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(1)
1:
E=
E=
1,23 V
E=
2:
E= 0,77 V
E= 1,44 V
E=
Segn la ecuacin 1, ambas etapas estn favorecidas termodinmicamente por sus potenciales
estndar de celda relativos al Electrodo de Estndar de Hidrgeno (EEH) [2], por lo que puede
verse la corrosin del hierro como el proceso en el que este regresa a su estado natural.
Durante la prctica, se incluyeron laminillas de otras especies metlicas ligadas a los clavos,
Aluminio, Cobre y Zinc, los cuales tienen reacciones de oxidacin como se muestran a
continuacin.
Al(s) Al3+(aq) + 3e
Cu(s) Cu2+(aq) + 2e
Zn(s) Zn2+(aq) + 2e
E=1,68 V
E= -0,68 V
E= 0,76 V
(2)
Las proteasas alcalinas son enzimas capaces de hidrolizar protenas en medios cuyo
pH es mucho mayor a 7, por lo que son ideales para su utilizacin en detergentes , este
tipo de enzimas son producidas por varias bacterias Gram + siendo el gnero Bacillus
el ms utilizado para la produccin industrial , debido principalmente a su capacidad
para excretarlas al medio de cultivo, de donde resulta fcil obtenerlas al evitarse el
trabajo de tener que reventar las clulas para liberar la enzima.
Los dos tipos de proteasas presentes en mayor medida en cultivos de Bacillus son las
proteasas alcalinas o serinproteasas, (debido a la presencia de serina en el sitio activo
de la enzima), y las proteasas neutras o metaloproteasas. Por lo mismo las cepas de
Bacillus subtilis pueden clasificarse en cuatro tipos segn el tipo de proteasas que
producen:
Materiales y mtodos
El procedimiento experimental para la oxidacin del hierro puede encontrarse en el artculo The
Oxidation of Iron in a Gel Using Consumer Chemicals, Wright y otros [6].
Las cajas de petri deben ser fotografiadas cada cierto periodo de tiempo procurando tener una
distancia del lente de la cmara a la caja de petri y unas condiciones de luminosidad similares
en todos los tiempos. el uso de un trpode sera muy acertado. las fotografas deben ser
analizadas con el programa Tracker y deben crearse perfiles de luminosidad desde la punta
de las puntillas hasta el borde de la caja de petri, la luminosidad disminuye conforme se haga
presente el quelato salicilicato de hierro (III), por lo que fcilmente podr verse la difusin de la
especie inica del hierro en las cajas de petri que presenten corrosin galvnica.
Por otro lado, para la prctica de las proteasas se prepararon 5 disoluciones diferentes de
detergente en %p/p (1%, 2%, 3%, 4% y 5%) y se prepararon para cada solucin un cubo de
una solucin de agar-agar al 4% p/v con el fin de poder determinar la cintica enzimtica de las
proteasas presentes en los bio-detergentes, midiendo la masa que perdan los cubos de agar
agar en funcin del tiempo. se recomienda termostatar las soluciones a 50C por las razones
expuestas en la introduccin.
Figura 1a, en el tiempo inicial se tienen las puntillas inmersas en la solucin electroltica
de Agar Agar, puede observarse que la corrosin del hierro en la segunda caja de petri
(con electrodo de cobre) inicia casi instantneamente.
Figura 1b, tras haber transcurrido una hora, las dos cajas de la derecha no presentan
corrosin del hierro tal y como se esperaba, pues como ya se mencion, los potenciales
de oxidacin de los metales aluminio y zinc son mayores que el del hierro. en las cajas
de la izquierda s se observa el color rojo oscuro que evidencia la presencia del ion Fe
(III) en el medio.
Figura 1c, A las dos horas, las cajas con aluminio y zinc siguen presentando proteccin
catdica del hierro, en la caja con solo hierro, se puede observar hierro (III) producto de
la corrosin de la puntilla, sin embargo, la corrosin es ms notoria en la caja que
contiene el electrodo de cobre, este comportamiento no se aleja del esperado, pues al
tener el cobre un potencial de oxidacin menor, el proceso puede verse como proteccin
catdica del cubre por el hierro. Este set de fotografas y los siguientes (figura 1c hasta
la figura 1k) presentan una coloracin ligeramente ocre sepia en el agar agar y sus
alrededores, este cambio general de tonalidad se debe a variaciones en las condiciones
de luminosidad respecto a la que se tuvo para los primeros dos sets de fotos, estas
condiciones no pudieron ser recreadas para proseguir con la prctica.
figura 1d, Al transcurrir seis horas, las dos cajas de petri con aluminio y zinc siguen
igual, en la caja con puntillas la oxidacin del hierro sigue progresando y en la caja de
petri con electrodo de cobre la coloracin amarilla cerca a la cabeza de la puntilla
evidencia la formacin de Fe (II), el cual aunque desde la figura 1b y 1c ya estaba
presente, hasta ahora se intensifica lo necesario como para poder ser visto.
