Referate generale

HEMOCULTURA - CERINE ACTUALE I PERSPECTIVE

Olga Mihaela Dorob, Al. Rafila
Institutul Naional de Boli Infecioase Prof. Dr. Matei Bal, Bucureti
Cuvinte cheie

Hemocultura constituie una din cele mai importante examinri n

laboratorul de microbiologie clinic. Decelarea rapid a agenilor patogeni,
hemocultura, metode automate, inclusiv identificarea lor la nivel de specie i determinarea patternului de
metode moleculare
sensibilitate la antibiotice este important deoarece: bolnavii pot fi tratai
cu agentul antimicrobian corespunztor, prognosticul bolnavilor poate fi
mbuntit i ctigarea rezistenei de ctre patogen poate fi redus, costul
ngrijirii medicale va fi mai mic.
Pentru punerea la punct a unor metode de evideniere rapid, sensibil
i specific a agenilor patogeni au fost necesare eforturi susinute. Sistemele
automate de monitorizare a hemoculturilor permit o detectare mai rapid
a bacteriemiilor i fungemiilor comparativ cu metodele manuale.
Pentru identificarea i testarea sensibilitii la antibiotice (AST) a patogenilor din hemoculturi este necesar mai nti obinerea unei subculturi
pe medii gelozate. Aceast metod convenional necesit cteva zile pn
la identificare i AST. Sistemele automate de identificare i AST pot furniza
rezultate corespunztoare n 2-12h.
Identificarea direct din flacoanele de hemocultur pozitive n sisteme
automate a fost obinut n procente variabile (31-96%).
Determinarea AST direct din flacoanele de hemocultur folosind
sisteme automate cum sunt Phoenix, VITEK i VITEK 2, Sensititre,
MicroScan i MICRONAUT, cu un protocol de diluie predeterminat,
furnizeaz rezultate corespunztoare pentru cele mai multe combinaii
microorganism-antibiotic.
n ultimii ani au fost introduse pentru diagnosticul precoce al infeciilor
bacteriene noi tehnici bazate pe identificarea genomului bacterian. Identificarea rapid (4-5h) prin noua tehnologie Genotyping (DNA strip) este
acum posibil pentru multe specii de bacili Gram negativi i pentru specii
de Gram pozitivi mpreun cu determinarea meticilin, penicillin, vancomicin,
eritromicin i aminoglicozid rezistenei. Studiul rRNA din hemoculturi are
o sensibilitate mare (100%) i specificitate de 96%. Real time PCR direct
din flacoanele de hemocultur pentru gena nuc care codific nucleaza
i gena mec A care codific rezistena la meticilin permite identificarea
rapid (2-3h) a S. aureus i a stafilococilor coagulazo-negativi, inclusiv
rezistena la meticilin.
Keywords

Blood culture - actual requirements and perspectives

blood culture, automated

methods, molecular methods

The detection of bloodstream infections (BSI) is one of the most important tasks performed in clinical microbiology laboratory. Rapid and
reliable detection of BSI includes identification of pathogens at species
level and determination of antibiotic susceptibility patterns which are
crucial because: patients can be treated with appropriate antimicrobial
agents; the prognosis of the patient can be improved and the acquisition
of resistance of the pathogen may be reduced; overall hospital costs for
medical care will be reduced.

