Historia de la Microbiologa- Lectura complementaria

En este artculo encontrars aportes importantes que hicieron diferentes Cientficos en el

descubrimiento de la Microbiologa
PERIODO PREVIO AL DESCUBRIMIENTO DEL MICROSCOPIO
Si bien el descubrimiento efectivo de seres vivos no visibles a simple vista debi aguardar
hasta el ltimo tercio del siglo XVII, sus actividades son conocidas por la humanidad desde
muy antiguo, tanto las beneficiosas, representadas por las fermentaciones implicadas en la
produccin de bebidas alcohlicas, pan y productos lcteos, como las perjudiciales, en forma
de enfermedades infecciosas.
En el Renacimiento europeo, Girolamo Frascatorius, en su libro "De contagione et contagionis"
(1546) dice que las enfermedades contagiosas se deben a "grmenes vivos" que pasan de
diversas maneras de un individuo a otro. Estos inicios de explicacin que renunciaban a
invocar causas sobrenaturales fueron probablemente catalizados por la introduccin en
Europa de la sfilis, una enfermedad en la que estaba clara la necesidad de contacto para su
contagio. Pero la "cosa" que se transmite en la enfermedad sigui siendo objeto de conjeturas
durante mucho tiempo.
2.2 EL PERIODO DE LOS PRIMEROS MICROSCOPISTAS.
Ya en el siglo XIV, con la invencin de las primeras lentes para corregir la visin, surgi una
cierta curiosidad sobre su capacidad de aumentar el tamao aparente de los objetos. En el
siglo XVI surgieron algunas ideas sobre aspectos de la fsica ptica de las lentes de aumento,
pero no encontraron una aplicacin inmediata. Se dice que Galileo hizo algunas observaciones
"microscpicas" invirtiendo su telescopio a partir de lentes montadas en un tubo, pero en
cualquier caso est claro que no tuvieron ninguna repercusin.
La primera referencia segura sobre el microscopio (1621) se debe a Constantijn Huygens,
quien relata que el ingls Cornelis Drebbel tena en su taller un instrumento magnificador, que
recibi el nombre de microscopium en l625, en la Accademia dei Lincei, de Roma.
El descubrimiento de los microorganismos fue obra de un comerciante holands de
tejidos, Antonie van Leeuwenhoek (1632-1723), quien en su pasin por pulir y montar lentes
casi esfricas sobre placas de oro, plata o cobre, casi lleg a descuidar sus negocios. Fabric
unos cuatrocientos microscopios simples, con los que lleg a obtener aumentos de casi 300
dimetros. En 1675 descubri que en una gota de agua de estanque pululaba una asombrosa
variedad de pequeas criaturas a las que denomin "animlculos". En 1683 descubre las
bacterias, por lo que se considera el "padre de la Microbiologa". Durante varias dcadas
Leeuwenhoek fue comunicando sus descubrimientos a la Royal Society de Londres a travs de
una serie de cartas que se difundieron, en traduccin inglesa, en las "Philosophical
Transactions". Sus magnficas dotes de observador le llevaron asimismo a describir protozoos
(comoGiardia, que encontr en sus propias heces), la estructura estriada del msculo, la
circulacin capilar, a descubrir los espermatozoides y los glbulos rojos (por lo que tambin se
le considera el fundador de la Histologa animal), as como a detallar diversos aspectos

estructurales de las semillas y embriones de plantas. Leeuwenhoek se percat de la

