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Pharmacope et Mdecine traditionnelle Africaines, 2008 ; 15 : 1 - 5

Article original

ETUDE DE LACTIVITE ANTIMICROBIENNE DEXTRAITS DE PARKIA BIGLOBOSA


(JACQ.) BENTH. SUR DES SOUCHES DE STAPHYLOCOCCUS AUREUS
1Millogo-Kon

H., 2Asimi S., 1-3Guissou IP., 3Nacoulma OG.

1- Centre National de la Recherche Scientifique et Technologique (C.N.R.S.T.) Institut de Recherche


en Sciences de la Sant (I.R.S.S.)
06 BP 9160 Ouagadougou 06 Burkina Faso Tel: 226-70 16 05 01 E-mail: hassmillogo@gmail.com
2- Centre National de la Recherche Scientifique et Technologique (C.N.R.S.T.) Direction de la Production Forestire
3- Universit de Ouagadougou

Abstract
Extracts of stem barks of Parkia biglobosa (Jacq.) Benth (Mimosaceae) have been tested against strains of
Staphylococcus aureus collected from pus, blood, vaginal secretions, sperm and urines and also against a collection
strain of Staphylococcus aureus as a positive control. Tests have been conducted with the decoction, form under which
the drug is prescribed by the traditional healers and extracts obtained with different solvents: dichloromethan, ethanol
water 70 % (70 30 v:v), hydroethanolic extract 70 % after extraction with the dichloromethan, ethyl acetate. The results
showed that the decoction is indeed efficient against Staphylococcus aureus, thus justifying the successful use of it in
the traditional medicine. They also revealed that the hydroalcoholic extract 70 % and the ethyl acetate extract are more
effective against Staphylococcus aureus than the decoction. The dichloromethan extract has no effect against the tested
strains. Submitted to a column chromatography, the ethanolic extract, the most effective of all the tested extracts, gave
four fractions (F1, F2, F3, F4) that have been all tested against the strains of Staphylococcus aureus. F2 fraction exerted the
best inhibition. Submitted to a thin layer chromatography, this fraction gave three sub-fractions that have all been tested
against Staphylococcus aureus. None of them showed anti-staphylococcus activity. Chemical screening conducted with
all these extracts showed that the dichloromethan extract contains mainly sterols, triterpens and coumarins. It also
showed that the ethyl acetate extract, the aqueous and the hydroethanolic extracts contain saponosides,
anthracenosides, tannins, flavonoids, reducing compounds but in different proportions, justifying the differences in their
respective anti staphylococcus activities.
Key words: Stem barks Parkia biglobosa Staphylococcus aureus

Introduction
La rsistance de plus en plus accrue des staphylocoques vis--vis
des antibiotiques jadis reconnus pour leur efficacit, constitue
lheure actuelle un vritable problme de sant publique
(Nascimento et al, 2000). Les staphylocoques sont des bactries
ubiquistes (Stucke et al, 1993). En pathologie humaine, ils sont
responsables de nombreuses infections : maladies des voies
respiratoires (bronchites, pneumonies), maladies cutanomuqueuses (sinusites, infections de la sphre gnitale, abcs
pelviens, otites, furoncles, dermatoses, plaies,..), intoxications
alimentaires, endocardites. Les traitements des infections
staphylocoques sont gnralement longs et onreux (Berche et
Gaillard, 1988). A lheure actuelle, le squenage a permis de
dnombrer de nombreuses espces et de souches appartenant
la famille des staphylocoques (Iandolo et al, 2002). La plupart des
espces font partie de la flore commensale humaine, donc vivent
en symbiose avec lorganisme hte quils aident lutter contre

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dautres microorganismes quand les conditions sont favorables.


