PRACTICA N 6

SEPARACIN DE PIGMENTOS DE LAS HOJAS

2.-OBJETIVOS:
.

Separar los pigmentos de las hojas verdes como la amapola y planta

silvestre por la tcnica de cromatografa en capa fina con almina de

fase estacionaria y (acetona ter de petrleo) de fase mvil.
.

Conocer la tcnica de cromatografa en capa fina, sus caractersticas

y los factores que en ella intervienen.

.

Calcular valores de r.f. de las sustancias estudiadas y correlacionarlo

a la seleccin adecuada del eluyente y deducir la relacin que existe

entre la polaridad de las sustancias que se analizan y la de los eluyente
utilizados.
3.-PROBLEMA:
Nuestro problema es la identificacin de los diferentes pigmentos, sus
caractersticas de los diferentes hojas verdes como son (amapola y
planta silvestre) por la tcnica de cromatografa en capa fina.
4.-FUNDAMENTO TEORICO:
Muy bien sabemos que la cromatografa, es la tcnica de anlisis
qumico utilizada para separar sustancias puras de mezclas complejas.
Esta

tcnica

depende

confundamos con

del

principio

de

adsorcin

selectiva

(no

absorcin que es diferente). La cromatografa fue

descubierta por el botnico ruso, de origen italiano, Mijal Tswett en

1906, pero su uso no se generaliz hasta la dcada de 1930. Tswett
segn las diferentes teoras que le.
La tcnica estudiada en esta parte es la cromatografa de capa fina
perteneciente a la cromatografa plana que se separa en:
Cromatografa en papel

Cromatografa en capa fina:

La tcnica, en forma generalizada, comprende:
Preparacin del disolvente
Preparacin de la cmara de cromatografa
Desarrollo del cromatograma
Secado
Revelado de las sustancias separadas
Estudio del factor de retencin (Rf)
1. La cromatografa de capa fina se basa en el reparto. La
distribucin de molculas en dos fases. Estas dos fases seran:
Fase mvil: una capa de solvente orgnico que asciende por la
fase estacionaria de solvente impregnado en una placa de vidrio.
2. Fase estacionaria: la capa hidratada. Ya que el movimiento se
restringe al solvente orgnico, es el tiempo que permanezcan en
esta fase el que determinar la distancia recorrida; a ms tiempo,
ms distancia. Esto suele significar que el compuesto que ms
distancia recorre es ms apolar ya que permanece ms tiempo en
el solvente afn.
3. Pueden llegar a separar sustancias con diferente K (constante de
reparto), y con diferentes grupos funcionales. Experimentalmente
en ocasiones no podemos separar compuestos con diferentes
grupos funcionales. Es por esto que se utilizan soluciones de
almina y silicagel impregnadas en placas de vidrio
Ventajas de la cromatografa en capa fina:
Segn teoras se dice que la cromatografa en capa fina presenta una
serie de ventajas frente a otros mtodos cromatogrficos como ser: (en
columna, en papel, en fase gaseosa, ...) ya que el mismo se dice que es

de mas utilizaje, precisa y ms simple. As mismo el tiempo que se

necesita para conseguir las separaciones es mucho menor y la
separacin es generalmente mejor.
Eluyentes ms comunes para cromatografa en capa fina:

ter de petrleo

-tolueno

-dietil-ter, t-butil-ter

-diclorometano

-acetato de etilo

-n-pentano, n-hexano

-ciclohexano

-tetracloruro de carbono

-ter dietlico

-cloroformo

-acetona

-iso-propanol

-etanol

-metanol

-cido acetic

Almina
Segn teoras se dice que la almina u xido de aluminio es un
adsorbente ligeramente bsico debido a que en el proceso de extraccin
de la almina a partir de la bauxita quedan algunas molculas de
hidrxido de aluminio adheridas a la almina, dndole a sta un carcter
bsico. No consigue un desarrollo tan alto de la sustancia depositada
como el gel de slice.
La almina puede ser tratada qumicamente para conseguir alminas
cidas, bsicas y neutras. Puede contener aglomerantes y/o indicadores
ultravioletas. Es un adsorbente de carcter polar, de tal forma que
retendr con mayor avidez a los componentes polares
Adsorbentes ms comunes para cromatografa en capa fina:
a) Silica gel (SiO2. H2O) (se utiliza en el 80% de las separaciones)
b) xido de Alumnio Alumina (cida, neutra bsica)
c) Celulosa (Nativa o micro-cristalina)
d) Poliamidas
Para la seleccin de los adsorbentes deber tomar las siguientes
consideraciones:
a) Polaridad
b) Tamao de partcula
c) Dimetro
d) rea Superficial
e) Homogeneidad

Todos los slidos finamente pulverizados se dice que tienen el poder de

adsorber en mayor o menor grado otras sustancias sobre su superficie;
y, similarmente, todas las sustancias pueden ser adsorbidas, unas con
ms facilidad que otras. A este fenmeno de adsorcin selectiva es el
principio fundamental de la cromatografa.
Concepto de rf:

Rf es el registro y se define como:

Rf = distancia que recorre la muestra desde el punto de aplicacin

/ distancia que recorre el disolvente hasta el frente del eluyente.

Segn otras teoras se dice que, se us la cromatografa de particin,

que consiste en aplicar una gota de la solucin con la mezcla de
substancias a separar en la parte delgada capa de un material inerte,
como silicagel o celulosa (cromatografa en capa delgada). Luego, el
papel o material inerte (los denominaremos soportes) se colocan en un
recipiente con un solvente, de manera que, poco a poco, este los vaya
impregnando. Dicho solvente es una mezcla de dos lquidos (por
ejemplo, en el caso de nuestra prctica la acetona y ter de petrleo),
que se eligen de manera tal que uno de ellos se adsorba ms al soporte
que el otro; as, a medida que el solvente avance a lo largo del soporte
-los

lquidos

suben

espontneamente

por

capilaridad-,

aquellos

componentes de la muestra que sean ms solubles en el lquido que

queda adsorbido sern retenidos, y los que tengan mayor afinidad por el
que no se adsorbe sern arrastrados por este. Una vez finalizado el
proceso, el soporte se seca y se tie con un colorante conveniente, para
revelar los compuestos separados, los que se identifican colocando,
sobre el mismo soporte, muestras de substancias conocidas como en
nuestro caso la utilidad y conocimiento de las caractersticas de las
hojas verdes como la mapola y planta silvestre.

Acerca de los pigmentos de las hojas verdes:

Los pigmentos que dan color a las plantas se encuentran en el interior
de unos orgnulos celulares llamados cromatforos y vacuolas.
Los cromatforos son orgnulos de forma ovoide rodeados por una doble
membrana que almacenan pigmentos liposolubles. Pueden ser de
distintos tipos:
a) Cloroplastos: Presentes en las hojas verdes y responsables de la
fotosntesis. Contienen varios tipos de pigmentos: clorofilas, de color
verde; carotenos, de color rojo-anaranjado, y xantofilas, de color
amarillo.
b) Cromatforos no fotosintticos: Contienen carotenos y xantofilas,
responsables de los colores amarillo, naranja y rojo de muchas flores y
frutos.
c) Leuco plastos: Son incoloros, aunque pueden almacenar sustancias,
como el almidn, que les dan una coloracin blanquecina. Aparecen en
hojas variedades y en rganos de reserva como races o rizomas,
adems de en plantas parsitas.
Las vacuolas son orgnulos rodeados por una membrana simple que
ocupan la prctica totalidad de la clula. Son abundantes en los ptalos
de las flores y contienen pigmentos hidrosolubles de dos tipos:
a) antocianinas, que dan una coloracin azul, violeta o rojo purpreo, y
antoxantinas, que originan colores amarillo plido.
Una buena separacin revela la presencia de al menos siete puntos
coloreados
Pigmento Color:
Carotenos

Naranja

Clorofila

a Verde azulado

Xantofilas

Amarillo

Clorofila b

Verde

5.-REALIZACIN DE LA PRCTICA:
5.1.-MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS:
MATERIALES
REACTIVOS
Cubeta cromatogrfica Almina (Al2O3)

EQUIPOS
Campana

de

adsorcin.
Regla
Acetona
Pipetas
ter de petrleo
Vasos de precipitados
tijeras
Placa de vidrio
Picetas
Lpiz
Probeta
Esptula
Mortero
Hojas:
Amapola
y
planta silvestre.