abundancia y ubicuidad de sus animlculos, observndolos en vinagre, placa dental, etc.
Aunque los descubrimientos de Leeuwenhoek despertaron inters al ser comunicados, pocos
intentaron o pudieron reproducirlos seriamente. Adems, la fabricacin de lentes sencillas de
gran aumento era difcil y el manejo de los microscopios simples, bastante engorroso.
Simultneamente el ingls Robert Hooke (1635-1703) usando microscopios compuestos,
describi los hongos filamentosos (1667), y descubri la estructura celular de las plantas
(Micrographia, 1665), acuando el trmino clula. Pero el trabajo con microscopios
compuestos aplicados al estudio de los "animlculos" languideci durante casi 200 aos,
debido a sus imperfecciones pticas, hasta que hacia 1830 se desarrollaron las lentes
acromticas.
2.3 EL DEBATE SOBRE LA GENERACIN ESPONTNEA.
En la Edad Media y Renacimiento, dieron carta de naturaleza a la idea de que algunos seres
vivos podan originarse a partir de materia inanimada, o bien a partir del aire o de materiales
en putrefaccin. Esta doctrina de la "generatio spontanea" o abiognesis, fue puesta en
entredicho por los experimentos de Francesco Redi (1621-1697), quien haba acuado la
expresin "Omne vivum ex ovo" (1668), tras comprobar que los insectos y nematodos
procedan de huevos puestos por animales adultos de su misma especie. Demostr que si un
trozo de carne era cubierto con gasa de forma que las moscas no podan depositar all sus
huevos, no aparecan "gusanos", que l correctamente identific como fases larvarias del
insecto. Los descubrimientos de Redi tuvieron el efecto de desacreditar la teora de la
generacin espontnea para los animales y plantas, pero la reavivaron respecto de los recin
descubiertos "animlculos", de modo que aunque se acept la continuidad de la vida en
cuanto a sus formas superiores, no todos estaban dispuestos a admitir el ms amplio "Omne
vivum ex vivo" aplicado a los microorganismos.
Lazzaro Spallanzani (1729-1799) sostuvo una disputa con J.T. Needham (1713-1781) en la
que el primero demostr que los "infusorios" no aparecan en muestras de maceraciones
animales o vegetales sometidas durante tiempo suficiente a ebullicin en frascos
hermticamente cerrados, pero volvan a aparecer si se practicaban agujeros en el recipiente.
Sin embargo Needham, recogiendo una idea ya expresada por Huygens, amigo de
Leeuwenhoek, replic -con argumentos vitalistas muy propios de la poca- que el calor haba
destruido la "fuerza vegetativa" de las infusiones y haba cambiado la "cualidad" del aire
dentro de los frascos.
En 1769, tras rechazar la teora de la generacin espontnea, Spallanzani dise experimentos para refutar los
realizados por el sacerdote catlico ingls John Turberville Needham, que haba calentado y seguidamente sellado
caldo de carne en diversos recipientes; dado que se haban encontrado microorganismos en el caldo tras abrir los
recipientes, Needham crea que esto demostraba que la vida surge de la materia no viviente. No obstante, prolongando
el periodo de calentamiento y sellando con ms cuidado los recipientes, Spallanzani pudo demostrar que dichos caldos
no generaban microorganismos mientras los recipientes estuvieran sellados.
Durante el primer tercio del siglo XIX la doctrina de la arquegnesis o generacin espontnea
recibi un ltimo refuerzo antes de morir, debido por un lado a razones extracientficas (el
auge del concepto de transmutacin producido por la escuela de la filosofa de la naturaleza),

y por otro al descubrimiento del oxgeno y de su importancia para la vida, de modo que los
experimentos de Spallanzani se interpretaron como que al calentarse las infusiones, el
oxgeno del aire se destrua, y por lo tanto desapareca la "fuerza vegetativa" que originaba la
aparicin de microorganismos.
Theodor Schwann (1810-1882) present en 1836 un mtodo seguro para refutar la teora
abiognica: calent maceraciones en frascos a los que se haba eliminado previamente el
aire, pero no continu trabajando en esta lnea.
Fue, efectivamente Louis Pasteur (1822-1895) el que asest el golpe definitivo y zanj la
cuestin a favor de la teora biognica. En escritos posteriores comunica sus sencillos y
elegantes experimentos.
Algunos de sus contemporneos, incluido el eminente qumico alemn Justus von Liebing, insistan en que
la fermentacin era un proceso qumico y que no requera la intervencin de ningn organismo. Con la ayuda de un
microscopio, Pasteur descubri que, en realidad, intervenan dos organismos -dos variedades de Levaduras- que
eran la clave del proceso. Uno produca alcohol y el otro, cido lctico, que agriaba el vino.
Utiliz un nuevo mtodo para eliminar microorganismos que pueden degradar al vino, la cerveza o la leche, despus
de encerrar el lquido en cubas bien selladas y elevando su temperatura hasta los 44 grados centgrados durante un
tiempo corto. A pesar del rechazo inicial de la industria ante la idea de calentar vino, un experimento controlado con
lotes de vino calentado y sin calentar demostr la efectividad del procedimiento. Haba nacido la "pasteurizacin", el
proceso que actualmente garantiza la seguridad de numerosos productos alimenticios del mundo.