202

Terapeutic, Farmacologie i Toxicologie Clinic

Referate generale

Considerable efforts have been made to develop rapid, sensitive and

specific assays for the detection of causative organism. Current automated
continuous monitoring blood-culture systems permit a more rapid detection
of bacteremia and fungemia comparative with manual methods.
An overnight agar medium subculture from positive blood-culture
bottle is the initial step for identification and antimicrobial susceptibility
testing (AST) of pathogens causing bacteremia. This conventional culture
method is time-consuming and several days are usually needed for microbial
recovery, identification and AST. Automated systems for the identification
and AST are able to generate accurate results in 2 to 12 h.
Direct identification from positive blood-culture bottles in automated
systems showed a variable correlation rate compared with standard method
(31 to 96%).
Direct AST performed from positive blood-culture bottles, using automated systems, like Phoenix, VITEK and VITEK 2, Sensititre, MicroScan
and MICRONAUT, with a pre-determined dilution protocol, provides
accurate results for most organism-antibiotic combination.
New techniques have been introduced in last years for early diagnostic
of bacterial infections by identifying bacterial genome. Rapid identification
(4-5h) by new Genotyping technology (DNA strip) is now possible for many
species of Gram negative rods and Gram positive bacteria together with
the determination of methicillin, penicillin, vancomycin, erythromycin and
aminoglycoside resistance. rRNA assay in blood cultures is highly sensitive
(100%) and specific (96%). Real time PCR for nuc gene encoding nuclease
and mec A gene encoding for methicillin resistance from blood-culture bottles yields a rapid identification (2-3h) of S. aureus and coagulase-negative
staphylococci, including those methicillin-resistant.

Decelarea rapid a agenilor microbieni n snge,

identificarea lor la nivel de specie i determinarea
paternului de sensibilitate la substanele antimicrobiene constituie un deziderat major pentru asigurarea unui tratament corespunztor bolii pacientului,
obinerea scderii ratei mortalitii, reducerea zilelor
de spitalizare i a costurilor aferente acesteia precum
i reducerea posibilitii de ctigare a rezistenei
de ctre agentul patogen respectiv.
n mod uzual sunt cerute trei hemoculturi a
20 ml n primele 24 ore pentru a detecta bacteriemia sau fungemia. Un studiu recent efectuat
demonstreaz c prin dou hemoculturi n decurs
de 24 de ore se deceleaz aproximativ 90% dintre
bacteriemii i prin patru hemoculturi se ajunge la
mai mult de 99%(14).
Un real progres n efectuarea hemoculturilor a
fost realizat prin trecerea de la metodele manuale, cu
citire vizual zilnic, la sistemele automate (Bactec,
BacT/Alert) care permit citirea la fiecare 10 minute i
care odat cu apariia creterii microbiene avertizeaz
Anul XII, Vol.12, Nr. 2/2008

sonor sau luminos pozitivarea flacoanelor.

Intervalul de timp dintre recoltarea hemoculturii
i pozitivarea ei poate fi luat n considerare ca un
indicator al gravitii bolii, n cazul producerii de
ctre unele bacterii cum ar fi Staphylococcus aureus.
Marra i colab. comunic pentru bolnavii a cror
hemoculturi s-au pozitivat n mai puin de 12 ore o
rat a mortalitii de 7 ori mai mare dect la bolnavii
la care hemoculturile s-au pozitivat la mai mult de
12 ore(17). Timpul de pozitivare poate fi utilizat de
medic n stabilirea unei terapii corespunztoare ct
mai repede posibil i totodat constituie o informaie
n ceea ce privete prognosticul bolnavilor cu bacteriemii cu Staphylococcus aureus.

Identificarea i testarea a sensibilitii la

substanele antimicrobiene
1. Metode clasice
n mod obinuit dup pozitivarea flaconului
203

