BIOQUIMICA: PRCTICA DE LABORATORIO NO.

1
HIDRLISIS ENZIMTICA DEL ALMIDN y
PRUEBA CUALITATIVA DE GLUCOSURIA.
Lectura Obligatoria: Del texto Bioqumica 5. Ed. de Harvey, Unidades 5 y 7
y del texto Bioqumica Mdica 3. Ed. de Baynes, Captulos 3 y 6
Generalidades de Enzimas; Generalidades, digestin y absorcin de Carbohidratos.
Resolver situacin de aprendizaje No. 1 y 4

Con el estudio y desarrollo de la presente prctica de laboratorio el estudiante:

1)
2)
3)
4)
5)

Explica los factores que afectan la actividad enzimtica.

Relaciona el proceso de digestin con la actividad enzimtica.
Explica la actividad enzimtica a travs de las pruebas de laboratorio.
Interpreta las Pruebas de Benedict y Lugol.
Deduce la aplicacin mdica de las pruebas de laboratorio estudiadas.

INFORMACIN GENERAL
Un catalizador es una sustancia que aumenta la velocidad de una reaccin qumica, sin
sufrir ningn cambio al final de la misma. Casi todas las reacciones qumicas que ocurren en los
seres vivos son catalizadas por protenas especializadas llamadas enzimas.
La sustancia sobre la que acta una enzima se llama sustrato. La enzima se une al sustrato
formando un complejo enzima-sustrato que al final se disocia en enzima y producto. La enzima
libre queda as en capacidad de unirse a otras molculas del sustrato y generar ms producto,
hasta que se agote la disponibilidad del sustrato o se presenten efectos reguladores que inhiban la
actividad cataltica de la enzima.
Las enzimas son protenas de peso molecular elevado (ms de 10 K daltons). Su estructura
tridimensional est determinada por la secuencia de aminocidos que caracteriza a cada una. En
su estructura contienen un pequeo espacio llamado sitio activo, cataltico o sitio isostrico, al que
se une una regin especfica del sustrato, por medio de un acoplamiento muy especfico
semejante al de una llave con su cerradura. Esto explica una de las caractersticas de las enzimas:
una alta especificidad por su sustrato. Por ejemplo, la enzima SACARASA acta slo sobre
SACAROSA y no lo puede hacer sobre otros disacridos parecidos.
La actividad enzimtica puede verse afectada por cualquier factor fsico o qumico que
altere su estructura tridimensional. Generalmente, las condiciones ptimas se encuentran entre
lmites estrechos de temperatura, pH, concentracin salina, etc. A medida que las condiciones se
alejan del punto ptimo, la actividad de la enzima empieza a decrecer y en condiciones extremas,
puede perder su estructura tridimensional y se dice que la enzima es desnaturalizada.
De acuerdo con las reacciones que catalizan, las enzimas se clasifican en 6 clases:
1. OXIDORREDUCTASAS 2. TRANSFERASAS 3. HIDROLASAS 4. LIASAS 5. ISOMERASAS y
6. LIGASAS
La digestin es un proceso que involucra la accin cataltica de Hidrolasas, las cuales
rompen uniones covalentes y saturan las valencias libres aprovechando los componentes de la
molcula de agua (CC + H2O
COH + CH). As, reducen los compuestos orgnicos
que recibimos en la dieta, hasta molculas pequeas que pueden ser absorbidas por las clulas del
epitelio intestinal. Un ejemplo ser demostrado al efectuar la hidrlisis del almidn por la
actividad de la enzima amilasa salival (o ptialina), secretada en las glndulas salivales, cuyo
sustrato (el almidn) ser convertido a maltosa, maltotriosa y alfa dextrinas.