En 1861 Pasteur publica otro informe en el que explica cmo se pueden capturar los "cuerpos
organizados" del aire con ayuda de un tubo provisto de un tapn de algodn como filtro, y la
manera de recuperarlos para su observacin microscpica. De esta forma quedaba
definitivamente aclarado el origen de los microorganismos, y se abra la Edad de Oro del
estudio cientfico de las formas de vida no observables a simple vista.
Los ltimos escpticos quedaron silenciados cuando en 1877 John Tyndall (1820-1893) aplic
su sistema de esterilizacin por calentamiento discontinuo (hoy conocida precisamente como
tindalizacin), que evidenci la existencia de formas microbianas de reposo muy resistentes al
calor, lo cual fue confirmado poco ms tarde por Ferdinand Cohn al descubrir las esporas
bacterianas.
2.4 EL DEBATE SOBRE LOS FERMENTOS
Trabajando sobre los agentes de la fermentacin butrica, Pasteur descubri la presencia
de microorganismos que se desarrollaban en ausencia de oxgeno, lo cual desmenta la creencia de que

todas las formas de vida necesitan aire para crecer. Acu los trminos aerobiosis y anaerobiosis para
denominar, respectivamente, a la vida en presencia y en ausencia de oxgeno.
Tras el descubrimiento de la anaerobiosis, el mismo Pasteur comprendi las distintas
implicaciones energticas subyacentes a la utilizacin de sustratos orgnicos en presencia y
en ausencia de oxgeno, demostrando que, en el segundo caso el rendimiento (medido como
crecimiento microbiano) era siempre menor, al no poder realizarse la degradacin total de las
correspondientes sustancias.

Los primeros cultivos puros fueron obtenidos por el miclogo Brefeld, quien logr aislar
esporas de hongos y cultivarlas sobre medios slidos a base de gelatina. Por su menor
tamao, este mtodo se haca inviable para las bacterias, por lo que se recurri a un mtodo
basado en diluciones: Lister, en 1878 realiz diluciones secuenciales de cultivos mixtos, hasta
lograr muestras en las que exista una sola clula. Pero la tcnica era larga y tediosa y,
adems, normalmente slo se lograban aislar clulas del tipo bacteriano ms abundante en el
cultivo original; sin embargo, el experimento sirvi para confirmar la naturaleza "particulada"
de los agentes de las fermentaciones.
Por aquella poca Koch buscaba con ahnco mtodos ms sencillos de cultivo puro,
indispensables para proseguir sus investigaciones sobre bacterias patgenas. Primero (y
quiz de forma un tanto casual) emple rodajas de patata como sustrato slido nutritivo sobre
el que se podan desarrollar colonias macroscpicas de bacterias que presentaban morfologa
caracterstica, que Koch interpret como resultantes del crecimiento a partir de clulas
individuales. Pero enseguida recurri a compactar el tpico caldo de cultivo a partir de carne
(diseado por Loeffler) aadindole gelatina (1881). El medio slido as logrado era
transparente, lo que permita visualizar fcilmente los rasgos coloniales, y contena los
nutrientes adecuados para el crecimiento de una amplia gama de bacterias. stas eran
inoculadas en la superficie del medio con un hilo de platino pasado previamente por la llama,
por la tcnica de siembra en estra. Sin embargo, la gelatina presentaba los inconvenientes
de ser atacada por determinados microorganismos, y de tener un bajo punto de fusin;
ambos problemas se solventaron cuando en 1882 el mdico alemn Walter Hesse, siguiendo
una sugerencia de su mujer Fanny, introdujo el agar-agar (polisacrido extrado de algas
rojas) como nuevo agente solidificante. El trabajo de Koch ya citado tuvo la trascendental
consecuencia de derribar las ideas pleomorfistas, y supuso la primera propuesta del concepto
de especie dentro del mundo bacteriano. En 1887 Petri, un ayudante de Koch, sustituy las
engorrosas bandejas de vidrio cubiertas con campanas, usadas hasta entonces para los
cultivos slidos, por un sistema manejable de placas de cristal planas, que se conoce como
cajas de Petri.
Por otro lado, la industria qumica BASF, que por aquella poca se encontraba en pleno auge
de patentes de nuevos colorantes, sumistr al laboratorio de Koch una serie de derivados de
anilina que tean las bacterias permitiendo su fcil visualizacin al microscopio en frotis de
tejidos infectados. En 1875 Carl Weigert ti bacterias con pirocarmn, un colorante que ya
vena siendo usado desde haca unos aos en estudios zoolgicos. En aos sucesivos se
fueron introduciendo el azul de metileno (Koch, 1877), la fuchsina, y el violeta cristal. En
1882-1883 Ziehl y Neelsen desarrollan su mtodo de cido-alcohol resistencia para
teirMycobacterium tuberculosis. En 1884 el patlogo dans Christian Gram establece una