Referate generale

de hemocultur se efectueaz un frotiu colorat cu

Gram, pe care se evideniaz morfologia microorganismului. Murdoch si Greenless arat c un bun
tehnician de laborator poate identifica rapid Staphylococcus aureus n flacoanele de hemocultur BacT/
Alert pe baza aspectului microscopic caracteristic,
cu o sensibilitate de 89% i o specificitate de 98%(19),
aspect important dac se ia n considerare faptul
c stafilococii sunt frecveni n hemoculturi, att
S.aureus - ca agent etiologic, ct i stafilococi coagulazo-negativi, n majoritatea cazurilor contaminani.
Aspectul microscopic al microorganismului pe frotiul Gram din hemocultur se comunic de urgen
clinicianului. Concomitent se efectueaz treceri pe
medii solide: geloz snge, geloz chocolat i un
mediu cu lactoz pentru a obine cultura n vederea
identificrii i a testrii sensibilitii la antibiotice.
Rezultatele identificrii i testrii sensibilitii sunt
astfel disponibile dup 48 de ore de la pozitivarea
flaconului de hemocultur.
Pentru a reduce timpul de identificare se poate
recurge la efectuarea unor teste clasice, n funcie
de aspectul microscopic al bacteriilor, direct din
flaconul de hemocultur. Astfel pentru cocii Gram
pozitivi n ciorchine se determin producerea de
DNA-z, test prin care a doua zi se poate comunica rezultatul Staphylococcus aureus. Pentru cocii
Gram pozitivi n diplo i lanuri scurte, asemntori
pneumococului, se poate efectua o reacie de latex
aglutinare cu un reactiv pentru Streptococcus pneumoniae. De asemenea pe placa primar de geloz
snge se poate pune un disc de optochin i unul
de bacitracin, discuri care permit identificarea
Streptococcus pneumoniae n primul caz i a streptococilor beta-hemolitici n al doilea caz. Pentru
bacilii Gram negativi, sedimentul centrifugatului
din flaconul de hemocultur poate fi insmnat
pe medii biochimice politrope, ca de exemplu TSI,
MIU i pe citrat, medii care asigur diferenierea
majoritii bacililor fermentativi i nefermentativi.
Dac se suspicioneaz prezena unui Haemophilus
influenzae, n funcie de aspectul microscopic i
de diagnosticul clinic, pentru a obine mai repede
identificarea se traseaz un striu de stafilococ pe
placa de geloz snge sau se utilizeaz discuri cu
factori X, V i XV.
Pentru stabilirea sensibilitii la substanele
antimicrobiene se poate efectua o antibiogram
difuzimetric direct din flaconul de hemocultur.
O lucrare publicat n 2007 constat o concordan
ntre testarea prin disc difuzie, direct din flaconul
de hemocultur i testarea din cultur obinut
204

a doua zi, de 93,9% pentru cocii Gram pozitivi,

cu 1,6% erori foarte mari, 1,1% erori mari i 2,6%
erori mici, pe un lot de 532 hemoculturi i pentru
bacilii Gram negativi n cazul a 226 hemoculturi,
concordana comunicat a fost de 91,9%, cu 1,2%
erori foarte mari, 0,7% erori mari i 6,3% erori
mici(5). Pe un numr mai mic de determinri,
432 hemoculturi pozitive, Tan i colab. identific
numai 0,03% erori majore i 2,3% erori minore n
determinarea sensibilitii direct din flacoanele de
hemocultur(28). Rezultatele testrilor directe de
sensibilitate se consider c pot fi comunicate clinicianului pentru asigurarea unui tratament rapid,
adecvat n cazurile severe, cu verificarea ulterioar
pe cultura obinut pe mediile solide.
2. Metode automate
Utilizarea metodelor automate pentru identificarea i testarea sensibilitii la substanele
antimicrobiene n sistemele Phoenix Automated
Microbiology BD , VITEK i VITEK 2 (bioMrieux),
Sensititre (Trek Diagnostics), MicroScan Dade
i MICRONAUT Merlin, introduse n practica
medical n ultimul timp, au permis obinerea unor
rezultate in 2-7 ore comparativ cu 18-24 ore prin
metode clasice. Metodele automate pentru identificarea i testarea sensibilitii, considerate a da
rezultate mai devreme dect metodele clasice, cu
scurtarea perioadei de timp pn la administrarea
antibioticului corespunztor, sunt astzi disponibile
n multe laboratoare(4).
Cele mai folosite sisteme automate pentru identificarea i testarea sensibilitii la antibiotice, direct
din flacoanele de hemocultur pozitive sunt Vitek i
Vitek2. Dac n una din primele ncercri de utilizare
a sistemului Vitek(10), n anii 1996-1997 rezultatele au
fost nesatisfctoare, n anii ce au urmat prin utilizarea aceluiai sistem se crete procentul de testri
corespunztoare(3,9,13,16). Astfel Hansen comunic
75% identificri corecte pentru bacilii enterici cu
99% determinri corespunztoare de rezisten,
dintre care 85% n decurs de 6 ore(9). La un numr
de 118 tulpini Gram negative din hemoculturi, Ling
obine 82,2% identificri corespunztoare i 97,6%
rezultate corecte de sensibilitate(16).
Prin introducerea sistemului Vitek 2 se obine
pentru bacilii Gram negativi o identificare corect
de 80%, comparativ cu 90% prin subcultivare i
rezultate identice pentru testarea sensibilitii
bacililor Gram negativi, de 98,7% iar pentru cocii
Gram pozitivi 95,2%(13). Pentru cocii Gram pozitivi
de Cueto relateaz n acelai an, 2004 faptul c
Terapeutic, Farmacologie i Toxicologie Clinic