Chez un sujet immunodprim et dune manire gnrale quand
les conditions deviennent dfavorables, ces espces deviennent
rapidement pathognes. Parmi ces espces on peut
citer Staphylococcus aureus, S. epidermidis, S. saprophiticus et S.
haemolyticus. Staphylococcus aureus est la plus pathogne de
toutes les espces de staphylocoques et est responsable de prs
de 25 % des scepticmies rencontres dans les milieux
hospitaliers (Moyen et al, 1993).
Face lmergence et la rmergence de certaines pathologies
dues la rsistance des microorganismes et dautres facteurs, le
recours aux substances naturelles, notamment aux plantes
mdicinales comme sources potentielles de nouvelles molcules
actives trouve toute sa justification. En effet de nombreuses
recherches ne cessent de dmontrer que les plantes mdicinales
renferment de nombreux principes chimiques biologiquement actifs
qui exercent diffrentes activits pharmacologiques : activits
antioxydantes, antiinflammatoires, analgsiques, antibactriennes,

antifongiques, antiviraux, (Martnez et al, 1994, Essawi et Srour,


2000 ; Voravuthikunchai et Kitpipit, 2005 ; Kawshik et al, 2005; Fei
et al, 2006). En mdecine traditionnelle, nombreuses sont les
plantes qui traitent avec succs des maladies contre lesquelles la
mdecine moderne a parfois du mal trouver un remde. Parkia
biglobosa (Jacq.) Benth. (Mimosaceae) fait partie de ces plantes.
En effet, cest une plante qui est utilise en mdecine traditionnelle
pour le traitement de nombreuses infections: caries dentaires,
pneumonies, bronchites, violentes coliques, toux svres,
diarrhes, plaies, otites, dermatoses, amibiases, hmorrodes,
bilharzioses, lpre, ankylostomes, trachites, conjonctivites
(Kerharo, 1973, Maydell, 1983, Nacoulma, 1996, Arbonnier, 2002).
Nos recherches avaient pour objectif de trouver un extrait trs
efficace contre Staphylococcus aureus, une bactrie responsable
de nombreuses infections en pathologie humaine et rsistante de
nombreux antibiotiques.
II. MATERIEL ET METHODES
2.1. Matire vgtale
Les chantillons dcorces de tronc ont t rcolts Yako au
mois de mai 2007. Ils ont t identifis et authentifis par le Prof
Jeanne MILLOGO, botaniste du Dpartement de Botanique et
Ecologie tropicales, Universit de Ouagadougou, Burkina Faso. Un
specimen a t depos lHerbier National.
2.2. Etudes phytochimiques
Les tudes phytochimiques et microbiologiques ont t effectues
par bioguidage.
- Extraits
Des corces de tronc ont t sches la temprature ordinaire et
finement crases. Differents extraits dcorces de tronc ont t
raliss et tests contre des souches de Staphylococcus aureus.
Ces extraits tests sont : lextrait aqueux (dcoct, forme sous
laquelle lextrait est prescrit par le tradithapeute), lextrait au
dichloromthane, lextrait hydrothanolique 70 %, lextrait
hydrothanolique aprs puisement au dichloromthane, lextrait
lactate dthyle.
Lextrait aqueux a t obtenu en faisant bouillir 20 g de poudre
dans 100mL deau distille pendant 10mn. Lextrait thanolique a
t obtenu en versant 100 mL dthanol - eau (70 : 30) v:v bouillant
sur 20 g de matire vgtale, selon la mthode de Harborne
(1989). Le mlange a t soumis une macration pendant 18
heures et le macr a t filtr sur papier Whatman n1.
Lextrait dichloromthanolique a t obtenu en mettant en
macration 20g de poudre dans 100 mL de dichloromethane, sous
agitateur magntique. Le rsidu a t sch et extrait avec de
lthanol aqueux 70% bouillant comme prcdemment.
Lextrait lactate dthyle a t obtenu en mettant en macration
20 g de poudre dans 100mL dactate dthyle. Lextrait
dichloromthanique et lextrait dactate dthyle ont t solubiliss
dans le DMSO.
Le rendement des diffrents extraits a t dtermin.
2.3. Etudes microbiologiques
Les souches de staphylocoques qui ont fait lobjet de tests ont t
isoles du pus (1 souche), de prlvements vaginaux (2 souches),
de spermes (2 souches), duroculture (1 souche), de coproculture
(1 souche) et dhmoculture (1 souche).
Une souche de collection, Staphylococcus aureus ATCC 25923, a
t teste comme tmoin.
Les milieux de culture utiliss sont : le Bouillon tryptic soy broth
pour les suspensions bactriennes et la glose Mueller Hinton, un
milieu tampon, pour les tests antimicrobiens. Ces tests ont t
effectus avec des suspensions bactriennes de 18 heures, selon