Figura 1e, durante las 9 horas que transcurrieron desde la foto anterior, las cajas de petri
permanecieron cerradas, lo cual pudo ocasionar que la concentracin de oxigeno en la
interfase agar-agar/aire haya disminuido, impidiendo la oxidacin de hierro hasta hierro
(III) sino solo hasta hierro (II), que puede verse de color amarillo quemado. en la caja con
zinc puede verse una zona con un color blanco intenso cerca de los electrodos de zinc,
lo cual evidencia la existencia de zinc (II) en el medio. por otro lado, en la caja con
electrodos de aluminio, una de las puntillas presenta oxido de aluminio y apenas trazas
imperceptibles de xido de hierro tal y como se esperaba, sin embargo en la otra puntilla
si se observan los iones Fe y Fe , que pudieron formarse debido a mal contacto entre
el aluminio y el hierro, lo que impidi la proteccin catdica que si se hace evidente en la
otra puntilla de la misma caja.
Figura 1f, pasaron otras nueve horas desde la ltima fotografa, la formacion de hierro
(III) en las cajas de la izquierda se hace ms notoria en las puntas y cabezas de los
clavos, posiblemente por ser zonas un poco ms porosas y poco uniformes. en la
tercera caja (de izquierda a derecha) se hace mas notoria la capa de Zinc (II) aunque no
puede esclarecer si el color de esta fase corresponde a un complejo de salicilicato con
zinc u xido de zinc (ZnO), en la cuarta caja el clavo superior sigue el comportamiento
esperado mientras que en el inferior comienza a reducirse el Fe que se haba formado.
Figura 1g, 32 horas luego de iniciada la prctica, el agar agar de la primera caja (de
izquierda a derecha) sufre un corte debido a factores externos, esto alterara las
predicciones cualitativas para el clavo por lo que desde ahora ser ignorado. el clavo
inferior no cambi mucho en estas ocho horas. la segunda caja presenta un aumento en
intensidad y tamao de las manchas, la capa de zinc aumenta ligeramente en la tercera
caja, y en la cuarta caja el clavo anormal presenta un aumento en la intensidad del color,
reflejando el aumento de iones Fe , el otro clavo muestra algo de Al que se
manifiesta de color blanco igual que en la caza con zinc.
Figura 1h, en la primera y segunda caja (de izquierda a derecha) se puede notar un
aumento en la intensidad de los colores, seal del aumento de la concentracin de los
iones de hierro. en las otras dos cajas hay evidencia de xido de aluminio y zinc (o su
complejo con el ion saliclico) y en el clavo anormal de la cuarta caja disminuye la
presencia de hierro (III).
Figura 1i, Todas las especies inicas (a excepcin de hierro (III) en el clavo anmalo de
la caja de petri con hierro y aluminio) presentes en los medios aumentan su
Figura 1j, en la primera caja (de izquierda a derecha) el color amarillo del ion Fe ha
invadido casi todo el volumen de agar agar, los colores debido al Fe se hacen mucho
ms intensos igual que en la segunda caja, el Zn en la tercera caja sigue aumentado la
intensidad del color blando y de igual manera el Al en la cuarta caja.
Figura 1k, tras casi cuatro das de duracin de la prctica (90 horas), la oxidacin del
hierro ha progresado continuamente a tal punto que en las primeras dos cajas el Fe se
ha difundido por toda la caja, las manchas de Fe han logrado una alta definicin e
intensidad y las especies oxidadas de zinc y aluminio tambin se han difundido por el
volumen de Agar-agar con una intensidad y definicin apreciable.