Referate generale

nici una dintre 50 tulpini de coci Gram pozitivi

nu a fost corect identificat prin testare direct
n sistemul Vitek 2(2). Doi ani mai trziu Diederen
comunic identificarea corect pentru toate tulpinile
de Staphylococcus aureus i stafilococi coagulazo
negativi pentru sistemul Vitek 2, cu rezultate corespunzatoare ale testrii de sensibilitate in 99,6%
dintre determinri(3). Aceste deosebiri de rezultate
se pot datora tehnicilor diferite de preparare a
inoculului din flacoanele de hemocultur, utilizat
pentru cardurile sistemului Vitek2.
Sistemul BD Phoenix Automated Microbiology
pentru identificarea bacililor Gram negativi i testarea rezistenei la antibiotice, direct din flacoanele
pozitive, cu utilizarea SST (Serum Separator Tube),
comparativ cu metodele de referin d rezultate
identice n 92,9% din probe pentru identificare i
99,0% pentru testrile de sensibilitate(7).
Studii pentru determinarea sensibilitii direct
din flacoane BacT/Alert comparativ utilizarea
subculturii prin folosirea panelurilor overnight i
rapide n sistemul MicroScan au relevat pentru
cocii Gram pozitivi date identice n 93,2% i 93,1%
i pentru bacilii Gram negativi de 94,7% i respectiv
93,5%(29).
Evaluarea sistemului automat MICRONAUT
Merlin indic pentru Gram negativi o concordan
de 98,1% iar pentru Gram pozitivi de 95,6%, comparativ cu testarea din cultur, cu avantajul c
pentru majoritatea preparatelor este dat valoarea
real a CMI-ului, dar dup un interval de timp mai
lung, de 18-24 ore(30).
3. Metode moleculare
n ultimii ani numeroase lucrri au abordat
tematica metodelor moleculare pentru identificarea
i genotiparea bacteriilor i fungilor direct din flacoanele de hemocultur.
Prin utilizarea tehnicii FISH, Jansen i colab.
identific n 25 minute streptococii i enterococii
iar bacilii Gram negativi din familia Enterobacteriaceae i Psedomonas aeruginosa n 45 minute,
fr s obin rezultate corespunztoare pentru
stafilococi(11). n acelai an Kempf i col, comunic
printr-o variant a metodei FISH o sensibilitate i
specificitate de 100% pentru identificarea in decurs
de 2,5 ore a stafilococilor, streptococilor, enterococilor, bacililor Gram negativi i a fungilor din hemoculturile pozitive(12). Mai trziu Olivera i col. cerceteaz
comparativ identificarea Staphylococcus aureus din
trei sisteme automate de hemocultur prin metoda
FISH obinnd o specificitate de 98,5% - 100% n
funcie de tipul sistemului (20). Identificarea rapid
Anul XII, Vol.12, Nr. 2/2008