Debido a que se necesitan muy bajas concentraciones de enzima para catalizar una
reaccin dada, pocas enzimas pueden medirse directamente. Por consiguiente, la presencia de
una enzima se demuestra generalmente midiendo los cambios de concentracin, conforme ocurre
la desaparicin del sustrato o la aparicin del producto de su accin catalizadora.
En esta prctica, para identificar almidn y el producto de su hidrlisis, se utilizan los
siguientes reactivos:
LUGOL. Solucin de Yodo metlico y yoduro de potasio.
El yodo como tal es muy poco soluble en agua, por lo tanto el reactivo de Lugol se prepara
mediante la disolucin de yodo en agua en presencia de yoduro de potasio. Esto hace que el
complejo de iones triyoduro lineal sea soluble. El ion triyoduro se desliza en la fraccin helicoidal
del almidn (amilosa) causando un color azulnegro intenso.
Cuando se agrega sustancia que lleva almidn
a una solucin de yodo (lugol), estas se tien
de color azul intenso. Esto es debido a que los
tomos de yodo se introducen en las espirales
(amilosa), dndole esa coloracin. El color
desaparece, al calentar la disolucin,
volvindose transparente, porque los tomos
de yodo se salen de la espiral. Al enfriar la
disolucin retorna el color azul.

REACTIVO DE BENEDICT. Algunos

azcares tienen la propiedad de
oxidarse en presencia de agentes
oxidantes suaves como el ion Fe3+ o Cu2+. Esta caracterstica radica en la presencia de un grupo
carbonilo libre, el cual es oxidado y genera un grupo carboxilo. Por lo tanto, aquellos azcares con
un grupo carbonilo libre son llamados azcares reductores y aquellos en los que el grupo carbonilo
se encuentra combinado en unin glicosdica se conocen como azcares no reductores. Existen
varias reacciones qumicas que permiten determinar si se est en presencia de un azcar reductor
o no. La Prueba de Benedict se usa para detectar la presencia de azcares reductores porque el
reactivo de Benedict contiene cobre y ste se reduce en presencia de azcares reductores.
Durante esta reaccin el azcar se oxida. La reaccin antes mencionada se conoce como una
reaccin oxidacin-reduccin (REDOX) porque la oxidacin del azcar sucede simultneamente
con la reaccin de reduccin del cobre.
El reactivo de Benedict contiene soluciones de carbonato de sodio, sulfato de cobre, y citrato de
sodio. El Na2CO3 confiere a la solucin un pH alcalino necesario para que la reaccin pueda
llevarse a cabo. El citrato de sodio mantiene al ion Cu2+ en solucin ya que tiene la propiedad de
formar complejos coloreados poco ionizados con algunos de los metales pesados. Con el cobre
produce un complejo de color azul.
Si se le agrega al reactivo una solucin de azcar reductor y se calienta hasta llevar la
mezcla a ebullicin, el azcar en solucin alcalina a elevadas temperaturas se convertir en DPgina 2 de 5

gluconato y su ene-diol, rompindose luego en dos fragmentos altamente reductores, los cuales
con sus electrones expuestos, reaccionarn con el Cu++. Se obtiene entonces un azcar oxidado y
dos iones Cu+. Posteriormente el Cu+ producido reacciona con los iones OH- presentes en la
solucin para formar el hidrxido de cobre:
Cu + + OH - Cu (OH) (precipitado amarillo)
El hidrxido pierde agua 2Cu (OH) Cu2O (precipitado rojo ladrillo) + H2O
La aparicin de un precipitado amarillo, anaranjado, o rojo ladrillo evidencia la presencia de un
azcar reductor. Esta prueba se utiliza para detectar azcares reductores en orina, por ejemplo,
en pacientes con Diabetes Mellitus descompensada, glucosuria, en los cuales la prueba es positiva.
HIPTESIS DE TRABAJO: El grupo de estudiantes elabora una hiptesis de lo que espera ocurrir
en el laboratorio, el cual deber confirmar o descartara travs de la realizacin de la prctica de
laboratorio. Elaborarn un laboratorio virtual el cual explicarn a su docente antes de la prctica.
INSTRUCCIONES: El grupo de estudiantes desarrollara la prctica de laboratorio siguiendo el
instructivo, se designar al coordinador del grupo como responsable del equipo. Los estudiantes
escribirn un reporte de laboratorio que ser entregado a su docente.
EQUIPO DE LABORATORIO QUE SE USAR:
7 tubos de ensayo grandes.
4 pipetas de 2 ml
1 estufa de hornilla elctrica
1 Bao de Mara en ebullicin
1 Beaker de 50 ml
1 gotero.