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la technique des puits (Perez et al, 1990). De mme, la


gentamicine, un antibiotique trs large spectre, a t teste,
comme rfrence, sur ces souches de staphylocoques. Les
lectures ont t effectues au bout de 18 24 h.
2.4. Fractionnement
Lextrait hydrothanolique tant le plus efficace, ses composs ont
t spars par chromatographie sur colonne silica gel en vue de
cibler le ou les groupes de principes chimiques responsables de
lactivit pharmacologique. Le systme de solvants utilis est : nbutanol - acide actique eau (40:20:5). Des fractions ont t
obtenues.
Elles ont galement fait lobjet de criblages chimiques et de tests
antimicrobiens.
Une chromatographie sur couche mince de la fraction la plus
efficace a permis dobtenir des sous fractions qui ont galement
t testes en microbiologie.
2.5. Analyses statistiques : les donnes ont t exprimes sous
la forme X + SE. X reprsente le diamtre de la zone dinhibition
en mm et SE, lcart type. Les diffrences significatives ont t
dtermines par le Newman- Keuls Test Pharmacological
Calculation System.
III. RESULTATS
3.1. Etudes phytochimiques
3.1.1. Dtermination du rendement des extraits
Le tableau I montre que lextrait hydrothanolique est celui qui
extrait le mieux les principes chimiques (18,95 0,17 %), suivi de
leau (15,56 + 0,62%) qui est le solvant dextraction utilis par le
tradithrapeute.
Tableau I : Rendements des diffrents extraits

Extraits

Rendements en %

Aqueux (dcoct)

15,56 + 0,62

Dichlorormthane

1,7 + 0,27

Actate dthyle

13,08 + 0,22

Ethanol aqueux 70 %

18,95 + 0,17

Extrait lthanol 70 % aprs


puisement au dichloromthane

12,35 + 0,17

3.1.2. Criblage chimique des extraits


Le tableau II prsente les rsultats de criblages chimiques des
diffrents extraits. A lexception de lextrait au dichloromthane,
tous les extraits renferment des saponosides, des tanins, des
anthracnosides, des flavonosides et des sucres rducteurs mais
dans des proportions diffrentes, selon les tests de coloration.
Lextrait au dichloromthane renferme essentiellement des strols
et triterpnes de mme que des coumarines.
Tableau II : Criblage chimique des diffrents extraits

Extraits
Principes
Chimiques
Strols &

Aqueu
x

Dichl
oro-

Act
ate

(dcoc
t)

Mtha
ne

dt
hyle

Etha
nol
70%

+
+
+

Saponosides

++

+
+

+
+
+

+++

Coumarines

+
+

+
+

Tanins

+++

+
+
+

+
+
+

+++

Anthracnosi
des

+++

+
+
+

+
+
+

++

Triterpnes

Lextrait hydroalcoolique 70 %, le plus efficace des extraits, a t


fractionn par chromatographie sur colonne. Le systme de
solvants utilis est: n-butanol - acide actique eau (40:20:5). La
photo ci-dessous prsente les diffrentes fractions (4) obtenues.

Extrait

lthanol 70%
aprs
puisement au
dichloromthan
e
-

Photo 1 : Fractions obtenues par la chromatographie sur


colonne silica gel.

Flavonosides

++

+
+

+
+

++

Sucres
ducteurs

+++

+
+
+

+
+
+

+++

- signifie absent ; + signifie prsent ; ++ signifie abondant ; +++


signifie trs abondant.
3.2. Tests antimicrobiens
Les tests antimicrobiens ont t effectus avec les diffrents
extraits obtenus en chimie: extrait aqueux, extrait hydrothanolique
70 %, extrait lactate dthyle, extrait au dichloromthane et
extrait hydrothanolique 70 % aprs puisement au
dichloromthane.
Tableau III : Tests antimicrobiens avec les diffrents extraits

Conc.mg/ml
Extraits
Extrait
Aqueux
Extrait hydro
Ethanolique
70%
Extrait
lactate dthyle
Extrait au
Dichloromthane

