Coloracin PAPANICOLAOU

Juego de soluciones para la coloracin de citologas por el mtodo de Papanicolaou

PRINCIPIO
La tincin de Papanicolaou es el mtodo de tincin ms utilizado para
material citolgico. En el primer paso se tien los ncleos con una
solucin de hematoxilina. Los ncleos aparecen azules a violeta. El
segundo paso es la tincin del citoplasma con una solucin anaranjada,
que presenta especialmente las clulas maduras y queratinizadas. Las
estructuras diana se tien de anaranjado con diferentes intensidades. En
el tercer paso de tincin se usa la llamada solucin polcroma, que es una
mezcla de eosina, verde luz SF y pardo de Bismarck. Con la solucin
polcroma se muestra la diferenciacin del epitelio escamoso simple.

MUESTRAS
Muestras ginecolgicas, cada muestra (fondo, cervix y endocervix) se
extiende muy suavemente para evitar destruccin de estructuras. Los
extendidos no deben ser grumosos y deben cubrir, por lo menos, 1/3 parte
de la placa cada uno.
Se deben usar lminas nuevas y prelavadas con alcohol de 96% para
quitar la grasa.
Toda muestra biolgica
potencialmente infecciosa.

debe

se

considerada

como

CONTENIDOS
PAPANICOLAOU HEMATOXILINA Listo para su uso
Hematoxilina Certificada
Potasio y Alumino Sulfato 12-H R.A.
Mercurio II Oxido R.A.
Acido Acetico R.A.
Alcohol al 96%
Agua desmineralizada Tipo II

5g/l
100 g/l
2.5g/l
12 ml
50 ml
csp

PROCEDIMIENTO
1.
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20.
21.

PAPANICOLAOU NARANJA G Listo para su uso

Anaranjado G Certificado
Acido Fosfotungstico al 0.015% Sol Alcoholica

5g/l
0.15g/l

PAPANICOLAOU SOLUCION EA-50 Listo para su uso

Eosina Y certificada al 0.5%
Bismark Bronw certificado al 0.5%
Verde FCF amarillento cerfificado al 0.5%
Acido fosfotungstico al 0.2% Sol alcoholica

450 ml
100 ml
450 ml
100 ml

CONDICIONES DE ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD

Las soluciones deben almacenarse entre 15C y 30C y protegidos

de la luz. Despus de abierto el contenido almacenado entre 15C y
30C y protegidos de la luz es estable hasta la fec ha de caducidad
indicada en la etiqueta.

La presencia de un ligero precipitado en los colorantes de

Hematoxilina y Naranja G, debido a los cambios de temperatura, no
altera su capacidad de tincin. Filtrar en caso necesario

Temperaturas inferiores a 15C pueden precipitar c olorantes de las

soluciones colorantes.

Los frascos deben mantenerse siempre bien cerrados.

22.

23.

10 pases (ni lentos ni rpidos) en el alcohol de 80 %.

10 pases en alcohol al 70 %.
10 pases en alcohol al 50 %.
10 pases en agua destilada.
Hematixilina de Harris por 3 minutos (tiempo variable).
Pases en agua destilada (hasta quitar el exceso de colorante).
6 pases en Hcl al 0.5 %.
Agua corriente por cinco min. (chorro lento).
10 pases en agua destilada.
10 pases en alcohol al 50 %.
10 pases en alcohol al 70 %.
10 pases en alcohol al 80 %.
10 pases en alcohol al 96 %.
Colocar en Naranja G por 1 minutos (tiempo variable).
10 pases en alcohol al 96 %.
10 pases en alcohol al 96 %.
Colorear en EA-50 por 3 min. (tiempo variable).
10 pases en alcohol al 96 %.
10 pases en alcohol al 96 %.
10 pases en alcohol al 96 %.
10 pases muy lentos en Isopropanol (dejar un rato para que se
deshidraten y despus secar bien.
10 pases muy lentos y dejando un buen rato para que se
deshidraten bien, en la mezcla de Isopropanol-Xilol. (secar
bien gradilla)
Montar las laminas.

RESULTADO
Los ncleos se tien en azul a violeta, mientras que el citoplasma muestra
varios tonos de azul, naranja, rosa o rojo asi:

PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS

Observe la simbologa en los rtulos de las soluciones.

Los colorantes EA, que contienen metanol, y el colorante OG 6, que

contiene etanol, son txicos por ingestin e inflamables. Manipular
con precaucin.

Las soluciones usadas y las caducadas deben eliminarse como

desechos especiales, debiendo cumplir las regulaciones locales para
el desecho de compuestos peligrosos.

Citoplasma Basofilo
Citoplasma Acidofilo
Citoplasma
Queratinizado
Eritrcitos
Ncleos

Verde azulado
Rosa
Rosa a Naranja
Rojo
Azul a violeta

MATERIALES ADICIONALES REQUERIDOS NO SUMINISTRADOS

Microscopio
Portaobjetos
Cubreobjetos
Cubetas de tincin
Agua
Cronometro y/o timer

CONTROL DE CALIDAD
El control de calidad en la microscopia de extendidos sanguneos
depende directamente de la formacin y experiencia del profesional que
validara la calidad de los extendidos, coloracin, etc.

Alcohol al 96%
Alcohol al 80%
Alcohol al 70%
Alcohol al 50%
HCl al 5%
Isopropanol
Xilol

NOTAS SOBRE EL EMPLEO

El microscopio usado debe cumplir los requisitos de un laboratorio de
diagnstico mdico.
La tcnica descrita anteriormente puede modificarse de acuerdo con
las preferencias del operador para lograr mayor o menor intensidad de
coloracin, lo cual implica variaciones en los tiempos de tincin,
decoloracin, lavado,...

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Coloracin PAPANICOLAOU

Juego de soluciones para la coloracin de citologas por el mtodo de Papanicolaou

Si las muestras pasan de 3 das de tomadas, antes de colorearlas

deben hidratarse sumergindose en agua destilada entre 8 y 15
minutos.
Nunca debe realizarse citologas vaginales durante el periodo
menstrual.
Los alcoholes del paso 18 al 20 del proceso de la coloracin. Deben
cambiarse muy frecuentemente. Siendo lo ideal cada vez que se
coloree.
Una buena coloracin, adems de contar con un buen colorante,
depende del extendido. Este no debe ser muy grueso y se debe evitar
la formacin de grumos o estras.
El espesor de cada extendido implica a cada laboratorio en particular
a establecer los tiempos ideales de coloracin.
Usar placas preferiblemente nuevas, desprovistas de ralladuras y
grasa.
Las soluciones de tincin empleadas para la tincin de Papanicolaou
estn listas para el uso, la dilucin de las soluciones no es necesaria,
disminuye la calidad de la tincin y la estabilidad.
Si se utiliza un aparato automtico de tincin, deben tenerse en
cuenta las instrucciones de empleo del fabricante del aparato y del
software.
Eliminar el aceite de inmersin en exceso antes de archivar.

BIBLIOGRAFA
1. Street CM: Papanicolaou Techniques in Exfoliative Cytology. IN Laboratory
Technique in Biology and Medicine, 3rd ed. EV Cowdry Editor, Williams & Wilkins,
Baltimore, 1952, p 253
2. Johnson PL, Klein MN: Application of Papanicolaou stain to paraffin sections. Stain
Technol 31:223, 1956
3. Liu W: A simplified cytologic staining technic. Am J Clin Pathol 54:767, 1970
4. A Manual for Cytotechnology, C Keebler, J Reagen, Editors, American Society of
Clinical Pathologists Press, Chicago (IL), 1983, p 323

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