CINETICA ENZIMATICA 2 INHIBICION

11 EJERCICIOS
GRAFICAR METODO DIRECTO
GRAFICAR METODO LINEAL
DEFINIR TIPO DE INHIBICION
DETERMINAR KM, Vmax, KMaparente, Vmax-apararente.

1. La actividad del sistema L-aspartato 4-carboxilasa (aspartato descarboxilasa) se puede ensayar manomtricamente siguiendo la produccin
de CO2 a partir del L-aspartato:
L-aspartato

L-alanina +

CO2

Se mont un experimento para comprobar la potencia del treo- -hidroaspartato

como inhibidor de la reaccin, a 303 oK y pH=5, partiendo de una preparacin
de aspartato 4-carboxilasa proveniente de una fuente microbiana. Se
obtuvieron los siguientes resultados:
Concentracin
de L-aspartato
(mol/L)
25
33.3
50
100
200

V ( mol/L)min-1
Sin inhibidor
Con 0.02 mol/L de
inhibidor
17.0
21.3
5.7
27.8
8.1
41.7
14.7
52.6
25.0

Calcular Km a partir de un grafico para la reaccin sin inhibicin. qu tipo de

inhibidor es?

2. Se encontr que los iones Ca2+ inhiban la actividad de una enzima con un
requerimiento de iones Mg2+. Cuando se llevaron a cabo estudios de velocidad
inicial a 293 K y pH 7 usando un margen de concentraciones de iones Mg 2+ en
presencia de diferentes concentraciones fijas de Ca 2+, se obtuvieron los siguientes
resultados:
Concentracin
de Mg2+. (mol dm-3) [Ca2+]:
x 10-5
mol dm-3
330

V mol de producto min-1)

2 x 10 -5
4
Ninguna
20.4

mol dm-3
9.26

5.99

500

25.65

12.66

8.47
1000

33.3

20.0

14.28
2000

40.0

28.57

22.23
Qu tipo de inhibicin llevan a cabo los iones Ca2+?
3. Un determinado compuesto es un inhibidor de una enzima hidroltica. Para
determinar la naturaleza de tal inhibicin se han medido las velocidades iniciales
de la hidrlisis enzimtica a diferentes concentraciones de sustrato, en ausencia
de inhibidor (Experimento A), en presencia de inhibidor a concentracin 2.50 mM
(experimento B) y a 5.60 mM (experimento C). En la tabla correspondiente se
recogen los resultados. Las velocidades de reaccin se experesan en mol/l de
sustrato hidrolizados por minuto. Determnese el tipo de inhibicin.

[S] / M
12.5
15
20.0
25.0
40.0
60.0
100.0

v / [(mol/L)/min]
B

1.68
1.89
2.27
2.60
3.22
3.77
4.35

1.04
1.20
1.50
1.75
2.35
2.94
3.57

0.70
0.83
1.05
1.25
1.75
2.27
2.94

4. Se estudia la cintica del estado estacionario de una enzima en ausencia y en

presencia de un inhibidor (Inhibidor A). La velocidad inicial viene dada en funcin
de la concentracin de sustrato en la siguiente tabla:
V [(mmol/L)-1min-1]
Sin inhibidor

[S] (mmol/L)
1.25

1.72
2.04

2.63

0.98
1.17

1.47
1.96

2.38

Inhibidor A
1.67
2.50

5.00
10.00

3.33
4.17

a) qu tipo de inhibicin (competitiva o no competitiva) se produce?

b) Determine Vmax y KM en ausencia y en presencia del inhibidor.
5. Pseudomonas aeruginosa cultivada en medio de acetato posee una enzima que
puede hidrolizar la propionamida
CH3CH2CONH2 + H2O

CH3CH2COOH + NH3

Los estudios de velocidad inicial, en los que se midi la produccin de amonaco a

partir de la propionamida a pH 7.2 y 37C, demostraron que la urea inhibe esta
reaccin enzimtica. En uno de tales experimentos en los que se examinaron los
efectos de dos concentraciones diferentes de urea sobre un margen de
concentraciones de propionamida, se obtuvieron los siguientes resultados:

Propionamida
(mol dm-3)

5000
6670
10000
20000
50000

Velocidad inicial
mol de NH3 liberado min-1 mg-1 de
protena
Sin inhibidor
160
194
263
400
576

Urea
(1mmol dm-3)

Urea
( 2 mmol dm-3)

111
140
183
279
400

76
95
128
188
277

Determinar el valor aparente de Km de la reaccin no inhibida. Acta la urea

como que tipo de inhibidor?
6. Una enzima se estudia en presencia de un inhibidor B, utilizando dos
concentraciones diferentes de inhibidor. Los datos son los siguientes:
V [(mmol/L)-1min-1]
[S] (mmol/L)
1.25

