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Microbiologia

Bactrias e Fungos
Profa. Msc. Fernanda A G Branco
22 de fevereiro de 2014

Referencial Histrico
7000 a. C. Fabrico de cerveja
3500 a. C. Os assrios fabricaram vinho
3000 a. C. Sumrios produziam manteiga,
egpcios processavam leite, fabricavam
manteiga e queijo
1000 a. C. foram criadas as primeiras tcnicas
de produo de vinho

Girolamo Fracastoro (1483-1553)


Props que as doenas infecciosas poderiam ser
causadas por minsculas partculas que
poderiam transmitir as infeces por contato
direto , indireto ou at mesmo sem contato.
Ele se referia a esporos como produtos qumicos
e no a entidades

Louis Pasteur (1822-1895)


Diferenciou leveduras para produo de vinho e
cerveja
Concluiu que a fermentao um mecanismo de
produo de energia na ausncia de oxignio

Pasteurizao
Criada em 1864 um processo trmico de destruio
de microorganismos
Nos dias atuais se divide em trs tipos:
Lenta: em que se aplicam temperaturas em torno de
65C durante trinta minutos ou mais
Rpida: aplicam-se temperaturas mais altas, em torno de
75C, durante alguns segundos. Este tipo de
pasteurizao , conhecido tambm como HTST (High
Temperature and Short Time)
Muito rpida: temperatura de 130C a 150C, durante trs
a cinco segundos, tambm conhecido como UHT (Ultra
High Temperature)

Robert Koch (1843-1910)


Um dos fundadores da Microbiologia
Mtodos de colorao e fixao para estudo de
bactrias
Criou seu postulado que foi amplamente aceito e
adotado

Postulados de Koch
A presena do agente deve ser sempre comprovada em
todos os indivduos que sofram da doena em questo e,
a partir da, isolada em cultura pura.
O agente causador da doena em questo no pode ser
encontrado em indivduos saudveis.
Uma vez isolado, o agente deve ser capaz de reproduzir a
doena em questo, aps a sua inoculao em animais
experimentais.
O mesmo agente deve poder ser recuperado desses
animais experimentalmente infectados e de novo isolado
em cultura pura.

Deteco e Identificao
de Bactrias de
Importncia Mdica

Bactrias
Organismos
unicelulares
desprovidos
de
membrana separando o ncleo do restante da
clula
Podem ser encontradas isoladas ou na forma de
colnia
Seu tamanho varia de 0,2 a 30 m

Morfologia
Coco : De forma esfrica ou subesfrica.
Bacilo : Em forma de bastonete (do gnero Bacillus)
Vibrio : Em forma de vrgula (do gnero Vibrio)
Espirilo : de forma espiral/ondulada (do gnero Spirillum)

Classificao de Gram
Gram-positivas: bactrias que possuem parede celular com uma nica
e espessa camada de peptidoglicanos. Pelo emprego da colorao de
Gram, tingem-se na cor prpura ou azul quando fixadas com cristal
violeta.
Gram-negativas: bactrias que possuem parede celular delgada e
segunda membrana lipdica - distinta quimicamente da membrana
plasmtica - no exterior desta parede celular. Ao trmino da colorao,
essas clulas so vistas com a tonalidade rosa-avermelhada.

Fungos
Organismos eucariotos que abrangem leveduras,
bolores e cogumelos
Usados especialmente como agente de
transformao de alimentos ou como alimento
Amplamente utilizados tambm na indstria de
alimentos
Levedura-hifa
Dimorfismo trmico

Importncia dos Microorganismos


Alteram

os alimentos

Alteraes benficas ou de decomposio

Causam

doenas

Streptococcus
Cocos G+
Podem causar infeco estreptoccica da
orofaringe, tonsilite, infeces de feridas e
da pele (piodermite), septicemia(infeces
do sangue), escarlatina, pneumonia.