tincin de contraste que permite distinguir dos tipos bacterianos en funcin de sus reaccin diferencial de
tincin y que, como se vera mucho ms tarde, reflejaba la existencia de dos grupos de bacterias con rasgos
estructurales distintivos. En 1890 Loeffler logra visualizar flagelos bacterianos por medio de su tcnica de
impregnacin argntica. Como veremos ms adelante, la misma industria de colorantes alemana previa a la
primera guerra mundial fue decisiva tambin para los comienzos de la quimioterapia.
Las bacterias gram-positivas y gram-negativas tien de forma distinta debido a las diferencias contitutivas en la
estructura de su pared. La pared de la clula bacteriana sirve para dar su tamao y forma al organismo as como para
prevenir la lisis osmtica. El material de la pared celular bacteriana que confiere rigidez es el peptidoglicano. La pared
de la clula gram-positiva es gruesa y consiste en varias capas interconectandas de peptidoglicano as como algo de

cido teicoico. Generalmente, 80%-90% de la pared de la clula gram-positiva es peptidoglicano. La pared de la clula
gram-negativa, por otro lado, contiene una capa mucho ms delgada, nicamente de peptidoglicano y est rodeada por
una membrana exterior compuesta de fosfolpidos, lipopolisacridos, y lipoprotenas. Slo 10% - 20% de la pared de
la clula gram-negativa es peptidoglicano.
Debido a su importancia en taxonoma bacteriana y a que indica diferencias fundamentales de la pared celular de las
distintas bacterias, describiremos aqu con algn detalle la tincin de Gram y las interpretaciones que actualmente se
hacen sobre el porqu de su funcionamiento.
Las clulas fijadas al calor sobre un portaobjetos se tien, primero con una solucin de cristal violeta (otros colorantes
bsicos no son tan efectivos) y son lavadas despus para quitar el exceso de colorante. En este estado, todas las
clulas, tanto las grampositivas como las gramnegativas, estn teidas de azul.
El portaobjetos se cubre entonces con una solucin de yodo-yoduro potsico. El ingrediente activo es aqu el I2; el KI
simplemente hace soluble el I2 en agua. El I2 entra en las clulas y forma un complejo insoluble en agua con el cristal
violeta. De nuevo tanto las clulas grampositivas como las gramnegativas se encuentran en la misma situacin.
Se lleva a cabo despus la decoloracin, usando una mezcla de alcohol-acetona, sustancias en las que es soluble el
complejo I2-cristal violeta. Algunos organismos (grampositivos) no se decoloran, mientras que otros (gramnegativos)
lo hacen. La diferencia esencial entre esos dos tipos de clulas est por tanto en su resistencia a la decoloracin; esta
resistencia se debe probablemente al hecho de que en el caso de bacterias gram-negativas, la mezcla de
alcohol/acetona es un solvente lipdico y disuelve la membrana exterior de la pared de la clula (y tambin puede
daar la membrana citoplsmica a la que se une peptidoglicano). La delgada capa de peptidoglicano es incapaz de
retener el de complejo cristal violeta-yodo y la clula se decolora. Las clulas grampositivas, a causa de sus paredes
celulares ms espesas (tienen ms peptidoglicano y menos lpido), no son permeables al disolvente ya que ste
deshidrata la pared celular y cierra los poros, disminuyendo as el espacio entre las molculas y provocando que el de
complejo cristal violeta-yodo quede atrapado dentro de la pared celular. Despus de la decoloracin las clulas
grampositivas son todava azules, pero las gramnegativas son incoloras.
Para poner de manifiesto las clulas gramnegativas se utiliza una coloracin de contraste. Habitualmente es un
colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina bsica. Despus de la coloracin de contraste las clulas
gramnegativas son rojas, mientras que las grampositivas permanecen azules
2.6 EL PAPEL DE LOS MICROORGANISMOS EN LAS ENFERMEDADES.
La intervencin de bacterias como agentes especficos en la produccin de enfermedades fue
descubierta a raz de una serie de investigaciones sobre el carbunco o ntrax, enfermedad
que afecta a ganado y que puede transmitirse al hombre. C. Davaine, entre 1863 y 1868,
encontr que en la sangre de vacas afectadas aparecan grandes cantidades de
microorganismos a los que llambacteridios; adems, logr inducir la enfermedad
experimentalmente en vacas sanas, inoculndoles muestras de sangre infectada. En 1872 el
mdico alemn C.J. Eberth consigui aislar los bacilos filtrando sangre de animales
carbuncosos. Pero fue Robert Koch(1843-1910), que haba sido alumno de Henle, quien con
su reciente tcnica de cultivo puro logr, en 1876, el primer aislamiento y propagacin in
vitro del bacilo del ntrax (Bacillus anthracis), consiguiendo las primeras microfotografas
sobre preparaciones secas, fijadas y teidas con azul de metileno. Pero ms fundamental fue
su demostracin de que la enfermedad se poda transmitir sucesivamente a ratones sanos
inoculndoles bacilos en cultivo puro, obtenidos tras varias transferencias en medios lquidos.
Este tipo de estrategias para demostrar el origen bacteriano de una enfermedad fue llevado a