Sin inhibidor
1.72

2.04
2.50

1.54
2.63

3.33
4.17

2.86
3.70

Inhibidor B
(3mM)
1.25
1.26
2.00
2.56
3.49

Inhibidor B
(5mM)
1.01
1.67
1.72
10.00

5.00

a) qu tipo de inhibidor es el inhibidor B?

b) Determine Vmax y KM para cada concentracin del inhibidor.
7. La lactosa es un disacrido encontrado en la leche, muchos adultos en el mundo
presentan malestares al consumirla, debido a que no pueden digerir la lactosa. La
intolerancia a la lactosa vara en diversos pueblos del mundo. Cuando una persona
que es intolerante a la lactosa ingiere leche, la lactosa se acumula en el lumen del
intestino delgado porque es ah donde no hay mecanismos para romper este
disacrido. Esto provoca distensin abdominal, dolor y diarrea. Los adultos que
toman leche y tienen problemas es debido a que la enzima lactasa, locializada en
la superficie de las clulas epiteliales del intestino delgado. La lactasa hidroliza la
lactosa en sus dos componentes monosacridos, glucosa y galactosa. Ambos
azcares pueden cruzar las clulas epiteliales y de esta forma no causan
problemas.
a) Para un estudio de la enzima lactasa, se parte de la hiptesis de que la
maltosa puede actuar como un inhibidor competitivo o acompetitivo de la
lactasa. Para comprobar esta hiptesis, se realiz un estudio cuantitativo
mediante una cintica de la lactasa solo con lactosa y otra en presencia de
lactosa y maltosa. Se midieron las velocidades iniciales de la reaccin
(velicidad a la cual la lactosa desaparece) con respecto a la variacin de
concentracin de sustrato. Y
los datos obtenidos se presentan a
continuacin:

[Lactosa] (mol/L)

V [(mol/L)min-1]
Solo con lactosa Con maltosa

0.3
0.5
1.0
3.0
9.0

10.4
14.5
22.5
33.8
40.5

x
x
x
x
x

10-5
10-5
10-5
10-5
10-5

4.1
6.4
11.3
22.6
33

Construya la grafica 1/V vs. 1/[S] para lactasa tanto en presencia como en
ausencia de maltosa, y determine el tipo de inhibicin que ejerce la maltosa.

8. Determinar grficamente la constante de Michaelis-Menten de la fosfatasa con

los siguientes datos experimentales, determinar igualmente el tipo de inhibidor
utilizado:
[Glicerofosfato]
(mol/L)
0.100
0.050
0.020
0.010
0.005
0.002
0.001

Micromoles de
minuto
Sin inhibidor
inhibidor
0.91
0.83
0.67
0.50
0.33
0.17
0.09

PO4

liberados

por
Con

0.75
0.70
0.58
0.47
0.22
0.11
0.04

9. Dibuje curvas Lineweaver-Burk para el comportamiento de una enzima que dio

estos datos experimentales:
[S] (mM)

V, sin inhibidor
V, con inhibidor
-1
(mmol min )
(mmol min-1)
3.0
4.58
3.66
5.0
6.40
5.12
7.0
7.72
6.18
9.0
8.72
6.98
11.0
9.50
7.60
Determine los valores KM y Vmax para las reacciones inhibida y no inhibida. El
inhibidor es competitivo o no competitivo?
10. La sacarosa (azcar de mesa) se hidroliza glucosa y fructosa en un
experimento clsico de cintica. La reaccin se cataliza con la enzima invertasa.
Utilizando los datos que siguen, determine por el mtodo de Lineweaver-Burk el
tipo de inhibicin de esta reaccin con urea 2 M.
Concentracin de
sacarosa (mol L-1)

V, sin inhibidor
(unidades arbitratias)

0.0292
0.0584
0.0876
0.117

0.182
0.265
0.311
0.330

V, con inhibidor
(mismas unidades
arbitratias)
0.083
0.119
0.154
0.167

0.175

0.372

0.192

10. La enzima succinato deshidrogenasa de corazn de buey es capaz de arrancar

dos tomos de hidrgeno del cido succinico para transferilos al FAD. El acido
malonico [CH2(COOH)2] interfiere esta accin, de acuerdo con las cifras de la siguiente tabla:

Succinato (mM)
0.1
0.4
1
4
10

Velocidad de reaccin
(nM de FADH2 formados por minuto)
En ausencia de
En presencia de
malonato
malonato 10-4 M
3.6
1.1
11.4
4.1
20
9.1
32
21.3
36.4
29.6

a) trazar las graficas con y sin inhibidor, utilizando las representaciones directa
y Lineweaver-Burk
b) calcular los valores de KM y Vmax en ambos casos
c) deducir el tipo de inhibicin que se produce.