe de puissance (Eq. 40)
vitesse dagitation (rotation par minute ou par seconde)
nombre daration
unit
m1
m.s-1
m
m
m
m
% saturation
m
m
W.m-3
cal.g-1 ou J.mol-1
W.kg-1
9,81 m.s-2
mol.L-1.atm-1
m3.kmol-1
m3.kmol-1
mol.L-1
Pa sY
mol.bar-1.m-2.s1
m.s1
m.s1
m.s-1
s-1
s-1
L .mol .s
s-1
n
-n -1
g/gMS.s-1
min-1 ou s-1
241
Annexes
NA
NA0
NE
Np
O2out
P
P0
pA
Pe
PG
pG
qA
qCO2
Qd
xA
densit de flux molaire de transfert de lespce A

densit de flux molaire de lespce A linterface
vitesse critique dentranement de surface
nombre de puissance
pourcentage doxygne mesur dans le gaz en sortie de racteur
pression absolue totale
puissance dissipe en labsence de bulle dans le racteur
pression partielle du gaz A
puissance lectrique consomme par le racteur
puissance dissipe en condition daration
puissance volumique dissipe par le gaz
terme de production ou consommation de lespce A
consommation volumique de CO2
flux gazeux entrant dans le racteur par le diffuseur, calcul
pression et temprature de travail
consommation volumique doxygne (Eq. 97)
flux gazeux sortant du racteur ( T, P de travail)
quotient respiratoire
densit de flux de diffusion
constante des gaz parfaits= 8,3145 J.mol-1.K-1
valeur de la fonction de rgression
nombre de Reynolds
nombre de Reynolds calcul par rapport la pale, Rei= dp2N/
vitesse spcifique de consommation de loxygne
turbine Rushton
fraction de linterface renouvele par unit de temps dans le
modle de Danckwerts
constante de Sechenov pour le gaz A et la substance i
temprature
dure dexposition dans le modle de Higbie
vitesse superficielle du gaz, = Qd/(dT2/4)
volume des cellules humides
volume du ciel gazeux
volume de gaz dispers
volume total de gaz dans le racteur
volume liquide total (de la suspension, pour un mot)
volume de la phase abiotique
volume total du fermenteur
volume dair par volume de liquide par minute
flux de lespce A
flux de transfert doxygne
concentration en biomasse
concentration en phase liquide en quilibre avec la
concentration en phase gazeuse en contact, selon la loi de
Henry
concentration de lespce A dans la phase liquide
xe
xS
xSM
concentration estime par le modle

concentration mesure par la sonde
modlisation de la concentration de la sonde
qO2
Qout
QR
R
R
R
Re
Rei
rO2
tRu
s
SeAi
T
te
Us
Vc
VC
VG
Vgaz
VL
VL-c
VT
vvm
WA
WO2
X
x*
mol.m-2.s-1
mol.m-2.s-1
s-1
%
bar ou atm
W
atm
W
W
W.m-3
mol.m-3.s-1
mol.m-3.h-1
m3.s-1
mol.m-3.h-1
m3.s-1
mol.m-2.s-1
J.mol-1.K-1
mol.gMS-1.h-1
s-1
m3.kmol-1
C ou K
s
-1
cm.s
m3
m3
m3
m-3
m3
m3
L ou m3
min-1
mol.s-1
mol.s-1
gMS.L-1
mol.m-3
mol.m-3
ou g.m-3
mol.m-3
mol.m-3
mol.m-3
242
Annexes
y
*
yA
z
Z
Z
zi
concentration molaire dans le gaz

concentration en phase gazeuse qui serait en quilibre avec la
concentration en phase liquide en contact, selon la loi de Henry
rendement en substrat (g de biomasse forme par g de substrat
consomm)
distance
hauteur de la dispersion gaz-liquide
rsistance au transfert
charge de lion i
, ,
&
app
max
0
d
F
G
m
r
S
coefficients dans Eq. 21