prin PNA FISH a patru specii importante din 1231

hemoculturi pozitive a demonstrat concordana
bun cu metodele convenionale pentru S.aureus,
E.coli i Candida albicans i o sensibilitate mai
redus pentru P.aeruginosa(25). Prin utilizarea tehnicii
FISH pentru 200 hemoculturi ntr-un laborator de
microbiologie din Olanda se comunic obinerea
identificrii comparativ cu metodele convenionale
cu 18 ore mai devreme pentru bacterii i cu 42
ore mai repede pentru levuri(22). O modificare a
tehnicii FISH permite obinerea rezultatului n mai
puin de o or, comparativ cu tehnica standard
cu rezultat n aproximativ 4 ore, cu meninerea
corespondenei cu identificrile clasice la 96% din
probe(23). Se consider c metoda FISH este rapid,
ieftin, uor de efectuat, corespunztoare pentru
activitatea de rutin din laboratoare. Identificarea
rapid a stafilococilor coagulazo-negativi prin metoda FISH a dat posibilitatea reducerii spitalizrii
de la 6 la 4 zile i a dus la un consum mai mic de
vancomicin cu scderea cheltuielilor de spitalizare
cu aproximativ 4000 $ per bolnav(6). Dezavantajul
metodei este faptul c se obine numai identificarea
microorganismului, fr indicii asupra rezistenei la
agenii antimicrobieni.
O alt metod pentru identificarea a 16 specii
patogene mai frecvente n hemoculturi i a 4 specii
posibil a fi folosite ca arme biologice (B.anthracis,
Y.pestis, F.tularensis, B.abortus), fr ca s fie
necesar efectuarea coloraiei Gram, este PCRLDR-CE (PCR-ligase detection reaction-capillary
electrophoresis) cu sensibilitate de 98% i mare
specificitate(24); rezultatul se obine n 8 ore.
Probe DNA fa de subsecvene rRNA bacteriene
s-au dovedit a face o discriminare corespunztoare
ntre fungi i bacteriile Gram pozitive i Gram
negative care produc bacteriemii, cu o sensibilitate
de 100% i o specificitate de 96%(18).
Evaluarea rezultatelor utilizrii de rutin timp de
sase ani a kiturilor Accuprobe pentru identificarea
direct din hemoculturi a S.aureus, S.pneumoniae,
enterococilor, streptococilor grup A i B ntr-un
laborator din Finlanda red o sensibilitate de 72,4%
i o specificitate de 99,8%, ceea ce a necesitat modificarea valorii cutoff pentru creterea performanei
testului(15).
Real-time PCR multiplex pentru stafilococ
(StaphSR assay) identific i difereniaz S.aureus
meticilino-rezistent (MRSA) de cel meticilinosensibil (MSSA) n decurs de 2 ore cu o sensibilitate
de 100% i o specificitate de 98,4% pentru MRSA
i de 98,9% i respectiv 96,7% pentru MSSA (26).
205