20

10

2,5

13 + 12 + 0,5
10+0,25 8,5+0,2
0,5
15
12,4
+ 10+0,50 8,2+0,25
+ 0,2 0,40
14,25 12,75+0,2 10,5 + 9 + 0,6
+
0,45
0,25
Diamtres des zones dinhibition en mm

Lextrait lthanol aqueux 70 % aprs puisement au


dichloromthane donne exactement les mmes rsultats que
lthanol aqueux 70 %, ce qui signifie que les principes chimiques
extraits par le dichloromthane nont apparemment pas dactivits
sur le Staphylococcus aureus.
3.3. Fractionnement en chromatographie sur colonne de
lextrait hydrothanolique 70 %

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Les quatre fractions (F1, F2, F3, F4) ont t testes au


trichlorure ferrique (FeCl3). La fraction F2 sest rvle tre la
plus riche en composs phnoliques.
Le criblage chimique effectu a montr que chacune des
fractions contient des tannins, des flavonodes, des sucres
rducteurs, des anthracnosides et des saponosides mais
dans des proportions diffrentes, justifiant leur diffrence
deffet sur la croissance de Staphylococcus aureus.

3.4. Tests antimicrobiens avec les diffrentes fractions


Les quatre (4) fractions obtenues par chromatographie sur colonne
et testes contre des souches de staphylocoques donnent des
rsultats consigns dans le tableau IV. Les tudes statistiques
montrent des diffrences significatives entre les activits
antimicrobiennes des diffrentes fractions. Les rsultats montrent
une meilleure efficacit de la fraction F2.
Tableau IV : Activit antimicrobienne des fractions de lextrait
hydro-thanolique des corces de Parkia Biglobosa.

Extraits en
mg
10
5
2,5
1,25
mL-1
Fractions
Fraction 1
9,5 +1,2 8,5 + 0,35 Fraction 2
12,33
11,33 + 9 +1
+0,57
1,5
Fraction 3
11,33
9,66
+ 8,33
1,15
1,52
+0,57
Fraction 4
10,5 0,5 8,5 + 0,57 Fraction 2 13
+ 12 + 1,13 10 + 0,57
teste
sur 1,33
souche
ATCC
Diamtres des zones dinhibition en mm

A une concentration de 5 g mL-1, la gentamicine a t teste sur


Staphylococcus aureus ATCC 25923 et a donn un diamtre
dinhibition de 26 + 2,5 mm.
En chromatographie sur couche prparative, la fraction 2 a donn
3 sous fractions. Chacune de ces sous-fractions a t isole,
dissoute dans de lactone et teste sur les souches de
staphylocoques. Les rsultats montrent quaucune de ces sousfractions nest active sur les souches de staphylocoques testes.
DISCUSSION
Bien que les corces de tronc et les feuilles de Parkia biglobosa
soient beaucoup exploites dans la pharmacope traditionnelle
pour leurs diffrentes proprits biologiques, trs peu de
recherches ont t menes sur ces parties de la plante. Par
contre, la fermentation des graines, en vue de la production dune
moutarde appele soumbala, a fait lobjet de nombreuses tudes
(Fetuga et al, 1974 ; Odunfa, 1981 ; Ndir et al, 2000 ; Diawara et
al, 2004).
Les rsultats montrent que les corces de tronc de Parkia
biglobosa renferment des strols et des triterpnes, des tanins,
des flavonodes, des anthracnosides, des saponosides, tous des
mtabolites secondaires dous dactivit antimicrobienne. La
meilleure activit antimicrobienne (15 + 0,2 mm de diamtre de
zone dinhibition) a t obtenue avec lextrait hydrothanolique 70
% qui a donn le meilleur rendement dextraction des principes
chimiques (18,95 + 0,17%) par les solvants.
Ajaiyeoba et al (2002) ont tudi les proprits phytochimiques et
antimicrobiennes dextraits de feuilles de Parkia biglobosa et de
Parkia bicolor. Ils ont montr que seules de fortes concentrations
(50 100 mg.mL-1) les extraits dactate dthyle, dthanol
aqueux et le dcoct de feuilles de Parkia biglobosa inhibent la
croissance de Bacillus cereus et de Staphylococcus aureus et
quaucun de ces extraits na un effet sur Escherichia coli et
Pseudomonas aeruginosa. Leurs tests ont port uniquement sur
les feuilles et non sur les corces de tronc du Parkia biglobosa.
Ces rsultats obtenus par Ajaiyeoba et al (2002) ont t confirms
par ceux de Millogo et al (2006) travers une tude comparative
des effets de feuilles et dcorces de tronc de Parkia biglobosa sur
des bactries entropathognes et sur des souches de
staphylocoques. Ces rsultats ont montr que les corces de tronc
sont bien plus efficaces que les feuilles sur toutes les
entrobactries testes et sur Staphylococcus aureus mais que les
feuilles pouvaient avoir des effets comparables ceux des corces
de tronc si lextraction des principes chimiques se fait lthanol
aqueux 70 %.
Des tudes menes antrieurement nont pas tenu compte de la
nature du sol et du microclimat environnemental qui sont pourtant
des facteurs trs importants dans la biosynthse des principes
chimiques et qui, par consquent, influencent lactivit
pharmacologique (Chaves et al, 1997). De nombreuses
recherches ont montr que Staphylococcus aureus est une
bactrie qui rsiste aux antibiotiques grce aux toxines et
enzymes quelle secrte, en particulier la -lactamase (Chambers,
1988 ; Mulligan, 1993, Zba, 2006). Paralllement, des tudes ont
montr que S. aureus est pourtant sensible des extraits de
plantes. En effet, Akinyemi et al (2005) ont test des extraits de six
plantes nigriannes sur des souches de staphylocoques
rsistantes la mthicilline. Ils ont dmontr que mme de trs
faibles concentrations ces plantes mdicinales ont des effets
antimicrobiens trs importants, justifiant ainsi leur utilisation avec
succs dans le traitement dinfections staphylocoques, en
mdecine traditionnelle. De nos jours, malgr les multiples
antibiotiques dj disponibles sur le march, on note un recours