Staphylococcus aureus
Simbionte ao homem
Causa gastroenterite estafiloccica devido
presena de enterotoxinas na comida
ingerida, e no a uma infeco. Comum
em presunto e outras carnes com sal, que
no apresentam nenhum sinal ou gosto
diferente.

ESTAFILOCOCOS,
ESTREPTOCOCOS, ENTEROCOCOS
E OUTROS COCOS GRAM
POSITIVOS
Os Estafilococos so as bactrias no
esporuladas que mais resistem no meio
ambiente.
Podem sobreviver por meses em amostras
clnicas secas, so relativamente resistentes ao
calor e podem tolerar uma concentrao
aumentada de sal.

Indivduos
sadios
so
colonizados
intermitentemente por Staphylococcus aureus
desde a amamentao, e podem albergar o
microrganismo na nasofaringe, ocasionalmente
na pele e raramente na vagina.
A partir destes stios, o S. aureus pode
contaminar a pele e membranas mucosas do
paciente, objetos inanimados ou outros
pacientes por contato direto ou por aerossol,
ocasionando infeces letais por conta dos
fatores de virulncia ou atravs de resistncia
aos antimicrobianos atualmente utilizados .

Os estreptococos foram os maiores


causadores de infeco hospitalar na era prantibitica, causando surtos de infeco e
morte de purperas. Apesar de no serem
atualmente uma importante causa de infeco
hospitalar, provocam, no entanto, doenas
muito graves e muitas vezes letais, mesmo em
pacientes imunocompetentes, sendo
importante o rpido diagnstico deste agente.

IDENTIFICAO PRELIMINAR

A identificao dos estreptococos e


estafilococos baseada na morfologia que
apresentam em meios lquidos.
A identificao preliminar comea com a
inoculao na placa de gar sangue de
carneiro incubada em 5% de tenso de CO
(mtodo da vela ou estufa de CO 2).
A diferenciao entre os estreptococos e os
estafilococos se d, seguramente, pela prova
da catalase.

PROVA DA CATALASE

Com a ala bacteriolgica ou com um palito


coleta-se o centro de uma colnia suspeita e
esfrega-se em uma lamina de vidro. Colocar
sobre este esfregao uma gota de gua
oxigenada a 3% e observar a formao de
bolhas. Para a famlia Microccocacea
(estafilococos) a prova geralmente positiva,
enquanto que para a famlia Streptococcacea
(estreptococos) negativa.

TESTE DA RESISTNCIA A
NOVOBIOCINA

A cepa semeada de maneira semelhante ao


antibiograma em placa de Muller Hinton
acrescida de um disco teste de novobiocina
contendo 5 g. As amostras resistentes
mostram zonas de inibio de 6 a 12 mm,
enquanto as susceptveis apresentam halos de
16 mm ou mais. As cepas de Staphylococcus
saprophyticus so resistentes.

IDENTIFICAO DE Staphylococcus aureus

TESTE DA COAGULASE EM LMINA

A maioria das cepas de Staphylococcus aureus


possui a coagulase ligada (ou fator aglutinante)
clumping factor na superfcie da parede
celular, que reage com o fibrinognio do
plasma causando a coagulao do mesmo.

Colocar 2 gotas de salina em uma lmina;

Emulsionar uma colnia isolada a ser testada;

Colocar uma gota de plasma e misturar com um


palito de plstico ou madeira;

Observar se h aglutinao em 10 segundos;

No se pode executar este teste a partir de um


gar com grande concentrao de sal como gar
manitol.

TESTE DA COAGULASE EM TUBO

Este teste baseia-se na presena da coagulase


livre que reage com um fator plasmtico
formando um complexo que atua sobre o
fibrinognio formando a fibrina. O teste
melhor efetuado se:

Adicionar 0,1 ml de caldo BHI, incubado por uma


noite, com colnia suspeita a um tubo de ensaio
com 0,5 ml de plasma;

Incubar por 4 horas 35C em estufa ou banho


maria;

A formao do cogulo observada pela inclinao


suave do tubo de ensaio a 90 graus da vertical.