5.2.-FLUJOPGRAMA:
Colocando

en

el

orden

numrico

para

colocar

la

cubeta

cromatogrfica.

1.-13 ml acetona
2.-37

ml

3.-Diluimos

ter

de
la

CUBETA
CROMATOGRAFICA

agua para impregnarlo toda la placa con ella.

petrleo
almina con un poco de

4.-Hacemos secar la placa con Almina y marcamos un centmetro la

base para repartirlo en dos y poner unas gotas de de pigmentos de
amapola y planta silvestre.
5.-Vertemos hacia la cubeta cromatogrfica la placa y observamos la
separacin de las diferentes caractersticas que presentan estos
pigmentos.
5.3.-PROCEDIMIENTO:
.

Recoger hojas

verdes de amapola y planta silvestre para luego

ponerlas en un mortero.
. Triturar la mezcla hasta que las hojas se decoloren y adquiera un color
verde intenso y nos quedamos con el lquido como extracto de la planta.
.

Poner 37 ml de disolvente ter de Petrleo y 13 ml de acetona en la

cmara o cubeta

y cerrar con la tapa para que no se evaporen los

gases.
.

Mientras el vapor se distribuye por la cmara, preparar la fase

estacionaria de la siguiente manera:

a) Diluir la almina con un poco de agua destilada.
b) Aadir la solucin y extenderlo por toda la placa de vidrio.
c) Llevar a secado completo en el sol por unos minutos hasta que
est bien seco.
.

Luego del secado marcar 1 cm por un extremo de la placa y dividirla

en dos para aadir gotas de pigmento de las hojas verdes de la amapola

y planta silvestre.
.

Introducir la placa en la cmara y volver a cerrar. Observe los colores

separados y hacer los clculos respectivos.

6.-CLCULOS Y RESULTADOS:
Para la fase mvil:
13 ml de acetona

37 ml de ter de petrleo
La cul nos da un total de 50ml de fase mvil.
Almina:
Pigmento de hoja verde de amapola:
Para el tiempo de retencin del aluyente: amapola (Eluyente TRE =
7,7cm) dato medido.

TRA(AMAPOLA) = 19 TRE = 19 7,7 = 11,3 cm

DRT =

T
T RA

7,7

= 11,3

= 0, 68 cm

Pigmento de hoja verde de planta silvestre:

Para el tiempo de retencin del aluyente: Planta silvestre. (Eluyente TRE
= 5,2 cm) dato medido

TR (NITRATO DE COBALTO EXAHIDRATATO) = 19 TRE = 19 5,2 = 13,8 cm

DRT =

T
T RA

5,2

= 13,8

= 0, 37 cm

6.1.-REACCIONES:
En

esta prctica no ay reacciones lo cual solo separaciones de las

sustancias qumicas a travs de la solubilidad de estos mismos y por

sus caractersticas qumicas que presentan las diferentes sustancias y la
polaridad de la fase estacionaria como es el silicagel.

7.-OBSERVACIONES:
A principios se pudo observar los colores de los pigmentos verdes de
cada hoja como es la amapola y planta silvestre.
As mismo decimos que hubo una separacin desigual de los diferentes
colores en la placa con los pigmentos de colores como ser:
Naranja
Verde azulado
Amarillo
Verde
Por otro decimos que se pudo observar la separacin de las diferentes
sustancias atravez del conocimiento de sus caractersticas tanto fsicas
como qumicas as como los colores secundarios que presentaban estos
mismos.
Por otro lado decimos que el tiempo de retencin fue igual para los dos
pigmentos por que se encontraban en la misma placa.
Por ltimo decimos que la solucin impregnada en la placa de vidrio
como la almina es incolora y transparente.