1 gradilla de madera
1 pipeta de 1 ml
1 Bao de Mara a 37C
1 Beaker de 550 ml
1 varilla de vidrio para agitar, y

REACTIVOS DE LABORATORIO:
Solucin de Lugol
Solucin de Benedict
Solucin de Glucosa al 1%
Solucin de almidn al 1%
Una muestra de Orina normal y
Una muestra de Orina de un paciente diabtico descompensado.
PROCEDIMIENTO
Para confirmar la hidrlisis enzimtica del almidn:
1) Tome cuatro tubos de ensayo y mrquelos del 1 al 4.
2) Colquele a los tubos Nos. 1, 2 y 3, - 2 ml (2 cc.) de solucin de ALMIDN. El tubo No. 4
por el momento quedar pendiente.
3) Al tubo de ensayo N. 1 virtale 1 ml de saliva y llvelo al bao de Mara a 37 C durante 5
minutos.
4) Al tubo de ensayo N. 2 agrguele dos gotas de lugol y observe y explique el cambio de
color que se presenta.
5) Al tubo de ensayo N. 3 agrguele 2 ml de reactivo de Benedict y pngalo en el bao de
Mara en ebullicin. Agite suavemente y observe los cambios fsicos que presenten.
Pgina 3 de 5

6) Pase la mitad del contenido del tubo de ensayo N. 1 al tubo de ensayo N. 4.

7) Al tubo N. 1 agrguele 2 gotas de lugol. Observe y explique el resultado.
8) Al tubo N. 4 agrguele 2 ml de reactivo de Benedict y pngalo en el bao de Mara en
ebullicin. Observe y explique el resultado.

Observaciones: Indique que solucin y reactivo agrego en cada tubo y explique el porqu de la
reaccin observada.
Tubo 1:
Tubo 2:
Tubo 3:
Tubo 4:

Para confirmar la presencia de glucosa en orina:

1) Tome 3 tubos de ensayo y numrelos del 5 al 7.
2) Al tubo de ensayo N. 5 virtale 2 ml de solucin de glucosa al 1%.
3) Al tubo de ensayo N. 6 virtale 2 ml de orina normal.
4) Al tubo de ensayo N. 7 virtale 2 ml de orina patolgica de diabtico descompensado.
5) A los 3 tubos agrgueles 2 ml de reactivo de Benedict y llvelos al bao de Mara en
ebullicin. Observe y explique el resultado en cada uno.

Observaciones: Indique que solucin y reactivo agrego en cada tubo y explique el porqu de la
reaccin observada.

Pgina 4 de 5

Tubo 5:
Tubo 6:
Tubo 7:

BIBLIOGRAFA:
1)

Daz Zagoya I. C., y J. Gmez.

Bioqumica 2. Ed. 1995

Interamericana. Mxico, D. F. 750 pgs.

2)

Mathews J. Linch.

Mtodos de Laboratorio 2. Ed.

Interamericana. Mxico, D. F

3)

Murray R. et al.

Bioqumica de Harper 16 y 17 Ed. 2007

El Manual Moderno. Mxico, D. F.

4)

Mathews, C.K. et al

Bioqumica. 3. Ed.
Pearson Educacin, S. A. Madrid, 2002.

5)

Donald Voet, et al.

Fundamentos de Bioqumica. 2. Ed.

Editorial Mdica Panamericana, Argentina, 2008
NOTAS IMPORTANTES

Resultado:

______
Conclusin:

Pgina 5 de 5