TESTE DA DNASE

Este teste consiste na inoculao de colnias


em meio contendo DNA, (DNAse test agar)
obtido comercialmente.

Adicionar ao meio original azul de ortotoluidina na


concentrao de 0,1%; o meio adquire uma
colorao azul intensa;

Incubar a 35C por 24 horas;

Uma colorao rsea ou amarelada


caracterstica ao redor das colnias produtoras
de DNAse indica a positividade da prova.

IDENTIFICAO DOS ESTREPTOCOCOS

Os estreptococos podem ser diferenciados de


acordo com sua aparncia na placa de gar
sangue aps incubao a 35C em presena
de 5% de CO2, podendo apresentar: hemlise
parcial (alfa, de cor esverdeada), total (beta) ou
nenhuma (gama).

Sensibilidade a antibiticos

TESTE DA BACITRACINA

TESTE DO SULFAMETOXAZOL + TRIMETOPRIM


(SXT)

TESTE DE CAMP (NA MESMA


PLACA)

Inocular uma estria nica de uma amostra de Staphylococcus aureus


produtor de beta lisina (ATCC 25923) no centro de uma placa de
gar sangue preparada obrigatoriamente com sangue de carneiro.
(Esta linhagem de S. aureus deve ser mantida continuamente em
estoque)
Inocular as amostras a serem testadas em estrias formando um
ngulo reto com a linha de inoculao da amostra teste de
estafilococo. As estrias no devem se tocar, ficando a 1 mm de
distncia, e deste modo vrias amostras podem ser testadas em uma
mesma placa de gar sangue. A maneira de inocular fundamental
para a observao do efeito esperado.
Incubar a placa a 35-37C durante um perodo de 18-24 horas.
A positividade da prova, Streptococcus agalactiae (grupo B),
evidenciada pelo alargamento da zona de lise, que adquire a forma
de ponta de flecha caracterstica, na rea de interseco entre as
duas estrias.

TESTE DE CAMP (NA MESMA


PLACA)

NEISSERIAS

Diplococos Gram negativos mais achatados


nas laterais, dando a forma de rins ou dois
gros de feijo unidos por uma ponte.

TRANSPORTE E SEMEADURA DO
MATERIAL

O ideal semear imediatamente aps a coleta


em meio slido, levar para a estufa 36 oC em
jarra com vela ou com gerador de CO2 e
umidade.

ENTEROBACTRIAS

a maior e mais heterognea famlia de


bactrias Gram negativas de importncia
mdica.

CARACTERIZAO DA FAMLIA
ENTEROBACTERIACEAE

So bacilos Gram negativos, no esporulados,


com motilidade varivel, oxidase negativos, e
que crescem em meios bsicos (caldo
peptona), meios ricos (gar sangue, gar
chocolate e CLED), meios seletivos (Mac
Conkey, EMB). So anaerbios facultativos
(crescem em aerobiose e anaerobiose),
fermentam a glicose com ou sem produo de
gs, so catalase positivos, e reduzem nitrato a
nitrito

Principais provas para a


identificao das enterobactrias de
importncia clnica
1. Fermentao da glicose
2. Fermentao da lactose
3. Motilidade
4. Utilizao de citrato
5. Descarboxilao da lisina
6. Produo de sulfeto de hidrognio (H2S)
7. Produo de gs (CO2)
8. Oxidase
9. Produo de indol
10. Produo de urease
11. Produo de fenilalanina desaminase ou opo
triptofanase
12. Produo de gelatinase ou opo DNAse

BASTONETES NO
FERMENTADORES

Os bacilos Gram negativos classificados como


no fermentadores (BNFs) so microrganismos
aerbios, no esporulados, que se
caracterizam pelo fato de serem incapazes de
utilizar carboidratos como fonte de energia
atravs de fermentao, degradando-os pela
via oxidativa.