Referate generale

Real-time PCR pentru genele nuc i mecA realizeaz

o identificare rapid n 2-3 ore a S.aureus i a stafilococilor coagulazo-negativi (8). Aceleai gene nuc
i mecA sunt utilizate pentru MRSA ntr-o reacie
Duplex real-time TaqMan PCR cu sensibilitate de
97% i specificitate de 100%(27)
O metod de genotipare promitoare pentru
identificarea simultan a unui numr mare de gene
este tehnologia DNA chip-urilor (microarray). Studiul efectuat de Cleven utilizeaz o metod care
evideniaz att identificarea microorganismului,
ct i caracteristicile de rezisten la antibiotice
i de virulen(1). Chipul DNA prototip utilizat
de Cleven permite identificarea Staphylococcus
aureus, Psedomonas aeruginosa i Escherichia
coli i determinanii de rezisten, bazat pe 120
gene, cu perspectiva de a adaug alte gene care
s creeze posibilitatea identificrii i a altor specii.
Evidenierea genelor de rezisten mecA, blaZ,
ermA, ermC, msrSA, aadD i aacA-aphD permite decelarea rezistenei la oxacilin, penicilin,
eritromicin, tobramicin i gentamicin printr-o
singur determinare. Pentru S. aureus se stabilete
rezistena la meticilin, la macrolide i la aminoglicozide prin evidenierea genelor mecA, ermA
i respectiv aacA-aphD. La tulpinile de E.coli
chipul determin rezistena la penicilin prin gena
blaTEM-106 i la aminoglicozide prin gena aacC2.
Palka-Santini(21) prin utilizarea metodei microarray
reusete identificarea i caracterizarea S. aureus cu
genele rspunzatoare de virulen (tsst-1, sea, seb,
eta) i genele de rezisten la antibiotice (mecA,
aacA-aphD, blaZ, ermA).
Nanotehnologia ofer n perspectiv posibilitatea
de a detecta cantiti foarte mici de DNA i proteine n snge ntr-un interval de timp de numai
cteva minute.
Noi ageni patogeni vor continua s apar ceea
ce face necesar recunoaterea lor rapid i ncorporarea lor n testele diagnostice.
Analiza automat simultan a DNA, RNA,
proteinelor, glicopeptidelor i a exopolizaharidelor
microbiene va face posibil identificarea a numeroase microorganisme patogene, a toxinelor i a genotipurilor de rezisten. In viitor tehnicile de biologie
molecular vor nlocui treptat metodele microbiologice clasice oferind posibilitatea unui diagnostic
precis n mai puin de o or, cu toate avantajele
acestuia privind bolnavul i comunitatea.

Bibliografie
1. Cleven BEE et all. Identification and characterization of
bacterial pathogens causing bloodstream infections by DNA
microarray. J Clin Microbiol, 2006, 44, 2389-2397

2. de Cueto et all. Use of positive blood cultures for direct

identification and susceptibility testing with the VITEK 2
system. J Clin Microbiol, 2004, 42, 3734-3738

3. Diederen BM et all. Identification and susceptibility

testing of Staphylococcus aureus by direct inoculation from
positive BACTEC blood culture bottles. Clin Microbiol Infect.
2006, 12, 84-86
4. Doern GV et all. Clinical impact of rapid in vitro susceptibility testing and bacterial identification. J Clin Microbiol.
1994. 32, 1757-1762

5. Edelmann A, Pietzcker T, Wellinghausen N. Comparison of direct disk diffusion and standard microtitre broth
dilution susceptibility testing of blood culture isolates. J Med
Microbiol. 2007, 56, 202-207

6. Forrest GN et all. Impact of rapid in situ hybridization

testing on coagulase-negative staphylococci positive blood
cultures. J Antimicrob Chemother, 2006, 58,154-158

7. Funke G, Funke-Kissling P. Use of the BD Phoenix

automated microbiology system for direct identification and
susceptibility testing of gram-negative rods from positive
blood cultures in a three-phase trial. J Clin Microbiol, 2004,
42, 1466-1470
8. Grbner S, Kempf VA. Rapid detection of methicillinresistant staphylococci by real-time PCR directly from positive blood culture bottles. Eur J Clin Microbiol Infect Dis,
2007, 26, 751-754
9. Hansen DS et all. Direct identification and susceptibility testing of enteric bacilli from positive blood cultures
using VITEK (GNI+/GNS-GA). Clin Microbiol Infect, 2002,
8, 38-44

10. Howard WJ et all. Vitek GPS card susceptibility testing accuracy using direct inoculation from BACTEC 9240
blood culture bottles. Diagn Microbiol Infect Dis, 1996, 24,
109-112
11. Jansen GJ et all. Rapid identification of bacteria in blood
cultures by using fluorescently labeled olgonucleotide probes.
J Clin Microbiol, 2000, 38, 814-817

12. Kempf VAJ et all. Fluorescent in situ hybridization allows rapid identification of microorganisms in blood cultures.
J Clin Microbiol, 2000, 38, 830-838