Tras revisar la descripcin cualitativa de la oxidacin del hierro para los cuatro medios, es
notorio, que para hallar el coeficiente de Difusin del hierro (III) usando la ecuacin de la
marcha tambaleante de Einstein mediante anlisis fotomtrico usando el programa Tracker ,
la mejor caja de petri para analizar es la que contiene las puntillas ligadas a laminillas de cobre,
pues es la que desarrolla una zona cromofora ms uniforme, intensa y regular a lo largo de la
prctica.
Tras graficar en Tracker la luminosidad de la imagen (LUMEN) contra la distancia a la punta
de la puntilla para los periodos de tiempo en los que se tomaron las fotografas, se obtienen las
siguientes grficas (las unidades en el eje de las X para distancia, es en centmetros, no en
metros):
Las grficas anteriores se calibraron a un mximo de lumen de 160, valor para el cual el
programa ofrece una relacin Seal Ruido relativamente baja.
Podemos asumir que las zonas en la que la luminosidad es baja, ya se ha difundido el hierro
(III), pues el color del complejo de salicilicato de hierro (III) es de color oscuro. todas las
grficas anteriores fueron calibradas en distancias (los clavos eran de 2,54 cm, con lo que
puede calibrarse esa longitud para tener en cuenta el avance de la mancha) y fueron calibradas
en cuanto a luminosidad para mitigar el error inducido por los cambios de luminosidad
ambiental (asignando un valor arbitrario de 160 Lmenes a la zona de Agar Agar donde no
haba llegado hierro). En ese orden de ideas, para obtener el coeficiente de difusin del Fe
en un gel de Agar Agar al 4%, podemos graficar la distancia de avance al cuadrado contra el
tiempo (relacin que se deriva de elevar ambos trminos de la ecuacin de la marcha
tambaleante al cuadrado), esta relacin debe tener por intercepto cero (en el tiempo inicial se
supone el Fe no se ha difundido) y la pendiente nos dar el valor del coeficiente de la
difusin.
tiempo
(horas)
tiempo
(segundos)
x (cm)
x (cm)
3600
0,2
0,04
7200
0,48
0,2304
3,5
12600
0,6
0,36
21600
0,7
0,49
15
54000
24
86400
1,5
2,25
32
115200
1,75
3,0625
42
151200
2,15
4,6225
54
194400
2,4
5,76
78
280800
2,6
6,76
90
324000
2,7
7,29
tiempo (min)
masa (g)
d tiempo
d masa
dt/dm
1/peso
ln peso
39,63
0,02523
3,679
15
39,57
15
-0,06
-0,004
0,02527
3,678
25
39,497
10
-0,073
-0,0073
0,02531
3,676
35
39,431
10
-0,066
-0,0066
0,02536
3,674
45
39,407
10
-0,024
-0,0024
0,02537
3,673
55
39,327
10
-0,08
-0,008
0,02542
3,672
65
39,274
10
-0,053
-0,0053
0,02546
3,67
En resumen se sugiere que para la proxima practica se use un sustrato afn a la enzima, o si se
quiere ver la actividad de esa enzima se agregue protena a la solucin de agar-agar para
poder obtener resultados ptimos, asimismo que la reaccin se lleve a cabo a 50 grados
celsius y con una concentracin de detergente ms alta y de agar-agar ms baja con el fin de
que se puedan ver mejores resultados en esta prctica.
Conclusiones
- el coeficiente de difusin del Fe en un gel de Agar Agar al 4% medido durante la
prctica fue de (2,49 0,09) *10 cm s .
-
Para que la proteccin catdica sea eficiente, debe haber un buen contacto entre el
electrodo a proteger y el electrodo de sacrificio, para evitar lo que sucedi con el clavo
inferior de la caja de petri con hierro y aluminio.
El valor del coeficiente de difusin del Fe presenta una desviacin del 32.4% frente a
valores encontrados en Handbooks [3], esta desviacin no puede considerarse un error
dado que las condiciones experimentales en las que se midieron fueron muy distintas.
No se uso el sustrato adecuado para las proteasas alcalinas, ya que en vez de usar un
sustrato proteico se uso un sustrato de un polisacrido
Bibliografa
1. Peter J. Mohr, and Barry N. Taylor, "CODATA recommended values of the fundamental
physical constants: 1998", Rev. Mod. Phys., Vol 72, No. 2, April 2000
2. Milazzo, G., Caroli, S., and Sharma, V. K. (1978). Tables of Standard Electrode
Potentials (Wiley, Chichester).