VIBRIO

As espcies do Gnero Vibrio so bacilos


curvos ou s vezes retos, longos, anaerbios
facultativos, mveis, fermentadores da glicose,
em geral sem produzir gs, e oxidase positivas.
Alm do Vibrio cholerae, existem mais de 10
espcies patognicas para o ser humano.
Algumas espcies podem causar
gastroenterite, outras infeces cutneas e
bacteremias.

Deteco e Identificao
dos Fungos de
Importncia Mdica

FUNGOS E INFECO
HOSPITALAR
Fungos so seres dispersos no meio
ambiente, em vegetais, ar atmosfrico, solo
e gua e, embora sejam estimados em 250
mil espcies, menos de 150 foram descritos
como patgenos aos seres humanos.
Leveduras so fungos capazes de colonizar
o homem e animais e, frente perda do
equilbrio parasita-hospedeiro, podem
causar diversos quadros infecciosos com
formas clnicas localizadas ou
disseminadas.

De modo contrrio, fungos filamentosos, ou


bolores, normalmente, no fazem parte da
microbiota animal e portanto o homem no
um reservatrio importante para esse
grupo de fungos. As portas de entrada no
hospedeiro so as vias areas superiores
ou quebra na barreira epidrmica aps
traumatismos com objetos perfurocortantes.

Candida
Leveduras do gnero Candida so os maiores
agentes de infeco hospitalar e representam um
desafio para a sobrevida de pacientes com
doenas graves e aqueles em perodo psoperatrio.

GENERALIDADES SOBRE
FUNGOS
Os fungos de interesse mdico, agentes de
micoses, so de dois tipos morfolgicos:
leveduras, que so unicelulares e bolores ou
fungos filamentosos, que so multicelulares
(Fig.1). Existe um subgrupo dentro dos
filamentosos, chamados fungos dimrficos, que
se apresentam sob ambas as formas,
dependendo principalmente da temperatura, mas
sob influncia tambm do teor de CO2 e
condies nutricionais.

EXAME MICROSCPICO DIRETO COM


HIDRXIDO DE POTSSIO (KOH) A 20%

usado para exame de pelos, pele, unha, tecido


obtido por bipsia, exsudatos espessos e outros
materiais densos. Colocar uma gota de KOH
(aquoso a 20%) em uma lmina de microscopia e
sobre esta, uma poro da amostra a ser
examinada. Cobrir a preparao com uma
lamnula e, para intensificar a clarificao,
aquecer ligeiramente, sobre a chama de um bico
de Bunsen, sem deixar ferver a mistura. Examinar
a preparao aps 20 minutos, em microscpio
ptico comum, inicialmente, com objetiva de 10x,
seguida de 40x.

EXAME MICROSCPICO DIRETO


COM TINTA NANQUIM

Colocar uma gota de tinta nanquim e uma gota


do sedimento da amostra centrifugada, sobre
uma lmina. Cobrir a preparao com lamnula
e observar ao microscpio ptico (objetivas de
10x e 40 x).
Nesta tcnica, um erro bastante frequente
confundir linfcitos com clulas de leveduras. A
diferenciao feita pela refringncia da
parede celular e das incluses no citoplasma
das leveduras, alm da presena de
brotamentos.

INTERPRETAO DE
RESULTADOS E LAUDOS

O microbiologista ao elaborar os relatrios de


exames microbiolgicos deve ter em mente a
possibilidade do clnico no saber interpret-lo
adequadamente, tanto por desconhecer um
determinado nome de bactria, como seu
potencial patognico e porque muitas vezes
estas dvidas associadas disponibilidade do
antibiograma possam ser um fator
determinante do uso inadequado de
antimicrobianos.

ANLISE MICROBIOLGICA

Bactrias como S. pyogenes, Neisseria


gonorrhoeae e Mycobacterium tuberculosis,
independente do material que foram isoladas
so de importncia clinica e epidemiolgica.
Bactrias como Neisseria meningitidis e
Haemophilus influenzae, se forem isolado no
LCR ou sangue so de importncia indiscutvel,
mas quando isolados em mucosas costumam
representar flora e seu relato discutvel.

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