una ulterior perfeccin en 1882, con la publicacin de "Die thiologie der Tuberkulose", donde
se comunica por primera vez la aplicacin de los criterios que Henle haba postulado en 1840.
Estos criterios, que hoy van asociados al nombre de Koch, son los siguientes:
1. El microorganismo debe de estar presente en todos los individuos enfermos.
2. El microorganismo debe poder aislarse del hospedador y ser crecido en cultivo puro.
3. La inoculacin del microorganismo crecido en cultivo puro a animales sanos debe
provocar la aparicin de sntomas especficos de la enfermedad en cuestin.
4. El microorganismo debe poder ser reaislado del hospedador infectado de forma
experimental.
Fue asimismo Koch quien demostr el principio de especificidad biolgica del agente
infeccioso: cada enfermedad infecciosa especfica est causada por un tipo de bacteria
diferente.
2.7 DESARROLLO DE LA ASEPSIA, QUIMIOTERAPIA Y ANTIBIOTERAPIA
Un joven mdico britnico, Joseph Lister (1827-1912), que haba ledo atentamente los
trabajos de Pasteur, y que crea que estas infecciones se deban a grmenes presentes en el
aire, comprob que la aplicacin de compuestos como el fenol o el bicloruro de mercurio en el
lavado del instrumental quirrgico, de las manos y de las heridas, disminua notablemente la
frecuencia de infecciones post-quirrgicas y puerperales.
Ms tarde, Paul Ehrlich (1854-1919), que haba venido empleando distintas sustancias
para teir clulas y microorganismos, y que conoca bien el efecto de tincin selectiva de
bacterias por ciertos colorantes que dejaban, en cambio, incoloras a clulas animales,
concibi la posibilidad de que algunos de los compuestos de sntesis que la industria qumica
estaba produciendo pudieran actuar como "balas mgicas" que fueran txicas para las
bacterias pero inocuas para el hospedador. En 1927 Gerhard Domagk,, inici un ambicioso
proyecto de bsqueda de nuevos agentes quimioterpicos, siguiendo el esquema de Ehrlich;
en 1932-1935 descubre la accin del rojo de prontosilo frente a neumococos hemolticos
dentro del hospedador, pero seala que esta droga es inactiva sobre bacterias creciendo in
vitro. La explicacin la sumistra el matrimonio Trfoul, del Instituto Pasteur, al descubrir que
la actividad antibacteriana depende de la conversin por el hospedador en sulfanilamida. El
mecanismo de accin de las sulfamidas (inhibicin competitiva con el cido paraaminobenzoico) fue dilucidado por el estadounidense Donald D. Woods. Las investigaciones
de ste encaminaron a la industria farmacutica hacia la sntesis de anlogos de metabolitos
esenciales, introduciendo un enfoque ms racional frente a la poca anterior, ms emprica.
En 1874, el mdico ingls W. Roberts haba descrito las propiedades antibiticas de ciertos
cultivos de hongos (Penicillium glaucum) contra las bacterias, e introdujo en Microbiologa el
concepto de antagonismo. Otros investigadores de finales del siglo XIX realizaron
observaciones similares, pero fue Fleming quien, en 1929, logr expresar ideas claras sobre el
tema, al atribuir a una sustancia qumica concreta (la penicilina) la accin inhibidora sobre

bacterias producida por el hongo Penicillium notatum.

El laboratorio de Fleming estaba habitualmente desordenado, lo que result una ventaja para su siguiente
descubrimiento. En septiembre de1928, estaba realizando varios experimentos en su laboratorio y el da 22,
al inspeccionar sus cultivos antes de destruirlos not que la colonia de un hongo haba crecido
espontneamente, como un contaminante, en una de las placa de Petri sembradas con Staphylococcus
aureus. Fleming observ ms tarde las placas y comprob que las colonias bacterianas que se encontraban
alrededor del hongo (ms tarde identificado comoPenicillium notatum) eran transparentes debido a una lisis
bacteriana. Para ser ms exactos, la Penicillium es un moho que produce una sustancia natural con efectos
antibacterianos: la penicilina.

Por Prof. Karolain - 20 de Noviembre, 2008, 23:00, Categora: General

Enlace Permanente | Referencias (0)