paisseur du film stagnant
rtention gazeuse permanente
critre de Merchuck (Eq. 60)
gradient de vitesse ( shear rate )
taux de croissance
viscosit dynamique
viscosit dynamique apparente
taux de croissance maximum
masse volumique
tension de surface
contrainte tangentielle ( shear stress )
contrainte tangentielle seuil
temps de diffusion
constante de temps du film
temps de sjour du gaz en phase liquide
temps de mlange
temps de raction
constante de temps de la sonde
fraction de bulle recouverte de particules (Eq. 65)
excs de CO2
YX/S
mol.m-3
mol.m-3
m
m
s.m-1
m
s-1
h-1
Pa s
Pa s
h-1
kg.m-3
dyne.cm-1
Pa
Pa
s
s
s
s
s
s
exposants
in
off
out
en entr de racteur
en sortie de phase disperse
en sortie de racteur
indices
b
c
c
C
d
DC
e
F
ln
loc
milieu biologique
milieu coalescent
cellule
ciel gazeux
diffuseur
dispersion complte du gaz
entran par la surface
film liquide
calcul par une moyenne logarithmique
variable locale
243
Annexes
M
mb
MS
O2
S
S
membrane de la sonde
microbulle
masse sche
oxygne
surfactant
sonde oxygne
244

Consomation Oxygene

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Thse prsente le Jeudi 25 Octobre 2007 devant la commission d'examen pour

Professeur, Universit B.P. de Clermont Ferrand II

Titre. Transfert doxygne en conditions de culture microbienne intensive.

TABLE DES MATIERES

I.1. Absorption physique .................................................................................................. 16

Schma thorique du transfert doxygne du gaz au microorganisme............. 16

Solubilit des gaz en phase liquide .................................................................. 18

Modles locaux de transfert ............................................................................. 20

Le coefficient volumique de transfert .............................................................. 22

KLa et dimensionnement ........................................................................................23

Relation entre KLa et concentration en CO2 ..........................................................24

I.2. Influences physiques, chimiques, et mcaniques sur KLa....................................... 27

Effet de la puissance dissipe sur KLa.............................................................. 27

Corrlations empiriques ........................................................................................27

Influence de la puissance dissipe sur kL , approches thoriques..........................29

Influence de la puissance dissipe sur laire interfaciale......................................31

Effet du dbit daration sur KLa...................................................................... 35

Aration par le diffuseur........................................................................................35

Effet des soluts sur KLa (force ionique) ......................................................... 38

Effet des agents de surface sur KLa (tension de surface) ................................. 41

Effet de la viscosit sur KLa ............................................................................. 43

Modles de viscosit ..............................................................................................43

Modlisation de KLa en systme visqueux .............................................................44

Effet de la temprature sur KLa ........................................................................ 46

Effet de la prsence de particules solides sur KLa............................................ 47

Effet de blocage de linterface sur kL .....................................................................47

Effet hydrodynamique (boule de neige) sur kL .......................................................48

Table des matires

I.3. Absorption avec consommation simultane de loxygne ...................................... 48

Absorption en prsence de raction chimique.................................................. 48

Absorption en prsence de consommation par la biomasse ............................. 51

Thse de Tsao : rpartition htrogne linterface (double zone)......................56

Effet daffinit, effet de navette ..............................................................................58

Transfert direct du gaz dans la cellule ..................................................................59

Lapport des modles de connaissance .................................................................60

Gnralisation du facteur dacclration.......................................................... 62

Production de gaz dans la couche limite ...............................................................63

I.4. Dtermination de KLa ................................................................................................ 64

Mise en uvre de la roxygnation .......................................................................65

Mesure de la rtention gazeuse .............................................................................66

Sur la diffrence de potentiel (x*-x) ......................................................................67

Prise en compte de la biomasse active ..................................................................69

Conclusions sur les mthodes dynamiques ............................................................69

Mthodes au sulfite ................................................................................................70

Hypothse du profil axial de concentration du gaz ...............................................71

Comparaison entre les mthodes statiques et dynamiques....................................71

Mthodes de dtermination des facteurs dacclration .................................. 72

Synthse des grandeurs caractristiques .......................................................... 73

KLa et facteur dacclration.................................................................................73

Autres paramtres du transfert ..............................................................................74

Cas des racteurs multi-turbines ...........................................................................75

I.5. Conclusions et perspectives ....................................................................................... 76

MATERIEL ET METHODES ...............................................80

II.1. Souches et milieux de cultures................................................................................... 81

Conditions de culture dE. coli......................................................................... 83

Conditions de culture de S. cerevisiae ............................................................. 85

Conditions de culture dAspergillus niger ....................................................... 85

II.3. Dtermination de KLa ................................................................................................ 85

Table des matires

Choix des mthodes exprimentales ................................................................ 85

Mthodes du bilan gazeux: BG et BG+OS ...................................................... 86

Mthode de roxygnation ............................................................................... 87

II.3.3.1. La sonde oxygne rponse rapide....................................................................87