13. Kerremans JJ si col. Accuracy of identificaton and

susceptibility results by direct inoculation of Vitek 2 cards
from positive BACTEc cultures. Eur J Clin Microbiol Infect
Dis, 2004, 23, 892-898
14. Lee A et all. Detection of bloodstream infections in
adults: how many blood cultures are needed? J Clin Microbiol,
2007, 45, 3546-3548

15. Lindholm L, Sarkkinen H. Direct Identification of

Gram-Positive Cocci from Routine Blood Cultures by Using
AccuProbe Tests. J Clin Microbiol, 2004. 42, 5609-5613

16. Ling TK, Liu ZK, Cheng AF. Evaluation of the VITEK 2
system for rapid direct identification and susceptibility testing
of gram-negative bacilli from positive blood cultures. J. Clin.
Microbiol, 2003. 41, 4705-4707
17. Marra AR et all. Time to Blood Culture Positivity as

206

Terapeutic, Farmacologie i Toxicologie Clinic

Referate generale
a Predictor of Clinical Outcome of Staphylococcus aureus
Bloodstream Infection. J Clin Microbiol, 2006, 44, 13421346

18. Marlowe EM et all. Application of an rRNA probe matrix

for rapid identification of bacteria and fungi from routine
blood cultures. J Clin Microbiol, 2003, 41, 5127-5133
19. Murdoch DR, Greenlees, RL. Rapid identification
of Staphylococcus aureus from BacT/ALERT blood culture
bottles by direct Gram stain characteristics. J Clin Pathol,
2004, 57, 199-201

20. Oliveira K et all. Direct Identification of Staphylococcus

aureus from positive blood culture bottles. J Clin Microbiol,
2003, 41, 889-891
21. Palka-Santini et all. Rapid identification, virulence
analysis and resistance profiling of Staphylococcus aureus
by gene segment-based DNA microarrays: application to
blood culture post-processing. J Microbiol Methods, 2007,
68, 468-477
22. Peters RPH et all. Faster identification of pathogens in
positive blood cultures by Fluorescence in situ hibridization
in ruotine practice. J Clin Microbiol, 2006, 44, 119-123
23. Peters RPH et all. Rapid identification of pathogens in
blood cultures with a modified fluorescence in situ hibridization assay. J Clin Microbiol, 2006, 44, 4186-4188

24. Pingle MR si colab. Multiplexed identification of BloodBorne Bacterial Pathogens by Use of a Novel 16S rRNA Gene

Anul XII, Vol.12, Nr. 2/2008

PCR-Ligase Detection Reaction-Capillary Electrophoresis

Assay. J Clin Microbiol, 2007, 45, 1927-1935

25. Sogaard M, Stender H, Schonheyder HC. Direct

Identification of Major Blood Culture Pathogens, Including
Pseudomonas aeruginosa and Escherichia coli, by a panel
of Fluorescence In Situ Hybridization Assays Using Peptide
Nucleic Acid Probes. J Clin Microbiol, 2005, 43, 1947-1949

26. Stamper PD et all. Clinical Validation of the Molecular

BD GeneOhm StaphSR Assay for direct detection of Staphylococcus aureus and Methicillin-Resistant Staphylococcus
aureus in positive blood cultures. J Clin Microbiol, 2007,
45, 2191-2196
27. Thomas LC et all. Development of a real-time Staphylococcus aureus and MRSA (SAM) PCR for routine blood
culture. J Microbiol Methods, 2007, 68, 296-302
28. Tan TY, Ng SY, Kwang LL. Evaluation of disc susceptibility tests performed directly from positive blood cultures.
J Clin Pathol, 2008, 61, 343-346

29. Waites KB et all. Direct susceptibility testing with positive BacT/Alert blood cultures by using MicroScan overnight
and rapid panels. J Clin Microbiol, 1998, 36, 2052-2056.

30. Wellinghausen N et all. Evaluation of the Merlin MICRONAUT System for Rapid Direct Susceptibility Testing of
Gram-Positive Cocci and Gram-Negative Bacilli from Positive
Blood Cultures. J Clin Microbiol, 2007, 45, 789-795

207