8.-CONCLUCIONES:
Los resultados obtenidos sern de forma distinta esto debido al cambio
de fase mvil como es la acetona y ter de petrleo. O sea que este ser
de acuerdo a la polaridad que presente la fase estacionaria frente a los
disolventes.

Las manchas de los reactivos fueron arrastradas hasta casi al tope de

las placas, esto debido a la gran solubilidad que se presenta hacia las
diferentes soluciones que se encuentran impregnadas en las placas de
vidrio como la almina al igual que su polaridad.
Bueno respecto a la separacin de las diferentes pigmentos como son
(amapola y planta silvestre) decimos o concluimos que la amapola es
quin se separa ms en la placa de almina respecto a la polaridad que
presenta este frente al mismo al igual que su solubilidad.
As mismo concluimos que la tcnica de cromatografa en capa fina es
muy importante porque en este se trabaja con fases estacionarias
diferentes en el cul como conclusin nosotros podemos designar a
travs de ensayos previos una fase estacionaria previa para una
muestra problema a separar, o sea con que fase estacionaria trabajar
para separar una sustancia problema como ser si usar la almina para
una separacin buena de acuerdo a la solubilidad que presentan estos
mismos frente a una solucin problema con una fase mvil idntica al
que se usa en la cromatografa en papel. Al igual tambin concluimos
que la fase mvil de acetona y ter de petrleo actu frente a las
sustancias de una manera buena esto

debido a la separacin que

existi en la placa de almina de acuerdo a los colores caractersticos de

pigmentos de hojas verdes como ser:
Una buena separacin que revela la presencia de al menos de los siete
puntos coloreados unos cuatro colores respectivos en nuestra prctica.

Carotenos

Naranja

Clorofila

a Verde azulado

Xantofilas

Amarillo

Clorofila b

Verde

Por ltimo concluimos que siempre existen factores que influyen ya sea
en mayor o menor grado como ser:
a) Temperatura: a menor temperatura las sustancias se adsorben ms
en la fase estacionaria.
b) La cromatografa debe llevarse a cabo en un rea sin corrientes de
aire.
c) Limpieza de las placas. Muchas placas estn contaminadas con grasa
o agentes plastificantes o adhesivos. Para el trabajo a pequea escala,
stas deben limpiarse corriendo primero una mezcla de cloroformo y
metanol y despus dejar secar completamente antes de aplicar la
muestra.
d) Pureza de los disolventes.
Finalmente concluimos que la cromatografa en capa fina Tiene muchas
aplicaciones entre las cuales hay que destacar:

Ensayo de la pureza radioqumica de los radiofrmacs

Determinacin de los pigmentos que contiene una planta

Deteccin de plaguicides en el comer

Anlisis de la composicin de los tintes de las fibras en medicina

forense

Identificacin de los componentes presentes en una mezcla y

sobre todo es un mtodo rpido y barato para el control de las
reacciones orgnicas

9.-BIBLIOGRAFIA:

. PRINCIPIOS DE ANALISIS INSTRUMENTAL Quinta edicin autores

(ESKOOG HOLLER NIEMAN) Mc Graw Hill

ANLISIS QUMICO E INSTRUMENTAL MODERNO.

HAROLD F.

WALTON Y JORGE REYES. ED. REVERT. MXICO D.F.

ANLISIS QUMICO CUANTITATIVO. GILBERT H. AYRES. ED. HARLA.

MEXICO D.F.

Va Internet

http://www.cienciahoy.org.

Microsoft Encarta 2001

Experimental Organic Chemistry 3th Edition. Gilbert & Martin.

Harcourt, pgina 171

Ballesteros, P y otros; Curso experimental de Qumica Orgnica;

UNED,

1989.

- Brewster, RQ y otros; Curso de qumica orgnica experimental;

Ed. Alhambra, 1978