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sans prcdent aux plantes mdicinales comme sources


potentielles de nouvelles molcules actives. Les recherches vont
gnralement des extraits bruts souvent moins actifs (compars
aux molcules pures) vers des fractions plus actives pour aboutir
des molcules isoles et purifies.
Le fractionnement sur colonne de lextrait hydrothanolique a
permis dobtenir quatre fractions qui sont toutes actives sur les
souches testes. La fraction F2, fraction la plus efficace, a donn
en chromatographie sur couche prparative, des sous fractions qui
nont aucun effet sur les souches de staphylocoques testes. Il y
aurait donc une synergie daction au niveau des principes
chimiques prsents dans lextrait. Ces rsultats montrent que
lisolement de molcules partir dun extrait total ne doit pas
toujours tre un objectif surtout quil demeure une opration trs
onreuse sans pour autant aboutir un produit plus efficace.
CONCLUSION
Les souches de Staphylococcus aureus testes sont toutes
sensibles aux extraits dcorces de Parkia biglobosa. Des extraits
plus actifs que le dcoct prescrit par le tradithrapeute ont t
obtenus. Il sagit de lextrait hydroalcoolique, de lextrait lactate
dthyle et de la fraction 2 de lextrait hydroalcoolique. Lextrait
hydroalcoolique est le plus efficace de ces extraits. Le fait que son
fractionnement donne des extraits moins efficaces qui, fractionns
leur tour donne des sous fractions qui nont aucune activit,
montre quil existerait une synergie daction au niveau des
molcules prsentes dans lextrait hydrothanolique.
Le fait que lextrait au dichloromthane nait aucun effet sur les
souches testes signifierait que les strols et les triterpnes, de
mme que les coumarines ne sont pas directement
impliqus/responsables de lactivit antimicrobienne.
PERSPECTIVES
Approfondir les recherches sur la fraction 2 de lextrait
hydrothanolique par des fractionnements avec dautres
systmes de solvants.

Etudier dautres paramtres biologiques de ces extraits.

Envisager des formulations galniques.

Effectuer des tests cliniques

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REMERCIEMENTS
-

Prof Jeanne Millogo, botaniste au laboratoire de


botanique et cologie tropicales
Monsieur Yaro boubacar
Centre Mdical Saint Camilles
Laboratoire National dElevage

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